KR20140063657A - Ｈｃｖ 면역요법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 C 형 간염 바이러스에 감염된 환자의 C 형 간염 치료를 위한 인터류킨-7 (IL-7) 의 용도에 관한 것으로서, 이때 상기 환자는 바이러스량을 감소하도록 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로 치료된 바 있거나 또는 치료중인 환자이다.

Description

ＨＣＶ 면역요법 {HCV IMMUNOTHERAPY}

본 발명은 C 형 간염 치료 분야에 관한 것이다. 더욱 구체적으로 본 발명은 인터류킨-7 (IL-7) 을 이용한 C 형 간염에 대한 새로운 요법을 제공한다.

C 형 간염은 만성 간 질환과 그 합병증, 예를 들어 간 섬유증 및 간경화, 간부전 및 간세포암종의 주요 원인이다.

C 형 간염 바이러스 (HCV) 는 전세계적으로 주된 공중 위생 문제이다. 세계 보건 기구 (WHO) 는 1 억 7 천만 이하의 전세계 인구 (전세계 인구의 3%) 가 C 형 간염 바이러스 (HCV) 에 감염되어 있고, 이들 중 1 억 3 천만 초과는 만성 감염으로, 간경화 및 간암 발생의 위험이 있다고 추정한다. 대략 4 백만 사람들이 매년 HCV 에 감염된다 (World Health Organization. Viral cancers: Hepatitis C. online www.who.int; WHO 2010).

간에서 HCV 의 근절을 위한 오늘날의 치료기준 (standard-of-care; SOC) 은 PEG화 (pegylation) 유형 I 인터페론 (PegIFN) 및 합성 뉴클레오시드 리바비린 (RBV) 요법으로 이루어진다 (Fried MW et al; N Engl J Med. 2002; 347(13):975-82; EASL Clinical Practice Guideline: Management of hepatitis C virus infection, J Hepatol. 201 1 ; 55:245-264). 그러나, 상기 표준 요법은 그 효능이 제한적이고 예측될 수 없으며, 자주 치료 중단을 야기하는 과도한 독성 프로파일을 갖고, 매우 비싸다. 유전자형 1 및 4 의 만성 HCV-감염 개체의 절반 미만은 장기간 치료 (48 주) 의 표준 요법 (PegIFN/RBV) 에 반응한다 (Testino G et al; Hepatogastroenterology 2011; 58(106):536-8).

인터페론 (IFN) 은 고 활성의 항바이러스성 사이토카인이나, 열악한 임상적 내성을 갖는 림프구감소성 (lymphopenic) 이다. 그러므로, IFN 은 항바이러스성 활성을 보이지만, 이것은 또한 장기적 보호 중심 기억 T 세포의 생성 및 유지를 차단하기도 한다. 이는 PegIFN/RBV 로 치료된 만성 HCV-감염 환자에 있어서 재발 빈도가 높다는 점으로 해석된다. 게다가, 대조군 그룹과 비교시, 진행된 만성 C 형 간염 환자에게서 PEG인터페론으로의 연장 치료는 과도한 종합 치사율과 결부된다 (Di Bisceglie AM et al; Hepatology 201 1 ; 53(4): 1 100-8).

상이한 단계의 HCV 수명 주기 저해를 표적하는 새로운 항바이러스성 화합물이 개발된 바 있다. 몇몇의 새로운 C 형 간염에 대한 항바이러스성 약물 (프로테아제 저해제 및 폴리머라아제 저해제를 비롯한, 직접-작용성 항바이러스제 (direct-acting antiviral; DAA) 로도 지칭되는 바이러스 복제의 소분자 저해제) 이 현재 개발 진행 단계에 있다. 텔라프레비르 (Telaprevir) 및 보세프레비르 (Boceprevir) 가 시판되었다 (Ghany et al, Hepathology, 201 1 , 54(4): 1433-1444). 이들 새 항바이러스제는 치료기준 (PegIFN/RBV) 의 존재 또는 부재 하, 단일요법 또는 다중약물 요법에서 시험된 바 있다. 그러나, 직접-작용성 항바이러스의 단일요법은 약물 효과를 현저히 감소시키고 치료 실패를 초래하는 약물 내성의 발달을 일으키는 것이 일반적이다. 약물 내성은 DAA 의 사용에 있어서 상당한 제한 인자이다. 예를 들어, 텔라프레비르 (NS3/4 프로테아제 저해제) 단일요법은, 요법 개시 2 일 이내에 거의 99% 의 바이러스량 감소를 유도하나, 치료 지속 중임에도 불구하고 약물 내성 발생으로 인해 (Rong L et al; Sci Transl Med; 2010 May 5; 2(30):30ra32), 10 일 이내에 바이러스량의 반등이 빈발한다 (Kieffer TL et al; Hepatology; 2007 Sep; 46(3):631 -9). 만성 감염은, 대개 간에서 C 형 간염 바이러스의 신속한 회전율 및 상승된 돌연변이율에 의해 유지된다. 이러한 높은 C 형 간염 바이러스의 생존력 및 다양성은 하나 또는 다수의 DAA 부류에 대해 내성을 야기한다. 결과적으로, 대부분의 치료가 항바이러스제에 대해 내성이 있는 변이체의 복제로 인해 실패한다. 다른 한편, 단일- 또는 병용 요법에 있어서 직접-작용 항바이러스성 약물은 반응 속도를 증가시키고/시키거나 치료 기간을 단축시키는 저력을 보여왔으나, 이들은 단지 PegIFN/RBV 와 함께 부가 요법으로서만 작용한다 (McHutchison JG et al; N Engl J Med. 2009; 360(18): 1827-38). 이들 병용 요법의 효능은 유전자형-1 감염에 대해서만 입증된 바 있다. 게다가, 이들은 더 많은 부작용을 유발하며 치료 비용을 상승시킨다. 마지막으로, 이들의 효능은 잠재적인 약물 내성 문제 측면에 있어서 여전히 불명확하다.

HCV 에 대해 일반적 및 특이적 면역 반응을 자극할 수 있는 몇몇의 면역-조절제 (이들 중, 모노클로날 항체, 사이토카인, 예컨대 새로운 인터페론 람다, 백신 및 TLR 아고니스트를 들 수 있음) 가 또한 개발 중이다.

다수의 과학 그룹들이 HCV 감염 예방과 나아가 치료를 위해, T 세포 및 항체 기반 백신 개발에 현재 작업 중이나, 지금까지는 어떠한 백신도 존재하지 않는다. 게다가, 바이러스에 의해 보여지는 고수준의 유전적 다양성으로 인해 모든 HCV 를 표적하는 백신을 개발하는 것은 불가능할 수 있다.

T 세포 발달 및 항상성에 있어서 중요한 사이토카인인 IL-7 은, 만성 LCMV 의 임상전 모델 (지속적인 고수준의 바이러스혈증을 가진 LCMV 클론-13 감염 마우스) 에서 흥미로운 항바이러스 활성을 보인 바 있으나, 이 활성은 오직 환자 테스트에 적절하지 않은 매우 높은 용량의 IL-7 에서만 나타난다 (Pellegrini M et al; Cell 2011; 144(4):601 -13).

바이러스를 제어하는 각종 치료법이 지난 수십년간 개선되어 왔음에도 불구하고, 그 한계가 여전히 존재하는데, 이 중, 치료 기간; 만성 HCV 를 치유하는데 있어서의 치료 효능; 치료 내인성, 과도한 비용 및 부적절한 접근 등을 들 수 있다. 모든 HCV-감염 환자들이 항바이러스성 치료에서 이득을 보는 것은 아니다. 지금까지 제안된 치료들 중 어떤 것도 재발 방지를 제공하는 연장된 효과와 더불어, 단기간 (수 주 (weeks)) 동안에 광범위한 반응 속도를 제공할 수 없었다. 오늘날, 비응답 (non-responder) HCV-감염 환자의 치료 옵션은 한정되어 있다. 이에 따라 HCV 감염 및 HCV-관련 질환 및 사망을 치료하는데 개선된 요법이 요구된다.

본 발명의 개요

본 발명은 순환 HCV 바이러스 농도를 줄이는 항바이러스 단기 치료와 병용되는 HCV 바이러스에 대한 효율적인 면역 반응을 자극하는 IL-7 면역요법을 제안한다.

본 발명은 C 형 간염 바이러스에 감염된 환자의 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물과 병용 또는 후속하는 IL-7 을 제공한다.

바람직하게, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물은 HCV 바이러스량을 5 Log₁₀ IU/mL 미만, 바람직하게 4 Log₁₀ IU/mL 미만, 더욱 바람직하게 3 Log₁₀ IU/mL 미만으로 감소시키는 치료적 유효량으로 한다.

바람직한 구현예에서, IL-7 은 IL-7 투여 이전에 바이러스량을 감소시키도록 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로 치료된 바 있는 환자에게서 이용된다.

따라서, 하기를 포함하는, 치료를 필요로 하는 인간 대상에서의 C 형 간염 감염을 치료 또는 저해하기 위한 새로운 치료 요법이 제공된다:

- 항바이러스 치료를 실시해 C 형 간염 바이러스량을 감소시키고,

- 인터류킨-7 약학적 조성물을 투여해, 면역 기능을 회복시키고 치료 중단 후 오래 지속적인 치료를 제공함.

바람직하게, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물은 바이러스량을 IL-7 투여 이전에 5 Log₁₀ IU/mL 미만, 바람직하게 4 Log₁₀ IU/mL 미만, 더욱 바람직하게 3 Log₁₀ IU/mL 미만으로 감소시킨다.

항바이러스제는 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 것이 유리하다: 인터페론, 프로테아제 저해제, 폴리머라아제 저해제, 바이러스 진입 저해제, 헬리카아제 저해제, 및 리바비린 또는 이들의 조합.

다시 말해, 본 발명은 C 형 간염 바이러스에 감염된 환자의 C 형 간염 치료용 약제 제조를 위한, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물과 병용되거나, 또는 후속적인 IL-7 의 용도에 관한 것이다.

C 형 간염 바이러스 (HCV) 로 감염된 환자의 C 형 간염 치료 방법이 기재되는데, 이 방법은 HCV 바이러스량을 감소시키기 위해 환자에게 치료적 유효량의 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물을 투여하면서, 환자에게 잔류 바이러스에 대한 효과적인 면역 반응을 자극하기 위해 치료적 유효량의 IL-7 을 투여하는 것을 포함한다.

특정 구현예에서, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로의 치료는 IL-7 로의 치료와 동시 시작하고, IL-7 치료 적어도 어느 정도 동안, 바람직하게 6 내지 12 주 동안 유지된다.

또 다른 구현예에서, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로의 치료는 IL-7 로의 치료 이전에 시작되고, IL-7 치료 적어도 어느 정도 동안, 바람직하게 6 내지 12 주 동안 유지된다.

또 다른 구현예에서, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로의 치료는 IL-7 로의 치료 후 1 주 후에 시작하고, IL-7 치료 적어도 어느 정도 동안, 바람직하게 6 내지 12 주 동안 유지된다. 상기 요법은 특히 항바이러스제가 인터페론인 경우에 유용할 수 있다. 실제로, 인터페론이 림프구 감소성이므로, IL-7 요법을 1 주 전에 시작하는 것이 효율적으로 면역 시스템의 반응을 보조할 수 있다.

본 발명은 많은 바이러스 유사 종들을 표적하고, 돌연변이에 의한 바이러스 탈출을 막고, 치료 완료 또는 중단 후 HCV 재발을 예방하는 광범위하고 안정적인 항바이러스성 면역 반응을 유도하는 것을 가능하게 한다.

본 발명은 환자의 특정 면역 반응의 레퍼토리를 넓히는 것을 허용한다 (즉, TCR 레퍼토리의 다양성이 넓혀진다). 이는 결과적으로 재발을 방지한다.

빠르고 효과적인 항바이러스 반응이 전개되고, 바이러스 소거가 행해진다.

게다가, 지속적인 보호가 숙주 (환자) 바이러스에 대해 특이적인 장기간 중심 기억 T 세포의 생성에 의해 달성되고 지지된다.

도면 범례:

도 1 은 단 주기의 IL-7 (CYT107) 이 (10μg/kg, 1 주에 1 회, 경과일 0 (Day0) 에서 시작해 4 주간) 첨가된, (표준 요법에 대한 반응 결여를 확인하도록 IL-7 요법 9 주전 (중앙값) 에 개시된) 52 주의 표준 pegIFN+RBV (리바비린) 요법을 적용한 12 명의 환자에게서, 시간 경과에 따른 (경과일) HCV RNA 의 정량화로써 측정된 바, HCV 바이러스량의 진전을 나타내는 그래프이다. HCV 바이러스를 소거한 환자는 그의 HCV 바이러스량을 스크리닝과 D0 사이 2 Log₁₀ IU/mL (평균) 감소시키고, IL-7 요법 이전에는 5 Log₁₀ IU/mL 미만의 바이러스량을 갖는다.

도 2 는 단 주기의 IL-7 (CYT107) 이 (10μg/kg, 1 주에 1 회, 경과일 0 에서 시작해 4 주간) 첨가된, (표준 요법에 대한 반응 결여를 확인하도록 IL-7 요법 9 주전 (중앙값) 에 개시된) 52 주의 표준 pegIFN+RBV (리바비린) 요법 을 적용한 12 명의 환자에게서 T 세포 다양성의 진전을 나타내는 그래프이다. 12 명 중 5 명은 비다양성 (divpenic) 이었는데, 이는 이들이 IL-7 요법 이전에 중간 정도 내지 극도의 면역 다양성의 감소를 보였다는 점을 시사한다. IL-7 요법 후, 통상의 T 세포 다양성이 모든 환자에게서 회복되었고, 적어도 D56 까지 안정적이었다.

본 발명의 상세한 설명:

본원에서는 HCV 바이러스에 감염된 환자의 C 형 간염 치료 방법이 기술되어 있으며, 이때 상기 방법은 상기 환자에 부가 요법으로서 인터류킨-7 (IL-7) 을 투여하는 것을 포함한다.

놀랍게도, 다양한 환자 모집단에서 각종 연합을 테스트함으로써, 본 발명자들은 IL-7 요법이 만성 HCV 감염에 불활성이고, 통상 고 바이러스량 (즉, 5 Log₁₀ IU/mL 초과, 일반적으로 5 내지 7 Log₁₀ IU/mL 의 HCV RNA) 이 관찰되는 환자에게서 바이러스를 소거하는 것이 불가능한 것처럼 보이는 반면에, 바이러스량을 중 또는 저 수준으로 (즉, 5 Log₁₀ IU/mL 미만, 바람직하게 4 Log₁₀ IU/mL 미만의 HCV RNA) 감소시키는데 항바이러스제를 사용하는 경우에는, 단기 (short) 첨가제 IL-7 요법은 (1) 대부분의 환자에게서 관심 항바이러스성 활성을 전개시키고 빠르게 바이러스를 소거할 수 있으며, (2) T 세포 총계 (count), 다양성 및 작용성을 증대시킬 수 있고, (3) 치료 중단 또는 완료 후 HCV 재발을 피하면서 효율적이고 안정적인 면역 반응을 유도할 수 있다는 점을 발견했다. 첨가제 IL-7 요법은 또한 간 C 형 간염-연관 섬유증을 방지할 수 있고 간경화의 위험을 최소화할 수 있다.

이는 표준 요법 (PegIFN/RBV) 의 재도입 후 바이러스량을 적당히 감소시키고, 그 바이러스량이 4 Log₁₀ IU/mL 미만으로 떨어질 때 IL-7 의 첨가로 바이러스를 소거한, 표준 요법에 대한 비반응자로서 이전에 동정된 바 있는 만성 HCV 환자에서 익히 입증되었다.

C 형 간염은 C 형 간염 바이러스 (HCV) 에 의해 감염되는 바이러스성 간염이다. 임의의 HCV 균주 또는 유전자형 (1, 2, 3, 4, 5, 6) 이 본원에서 고려된다. 바람직하게, 환자는 HCV 유전자형 1 또는 4 로 감염된다.

본원의 문맥에서, 본원에 사용된 바 용어 "치료하기" 또는 "치료"는 상기 용어가 적용되는 장애 또는 병태, 또는 그러한 장애 또는 병태의 하나 이상의 증상을 예방, 또는 그 진행을 치유, 역행, 경감, 저해하는 것을 의미한다. 용어 "치유"는 바람직하게 바이러스성 소거가 관찰되는 것을 의미한다.

"바이러스량 감소"란, 예를 들어 정량적 RT-PCR 로써 측정될 수 있는 순환 HCV 바이러스의 양을 감소시키는 것을 의미한다. 바이러스량은 Log₁₀ IU/mL 로 표기된다.

본 발명에 따르면, 용어 "환자" 또는 "이를 필요로 하는 환자"는, HCV 에 감염된 또는 감염되기 쉬운 인간 또는 비(非)인간 포유동물로 의도된다. 환자는 아동 또는 10 대를 비롯한 임의의 연령의 남성 또는 여성일 수 있다. 환자는 무증상일 수 있거나, 또는 간염의 초기 또는 진행 징후를 보일 수 있다. 특정 구현예에서, 환자는 항바이러스제로 치료받기 시작할 때 고 HCV 바이러스량을 보인다. "고 HCV 바이러스량"이란, 일반적으로 2 Log₁₀ IU/mL 초과, 바람직하게 3 Log₁₀ IU/mL 초과, 더욱 바람직하게 4 Log₁₀ IU/mL 초과, 보다 더욱 바람직하게 5 Log₁₀ IU/mL 초과를 의미한다.

또 다른 구현예에서, 임의의 환자는 그/그녀의 HCV 바이러스량과 관계 없이 본 발명의 치료로부터 이득을 얻을 수 있을 것이다.

항바이러스제 :

HCV 바이러스량은, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로의 치료 제 1 상 동안 약 5 Log₁₀ IU/mL 미만, 바람직하게 약 4 Log₁₀ IU/mL 미만, 더욱 바람직하게 약 3 Log₁₀ IU/mL 미만으로 감소된다.

특정 구현예에서, 항바이러스제는 인터페론, 리바비린, HCV 프로테아제 저해제, HCV 폴리머라아제 저해제 (뉴클레오시드, 뉴클레오티드 및 비(非)뉴클레오시드 폴리머라아제 저해제 포함), HCV 바이러스 진입 저해제, 헬리카아제 저해제 및 이들 조합을 포함할 수 있다. 인터페론 (IFN) 에는, 이에 제한되는 것은 아니나, 리바비린과의 조합 또는 그렇지 않은, PEG화 또는 그렇지 않은 IFN 알파 (IFN 알파 변이체, 예컨대 IFN 알파-2a 또는 IFN 알파-2b 포함), IFN 람다 또는 IFN 오메가, 특히 인터페론 알파-2a 및 보다 바람직하게 PEG화 인터페론 알파-2a 이 포함된다. 리바비린과 조합된 PEG화 인터페론 알파-2a 가 현재의 표준 치료법이다. 리바비린, HCV 프로테아제 저해제 또는 HCV 폴리머라아제 저해제와 연합되거나 또는 그렇지 않은 인터페론의 조합물이 또한 고려된다. 대안적으로, 직접-작용 항바이러스제 (DAA), 바람직하게 하나 이상의 HCV 프로테아제 저해제 및 하나 이상의 HCV 폴리머라아제 저해제의 조합이 항바이러스제로서 이용될 수 있다.

일반적으로 말하면, 항바이러스 치료는 하기 언급되는 약물 중 임의의 것, 특히 인터페론, 리바비린, HCV 프로테아제의 저해제, HCV 폴리머라아제의 저해제 (뉴클레오시드, 뉴클레오티드 및 비뉴클레오시드 폴리머라아제 저해제 포함), 진입 저해제, 헬리카아제 저해제 및 기타 항-C 형 간염 제제 또는 그의 조합물: (1) 인터페론 및/또는 리바비린; (2) 기질-기반 NS3 프로테아제 저해제 (WO 98/22496); (3) 비(非)-기질-기반 저해제, 예컨대 2,4,6-트리히드록시-3-니트로-벤즈아미드 유도체 (Sudo K. et al., Biochemical and Biophysical Research Communications, 238:643-647 (1997); Sudo K., et al. Antiviral Chemistry and Chemotherapy, 9:186 (1998)), RD3-4082 및 RD3-4078 포함, 이때 전자는 14 탄소 사슬로 아미드 상 치환되고, 후자는 파라-페녹시페닐기를 가짐; (4) 티아졸리딘 유도체, 이는 NS3/4A 융합 단백질 및 NS5A/5B 기질을 갖는 역상 HPLC 검정에서 관련 저해를 보임 (Sudo K. et al., Antiviral Research, 32: 9-18 (1996)), 특히 화합물 RD-1 -6250 은 RD4 6205 및 RD4 6193, 알킬 장쇄로 치환된 융합된 신나모일 모이어티를 가짐; (5) 티아졸리딘 및 벤즈아닐리드 [Kakiuchi N. et al. J. FEBS Letters 421 , 217-220; 및 Takeshita N. et al. Analytical Biochemistry, 247: 242-246 (1997)] 에서 동정됨; (6) SDS-PAGE 및 오토라디오그라피 검정에서 프로테아제에 대한 활성을 갖고 스트렙토마이세스 종 (Streptomyces sp.) 의 발효 배양 브로쓰로부터 단리된, Sch 68631 (Chu M. et al., Tetrahedron Letters, 37: 7229-7232 (1996)), 및 Sch 351633, 신틸레이션 접근 검정에서 활성을 나타내는 진균류 페니실륨 그리스코풀럼 (Penicillium griscofuluum) 에서 단리된 페난트렌퀴논; (7) 거머리에서 단리된 거대분자 엘진 c 기재 선택적 NS3 저해제 (Qasim M. A. et al., Biochemistry, 36: 1598-1607 (1997)); (8) 헬리케이스 저해제 (U.S. 특허 번호 5,633,358); (9) 폴리머라아제 저해제, 예컨대 뉴클레오티드 유사체, 글리오톡신 (Ferrari E. et al., Journal of Virology, 73:1649-1654 (1999)), 및 천연 생성물 세룰레닌 (Lohmann V. et al., Virology, 249: 108-1 18 (1998)); (10) 바이러스의 5' 비(非)코딩 영역 (NCR) 에서 서열 확장물 (stretch) 에 상보적인 안티센스 포스포로티오에이트 올리고데옥시뉴클레오티드 (S-ODN), 또는 NCR 의 3' 말단을 포함하는 뉴클레오티드 326-348 및 HCV RNA 의 코어 코딩 영역에 위치된 뉴클레오티드 371-388; (11) IRES-의존 번역 저해제; (12) 뉴클레아제-저항 리보자임; 및 (13) 1-아미노-알킬옥시클로헥산 포함 여러 종류의 화합물 (U.S. Pat. No. 6,034,134 내지 Gold et al.), 알킬 지질 (U.S. Pat. No. 5,922,757 내지 Chojkier et al.), 비타민 E 및 기타 항산화제 (U.S. Pat. No. 5,922,757 내지 Chojkier et al.), 스쿠알렌, 아만타딘, 담즙산 (U.S. Pat. No. 5,846,964 내지 Ozeki et al.), N-(포스포노아세틸)-L-아스파르트산, (U.S. Pat. No. 5,830,905 내지 Diana et al.), 벤젠디카르복사미드 (U.S. Pat. No. 5,633,388 내지 Diana et al.), 폴리아데닐산 유도체 (U.S. Pat. No. 5,496,546 내지 Wang et al.), 2',3' 디데옥시이노신 (U.S. Pat. No. 5,026,687 내지 Yarchoan et al.), 및 벤즈이미다졸 (U.S. Pat. No. 5,891,874 내지 Colacino et al.) 을 포함할 수 있다.

보다 최근, 기타 항바이러스 약물 (또한 직접-작용 항바이러스제 (DAA) 로 지칭) 이 주로 표적으로서 폴리머라아제 및 프토테아제 효소에 따라 개발된 바 있고, 이는 또한 항바이러스제로서 이용될 수 있다:

(1) 프로테아제 저해제, 예컨대 텔라프레비르 (VX-950) (NS3/NS4a 프로테아제의 특정 펩티드유사체 (peptidomimetic) 저해제) (Reesink HW Gastroenterology 2006, 131 :997-1002) 및 보세프레비르 (SCHS03034) (Sarrazin C Gastroenterology 2007, 132:1270-1278). 관심 기타 프로테아제 저해제로는 다노프레비르, 바니프레비르가 있다.

(2) 2' 및 3' 치환 리보뉴클레오시드 유사체의 폴리머라아제 저해제, 예컨대 발로피시타빈, 뉴클레오시드 유사체 2-C-메틸시티딘의 전구체 (NM283) (Pierra C J med chem. 2006, 49:6614-6620), 및 비(非) 뉴클레오시드 RNA-의존 RNA 폴리머라아제 저해제, 예컨대 벤즈이미다졸 유도체 JTK-109 및 JTK-003 (Tomei L. J Virology 2004, 78(2):938-946).

비뉴클레오시드 폴리머라아제 저해제에는 테고부비르 (tegobuvir), 필리부비르 (filibuvir) 가 포함된다.

뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 폴리머라아제 저해제에는 RG7128, PSI-7977 이 포함된다.

항바이러스성 반응을 유도할 수 있는 면역 조절제는 Toll-유사 수용체 아고니스트를 비롯해, 예컨대 또한 이사토리빈 (isatoribine) (TLR7) (Horsmans Y, Hepatology 2005, 42:724-731), 레시퀴모드 (resiquimod) (TLR7 및 8) (Pockros PJ, Hepatology 2007, 47:174-182), 및 CPG10101 (TLR9) (McHutchison JG, Hepatology 2007, 46:1341-1349) 이 또한 개발된 바 있다.

항바이러스제는 단독으로, 또는 기타 항바이러스제들과 병용 또는 함께하는, 직접-작용 항바이러스제 (DAA) 또는 인터페론 또는 리바비린이 바람직하다. 텔라프레비르 및 보세프레비르가 본 발명에서 유용한 바람직한 프로테아제 저해제이다.

바람직한 조합물에는, (i) 인터페론 및 리바비린, (ii) 인터페론, 리바비린 및 DAA(들), (iii) 인터페론 및 DAA(들), (iv) 리바비린 및 DAA(들) 이 포함된다.

인터페론 (IFN) 은, 각종 미토겐에 노출시 매우 다양한 진핵 세포에 의해 분비된 익히 공지된 사이토카인 부류이다. 인터페론은 그의 화학적 및 생물학적 특성에 의해 하기 4 그룹으로 분류된다: IFN-알파 (백혈구), IFN-베타 (섬유아세포), IFN-감마 (림프구), 및 IFN-람다. IFN-알파 및 베타는 유형 I 인터페론으로서 공지되어 있고; IFN-감마는 유형 II 또는 면역 인터페론으로서 공지되어 있고, IFN-람다는 유형 III 인터페론으로서 공지되어 있다. 유형 I IFN 및 유형 III IFN 은 현저하게도 유사한 생물학적 활성을 보인다. 유형 III IFN (람다 인터페론 (IFN-λ) 또는 인터류킨-28/29) 은, 유형 I IFN 과는 구별되는 수용체 착물을 통해 그의 작용을 발휘하나 IFN-유사 활성을 보인다. IFN 은 항-바이러스성, 면역조절 및 항증식성 활성을 나타낸다. 본 발명에서, 사용될 인터페론은 바람직하게 인터페론-알파이다.

전형적인 적합한 인터페론-알파에는, 이에 제한되는 것은 아니나, 재조합 IFNα-2b, 예컨대 INTRON A 인터페론 (Schering Corporation, Kenilworth, N.J.), 재조합 IFNα-2a, 예컨대 ROFERON® 인터페론 (Hoffmann-La Roche, Nutley, N.J.), 재조합 IFN-α 2c, 예컨대 Berofor® 알파 2 인터페론 (Boehringer Ingelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, Conn.) IFN-α n1, 천연 알파 인터페론의 정제된 블렌드, 예컨대 SUMIFERON® (Sumitomo, Japan) 또는 WELLFERON® IFN-α n1 (INS) (Glaxo-Wellcome Ltd., London, Great Britain), 또는 공통 알파 인터페론, 예컨대 U.S. Pat. Nos. 4,897,471 및 4,695,623 (특히 그의 실시예 7, 8 또는 9) 에 기재된 것 및 특정 제품 (Amgen, Inc., Newbury Park, Calif.), 또는 IFN-α n3, 천연 알파 인터페론의 혼합물 (Interferon Sciences 에서 제조하고, Purdue Frederick Co., Norwalk, Conn.에서 입수가능), ALFERON® 또는 재조합 인터페론 알파 (Frauenhoffer Institute, Germany 또는 Green Cross, South Korea 에서 입수가능) 가 포함된다.

IFN α-2b 또는 IFN α-2a 가 바람직하다. 가장 바람직한 구현예에서, 인터페론은 PEG화 형태이다. PEG화 인터페론은 인터페론의 폴리에틸렌 글리콜 개질 콘쥬게이트이다.

PEGASYS® 와 같은, 폴리에틸렌-글리콜-인터페론 알파-2a 콘쥬게이트가 바람직하다 (EP 809 996 참조).

(예를 들어, Bristol Myers Squibb 에 의해 개발된 바) PEG화 인터페론 람다가 또한 이용될 수 있다.

더욱이, 인터페론은 알부민 등의 단백질에 융합 또는 콘쥬게이션될 수 있다. 예를 들어, 알부민 인터페론 알파-b (알파-IFN) (Albuferon®) 는 인간 혈청 알부민의 긴 반감기를 갖는 인터페론 알파의 치료적 활성을 조합한 폴리펩티드 분자이다.

또한 바람직한 구현예에서, 인터페론은 6 주 이하에서 사용되고, 특히 인터페론은 IL-7 치료 후 3 주 이하 후에 사용된다.

실제로, 본 발명에 있어서, 항바이러스제는 프로테아제 저해제 또는 폴리머라아제 저해제, 바람직하게 그의 조합물 등의 환자의 HCV 바이러스 유전자형을 표적하는 직접-작용 항바이러스제 (DAA) 인 것이 바람직하다.

인터류킨 7:

본 발명의 문맥 내에서, "IL-7" 은, 포유동물 (예, 인간, 원숭이, 소, 말, 고양이 또는 개) IL-7 폴리펩티드를 지시한다. 더욱 바람직하게, IL-7 폴리펩티드는 인간 IL-7 폴리펩티드이다.

본 발명의 바람직한 인간 IL-7 폴리펩티드는 EP 314 415 또는 WO2004/018681 A2 에 기재된 아미노산 서열 및 그의 임의 천연 변이체 및 동족체를 포함한다. 인간 IL-7 의 서열은 또한 유전자 은행에서 이용가능하다. 전형적인 야생형 단백질은 152 개의 아미노산을 포함하고, 임의로는 추가적인 N-말단 메티오닌 잔기를 포함한다. 그 변이체는 더욱 바람직하게 SNP, 스플라이싱 변이체 등을 비롯한 천연 다형으로부터 도모된 천연 대립유전자 변이체를 포함한다.

본 발명에서 사용된 IL-7 폴리펩티드는 바람직하게 재조합 IL-7 이다. 본원에서 사용된 바 용어 "재조합"은, 폴리펩티드가 재조합 발현 시스템에서, 즉 숙주 세포 (예, 미생물 또는 곤충 또는 식물 또는 포유동물) 의 배양물에서, 또는 IL-7 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산 분자를 포함하도록 조작된 트랜스제닉 식물 또는 동물에서 수득 또는 유래되는 것을 의미한다. "미생물"은 박테리아 발현 시스템에서 제조된 재조합 단백질을 지칭한다. "포유동물"은 포유동물 발현 시스템에서 제조된 재조된 재조합 당단백질을 지칭한다. 이들 숙주 세포 전부는 바람직하게 자연적으로 또는 유전자도입 후 적절한 글리코실트랜스퍼라아제 및/또는 시알릴트랜스퍼라아제 유전자를 발현시켜야 한다. IL-7 폴리펩티드는 또한 적절한 시험관 내 또는 생체 내 글리코실트랜스퍼라아제 및/또는 시알릴트랜스퍼라아제 분자의 사용을 통해 또는 올리고사카라이드 구조를 그라프팅함으로써 글리코실화될 수 있다. CHO 세포가 바람직하다.

인간 IL-7 폴리펩티드의 특정예는 EP 1 527 179 에 기재된 바 디술파이드 다리결합 Cys2-Cys92; Cys34-Cys129 및 Cys47-Cys141 을 포함하는 SEQ ID NO: 1 의 폴리펩티드이다.

또한, 본 발명의 IL-7 폴리펩티드는 성숙한 IL-7 폴리펩티드 서열을 포함할 수 있고, 또는 추가의 아미노산 잔기, 예컨대 분비 펩티드를 추가로 포함할 수 있다. 상기 분비 펩티드의 바람직한 예에는, 제한 없이 EPO 신호 펩티드, SEAP 신호 펩티드, IgG카파 신호 펩티드, 락토트랜스페린/비트로넥틴 신호 펩티드, VIP/비트로넥틴 신호 펩티드 및 사이토스타틴 비스 신호 펩티드로 이루어진 군으로부터 선택된 신호 펩티드를 포함한다.

바람직한 구현예에서, IL-7 은 WO2007/010401 에 기재된 바 하이퍼글리코실화 (hyperglycosylation) 형태이다.

본 발명의 문맥 하, 용어 "하이퍼글리코실화 IL-7" 은 3 개 이상의 글리코실화 아미노산 잔기를 갖고, 6.5 보다 낮은 평균 등전점을 갖고, 27 KDa 보다 높은 평균 분자량을 갖는 (SDS 겔 전기영동에서 측정) IL-7 폴리펩티드를 지정한다.

하이퍼글리코실화 IL-7 폴리펩티드에서 특정 글리코실화 자리에 부착된 올리고사카라이드 단위의 구조 및 갯수는 가변적일 수 있다. 이들은 예를 들어 N-아세틸 글루코사민, N-아세틸 갈락토사민, 만노오스, 갈락토오스, 글루코오스, 푸코오스, 자일로오스, 글루쿠론산, 이두론산 및/또는 시알산일 수 있다.

더욱 바람직하게, 하이퍼글리코실화 IL-7 폴리펩티드는 하기로부터 선택된 N-링크 및/또는 O-링크된 탄수화물 쇄(들)를 포함한다:

a) 포유동물 유형 당 쇄, 바람직하게 CHO 세포에 의해 발현된 유형;

b) 복합체 N-탄수화물 쇄를 포함하는 당 쇄 (예, 3쇄형 (triantenary) 또는 2 쇄형 (biantenary) 구조), 더욱 바람직하게 고 만노오스 및 아세틸글루코사민 분자 및 고 말단 시알산 잔기 포함;

c) 바람직하게는 말단 시알산 잔기 존재 및 부재 하 O-탄수화물 쇄를 포함하는 당쇄;

d) 알파2,6-시알릴트랜스퍼라아제 또는 알파2,3-시알릴트랜스퍼라아제에 의해 시알릴화된 당 쇄; 및/또는

e) 3 내지 30 개, 바람직하게 7 내지 23 개의 시알릴-N-아세틸갈락토사민을 나타내는 시알릴화 당 쇄.

특히 바람직한 탄수화물 쇄(들)는 부분 또는 완전한 말단 시알릴화를 갖는 3쇄형 또는 2쇄형 구조를 포함한다. 추가의 바람직한 탄수화물 쇄는 3쇄형 구조 및 트리- 또는 바이-시알릴화를 포함하고 및/또는 디시알릴화된 2촉각형 (diantenary) 구조를 포함한다.

관심 하이퍼글리코실화 인터류킨-7 폴리펩티드는 유리하게도 6.5 보다 낮은 평균 등전점 및 질량 분광 분석에 따르면 25 kDa 로 번역되는 겔 전기영동을 통하면 (웨스턴 블롯으로 확인), 27 kDa 보다 높은 평균 겉보기 분자량, 28 KDa 내지 65 KDa (7N + 1O 글리코실화에 있어서 이론적), 바람직하게 28 KDa 내지 35 KDa (3N + 1O 글리코실화에 있어서 나타냄) 의 평균 겉보기 분자량을 가진다.

"글리코실화 부위"는, 글리코실화에 적용되는 폴리펩티드 내 임의의 아미노산 잔기 또는 영역, 즉 탄수화물 구조의 부착지를 나타낸다. 이러한 부위는 전형적으로 N-글리코실화 부위 (즉, N-결합을 통해 탄수화물 구조의 부착을 허용하는 폴리펩티드 내 임의의 아미노산 잔기 또는 영역) 및/또는 O-글리코실화 부위 (즉, O-결합을 통해 탄수화물 구조의 부착을 허용하는 폴리펩티드 내 임의의 아미노산 잔기 또는 영역) 을 지칭한다. 글리코실화 부위의 공통 서열은 당업계에 그 자체로 공지되어 있다. 예시로서, 공통 N-글리코실화 부위는 전형적으로 하기의 구조를 갖는다: Asn-X-Ser/Thr (이때, X 는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산임). 상기 글리코실화 부위는 IL-7 폴리펩티드 서열 내에 자연적으로 존재 및/또는 상기 서열 내 인위적으로 첨가 또는 생성될 수 있다.

본 발명에서 유용한 바람직한 IL-7 조성물은, 디술파이드 다리결합 Cys2-Cys92; Cys34-Cys129 및 Cys47-Cys141 를 포함하고, SDS 겔 전기영동에 의해 측정된 바 27 KDa 보다 높은 평균 분자량, 6.5 보다 낮은 평균 등전점 및 3 개 이상의 글리코실화 아미노산 잔기를 갖는 80% 이상의 인간 IL-7 재조합 폴리펩티드를 포함한다. IL-7 폴리펩티드는 바람직하게 3 개 이상의 별개의 아미노산 잔기 상에서 N-글리코실화된다.

또 다른 바람직한 구현예에서, IL-7 은 또 다른 단백질 독립체에 융합된다. IL-7 융합 단백질의 예는 WO2005/063820 에 기재되어 있다. 예를 들어, 이것은 (1) IgG 모이어티는 바람직하게 WO2007/010401 에 기재된 바 인간 IgG1 또는 IgG4 이고, 전형적으로 펩티드 힌지 영역을 통해 상기 IgG 중쇄의 Fc 부분에 작동적으로 부착된 IL-7, (2) US 특허 7,323,549 및 7,589,179, 및 US 특허 출원 20090010875 에 기재된 바와 같은 융합 단백질, (3) WO2007/010401 에 기재된 바, 융합 단백질로서, 인간 혈청 알부민 ("HSA") 또는 HSA 의 부분에 작용적으로 연합된 IL-7, 또는 (4) 융합 단백질로서, 인간 성장 인자 (HGF) 또는 그의 일부에 작동적으로 연합된 IL-7 와 같이, IL-7 융합 단백질 형태로 존재한다.

예를 들어, 표준 생검정 또는 IL-7 수용체 결합 친화도 검정에서, 실질적으로 동등한 생물학적 활성을 보이고, 야생형 성숙 포유동물 IL-7 과 실질적으로 아미노산 서열 상동성을 보이는 IL-7 변이체가 포함된다. 예를 들어, IL-7 은 하기의 아미노산 서열을 가진 재조합 또는 비(非)재조합 폴리펩티드의 아미노산 서열을 지칭한다: i) IL-7 폴리펩티드의 천연 또는 자연 발생 대립유전자 변이체, ii) IL-7 폴리펩티드의 생물학적 활성 단편, iii) IL-7 폴리펩티드의 생물학적 활성 폴리펩티드 유사체, 또는 iv) IL-7 폴리펩티드의 생물학적 활성 변이체.

IL-7 단백질의 "변이체"는 1 개 이상의 아미노산이 변경된 아미노산 서열로서 정의된다. 변이체는 "보존적" 변경을 가질 수 있고, 이때 치환된 아미노산은, 예를 들어 류신의 이소류신으로의 대체와 같이 유사한 구조 또는 화학적 특성을 가진다. 보다 드물게는, 변이체는 "비보존적" 변경, 예를 들어 글리신의 트립토판으로의 대체를 가질 수 있다. 유사한 작은 변형으로는 또한 아미노산 결실 또는 삽입 또는 양자 모두를 포함할 수 있다. 생물학적 활성을 없애지 않고 어느 및 얼마나 많은 아미노산 잔기가 치환, 삽입 또는 결실될 수 있는지에 대한 결정 지도는 당업계에 익히 공지된 컴퓨트 프로그램, 예를 들어 분자 모델링 또는 배열 형성용 소프트웨어를 이용해 알 수 있다. 본 발명에 포함된 변이체 IL-7 단백질은 IL-7 활성을 보유하는 IL-7 단백질을 포함한다. 부가, 치환 또는 결실도 또한 포함하는 IL-7 폴리펩티드는 단백질이 실질적으로 동등한 생물학적 IL-7 활성을 보유하는 한 본 발명 내에 또한 포함된다. 예를 들어, 전장 형태의 IL-7 단백질만큼 필적할만한 생물학적 활성을 보유하는 절삭형 (truncation) 의 IL-7 이 본 발명에 포함된다. IL-7 단백질의 활성은 시험관 내 세포 증식 검정을 이용해 측정될 수 있다. 본 발명의 IL-7 변이체의 활성은 야생형 IL-7 과 비교시 적어도 30%, 적어도 40%, 50%, 60%, 70%, 바람직하게 적어도 80%, 90%, 95% 또는 나아가 99% 의 생물학적 활성을 유지한다.

변이체 IL-7 단백질은 또한 야생형 IL-7 과 적어도 약 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 초과의 서열 상동성을 갖는 폴리펩티드를 포함한다. 두 핵산의 또는 두 아미노산 서열의 상동성% 를 측정하기 위해, 서열들을 최적 비교 목적을 위해 배열한다 (예, 제 1 아미노산의 서열 또는 핵산 서열에서 제 2 아미노산 또는 핵산 서열과의 최적 배열을 위해 갭 (gap) 을 도입할 수 있음). 두 서열들 사이의 상동성% 는 서열에 의해 공유된 동일한 위치 개수의 함수이다 (즉, % 상동 = 동일 위치의 #/위치의 총 #. x100 배). 두 서열들 사이의 상동성% 의 결정은 수학적 알고리즘을 이용해 수행될 수 있다. 두 서열의 비교에 사용된 수학적 알고리즘의 바람직한 비제한적 예는 [Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-77] 에서와 같이 수정된, [Karlin and Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-68] 의 알고리즘이다. 그러한 알고리즘은 [Altschul, et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-10] 의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램으로 통합된다. BLAST 뉴클레오티드 조사는 NBLAST 프로그램, 스코어 = 100, 단어길이 = 12 로 수행할 수 있다. BLAST 단백질 조사는 XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 단어길이 = 3 으로 수행할 수 있다. 비교 목적을 위한 갭이 존재하는 (갭핑; gapped) 배열을 수득하기 위해, 갭핑 BLAST 를 [Altschul et al., (1997) Nucleic Acids Research 25(17):3389-3402] 에 기재된 바와 같이 이용할 수 있다. BLAST 및 갭핑 BLAST 프로그램을 이용하는 경우, 각 프로그램의 디폴트 파라미터 (예, XBLAST 및 NBLAST) 가 사용될 수 있다.

요법:

본 발명에 따르면, IL-7 은 바람직하게 일주일에 1 또는 2 회, 바람직하게 2 내지 6 주의 기간 동안, 바람직하게 4 주 기간 동안 (이것이 IL-7 투여 주기로 정의됨) 투여된다. 상기 주기는 1 회 이상 반복될 수 있다.

바람직한 구현예에서, IL-7 은 4 주 동안 1 주에 1 회 투여된다.

바람직한 구현예에서, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로의 치료는 IL-7 로의 치료의 적어도 일부분 동안에 유지되고, 바람직하게도 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물 치료는 방해되지 않는다. 가장 바람직하게, IL-7 은 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물과 병용 투여된다. 이때, IL-7 은 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물과 개별적으로, 동시에 또는 연속적으로 투여될 수 있다.

특정 구현예에서, IL-7 은 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물과 동시에 투여된다.

바람직한 프로토콜에서, 환자에게, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물 이전에, 바람직하게는 1 주일 전에 IL-7 이 투여된다.

또 다른 바람직한 프로토콜에서, 환자에게, IL-7 이, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물과 동시에, 치료 개시점에서, 바람직하게 D0 내지 D10 사이에 출발해, 가장 바람직하게는 D3 내지 D7 사이에 출발해 투여된다.

또 다른 바람직한 프로토콜에서, 환자에게, 바이러스량을 감소시키기 위해, 제 1 상 동안, 다시 말해 바람직하게는 1 주 이상의 기간 동안의 제 1 상 동안 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물이 투여된 후, 바람직하게는 2 내지 6 주의 제 2 상의 IL-7 이, 바람직하게는 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물과 병용되어 투여된다.

IL-7 의 투여 후에, 적어도 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물과의 치료가 1 내지 3 주 지속하거나, 또는 4 또는 6 주 그 이상을 넘어 연장될 수 있는 제 3 상이 있다. 바람직하게 상기 제 3 상은 1 내지 9 주 지속된다.

전체적으로, 환자에게 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로 6 내지 12 주의 기간 동안 투여하는 것이 바람직하다.

항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물은 모든 치료 단계 동안 동일한 것이 바람직하다. 그러나, 이것은 원하는 경우 변경될 수 있다.

바람직한 구현예에서, 프로토콜은 사전에, 그러나 신속한 환자 바이러스량 감소를 수반하고, 이후 단기 IL-7 치료요법의 부가를 수반하며, 이와 동시에 한편으로는 상기 항바이러스 치료는 상기 기간에 걸쳐 그리고 이후 몇 주 동안에 유지된다.

치료가 중단되는 경우, 환자의 면역 시스템은 그 자체로 효율적으로 안정적으로 HCV 바이러스를 제어할 수 있다.

인터페론 등의 항바이러스제의 양은 1 주 또는 1 일 기준, 2 회 또는 3 회로, 1 주 당 2,000,000 내지 10,000,000 IU 일 수 있다. 바람직한 구현예에서, 투여되는 인터페론-알파는 인터페론-알파-2b 이고, 인터페론의 양은 1 주에 2 또는 3 회 3,000,000 IU 투여된다.

특정 구현예에서, 투여된 인터페론-알파는 PEG화 인터페론 알파-2b 이고, 인터페론의 투여량은 매 주, 1 주 당 0.5 내지 2.0 ㎍/체중 kg, 1 일 기준, 또는 1 주 2 회 또는 3 회 투여된다. 다르게는, 투여된 인터페론은 PEG화 인터페론 알파-2a 이고, 인터페론의 투여량은 매 주 1 주 당 20 내지 250 ㎍/체중 kg, 1 일 기준, 또는 1 주 2 또는 3 회이다.

기타 항바이러스제, 예컨대 리바비린은, 환자의 체중 기준 1 일, 약 400 내지 약 1600 mg/일, 바람직하게 약 600 내지 약 1200 mg/일 또는 약 800 내지 약 1200 mg/일 및 가장 바람직하게 약 1000 내지 약 1200 mg/kg 투여될 수 있다.

기타 항바이러스제, 예컨대 텔라프레비르는 1 일 3 회 (바람직하게 7-9 시간 간격으로 떨어져) 약 750 mg 투여될 수 있다.

기타 항바이러스제, 예컨대 보세프레비르는 1 일 3 회 (7-9 시간 간격으로 떨어져) 약 800 mg 투여될 수 있다.

바람직하게, 인터류킨-7의 투여 유효량은 약 3 내지 30 μg/kg, 바람직하게 약 5 내지 20 μg/kg 이고, 바람직하게, 약 10μg/체중 kg, 더욱 바람직하게 20μg/체중 kg 이다. 바람직하게, 상기는 1 주 단위로, 바람직하게 2 내지 6 주 동안 투여된다.

바람직한 경우, IL-7 는 1 주에 2 회 투여될 수 있다.

바람직한 구현예에서, IL-7 는 2 내지 4 주의 주기 동안 1 주에 1 회 투여될 수 있다. 상기 주기는 적어도 1 회 반복될 수 있다.

IL-7 및 항바이러스제는 동시에, 개별적으로 또는 동일한 제형물 내로 하여 투여될 수 있다. 바람직하게, 이들은 동시에 투여되고, 두 요법은 동시에 개시될 수 있거나, 또는 IL-7 이 항바이러스제 1 주일 전에 개시될 수 있다. 더욱 바람직하게, 이들은 상이한 스케쥴에 따라 개별적으로 투여된다. 항바이러스제 투여량은 바람직하게 환자가 IL-7 을 수령하는 동일한 시간 동안 투여된다.

약학적 조성물:

IL-7 을 포함하는 약학적 조성물은 경구, 직장 또는 비경구 경로에 적합할 수 있고, 더욱 특히 정맥내, 피하, 피내, 동맥내, 복강내 또는 근육내뿐 아니라 비강내 경로에 적합할 수 있다. 비경구 경로, 특히 피하가 바람직하다. 예를 들어, 활성 성분은 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 희석제 (중성 내지 약산성의, 등장성, 완충 식염수, 용액 또는 현탁액으로부터 선택될 수 있고, 더욱 바람직하게 수크로오스, 트레할로오스 및 아미노산으로부터 선택될 수 있음) 와 연합된다. 약학적으로 조합가능한 담체는 바람직하게 적절한 완충액에 포함되어 등장성 용액을 형성한다. 적절한 완충액은 pH 범위가 4.5 내지 7.5, 바람직하게 5.0 내지 7.0, 보다 더욱 바람직하게 약 5.5 인 것이 바람직하고, 나트륨 시트레이트 완충액 또는 암모늄 아세테이트 완충액에서 선택된 유기염이 바람직하다. 약학적 조성물은 현탁액, 용액, 겔, 분말, 고체 등의 형태일 수 있다. 조성물은 바람직하게 액체 형태이다.

상기 조성물은 안정화제, 예컨대 당, 아미노산, 단백질, 계면활성제 등을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 포스페이트, 클로라이드 등을 비롯해 임의의 식염수 용액을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 특정 약학적 조성물은 활성 약물 물질에 더해 단백질 및/또는 계면활성제를 포함한다. 이러한 단백질, 또는 천연 기원의 임의의 기타 고분자량 분자의 존재는 숙주 면역 시스템으로의 IL-7 의 노출을 감소시키고, 그리하여 2차 효과를 피한다. 더욱 바람직하게, 단백질은 인간 기원의 임의의 단백질과 같이 대상체에서 비(非)면역원성이다. 단백질의 가장 바람직한 예는 인간 혈청 알부민이다. 계면활성제는 공지된 계면활성제, 예컨대 Polysorbate 제품, 바람직하게 Tween20® 또는 Tween80® 로부터 선택될 수 있다. 본 발명의 특정 조성물은 인간 혈청 알부민 (바람직하게 2 내지 5 mg/ml) 또는 폴리소르베이트 (Tween 20 또는 80 (전형적으로 0.005%)) 또는 조성물의 투여 후 주사 자리에서 약물 제품의 국소 지속성 및/또는 단백질 응집으로 인한 IL-7 면역원성을 방지할 수 있는, 임의의 기타 물질, 예컨대 장력활성 물질 또는 아미노산 (예, 아르기닌, 글루타메이트 또는 아르기닌과 글루타메이트의 혼합물) 또는 당 (예, 수크로오스, 트레할로오스, 소르비톨) 을 포함한다.

특정 구현예에서, 투여 경로는 경구 경로이다. 기타 폴리펩티드 호르몬과 비교시, 경구 경로는 실제로 IL-7, 특히 하이퍼글리코실화 형태인 것에 있어서, 상기 단백질의 특출한 안정성으로 인해 허용가능하다. 이때, 조성물은 적절한 약학적으로 허용가능한 담체 중 제조된, 정제 또는 분말 또는 캡슐과 같은 고체 형태, 또는 시럽 또는 에멀젼과 같은 액체 형태일 수 있다. 바람직하게, 담체 그 자체는 위장관 및 순환계에서 안정적이고, 허용가능한 혈장 반감기를 보인다. 위산-내성 캡슐, 예컨대 IL-7 폴리펩티드의 마이크로-에멀젼 또는 리포솜 제형물을 포함하는 위산-내성 캡슐이 유리하다.

추가의 활성 성분, 예컨대 바람직하게는 조혈 세포 성장 인자, 사이토카인, 항원성 분자 (또는 항원) 및 아쥬번트로부터 선택된 면역-자극제가 병용, 개별적으로 또는 연속적인 용도로 사용될 수 있다.

치료 지시:

본 발명은 HCV 바이러스량의 현저한 감소를 허용한다.

바이러스 소거 및 증상 경감은 치료 후 1 주 내지 6 개월 이내에, 바람직하게 1 주 내지 3 개월 이내에 관찰될 수 있다.

본 발명은 질병 진행 억제를 가능하게 하고, 바이러스의 실질적으로 완전한 소거를 가능하게 한다. 달리 말하면, HCV RNA 는 환자에게서 탐지불가능해진다.

본 발명은 HCV 감염으로부터 야기된 임의의 유해 발생, 특히 간 섬유증 또는 간경화 또는 간암종의 임의 발병을 지연 또는 방지하는데 특히 유용하다.

본 발명의 프로토콜은 이전의 치료에 반응하지 않은 바 있는 환자에게서 특히 흥미롭다. 이들 환자에는, 비반응 (non-responder) 환자 (또한, 부분 반응자 또는 지연 반응자로도 지칭됨) 또는 무반응 (null-responder) 환자가 포함된다. 특히, 비반응 환자 (또한, 부분 반응자 또는 지연 반응자로도 지칭됨) 는, 치료 개시 후, 특히 인터페론 단독으로 또는 리바비린과 인터페론의 조합물로의 사전 치료 (현재의 표준 치료임) 의 개시 후, HCV RNA 가 12 주 후에 2 log 감소되었으나, 24 주까지 탐지불가능하지는 않은 환자이다. 이들 환자는 표준 치료로 재치료시 SVR (sustained viral response; 지속된 바이러스 반응) 을 달성할 가능성이 별로 없다. 무반응자는 치료 4 주 후에 1 log (10 지수) 이상, 또는 치료 12 주 후 2 log 감소되지 않은 환자이다. 이들 환자는 심지어 표준 치료로 재치료시에도 SVR 을 달성할 가능성이 극도로 없다.

이전의 치료에 대한 바이러스 반응 부재는, 정량적 RT PCR 테스트에 의해 측정된 바 12 주 후 HCV RNA 의 양이 유사 기법에 의해 측정된 기준선 수준과 비교시 2 log 미만 감소된 것으로써 정의된, 초기 바이러스 반응 (EVR) 의 무-반응 또는 부재로서 정의된다. 또는, 치료 말미에 탐지가능한 HCV RNA 에 의해 정의된 치료 종료시 반응의 부재로서 정의된다.

본 발명의 프로토콜은 경험이 없는 (naive) 환자, 즉 HCV 감염에 대해 치료를 받아본 적이 없는 환자, 더욱 특히 리바비린 또는 임의의 인터페론으로 치료를 받아본 적이 없는 환자를 치료하는데 있어서도 또한 유리할 수 있다.

감염에 대해 치료를 받아본적 있는 C 형 간염 환자, 특히, 리바비린 또는 임의의 인터페론으로의 치료를 받아본적 있는 환자는 또한 본 발명의 병용 치료에서 좋은 후보가 될 수 있다.

이들에는 이전의 치료에 대한 최초 반응 후 재발된 바 있는 C 형 간염 환자가 포함된다.

바이러스 돌파현상 (viral break-through) 을 보여주는 환자는 또한 본 발명의 치료로부터 이득을 얻을 수 있다. 바이러스 돌파현상은 환자가 치료 (특히 인터페론으로의 치료) 중에 반응을 달성한 경우에 일어나나, 그 후 연속적인 치료에도 불구하고 그 반응은 상실된다.

재발자, 비반응자 및 무반응자를 포함한, 급성 또는 만성 C 형 간염에 감염된 환자가 포함된다.

특정 구현예에 있어서, 환자는 인코딩 인터페론-람다-3 을 인코딩하는 IL28b 유전자의 유전자좌에서 단일-뉴클레오티드 다형에 있어서 유전자형으로 분류된다 (Thomson et al, Gastroenterology. 2010, 139(1):120-9, 및 국제 특허 출원 WO201 1/013019 참조). SNP rs12979860 에서 CC 유전자형은 SOC 치료에 대해, 특히 PEG화 인터페론-알파 (PEG-IFN-알파) + 리바비린 (RBV) 치료에 대해 응답하는 환자를 가리킨다. CT 또는 TT 유전자형은 비반응자 또는 무반응자를 가리킨다. 바람직한 구현예에서, SNP rs12979860 에서 CT 또는 TT 유전자형을 갖는 환자는 유리하게도 본 발명의 치료로부터 이득을 얻을 수 있다.

당해 프로토콜은 치료에 대한 내성 출현을 피하고, 더 많은 환자에게 이득을 주고, 더 신속하고 효과적이며 보다 지속적인 반응을 제공하면서, C 형 간염 바이러스의 변동성 및 다양성에 대해 유용하다.

본 발명의 프로토콜은 HCV 및 또 다른 바이러스, 예컨대 HIV, HBV, HPV, HSV, 또는 CMV 로 공동-감염된 환자에게서 추가적으로 유용할 수 있다.

특히, 상기 방법은 CD4 T 세포 총계가 낮은 (<400 CD4/㎕) HIV/HCV 공동-감염된 환자에게 유용할 수 있으며, 상기 환자들 중에서 일부는 그들의 매우 낮은 CD4 T 세포 총계로 인해 (<250 CD4/㎕) 치료 받을 수 없고, 인터페론 치료로도 적합하지 않다.

상기 경우, 동 치료 요법이 본원에 기재된 프로토콜을 적용하기 이전에 적절한 CD4 T 세포 총계를 복구하도록 약 2 내지 4 주의 IL-7 또는 임의의 기타 IL-7 아고니스트의 준비 주기 후에 적용될 수 있다.

본 발명의 프로토콜은 탐지가능한 HBV 바이러스량이 있는 HCV/HBV 공동-감염된 환자에게 추가로 맞춰질 수 있다. 이 경우, HBV 바이러스량의 사전 감소가 엔테카비르 (entecavir) 또는 테노포비르 (tenofovir) 와 같은 직접 항 HBV 항바이러스제로의 3 내지 4 개월 사전치료에 의해 수득될 수 있다.

도면 및 실시예는 본 발명을 그 영역을 한정하지 않으며 설명한다.

실시예

실시예 1: 상 I/IIa 연구에서 IL-7 의 C 형 간염 간 질환 평가

방법:

I/IIa 상 연구는 Peg-인터페론 및 리바비린으로의 현 "치료 기준" (SOC) 에 대해, 이 표준 이원-치료 (bi-therapy) 12 주 후에, 내성이 존재하고, C 형 간염 바이러스 유전자형 1 또는 4 에 의해 감염된 성인 환자에게서, 인터류킨-7 의 일주 단위 투여의 안전성 및 개인적 이득을 평가하도록 고안되었다.

초기 바이러스 반응 (EVR) 의 부재로서 동정된, PEG화 인터페론-알파 + 리바비린으로의 현 치료 기준에 대한 바이러스 반응의 부재를, 표준 치료 12 주 후, 정량적 PCR 테스트에 의해 측정된 바, 유사 기법에 의해 측정된 기준 수준과 비교시 2 log 미만의 HCV RNA 양 감소로서 정의한다. 또는, 치료 말미에 (24 주 또는 48 주) 탐지가능한 HCV RNA 에 의해 정의된 치료 종료시 반응의 부재로서 정의한다.

상기 공개 실험 (open-label) 의 상승용량 (dose-escalating) 연구에서, (3, 10 및 20 μg/kg/주) CYT107 (재조합 인간 글리코실화 IL-7) 를, SOC 에 대한 반응 결여를 확인하기 위해 CYT107 9 주 (중앙값) 전에 개시된 52 주 SOC 요법에 대한 부가물로서, 4 주 (D0 내지 D21) 동안 피하 경로를 통해 투여했다.

6 명의 환자들이 각 투여량 수준에서 포함되었고, 2 명 이상의 환자가 2 log 초과의 HCV RNA 급강하를 보이는 경우 6 명이 더 포함되었다.

결과:

CYT107 치료와 관련된 생물학적 파라미터에서, 중증 부작용 또는 임상적으로 관련있는 이상 (abnormality) 은 없었다.

D56 에서, CYT107 (10 g/kg/wk) 유도 (중앙 값):

- 초기의 예비-CYT107-SOC 유도된 림프구감소증 (-147/㎕ CD4) 을 보정하는 것 초과의 T 세포 증가 +341 CD4/㎕(+168%) 및 +209 CD8/㎕ (+179%).

- D0 (45%) 에서 낮은 다양성을 갖는 4 명의 환자에서 TCR 레퍼토리 다양성 증폭 (+25%).

- α4/β7 수용체 발현 CD3 개수 증가 (+ 73%)

이러한 T 세포 총계, 다양성 및 회귀성 (homing) 에서의 증가는 12 명의 환자 중 5 명의 환자에게서 12 주때 가속화된 속도로의 HCV 바이러스 감소 및 소거와 연관있다.

그 후, HCV RNA 는 탐지가능하지 않았다 (중앙 현 추적 (follow up): 11 개월). 반응이 있는 환자들은 CYT107 개시 때에 바이러스량이 중간 정도였다 (<4.52 log/mL).

도 1 에 나타낸 바, 치료기준 재도입 동안 바이러스량을 감소시킬 수 없었던 7 명의 환자들은 IL-7 부가 치료로도 바이러스를 소거하지 못했고 (제 0 일에 시작해 4 주간 1 주에 1 회 10 μg kg), 바이러스량이 표준 이원-치료 하에 5 Log₁₀ IU/mL 미만으로 격감된 5 명의 환자들은 상기 동일한 IL-7 치료로 (제 0 일에 제공) 바이러스를 소거했다.

도 2 는 IL-7 치료 후, 통상의 T 세포 다양성이 모든 환자들에서 복구되었고, 적어도 D56 까지 안정적이었음을 나타낸다.

결론:

PEG인터페론 및 리바비린으로의 표준 이원-치료에 대한 비반응자로서 정의된 만성 HCV 환자들에 있어서, IL-7 치료는 안전하고 CD4 및 CD8 T 세포 모두를 증량시키는데, 이는 효율적이고 안정적인 면역 반응을 제공하는 것으로 공지된 효과이다. IL-7 은 또한 림프 기관 내 T 세포 회귀 증가에 기여하고, 다양한 TCR 레파토리의 정상화에 기여한다. 이러한 효과는 표준 2원 치료 하에 바이러스량을 5 Log₁₀ IU/mL 미만으로 감소하는 환자에게 있어서 바이러스 소거와 체계적으로 연관있다.

SEQUENCE LISTING <110> Cytheris <120> HCV immunotherapy <130> B1220 <160> 1 <170> PatentIn version 3.1 <210> 1 <211> 152 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu 1 5 10 15 Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser 20 25 30 Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp 35 40 45 Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg 50 55 60 Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu 65 70 75 80 Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val 85 90 95 Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser 100 105 110 Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu 115 120 125 Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys 130 135 140 Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His 145 150

Claims (15)

1. C 형 간염 바이러스로 감염된 환자의 C 형 간염 치료에 사용되기 위한, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물과 병용되거나 또는 후속적인 인터류킨-7 (IL-7).
2. 제 1 항에 있어서, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물은 HCV 바이러스량을 5 Log₁₀ IU/mL 미만, 바람직하게 4 Log₁₀ IU/mL 미만, 더욱 바람직하게 3 Log₁₀ IU/mL 미만으로 감소시키는 치료적 유효량으로 존재하는 것인 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, IL-7 투여 전 바이러스량을 감소시키기 위해 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로 치료된 바 있는 환자에게 사용되기 위한 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7 로서, 바람직하게는 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물이 IL-7 로의 투여 이전에 바이러스량을 5 Log₁₀ IU/mL 미만, 바람직하게 4 Log₁₀ IU/mL 미만, 더욱 바람직하게 3 Log₁₀ IU/mL 미만으로 감소시키는 것인 IL-7.
4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 항바이러스제는 텔라프레비르 또는 보세프레비르 등의 프로테아제 저해제, 폴리머라아제 저해제, 바이러스 진입 저해제, 및 헬리카아제 저해제 또는 그 조합물로 이루어진 군으로부터 선택되고, 임의로는 인터페론 및/또는 리바비린과 조합되는 것인 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
5. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 항바이러스제는 인터페론 알파 또는 공통 인터페론 또는 인터페론 람다, 바람직하게 IFN알파-2a 또는 IFN알파-2b 등의 인터페론으로서, 단독으로, 또는 리바비린 등의 또 다른 항바이러스제와 조합되고, 이때 상기 인터페론은 바람직하게 PEG화 형태인 것인 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로의 치료는 IL-7 로의 치료와 동시에 시작되고, IL-7 로의 치료 적어도 일부 동안, 바람직하게는 6 내지 12 주 동안 유지되는 것인 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
7. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서, 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로의 치료는 IL-7 로의 치료 이전에 시작되고, IL-7 로의 치료 적어도 일부 동안, 바람직하게는 6 내지 12 주 동안 유지되는 것인 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
8. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, IL-7 은 1 주에 1 회, 임의로는 1 회 이상 반복되는 IL-7 치료 주기로 정의되는, 바람직하게 2 내지 6 주의 기간 동안, 바람직하게 4 주 동안 투여되는 것인 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, IL-7 은 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물과 별도로, 동시에 또는 연속적으로 투여되고, IL-7 치료는 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물의 투여 전, 바람직하게는 1 주 전에 시작되는 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
10. 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 바이러스량 감소를 위해 1 주간의 제 1 상 동안 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로 투여된 후, 4 주간의 제 2 상의 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물과 병용된 IL-7 이 투여되며, 이때 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물은 바람직하게 모든 치료 상들 동안 동일할 수 있는 것인 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
11. 제 10 항에 있어서, IL-7 의 투여 후 1 내지 9 주간의 제 3 상의 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물로의 치료가 뒤따르며, 이때 항바이러스제 또는 항바이러스제들의 조합물은 바람직하게 모든 치료 상들 동안 동일할 수 있는 것인 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 환자는 만성 C 형 간염 유전형 1 내지 6, 바람직하게 유전형 1 내지 4, 바람직하게 유전형 1 감염 환자인 것인 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
13. 제 1 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, HCV 바이러스 소거, 간 섬유증 및 간경화 발병의 방지 또는 지연, 및/또는 HCV 감염 재발 방지를 위한, C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, IL-7 은 융합 단백질 형태, 바람직하게 면역글로불린의 Fc 단편과 융합된 것인 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 있어서, IL-7 은 야생형 인간 IL-7 또는 그 변이체이고, 바람직하게는 하이퍼글리코실화 형태인 것인 C 형 간염 치료에 사용되기 위한 IL-7.
    
    
    

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