CN108697765A

CN108697765A - 用于预防或治疗人乳头瘤病毒引起的疾病的含有免疫球蛋白fc融合il-7融合蛋白的药物组合物

Info

Publication number: CN108697765A
Application number: CN201680070831.3A
Authority: CN
Inventors: 姜文哲; 崔永祐; 崔东勋; 成永哲
Original assignee: Genexine Co Ltd
Current assignee: Genexine Co Ltd; Genexine Inc
Priority date: 2015-12-04
Filing date: 2016-12-02
Publication date: 2018-10-23
Also published as: US20240018205A1; TW201729829A; US20180319858A1; US11708399B2; KR20180033147A; WO2017095191A1; KR102133887B1; TWI774651B; KR20170066265A

Abstract

本发明涉及包含免疫球蛋白Fc区和IL‑7融合蛋白的药物组合物。具体地，当以包含免疫球蛋白Fc区和IL‑7的融合蛋白向感染区域给药时，会在体内诱导强烈的免疫应答，从而可以预防或治疗人乳头瘤病毒引起的疾病。

Description

用于预防或治疗人乳头瘤病毒引起的疾病的含有免疫球蛋白 FC融合IL-7融合蛋白的药物组合物

技术领域

本发明涉及用于预防或治疗人乳头瘤病毒衍生疾病的包含白细胞介素-7的融合蛋白的组合物。

背景技术

白细胞介素-7(以下称为“IL-7”)是刺激由B细胞和T细胞介导的免疫应答的免疫刺激性细胞因子，在适应性免疫系统中发挥着重要作用。IL-7主要由骨髓和胸腺的基质细胞分泌，也可在角化细胞、树突细胞、肝细胞、神经细胞和上皮细胞中产生(Heufler C etal.,1993,J.Exp.Med.178(3)):1109-14)。

具体地，白细胞介素-7通过T细胞和B细胞的存活和分化、淋巴细胞的存活、以及NK(自然杀伤)细胞的活化的刺激来激活免疫功能，白细胞介素-7对于T细胞和B细胞的发育起着特别重要的作用。所述IL-7与HGF(肝细胞生长因子)结合并作为前B细胞生长刺激因子或用于T细胞受体β(TCRβ)的V(D)J重排的辅助因子起作用(Muegge K,1993,Science 261(5117):93-5)。另外，白细胞介素-7通过淋巴组织诱导(LTi)细胞调节淋巴结的发育并促进幼稚T细胞或记忆T细胞的扩增和存活。还已知IL-7刺激IL-2和干扰素-γ的分泌，从而增强人类免疫应答。

同时，乳头瘤病毒是一种直径为52-55nm的基于DNA的病毒，其感染人类和其他动物的皮肤和皮下组织。人乳头瘤病毒(HPV)通常通过皮肤角化细胞或粘膜传播。目前已发现超过100种人乳头瘤病毒(HPV)，其中大多数未显示任何症状，但在某些情况下，它们可引起人类乳头状瘤。一些HPV会导致疣的发展，而一些HPV会导致癌前病变。特别地，高危病毒例如人乳头瘤病毒16(HPV 16)和人乳头瘤病毒18(HPV 18)会引发癌症，如宫颈癌和睾丸癌。

宫颈癌是全球女性癌症相关死亡的最常见原因之一。几乎所有的宫颈癌病例都是由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的。其中，HPV 16和HPV 18约占宫颈癌患者的70-75％。感染细胞的持续增殖导致恶化前宫颈上皮内瘤形成(CIN)，然后该CIN逐渐转变为浸润性癌症。

虽然预防性HPV疫苗可有效预防HPV感染，但这些疫苗对预先存在的感染和HPV诱导的病变没有治疗效果。对CIN2和CIN3最常见的治疗方法是手术切除，这与妊娠相关并发症和10％的复发率有关。更严重的是，传统治疗后宫颈癌的死亡率超过50％。

同时，最近已经开发了通过诱导免疫增强来治疗HPV感染的疗法。据报道，在以包括HPV16E7抗原的疫苗给药后，以Toll样受体(TLR)试剂7和9、咪喹莫特和CpG进行局部给药会诱导生殖道中E7特异性CD8T细胞的积聚和生殖器肿瘤的消退(Soong R-S et al.,2014,Clin.Cancer Res.20:5456-67)。然而，在人类中，咪喹莫特的使用会诱发副作用，例如急性和严重的局部炎症和溃疡，而CpG的给药需要重复注射，因为其疗效短暂。有人研究了在动物模型中用作疫苗佐剂的细胞因子(例如IL-2和IL-15)的能力，以提高治疗效力(AbrahamE et al.,1992,J Immunol 149:3719-26)。然而，这种细胞因子也需要重复注射，并可能诱发不良作用，例如在IL-2情况下的毛细血管渗漏综合征。

因此，仍然需要开发用于预防和治疗由HPV感染引起的疾病的有效和非手术疗法。

发明内容

技术问题

本发明的目的是提供用于预防或治疗人乳头瘤病毒衍生的疾病的组合物。

本发明的另一目的是提供用于预防或治疗人乳头瘤病毒衍生的疾病的方法。

解决方案

根据本发明的一个方面，提供了包含免疫球蛋白Fc区和IL-7的融合蛋白的药物组合物。此外，提供了一种通过以含有该融合蛋白的药物组合物进行粘膜给药来预防或治疗人乳头瘤病毒衍生的疾病的方法。

有益效果

在通过粘膜途径以本发明的包含免疫球蛋白Fc区和IL-7的融合蛋白给药的情况下，抗原特异性T细胞的数量增加，以预防或治疗人乳头瘤病毒衍生的疾病。而且，这种给药很容易进行。因此，根据本发明的包含免疫球蛋白Fc区和IL-7的融合蛋白可以用作能够替代传统的HPV预防性疫苗的新型药物组合物。

附图说明

图1是与Fc融合的IL-7的结构的示意图。

图2a和2b分别是条形图和荧光图像，其分别展示了在以Cy5.5和IL-7-Fc-Cy5.5粘膜给药后的第1天和第7天各种器官中的荧光强度(*，p<0.05)。

图3阐明了以PBS、rIL-7和IL-7-Fc对小鼠进行阴道内给药后，IL-7-Fc通过FcRn介导的转胞吞作用被运输至血清(*，p<0.05(rIL-7对IL-7-Fc))。

图4展示了宫颈组织中T细胞的点图、CD4和CD8T细胞的数量、以及CD4和CD8T细胞中CD62L^低CD44^高子集的数量(**，p<0.01)。

图5展示了取决于IL-7-Fc给药途径的T细胞活动的结果。在阴道给药7天后，通过流式细胞术分析宫颈(CV)组织中的T细胞，并计算CD4T细胞和CD8T细胞的数量(图5)(**，p<0.01)。

图6展示了根据以IL-7-Fc给药观察抗癌作用的结果。

具体实施方式

实施本发明的最佳方式

下文详细描述本发明。

在用于实现目标的一个方面中，本发明提供了用于预防或治疗生殖器疾病的药物组合物，该药物组合物包含其中融合有免疫球蛋白Fc区的白细胞介素-7(IL-7)融合蛋白。

生殖器疾病可以是人乳头瘤病毒衍生的疾病。

如本文所用，术语“人乳头瘤病毒衍生的疾病”或“人乳头瘤病毒感染疾病”是指由人乳头瘤病毒(HPV)感染引起的疾病。根据感染程度或病变状态，可将人乳头瘤病毒衍生的疾病分为CIN1、CIN2、CIN3、LSIL(低级鳞状上皮内病变)、HSIL(高级鳞状上皮内病变)或癌症等。

如本文所用，术语“白细胞介素-7”可以是与源自动物或人的白细胞介素-7具有相同的氨基酸序列的蛋白。此外，术语“白细胞介素-7”可以是与体内衍生的白细胞介素-7具有相似的活性的多肽或蛋白。具体地，IL-7可以是包含IL-7蛋白或其片段的蛋白。而且，IL-7可以源自人、大鼠、小鼠、猴、牛或绵羊。

IL-7包括由SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6所示的氨基酸序列组成的多肽。此外，IL-7可以与SEQ ID NO：1至SEQ ID NO：6的序列具有约70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高的同源性。

具体地，人IL-7可以具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列(Genbank登录号P13232)；大鼠IL-7可以具有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列(Genbank登录号P56478)；小鼠IL-7可以具有如SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列(Genbank登录号P10168)；猴IL-7可以具有如SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列(Genbank登录号NP_001279008)；牛IL-7可以具有如SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列(Genbank登录号P26895)；且绵羊IL-7可以具有如SEQ IDNO：6所示的氨基酸序列(Genbank登录号Q28540)。

另外，IL-7蛋白或其片段可以包括各种经修饰的蛋白或肽，即变体。这种修饰可通过取代、缺失或添加野生型IL-7的一种或多种蛋白来进行，这不会改变IL-7的功能。这些不同的蛋白或肽可以与野生型蛋白具有70％、75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同源性。

通常，野生型氨基酸残基的取代可以通过取代不影响整个蛋白的电荷、极性或疏水性的丙氨酸或保守氨基酸来完成。

在本说明书中使用的术语“IL-7蛋白”可以用作包括“IL-7蛋白”及其片段的概念。除非另有说明，否则术语“蛋白”、“多肽”和“肽”可以互换使用。

此外，IL-7可以是具有以下结构的经修饰的IL-7：

A-IL-7，

其中所述A是由1至10个氨基酸残基组成的寡肽，

且IL-7是白细胞介素-7或与白细胞介素-7具有相似的活性的多肽。

在这里，所述A可以直接连接到IL-7的N端或通过接头连接。

所述A可以增加IL-7的生产力，并且可以根据韩国专利申请号10-2016-0072769中公开的方法来制备。

在本文中，所述A可以与IL-7的N端连接。在上式中，所述A的特征在于含有1至10个氨基酸，其可以优选为选自甲硫氨酸、甘氨酸、丝氨酸及其组合。

已知甲硫氨酸和甘氨酸不会在人体内诱导免疫反应。尽管由大肠杆菌产生的各种蛋白治疗剂在其N端必然含有甲硫氨酸，但未报道不良的免疫作用。同时，甘氨酸广泛用于GS接头中，并且已知商业产品如杜拉鲁肽(Dulaglutide)不诱导免疫应答。

根据一个实施例，IL-7可以是包含1至10个选自甲硫氨酸(Met，M)、甘氨酸(Gly，G)及其组合的氨基酸的寡肽。优选地，IL-7可以是由1至5个氨基酸组成的寡肽。例如，所述A可以由选自以下的氨基酸序列表示：甲硫氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸-甲硫氨酸、甘氨酸-甘氨酸、甲硫氨酸-甘氨酸、甘氨酸-甲硫氨酸、甲硫氨酸-甲硫氨酸-甲硫氨酸、甲硫氨酸-甲硫氨酸-甘氨酸、甲硫氨酸-甘氨酸-甲硫氨酸、甘氨酸-甲硫氨酸-甲硫氨酸、甲硫氨酸-甘氨酸-甘氨酸、甘氨酸-甲硫氨酸-甘氨酸、甘氨酸-甘氨酸-甲硫氨酸和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸。在这里，经修饰的IL-7可以具有选自SEQ ID NO：15至20的任何一个氨基酸序列。

此外，免疫球蛋白Fc区可以包含动物或人免疫球蛋白Fc区或其经修饰的免疫球蛋白Fc区。

IL-7可以连接到Fc区的N端或C端。已知即使当IL-7与Fc区的C端融合时，IL-7的活性也可以维持(US8338575B2)。在此，IL-7可以通过接头连接至Fc区。

如本文所用，术语“Fc区”、“Fc片段”或“Fc”是指包含免疫球蛋白的重链恒定区2(CH2)和重链恒定区3(CH3)、但不包含其重链或轻链可变区及轻链恒定区1(CL1)的蛋白。它可以进一步包含重链恒定区的铰链区。杂合Fc或杂合Fc片段在本文中也可以称为“hFc”或“hyFc”。此外，如本文所用，术语“经修饰的免疫球蛋白Fc区”或“Fc区变体”是指其中Fc区内的一个或多个氨基酸被取代的Fc区或通过组合不同的Fc区而制备的Fc区。优选地，所述术语“Fc区”、“Fc片段”或“Fc”指这样的Fc区：该Fc区与Fc受体和/或补体的结合力已被修饰，从而与野生型Fc区相比，表现出减弱的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)。所述经修饰的免疫球蛋白Fc区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgD和IgG4中的两种或更多种的组合序列。

特别地，所述经修饰的免疫球蛋白Fc区在N端到C端方向包含CH2结构域和CH3结构域，其中所述CH2结构域包含人IgD和人IgG4的CH2结构域的氨基酸残基的一部分，并且所述CH3结构域包含人IgG4CH3结构域的氨基酸残基的一部分。

可以修饰Fc区变体以防止铰链区处的切割。具体地，可以修饰SEQ ID NO：9的第144个氨基酸和/或第145个氨基酸。优选地，所述变体可以是其中SEQ ID NO：9的第144位氨基酸K被G或S取代并且第145位氨基酸E被G或S取代的突变体。

特别地，所述经修饰的免疫球蛋白的Fc区在N端到C端方向包含CH2结构域和CH3结构域，其中所述CH2结构域包含人IgD和人IgG4的CH2结构域的氨基酸残基的一部分，并且所述CH3结构域包含人IgG4CH3结构域的氨基酸残基的一部分。

如本文所用，术语“Fc区”、“Fc片段”或“Fc”是指包含免疫球蛋白的重链恒定区2(CH2)和重链恒定区3(CH3)、但不包括其重链或轻链可变区及轻链恒定区1(CL1)的蛋白。它可以进一步包含重链恒定区的铰链区。杂合Fc或杂合Fc片段在本文中也可以称为“hFc”或“hyFc”。此外，如本文所用，术语“Fc区变体”是指其中Fc区中的一个或多个氨基酸被取代的Fc区，或通过组合不同的Fc区而制备的Fc区。该Fc区变体可以被修饰以防止在铰链区被切断。具体地，可以修饰SEQ ID NO：9的第144位氨基酸和/或第145位氨基酸。优选地，所述变体可以是其中SEQ ID NO：9的第144位氨基酸K被G或S取代并且第145位氨基酸E被G或S取代的突变体。

另外，hFc可以由下式(I)表示：

[式(I)]

N'-(Z1)p-(Y)q-Z2-Z3-Z4-C',

其中，

N'是多肽的N端，而C'是多肽的C端,

p或q为0或1的整数，

Z1是具有来自SEQ ID NO：7的第90至98位的氨基酸残基中从第98位起沿N末端方向的5至9个连续的氨基酸残基的氨基酸序列，

Y是具有来自SEQ ID NO：7的第99至162位的氨基酸残基中从第162位起沿N末端方向的5至64个连续的氨基酸残基的氨基酸序列，

Z2是具有来自SEQ ID NO：7的第163至199位的氨基酸残基中从第163位起沿C末端方向的4至37个连续的氨基酸残基的氨基酸序列，

Z3是具有来自SEQ ID NO：8的第115至220位的氨基酸残基中从第220位起沿N末端方向的70至106个连续的氨基酸残基的氨基酸序列，以及

Z4是具有来自SEQ ID NO：8的第221至327位的氨基酸残基中从第221位起沿C末端方向的80至107个连续的氨基酸残基的氨基酸序列。

另外，经修饰的免疫球蛋白Fc区或Fc区变体可以由下式(I)表示：

[式(I)]

N'-(Z1)p-Y-Z2-Z3-Z4-C'，

其中，

N'是多肽的N端，而C'是多肽的C端，

p为0或1的整数，

另外，本发明的Fc片段可以是野生型糖链、与野生型相比增加的糖链、与野生型相比减少的糖链、或者糖链被去除的形式。免疫球蛋白Fc糖链的增加、减少或去除可以通过本领域已知的传统方法进行，例如化学方法、酶促方法和使用微生物的基因工程方法。从Fc片段去除糖链迅速降低了初级补体成分C1与C1q的结合亲和力并导致ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)或CDC(补体依赖性细胞毒性)的降低或丧失，由此在体内不诱导不必要的免疫应答。就此而言，去糖基化或非糖基化形式的免疫球蛋白Fc片段作为药物载体可能更适合于本发明的目的。如本文所用，术语“去糖基化”是指从Fc片段酶促去除糖，并且术语“非糖基化”是指通过原核生物，优选大肠杆菌，产生的非糖基化形式的Fc片段。

经修饰的免疫球蛋白Fc区可以包括氨基酸序列SEQ ID NO：9(hFc01)、SEQ ID NO：10(hFc02)、SEQ ID NO：11(hFc03)、SEQ ID NO：12(hFc04)或SEQ ID NO：13(hFc05)。另外，经修饰的免疫球蛋白Fc区可以包含SEQ ID NO：14的非溶细胞性(non-lytic)小鼠Fc。

根据本发明，经修饰的免疫球蛋白Fc区可以是在美国专利号7,867,491中描述的经修饰的免疫球蛋白Fc区，并且可以参照美国专利号7,867,491的公开内容来生产经修饰的免疫球蛋白Fc区。

另外，白细胞介素-7融合蛋白(免疫球蛋白Fc区融合于)可以具有SEQ ID NO：21至27中任一个的氨基酸序列。

同时，根据本发明的其中融合有免疫球蛋白Fc区的白细胞介素-7融合蛋白可以进一步包含药学上可接受的载体。该药学上可接受的载体可以是任何适合于递送至患者并且对患者无毒的载体。该载体可以包括蒸馏水、醇、脂肪、蜡和惰性固体。药学上可接受的佐剂(缓冲剂或分散剂)也可包含在该药物组合物中。

在本发明的另一方面，提供了用于预防或治疗生殖器疾病的方法，该方法包括以其中融合有免疫球蛋白Fc区的白细胞介素-7(IL-7)融合蛋白和药学上可接受的载体向个体给药。

生殖器疾病可以是人乳头瘤病毒衍生的疾病，例如，宫颈癌。

在此，向个体给药的方法可以是局部给药，优选粘膜给药。在局部提供本发明组合物如阴道内或气雾剂给药的情况下，该组合物优选为包含一部分水性或生理相容的体液悬浮液或溶液。因此，载体或赋形剂可以是生理上可接受的，因此它可以加入到组合物中并递送给患者，这不会不利地影响患者的电解质和/或体积平衡。因此，用于制剂的载体通常可以包括生理盐水。而且，根据病变或生理状况，所述载体可以包括一部分粘性悬浮液或溶液。

使用本发明的融合蛋白或包含其的组合物来预防或治疗疾病的方法可以包括以具有预防或治疗疾病作用的另一种药物或生理活性物质与本发明的蛋白或组合物联合给药，而给药途径、时间和剂量可以根据疾病的种类、患者的疾病状态、治疗或预防的目的以及联合给药的其他药物或生理活性物质来确定。

编码所述经修饰的白细胞介素-7或包含其的融合蛋白的分离的核酸分子可以编码具有选自SEQ ID NO：15至25的氨基酸序列的多肽。该核酸分子可以包括选自SEQ ID NO：29至39的多核苷酸序列。该核酸分子可以进一步包括信号序列或前导序列。

本发明的实施方式

下文详细描述本发明。以下实施例旨在进一步说明本发明而不限制其范围。

制备实施例1：实验动物的制备

以下实施例中使用的8-10周龄雌性C57BL/6小鼠购自The Jackson Laboratory(Bar Harbor，USA)。所有动物都在POSTECH的动物护理设施中在特定的无病原体条件下饲养。动物实验的程序是根据美国国立卫生研究院(National Institutes of Health，NIH)的小鼠实验指南进行的。实验方案得到了实验动物管理与使用委员会(InstitutionalAnimal Care and Use Committee，IACUC)的批准。另外，11周龄的雌性Sprague-Dawley大鼠购自Charles River实验室(Raleigh，USA)。所有动物均在MPI研究的动物护理设施中在无特定病原体条件下饲养。动物实验的程序按照美国农业部(United States Departmentof Agriculture，USDA)动物福利法(9CFR，第1-3部分)中的规定进行。

制备实施例2：Fc和IL-7的融合蛋白的制备和处理

密码子优化的人IL-7和粒细胞集落刺激因子(G-CSF)基因分别与杂合Fc片段融合。与Fc融合的IL-7的示意性结构如图1所示。用编码IL-7-Fc和G-CSF-Fc的质粒稳定转染中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。然后，从细胞中获得IL-7-Fc和G-CSF-Fc。用于对照组的纯化的重组人IL-7(rIL-7)购自Biolegend(San Diego，USA)。

治疗前4天将3mg醋酸甲羟孕酮(Depo-Provera，Pfizer)皮下注射至处于间情期的小鼠中。通过腹膜内注射溶于PBS中的100mg/kg氯胺酮(Yuhan)和10mg/kg盐酸甲苯噻嗪(Bayer)来对小鼠进行麻醉。然后，将10μg rIL-7、IL-7-Fc或G-CSF-Fc与PBS混合并使用微量移液管将其应用(给药)在阴道粘膜组织上。

制备实施例3：在生殖道中荧光缀合的IL-7-Fc的鉴定

将IL-7-Fc与Cy-5.5单反应性NHS酯偶联。通过使用离心过滤装置(MerckMillipore)将洗脱的蛋白脱盐并浓缩，并且使用抗人IL-7ELISA套装((Southern Biotech)测量染料标记的IL-7-Fc的蛋白浓度。以具有等效信号强度的溶于PBS中的Cy-5.5-缀合的IL-7-Fc(1mg/kg)和Cy-5.5对被麻醉的小鼠进行阴道内给药。在给药后第1天和第7天，使小鼠安乐死并清洗它们的阴道，获得每只小鼠的器官。然后使用IVIS光谱仪(Caliper LifeScience)对荧光信号强度进行定量。通过测量每立方弧度每平方厘米每秒的光子数(p/s/cm²/sr)来在器官中定量测量信号强度。

制备实施例4：血清IL-7的定量

以IL-7-Fc给药前和给药后最多到第7天，采集血样，使用人IL-7ELISA套装(Southern biotech)测定血清IL-7浓度。

制备实施例5：取决于重复给药的毒性研究

在以IL-7-Fc局部给药后，使用显微镜进行组织病理学分析，每周一次向大鼠阴道内给送0.8、3和8mg/kg/剂量的IL-7-Fc，共给药4周(总剂量为5)。切下子宫颈/阴道组织并用中性福尔马林固定。将固定的组织放入石蜡中，切割成4-6μm的厚度并用苏木精和伊红(H&E，Sigma-Aldrich)染色。为确定阴道炎症的剂量依赖性，在每周一次给药后4小时和24小时分别单独观察大鼠。使用以下评分等级：0＝无红斑，1＝非常轻微的红斑(几乎不可察觉)，2＝明确的红斑，3＝中度红斑，4＝严重红斑(发红)至形成焦痂。

制备实施例6：脾细胞和宫颈/阴道(CV)细胞分离

使用无菌技术手术切除脾脏和CV组织。通过机械破坏所述组织来获得脾细胞。为了制备CV细胞，将CV组织切碎并用1mg/ml胶原酶D(Roche)和0.5mg/ml DNA酶(Sigma-Aldrich)处理。将细胞通过40μm过滤器(BD)，洗涤，并用含有10％FBS和抗生素的RPMI-1640重新悬浮。

制备实施例7：流式细胞术

为了防止免疫球蛋白与Fc受体的非特异性结合，将以下实施例中使用的细胞用CD16/32(2.4G2)处理并用以下单克隆抗体染色：来自eBioscience的CD4(RM4-5)、CD8(53-6.7)、CD44(IM7)、CD62L(MEL-14)、CD11b(M1/70)、CD11c(N418)和MHCII(M5/114.15.2)；来自BD的CD3e(145-2C1)和TCRγδ(GL3)；来自Biolegend的CXCR3(CXCR3-173)；和Live/Dead(Life technologies)。所有样品均使用LSR Fortessa(BD)和FlowJo软件(Tree Star)进行分析。

制备实施例8：统计分析

使用双尾配对学生t检验来评估两个实验组之间的统计学差异。对于体内肿瘤实验，通过使用Prism 5.0软件(GraphPad)的对数秩检验来确定组之间存活率的差异。

实施例1：IL-7-Fc融合蛋白给药方法的评估

将Cy-5.5(Cy-5.5)和Cy-5.5-缀合的IL-7-Fc(Cy5.5-IL-7-Fc)阴道内给药至C57BL/6野生型小鼠(n＝3/组)。其结果如图2a和2b所示。

如图2a和2b所示，在给药后第1天，宫颈/阴道(CV)组织中Cy-5.5-IL-7-Fc的强度显著增加，观察7天。特别地，用Cy5.5-IL-7-Fc处理过的小鼠的CV组织中的信号强度在给药后第1天和第7天分别比对照(Cy5.5处理过的小鼠)高6和4.5倍。在用Cy5.5-IL-7-Fc处理过的小鼠的各种宫颈/阴道附近组织(子宫颈-阴道、子宫、卵巢和直肠)中也检测到高强度荧光信号。特别地，即使在第7天，用Cy5.5-IL-7-Fc处理过的小鼠也不仅在生殖道组织中保持高水平的荧光，而且在肝脏、肾脏和脾脏中也保持高水平的荧光。

实施例2：IL-7-Fc阴道内给药的体循环的确认

以PBS、rIL-7和IL-7-Fc向小鼠(n＝7/组)的阴道内给药，并通过人IL-7ELISA测量血清IL-7浓度。结果显示在图3中。如图3所示，与PBS对照相比，用IL-7-Fc(而不是rIL-7)处理过的小鼠显示出显著升高的IL-7水平。

这些结果揭示了Fc融合蛋白在粘膜上皮上的应用能够实现生殖器-上皮屏障转胞吞作用。

实施例3：以IL-7-Fc局部给药后宫颈组织中白细胞数量变化分析

在处死前0、3、7、14和21天，向小鼠(n＝3/组)阴道内给送IL-7-Fc，使用流式细胞术计算宫颈组织中的白细胞数量(表1)。另外，用PBS、IL-7、IL-7-Fc、IFN-α2a-Fc或G-CSF-Fc处理小鼠(n＝6/组)，7天后，通过流式细胞术分析CV组织中的CD4和CD8T细胞。结果展示在表1、表2和图4中。下表中的数据显示为平均值±SEM(*，p<0.05)。

表1

表2

如表1和图4所示，IL-7-Fc的局部给药使得CD4和CD8T细胞的数量增加。生殖道T细胞的这种增加在IL-7-Fc给药后第7天达到峰值，并在第14天逐渐降低至基线水平。此外，与基线水平相比，在IL-7-Fc给药后第7天，CD4或CD8T细胞的数量分别显著增加约20倍和10倍。特别地，在第7天CD44^高CD62L^低效应CD4和CD8T细胞的数量显著增加，并且总CD4和CD8T细胞的数量随时间以相似的模式减少。

如表2和图4所示，与基线水平或对照组相比，IFN-α2a-Fc和G-CSF-Fc的给药并未显著改变CD4和CD8T细胞的数量。

这些结果表明IL-7-Fc的阴道内给药会诱导免疫细胞(如T细胞和DC)的局部积聚。此外，我们发现IL-7-Fc的阴内道给药的效果优于其他免疫诱导剂。

实施例4：IL-7-Fc毒性的评估

将IL-7-Fc向SD大鼠阴道内给药五次，即在第1、8、15、22和29天进行给药。在初次治疗后第33天时对生殖道的切片进行显微镜检查(表3A)。在给药前和给药后4和24小时，用评分等级记录阴道炎症评分(表3B)。结果展示在表3A和表3B中。

表3A

表3B

如上表3A和3B所示，宫颈组织(表3A)和阴道(表3B)的炎症程度的病理学评估显示：以IL-7-Fc局部给药是安全的并且不会在生殖道内诱发严重的炎症。

实施例5：IL-7-Fc的给药途径与宫颈/阴道组织中T细胞的诱导之间的关系的确认

将IL-7-Fc通过皮下或阴道内给药至小鼠(n＝5/组)，并通过制备实施例6的方法观察宫颈/阴道组织中T细胞的分布。

结果如图5所示，阴道给药时宫颈/阴道内组织中的CD4和CD8T细胞的积聚程度比皮下给药时增长更多。因此，我们发现，为了将CD4和CD8T细胞特异性地诱导至宫颈/阴道组织，与宫颈/阴道组织直接相关的阴道内给药比全身给药如皮下给药更有效。

实施例6：使用TC-1/fluc模型以IL-7-Fc局部给药的抗癌作用

所述治疗作用利用表达HPV16E6和HPV E7抗原的TC-1肿瘤细胞系来证实。将1×10⁶个TC-1/fluc细胞系(其经处理以在表达HPV16E6和E7基因的TC-1细胞系中表达萤光素酶基因)阴道内施用至小鼠(n＝7或8/组)。施用TC-1/fluc细胞系前四(4)天，将3mg醋酸甲羟孕酮(Depo-Provera，Pfizer)皮下给药至处于间情期的小鼠。在施用TC-1/fluc细胞系当天，将小鼠麻醉，以10μl 20％壬苯醇醚-9(USP)和40μl 3％羧甲基纤维素(CMC)(Sigma-Aldrich)的混合物对小鼠进行阴道内给药，6小时后，再次麻醉小鼠，用PBS清洗其阴道，然后向小鼠施用TC-1/fluc细胞系。

在施用TC-1/fluc细胞系后第1、8和15天，以1μg IL-7-Fc向小鼠阴道内给药，并且在第8和15天通过体内生物发光成像研究癌症进展。在第20天，通过观察外观来检查抗癌作用(图6)。结果证实，IL-7-Fc处理组中癌细胞的发病率显著降低。

序列表

<110> 格纳西尼有限公司

<120> 用于预防或治疗人乳头瘤病毒引起的疾病的含有免疫球蛋白FC融合IL-7融合蛋白的药物组合物

<130> PCB607040GNX

<150> US 62/361170

<151> 2016-07-12

<150> US 62/360696

<151> 2016-07-11

<150> US 62/263262

<151> 2015-12-04

<160> 40

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 177

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 人IL-7的氨基酸序列 (登录号 : P13232)

<400> 1

Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Leu Pro Pro Leu Ile

1 5 10 15

Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys

20 25 30

Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu

35 40 45

Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe

50 55 60

Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe

65 70 75 80

Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser

85 90 95

Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr

100 105 110

Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala

115 120 125

Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu

130 135 140

Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu

145 150 155 160

Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu

165 170 175

His

<210> 2

<211> 154

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 大鼠IL-7的氨基酸序列 (登录号 : P56478)

<400> 2

Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile

1 5 10 15

Leu Val Leu Leu Pro Val Thr Ser Ser Asp Cys His Ile Lys Asp Lys

20 25 30

Asp Gly Lys Ala Phe Gly Ser Val Leu Met Ile Ser Ile Asn Gln Leu

35 40 45

Asp Lys Met Thr Gly Thr Asp Ser Asp Cys Pro Asn Asn Glu Pro Asn

50 55 60

Phe Phe Lys Lys His Leu Cys Asp Asp Thr Lys Glu Ala Ala Phe Leu

65 70 75 80

Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser

85 90 95

Glu Glu Phe Asn Asp His Leu Leu Arg Val Ser Asp Gly Thr Gln Thr

100 105 110

Leu Val Asn Cys Thr Ser Lys Glu Glu Lys Thr Ile Lys Glu Gln Lys

115 120 125

Lys Asn Asp Pro Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Arg Glu Ile Lys Thr

130 135 140

Cys Trp Asn Lys Ile Leu Lys Gly Ser Ile

145 150

<210> 3

<211> 154

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 小鼠IL-7的氨基酸序列 (登录号 : P10168)

<400> 3

Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile

1 5 10 15

Leu Val Leu Leu Pro Val Thr Ser Ser Glu Cys His Ile Lys Asp Lys

20 25 30

Glu Gly Lys Ala Tyr Glu Ser Val Leu Met Ile Ser Ile Asp Glu Leu

35 40 45

Asp Lys Met Thr Gly Thr Asp Ser Asn Cys Pro Asn Asn Glu Pro Asn

50 55 60

Phe Phe Arg Lys His Val Cys Asp Asp Thr Lys Glu Ala Ala Phe Leu

65 70 75 80

Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser

85 90 95

Glu Glu Phe Asn Val His Leu Leu Thr Val Ser Gln Gly Thr Gln Thr

100 105 110

Leu Val Asn Cys Thr Ser Lys Glu Glu Lys Asn Val Lys Glu Gln Lys

115 120 125

Lys Asn Asp Ala Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Arg Glu Ile Lys Thr

130 135 140

Cys Trp Asn Lys Ile Leu Lys Gly Ser Ile

145 150

<210> 4

<211> 177

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 猴IL-7的氨基酸序列 (登录号 : NP_001279008)

<400> 4

Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Leu Pro Pro Leu Ile

1 5 10 15

Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys

20 25 30

Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu

35 40 45

Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe

50 55 60

Asn Phe Phe Lys Arg His Leu Cys Asp Asp Asn Lys Glu Gly Met Phe

65 70 75 80

Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser

85 90 95

Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr

100 105 110

Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Lys Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala

115 120 125

Leu Gly Glu Pro Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu

130 135 140

Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Ser Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu

145 150 155 160

Gln Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu

165 170 175

His

<210> 5

<211> 176

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 牛IL-7的氨基酸序列 (登录号 : P26895)

<400> 5

Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile

1 5 10 15

Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Ser Gly Lys

20 25 30

Asp Gly Gly Ala Tyr Gln Asn Val Leu Met Val Asn Ile Asp Asp Leu

35 40 45

Asp Asn Met Ile Asn Phe Asp Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Pro Asn

50 55 60

Phe Phe Lys Lys His Ser Cys Asp Asp Asn Lys Glu Ala Ser Phe Leu

65 70 75 80

Asn Arg Ala Ser Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser

85 90 95

Asp Asp Phe Lys Leu His Leu Ser Thr Val Ser Gln Gly Thr Leu Thr

100 105 110

Leu Leu Asn Cys Thr Ser Lys Gly Lys Gly Arg Lys Pro Pro Ser Leu

115 120 125

Ser Glu Ala Gln Pro Thr Lys Asn Leu Glu Glu Asn Lys Ser Ser Lys

130 135 140

Glu Gln Lys Lys Gln Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Ile Leu Leu Gln

145 150 155 160

Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Arg Gly Ile Lys Glu His

165 170 175

<210> 6

<211> 176

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 绵羊IL-7的氨基酸序列 (登录号 : Q28540)

<400> 6

Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile

1 5 10 15

Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Phe Ser Gly Lys

20 25 30

Asp Gly Gly Ala Tyr Gln Asn Val Leu Met Val Ser Ile Asp Asp Leu

35 40 45

Asp Asn Met Ile Asn Phe Asp Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Pro Asn

50 55 60

Phe Phe Lys Lys His Ser Cys Asp Asp Asn Lys Glu Ala Ser Phe Leu

65 70 75 80

Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser

85 90 95

Asp Asp Phe Lys Leu His Leu Ser Thr Val Ser Gln Gly Thr Leu Thr

100 105 110

Leu Leu Asn Cys Thr Ser Lys Gly Lys Gly Arg Lys Pro Pro Ser Leu

115 120 125

Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Asn Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys

130 135 140

Glu Gln Arg Lys Gln Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Ile Leu Leu Gln

145 150 155 160

Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Arg Gly Ile Thr Glu His

165 170 175

<210> 7

<211> 384

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 人IgD恒定区的氨基酸序列 (Genbank 登录号：P01880)

<400> 7

Ala Pro Thr Lys Ala Pro Asp Val Phe Pro Ile Ile Ser Gly Cys Arg

1 5 10 15

His Pro Lys Asp Asn Ser Pro Val Val Leu Ala Cys Leu Ile Thr Gly

20 25 30

Tyr His Pro Thr Ser Val Thr Val Thr Trp Tyr Met Gly Thr Gln Ser

35 40 45

Gln Pro Gln Arg Thr Phe Pro Glu Ile Gln Arg Arg Asp Ser Tyr Tyr

50 55 60

Met Thr Ser Ser Gln Leu Ser Thr Pro Leu Gln Gln Trp Arg Gln Gly

65 70 75 80

Glu Tyr Lys Cys Val Val Gln His Thr Ala Ser Lys Ser Lys Lys Glu

85 90 95

Ile Phe Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro

100 105 110

Thr Ala Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala

115 120 125

Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys

130 135 140

Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu

145 150 155 160

Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala

165 170 175

Val Gln Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val

180 185 190

Val Gly Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly

195 200 205

Lys Val Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser

210 215 220

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225 230 235 240

Trp Asn Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu

245 250 255

Pro Pro Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro

260 265 270

Val Lys Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala

275 280 285

Ala Ser Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile

290 295 300

Leu Leu Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe

305 310 315 320

Ala Pro Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala

325 330 335

Trp Ser Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr

340 345 350

Tyr Thr Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala

355 360 365

Ser Arg Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His Gly Pro Met Lys

370 375 380

<210> 8

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 部分人IgG4恒定区的氨基酸序列 (Genbank登录号：AAH25985)

<400> 8

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 9

<211> 245

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> hFc01的氨基酸序列

<400> 9

Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys

1 5 10 15

Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His

20 25 30

Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

35 40 45

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

50 55 60

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

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Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

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115 120 125

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

130 135 140

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

145 150 155 160

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

165 170 175

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

180 185 190

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

195 200 205

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

210 215 220

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

225 230 235 240

Leu Ser Leu Gly Lys

245

<210> 10

<211> 245

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> hFc02的氨基酸序列

<400> 10

Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Gly Gly Lys Glu Lys

1 5 10 15

Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His

20 25 30

Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

35 40 45

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

50 55 60

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

65 70 75 80

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

85 90 95

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

100 105 110

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

115 120 125

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

130 135 140

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

145 150 155 160

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

165 170 175

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

180 185 190

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

195 200 205

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

210 215 220

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

225 230 235 240

Leu Ser Leu Gly Lys

245

<210> 11

<211> 245

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> hFc03的氨基酸序列

<400> 11

Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Gly Ser Lys Glu Lys

1 5 10 15

Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His

20 25 30

Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

35 40 45

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

50 55 60

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

65 70 75 80

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

85 90 95

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

100 105 110

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

115 120 125

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

130 135 140

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

145 150 155 160

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

165 170 175

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

180 185 190

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

195 200 205

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

210 215 220

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

225 230 235 240

Leu Ser Leu Gly Lys

245

<210> 12

<211> 245

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> hFc04的氨基酸序列

<400> 12

Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Ser Gly Lys Glu Lys

1 5 10 15

Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His

20 25 30

Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

35 40 45

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

50 55 60

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

65 70 75 80

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

85 90 95

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

100 105 110

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

115 120 125

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

130 135 140

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

145 150 155 160

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

165 170 175

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

180 185 190

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

195 200 205

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

210 215 220

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

225 230 235 240

Leu Ser Leu Gly Lys

245

<210> 13

<211> 245

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> hFc05的氨基酸序列

<400> 13

Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Ser Ser Lys Glu Lys

1 5 10 15

Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His

20 25 30

Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr

35 40 45

Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val

50 55 60

Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val

65 70 75 80

Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser

85 90 95

Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu

100 105 110

Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser

115 120 125

Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro

130 135 140

Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln

145 150 155 160

Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala

165 170 175

Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr

180 185 190

Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu

195 200 205

Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser

210 215 220

Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser

225 230 235 240

Leu Ser Leu Gly Lys

245

<210> 14

<211> 243

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 小鼠IgG Fc变体的氨基酸序列

<400> 14

Ala Ser Ala Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys

1 5 10 15

Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe

20 25 30

Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val

35 40 45

Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile

50 55 60

Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr

65 70 75 80

His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro

85 90 95

Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Ala Phe Ala Cys Ala Val

100 105 110

Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro

115 120 125

Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu

130 135 140

Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp

145 150 155 160

Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr

165 170 175

Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser

180 185 190

Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu

195 200 205

Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His

210 215 220

His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys Gly Gly Gly Asn

225 230 235 240

Ser Gly Ser

<210> 15

<211> 153

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(M)的氨基酸序列

<400> 15

Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val

1 5 10 15

Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly

20 25 30

Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys

35 40 45

Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu

50 55 60

Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu

65 70 75 80

Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln

85 90 95

Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys

100 105 110

Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp

115 120 125

Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn

130 135 140

Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His

145 150

<210> 16

<211> 154

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MM)的氨基酸序列

<400> 16

Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser

1 5 10 15

Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile

20 25 30

Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile

35 40 45

Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys

50 55 60

Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His

65 70 75 80

Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly

85 90 95

Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr

100 105 110

Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn

115 120 125

Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp

130 135 140

Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His

145 150

<210> 17

<211> 155

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MMM)的氨基酸序列

<400> 17

Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu

1 5 10 15

Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu

20 25 30

Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His

35 40 45

Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg

50 55 60

Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu

65 70 75 80

His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr

85 90 95

Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro

100 105 110

Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu

115 120 125

Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys

130 135 140

Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His

145 150 155

<210> 18

<211> 155

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MGM)的氨基酸序列

<400> 18

Met Gly Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu

1 5 10 15

Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu

20 25 30

Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His

35 40 45

Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg

50 55 60

Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu

65 70 75 80

His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr

85 90 95

Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro

100 105 110

Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu

115 120 125

Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys

130 135 140

Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His

145 150 155

<210> 19

<211> 155

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(DDD)的氨基酸序列

<400> 19

Asp Asp Asp Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu

1 5 10 15

Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu

20 25 30

Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His

35 40 45

Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg

50 55 60

Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu

65 70 75 80

His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr

85 90 95

Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro

100 105 110

Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu

115 120 125

Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys

130 135 140

Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His

145 150 155

<210> 20

<211> 156

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MMMM)的氨基酸序列

<400> 20

Met Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr

1 5 10 15

Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys

20 25 30

Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg

35 40 45

His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala

50 55 60

Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp

65 70 75 80

Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys

85 90 95

Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln

100 105 110

Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys

115 120 125

Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr

130 135 140

Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His

145 150 155

<210> 21

<211> 398

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(M)融合hyFc的氨基酸序列

<400> 21

Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val

1 5 10 15

Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly

20 25 30

Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys

35 40 45

Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu

50 55 60

Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu

65 70 75 80

Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln

85 90 95

Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys

100 105 110

Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp

115 120 125

Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn

130 135 140

Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly

145 150 155 160

Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu

165 170 175

Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe

180 185 190

Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro

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Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val

210 215 220

Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr

225 230 235 240

Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val

245 250 255

Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys

260 265 270

Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser

275 280 285

Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro

290 295 300

Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val

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Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly

325 330 335

Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp

340 345 350

Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp

355 360 365

Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His

370 375 380

Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

385 390 395

<210> 22

<211> 399

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MM)融合hyFc的氨基酸序列

<400> 22

Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser

1 5 10 15

Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile

20 25 30

Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile

35 40 45

Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys

50 55 60

Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His

65 70 75 80

Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly

85 90 95

Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr

100 105 110

Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn

115 120 125

Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp

130 135 140

Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg Gly

145 150 155 160

Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg

165 170 175

Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val

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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr

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Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu

210 215 220

Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys

225 230 235 240

Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser

245 250 255

Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys

260 265 270

Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile

275 280 285

Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro

290 295 300

Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu

305 310 315 320

Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn

325 330 335

Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser

340 345 350

Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg

355 360 365

Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu

370 375 380

His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

385 390 395

<210> 23

<211> 400

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MMM)融合hyFc的氨基酸序列

<400> 23

Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu

1 5 10 15

Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu

20 25 30

Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His

35 40 45

Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg

50 55 60

Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu

65 70 75 80

His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr

85 90 95

Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro

100 105 110

Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu

115 120 125

Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys

130 135 140

Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg

145 150 155 160

Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu

165 170 175

Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly

180 185 190

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

195 200 205

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro

210 215 220

Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

225 230 235 240

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

245 250 255

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

260 265 270

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

275 280 285

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

290 295 300

Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

305 310 315 320

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

325 330 335

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

340 345 350

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser

355 360 365

Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

370 375 380

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

385 390 395 400

<210> 24

<211> 400

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MGM) 融合hyFc的氨基酸序列

<400> 24

Met Gly Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu

1 5 10 15

Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu

20 25 30

Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His

35 40 45

Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg

50 55 60

Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu

65 70 75 80

His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr

85 90 95

Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro

100 105 110

Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu

115 120 125

Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys

130 135 140

Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg

145 150 155 160

Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu

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Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly

180 185 190

Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg

195 200 205

Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro

210 215 220

Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala

225 230 235 240

Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val

245 250 255

Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr

260 265 270

Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr

275 280 285

Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu

290 295 300

Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys

305 310 315 320

Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser

325 330 335

Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp

340 345 350

Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser

355 360 365

Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala

370 375 380

Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

385 390 395 400

<210> 25

<211> 401

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MMMM)融合hyFc的氨基酸序列

<400> 25

Met Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr

1 5 10 15

Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys

20 25 30

Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg

35 40 45

His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala

50 55 60

Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp

65 70 75 80

Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys

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Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln

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Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys

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Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr

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Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly

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Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu

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Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu

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Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser

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Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp

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Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn

225 230 235 240

Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val

245 250 255

Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu

260 265 270

Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys

275 280 285

Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr

290 295 300

Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr

305 310 315 320

Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu

325 330 335

Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu

340 345 350

Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys

355 360 365

Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu

370 375 380

Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly

385 390 395 400

Lys

<210> 26

<211> 397

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 人IL-7融合hyFc的氨基酸序列

<400> 26

Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu

1 5 10 15

Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser

20 25 30

Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp

35 40 45

Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg

50 55 60

Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu

65 70 75 80

Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val

85 90 95

Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser

100 105 110

Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu

115 120 125

Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys

130 135 140

Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu

145 150 155 160

Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr

165 170 175

Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu

180 185 190

Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu

195 200 205

Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln

210 215 220

Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys

225 230 235 240

Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu

245 250 255

Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys

260 265 270

Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys

275 280 285

Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser

290 295 300

Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys

305 310 315 320

Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

325 330 335

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

340 345 350

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

355 360 365

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

370 375 380

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

385 390 395

<210> 27

<211> 395

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 人IL-7融合非溶细胞性小鼠Fc的氨基酸序列

<400> 27

Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu

1 5 10 15

Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser

20 25 30

Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp

35 40 45

Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg

50 55 60

Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu

65 70 75 80

Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val

85 90 95

Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser

100 105 110

Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu

115 120 125

Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys

130 135 140

Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ala Ser Ala Glu Pro Arg Gly Pro

145 150 155 160

Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu

165 170 175

Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu

180 185 190

Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

195 200 205

Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu

210 215 220

Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr

225 230 235 240

Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser

245 250 255

Gly Lys Ala Phe Ala Cys Ala Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro

260 265 270

Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln

275 280 285

Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val

290 295 300

Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val

305 310 315 320

Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu

325 330 335

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg

340 345 350

Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val

355 360 365

Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg

370 375 380

Thr Pro Gly Lys Gly Gly Gly Asn Ser Gly Ser

385 390 395

<210> 28

<211> 531

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 人IL-7的核苷酸序列

<400> 28

atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60

cctgtggcca gctccgactg cgacatcgag ggaaaagacg gcaagcagta cgaaagcgtg 120

ctgatggtgt ccatcgacca gctgctggat tctatgaagg agattgggag taactgcctg 180

aacaatgagt tcaacttctt caaacggcac atttgtgatg ccaacaagga gggaatgttc 240

ctgtttcggg ccgctagaaa actgaggcag ttcctgaaga tgaacagcac cggagacttt 300

gatctgcatc tgctgaaagt gtctgagggc accacaatcc tgctgaactg cactgggcag 360

gtgaaaggaa ggaagcctgc cgctctggga gaggctcagc caaccaagtc actggaggaa 420

aacaaaagcc tgaaggaaca gaagaaactg aatgacctgt gctttctgaa acggctgctg 480

caggagatca aaacatgttg gaacaagatt ctgatgggca caaaggaaca c 531

<210> 29

<211> 534

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(M)的核苷酸序列

<400> 29

atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60

cccgtggcca gcagcatgga ctgcgacatc gagggcaagg acggcaagca gtacgagagc 120

gtgctgatgg tgagcatcga ccagctgctg gacagcatga aggagatcgg cagcaactgc 180

ctgaacaacg agttcaactt cttcaagaga cacatctgcg acgccaacaa ggagggcatg 240

ttcctgttca gagccgccag aaagctgaga cagttcctga agatgaacag caccggcgac 300

ttcgacctgc acctgctgaa ggtgagcgag ggcacaacca tcctgctgaa ctgcaccggc 360

caggtgaagg gcagaaagcc cgccgccctg ggcgaggccc agcccaccaa gagcctggag 420

gagaacaaga gcctgaagga gcagaagaag ctgaacgacc tgtgcttcct gaagagactg 480

ctgcaggaga tcaagacctg ctggaacaag atcctgatgg gcaccaagga gcac 534

<210> 30

<211> 537

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MM)的核苷酸序列

<400> 30

atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60

cccgtggcca gcagcatgat ggactgcgac atcgagggca aggacggcaa gcagtacgag 120

agcgtgctga tggtgagcat cgaccagctg ctggacagca tgaaggagat cggcagcaac 180

tgcctgaaca acgagttcaa cttcttcaag agacacatct gcgacgccaa caaggagggc 240

atgttcctgt tcagagccgc cagaaagctg agacagttcc tgaagatgaa cagcaccggc 300

gacttcgacc tgcacctgct gaaggtgagc gagggcacaa ccatcctgct gaactgcacc 360

ggccaggtga agggcagaaa gcccgccgcc ctgggcgagg cccagcccac caagagcctg 420

gaggagaaca agagcctgaa ggagcagaag aagctgaacg acctgtgctt cctgaagaga 480

ctgctgcagg agatcaagac ctgctggaac aagatcctga tgggcaccaa ggagcac 537

<210> 31

<211> 540

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MMM)的核苷酸序列

<400> 31

atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60

cccgtggcca gcagcatgat gatggactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120

gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180

aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240

ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300

ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360

accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420

ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480

agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540

<210> 32

<211> 540

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MGM)的核苷酸序列

<400> 32

atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60

cctgtggcca gctccatggg gatggactgc gacatcgagg gaaaagacgg caagcagtac 120

gaaagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag ctgctggatt ctatgaagga gattgggagt 180

aactgcctga acaatgagtt caacttcttc aaacggcaca tttgtgatgc caacaaggag 240

ggaatgttcc tgtttcgggc cgctagaaaa ctgaggcagt tcctgaagat gaacagcacc 300

ggagactttg atctgcatct gctgaaagtg tctgagggca ccacaatcct gctgaactgc 360

actgggcagg tgaaaggaag gaagcctgcc gctctgggag aggctcagcc aaccaagtca 420

ctggaggaaa acaaaagcct gaaggaacag aagaaactga atgacctgtg ctttctgaaa 480

cggctgctgc aggagatcaa aacatgttgg aacaagattc tgatgggcac caaggagcac 540

<210> 33

<211> 540

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(DDD)的核苷酸序列

<400> 33

atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60

cccgtggcca gcagcgacga tgacgactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120

gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180

aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240

ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300

ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360

accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420

ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480

agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540

<210> 34

<211> 543

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MMMM)的核苷酸序列

<400> 34

atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60

cccgtggcca gcagcatgat gatgatggac tgcgacatcg agggcaagga cggcaagcag 120

tacgagagcg tgctgatggt gagcatcgac cagctgctgg acagcatgaa ggagatcggc 180

agcaactgcc tgaacaacga gttcaacttc ttcaagagac acatctgcga cgccaacaag 240

gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc 300

accggcgact tcgacctgca cctgctgaag gtgagcgagg gcacaaccat cctgctgaac 360

tgcaccggcc aggtgaaggg cagaaagccc gccgccctgg gcgaggccca gcccaccaag 420

agcctggagg agaacaagag cctgaaggag cagaagaagc tgaacgacct gtgcttcctg 480

aagagactgc tgcaggagat caagacctgc tggaacaaga tcctgatggg caccaaggag 540

cac 543

<210> 35

<211> 1284

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(M)融合hyFc的核苷酸序列

<400> 35

atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60

cccgtggcca gcagcatgga ctgcgacatc gagggcaagg acggcaagca gtacgagagc 120

gtgctgatgg tgagcatcga ccagctgctg gacagcatga aggagatcgg cagcaactgc 180

ctgaacaacg agttcaactt cttcaagaga cacatctgcg acgccaacaa ggagggcatg 240

ttcctgttca gagccgccag aaagctgaga cagttcctga agatgaacag caccggcgac 300

ttcgacctgc acctgctgaa ggtgagcgag ggcacaacca tcctgctgaa ctgcaccggc 360

caggtgaagg gcagaaagcc cgccgccctg ggcgaggccc agcccaccaa gagcctggag 420

gagaacaaga gcctgaagga gcagaagaag ctgaacgacc tgtgcttcct gaagagactg 480

ctgcaggaga tcaagacctg ctggaacaag atcctgatgg gcaccaagga gcacaggaac 540

acaggcagag gcggcgagga gaagaagaag gagaaggaga aggaggagca ggaggaaaga 600

gagaccaaga cccccgagtg ccccagccac acccagcccc tgggcgtgtt cctgttccct 660

cccaagccca aggacaccct gatgatcagc agaacccccg aggtgacctg cgtggtcgtg 720

gatgtgagcc aggaagatcc cgaagtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaagtg 780

cacaacgcca agaccaagcc cagagaagag cagttcaact ccacctacag agtggtgagc 840

gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtgtcc 900

aacaaaggcc tgcccagctc catcgagaag accatcagca aagccaaagg ccagcccaga 960

gaaccccagg tgtacaccct gcctcccagc caggaagaga tgaccaagaa ccaggtgtcc 1020

ctgacctgcc tggtgaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggaaagcaac 1080

ggccagcccg agaacaatta caagacaacc cctcccgtgc tggatagcga tggcagcttc 1140

tttctgtaca gcagactgac cgtggacaag agcagatggc aggaaggcaa cgtgttcagc 1200

tgcagcgtga tgcacgaagc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gtccctgagc 1260

ctgggcaagt gactcgagtc taga 1284

<210> 36

<211> 1272

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MM)融合hyFc的核苷酸序列

<400> 36

atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60

cccgtggcca gcagcatgat ggactgcgac atcgagggca aggacggcaa gcagtacgag 120

agcgtgctga tggtgagcat cgaccagctg ctggacagca tgaaggagat cggcagcaac 180

tgcctgaaca acgagttcaa cttcttcaag agacacatct gcgacgccaa caaggagggc 240

atgttcctgt tcagagccgc cagaaagctg agacagttcc tgaagatgaa cagcaccggc 300

gacttcgacc tgcacctgct gaaggtgagc gagggcacaa ccatcctgct gaactgcacc 360

ggccaggtga agggcagaaa gcccgccgcc ctgggcgagg cccagcccac caagagcctg 420

gaggagaaca agagcctgaa ggagcagaag aagctgaacg acctgtgctt cctgaagaga 480

ctgctgcagg agatcaagac ctgctggaac aagatcctga tgggcaccaa ggagcacagg 540

aacacaggca gaggcggcga ggagaagaag aaggagaagg agaaggagga gcaggaggaa 600

agagagacca agacccccga gtgccccagc cacacccagc ccctgggcgt gttcctgttc 660

cctcccaagc ccaaggacac cctgatgatc agcagaaccc ccgaggtgac ctgcgtggtc 720

gtggatgtga gccaggaaga tcccgaagtg cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggaa 780

gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagaa gagcagttca actccaccta cagagtggtg 840

agcgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg 900

tccaacaaag gcctgcccag ctccatcgag aagaccatca gcaaagccaa aggccagccc 960

agagaacccc aggtgtacac cctgcctccc agccaggaag agatgaccaa gaaccaggtg 1020

tccctgacct gcctggtgaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggaaagc 1080

aacggccagc ccgagaacaa ttacaagaca acccctcccg tgctggatag cgatggcagc 1140

ttctttctgt acagcagact gaccgtggac aagagcagat ggcaggaagg caacgtgttc 1200

agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaagag cctgtccctg 1260

agcctgggca ag 1272

<210> 37

<211> 1275

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MMM)融合hyFc的核苷酸序列

<400> 37

atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60

cccgtggcca gcagcatgat gatggactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120

gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180

aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240

ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300

ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360

accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420

ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480

agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540

aggaacacag gcagaggcgg cgaggagaag aagaaggaga aggagaagga ggagcaggag 600

gaaagagaga ccaagacccc cgagtgcccc agccacaccc agcccctggg cgtgttcctg 660

ttccctccca agcccaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgcgtg 720

gtcgtggatg tgagccagga agatcccgaa gtgcagttca actggtacgt ggatggcgtg 780

gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaagagcagt tcaactccac ctacagagtg 840

gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 900

gtgtccaaca aaggcctgcc cagctccatc gagaagacca tcagcaaagc caaaggccag 960

cccagagaac cccaggtgta caccctgcct cccagccagg aagagatgac caagaaccag 1020

gtgtccctga cctgcctggt gaaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa 1080

agcaacggcc agcccgagaa caattacaag acaacccctc ccgtgctgga tagcgatggc 1140

agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg 1200

ttcagctgca gcgtgatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgtcc 1260

ctgagcctgg gcaag 1275

<210> 38

<211> 1275

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MGM)融合hyFc的核苷酸序列

<400> 38

atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60

cctgtggcca gctccatggg gatggactgc gacatcgagg gaaaagacgg caagcagtac 120

gaaagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag ctgctggatt ctatgaagga gattgggagt 180

aactgcctga acaatgagtt caacttcttc aaacggcaca tttgtgatgc caacaaggag 240

ggaatgttcc tgtttcgggc cgctagaaaa ctgaggcagt tcctgaagat gaacagcacc 300

ggagactttg atctgcatct gctgaaagtg tctgagggca ccacaatcct gctgaactgc 360

actgggcagg tgaaaggaag gaagcctgcc gctctgggag aggctcagcc aaccaagtca 420

ctggaggaaa acaaaagcct gaaggaacag aagaaactga atgacctgtg ctttctgaaa 480

cggctgctgc aggagatcaa aacatgttgg aacaagattc tgatgggcac aaaggaacac 540

cgcaatactg ggcggggcgg ggaggaaaag aaaaaggaga aggaaaagga ggaacaggag 600

gaaagagaga ctaagacccc agaatgtccc agccatactc agcccctggg ggtgttcctg 660

tttcccccta aacctaagga taccctgatg atcagcagga cacccgaggt gacctgcgtg 720

gtcgtggatg tgagccagga agatcccgaa gtgcagttca actggtacgt ggatggcgtg 780

gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaagagcagt tcaactccac ctacagagtg 840

gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 900

gtgtccaaca aaggcctgcc cagctccatc gagaagacca tcagcaaagc caaaggccag 960

cccagagaac cccaggtgta caccctgcct cccagccagg aagagatgac caagaaccag 1020

gtgtccctga cctgcctggt gaaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa 1080

agcaacggcc agcccgagaa caattacaag acaacccctc ccgtgctgga tagcgatggc 1140

agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg 1200

ttcagctgca gcgtgatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgtcc 1260

ctgagcctgg gcaag 1275

<210> 39

<211> 1278

<212> DNA

<213> 人工序列()

<220>

<223> 经修饰的IL-7(MMMM)融合hyFc的核苷酸序列

<400> 39

atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60

cccgtggcca gcagcatgat gatgatggac tgcgacatcg agggcaagga cggcaagcag 120

tacgagagcg tgctgatggt gagcatcgac cagctgctgg acagcatgaa ggagatcggc 180

agcaactgcc tgaacaacga gttcaacttc ttcaagagac acatctgcga cgccaacaag 240

gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc 300

accggcgact tcgacctgca cctgctgaag gtgagcgagg gcacaaccat cctgctgaac 360

tgcaccggcc aggtgaaggg cagaaagccc gccgccctgg gcgaggccca gcccaccaag 420

agcctggagg agaacaagag cctgaaggag cagaagaagc tgaacgacct gtgcttcctg 480

aagagactgc tgcaggagat caagacctgc tggaacaaga tcctgatggg caccaaggag 540

cacaggaaca caggcagagg cggcgaggag aagaagaagg agaaggagaa ggaggagcag 600

gaggaaagag agaccaagac ccccgagtgc cccagccaca cccagcccct gggcgtgttc 660

ctgttccctc ccaagcccaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgc 720

gtggtcgtgg atgtgagcca ggaagatccc gaagtgcagt tcaactggta cgtggatggc 780

gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaagagc agttcaactc cacctacaga 840

gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 900

aaggtgtcca acaaaggcct gcccagctcc atcgagaaga ccatcagcaa agccaaaggc 960

cagcccagag aaccccaggt gtacaccctg cctcccagcc aggaagagat gaccaagaac 1020

caggtgtccc tgacctgcct ggtgaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1080

gaaagcaacg gccagcccga gaacaattac aagacaaccc ctcccgtgct ggatagcgat 1140

ggcagcttct ttctgtacag cagactgacc gtggacaaga gcagatggca ggaaggcaac 1200

gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaagcc ctgcacaacc actacaccca gaagagcctg 1260

tccctgagcc tgggcaag 1278

<210> 40

<211> 4

<212> PRT

<213> 人工序列()

<220>

<223> 与IL-7缀合的寡肽

<400> 40

Met Met Met Met

1

Claims

1.一种用于预防或治疗生殖器疾病的药物组合物，该药物组合物包含其中融合有免疫球蛋白Fc区的白细胞介素-7(IL-7)融合蛋白。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述IL-7融合至免疫球蛋白Fc区的N端或C端。

3.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述IL-7是具有以下结构的经修饰的IL-7：

A-IL-7，

其中，所述A是由1至10个氨基酸残基组成的寡肽，且

所述IL-7是白细胞介素-7或具有与白细胞介素-7相似的活性的多肽。

4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述IL-7选自SEQ ID NO：1至6。

5.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于，所述A选自：甲硫氨酸、甘氨酸、甲硫氨酸-甲硫氨酸、甘氨酸-甘氨酸、甲硫氨酸-甘氨酸、甘氨酸-甲硫氨酸、甲硫氨酸-甲硫氨酸-甲硫氨酸、甲硫氨酸-甲硫氨酸-甘氨酸、甲硫氨酸-甘氨酸-甲硫氨酸、甘氨酸-甲硫氨酸-甲硫氨酸、甲硫氨酸-甘氨酸-甘氨酸、甘氨酸-甲硫氨酸-甘氨酸、甘氨酸-甘氨酸-甲硫氨酸、甲硫氨酸-甲硫氨酸-甲硫氨酸和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸。

6.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述免疫球蛋白Fc区包括动物或人免疫球蛋白Fc区或其经修饰的免疫球蛋白Fc区。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述经修饰的免疫球蛋白Fc选自IgG1、IgG2、IgG3、IgD、IgG4及其组合。

8.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述经修饰的免疫球蛋白Fc区在N端到C端方向包含CH2结构域和CH3结构域，其中所述CH2结构域包含人IgD和人IgG4的CH2结构域的氨基酸残基的一部分，并且所述CH3结构域包含人IgG4CH3结构域的氨基酸残基的一部分。

9.根据权利要求6所述的药物组合物，其特征在于，所述经修饰的免疫球蛋白Fc区选自SEQ ID NO：9至14。

10.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述生殖器疾病是人乳头瘤病毒衍生的疾病。

11.一种用于预防或治疗生殖器疾病的方法，该方法包括将其中融合有免疫球蛋白Fc区的白细胞介素-7(IL-7)融合蛋白和药学上可接受的载体给药至个体。

12.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述生殖器疾病是人乳头瘤病毒衍生的疾病。

13.根据权利要求11所述的方法，其特征在于，所述给药是局部给药。

14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述局部给药是粘膜给药。