CN105154503B - 一种金枪鱼多肽的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种金枪鱼多肽的提取方法，目的主要是克服现有方法提取的金枪鱼多肽带腥味的问题。本发明首先采用稀盐溶液提取金枪下脚料中的蛋白质，然后使用改性膨润土对提取的金枪鱼蛋白质进行脱腥处理，同时利用蛋白质在等电点沉淀的原理，在脱腥之前调节金枪鱼蛋白液的pH，使提取的金枪鱼蛋白质沉淀，避免了改性膨润土对蛋白质的吸附，最后采用中性蛋白酶和复合蛋白酶酶解蛋白质，得到金枪鱼多肽。使用本发明提取的金枪鱼多肽，不仅无腥味，而且多肽得率高。
Description
技术领域
本发明涉及水产品加工领域，尤其涉及一种金枪鱼多肽的提取方法。
背景技术
金枪鱼类是硬骨鱼纲鲈形目鲭科鱼类中具有胸甲的几个属鱼类的总称，又称鲔鱼、吞拿鱼，是一种生活在海洋中上层水域的高度洄游性鱼类，主要分别在太平洋、大西洋、印度洋的热带、亚热带以及温带广阔水域。常见的金枪鱼类有5个属，17个种。主要包括长鳍金枪鱼、大西洋金枪鱼、黄鳍金枪鱼、大眼金枪鱼、蓝鳍金枪鱼、鲣鱼等。金枪鱼肉质鲜嫩，蛋白质含量很高，生物价高达90，氨基酸配合优越；富含DHA、EPA等具有生物活性的高度多不饱和脂肪酸，可促进大脑发育、有效预防心脑血管疾病；同时，蛋氨酸、牛磺酸、矿物质和维生素含量丰富，是国际营养协会推荐的绿色无污染食品。
目前，金枪鱼除了鲜销外，一般都经冷冻制成冷冻金枪鱼肉，用于制备调味料、罐头等食品。金枪鱼加工过程中会出现大量的下脚料，如鱼头、内脏、鳃、鱼皮等，下脚料约占总重量的50～70％，下脚料中含有大量的蛋白质资源，是制备各种活性肽、氨基酸的优良原料。随着金枪鱼加工量的增大，将会产生大量的副产物，因此蛋白质的水解工艺及水解产物的研究具有重要的意义和应用价值。
中国专利公布号CN102051399A，公布日2011年5月11日，公开了一种金枪鱼中降血压肽的提取方法，包括如下步骤：将金枪鱼组织匀浆，在pH值2～5的条件下加入1000～13000U/g鱼浆的胃蛋白酶或者木瓜蛋白酶，升温至35～50℃，水浴酶解1～4h，再将酶解液沸水加热5～15min灭酶，冷却离心后，用打孔树脂或者葡聚糖凝胶树脂净化等步骤制得降血压多肽提取物。该发明的优点在于以金枪鱼下脚料为原料提取降血压肽，但是该方法制备的降血压肽没有经过脱腥处理，使用价值低。
发明内容
本发明的目的在于克服现有方法提取的金枪鱼多肽带腥味的问题，提供一种金枪鱼多肽的提取方法，采用本发明制备的金枪鱼冻干粉，不仅无腥味而且多肽得率高。
本发明的具体技术方案为：一种金枪鱼多肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)将新鲜的金枪鱼下脚料洗净，绞成金枪鱼肉糜；
(2)将金枪鱼肉糜与浓度为0.4～0.5mol/L的NaCl溶液按质量比1：8～10混合，将混合液在10～15℃、搅拌速度为500～700r/min的条件下浸提1～2h；
(3)浸提完毕，将混合液过滤得料液，调节料液pH至5.0～5.5后，在料液中加入改性膨润土，反应45～60min；
(4)反应完毕，调节料液pH至7.0～7.5后，将料液离心，取上清液；
(5)在上清液中加入占上清液质量4～6％的中性蛋白酶和复合蛋白酶，在25～30℃条件下酶解5～8h得酶解液；
(6)将酶解液以100℃水浴加热15～20min后，在5000～6000r/min条件下离心20～30min，取上清液，冷冻干燥后即得金枪鱼多肽。
本发明采用稀盐溶液提取金枪鱼下脚料中的蛋白质，并利用蛋白质在等电点沉淀的原理，调节金枪鱼蛋白液的pH，使提取的金枪鱼蛋白质沉淀，然后利用膨润土吸附原理，使用改性膨润土对金枪鱼蛋白质进行脱腥处理，避免了改性膨润土对蛋白质的吸附，最后使用中性蛋白酶和复合蛋白酶对提取的蛋白质进行酶解，得到金枪鱼多肽提取物。使用本发明提取的金枪鱼多肽，不仅无腥味，而且多肽得率高。
作为优选，所述步骤(3)改性膨润土与料液的质量比为1：10～12。改性膨润土的使用量影响脱腥效果，量太少，脱腥时间长而且效果差。
作为优选，所述步骤(3)改性膨润土由以下步骤制备：
(1)将膨润土原土粉碎、烘干、研磨后，过250～300目筛；
(2)将过筛后的膨润土与质量分数为13～18％的盐酸溶液按质量比1：3～4混合，置于微波加热器中加热；
(3)加热完毕后，将混合物过滤，滤饼经冷冻干燥后，活化30～45min，即得改性膨润土。
本发明采用盐酸处理膨润土，可以将膨润土中的一些非吸附性杂质矿物分解，提高了具吸附性蒙脱石的含量。同时，小半径高活性的H+易取代蒙脱石晶层间的可交换性阳离子K+、Na+、Ca+、Mg2+等离子，从而改变了表面电位，增大了表面积，从而增加了膨润土的吸附性能。
作为优选，所述活化温度为300～350℃。高温焙烧可以使膨润土失去部分自身含有的吸附水，并使膨润土内部的空气逸出，从而在膨润土内部形成许多细小的空隙，增大了比表面积，增强膨润土的吸附能力。
作为优选，所述微波加热器功率为800～900W，加热时间6～8min。采用微波加热，可以缩短加热时间，节约能源。
作为优选，所述步骤(5)中性蛋白酶与复合蛋白酶质量比为2～3：1。采用混合蛋白酶酶解蛋白质，可以制备分子量更低的多肽，更易于人体吸收。
本发明的有益效果是：本发明采用改性膨润土对提取的金枪鱼蛋白液进行脱腥处理，同时，利用蛋白质等电点沉淀的原理，在脱腥之前，将金枪鱼蛋白质沉淀，避免了改性膨润土对蛋白质的吸附，最后使用中性蛋白酶和复合蛋白酶对提取的蛋白质进行酶解，本发明提取的金枪鱼多肽不仅无腥味，而且多肽得率高。
具体实施方式
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案做进一步说明。
本发明使用的中性蛋白酶和复合蛋白酶均购自诺维信(中国)生物技术有限公司。
本发明所采用的其他原料和设备若非特指，均可从市场购得或是本领域常用的，实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1
一种金枪鱼多肽的提取方法，包括以下步骤：
(1)将新鲜的金枪鱼下脚料洗净，绞成金枪鱼肉糜；
(2)将金枪鱼肉糜与浓度为0.4mol/L的NaCl溶液按质量比1：8混合，使用磁力恒温搅拌器，将混合液在10℃、搅拌速度为500r/min的条件下浸提1h；
(3)浸提完毕，将浸提液过滤得料液，使用0.01mol/L的盐酸溶液调节料液pH至5.0后，在料液中加入与料液质量比为1：10的改性膨润土，反应45min；
(4)反应完毕，使用0.01mol/L的NaOH溶液调节料液pH至7.0，将料液以8000r/min离心20min，取上清液；
(5)在上清液中加入占上清液质量4％的中性蛋白酶和复合蛋白酶，在25℃条件下酶解5h得酶解液，其中中性蛋白酶和复合蛋白酶的质量比为2：1；
(6)将酶解液以100℃水浴加热15min后，在5000r/min条件下离心20min，取上清液，冷冻干燥后即得金枪鱼多肽。
其中，改性膨润土由以下步骤制备：
(1)将膨润土原土粉碎、烘干、研磨后，过250目筛；
(2)将过筛后的膨润土与质量分数为13％的盐酸溶液按质量比1：3混合，置于微波加热器中加热6min，微波加热器的功率为800W；
(3)加热完毕后，将混合物过滤，滤饼经冷冻干燥后，在300℃活化30min，即得改性膨润土。
实施例2
一种金枪鱼冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)将新鲜的金枪鱼去除内脏后洗净，绞成金枪鱼肉糜；
(2)将金枪鱼肉糜与浓度为0.45mol/L的NaCl溶液按质量比1：9混合，使用磁力搅拌器，将混合液在12℃、搅拌速度为600r/min的条件下浸提1.5h；
(3)浸提完毕，将浸提液过滤得料液，使用0.01mol/L的盐酸溶液调节料液pH至5.2后，在料液中加入与料液质量比为1：11的改性膨润土，反应50min；
(4)反应完毕，使用0.01mol/L的NaOH溶液调节料液pH至中性后，将料液以9000r/min离心25min，取上清液；
(5)在上清液中加入占上清液质量5％的中性蛋白酶和复合蛋白酶，在28℃条件下酶解7h得酶解液，其中中性蛋白酶和复合蛋白酶的质量比为2.5：1；
(6)将酶解液以100℃水浴加热18min后，在5500r/min条件下离心25min，取上清液，冷冻干燥后即得金枪鱼多肽。
其中，改性膨润土由以下步骤制备：
(1)将膨润土原土粉碎、烘干、研磨后，过300目筛；
(2)将过筛后的膨润土与质量分数为15％的盐酸溶液按质量比1：3.5混合，置于微波加热器中加热7min，微波加热器的功率为850W；
(3)加热完毕后，将混合物过滤，滤饼经冷冻干燥后，在320℃活化40min，即得改性膨润土。
实施例3
一种金枪鱼冻干粉的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将新鲜的金枪鱼去除内脏后洗净，绞成金枪鱼肉糜；
(2)将金枪鱼肉糜与浓度为0.5mol/L的NaCl溶液按质量比1：10混合，使用磁力搅拌器，将混合液在15℃、搅拌速度为700r/min的条件下浸提2h；
(3)浸提完毕，将浸提液过滤得料液，使用0.01mol/L的盐酸溶液调节料液pH至5.5后，在料液中加入与料液质量比为1：12的改性膨润土，反应60min；
(4)反应完毕，使用0.01mol/L的NaOH溶液调节料液pH至中性后，将料液以10000r/min离心30min，取上清液；
(5)在上清液中加入占上清液质量6％的中性蛋白酶和复合蛋白酶，在30℃条件下酶解8h得酶解液，其中中性蛋白酶和复合蛋白酶的质量比为3：1；
(6)将酶解液以100℃水浴加热20min后，在6000r/min条件下离心30min，取上清液，冷冻干燥后即得金枪鱼多肽。
其中，改性膨润土由以下步骤制备：
(1)将膨润土原土粉碎、烘干、研磨后，过300目筛；
(2)将过筛后的膨润土与质量分数为18％的盐酸溶液按质量比1：4混合，置于微波加热器中加热8min，微波加热器的功率为900W；
(3)加热完毕后，将混合物过滤，滤饼经冷冻干燥后，在350℃活化45min，即得改性膨润土。
采用本发明提取的金枪鱼多肽，多肽得率≥75.4％。将实施例1、实施例2、实施例3中提取的金枪鱼多肽，进行感官评价，评价标准如表1所示，得到的评价结果如表2所示。
由表2可以看出，采用本发明提取的金枪鱼多肽，无鱼腥味或者很淡的鱼腥味，消费者容易接受。
表1感官评价标准
表2感官评价结果
Claims (4)
1.一种金枪鱼多肽的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将新鲜的金枪鱼下脚料洗净，绞成金枪鱼肉糜；
(2)将金枪鱼肉糜与浓度为0.4～0.5mol/L的NaCl溶液按质量比1：8～10混合，将混合液在10～15℃、搅拌速度为500～700r/min的条件下浸提1～2h；
(3)浸提完毕，将混合液过滤得料液，调节料液pH至5.0～5.5后，在料液中加入改性膨润土，改性膨润土与料液的质量比为1：10～12，反应45～60min；其中，改性膨润土由以下步骤制备方法为：将膨润土原土粉碎、烘干、研磨后，过250～300目筛；将过筛后的膨润土与质量分数为13～18％的盐酸溶液按质量比1：3～4混合，置于微波加热器中加热；加热完毕后，将混合物过滤，滤饼经冷冻干燥后，活化30～45min，即得改性膨润土；
(4)反应完毕，调节料液pH至7.0～7.5后，将料液离心，取上清液；
(5)在上清液中加入占上清液质量4～6％的中性蛋白酶和复合蛋白酶，在25～30℃条件下酶解5～8h得酶解液；
(6)将酶解液以100℃水浴加热15～20min后，在5000～6000r/min条件下离心20～30min，取上清液，冷冻干燥后即得金枪鱼多肽。
2.根据权利要求1所述的一种金枪鱼多肽的提取方法，其特征在于，所述活化温度为300～350℃。
3.根据权利要求1所述的一种金枪鱼多肽的提取方法，其特征在于，所述微波加热器功率为800～900W，加热时间6～8min。
4.根据权利要求1所述的一种金枪鱼多肽的提取方法，其特征在于，所述步骤(5)中性蛋白酶与复合蛋白酶质量比为2～3：1。
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