CN108732266A - 一种精芪双参胶囊的hplc特征图谱的构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及医药技术领域,特别涉及一种精芪双参胶囊的HPLC特征图谱的构建方法。该构建方法,包括如下步骤:取精芪双参胶囊内容物,加入甲醇,超声处理后滤过,取续滤液,得到供试品溶液;取人参皂苷Rg1对照品、丹酚酸B对照品、芒柄花素对照品和丹参酮IIA对照品混合,加入甲醇,得到参照物溶液;将供试品溶液和参照物溶液分别采用高效液相色谱法进行测定,得到精芪双参胶囊的HPLC特征图谱;高效液相色谱法的色谱条件为:以C18柱为色谱柱,以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱。本发明建立的精芪双参胶囊特征图谱的分离度较好,可同时分离检测15种中药活性成分。
Description
技术领域
本发明涉及医药技术领域,特别涉及一种精芪双参胶囊的HPLC特征图谱的构建方法。
背景技术
精芪双参胶囊是由黄芪、人参、丹参及黄精4味组成的中药复方,功能主治为补气养阴、活血化瘀、养心安神。适用于心脑血管疾病之心悸气短,头晕头痛,倦怠乏力,耳鸣眼花,肢体麻木,失眼健忘等症。现执行国家药品标准编号为WS-5136(B-0136)-2002,标准中只收载性状、检查及个别药材的鉴别项及含量测定项,因中药复方制剂药味多,成分复杂相互干扰不易有效检测等特点,已有质量检查项并不能全面监控产品质量。由于中药产地分散,类同品、代用品不断,加之生长环境、采收期、加工炮制方法不同及制剂生产工艺等因素,造成不同厂家生产的同一品种中药产品及同一厂家不同生产批次产品间,其内在质量即其所含化学成分及临床疗效的差异。有效成分不明,作用机制不清,质量的可控性不够等因素严重制约了中药国际化和现代化的步伐,因此,采用有效合理的方式和技术手段进行中药质量一致性评价,以保证中药产品的安全、有效和质量可控,成为了中药国际化和现代化的重点与难点之一。
中药及其制剂均为多组分复杂体系,因此评价其质量应采用与之相适应的,能提供丰富鉴别信息的检测方法,但现行的显微鉴别、薄层鉴别和含量测定等方法都不足以解决这一问题,建立中成药特征图谱将能较为全面地反映其所含化学成分的种类与数量,进而对药品质量进行整体描述和评价。
目前,有关质量控制方面的专利只是单纯的对一味药的一种活性成分的含量测定及定性鉴定,难以从整体上反应产品的质量或从整体上控制产品的质量。目前针对精芪双参胶囊HPLC特征图谱的构建方法暂无相关报道。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了一种精芪双参胶囊的HPLC特征图谱的构建方法。该精芪双参胶囊特征图谱构建方法的分离度较好,可同时分离检测15种中药活性成分。
为了实现上述发明目的,本发明提供以下技术方案:
本发明提供了一种精芪双参胶囊的HPLC特征图谱的构建方法,包括如下步骤:
取精芪双参胶囊内容物,加入甲醇,超声处理后滤过,取续滤液,得到供试品溶液;
取人参皂苷Rg1对照品、丹酚酸B对照品、芒柄花素对照品和丹参酮IIA对照品混合,加入甲醇,得到参照物溶液;
将供试品溶液和参照物溶液分别采用高效液相色谱法进行测定,得到精芪双参胶囊的HPLC特征图谱;
高效液相色谱法的色谱条件为:以Agilent ZORBAXSB-C18柱为色谱柱,以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,梯度洗脱的程序为:
0~15min,A相:5~15%,B相:95~85%;
15~35min,A相:15~35%,B相:85~65%;
35~60min,A相:35~70%,B相:65~30%;
60~70min,A相:70~80%,B相:30~20%。
本发明中,对精芪双参胶囊进行了特征图谱试验研究,并对所建立方法进行了精密度、重复性等方法学验证试验,结果表明本发明中方法稳定可行。本发明中方法,克服了现有技术中检测方法指标针对性强、覆盖面小、片面性等不足,是一种符合中药复方特色的质量控制模式,可有效地表征药品整体质量。
按照前述精芪双参胶囊HPLC特征图谱构建方法构建10批精芪双参胶囊的HPLC特征图谱,采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件生成由15个共有峰构成的精芪双参胶囊HPLC对照特征图谱,共有峰中峰1为毛蕊异黄酮葡萄糖苷峰,峰3为人参皂苷Rg1峰,峰6(S)为丹酚酸B峰,峰10为芒丙花素峰,峰15为丹参酮IIA峰。
在对照特征图谱中,以丹酚酸B峰为参照峰S峰,计算各特征峰与S峰的相对保留时间,相对保留时间在第一规定值的±5%之内,第一规定值分别为:0.74-峰1、0.93-峰2、0.91-峰3、0.95-峰4、0.96-峰5、1.00-峰S、1.03-峰7、1.05-峰8、1.10-峰9、1.38-峰10、1.63-峰11、1.77-峰12、1.89-峰13、1.95-峰14、2.15-峰15。
本发明精芪双参胶囊特征图谱的构建方法,采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对样品图谱与对照特征图谱进行分析,相似度大于0.90为合格产品。
作为优选,在供试品溶液制备步骤中,以g/mL计,精芪双参胶囊内容物与甲醇的用量比为(1~3):(10~50)。
优选地,在供试品溶液制备步骤中,以g/mL计,精芪双参胶囊内容物与甲醇的用量比为2:25。
作为优选,超声处理的时间为20~40分钟。
优选地,超声处理的时间为30分钟。
作为优选,在参照物溶液中,人参皂苷Rg1的浓度为25~75μg/mL、丹酚酸B的浓度为100~300μg/mL、芒柄花素的浓度为10~30μg/mL,丹参酮IIA的浓度为15~45μg/mL。
优选地,在参照物溶液中,人参皂苷Rg1的浓度为50μg/mL、丹酚酸B的浓度为200μg/mL、芒柄花素的浓度为20μg/mL,丹参酮IIA的浓度为30μg/mL。
作为优选,供试品溶液的进样量为5~15μL,参照物溶液的进样量为5~15μL。
优选地,供试品溶液的进样量为10μL,参照物溶液的进样量为10μL。
作为优选,高效液相色谱法的紫外检测波长为230~270nm。
作为优选,高效液相色谱法的紫外检测波长为250nm。
作为优选,高效液相色谱法的流速为0.5~1.5mL/min。
作为优选,高效液相色谱法的流速为1.0mL/min。
作为优选,高效液相色谱法的柱温为30~40℃。
优选地,高效液相色谱法的柱温为35℃。
作为优选,精芪双参胶囊HPLC特征图谱的构建方法如下:
(1)供试品溶液的制备:取精芪双参胶囊内容物2g,精密称定,精密加入甲醇25mL,称定重量,超声处理30分钟,放冷,用甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得;
(2)参照物溶液的制备:取人参皂苷Rg1、丹酚酸B、芒柄花素及丹参酮IIA对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lmL含人参皂苷Rg1 50μg、丹酚酸B 200μg、芒柄花素20μg及丹参酮IIA30μg的溶液,即得。
(3)测定:精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,即得精芪双参胶囊特征图谱。
步骤(3)中,优选的高效液相色谱测定的色谱条件为:以Agilent ZORBAXSB-C18柱为色谱柱;紫外检测波长为250nm;流速为1.0mL/min;柱温为35℃;以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,流动相A、B的比例变化为:0~15min,A相:5~15%、B相:95~85%;15~35min,A相:15~35%、B相:85~65%;35~60min,A相:35~70%、B相:65~30%;60~70min,A相:70~80%、B相:30~20%。
本发明提供了一种精芪双参胶囊的HPLC特征图谱的构建方法。该构建方法,包括如下步骤:取精芪双参胶囊内容物,加入甲醇,超声处理后滤过,取续滤液,得到供试品溶液;取人参皂苷Rg1对照品、丹酚酸B对照品、芒柄花素对照品和丹参酮IIA对照品混合,加入甲醇,得到参照物溶液;将供试品溶液和参照物溶液分别采用高效液相色谱法进行测定,得到精芪双参胶囊的HPLC特征图谱;高效液相色谱法的色谱条件为:以Agilent ZORBAXSB-C18柱为色谱柱,以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱。
本发明的有益效果如下:
(1)用本发明所提供的方法能有效的监控不同批次精芪双参胶囊的质量,使其质量稳定,方法具有精密度高、重现性好等特点,有利于全面监控产品的质量。
(2)本发明建立的精芪双参胶囊特征图谱以人参皂苷Rg1、丹酚酸B、芒柄花素及丹参酮IIA为参照物,注重各个特征峰的顺序和关系,能全面评价产品的整体质量面貌特征,方法科学可靠。
(3)本发明的最佳紫外吸收波长为250nm。采用本发明中方法用DAD检测器对精芪双参胶囊进行测定,根据三维扫描图中所有色谱峰出现最大吸收的检测波长结果分别调取各波长下色谱图,当检测波长为250nm时,特征峰数目较多,各峰面积较高且各特征峰之间分离效果也最好。
(4)本发明建立的精芪双参胶囊特征图谱的分离度较好,可同时分离检测15种中药活性成分。
附图说明
图1示实施例2精芪双参胶囊HPLC特征图谱;
图2示实施例5精芪双参胶囊10批次HPLC特征图谱叠加图;
图3示实施例5精芪双参胶囊对照特征图谱;
图4示对比例1精芪双参胶囊流动相选择色谱图;
图5示对比例2精芪双参胶囊流动相选择色谱图;
图6示对比例3精芪双参胶囊流动相比例选择色谱图;
图7示对比例4精芪双参胶囊流动相比例选择色谱图。
具体实施方式
本发明公开了一种精芪双参胶囊的HPLC特征图谱的构建方法,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
本发明提供的精芪双参胶囊的HPLC特征图谱的构建方法中所用试剂或仪器均可由市场购得。
下面结合实施例,进一步阐述本发明:
实施例1:一种精芪双参胶囊HPLC特征图谱的构建方法
仪器:UltiMate 3000高效液相色谱仪,紫外DAD检测器;Mettler AE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。
试剂:甲醇等为分析纯,磷酸、乙腈为色谱纯,水为超纯水。
试药:人参皂苷Rg1、丹酚酸B、芒柄花素及丹参酮IIA(均购自中国食品药品检定研究院)。
方法与结果
(1)供试品溶液的制备:取精芪双参胶囊内容物约1g,精密称定,精密加入甲醇10mL,称定重量,超声处理20分钟,放冷,用甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得;
(2)参照物溶液的制备:取人参皂苷Rg1、丹酚酸B、芒柄花素及丹参酮IIA对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lmL含人参皂苷Rg1 25μg、丹酚酸B 100μg、芒柄花素10μg及丹参酮IIA 15μg的溶液,即得。
(3)测定:以Agilent ZORBAX SB-C18柱为色谱柱;紫外检测波长为230nm;流速为0.5mL/min;柱温为30℃。以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,梯度洗脱的时间及流动相比例如表1所示:
表1精芪双参胶囊特征图谱流动相时间及梯度
时间(分钟) | 流动相A(%) | 流动相B(%) |
0~15 | 5→15 | 95→85 |
15~35 | 15→35 | 85→65 |
35~60 | 35→70 | 65→30 |
60~70 | 70→80 | 30→20 |
精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到精芪双参胶囊的HPLC特征图谱。
实施例2:一种精芪双参胶囊HPLC特征图谱的构建方法
仪器:UltiMate 3000高效液相色谱仪,紫外DAD检测器;Mettler AE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。
试剂:甲醇等为分析纯,磷酸、乙腈为色谱纯,水为超纯水。
试药:人参皂苷Rg1、丹酚酸B、芒柄花素及丹参酮IIA(均购自中国食品药品检定研究院)。
方法与结果
(1)供试品溶液的制备:取精芪双参胶囊内容物约2g,精密称定,精密加入甲醇25mL,称定重量,超声处理30分钟,放冷,用甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得;
(2)参照物溶液的制备:取人参皂苷Rg1、丹酚酸B、芒柄花素及丹参酮IIA对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lmL含人参皂苷Rg150μg、丹酚酸B200μg、芒柄花素20μg及丹参酮IIA30μg的溶液,即得。
(3)测定:以Agilent ZORBAXSB-C18柱为色谱柱;紫外检测波长为250nm;流速为1.0mL/min;柱温为35℃。以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,梯度洗脱的时间及流动相比例同表1。
精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到精芪双参胶囊的HPLC特征图谱,如图1所示。
实施例3:一种精芪双参胶囊HPLC特征图谱的构建方法
仪器:UltiMate 3000高效液相色谱仪,紫外DAD检测器;Mettler AE240十万分之一分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司);AB204-E电子天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)等。
试剂:甲醇等为分析纯,磷酸、乙腈为色谱纯,水为超纯水。
试药:人参皂苷Rg1、丹酚酸B、芒柄花素及丹参酮IIA(均购自中国食品药品检定研究院)。
方法与结果
(1)供试品溶液的制备:取精芪双参胶囊内容物约3g,精密称定,精密加入甲醇50mL,称定重量,超声处理40分钟,放冷,用甲醇补足减失的重量,滤过,取续滤液,即得;
(2)参照物溶液的制备:取人参皂苷Rg1、丹酚酸B、芒柄花素及丹参酮IIA对照品适量,精密称定,加甲醇制成每lmL含人参皂苷Rg175μg、丹酚酸B300μg、芒柄花素30μg及丹参酮IIA45μg的溶液,即得。
(3)测定:以Agilent ZORBAXSB-C18柱为色谱柱;紫外检测波长为270nm;流速为1.5mL/min;柱温为40℃。以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,梯度洗脱的时间及流动相比例同表1。
精密吸取参照物溶液和供试品溶液各10μL,注入高效液相色谱仪,照高效液相色谱法测定,得到精芪双参胶囊的HPLC特征图谱。
实施例4:精芪双参胶囊特征图谱测定方法学考察
精密度试验:取精芪双参胶囊,按实施例2供试品溶液制备方法制成供试品溶液,连续进样6次,依法检测。结果:6次测定特征图谱中各共有峰的相对保留时间RSD值均﹤2%,表明仪器精密度良好。
稳定性试验:取精芪双参胶囊,按实施例2供试品溶液制备方法制成供试品溶液,分别在0、2、4、8、12小时依法进行检测。结果:5次测定特征图谱中各共有峰的相对保留时间RSD值均﹤2%,表明供试品溶液在12小时之内稳定。
重复性试验:取同一批精芪双参胶囊,按实施例2供试品溶液制备方法制成6份供试品溶液,依法测定。结果:6次测定特征图谱中各共有峰的相对保留时间RSD值均﹤2%,表明方法的重复性较好。
考察了实施例1、3的方法的精密度、稳定性、重复性,结果与实施例2方法的结果相近,同样显示了良好的精密度、稳定性、重复性。
实施例5:构建精芪双参胶囊的对照特征图谱
取精芪双参胶囊10批,按实施例2的条件进行测定,得到10批次样品HPLC特征图谱,如图2所示。采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对10批特征图谱进行比较,确定共有特征峰,生成由15个共有峰构成的对照特征图谱,如图3所示。其中参照峰为丹酚酸B峰(6号峰)。
相似度分析:计算10批供试品特征图谱与生成的对照特征图谱的相似度,结果均大于0.90。相似度比较结果如表2所示。
表2精芪双参胶囊HPLC特征图谱相似度评价结果
S1 | S2 | S3 | S4 | S5 | S6 | S7 | S8 | S9 | S10 | R | |
S1 | 1 | 0.994 | 0.98 | 0.996 | 0.999 | 0.994 | 0.965 | 0.983 | 0.953 | 0.912 | 0.990 |
S2 | 0.994 | 1 | 0.994 | 0.999 | 0.991 | 0.996 | 0.986 | 0.996 | 0.978 | 0.913 | 0.999 |
S3 | 0.980 | 0.994 | 1 | 0.989 | 0.975 | 0.991 | 0.995 | 0.994 | 0.986 | 0.948 | 0.997 |
S4 | 0.996 | 0.999 | 0.989 | 1 | 0.995 | 0.995 | 0.979 | 0.993 | 0.971 | 0.958 | 0.996 |
S5 | 0.999 | 0.991 | 0.975 | 0.995 | 1 | 0.992 | 0.958 | 0.980 | 0.946 | 0.969 | 0.986 |
S6 | 0.994 | 0.996 | 0.991 | 0.995 | 0.992 | 1 | 0.980 | 0.988 | 0.965 | 0.922 | 0.996 |
S7 | 0.965 | 0.986 | 0.995 | 0.979 | 0.958 | 0.980 | 1 | 0.991 | 0.992 | 0.955 | 0.992 |
S8 | 0.983 | 0.996 | 0.994 | 0.993 | 0.980 | 0.988 | 0.991 | 1 | 0.99 | 0.916 | 0.997 |
S9 | 0.953 | 0.978 | 0.986 | 0.971 | 0.946 | 0.965 | 0.992 | 0.99 | 1 | 0.934 | 0.984 |
S10 | 0.912 | 0.913 | 0.948 | 0.958 | 0.969 | 0.922 | 0.955 | 0.916 | 0.934 | 1 | 0.929 |
R | 0.990 | 0.999 | 0.997 | 0.996 | 0.986 | 0.996 | 0.992 | 0.997 | 0.984 | 0.929 | 1 |
对比例1:
该对比例与实施例2相近,唯一不同的是流动相选择乙腈-水,其特征图谱见图4。将该图与以乙腈-0.1%磷酸溶液作为流动相得到的图谱相比,显示色谱图中各色谱峰分离效果、不对称度均较差,基线不平稳。
对比例2:
该对比例与实施例2相近,唯一不同的是流动相选择甲醇-0.1%甲酸溶液,其特征图谱见图5。将该图与以乙腈-0.1%磷酸溶液作为流动相得到的图谱相比,显示色谱图中各色谱峰相对保留时间集中在40分钟后,各峰分离效果较差,基线不平稳。
对比例3:
该对比例与实施例2相近,唯一不同的是洗脱程序不同,该对比例的洗脱程序如下:
0~5min,A相:5~15%、B相:95~85%;
5~20min,A相:15~35%、B相:85~65%;
20~50min,A相:35~75%、B相:65~25%;
50~60min,A相:75~80%、B相:25~20%;
60~70min,A相:80%、B相:20%。
特征图谱见图6。结果显示,该色谱图中各色谱峰相对保留时间集中在20分钟之前,各峰之间分离效果较差。
对比例4:
该对比例与实施例2相近,唯一不同的是洗脱程序不同,该对比例的洗脱程序如下:
0~5min,A相:2~10%、B相:98~90%;
5~25min,A相:10~30%、B相:90~70%;
25~40min,A相:30~80%、B相:70~20%;
40~50min,A相:80%、B相:20%;
50~60min,A相:80~2%、B相:20~98%。
特征图谱见图7。结果显示,该色谱图中各特征峰分离效果较差。
对比例5:
该对比例与实施例2相近,唯一不同的是供试品提取方法不同,该对比例的供试品提取方法如下:
取精芪双参胶囊样品,以甲醇为提取溶剂,回流提取。
结果显示,超声与回流提取的提取率相当,但超声处理方法操作简便,故确定提取方法为超声提取。
对比例6:
该对比例与实施例2相近,唯一不同的是供试品提取溶剂不同,该对比例的供试品提取溶剂为乙醇、70%甲醇。
结果显示,以乙醇为溶剂供试品色谱中,特征峰数目较少且分离效果不佳;以70%甲醇为溶剂供试品色谱图中,各色谱峰峰面积较小。表明以乙醇或70%甲醇为溶剂时提取不完全。
对比例7:
该对比例与实施例2相近,唯一不同的是供试品提取溶剂加入量不同,该对比例的供试品提取溶剂加入量为:取精芪双参胶囊内容物约2g,精密称定,精密加入甲醇50mL。
结果显示,溶剂量为25mL和50mL提取供试品中色谱峰数目及分离效果无差异。
对比例8:
该对比例与实施例2相近,唯一不同的是供试品提取时间不同,该对比例的供试品提取时间为20分钟、40分钟。
结果显示,超声处理20、40分钟的供试品色谱图中,峰数目和分离效果与超声30分钟的峰数目和分离效果无差异,超声处理30和40分钟提取效率无明显差异,但色谱峰面积均高于超声处理20分钟。
对比例9:
该对比例与实施例2相近,唯一不同的是流动相B的磷酸溶液的浓度不同,该对比例的磷酸溶液的浓度为0.05%、0.2%。
结果显示,以浓度为0.05%的磷酸溶液作为流动相B时,各色谱峰峰形不佳且不对称度较差;以浓度为0.2%的磷酸溶液作为流动相B时,各色谱峰分离效果与浓度为0.1%的磷酸溶液的分离效果无差异。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种精芪双参胶囊的HPLC特征图谱的构建方法,其特征在于,包括如下步骤:
取精芪双参胶囊内容物,加入甲醇,超声处理后滤过,取续滤液,得到供试品溶液;
取人参皂苷Rg1对照品、丹酚酸B对照品、芒柄花素对照品和丹参酮IIA对照品混合,加入甲醇,得到参照物溶液;
将供试品溶液和参照物溶液分别采用高效液相色谱法进行测定,得到精芪双参胶囊的HPLC特征图谱;
所述高效液相色谱法的色谱条件为:以Agilent ZORBAX SB-C18柱为色谱柱,以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,梯度洗脱,所述梯度洗脱的程序为:
0~15min,A相:5~15%,B相:95~85%;
15~35min,A相:15~35%,B相:85~65%;
35~60min,A相:35~70%,B相:65~30%;
60~70min,A相:70~80%,B相:30~20%。
2.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,在供试品溶液制备步骤中,以g/mL计,所述精芪双参胶囊内容物与所述甲醇的用量比为(1~3):(10~50)。
3.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述超声处理的时间为20~40分钟。
4.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,在参照物溶液中,人参皂苷Rg1的浓度为25~75μg/mL、丹酚酸B的浓度为100~300μg/mL、芒柄花素的浓度为10~30μg/mL,丹参酮IIA的浓度为15~45μg/mL。
5.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述供试品溶液的进样量为5~15μL,所述参照物溶液的进样量为5~15μL。
6.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的紫外检测波长为230~270nm。
7.根据权利要求1或6所述的构建方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的紫外检测波长为250nm。
8.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的流速为0.5~1.5mL/min。
9.根据权利要求1或8所述的构建方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的流速为1.0mL/min。
10.根据权利要求1所述的构建方法,其特征在于,所述高效液相色谱法的柱温为30~40℃。
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