CN108866130A - 一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及鱼产品深加工技术领域，特别涉及一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺；具体过程包括鱼骨处理，除去表面碎肉；酶解出活性肽物质；在离心分离出渣料和活性肽组分，再进行脱腥、脱色操作，最后冷冻干燥得到蛋白多肽粉。在去除腥味时通过半胱氨酸盐酸盐、二硫苏糖醇、柠檬酸配合作用尽可能的除去能够产生腥味的物质，而木糖、海藻糖、菠萝酮、乙基麦芽酚能够遮盖掉腥味，带来不同的口感，生产出的活性肽物质腥味少。
Description
技术领域
本发明涉及鱼产品深加工技术领域，特别涉及一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺。
背景技术
我国水产加工行业每年加工量超过1000万t，通常鱼头骨和脊骨占鱼体重的10%～15%，为仅次于鱼皮的第二大加工副产物。
现阶段，国内外都很重视水产加工中副产物的综合利用问题，并做了很多相关研究。
在国外，这类研究比较详细，技术也较为成熟，目前主要集中在对鱼头、鱼骨、鱼鳞、鱼皮的利用研究上，具体包括有，1、从废弃的鱼头软骨中提炼硫酸软骨素；2、将鱼头、鱼骨加工成鱼骨粉、鱼骨糊等功能性食品；3、利用鱼内脏来加工鱼油和鱼粉，其中鱼油可用来提炼鱼肝油，也可替代矿物质油制造皮革制剂，或者用来制造治疗高血压、糖尿病等疾病的药物；4、利用化学方法或生物方法将鱼内脏制成液体蛋白饲料，其营养价值和投喂效果与鱼粉相当；5、将鱼鳞制成鱼鳞胶，应用于食品，医疗等领域。
在国内，许多研究人员也对鱼类加工产生的副产物的综合利用和精深加工技术方面做了大量的研究，生产了鱼骨、鱼露、活性肽等产品，但是在总体上还存在加工产品技术含量较低，废弃物利用水平不高等问题。
现有的，授权公告号为CN10173166B的中国专利公开了一种鱼骨生物活性多肽钙粉及制备方法，该多肽钙粉中公开的制备方法包括，将鱼骨冷冻，然后对鱼骨进行粗磨、细磨，再加入水搅拌，接着加入复合蛋白酶进行水解，离心，分别收集上清液和沉淀物；将上清液经过过滤膜超滤，再将滤液浓缩、冷冻干燥，得鱼骨蛋白多肽粉；另将沉淀物进行清洗、烘干、粉碎；及用柠檬酸进行活化处理，烘干，得可溶性钙；将鱼骨蛋白多肽粉和可溶性钙混合，即得到鱼骨生物活性多肽钙粉。该工艺过程完成了活性多肽钙粉的制备，增加了鱼骨的应用范围。
实际加工中在鱼骨中会含有透明质酸、硫酸软骨素、硫酸角质素、皮肤素等多种粘多糖，在胶原肽提取过程中与蛋白容易发生美拉德反应，导致产品颜色变黄、腥味大，影响到产品的使用性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，具有降低活性肽的腥味和减少活性肽颜色变黄的优点。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，包括如下制备步骤：
步骤1：鱼骨处理，除去鱼骨表面的碎肉，于0.09～0.1MPa、120～125℃下烘干鱼骨；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过20～40目筛，后加入与鱼骨相同重量的去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3～3.5h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH，加入酶解液酶解，酶解后加热使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在20～25℃、2000～4000rpm条件下离心 6 ～ 10min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐、木糖、海藻糖、二硫苏糖醇、麦芽糖醇、白醋粉、维生素B１、菠萝酮、乙基麦芽酚、柠檬酸搅拌均匀，0.09～0.1MPa、110～121℃下蒸煮25～30min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在 2000～4000rpm 离心 10～15min，得到的上清液通过 GPC 凝胶净化，再通过 0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至80～85℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为20%～35%的聚乙烯吡洛烷酮作为冻干添加剂，冷冻干燥 10～18h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
通过上述技术方案，步骤１中的鱼骨表面会含有一些不易脱离的碎肉，除去碎肉方便下一步的操作；步骤2中将鱼渣骨打磨成细粉，增加了鱼渣骨的比表面积，可进一步增加酶解的效率；步骤3中酶解的操作能够酶解中间产物生成活性物质；步骤４中离心分离的操作，得到上清液中的活性肽；步骤5中向活性肽清液中加入的半胱氨酸盐酸盐起到发酵的作用，能够将活性肽中的腥味物质吸附，木糖、海藻糖、二硫苏糖醇、麦芽糖醇的加入能够遮盖腥味，同时二硫苏糖醇还是一种很强的还原剂，能够将产生鱼腥的醛类物质还原为糖，降低鱼腥味；菠萝酮、乙基麦芽酚能够起到遮盖腥味的作用；柠檬酸属有机酸，对腥臭物质以及脂肪、色素等有萃取溶解的作用，并能去除部分腥臭物质，此外柠檬段和半胱氨酸盐酸盐配合能够增强去除腥味的效果；步骤6和步骤7的操作完成了活性肽的制备，经过步骤1至步骤7的操作过程完成了活性肽的制备，且生成的活性肽的腥味小，且经过步骤７中的活性碳脱色处理，生成的成品色泽好。
优选的，步骤1中除去鱼骨表面碎肉的过程包括，鱼骨经沸水中烫漂3～5min后用自来水冲洗除去鱼骨表面残留鱼肉，残留鱼肉收集，备用。
通过上述技术方案，经沸水烫漂的操作能够使得蛋白质等物质变形，方便鱼肉从鱼骨表面分离。
优选的，步骤1中除去鱼骨表面碎肉的过程包括，向鱼骨中加入占鱼骨重量5％～8％的淡水鱼下脚料，与鱼骨重量等量的水，并调节pH为6～6.5，于40～50℃下保温36～48h后，于90℃下加热15～30min，降温至40～50℃后调节pH为5～5.5，加入占鱼骨重量1%～2％的胃蛋白酶继续酶解50～60min后，于90℃下加热15～30min，2000～4000rpm条件下离心分离出鱼骨后用自来水冲洗干净，分离液备用。
通过上述技术方案，加入淡水鱼的下脚料油漆是肝脏鱼头中含有丰富的内源性蛋白酶，可通过下脚自身蛋白酶的水解作用使得部分鱼肉蛋白水解，增加了淡水鱼下脚料的应用，其次再继续加入少量胃蛋白酶酶解的操作，实现鱼渣骨上鱼肉蛋白大部分被酶解，酶解后的分离液可应用起来。
优选的，步骤3中酶解的过程包括如下：调节中间产物pH为6～8，加入占鱼骨重量2%～4%的复合蛋白酶，于46～49℃下酶解4～6h，于90～100℃下加热15～30min，使酶失去活性。
通过上述技术方案，利用复合蛋白酶能够增加酶解的效率。
优选的，步骤3中酶解的过程包括如下：调节中间产物pH为6～8，加入占鱼骨重量2%～4%的复合蛋白酶，于46～49℃下酶解4～6h，于90～100℃下加热15～30min，使酶失去活性，在继续调节pH为5.5～7，加入占鱼骨重量2%～4%的木瓜蛋白酶，于50～60℃下酶解3～6h，于100～120℃下加热15～30min，使酶失去活性。
通过上述技术方案，加入的复合蛋白酶和木瓜蛋白酶相互配合能够使得鱼骨中的活性肽物质尽量多的溶解出来，增加提取率。
优选的，步骤4中的沉淀物于200～210℃，加入与沉淀物等重量的蒸馏水，0.09～0.1MPa下反应5～7h，得第二产物。
通过上述技术方案，沉淀物在高温、高压的条件下反应5～7ｈ，能够使得活性物质释放出来，方便用作饲料使用时的消化吸收。
优选的，步骤４中的沉淀物中加入为鱼骨重量20%～40%的乳酸活化5～8ｈ，取清液，0～4℃下冷却，得白色块状物，用无水乙醇浸泡白色块状物，2000～4000rpm条件下离心分离，得第二产物。
通过上述技术方案，沉淀物经乳酸活化的操作能够尽量多的使得钙成分溶解出来，提取钙物质的含量增加，提取率高。
优选的，将第二产物和所述残留鱼肉收集、混合，于70～80℃条件下烘干3～4ｈ后，用于制作饲料添加剂。
通过上述技术方案，第二产物经过处理后活性钙组分比较大量的溶解出来，与碎肉混合用作饲料添加剂，实现鱼骨的有效利用，其中碎肉可起到鱼粉类似的作用效果，鱼骨能够补充钙物质，作为饲料添加剂使用营养丰富。
优选的，步骤5中向上清液中加入下述重量份数的组分：半胱氨酸盐酸盐0.5～1份、木糖1～1.5份、海藻糖5～6份、二硫苏糖醇2～4份、麦芽糖醇1～2份、维生素B１0.2～0.5份、菠萝酮0.01～0.02份、乙基麦芽酚0.01～0.02份、柠檬酸0.2～0.5份。
通过上述技术方案，加入上述组分的材料实现的去腥效果优良。
优选的，所述鱼骨选自鲢鱼、罗非鱼、金枪鱼、鲶鱼中至少一种鱼的鱼骨。
通过上述技术方案，鱼骨选自鲢鱼、罗非鱼、金枪鱼、鲶鱼中的至少一种或几种的混合，能够实现这些鱼的骨渣得到应用，减少了资源了浪费。
综上所述，本发明对比于现有技术的有益效果为：
1、将鱼骨打磨成细粉的操作增大了鱼骨的比表面积，实现酶解的效率高；
2、半胱氨酸盐酸盐、二硫苏糖醇、柠檬酸配合作用能够尽可能的除去能够产生腥味的物质，而木糖、海藻糖、菠萝酮、乙基麦芽酚能够遮盖掉腥味，带来不同的口感，生产出的活性肽物质腥味少；
3、加入活性碳的操作能够除去液体中的颜色，最终生成的活性多肽不易变黄；
4、除去鱼骨表面的鱼肉采用在沸水中烫漂或者采用酶解的方式，操作方式简单，两种方式处理后的鱼肉或者鱼肉蛋白均可应用，实现了资源的合理利用；
5、沉淀物中经高温高压蒸煮或者乳酸活化后，活性钙成分被激发出来，生成的活性钙产物可以用于生产饲料。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例１
提取活性肽包括如下步骤：
步骤1：鱼骨处理，称取10kg鱼骨，经沸水中烫漂3min后用自来水冲洗除去鱼骨表面残留鱼肉，残留鱼肉收集，备用，鱼骨于0.09MPa、120℃下烘干；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过20目筛，后加入10kg去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH为6，加入0.2kg的复合蛋白酶，于46℃下酶解4h后，于90℃下加热15min，使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在20℃、2000rpm条件下离心6min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐0.5g、木糖1g、海藻糖5g、二硫苏糖醇2g、麦芽糖醇1g、维生素B１0.2g、菠萝酮0.01g、乙基麦芽酚0.01g、柠檬酸0.2g搅拌均匀，0.09MPa、110℃下蒸煮25min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在 2000rpm 离心 10min，得到的上清液通过GPC凝胶净化，再通过0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至80℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为20%的聚乙烯吡洛烷酮5g作为冻干添加剂，冷冻干燥10h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
其中，沉淀物的处理过程为，于200℃，加入与沉淀物等重量的蒸馏水，0.09MPa下反应5h，得第二产物。
第二产物和碎肉收集、混合，于70℃条件下烘干3ｈ后，用于制作饲料添加剂。
鱼骨选自鲢鱼、罗非鱼、金枪鱼、鲶鱼的鱼骨，具体为玉环县五丰蒸干脱脂鱼粉厂在生产酶解鱼浆时在离心工序中产生的鱼骨渣。
实施例2
实施例2与实施例1的区别在于实施过程中参数的不同；
提取活性肽包括如下步骤：
步骤1：鱼骨处理，称取10kg鱼骨，经沸水中烫漂3min后用自来水冲洗除去鱼骨表面残留鱼肉，残留鱼肉收集，备用，鱼骨于0.09MPa、120℃下烘干；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过40目筛，后加入10kg去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3.1h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH为6.5，加入0.3kg的复合蛋白酶，于47℃下酶解5h后，于95℃下加热15min，使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在21℃、2500rpm条件下离心6min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐0.5g、木糖1g、海藻糖5g、二硫苏糖醇2g、麦芽糖醇1g、维生素B１0.2g、菠萝酮0.01g、乙基麦芽酚0.01g、柠檬酸0.2g搅拌均匀，0.09MPa、110℃下蒸煮25min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在 2500rpm 离心 12min，得到的上清液通过GPC凝胶净化，再通过0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至80℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为20%聚乙烯吡洛烷酮5g作为冻干添加剂，冷冻干燥12h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
其中，沉淀物的处理过程为，于205℃，加入与沉淀物等重量的蒸馏水，0.095MPa下反应6h，得第二产物。
第二产物和碎肉收集、混合，于70℃条件下烘干3ｈ后，用于制作饲料添加剂。
鱼骨选自鲶鱼的鱼骨，具体为玉环县五丰蒸干脱脂鱼粉厂在生产酶解鱼浆时在离心工序中产生的鱼骨渣。
实施例3
实施例3与实施例1的区别在于实施过程中参数的不同；
提取活性肽包括如下步骤：
步骤1：鱼骨处理，称取10kg鱼骨，经沸水中烫漂5min后用自来水冲洗除去鱼骨表面残留鱼肉，残留鱼肉筛分后收集，备用，鱼骨于0.1MPa、125℃下烘干；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过40目筛，后加入10kg去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3.5h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH为8，加入0.4kg的复合蛋白酶，于49℃下酶解6h后，于100℃下加热30min，使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在25℃、4000rpm条件下离心10min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐0.6g、木糖1.1g、海藻糖5.1g、二硫苏糖醇2.4g、麦芽糖醇1.2g、维生素B１0.25g、菠萝酮0.15g、乙基麦芽酚0.02g、柠檬酸0.3g搅拌均匀，0.1MPa、115℃下蒸煮26min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在 4000rpm 离心 15min，得到的上清液通过 GPC 凝胶净化，再通过 0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至85℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为35%聚乙烯吡洛烷酮5g作为冻干添加剂，冷冻干燥18h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
其中，沉淀物的处理过程为，于210℃，加入与沉淀物等重量的蒸馏水，0.1MPa下反应7h，得第二产物。
第二产物和碎肉收集、混合，于70℃条件下烘干3ｈ后，用于制作饲料添加剂。
鱼骨选自金枪鱼的鱼骨，具体为玉环县五丰蒸干脱脂鱼粉厂在生产酶解鱼浆时在离心工序中产生的鱼骨渣。
实施例4
实施例4与实施1的区别在于步骤1中除去鱼骨表面碎肉的实施方式及整个实施过程中参数的不同。
提取活性肽包括如下步骤：
步骤1：鱼骨处理，称取10kg鱼骨，除去鱼骨表面碎肉的过程包括，向鱼骨中加入0.5kg淡水鱼下脚料，10kg水，并调节pH为6，于40℃下保温36h后，于90℃下加热15min，降温至40℃后调节pH为5，加入占0.1kg胃蛋白酶继续酶解50min后，于90℃下加热15min，2000rpm条件下离心分离出鱼骨后用自来水冲洗干净，分离液备用，鱼骨于0.1MPa、125℃下烘干；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过20目筛，后加入10kg去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3.2h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH为7，加入0.4kg的复合蛋白酶，于48℃下酶解5h后，于96℃下加热17min，使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在22℃、3000rpm条件下离心7min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐0.7g、木糖1.2g、海藻糖5.2g、二硫苏糖醇2.8g、麦芽糖醇1.5g、维生素Ｂ１0.3g、菠萝酮0.2g、乙基麦芽酚0.02g、柠檬酸0.1g搅拌均匀，0.1MPa、117℃下蒸煮28min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在3500rpm 离心14min，得到的上清液通过GPC凝胶净化，再通过0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至82℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为25%聚乙烯吡洛烷酮5g作为冻干添加剂，冷冻干燥14h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
其中，沉淀物的处理过程为，于210℃，加入与沉淀物等重量的蒸馏水，0.09MPa下反应7h，得第二产物；
第二产物和碎肉收集、混合，于70℃条件下烘干3ｈ后，用于制作饲料添加剂。
鱼骨选自罗非鱼的鱼骨，具体为玉环县五丰蒸干脱脂鱼粉厂在生产酶解鱼浆时在离心工序中产生的鱼骨渣。
实施例5
实施例5与实施例1的区别在于步骤3中酶解的实施方式及整个实施例中实施参数的不同。
提取活性肽包括如下步骤：
步骤1：鱼骨处理，称取10kg鱼骨，经沸水中烫漂3min后用自来水冲洗除去鱼骨表面残留鱼肉，残留鱼肉收集，备用，鱼骨于0.09MPa、120℃下烘干鱼骨；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过20目筛，后加入10kg去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3.2h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH为6，加入0.2kg的复合蛋白酶，于46℃下酶解4h，于90℃下加热15min，使酶失去活性，在继续调节pH为5.5，加入0.2kg的木瓜蛋白酶，于50℃下酶解3h，于100℃下加热15min，使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在22℃、3000rpm条件下离心7min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐0.7g、木糖1.2g、海藻糖5.2g、二硫苏糖醇2.8g、麦芽糖醇1.5g、维生素B１0.3g、菠萝酮0.2g、乙基麦芽酚0.02g、柠檬酸0.1g搅拌均匀，0.1MPa、117℃下蒸煮28min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在 3500rpm 离心 14min，得到的上清液通过 GPC 凝胶净化，再通过 0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至82℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为25%聚乙烯吡洛烷酮5g作为冻干添加剂，冷冻干燥14h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
其中，沉淀物的处理过程为，于210℃，加入与沉淀物等重量的蒸馏水，0.09MPa下反应7h，得第二产物。
第二产物和碎肉收集、混合，于75℃条件下烘干3.5ｈ后，用于制作饲料添加剂。
鱼骨选自鲢鱼的鱼骨，具体为玉环县五丰蒸干脱脂鱼粉厂在生产酶解鱼浆时在离心工序中产生的鱼骨渣。
实施例6
实施例6与实施例1的区别在于步骤4中沉淀物处理实施方式及整个实施例中实施参数的不同。
提取活性肽包括如下步骤：
步骤1：鱼骨处理，称取10kg鱼骨，经沸水中烫漂5min后用自来水冲洗除去鱼骨表面残留鱼肉，残留鱼肉收集，备用，鱼骨于0.1MPa、125℃下烘干；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过40目筛，后加入10kg去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3.1h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH为6.5，加入0.3kg的复合蛋白酶，于47℃下酶解5h后，于95℃下加热15min，使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在22℃、3000rpm条件下离心7min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐0.8g、木糖1.3g、海藻糖5.5g、二硫苏糖醇3g、麦芽糖醇1.5g、维生素B１0.3g、菠萝酮0.18g、乙基麦芽酚0.02g、柠檬酸0.4g搅拌均匀，0.1MPa、120℃下蒸煮28min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在3500rpm离心14min，得到的上清液通过GPC凝胶净化，再通过0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至80℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为25%聚乙烯吡洛烷酮5g作为冻干添加剂，冷冻干燥12h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
其中，沉淀物的处理过程为，沉淀物中加入为0.2kg的乳酸活化5ｈ，取清液，0℃下冷却，得白色块状物，用无水乙醇浸泡白色块状物，2000rpm条件下离心分离，得第二产物。
第二产物和碎肉收集、混合，于70℃条件下烘干3ｈ后，用于制作饲料添加剂。
鱼骨选自鲢鱼的鱼骨，具体为玉环县五丰蒸干脱脂鱼粉厂在生产酶解鱼浆时在离心工序中产生的鱼骨渣。
实施例7
实施例7与实施1的区别在于步骤1中除去鱼骨表面碎肉、步骤3中酶解的实施方式及整个实施例中实施参数的不同。
提取活性肽包括如下步骤：
步骤1：鱼骨处理，称取10kg鱼骨，除去鱼骨表面碎肉的过程包括，向鱼骨中加入0.7kg淡水鱼下脚料，10kg水，并调节pH为6.2，于45℃下保温40h后，于90℃下加热20min，降温至45℃后调节pH为5.2，加入0.2kg胃蛋白酶继续酶解60min后，于90℃下加热20min，3000rpm条件下离心分离出鱼骨后用自来水冲洗干净，分离液备用，鱼骨于0.1MPa、125℃下烘干；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过20目筛，后加入10kg去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH为6，加入0.2kg的复合蛋白酶，于46℃下酶解4h后，于90℃下加热15min，使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在20℃、2000rpm条件下离心6min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐0.8g、木糖1.4g、海藻糖5.8g、二硫苏糖醇3.5g、麦芽糖醇1.8g、维生素B１0.2g、菠萝酮0.01g、乙基麦芽酚0.01g、柠檬酸0.2g搅拌均匀，0.09MPa、110℃下蒸煮25min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在3500rpm 离心 10min，得到的上清液通过GPC凝胶净化，再通过0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至80℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为20%聚乙烯吡洛烷酮5g作为冻干添加剂，冷冻干燥10h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
其中，沉淀物的处理过程为，于200℃，加入与沉淀物等重量的蒸馏水，0.09MPa下反应5h，得第二产物。
第二产物和碎肉收集、混合，于70℃条件下烘干3ｈ后，用于制作饲料添加剂。
鱼骨选自金枪鱼、鲶鱼的鱼骨，具体为玉环县五丰蒸干脱脂鱼粉厂在生产酶解鱼浆时在离心工序中产生的鱼骨渣。
实施例8
实施例8与实施1的区别在于步骤1中除去鱼骨表面碎肉、步骤4中沉淀物处理的实施方式及整个实施例中实施参数的不同。
提取活性肽包括如下步骤：
步骤1：鱼骨处理，称取10kg鱼骨，经沸水中烫漂3min后用自来水冲洗除去鱼骨表面残留鱼肉，残留鱼肉筛分后收集，备用，鱼骨于0.09MPa、120℃下烘干鱼骨；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过20目筛，后加入10kg去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH为6，加入0.2kg的复合蛋白酶，于46℃下酶解4h后，于90℃下加热15min，使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在20℃、2000rpm条件下离心6min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐0.5g、木糖1g、海藻糖5g、二硫苏糖醇2g、麦芽糖醇1g、维生素B１0.2g、菠萝酮0.01g、乙基麦芽酚0.01g、柠檬酸0.2g搅拌均匀，0.09MPa、110℃下蒸煮25min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在2000rpm 离心10min，得到的上清液通过GPC凝胶净化，再通过0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至80℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为20%聚乙烯吡洛烷酮5g作为冻干添加剂，冷冻干燥10h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
其中，沉淀物的处理过程为，沉淀物中加入为0.4kg的乳酸活化8ｈ，取清液，4℃下冷却，得白色块状物，用无水乙醇浸泡白色块状物，3000rpm条件下离心分离，得第二产物。
第二产物和碎肉收集、混合，于70℃条件下烘干3ｈ后，用于制作饲料添加剂。
鱼骨选自鲢鱼、罗非鱼的鱼骨，具体为玉环县五丰蒸干脱脂鱼粉厂在生产酶解鱼浆时在离心工序中产生的鱼骨渣。
实施例9
实施例9与实施1的区别在于步骤3中酶解的方式、步骤4中沉淀物处理的实施方式及整个实施例中实施参数的不同。
提取活性肽包括如下步骤：
步骤1：鱼骨处理，称取10kg鱼骨，经沸水中烫漂3min后用自来水冲洗除去鱼骨表面残留鱼肉，残留鱼肉收集，备用，鱼骨于0.09MPa、120℃下烘干；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过20目筛，后加入10kg去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH为8，加入0.4kg的复合蛋白酶，于49℃下酶解6h，于100℃下加热30min，使酶失去活性，在继续调节pH为7，加入0.4kg的木瓜蛋白酶，于60℃下酶解6h，于120℃下加热30min，使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在20℃、2000rpm条件下离心6min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐1g、木糖1.5g、海藻糖6g、二硫苏糖醇4g、麦芽糖醇2g、维生素B１0.5g、菠萝酮0.02g、乙基麦芽酚0.02g、柠檬酸0.5g搅拌均匀，0.1MPa、121℃下蒸煮30min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在 2000rpm 离心 10min，得到的上清液通过 GPC 凝胶净化，再通过 0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至80℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为20%聚乙烯吡洛烷酮5g作为冻干添加剂，冷冻干燥10h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
其中，沉淀物的处理过程为，沉淀物中加入为0.4kg的乳酸活化8ｈ，取清液，4℃下冷却，得白色块状物，用无水乙醇浸泡白色块状物，3000rpm条件下离心分离，得第二产物。
第二产物和碎肉收集、混合，于70℃条件下烘干3ｈ后，用于制作饲料添加剂。
鱼骨选自鲢鱼、罗非鱼、金枪鱼的鱼骨，具体为玉环县五丰蒸干脱脂鱼粉厂在生产酶解鱼浆时在离心工序中产生的鱼骨渣。
实施例10
提取活性肽包括如下步骤：
步骤1：鱼骨处理，称取10kg鱼骨，除去鱼骨表面碎肉的过程包括，向鱼骨中加入0.8kg淡水鱼下脚料，10kg的水，并调节pH为6，于40℃下保温45h后，于90℃下加热20min，降温至45℃后调节pH为5.5，加入0.2kg胃蛋白酶继续酶解60min后，于90℃下加热20min，4000rpm条件下离心分离出鱼骨后用自来水冲洗干净，分离液备用，鱼骨于0.1MPa、125℃下烘干；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过20目筛，后加入10kg去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH为6，加入占鱼骨细分重量0.2kg的复合蛋白酶，于46℃下酶解5h，于100℃下加热20min，使酶失去活性，在继续调节pH为5.5，加入0.4kg的木瓜蛋白酶，于55℃下酶解4h，于115℃下加热25min，使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在23℃、4000rpm条件下离心10min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐1g、木糖1.2g、海藻糖5.5g、二硫苏糖醇3g、麦芽糖醇1.5g、维生素B１0.5g、菠萝酮0.01g、乙基麦芽酚0.01g、柠檬酸0.2g搅拌均匀，0.09MPa、110℃下蒸煮25min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在 4000rpm 离心 15min，得到的上清液通过 GPC 凝胶净化，再通过 0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至85℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为28%聚乙烯吡洛烷酮5g作为冻干添加剂，冷冻干燥 15h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
其中，沉淀物的处理过程为，沉淀物中加入为0.3kg的乳酸活化5ｈ，取清液，0℃下冷却，得白色块状物，用无水乙醇浸泡白色块状物，4000rpm条件下离心分离，得第二产物。
第二产物和碎肉收集、混合，于78℃条件下烘干4ｈ后，用于制作饲料添加剂。
鱼骨选自鲢鱼、罗非鱼、金枪鱼、鲶鱼的鱼骨，具体为玉环县五丰蒸干脱脂鱼粉厂在生产酶解鱼浆时在离心工序中产生的鱼骨渣。
实验检测
腥味评定：选择10个系统学过感官评定课程的人员，在通风良好的条件下，分别对实施例1～10的活性肽进行感官评定，分为以下8个级别：0 无腥味，1 略有腥味，2 腥味较弱，3有腥味，4 腥味一般，5 腥味偏重，6 腥味较重，7 腥味很重，分别单独进行打分，最终计算每个实施例的平均结果作为最终的评定结果。
表1 实施例1～10的结果
| 试验结果 | 实施例1 | 实施例2 | 实施例3 | 实施例4 | 实施例5 | 实施例6 | 实施例7 | 实施例8 | 实施例9 | 实施例10 |
| 腥味值 | 1.3 | 1.5 | 1.7 | 1.3 | 1.4 | 1.3 | 1.4 | 1.3 | 1.3 | 1.5 |
由实施例１～10的实验数据可以得出，在反应条件或者操作方式发生变化时，对于生成的活性肽的腥味值都会产生影响，以实施例１作为参照，实施例2和实施例3在改变反应条件的情况下，对生成的活性肽的腥味均能产生影响；以实施例1作为参照，对实施例4～10，进行比较，在改变操作方式时，也会对活性肽的腥味产生影响。
选择实施例10作为参照实施例。
对比例1
对比例1与实施例10的区别在于对比例10中，在上清液中不加半胱氨酸盐酸盐，其他均与实施例10保持一致。
对比例2
对比例2与实施例10的区别在于对比例10中，在上清液中不加柠檬酸，其他均与实施例10保持一致。
对比例3
对比例3与实施例10的区别在于对比例10中，在上清液中同时不加二硫苏糖醇和柠檬酸，其他均与实施例10保持一致。
对比例4
对比例4与实施例10的区别在于对比例10中，在上清液中不加二硫苏糖醇，其他均与实施例10保持一致。
根据实施例1～10 的检测方式对对比例1～4的实施方式生产的活性肽进行检测。
表2 对比例1～4的检测结果
| 试验结果 | 对比例1 | 对比例2 | 对比例3 | 对比例4 | 实施例10 |
| 腥味 | 2.7 | 2.5 | 4.1 | 2.7 | 1.5 |
分析:对比实施例10与对比例1和对比例2的实验结果，则可以发现半胱氨酸盐酸盐和柠檬酸均有优良的抑制腥味的作用，在对比实施例10与对比例3，在组分中同时不含有半胱氨酸盐酸盐和柠檬酸时，腥味明显加重，则申请人能够合理的推测出，半胱氨酸盐酸盐和柠檬酸间存在配合的作用效果，能够增强抑制腥味的作用，在对比实施例10 与对比例4，则会发现二硫苏糖醇也具有明显的抑制腥味的作用。
以上所述仅是本发明的示范性实施方式，而非用于限制本发明的保护范围，本发明的保护范围由所附的权利要求确定。
Claims (10)
1.一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，其特征是，包括如下制备步骤：
步骤1：鱼骨处理，除去鱼骨表面的碎肉，于0.09～0.1MPa、120～125℃下烘干鱼骨；
步骤2：将烘干后的鱼骨经粉碎机打磨成细粉，过20～40目筛，后加入与鱼骨相同重量的去离子水搅拌混合均匀得中间产物，静置3～3.5h；
步骤3：静置结束后调节中间产物pH，加入酶解液酶解，酶解后加热使酶失去活性后，得到酶解液浆；
步骤4：酶解液浆在20～25℃、2000～4000rpm条件下离心 6 ～ 10min，分别收集上清液和沉淀物；
步骤5：向上清液中加入半胱氨酸盐酸盐、木糖、海藻糖、二硫苏糖醇、麦芽糖醇、白醋粉、维生素B1、菠萝酮、乙基麦芽酚、柠檬酸搅拌均匀，0.09～0.1MPa、110～121℃下蒸煮25～30min，得处理后的上清液；
步骤6：将处理后的上清液用亚麻布过滤，滤液在 2000～4000rpm 离心 10～15min，得到的上清液通过 GPC 凝胶净化，再通过 0.22μm 孔径的滤膜过滤除菌，即得到无菌液；
步骤7：将无菌液经过浓缩、加活性碳脱色，搅拌并加热至80～85℃，保持半小时后过滤，向滤液中加入质量分数为20%～35%的聚乙烯吡洛烷酮作为冻干添加剂，冷冻干燥 10～18h，得到鱼骨蛋白多肽粉。
2.根据权利要求1所述的一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，其特征是，步骤1中除去鱼骨表面碎肉的过程包括，鱼骨经沸水中烫漂3～5min后用自来水冲洗除去鱼骨表面残留鱼肉，残留鱼肉收集，备用。
3.根据权利要求1所述的一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，其特征是，步骤1中除去鱼骨表面碎肉的过程包括，向鱼骨中加入占鱼骨重量5％～8％的淡水鱼下脚料，与鱼骨重量等量的水，并调节pH为6～6.5，于40～50℃下保温36～48h后，于90℃下加热15～30min，降温至40～50℃后调节pH为5～5.5，加入占鱼骨重量1%～2％的胃蛋白酶继续酶解50～60min后，于90℃下加热15～30min，2000～4000rpm条件下离心分离出鱼骨后用自来水冲洗干净，分离液备用。
4.根据权利要求1所述的一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，其特征是，步骤3中酶解的过程包括如下：调节中间产物pH为6～8，加入占鱼骨重量2%～4%的复合蛋白酶，于46～49℃下酶解4～6h，于90～100℃下加热15～30min，使酶失去活性。
5.根据权利要求1所述的一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，其特征是，步骤3中酶解的过程包括如下：调节中间产物pH为6～8，加入占鱼骨重量2%～4%的复合蛋白酶，于46～49℃下酶解4～6h，于90～100℃下加热15～30min，使酶失去活性，在继续调节pH为5.5～7，加入占鱼骨重量2%～4%的木瓜蛋白酶，于50～60℃下酶解3～6h，于100～120℃下加热15～30min，使酶失去活性。
6.根据权利要求1所述的一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，其特征是，步骤4中的沉淀物于200～210℃，加入与沉淀物等重量的蒸馏水，0.09～0.1MPa下反应5～7h，得第二产物。
7.根据权利要求1所述的一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，其特征是，步骤４中的沉淀物中加入为鱼骨重量20%～40%的乳酸活化5～8ｈ，取清液，0～4℃下冷却，得白色块状物，用无水乙醇浸泡白色块状物，2000～4000rpm条件下离心分离，得第二产物。
8.根据权利要求6所述的一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，其特征是，将第二产物和所述残留鱼肉收集、混合，于70～80℃条件下烘干3～4ｈ后，用于制作饲料添加剂。
9.根据权利要求1所述的一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，其特征是，步骤5中向上清液中加入下述重量份数的组分：半胱氨酸盐酸盐0.5～1份、木糖1～1.5份、海藻糖5～6份、二硫苏糖醇2～4份、麦芽糖醇1～2份、维生素B10.2～0.5份、菠萝酮0.01～0.02份、乙基麦芽酚0.01～0.02份、柠檬酸0.2～0.5份。
10.根据权利要求1所述的一种利用鱼骨渣提取活性肽的生产工艺，其特征是，所述鱼骨选自鲢鱼、罗非鱼、金枪鱼、鲶鱼中至少一种鱼的鱼骨。
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