KR20220079541A - 종양에서 il-7 융합 단백질을 이용한 림프구 수치를 증가시키는 방법 - Google Patents
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Abstract
필요로 하는 대상체에서 림프구 수치를 증가시키는 방법으로서, (i) 다음 화학식 (I): A - IL-7의 변형된 인터루킨-7(interleukin-7), 여기서 A는 1 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드이고, 상기 IL-7은 IL-7 수용체에 결합할 수 있는 폴리펩타이드임; 또는 (ii) (a) 변형된 인터루킨-7, (b) 메티오닌, 글리신, 또는 이들의 조합으로 구성된 1 내지 10개의 아미노산 잔기를 갖는 올리고펩타이드를 포함하는 제2 도메인; 및 (c) 인터루킨-7 융합 단백질의 반감기를 연장하는 제3 도메인을 포함하는 인터루킨-7(interleukin-7) 융합 단백질을 대상체에게 투여하는 것을 포함함.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2019.9.4 자에 출원된 미국 가출원 제62/895,787호 및 2019.11.15 자에 출원된 미국 가출원 제62/935,828호의 우선권을 주장한다.
T 세포는 암 항원을 인식하고, 암세포를 파괴하며, 기억 세포로 분화 및 증식하여 암을 공격하는 면역반응에서 중추적인 역할을 한다. 따라서, T 세포 암 세포에서 발현되는 다양한 항원을 인식할 수 있는 인식의 다양성, 암 특이적 항원에 반응하는 T 세포 클론의 증폭, 암 조직에서의 기억 T 세포로의 분화 등은 항암 치료를 극대화할 수 있다. 또한, 표준 항암제로 사용되는 세포독성 화학요법과 방사선 요법은 혈액 내 골수 및 면역 세포를 파괴하여 항암 면역 기능에 필수적인 T 세포를 감소시켜 면역치료제의 항암 효과를 상쇄시킨다. 최근 보고에 따르면, 암 환자에서 T 세포의 결핍은 화학 요법에 대한 반응률 감소 및 환자 생존율 감소와 관련이 있다. 현재까지 IL-2(Aldesleukin®)는 T 세포의 증식 및 과기능을 유도하는 치료제로 승인된 유일한 사이토카인 치료제다. 그러나, IL-2 투여는 면역억제를 유도하는 조절 T 세포의 증식으로 인해 효능이 제한되고, 과도한 면역반응으로 인한 사이토카인 폭풍(cytokine storm) 및 모세혈관 누출 증후군(capillary leak syndrome)과 같은 심각한 부작용은 IL-2 투여의 실제 임상적 사용을 제한한다.
이에 반해, 인터루킨-7(IL-7)은 T 세포의 중요한 성장 및 활성화 인자이고, 항원 인식과 표적화에 관여하는 나이브 T 세포와 기억 T 세포의 분화, 증식 및 생존에 주로 관여하면서 암세포를 파괴한다. 이것은 효과 T 세포의 활성화를 억제하는 조절 T 세포의 증식을 유도하지 않는다. 또한, 체내에서 IL-7의 수치가 증가하면, T 세포의 증식이 일어나고, 증가된 T 세포에서 주로 발현되는 IL-7 수용체 (CD127)와의 결합을 통해 IL-7은 세포 내로 이동한다(트랜스사이토시스). 이것은 항상성을 유지하며 항상성 사이토카인으로 알려져 있다. 따라서, 다른 사이토카인 치료제의 임상 안전성에 큰 문제가 되었던 과도한 면역반응으로 인한 사이토카인 폭풍(cytokine storm)과 같은 심각한 면역 관련 부작용은 코드명 CYT107 하에 Cytheris의 재조합 인간 IL-7 (rhIL-7)을 사용한 이전 임상시험에서 보고된 바가 없다.
IL-7은 IL 7 유전자에 의해 암호화되고 IL-7 수용체 (CD127)에 결합한다. IL-7은 B 세포 및 T 세포에 의해 매개되는 면역반응을 촉진할 수 있는 면역자극성 사이토카인이다. IL-7은 적응 면역계에서 중요한 역할을 한다.
전체 내용이 본원에 참조로 포함되는 동시 계류 중인 출원(미국 출원 제15/126,313호)에서, 발현 및 반감기가 개선된 변형된 IL-7 단백질, 변형된 IL-7을 함유하는 융합 단백질, 및 이들의 제조방법이 제공된다.
본 발명은 변형된 IL-7 또는 변형된 IL-7을 포함하는 융합 단백질을 이용하여 림프구 수치를 증가시키는 방법을 제공한다.
일 구현예는 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 필요로 하는 대상체에서 림프구 수치를 증가시키는 방법을 제공한다.
필요로 하는 대상체는 암 또는 악성 종양을 앓고 있는 포유동물일 수 있다. 상기 암은 고형 종양일 수 있다. 일 구현예에서, 상기 고형 종양은 국소 진행성 또는 전이성 고형 종양 또는 교모세포종일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 대상체는 인간일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 대상체는 이전에 또는 동시에 암 치료를 받을 수 있다. 상기 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질은 별도로 투여되거나 다른 항암제(들)와 동시에 투여될 수 있다.
따라서, 본 개시내용의 다양한 관점은 다음의 구현예를 포함한다.
1. 필요로 하는 대상체에서 림프구 수치를 증가시키는 방법으로서,
(i) 하기 화학식 (I)의 변형된 인터루킨-7(interleukin-7):
A - IL-7 화학식 (I)
여기서 A는 1 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드이고,
상기 IL-7은 IL-7 수용체에 결합할 수 있는 폴리펩타이드임; 또는
(ii) 다음을 포함하는 인터루킨-7(interleukin-7) 융합 단백질
상기 화학식 (I)의 변형된 인터루킨-7을 포함하는 제1 도메인,
메티오닌, 글리신, 또는 이들의 조합으로 구성된 1 내지 10개의 아미노산 잔기를 갖는 올리고펩타이드를 포함하는 제2 도메인; 및
인터루킨-7 융합 단백질의 반감기를 연장하는 제3 도메인;
을 약 600 μg/kg 초과의 용량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함한다.
2. 상기 1의 방법에서, 상기 대상체는 암, 전염병, 심장 우심실의 만성 부전, 호지킨병 및 림프계 암, 백혈병, 흉관(thoracic duct)내 누출 또는 파열, 항암제(예: 화학 요법), 항바이러스제 및 글루코코르티코이드를 포함하는 처방 약물의 부작용, 저단백 식이 요법, 방사선 요법, 요독증, 자가면역 장애, 면역 결핍 증후군, 높은 스트레스 수준, 트라우마, 흉선절제술 또는 이들의 조합으로 인한 영양실조; 또는 특발성, 급성 방사선 증후군 (ARS) 또는 이들의 조합을 앓고 있다.
3. 상기 1 또는 2의 방법에서, 상기 IL-7은 서열번호 1 내지 6으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는다.
4. 상기 1-3 중 어느 하나의 방법에서, 상기 A는 상기 IL-7의 N-말단에 연결된다.
5. 상기 1-4 중 어느 하나의 방법에서, 상기 A는 메티오닌, 글리신, 메티오닌-메티오닌, 글리신-글리신, 메티오닌-글리신, 글리신-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-글리신, 메티오닌-글리신-메티오닌, 글리신-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-글리신-글리신, 글리신-메티오닌-글리신, 글리신-글리신-메티오닌, 글리신-글리신-글리신, MMMM, MGMM, MGGM, MGGG, MGMG, GMMM, GMGG, GGGG, MMMMM, MMGMM, MMGGM, MGMMG, MMMMG, GGGGG, GGMMM, GGGMG, MGMGMG, MMMGGG, MMGGMM, GGMMGG, MGMGMGMG, MMMMGGGG, MMGGMMGG, MMMMGGGG, MGMGMGMGMG, 또는 및 MMMMMGGGGG이다.
6. 상기 5의 방법에서, 상기 제3 도메인은 제1 도메인 또는 제2 도메인의 N-말단 또는 C-말단에 연결된다.
7. 상기 1-6 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제3 도메인은 면역글로불린의 Fc 영역 또는 그의 일부, 알부민, 알부민-결합 폴리펩타이드, Pro/Ala/Ser (PAS), 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 β 서브유닛의 C-말단 펩타이드 (CTP), 폴리에틸렌글리콜(PEG), 아미노산의 긴 구조화되지 않은 친수성 서열 (XTEN), 하이드록시에틸 전분 (HES), 알부민-결합 소분자, 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나이다.
8. 상기 1-7 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제3 도메인은 변형된 면역글로불린의 Fc 영역을 포함한다.
9. 상기 1-8 중 어느 하나의 방법에서, 상기 변형된 면역글로불린은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택된다.
10. 상기 1-9 중 어느 하나의 방법에서, 상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 N-말단에서 C-말단 방향으로 힌지 영역, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하고,
상기 힌지 영역은 인간 IgD 힌지 영역을 포함하며,
상기 CH2 도메인은 인간 IgD 및 인간 IgG4의 CH2 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함하고,
상기 CH3 도메인은 인간 IgG4 CH3 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함한다.
11. 상기 1-10 중 어느 하나의 방법에서, 상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 하기 화학식 (I)로 표시되고:
화학식 (I)
N'-(Z1)p-Y-Z2-Z3-Z4-C'
여기서 N'은 폴리펩타이드의 N-말단이고 C'는 폴리펩타이드의 C-말단이며;
p는 0 또는 1의 정수이고;
Z1은 서열번호 7의 90 내지 98 위치의 아미노산 잔기 중 98 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 9개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
Y는 서열번호 7의 99 내지 162 위치의 아미노산 잔기 중 162 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 64개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고;
Z2는 서열번호 7의 163 내지 199 위치의 아미노산 잔기 중 163 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 4 내지 37개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
Z3은 서열번호 8의 115 내지 220 위치의 아미노산 잔기 중 220 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 71 내지 106개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고; 및
Z4는 서열번호 8의 221 내지 327 위치의 아미노산 잔기 중 221 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 80 내지 107개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이다.
12. 상기 1-11 중 어느 하나의 방법에서, 상기 제3 도메인은 서열번호 9 내지 14로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는다.
13. 상기 2-12 중 어느 하나의 방법에서, 상기 암은 고형 종양, 림프계 암 또는 백혈병이다.
14. 상기 13의 방법에서, 상기 고형 종양은 활막 육종, 침윤성 관 암종(infiltrating duct carcinoma), 직장암, 결장암, 난소암, 상행 결장암, 항문암, 침윤성 유관암(invasive ductal carcinoma), 선암종(adenocarcinoma), 전이성 대동맥 주위의 직장암(rectal cancer with paraaortic in metastatis), 신경내분비암종(자궁경부), S상(sigmoid) 결장암 또는 교모세포종이다.
15. 상기 1-14 중 어느 하나의 방법에서, 상기 대상체는 수술, 방사선 및/또는 화학 요법을 포함하는 암 치료 중 하나 이상을 이전에 받았거나, 동시에 받는다.
16. 상기 1-15 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 600 μg/kg 초과 내지 약 2,000 μg/kg 범위의 용량으로 투여된다.
17. 상기 1-16 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 720 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 1,200 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg의 용량으로 투여된다.
18. 상기 1-16 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 720 μg/kg 이상, 약 840 μg/kg, 또는 약 1,440 μg/kg 이상의 용량으로 투여된다.
19. 상기 1-16 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 720 μg/kg 이상, 840 μg/kg 이상, 960 μg/kg 이상, 1,200 μg/kg 이상, 1,440 μg/kg 이상, 1,700 μg/kg 이상, 또는 2,000 μg/kg의 용량으로 투여된다.
20. 상기 1-19 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 또는 12주의 간격으로 2회 이상 투여된다.
21. 상기 1-19 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 10일, 20일, 30일, 40일, 50일, 60일, 70일, 80일, 90일, 또는 100일의 간격으로 2회 이상 투여된다.
22. 상기 1-21 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 삽입구적(parenthetically), 근육내, 피하, 안구, 정맥내, 복강내, 피내, 안와내, 대뇌내, 두개내, 척수내, 심실내, 척추강내, 수조내(intracistemally), 피막내, 또는 종양내로 투여된다.
23. 상기 1-22 중 어느 하나의 방법에서, 상기 방법은 (ii) 인터류킨-7 융합 단백질을 투여하는 것을 포함한다.
24. 상기 1-23 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7은 서열번호 18의 아미노산 서열을 갖고, 상기 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함한다.
25. 상기 1-24 중 어느 하나의 방법에서, 상기 대상체는 이상반응 공통 용어 기준 (Common Terminology Criteria for Adverse Events, CTCAE) 4.0 버전에 따라 결정될 때, 1000개 림프구 세포/혈액 및/또는 혈청 μl 이하의 림프구 수치를 갖는다.
26. 상기 1-25 중 어느 하나의 방법에서, 상기 림프구는 T 세포이다.
27. 상기 1-26 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 1주, 약 2주, 약 3주, 또는 약 4주의 간격으로 약 720 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여된다.
28. 상기 1-26 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 2주, 약 3주, 약 4주, 또는 약 5주의 간격으로 약 840 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여된다.
29. 상기 1-26 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 또는 약 6주의 간격으로 약 960 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여된다.
30. 상기 1-26 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 또는 약 8주의 간격으로 약 1200 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여된다.
31. 상기 1-26 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 10주, 또는 약 12주, 또는 약 2개월 또는 3개월의 간격으로 약 1440 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여된다.
32. 상기 1-26 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 600 μg/kg 초과, 약 700 μg/kg 초과, 약 800 μg/kg 초과, 약 900 μg/kg 초과, 약 1,000 μg/kg 초과, 약 1,100 μg/kg 초과, 약 1,200 μg/kg 초과, 약 1,300 μg/kg 초과, 약 1,400 μg/kg 초과, 약 1,500 μg/kg 초과, 약 1,600 μg/kg 초과, 약 1,700 μg/kg 초과, 약 1,800 μg/kg 초과, 약 1,900 μg/kg 초과, 또는 약 2,000 μg/kg의 용량으로 투여된다.
33. 상기 1-26 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 610 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 650 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 800 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 850 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 900 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 950 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,000 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,050 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,100 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,200 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 1,300 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 1,500 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 1,700 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 610 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 650 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 800 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 850 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 900 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 또는 약 950 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg의 용량으로 투여된다.
34. 상기 1-26 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 700 μg/kg 내지 약 900 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 950 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 850 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 850 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 800 μg/kg, 약 800 μg/kg 내지 약 900 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 850 μg/kg, 또는 약 850 μg/kg 내지 약 950 μg/kg의 용량으로 투여된다.
35. 상기 1-26 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 650 μg/kg, 약 680 μg/kg, 약 700 μg/kg, 약 720 μg/kg, 약 740 μg/kg, 약 750 μg/kg, 약 760 μg/kg, 약 780 μg/kg, 약 800 μg/kg, 약 820 μg/kg, 약 840 μg/kg, 약 850 μg/kg, 약 860 μg/kg, 약 880 μg/kg, 약 900 μg/kg, 약 920 μg/kg, 약 940 μg/kg, 약 950 μg/kg, 약 960 μg/kg, 약 980 μg/kg, 약 1,000 μg/kg, 약 1,020 μg/kg, 약 1,040 μg/kg, 약 1,060 μg/kg, 약 1,080 μg/kg, 약 1,100 μg/kg, 약 1,120 μg/kg, 약 1,140 μg/kg, 약 1,160 μg/kg, 약 1,180 μg/kg, 약 1,200 μg/kg, 약 1,220 μg/kg, 약 1,240 μg/kg, 약 1,260 μg/kg, 약 1,280 μg/kg, 약 1,300 μg/kg, 약 1,320 μg/kg, 약 1,340 μg/kg, 약 1,360 μg/kg, 약 1,380 μg/kg, 약 1,400 μg/kg, 약 1,420 μg/kg, 약 1,440 μg/kg, 약 1,460 μg/kg, 약 1,480 μg/kg, 약 1,500 μg/kg, 약 1,520 μg/kg, 약 1,540 μg/kg, 약 1,560 μg/kg, 약 1,580 μg/kg, 약 1,600 μg/kg, 약 1,620 μg/kg, 약 1,640 μg/kg, 약 1,660 μg/kg, 약 1,680 μg/kg, 약 1,700 μg/kg, 약 1,720 μg/kg, 약 1,740 μg/kg, 약 1,760 μg/kg, 약 1,780 μg/kg, 약 1,800 μg/kg, 약 1,820 μg/kg, 약 1,840 μg/kg, 약 1,860 μg/kg, 약 1,880 μg/kg, 약 1,900 μg/kg, 약 1,920 μg/kg, 약 1,940 μg/kg, 약 1,960 μg/kg, 약 1,980 μg/kg, 또는 약 2,000 μg/kg의 용량으로 투여된다.
36. 상기 32-35 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 1주에 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 8주에 1회, 9주에 1회, 10주에 1회, 11주에 1회, 12주에 1회, 13주에 1회, 14주에 1회, 또는 15주에 1회의 투약 빈도로 투여된다.
37. 상기 26의 방법에서, 상기 T 세포는 CD4+ T 세포 및/또는 CD8+ T 세포이다.
38. 상기 26의 방법에서, 상기 T 세포는 CD4+/CD8+ T 세포이다.
39. 상기 1-38 중 어느 하나의 방법에서, 상기 대상체는 800개 림프구 세포/혈액 μl 이하의 림프구 수치를 갖는다.
40. 상기 1-39 중 어느 하나의 방법에서, 상기 대상체는 500개 림프구 세포/혈액 μl 이하의 림프구 수치를 갖는다.
41. 상기 1-40 중 어느 하나의 방법에서, 상기 대상체는 200개 림프구 세포/혈액 μl 이하의 림프구 수치를 갖는다.
42. 상기 15-41 중 어느 하나의 방법에서, 상기 대상체는 항암제를 동시에 투여받는다.
43. 상기 42의 방법에서, 상기 항암제는 항암 화합물이다.
44. 상기 1-43 중 어느 하나의 방법에서, 종양내 종양 침윤 림프구 (TILs)의 수는 투여 전 종양내 TILs의 수와 비교하여 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질의 투여 후에 증가된다.
45. 상기 1-43 중 어느 하나의 방법에서, 상기 TILs는 CD4+ TILs이다.
46. 상기 1-43 중 어느 하나의 방법에서, 상기 TILs는 CD8+ TILs 이다.
47. 상기 44-46 중 어느 하나의 방법에서, 상기 TILs의 수는 투여 후 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 125%, 적어도 약 150%, 적어도 약 200%, 적어도 약 250%, 또는 적어도 약 300% 증가된다.
48. 상기 1-26 중 어느 하나의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 650 μg/kg - 680 μg/kg, 약 680 μg/kg - 700 μg/kg, 약 700 μg/kg - 720 μg/kg, 약 720 μg/kg - 740 μg/kg, 약 740 μg/kg - 750 μg/kg, 약 750 μg/kg - 760 μg/kg, 약 760 μg/kg - 780 μg/kg, 약 780 μg/kg - 800 μg/kg, 약 800 μg/kg - 820 μg/kg, 약 820 μg/kg - 840 μg/kg, 약 840 μg/kg - 850 μg/kg, 약 850 μg/kg - 860 μg/kg, 약 860 μg/kg - 880 μg/kg, 약 880 μg/kg - 900 μg/kg, 약 900 μg/kg - 920 μg/kg, 약 920 μg/kg - 940 μg/kg, 약 940 μg/kg - 950 μg/kg, 약 950 μg/kg - 960 μg/kg, 약 960 μg/kg - 980 μg/kg, 약 980 μg/kg - 1000 μg/kg, 약 1,000 μg/kg - 1,020 μg/kg, 약 1,020 μg/kg - 1,040 μg/kg, 약 1,040 μg/kg - 1,060 μg/kg, 약 1,060 μg/kg - 1,080 μg/kg, 약 1,080 μg/kg - 1,100 μg/kg, 약 1,100 μg/kg - 1,120 μg/kg, 약 1,120 μg/kg - 1,140 μg/kg, 약 1,140 μg/kg - 1,160 μg/kg, 약 1,160 μg/kg - 1,180 μg/kg, 약 1,180 μg/kg - 1,200 μg/kg, 약 1,200 μg/kg - 1,220 μg/kg, 약 1,220 μg/kg - 1,240 μg/kg, 약 1,240 μg/kg - 1,260 μg/kg, 약 1,260 μg/kg - 1,280 μg/kg, 약 1,280 μg/kg - 1,300 μg/kg, 약 1,300 μg/kg - 1,320 μg/kg, 약 1,320 μg/kg - 1,340 μg/kg, 약 1,340 μg/kg - 1,360 μg/kg, 약 1,360 μg/kg - 1,380 μg/kg, 약 1,380 μg/kg - 1,400 μg/kg, 약 1,400 μg/kg - 1,420 μg/kg, 약 1,420 μg/kg - 1,440 μg/kg, 약 1,440 μg/kg - 1,460 μg/kg, 약 1,480 μg/kg, 약 1,480 μg/kg - 1,500 μg/kg, 약 1,500 μg/kg - 1,520 μg/kg, 약 1,520 μg/kg - 1,540 μg/kg, 약 1,540 μg/kg - 1,560 μg/kg, 약 1,560 μg/kg - 1,580 μg/kg, 약 1,580 μg/kg - 1,600 μg/kg, 약 1,600 μg/kg - 1,620 μg/kg, 약 1,620 μg/kg - 1,640 μg/kg, 약 1,640 μg/kg - 1,660 μg/kg, 약 1,660 μg/kg - 1,680 μg/kg, 약 1,680 μg/kg - 1,700 μg/kg, 약 1,700 μg/kg - 1,720 μg/kg, 약 1,720 μg/kg - 1,740 μg/kg, 약 1,740 μg/kg - 1,760 μg/kg, 약 1,760 μg/kg - 1,780 μg/kg, 약 1,780 μg/kg - 1,800 μg/kg, 약 1,800 μg/kg - 1,820 μg/kg, 약 1,820 μg/kg - 1,840 μg/kg, 약 1,840 μg/kg - 1,860 μg/kg, 약 1,860 μg/kg - 1,880 μg/kg, 약 1,880 μg/kg - 1,900 μg/kg, 약 1,900 μg/kg - 1,920 μg/kg, 약 1,920 μg/kg - 1,940 μg/kg, 약 1,940 μg/kg - 1,960 μg/kg, 약 1,960 μg/kg - 1,980 μg/kg, 또는 약 1,980 μg/kg - 2,000 μg/kg의 용량으로 투여된다.
49. 상기 48의 방법에서, 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주, 또는 약 15주의 간격으로 상기 용량으로 2회, 3회, 4회 또는 5회 투여된다.
도 1A, 1B 및 1C는 각각 랫트(rats)에서 IV, SC 및 IM 경로에 의한 약동학적 프로파일을 나타낸다.
도 2A 및 2B는 선형 스케일 및 로그 스케일로 나타낸 용량별 GX-I7 농도-시간 프로파일을 나타낸다.
도 3A 및 3B는 각각 혈청 노출(Cmax and AUClast) 대 용량 상관관계를 나타낸다.
도 4A 및 4B는 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹에서 기준선 값과 비교한 절대 림프구 수치 (ALC)의 변화를 나타낸다. 도 4A는 고형암 환자군의 결과를 나타내고, 도 4B는 교모세포종 환자군의 결과를 나타낸다.
도 5A 및 5B는 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹에서 기준선과 비교하여 CD3+ 수의 변화를 나타낸다. 도 5A는 고형암 환자군의 결과를 나타내고, 도 5B는 교모세포종 환자군의 결과를 나타낸다.
도 6A 및 6B는 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹에서 기준선 값과 비교한 CD4+ 수의 변화를 나타낸다. 도 6A는 고형암 환자군의 결과를 나타내고, 도 6B는 교모세포종 환자군의 결과를 나타낸다.
도 7A 및 7B는 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹에서 기준선 값과 비교한 CD8+ 수의 변화를 나타낸다. 도 7A는 고형암 환자군의 결과를 나타내고, 도 7B는 교모세포종 환자군의 결과를 나타낸다.
도 8A 및 8B는 각각 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹으로 나뉘어진 비-림프구감소증 고형암 환자군 (기준선 ALC ≥1,000 cells/mm3) 및 림프구감소증 고형암 환자군 (기준선 ALC <1,000 cells/mm3)에서 절대 림프구 수치 (ALC)의 변화를 나타낸다. Wilcoxon matched-pairs signed rank test에 의한 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 대 기준선 (0주) 그룹.
도 9A 및 9B는 각각 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹으로 나뉘어진 비-림프구감소증 교모세포종 환자군 (기준선 ALC ≥1,000 cells/mm3) 및 림프구감소증 고형암 환자군 (기준선 ALC <1,000 cells/mm3)에서 절대 림프구 수치 (ALC)의 변화를 나타낸다. Wilcoxon matched-pairs signed rank test에 의한 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 대 기준선 (0주) 그룹.
도 10A, 10B 및 10C는 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹에서 IL-7 융합 단백질 투여 후 CD4+ 및 CD8+ 세포 내 각각 Ki67, CD127 및 Treg 비율의 변화를 나타낸다. NS: 유의하지 않음, Wilcoxon matched-pairs signed rank test에 의한 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 대 기준선 (0주) 그룹.
도 11은 원숭이 모델에서 혈액 샘플링의 타임라인의 도해이다.
도 12A 및 12B는 실험된 원숭이의 혈액 샘플에서 CD8+ 및 CD4+ 세포 내 각각 Ki67의 발현 패턴을 나타낸다.
도 13A 및 13B는 저용량(120μg/kg) 그룹(도 13A), 중간 용량(360-600μg/kg) 및 고용량(840-1,440μg/kg) 그룹(도 13B)에서 0시간(0주)부터 15주까지의 시간에 따른 다중 투여에 의한 기준선 값과 비교한 절대 림프구 수치 (ALC)의 변화를 나타낸다.
도 14A, 14B 및 14C는 각각 TMZ (Temozolomide 150mg/m2), Avastin/Irinotecan (A; Avastin 10mg/kg, I; Irinotecan 100mg/m2), 및 PCV (PCV; CCNU 240mg, Vincristine 2mg, Procarbazine 150mg&100mg, Vincristine 2mg)를 이용한 화학 요법 중인 교모세포종 환자에서 8주 이상의 간격으로 IL-7 융합 단백질의 다중 투여에 의한 기준선 값(0주)과 비교한 절대 림프구 수치 (ALC)의 변화를 나타낸다.
도 15A 및 15B는 IL-7 융합 단백질 투여 후 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 서브세트의 변화, 및 케모카인 수용체 CCR 및 기타 면역 세포 (B 세포 및 NK 세포)의 변화를 나타낸다. NS: 유의하지 않음, Wilcoxon matched-pairs signed rank test에 의한 p>0.05, *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 대 기준선 (0주) 그룹.
도 2A 및 2B는 선형 스케일 및 로그 스케일로 나타낸 용량별 GX-I7 농도-시간 프로파일을 나타낸다.
도 3A 및 3B는 각각 혈청 노출(Cmax and AUClast) 대 용량 상관관계를 나타낸다.
도 4A 및 4B는 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹에서 기준선 값과 비교한 절대 림프구 수치 (ALC)의 변화를 나타낸다. 도 4A는 고형암 환자군의 결과를 나타내고, 도 4B는 교모세포종 환자군의 결과를 나타낸다.
도 5A 및 5B는 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹에서 기준선과 비교하여 CD3+ 수의 변화를 나타낸다. 도 5A는 고형암 환자군의 결과를 나타내고, 도 5B는 교모세포종 환자군의 결과를 나타낸다.
도 6A 및 6B는 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹에서 기준선 값과 비교한 CD4+ 수의 변화를 나타낸다. 도 6A는 고형암 환자군의 결과를 나타내고, 도 6B는 교모세포종 환자군의 결과를 나타낸다.
도 7A 및 7B는 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹에서 기준선 값과 비교한 CD8+ 수의 변화를 나타낸다. 도 7A는 고형암 환자군의 결과를 나타내고, 도 7B는 교모세포종 환자군의 결과를 나타낸다.
도 8A 및 8B는 각각 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹으로 나뉘어진 비-림프구감소증 고형암 환자군 (기준선 ALC ≥1,000 cells/mm3) 및 림프구감소증 고형암 환자군 (기준선 ALC <1,000 cells/mm3)에서 절대 림프구 수치 (ALC)의 변화를 나타낸다. Wilcoxon matched-pairs signed rank test에 의한 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 대 기준선 (0주) 그룹.
도 9A 및 9B는 각각 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹으로 나뉘어진 비-림프구감소증 교모세포종 환자군 (기준선 ALC ≥1,000 cells/mm3) 및 림프구감소증 고형암 환자군 (기준선 ALC <1,000 cells/mm3)에서 절대 림프구 수치 (ALC)의 변화를 나타낸다. Wilcoxon matched-pairs signed rank test에 의한 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 대 기준선 (0주) 그룹.
도 10A, 10B 및 10C는 저용량(60-120μg/kg), 중간 용량(240-480μg/kg) 및 고용량(720-1,200μg/kg) 그룹에서 IL-7 융합 단백질 투여 후 CD4+ 및 CD8+ 세포 내 각각 Ki67, CD127 및 Treg 비율의 변화를 나타낸다. NS: 유의하지 않음, Wilcoxon matched-pairs signed rank test에 의한 *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 대 기준선 (0주) 그룹.
도 11은 원숭이 모델에서 혈액 샘플링의 타임라인의 도해이다.
도 12A 및 12B는 실험된 원숭이의 혈액 샘플에서 CD8+ 및 CD4+ 세포 내 각각 Ki67의 발현 패턴을 나타낸다.
도 13A 및 13B는 저용량(120μg/kg) 그룹(도 13A), 중간 용량(360-600μg/kg) 및 고용량(840-1,440μg/kg) 그룹(도 13B)에서 0시간(0주)부터 15주까지의 시간에 따른 다중 투여에 의한 기준선 값과 비교한 절대 림프구 수치 (ALC)의 변화를 나타낸다.
도 14A, 14B 및 14C는 각각 TMZ (Temozolomide 150mg/m2), Avastin/Irinotecan (A; Avastin 10mg/kg, I; Irinotecan 100mg/m2), 및 PCV (PCV; CCNU 240mg, Vincristine 2mg, Procarbazine 150mg&100mg, Vincristine 2mg)를 이용한 화학 요법 중인 교모세포종 환자에서 8주 이상의 간격으로 IL-7 융합 단백질의 다중 투여에 의한 기준선 값(0주)과 비교한 절대 림프구 수치 (ALC)의 변화를 나타낸다.
도 15A 및 15B는 IL-7 융합 단백질 투여 후 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 서브세트의 변화, 및 케모카인 수용체 CCR 및 기타 면역 세포 (B 세포 및 NK 세포)의 변화를 나타낸다. NS: 유의하지 않음, Wilcoxon matched-pairs signed rank test에 의한 p>0.05, *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001 대 기준선 (0주) 그룹.
구현예
정의
달리 언급되지 않거나 문맥에서 암시되지 않는 한, 다음 용어 및 구문은 하기 제공된 의미를 포함한다. 달리 명시적으로 언급되지 않거나 문맥상 명백하지 않는 한, 하기 용어 및 문구는 해당 용어 또는 문구가 관련된 기술 분야에서 획득한 의미를 배제하지 않는다. 정의는 특정 구현예를 설명하는 데 도움을 주기 위해 제공되며, 본원에 제공된 관점의 범위는 청구범위에 의해서만 제한되기 때문에 본원에 제공된 관점을 제한하도록 의도되지 않는다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본원에 제공된 관점이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
용어 "약학 조성물(pharmaceutical composition)"은 포유동물에 영향을 미치는 특정 질병 또는 질환을 예방 또는 치료하기 위해 포유동물에 투여될 적어도 하나의 치료제를 함유하는 혼합물 또는 용액을 의미하는 것으로 본원에서 정의된다. 일 구현예에서, 포유동물은 인간일 수 있다.
용어 "약학적으로 허용 가능한(pharmaceutically acceptable)"은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 과도한 독성, 자극 알레르기 반응 및 기타 문제 합병증 없이 인간 환자의 조직과의 접촉에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 의미하는 것으로 본원에서 정의된다.
본원에 사용된 용어 "치료하는(treating)" 또는 "치료(treatment)"는 인간 환자에서 적어도 하나의 증상을 줄임(relieving), 감소, 낮춤(reducing) 또는 완화(alleviating)시키거나 질병의 진행을 지연시키는 치료를 포함한다. 예를 들어, 치료는 장애의 하나 또는 여러 증상의 감소 또는 암과 같은 장애의 완전한 근절일 수 있다. 본 개시내용의 의미 내에서, 용어 "치료하다(treat)"는 또한 정지, 발병 지연(즉, 질병의 임상적 징후 이전의 기간) 및/또는 질병의 발달 또는 악화의 위험을 감소시키는 것을 의미한다. 본원에서 용어 "보호하다(protect)"는 대상체에서 질병의 발달 또는 지속 또는 악화를 예방, 지연 또는 치료하거나 적절하다면 모두를 의미하는 것으로 사용된다.
본원에 사용된 용어 "예방하다(prevent)", "예방하는(preventing)" 또는 "예방(prevention)"은 예방되는 상태, 질병 또는 장애와 관련되거나 이에 의해 야기되는 적어도 하나의 증상의 예방을 포함한다.
치료제 조합의 용어 "약학적 유효량(pharmaceutically effective amount)" 또는 "임상적 유효량(clinically effective amount)"은 조합으로 치료되는 장애의 기본적인 임상적으로 관찰가능한 징후 및 증상에 대해 관찰가능한 개선을 제공하기에 충분한 양이다.
본원에 사용된 문구 "이러한 치료가 필요한 인간 환자(a human patient in need of such treatment)"는 확인된 증식성 질병으로 진단되거나 이를 앓고 있는 인간 환자를 의미한다.
용어 "약(about)" 또는 "대략(approximately)"은 주어진 값 또는 범위의 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 또는 5% 이내의 의미를 갖는다.
용어 "감소된(decreased)" 또는 "감소하다(decrease)"는 일반적으로 통계적으로 유의한 양만큼 감소를 의미하는 것으로 본원에서 사용된다. 일부 구현예에서, "감소된(decreased)" 또는 "감소하다(decrease)"는 기준 수준과 비교하여 적어도 10% 감소, 예를 들어 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40% 감소 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지의 감소 및 100% 감소를 포함하는 감소 (예를 들어, 기준 수준과 비교하여 부재의 수준 또는 감지할 수 없는 수준), 또는 기준 수준과 비교하여 10-100% 사이의 임의의 감소를 의미한다. 마커 또는 증상과 관련하여 이러한 용어는 이러한 수준의 통계적으로 유의한 감소를 의미한다. 감소는 예를 들어, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 그 이상일 수 있고, 바람직하게는 주어진 질병이 없는 개체에 대해 정상 범위 내로 허용되는 수준까지 내려간다.
변형된 IL-7
구현예에서 사용될 수 있는 변형된 IL-7은 다음 구조를 가질 수 있다:
A - IL-7 formula (I)
상기 A는 1 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드고, IL-7은 인터루킨 7, IL-7 수용체에 결합할 수 있는 폴리펩타이드(CD127로도 알려짐), 또는 IL-7의 활성 또는 이와 유사한 활성을 갖는 폴리펩타이드다.
본원에 사용된 용어 "IL-7의 활성 또는 이와 유사한 활성을 갖는 폴리펩타이드(a polypeptide having the activity of IL-7 or a similar activity thereof)"는 IL-7과 동일하거나 유사한 서열 및 활성을 갖는 폴리펩타이드 또는 단백질을 의미한다. 다른 구현예에서 달리 명시되지 않는 한, 상기 용어는 본원에서 상호교환 가능하게 사용되는 IL-7 융합 단백질 또는 변형된 IL-7 융합 단백질의 제1 도메인과 상호교환 가능한 개념으로 사용될 수 있다.
IL-7은 서열번호 1 내지 6으로 표시되는 아미노산 서열로 구성된 폴리펩타이드를 포함한다. 또한, IL-7은 서열번호 1 내지 6의 서열에 대해 약 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 가질 수 있다. 펩타이드 서열의 서열 동일성은 공지된 서열 정렬 또는 비교 소프트웨어를 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 서열 동일성은 기본 설정으로 BLASTP 프로그램(blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PAGE=Proteins)을 사용하여 결정될 수 있다.
IL-7은 IL-7 단백질 또는 이의 단편을 포함할 수 있으며, 상기 단편은 IL-7 수용체에 결합할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "IL-7 단백질(IL-7 protein)"은 "IL-7 수용체에 결합할 수 있는 IL-7 단백질 및 이의 단편"을 포함하는 개념으로 사용될 수 있다. IL-7은 인간, 랫트(rats), 마우스(mice), 원숭이, 소 또는 양에서 얻은 것일 수 있다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "단백질(protein)", "폴리펩타이드(polypeptide)" 및 "펩타이드(peptide)"는 상호교환 가능한 개념으로 사용될 수 있다.
구체적으로, 인간 IL-7은 서열번호 1(Genbank Accession No. P13232)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고; 랫트 IL-7은 서열번호 2(Genbank Accession No. P56478)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고; 마우스 IL-7은 서열번호 3(Genbank Accession No. P10168)으로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고; 원숭이 IL-7은 서열번호 4(Genbank Accession No. NP_001279008)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고; 소 IL-7은 서열번호 5(Genbank Accession No. P26895)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고, 양 IL-7은 서열번호 6(Genbank Accession No. Q28540)으로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
또한, IL-7 단백질 또는 이의 단편은 다양하게 변형된 단백질 또는 펩타이드, 즉 변이체를 포함할 수 있다. 상기 변형은 IL-7의 기능을 변형시키지 않고, 야생형 IL-7에 하나 이상의 단백질을 치환, 결실 또는 첨가하는 방법으로 수행될 수 있다. 이들 다양한 단백질 또는 펩타이드는 야생형 단백질에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 가질 수 있다.
통상적으로, 야생형 아미노산 잔기는 알라닌으로 치환되지만, 치환은 전체 단백질 전하, 즉 극성 또는 소수성에 영향을 미치지 않거나 약한 영향을 주는 보존적 아미노산 치환으로 수행될 수 있다.
보존적 아미노산 치환은 하기 표 1을 참조할 수 있다.
| 염기성(Basic) | 아르기닌 (Arg, R) 리신 (Lys, K) 히스티딘 (His, H) |
| 산성(Acidic) | 글루탐산 (Glu, E) 아스파르트산 (Asp, D) |
| 비전하성 극성(Uncharged polar) | 글루타민 (Gln, O) 아스파라긴 (Asn, N) 세린 (Ser, S) 트레오닌 (Thr, T) 티로신 (Tyr, Y) |
| 비극성(Non-polar) | 페닐알라닌 (Phe, F) 트립토판 (Trp, W) 시스테인 (Cys, C) 글리신 (Gly, G) 알라닌 (Ala, A) 발란 (Val, V) 프롤린 (Pro, P) 메티오닌 (Met, M) 루신 (Leu, L) 노르루신 (Norleucine) 이소루신 (Isoleucine) |
각각의 아미노산에 대해, 추가적인 보존적 치환은 아미노산의 "상동체(homolog)"를 포함한다. 특히, "상동체"는 아미노산 측쇄의 베타 위치 측쇄에 메틸렌기(CH2)가 삽입된 아미노산을 의미한다. "동족체"의 예는 호모페닐알라닌, 호모아르기닌, 호모세린 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
A-IL-7의 변형된 IL-7의 구조에서, A 잔기는 IL-7의 N-말단에 직접 연결되거나 링커를 통해 연결될 수 있으며, 달리 명시되지 않는 한 상기 용어는 IL-7 융합 단백질의 제2 도메인과 상호교환 가능한 개념으로 사용될 수 있다.
일 구현예에서, A는 IL-7의 N-말단에 연결될 수 있다. A는 1 내지 10개의 아미노산을 포함하는 것을 특징으로 하며, 상기 아미노산은 메티오닌, 글리신 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 일 구현예에서, A가 단일 아미노산 잔기인 경우, 이는 글리신이다.
메티오닌과 글리신은 인체에서 면역반응을 유도하지 않는다. 대장균에서 생산된 단백질 치료제는 항상 N-말단에 메티오닌을 포함하지만 이상반응은 보고된 바 없다. 또한, 글리신은 GS 링커로서 널리 사용되며, 둘라글루타이드(Dulaglutide)와 같이 상업용 제품에서 면역반응을 유도하지 않는 것으로 보고되어 있다(Cell Biophys. 1993 Jan-Jun; 22(103):189-224).
일 예시적인 구현예에서, A는 메티오닌(Met, M), 글리신(Gly, G) 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 1 내지 10개의 아미노산을 포함하는 올리고펩타이드일 수 있다. 일 구현예에서, A는 1 내지 5개의 아미노산으로 구성된 올리고펩타이드일 수 있다. 예를 들어, A는 메티오닌(M), 글리신(G), 메티오닌-메티오닌, 글리신-글리신, 메티오닌-글리신, 글리신-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-글리신, 메티오닌-글리신-메티오닌, 글리신-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-글리신-글리신, 글리신-메티오닌-글리신, 글리신-글리신-메티오닌, 글리신-글리신-글리신, MMMM, MGMM, MGGM, MGGG, MGMG, GMMM, GMGG, GGGG, MMMMM, MMGMM, MMGGM, MGMMG, MMMMG, GGGGG, GGMMM, GGGMG, MGMGMG, MMMGGG, MMGGMM, GGMMGG, MGMGMGMG, MMMMGGGG, MMGGMMGG, MMMMGGGG, MGMGMGMGMG, 또는 및 MMMMMGGGGGG으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나의 N-말단 서열을 가질 수 있다. 일 구현예에서, A는 메티오닌, 글리신, 메티오닌-메티오닌, 글리신-글리신, 메티오닌-글리신, 글리신-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-글리신, 메티오닌-글리신-메티오닌, 글리신-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-글리신-글리신, 글리신-메티오닌-글리신, 글리신-글리신-메티오닌, 또는 글리신-글리신-글리신일 수 있다.
변형된 IL-7의 융합 단백질 또는 변형된 IL-7 융합 단백질
또 다른 관점은 IL-7 융합 단백질을 제공하며, 이는 IL-7의 활성 또는 그의 유사한 활성을 갖는 폴리펩타이드를 포함하는 제1 도메인; 메티오닌, 글리신 또는 이들의 조합으로 구성된 1 내지 10개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 제2 도메인; 및 IL-7 융합 단백질의 반감기를 연장하는 제3 도메인을 포함한다.
제3 도메인은 제1 도메인 또는 제2 도메인의 N-말단 또는 C-말단에 연결될 수 있다. 또한, 제1 도메인 및 제2 도메인을 포함하는 변형된 IL-7은 제3 도메인의 양 말단에 연결될 수 있다.
제3 도메인은 생체 내 반감기를 증가시키기 위한 융합 파트너일 수 있으며, 바람직하게는 면역글로불린의 Fc 영역 또는 그의 일부, 알부민, 알부민-결합 폴리펩타이드, Pro/Ala/Ser (PAS), 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 β 서브유닛의 C-말단 펩타이드 (CTP), 폴리에틸렌글리콜(PEG), 아미노산의 긴 구조화되지 않은 친수성 서열 (XTEN), 하이드록시에틸 전분 (HES), 알부민-결합 소분자, 및 이들의 조합을 포함한다.
제3 도메인이 면역글로불린의 Fc 영역인 경우, 이는 변형된 면역글로불린의 Fc 영역일 수 있다. 특히, 상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 Fc 수용체 및/또는 보체와의 결합 친화도의 변형으로 인해 항체의존세포독성(ADCC) 또는 보체의존세포독성(CDC)이 약화된 것일 수 있다. 변형된 면역글로불린은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 구체적으로, 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 N-말단에서 C-말단까지 힌지 영역, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 특히, 힌지 영역은 인간 IgD 힌지 영역을 포함할 수 있고; CH2 도메인은 인간 IgD의 아미노산 잔기의 일부 및 인간 IgG4 CH2 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함할 수 있고; CH3 도메인은 인간 IgG4 CH3 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함할 수 있다.
또한, 2개의 융합 단백질은 이량체를 형성할 수 있으며, 예를 들어 제3 도메인이 Fc 영역인 경우 Fc 영역은 서로 결합하여 이량체를 형성할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "Fc 영역(Fc region)", "Fc 단편(Fc fragment)", 또는 "Fc"는 면역글로불린의 중쇄 불변 영역 2(CH2) 및 중쇄 불변 영역 3(CH3)을 포함하지만, 중쇄 및 경쇄의 가변영역 및 경쇄 불변영역 (CL1)은 포함하지 않는 단백질을 의미하고, 중쇄 불변영역의 힌지 영역을 추가로 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 하이브리드 Fc 또는 그의 하이브리드 Fc 단편은 "hFc" 또는 "hyFc"로 명명될 수 있다.
또한, 본원에 사용된 용어 "Fc 영역 변이체(Fc region variant)"는 Fc 영역 중 아미노산의 일부를 치환하거나 이종 Fc 영역을 조합하여 제조된 것을 의미한다. Fc 영역 변이체는 힌지 영역에서 절단되는 것을 방지할 수 있다. 구체적으로, 서열번호 9의 144번째 아미노산 및/또는 145번째 아미노산이 변형될 수 있다. 바람직하게는 변이체는 144번째 아미노산 K가 G 또는 S로 치환된 것 및 145번째 아미노산 E가 G 또는 S로 치환된 것일 수 있다.
또한, 변형된 면역글로불린의 Fc 영역 또는 Fc 영역 변이체는 하기 화학식 (I)로 표시될 수 있다:
화학식 (I)
N'-(Z1)p-Y-Z2-Z3-Z4-C'.
상기 화학식 (I)에서,
N'은 폴리펩타이드의 N-말단이고 C'는 폴리펩타이드의 C-말단이며;
p는 0 또는 1의 정수이고;
Z1은 서열번호 7의 90 내지 98 위치의 아미노산 잔기 중 98 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 9개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
Y는 서열번호 7의 99 내지 162 위치의 아미노산 잔기 중 162 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 64개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고;
Z2는 서열번호 7의 163 내지 199 위치의 아미노산 잔기 중 163 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 4 내지 37개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
Z3은 서열번호 8의 115 내지 220 위치의 아미노산 잔기 중 220 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 71 내지 106개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고; 및
Z4는 서열번호 8의 221 내지 327 위치의 아미노산 잔기 중 221 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 80 내지 107개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이다.
또한, Fc 단편은 천연 형태에 비해 천연 당쇄(sugar chains), 증가된 당쇄, 또는 감소된 당쇄를 갖는 형태일 수 있거나, 탈당화된 형태일 수 있다. 면역글로불린 Fc 당쇄는 화학적 방법, 효소적 방법, 미생물을 이용한 유전공학적 방법 등 통상적인 방법에 의해 변형될 수 있다. Fc 단편에서 당쇄를 제거하면 제1 보체 성분 C1의 C1q 부분에 대한 결합 친화도가 급격히 감소하고 ADCC 또는 CDC가 감소 또는 손실되어, 생체 내에서 불필요한 면역 반응을 유도하지 않는다. 이와 관련하여, 탈당화 또는 비당화된 형태의 면역글로불린 Fc 영역이 약물 담체로서 일 구현예의 목적에 보다 적합할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "탈당화(deglycosylation)"는 Fc 단편으로부터 당이 효소적으로 제거된 Fc 영역을 의미한다. 또한, 용어 "비당화(aglycosylation)"는 Fc 단편이 원핵생물, 바람직하게는 대장균에 의해 당화되지 않은 형태로 생산되는 것을 의미한다.
또한, 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 서열번호 9 (hyFc), 서열번호 10 (hyFcM1), 서열번호 11 (hyFcM2), 서열번호 12 (hyFcM3), 또는 서열번호 13 (hyFcM4)의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 서열번호 14 (비용해성 마우스 Fc)의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 미국 특허 제7,867,491호에 기재된 것일 수 있으며, 변형된 면역글로불린의 Fc 영역의 생산은 미국 특허 제7,867,491호의 개시내용을 참조하여 수행될 수 있으며, 그의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
제2 도메인은 제1 도메인의 N-말단에 직접 연결되거나 링커에 의해 연결될 수 있다. 구체적으로, 결과는 제2 도메인-제1 도메인 또는 제2 도메인-링커-제1 도메인의 형태일 수 있다.
제3 도메인은 제1 도메인 또는 제2 도메인에 직접 연결되거나 링커에 의해 연결될 수 있다. 구체적으로, 결과는 제2 도메인-제1 도메인-제3 도메인, 제3 도메인-제2 도메인-제1 도메인, 제2 도메인-제1 도메인-링커-제3 도메인, 제3 도메인-링커-제2 도메인-제1 도메인, 제2 도메인-링커-제1 도메인-링커-제3 도메인, 또는 제3 도메인-링커-제2 도메인-제1 도메인의 형태일 수 있다.
링커가 펩타이드 링커인 경우, 연결은 임의의 연결 영역에서 발생할 수 있다. 이들은 당업계에 공지된 가교제를 사용하여 커플링될 수 있다. 가교제의 예는 1,1-비스(디아조아세틸)-2-페닐에탄, 글루타르알데히드, 4-아지도살리실산과 같은 N-하이드록시숙신이미드 에스터; 3,3'-디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트)와 같은 디숙신이미딜 에스터 및 비스-N-말레이미도-1,8-옥탄과 같은 이기능성 말레이미드를 포함하는 이미도에스터를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 링커는 알부민 링커 또는 펩타이드 링커일 수 있다. 펩타이드 링커는 Gly 및 Ser 잔기로 구성된 10 내지 20개의 아미노산 잔기의 펩타이드일 수 있다.
링커가 화학 결합으로 구성된 군에서 선택되는 하나로 형성되는 경우, 화학 결합은 이황화 결합, 디아민 결합, 설파이드-아민 결합, 카르복시-아민 결합, 에스터 결합 및 공유 결합일 수 있다.
변형된 IL-7은 IL-7의 활성 또는 이와 유사한 활성을 갖는 폴리펩타이드 및 1 내지 10개의 아미노산으로 구성된 올리고펩타이드를 포함하는 A-IL-7의 구조를 가질 수 있다.
일 구현예에서, 변형된 IL-7은 서열번호 15 내지 20으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 또한, 변형된 IL-7은 서열번호 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 가질 수 있다.
또 다른 예시적인 구현예에서, 변형된 IL-7 또는 IL-7 융합 단백질은 IL-7의 활성 또는 그의 유사한 활성을 갖는 폴리펩타이드를 포함하는 제1 도메인; 메티오닌, 글리신 또는 이들의 조합으로 구성된 1 내지 10개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열을 포함하는 제2 도메인; 및 제1 도메인의 C-말단에 결합된, 변형된 면역글로불린의 Fc 영역인 제3 도메인을 포함한다.
IL-7 융합 단백질은 서열번호 21 내지 25로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 또한, IL-7 융합 단백질은 서열번호 21, 22, 23, 24, 또는 25의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 가질 수 있다.
서열번호 21 내지 25의 IL-7 융합 단백질은 서열번호 29 내지 39로 구성된 군에서 선택되는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화될 수 있다.
핵산 분자는 신호 서열 또는 리더 서열을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "신호 서열(signal sequence)"은 생물학적 활성 분자 약물 및 융합 단백질의 분비를 지시하는 단편을 의미하며, 이는 숙주 세포에서 번역된 후 절단된다. 일 구현예의 신호 서열은 소포체(ER) 막을 관통하는 단백질의 이동을 개시하는 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드다. 일 구현예에서 유용한 신호 서열은 항체 경쇄 신호 서열, 예를 들어, 항체 14.18 (Gillies et al., J. Immunol. Meth 1989. 125:191-202), 항체 중쇄 신호 서열, 예를 들어, MOPC141 항체 중쇄 신호 서열(Sakano et al., Nature, 1980. 286: 676-683), 및 당업계에 공지된 다른 신호 서열(예를 들어, Watson et al., Nucleic Acid Research, 1984. 12:5145-5164 참조)을 포함한다.
신호 펩타이드의 특징은 당업계에 잘 알려져 있으며, 신호 펩타이드는 통상적으로 16 내지 30개의 아미노산을 갖지만, 더 많거나 더 적은 수의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 통상적인 신호 펩타이드는 염기성 N-말단 영역, 중심 소수성 영역 및 더 극성인 C-말단 영역의 3개 영역으로 구성된다.
중심 소수성 영역은 4 내지 12개의 소수성 잔기를 포함하며, 이는 미성숙 폴리펩타이드의 전위 동안 막 지질 이중층을 통해 신호 서열을 고정화한다. 개시 후, 신호 서열은 신호 펩티다아제로 알려진 세포 효소에 의해 ER의 내강 내에서 주로 절단된다. 특히, 신호 서열은 조직 플라스미노겐 활성화 (tPa)를 위한 분비 신호 서열, 단순 포진 바이러스 당단백질 D (HSV gD)의 신호 서열, 또는 성장 호르몬일 수 있다. 바람직하게는 포유동물 등을 포함한 고등 진핵 세포에서 사용되는 분비 신호 서열이 사용될 수 있다. 또한, 분비 신호 서열로서, 야생형 IL-7에 포함된 신호 서열이 사용되거나 숙주 세포에서 발현 빈도가 높은 코돈으로 치환 후 사용될 수 있다.
변형된 IL-7 또는 IL-7 융합 단백질을 암호화하는 분리된 핵산 분자는 발현 벡터에 포함될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "벡터(vector)"는 숙주 세포 내로 도입되어 숙주 세포의 게놈 내로 재조합 및 삽입되거나 에피솜으로서 자발적으로 복제될 수 있는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 수단으로서 이해된다. 벡터는 선형 핵산, 플라스미드, 파지미드, 코스미드, RNA 벡터, 바이러스 벡터 및 이들의 유사체를 포함할 수 있다. 바이러스 벡터의 예는 레트로바이러스(retrovirus), 아데노바이러스(adenovirus) 및 아데노 관련 바이러스(adeno-associated virus)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원에 사용된 용어 "유전자 발현(gene expression)" 또는 표적 단백질의 "발현(expression)"은 DNA 서열의 전사, mRNA 전사체의 번역, 및 융합 단백질 생성물 또는 이의 단편의 분비를 의미하는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "숙주 세포(host cell)"는 재조합 발현 벡터가 도입될 수 있는 원핵 세포 및 진핵 세포를 의미한다. 본원에 사용된 용어 "형질도입된(transduced)", "형질전환된(transformed)" 및 "형질감염된(transfected)"은 당업계에 공지된 기술을 사용하여 핵산(예를 들어, 벡터)을 세포 내로 도입하는 것을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "유전자 발현" 또는 표적 단백질의 "발현"은 DNA 서열의 전사, mRNA 전사체의 번역, 및 Fc 융합 단백질 생성물 또는 항체 또는 이의 항체 단편의 분비를 의미하는 것으로 이해된다.
유용한 발현 벡터는 RcCMV(Invitrogen, Carlsbad) 또는 이의 변이체일 수 있다. 발현 벡터는 포유동물 세포에서 표적 유전자의 지속적인 전사를 촉진하기 위한 인간 사이토메갈로바이러스(human cytomegalovirus, CMV) 및 전사 후 RNA의 안정성 상태를 증가시키기 위한 소 성장 호르몬의 폴리아데닐화 신호 서열을 포함할 수 있다. 예시적인 구현예에서, 발현 벡터는 RcCMV의 변형된 형태인 pAD15이다.
발현 벡터는 일 구현예의 DNA 서열의 형질도입 또는 형질감염에 의해 표적 단백질의 발현 및/또는 분비에 적합한 적절한 숙주 세포에 포함될 수 있다.
적절한 숙주 세포의 예는 불멸 하이브리도마 세포, NS/0 골수종 세포, 293 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, HeLa 세포, 인간 양수 유래 세포 (CapT 셀) 또는 COS 세포를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
변형된 IL-7 단백질 및 이의 융합 단백질은 동시 계류 중인 출원(미국 출원 제15/126,313호)에 기재된 방법에 의해 생성될 수 있으며, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
조성물
전체 내용이 본원에 참조로 포함되는 미국 출원 제15/773,273호는 변형된 IL-7 융합 단백질을 함유하는 제형을 개시하고 있다. 일부 구현예에서, 약학 제형은 (a) 변형된 IL-7 융합 단백질; (b) 10 내지 50mM 농도의 기본 완충액; (c) 2.5 내지 5w/v% 농도의 당; 및 (d) 0.05 내지 6w/v% 농도의 계면활성제를 포함할 수 있다. 제형은 아미노산, 당 알코올(예를 들어, 소르비톨, 자일리톨, 말티톨, 만니톨, 또는 이들의 혼합물)을 추가로 포함할 수 있다. 제형은 약 pH5를 가질 수 있다.
변형된 IL-7 또는 IL-7 융합 단백질을 함유하는 약학 조성물은 직접 투여(예를 들어, 조직 영역으로의 주사, 이식 또는 국소 투여를 통한 투여에 의해 국소적으로) 또는 적절한 수단을 통한 시스템(예: 비경구 또는 경구)에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 조성물이 정맥내, 피하, 안구, 복강내, 근육내, 경구, 직장내, 안와내, 대뇌내, 두개내, 척수내, 심실내, 척추강내, 수조내(intracistenally), 피막내, 비강내, 또는 에어로졸 투여에 의해 비경구적으로 투여되는 경우, 조성물은 바람직하게는 체액의 수성 또는 생리학적으로 적용 가능한 현탁액 또는 이의 용액의 일부를 함유한다. 이와 같이, 생리학적으로 허용되는 담체 또는 수송체는 조성물에 첨가되어 환자에게 전달될 수 있으며, 이는 환자의 전해질 및/또는 체적 균형에 부정적인 영향을 미치지 않는다. 따라서, 생리학적으로 허용되는 담체 또는 수송체는 생리식염수일 수 있다.
또한, 변형된 IL-7 또는 IL-7 융합 단백질을 포함하는 핵산을 포함하는 DNA 작제물(또는 게놈 작제물)은 유전자 치료 프로토콜의 일부로 사용될 수 있다.
목적 단백질(desired protein)의 기능을 재구성하거나 보완하기 위해, 특정 세포에서 융합 단백질을 발현할 수 있는 발현 벡터는 임의의 생물학적으로 효과적인 담체와 함께 투여될 수 있다. 이는 목적 단백질 또는 IL-7 융합 단백질을 암호화하는 유전자를 생체 내에서 세포 내로 효율적으로 전달할 수 있는 임의의 제형 또는 조성물일 수 있다.
변형된 IL-7 또는 IL-7 융합 단백질을 암호화하는 핵산을 사용한 유전자 치료의 목적을 위해, 대상체 유전자는 바이러스 벡터, 재조합 박테리아 플라스미드 또는 재조합 진핵 플라스미드에 삽입될 수 있다. 상기 바이러스 벡터는 재조합 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 단순 포진 바이러스-1 등, 이식된 T 세포 또는 증식하는 시험관 내 분리된 T 세포 응집체를 포함할 수 있다.
변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도 및 치료 요법
증식성 질병을 치료하기 위한 의약의 제조에서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 상기 의약은 필요로 하는 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로 2회 이상 투여되는 약 600 μg/kg 초과 내지 약 2,000 μg/kg 범위의 치료학적으로 유효한 투여량을 포함한다.
일 구현예에서, 증식성 질병을 치료하기 위한 의약의 제조에서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 상기 의약은 필요로 하는 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로 2회 이상 투여되는 약 600 μg/kg 초과 내지 약 2,000 μg/kg 범위의 치료학적으로 유효한 투여량을 포함한다.
증식성 질병을 치료하기 위한 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 약 720 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 1,200 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg의 치료학적 유효량으로 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로, 또는 10일, 20일, 30일, 40일, 50일, 60일, 70일, 80일, 90일, 또는 100일의 간격으로 2회 이상 투여하는 것을 포함한다.
증식성 질병을 치료하기 위한 의약의 제조에서 사용하기 위한, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 약 720 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 1,200 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg의 치료학적 유효량으로 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로, 또는 10일, 20일, 30일, 40일, 50일, 60일, 70일, 80일, 90일, 또는 100일의 간격으로 2회 이상 투여하는 것을 포함한다.
증식성 질병을 치료하기 위한 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 약 720 μg/kg 이상, 약 840 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 1,200 μg/kg 이상, 약 1,440 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg의 치료학적 유효량으로 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로, 또는 10일, 20일, 30일, 40일, 50일, 60일, 70일, 80일, 90일, 또는 100일의 간격으로 2회 이상 투여하는 것을 포함한다.
증식성 질병을 치료하기 위한 의약의 제조에서 사용하기 위한, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 약 720 μg/kg 이상, 약 840 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 1,200 μg/kg 이상, 약 1,440 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg의 치료학적 유효량으로 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로, 또는 10일, 20일, 30일, 40일, 50일, 60일, 70일, 80일, 90일, 또는 100일의 간격으로 2회 이상 투여하는 것을 포함한다.
필요로 하는 대상체에서 림프구 수치 또는 림프구 생산을 증가시키기 위한 의약의 제조에서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 상기 의약은 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로 2회 이상 투여되는 약 600 μg/kg 초과 내지 약 2,000 μg/kg 범위의 치료학적으로 유효한 투여량을 포함한다.
일 구현예에서, 필요로 하는 대상체에서 림프구 수치 또는 림프구 생산을 증가시키기 위한 의약의 제조에서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 상기 의약은 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로 2회 이상 투여되는 약 600 μg/kg 초과 내지 약 2,000 μg/kg 범위의 치료학적으로 유효한 투여량을 포함한다.
필요로 하는 대상체에서 림프구 수치 또는 림프구 생산을 증가시키기 위한 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 약 720 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 1,200 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg의 치료학적 유효량으로 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로, 또는 10일, 20일, 30일, 40일, 50일, 60일, 70일, 80일, 90일, 또는 100일의 간격으로 2회 이상 투여하는 것을 포함한다.
필요로 하는 대상체에서 림프구 수치 또는 림프구 생산을 증가시키기 위한 의약의 제조에서 사용하기 위한, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 약 720 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 1,200 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg의 치료학적 유효량으로 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로, 또는 10일, 20일, 30일, 40일, 50일, 60일, 70일, 80일, 90일, 또는 100일의 간격으로 2회 이상 투여하는 것을 포함한다.
필요로 하는 대상체에서 림프구 수치 또는 림프구 생산을 증가시키기 위한 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 약 720 μg/kg 이상, 약 840 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 1,200 μg/kg 이상, 약 1,440 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg의 치료학적 유효량으로 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로, 또는 10일, 20일, 30일, 40일, 50일, 60일, 70일, 80일, 90일, 또는 100일의 간격으로 2회 이상 투여하는 것을 포함한다.
필요로 하는 대상체에서 림프구 수치 또는 림프구 생산을 증가시키기 위한 의약의 제조에서 사용하기 위한, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 용도로서, 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질의 약 720 μg/kg 이상, 약 840 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 1,200 μg/kg 이상, 약 1,440 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg의 치료학적 유효량으로 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 필요로 하는 대상체에게 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로, 또는 10일, 20일, 30일, 40일, 50일, 60일, 70일, 80일, 90일, 또는 100일의 간격으로 2회 이상 투여하는 것을 포함한다.
일 구현예에서, 상기 용도를 위한 증식성 질병은 암 또는 종양이며, 이는 고형 종양, 림프계 암, 또는 백혈병일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상기 고형 종양은 활막 육종, 침윤성 관 암종(infiltrating duct carcinoma), 직장암, 결장암, 난소암, 상행 결장암, 항문암, 침윤성 유관암(invasive ductal carcinoma), 선암종(adenocarcinoma), 전이성 대동맥 주위의 직장암(rectal cancer with paraaortic in metastatis), 신경내분비암종(자궁경부), S상 결장암 또는 교모세포종일 수 있다.
일 구현예에서, 대상체는 수술, 방사선 및 화학 요법을 포함하는 암 치료 중 하나 이상을 이전에 받았거나 동시에 받을 수 있다.
(i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질, 또는 이들을 함유하는 약학 조성물은 삽입구적(parenthetically), 근육내, 피하, 안구, 정맥내, 복강내, 피내, 안와내, 대뇌내, 두개내, 척수내, 심실내, 척추강내, 수조내(intracistemally), 피막내, 또는 종양내로 투여될 수 있다.
일부 관점에서, 대상체는 이상반응 공통 용어 기준 (Common Terminology Criteria for Adverse Events, CTCAE) 4.0 버전에 따라 결정된 1000개 림프구 세포/혈액 μl 이하의 림프구 수치를 가질 수 있다. 림프구는 T 세포일 수 있다. T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포를 포함할 수 있다. 혈액 샘플의 림프구 측정에는 전혈 또는 혈청이 사용될 수 있다. 따라서, 림프구 수치와 관련하여 사용되는 용어 "혈액(blood)"은 전혈 및/또는 혈청을 포함한다.
또 다른 관점에서, 대상체는 800개 림프구 세포/혈액 μl 이하의 림프구 수치, 500개 림프구 세포/혈액 μl 이하의 림프구 수치, 또는 200개 림프구 세포/혈액 μl 이하의 림프구 수치를 갖는다.
일 관점에서, 종양내 종양 침윤 림프구 (TILs)의 수는 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질의 투여 후 종양내 TILs의 수와 비교하여 투여 후에 증가된다. TILs는 CD4+ TILs 및/또는 CD8+ TILs 일 수 있다.
TILs의 수는 투여 후에 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 125%, 적어도 약 150%, 적어도 약 200%, 적어도 약 250%, 또는 적어도 약 300% 증가할 수 있다.
일 구현예에서, (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 또는 약 8주의 간격으로 약 720 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여될 수 있다.
일 구현예에서, (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 2주, 약 3주, 약 4주, 또는 약 5주, 약 6주, 약 7주, 또는 약 8주의 간격으로 약 840 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여될 수 있다.
다른 구현예에서, (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 또는 약 10주의 간격으로 약 960 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여될 수 있다.
또 다른 구현예에서, (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 또는 약 12주의 간격으로 약 1200 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여될 수 있다.
또 다른 구현예에서, (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주, 약 15주, 약 1개월, 약 2개월, 또는 약 3개월의 간격으로 약 1440 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여될 수 있다.
일 구현예에 따르면, (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 600 μg/kg 초과, 약 700 μg/kg 초과, 약 800 μg/kg 초과, 약 900 μg/kg 초과, 약 1,000 μg/kg 초과, 약 1,100 μg/kg 초과, 약 1,200 μg/kg 초과, 약 1,300 μg/kg 초과, 약 1,400 μg/kg 초과, 약 1,500 μg/kg 초과, 약 1,600 μg/kg 초과, 약 1,700 μg/kg 초과, 약 1,800 μg/kg 초과, 약 1,900 μg/kg 초과, 또는 약 2,000 μg/kg 초과의 용량으로, 1주에 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 8주에 1회, 9주에 1회, 10주에 1회, 11주에 1회, 12주에 1회, 13주에 1회, 14주에 1회, 또는 15주에 1회의 투약 빈도로 투여될 수 있다.
일부 관점에 따르면, (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 610 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 650 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 800 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 850 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 900 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 950 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,000 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,050 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,100 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,200 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 1,300 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 1,500 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 1,700 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 610 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 650 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 800 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 850 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 900 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 또는 약 950 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg의 용량으로, 1주에 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 8주에 1회, 9주에 1회, 10주에 1회, 11주에 1회, 12주에 1회, 13주에 1회, 14주에 1회, 또는 15주에 1회의 투약 빈도로 투여될 수 있다.
다른 관점에 따르면, (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 700 μg/kg 내지 약 900 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 950 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 850 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 850 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 800 μg/kg, 약 800 μg/kg 내지 약 900 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 850 μg/kg, 또는 약 850 μg/kg 내지 약 950 μg/kg의 용량으로, 1주에 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 8주에 1회, 9주에 1회, 10주에 1회, 11주에 1회, 12주에 1회, 13주에 1회, 14주에 1회, 또는 15주에 1회의 투약 빈도로 투여될 수 있다.
또 다른 구현예에 따르면, (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 650 μg/kg, 약 680 μg/kg, 약 700 μg/kg, 약 720 μg/kg, 약 740 μg/kg, 약 750 μg/kg, 약 760 μg/kg, 약 780 μg/kg, 약 800 μg/kg, 약 820 μg/kg, 약 840 μg/kg, 약 850 μg/kg, 약 860 μg/kg, 약 880 μg/kg, 약 900 μg/kg, 약 920 μg/kg, 약 940 μg/kg, 약 950 μg/kg, 약 960 μg/kg, 약 980 μg/kg, 약 1,000 μg/kg, 약 1,020 μg/kg, 약 1,040 μg/kg, 약 1,060 μg/kg, 약 1,080 μg/kg, 약 1,100 μg/kg, 약 1,120 μg/kg, 약 1,140 μg/kg, 약 1,160 μg/kg, 약 1,180 μg/kg, 약 1,200 μg/kg, 약 1,220 μg/kg, 약 1,240 μg/kg, 약 1,260 μg/kg, 약 1,280 μg/kg, 약 1,300 μg/kg, 약 1,320 μg/kg, 약 1,340 μg/kg, 약 1,360 μg/kg, 약 1,380 μg/kg, 약 1,400 μg/kg, 약 1,420 μg/kg, 약 1,440 μg/kg, 약 1,460 μg/kg, 약 1,480 μg/kg, 약 1,500 μg/kg, 약 1,520 μg/kg, 약 1,540 μg/kg, 약 1,560 μg/kg, 약 1,580 μg/kg, 약 1,600 μg/kg, 약 1,620 μg/kg, 약 1,640 μg/kg, 약 1,660 μg/kg, 약 1,680 μg/kg, 약 1,700 μg/kg, 약 1,720 μg/kg, 약 1,740 μg/kg, 약 1,760 μg/kg, 약 1,780 μg/kg, 약 1,800 μg/kg, 약 1,820 μg/kg, 약 1,840 μg/kg, 약 1,860 μg/kg, 약 1,880 μg/kg, 약 1,900 μg/kg, 약 1,920 μg/kg, 약 1,940 μg/kg, 약 1,960 μg/kg, 약 1,980 μg/kg, 또는 약 2,000 μg/kg의 용량으로, 1주에 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 8주에 1회, 9주에 1회, 10주에 1회, 11주에 1회, 12주에 1회, 13주에 1회, 14주에 1회, 또는 15주에 1회의 투약 빈도로 투여될 수 있다.
일 구현예에서, (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 650 μg/kg - 680 μg/kg, 약 680 μg/kg - 700 μg/kg, 약 700 μg/kg - 720 μg/kg, 약 720 μg/kg - 740 μg/kg, 약 740 μg/kg - 750 μg/kg, 약 750 μg/kg - 760 μg/kg, 약 760 μg/kg - 780 μg/kg, 약 780 μg/kg - 800 μg/kg, 약 800 μg/kg - 820 μg/kg, 약 820 μg/kg - 840 μg/kg, 약 840 μg/kg - 850 μg/kg, 약 850 μg/kg - 860 μg/kg, 약 860 μg/kg - 880 μg/kg, 약 880 μg/kg - 900 μg/kg, 약 900 μg/kg - 920 μg/kg, 약 920 μg/kg - 940 μg/kg, 약 940 μg/kg - 950 μg/kg, 약 950 μg/kg - 960 μg/kg, 약 960 μg/kg - 980 μg/kg, 약 980 μg/kg - 1000 μg/kg, 약 1,000 μg/kg - 1,020 μg/kg, 약 1,020 μg/kg - 1,040 μg/kg, 약 1,040 μg/kg - 1,060 μg/kg, 약 1,060 μg/kg - 1,080 μg/kg, 약 1,080 μg/kg - 1,100 μg/kg, 약 1,100 μg/kg - 1,120 μg/kg, 약 1,120 μg/kg - 1,140 μg/kg, 약 1,140 μg/kg - 1,160 μg/kg, 약 1,160 μg/kg - 1,180 μg/kg, 약 1,180 μg/kg - 1,200 μg/kg, 약 1,200 μg/kg - 1,220 μg/kg, 약 1,220 μg/kg - 1,240 μg/kg, 약 1,240 μg/kg - 1,260 μg/kg, 약 1,260 μg/kg - 1,280 μg/kg, 약 1,280 μg/kg - 1,300 μg/kg, 약 1,300 μg/kg - 1,320 μg/kg, 약 1,320 μg/kg - 1,340 μg/kg, 약 1,340 μg/kg - 1,360 μg/kg, 약 1,360 μg/kg - 1,380 μg/kg, 약 1,380 μg/kg - 1,400 μg/kg, 약 1,400 μg/kg - 1,420 μg/kg, 약 1,420 μg/kg - 1,440 μg/kg, 약 1,440 μg/kg - 1,460 μg/kg, 약 1,480 μg/kg, 약 1,480 μg/kg - 1,500 μg/kg, 약 1,500 μg/kg - 1,520 μg/kg, 약 1,520 μg/kg - 1,540 μg/kg, 약 1,540 μg/kg - 1,560 μg/kg, 약 1,560 μg/kg - 1,580 μg/kg, 약 1,580 μg/kg - 1,600 μg/kg, 약 1,600 μg/kg - 1,620 μg/kg, 약 1,620 μg/kg - 1,640 μg/kg, 약 1,640 μg/kg - 1,660 μg/kg, 약 1,660 μg/kg - 1,680 μg/kg, 약 1,680 μg/kg - 1,700 μg/kg, 약 1,700 μg/kg - 1,720 μg/kg, 약 1,720 μg/kg - 1,740 μg/kg, 약 1,740 μg/kg - 1,760 μg/kg, 약 1,760 μg/kg - 1,780 μg/kg, 약 1,780 μg/kg - 1,800 μg/kg, 약 1,800 μg/kg - 1,820 μg/kg, 약 1,820 μg/kg - 1,840 μg/kg, 약 1,840 μg/kg - 1,860 μg/kg, 약 1,860 μg/kg - 1,880 μg/kg, 약 1,880 μg/kg - 1,900 μg/kg, 약 1,900 μg/kg - 1,920 μg/kg, 약 1,920 μg/kg - 1,940 μg/kg, 약 1,940 μg/kg - 1,960 μg/kg, 약 1,960 μg/kg - 1,980 μg/kg, 또는 약 1,980 μg/kg - 1,200 μg/kg의 용량으로, 1주에 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 8주에 1회, 9주에 1회, 10주에 1회, 11주에 1회, 12주에 1회, 13주에 1회, 또는 10일에 1회, 20일에 1회, 30일에 1회, 40일에 1회, 50일에 1회, 60일에 1회, 90일에 1회 또는 100일에 1회의 투약 빈도로 투여될 수 있다.
일 구현예에서, 대상체는 화학 요법을 받았거나, 받고 있거나, 받을 예정인 것일 수 있다. 화학요법제 및 변형된 IL-7 또는 이의 융합 단백질은 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
참고 실시예 1. IL-7에 올리고펩타이드가 결합된 변형된 IL-7 단백질의 제조
올리고펩타이드가 IL-7의 N-말단에 결합된 변형된 IL-7을 제조하였다. IL-7은 인간 IL-7 (서열번호 1)의 서열을 사용하였고, 올리고펩타이드로는 메티오닌(M), 글리신(G), MM, GG, MG, GM, MMM, MMG, MGM, GMM, MGG, GMG, GGM, GGG, DDD 또는 MMMM 서열을 사용하였다.
도 1A에 도시된 바와 같이, 'A'-IL-7의 구조를 갖는 변형된 IL-7의 다양한 형태를 제조하였다. 이 실시예에서는 메티오닌(M), 글리신(G), MM, GG, MG, GM, MMM, MMG, MGM, GMM, MGG, GMG, GGM, GGG, DDD 또는 MMMM 서열을 제2 도메인으로 사용하였다(올리고펩타이드, 'A'). 또한, MGMM, MGGM, MGGG, MGMG, GMMM, GMGG, GGGG, MMMMM, MMGMM, MMGGM, MGMMG, MMMMG, GGGGG, GGMMM, GGGMG, MGMGMG, MMMGGG, MMGGMM, GGMMGG, MGMGMGMG, MMMMGGGG, MMGGMMGG, MMMMGGGG, MGMGMGMGMG, 및 MMMMMGGGGG는 "A"로 생산하였다.
올리고펩타이드에 융합되는 제1 도메인으로서 IL-7의 경우, 서열번호 28의 핵산 서열을 사용하였다. 올리고펩타이드에 IL-7이 융합된 형태의 전체 핵산 서열을 얻은 후 발현 벡터에 삽입하였다. 음성 대조군으로는 동일한 방법으로 올리고펩타이드 변형이 없는 IL-7 단백질을 제조하였다.
A-IL-7 유전자를 포함하는 발현 벡터를 HEK293 세포에 형질감염시켰다. 300mL의 현탁 배양물을 기준으로, 208.3ug의 DNA와 416.6ug(μL)의 폴리에틸렌이민(PEI)(w/w)을 사용하여 폴리플렉스를 제조한 후, HEK293F 세포에 형질감염시켰다. 형질감염 6일 후, 세포 배양액을 채취하여 웨스턴 블롯을 수행하여 표적 단백질의 발현율을 평가하였다. 이후, 배양액을 8,000rpm에서 30분간 원심분리하고 배양 찌꺼기를 제거하고 0.22um의 pore 크기를 갖는 병탑 필터를 사용하여 여과하였다. 그 결과, M-IL-7, G-IL-7, MM-IL-7, GG-IL-7, MG-IL-7, GM-IL-7, MMM-IL-7, MMG-IL-7, MGM-IL-7, GMM-IL-7, MGG-IL-7, GMG-IL-7, GGM-IL-7, GGG-IL-7, DDD-IL-7, 및 MMMM-IL-7의 변형된 IL-7을 포함하는 배양액을 수득하였다. 또한, MGMM-IL-7, MGGM-IL-7, MGGG-IL-7, MGMG-IL-7, GMMM-IL-7, GMGG-IL-7, GGGG-IL-7, MMMMM-IL-7, MMGMM-IL-7, MMGGM-IL-7, MGMMG-IL-7, MMMMG-IL-7, GGGGG-IL-7, GGMMM-IL-7, GGGMG-IL-7, MGMGMG-IL-7, MMMGGG-IL-7, MMGGMM-IL-7, GGMMGG-IL-7, MGMGMGMG-IL-7, MMMMGGGG-IL-7, MMGGMMGG-IL-7, MMMMGGGG-IL-7, MGMGMGMGMG-IL-7, 및 MMMMMGGGGG-IL-7을 생산하였다.
참고 실시예 2. IL-7의 C-말단에 Fc 영역이 결합된 IL-7 융합 단백질의 제조
변형된 IL-7의 C-말단에 이종 아미노산 서열로 구성된 폴리펩타이드가 추가로 결합된 IL-7 융합 단백질, 즉 제2 도메인-제1 도메인-제3 도메인을 제조하였다. 제1 도메인은 인간 IL-7 (서열번호 1)의 서열을 사용하였고, 제2 도메인은 M, G, MM, GG, MG, GM, MMM, MMG, MGM, GMM, MGG, GMG, GGM, GGG, DDD 또는 MMMM 서열을 사용하였다. 제3 도메인은 Fc 영역의 서열(서열번호 9 또는 14)을 사용하였다. 다른 구현예에서, IL-7 - Fc 융합 단백질(여기서 MGMM, MGGM, MGGG, MGMG, GMMM, GMGG, GGGG, MMMMM, MMGMM, MMGGM, MGMMG, MMMMG, GGGGG, GGMMM, GGGMG, MGMGMG, MMMGGG, MMGGMM, GGMMGG, MGMGMGMG, MMMMGGGG, MMGGMMGG, MMMMGGGG, MGMGMGMGMG 또는 MMMMMGGGGG는 IL-7 - Fc의 N-말단에 연결됨)이 생산되었다.
제2 도메인, 제1 도메인 및 제3 도메인으로 구성된 다양한 형태의 IL-7 융합 단백질을 제조하였다. 본 실시예에서는 제2 도메인으로 메티오닌(M), 글리신(G), MM, GG, MG, GM, MMM, MMG, MGM, GMM, MGG, GMG, GGM, GGG, DDD 또는 MMMM 서열을 사용하였고; 제1 도메인으로 인간 IL-7을 사용하였고; 제3 도메인으로 하이브리드 Fc (hFc, hyFc) 또는 마우스 비용해성(non-lytic) Fc를 사용하였다. 추가적인 실험에서, MGMM, MGGM, MGGG, MGMG, GMMM, GMGG, GGGG, MMMMM, MMGMM, MMGGM, MGMMG, MMMMG, GGGGG, GGMMM, GGGMG, MGMGMG, MMMGGG, MMGGMM, GGMMGG, MGMGMGMG, MMMMGGGG, MMGGMMGG, MMMMGGGG, MGMGMGMGMG 또는 MMMMMGGGGG는 변형된 IL-7 융합 단백질을 생산하기 위한 제2 도메인으로 사용된다.
특히, 하이브리드 Fc는 미국 특허 제7,867,491호에 개시되어 있는 hFc(하이브리드 Fc)를 사용하였으며, 그 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다. hFc는 생리학적으로 활성인 단백질과 결합할 수 있어 기존의 변형된 면역글로불린의 Fc 영역에 비해 우수한 생체 내 반감기를 나타낸다.
실시예 1과 동일한 방법으로 유전자 발현 벡터를 제작하여 형질감염시킨 후, 세포를 배양하여 다양한 형태의 IL-7 융합 단백질을 포함하는 배양액을 제조하였다. 그 결과, G-IL-7-hyFc, M-IL-7-hyFc, MM-IL-7-hyFc, GG-IL-7-hyFc, MG-IL-7-hyFc, GM-IL-7-hyFc, MMM-IL-7-hyFc, MMG-IL-7-hyFc, MGM-IL-7-hyFc, GMM-IL-7-hyFc, MGG-IL-7-hyFc, GMG-IL-7-hyFc, GGM-IL-7-hyFc, GGG-IL-7-hyFc, DDD-IL-7-hyFc, 또는 MMMM-IL-7-hyFc 단백질을 함유하는 배양액을 수득하였다. MGMM-IL-7-hyFc, MGGM-IL-7-hyFc, MGGG-IL-7-hyFc, MGMG-IL-7-hyFc, GMMM-IL-7-hyFc, GMGG-IL-7-hyFc, GGGG-IL-7-hyFc, MMMMM-IL-7-hyFc, MMGMM-IL-7-hyFc, MMGGM-IL-7-hyFc, MGMMG-IL-7-hyFc, MMMMG-IL-7-hyFc, GGGGG-IL-7-hyFc, GGMMM-IL-7-hyFc, GGGMG-IL-7-hyFc, MGMGMG-IL-7-hyFc, MMMGGG-IL-7-hyFc, MMGGMM-IL-7-hyFc, GGMMGG-IL-7-hyFc, MGMGMGMG-IL-7-hyFc, MMMMGGGG-IL-7-hyFc, MMGGMMGG-IL-7-hyFc, MMMMGGGG-IL-7-hyFc, MGMGMGMGMG-IL-7-hyFc, 또는 MMMMMGGGGG-IL-7-hyFc를 생산하였다.
일 관점에서, 코드명 GX-I7(서열번호 24)을 갖는 변형된-IL-7 - Fc 융합 단백질이 사용될 수 있다. GX-17은 서열번호 18의 변형된 IL-7 및 변형된 IL-7의 C-말단에 융합된 hyFc를 포함한다.
일 관점에서, IL-7 융합 단백질은 약 60 μg/kg 이상의 용량으로 투여될 수 있다. 용량은 약 60 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg 의 범위일 수 있다. 용량은 약 60 μg/kg 이상, 약 120 μg/kg 이상, 약 240 μg/kg 이상, 약 480 μg/kg 이상, 약 720 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 μg/kg 이상, 1,200 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg 일 수 있다. 다른 구현예에서, 용량은 약 60 μg/kg 이상, 약 360 μg/kg 이상, 약 600 μg/kg 이상, 약 840 μg/kg 이상, 또는 약 1440 μg/kg 이상일 수 있다.
일 구현예에서, 용량은 약 60 μg/kg 이상, 약 120 μg/kg 이상, 약 240 μg/kg 이상, 약 360 μg/kg 이상, 약 480 μg/kg 이상, 약 600 μg/kg 이상, 약 720 μg/kg 이상, 약 840 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 1,200 μg/kg 이상, 약 1,440 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg 일 수 있다.
일부 관점에서, 변형된 인터루킨-7 또는 인터루킨-7 융합 단백질은 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 또는 약 8주의 간격으로 약 720 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여된다. 일부 관점에서, 변형된 인터루킨-7 또는 인터루킨-7 융합 단백질은 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 또는 약 8주의 간격으로 약 840 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여된다. 다른 관점에서, 변형된 인터루킨-7 또는 인터루킨-7 융합 단백질은 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 또는 9주, 또는 약 10주의 간격으로 약 960 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여된다. 일부 관점에서, 변형된 인터루킨-7 또는 인터루킨-7 융합 단백질은 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 또는 약 12주의 간격으로 약 1200 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여된다. 일부 다른 관점에서, 변형된 인터루킨-7 또는 인터루킨-7 융합 단백질은 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주, 또는 약 15주의 간격으로 약 1440 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여된다.
Ⅰ. 전임상 연구
A. 랫트(rat)에 IL-7 융합 단백질의 단회 투여 후의 약동학 시험
IL-7 융합 단백질의 약동학 특성을 관찰하기 위해, 정상 랫트(rats)를 이용하여 약동학 시험을 수행하였다. 약동학 시험은 정맥내, 피하 및 근육내 투여에 의해 수행되었다. GX-17(서열번호 24)을 IL-7 융합 단백질로 사용하였다.
IL-7 융합 단백질이 정상 랫트에 정맥내, 피하 및 근육내 1회 투여되었을 때 약물의 생체내 동역학 및 생체이용률을 평가하기 위한 실험 결과.
정맥내 투여되는 경우, AUClast 및 Cmax는 각각 349.7 (0.1 mg /kg), 1,440.6 (0.3 mg/kg), 4,225.9 (1.0 mg/kg) h·ng/mL 및 34.3 (0.1 mg/kg), 86.7 (0.3 mg/kg), 324.5 (1.0 mg/kg) ng/mL 이었고, 이들은 용량 의존적으로 증가함을 확인했다. Tmax 는 0.083시간이엇고, 0.1, 0.3, 및 1.0 mg/kg 투여군에서 T1/2 말단은 각각 22.6, 22.6, 및 22.0시간이었고, 평균 T1/2 말단은 22.4시간이었다. 생체이용률은 정맥투여군의 혈중농도를 측정할 수 있는 시점인 72시간(0.1mg/kg), 120시간(0.3mg/kg), 및 168시간(1.0mg/kg)을 기준으로 계산하였다.
피하 투여되는 경우, AUClast 및 Cmax는 각각 363.8 (0.1 mg/kg), 1,675.9 (0.3 mg/kg), 9,765.4 (1.0 mg/kg) h·ng/mL 및 4.1 (0.1 mg/kg), 16.4 (0.3 mg/kg), 및 105.9 (1.0 mg/kg) ng/mL 이었다. Tmax 는 0.1, 0.3, 및 1.0 mg/kg의 각 투여군에서 48.0, 36.0, 48.0시간으로 증가하였고, 말단 T1/2 는 0.3 및 1.0mg/kg의 각 투여군에서 39.4, 24.3시간인 것을 확인하였다. 생체이용률은 정맥주사군의 혈중농도를 기준으로 104(0.1 mg/kg), 116(0.3 mg/kg), 및 231(1.0 mg/kg)로 나타났다.
근육내 투여되는 경우, AUClast 및 Cmax는 각각 732.3 (0.1 mg/kg), 2,898.3 (0.3 mg/kg), 11,027.8 (1.0 mg/kg) h·ng/mL 및 12.5 (0.1 mg/kg), 51.2 (0.3 mg/kg), 및 147.9 (1.0 mg/kg) ng/mL 이었다. 이러한 값은 용량 의존적으로 증가함을 확인하였다. Tmax 는 0.1, 0.3 및 1.0 mg/kg의 모든 투여군에서 약 10.0시간이었고, 말단 T1/2 는 0.1, 0.3 및 1.0 mg/kg의 각 투여군에서 48.3, 39.0, 및 25.6시간이었다. 생체이용률은 정맥주사군의 혈중농도를 기준으로 209(0.1 mg/kg), 201(0.3 mg/kg), 및 261(1.0 mg/kg)로 나타났다.
흥미롭게도, 이 실험에서, 근육내 투여된 변형된 IL-7 융합 단백질은 정맥내 투여보다 더 높은 생체이용률을 나타낸 반면, 기존 약물 화합물의 대부분은 정맥내 투여보다 피하 또는 근육내 투여될 때 더 낮은 생체이용률을 나타냈다. 도 1A-1C 참조.
B. 원숭이에 IL-7 융합 단백질의 투여 후의 약동학 시험
게잡이(cynomolgus) 원숭이의 약동학 프로파일은 4주 동안 1회 투여 독성 시험 후 독성 동역학을 통해 확인되었다. IL-7 융합 단백질 0.6, 2, 6 mg/kg을 1회 투여한 후, 1주 동안 독성 동역학을 측정하였다. 그 결과 AUClast 및 Cmax는 608 (0.6 mg/kg), 2,730 (2 mg/kg), 15,824 (6 mg/kg) h·ng/mL 및 6 (0.6 mg/kg), 29 (2 mg/kg), 172 (6 mg/kg) ng/mL이었고, 용량 의존적 증가를 나타낸다. Tmax 는 22-40시간이었고, T1/2말단은 0.6, 2, 및 6 mg/kg의 각 투여군에서 164, 90, 및 69시간이었다. 0.6 mg/kg 투여군의 말단 T1/2는 낮은 혈중 IL-7 융합 단백질 농도에 의한 생물학적 변이로서 말단기에 혈액 IL-7 융합 단백질 농도가 약간 증가하는 경향에 기인한 것으로 추측된다. 따라서, 0.6 mg/kg 투여군을 제외한 나머지 군의 평균 말단 T1/2를 계산하여 약 80시간이었다. 결과는 표 2에 나와 있다.
| 동물 | 용량 | T1/2 (h) |
Tmax (h) |
Cmax (ng/mL) |
AUClast (h·ng/mL) |
F% (0-72hr) |
|
| 정상 랫트(Rat) | IV | 0.1 mg/kg | 22.6 ± 3.1 | 0.083 ± 0.0 | 34.3 ± 4.3 | 349.7 ± 95.5 | 100 |
| 0.3 mg/kg | 22.6 ± 4.3 | 0.083 ± 0.0 | 86.7 ± 33.0 | 1440.6 ± 201.0 | 100 | ||
| 1.0 mg/kg | 22.0 ± 5.9 | 0.083 ± 0.0 | 324.5 ± 54.5 | 4225.9 ± 193.8 | 100 | ||
| SC | 0.1 mg/kg | ND1) | 48.0 ± 0.0 | 4.1 ± 1.7 | 363.8 ± 139.9 | 104 | |
| 0.3 mg/kg | 39.4 ± 10.7 | 36.0 ± 13.9 | 16.4 ± 5.4 | 1675.9 ± 579.3 | 116 | ||
| 1.0 mg/kg | 24.3 ± 8.4 | 48.0 ± 12.0 | 105.9 ± 36.5 | 9765.4 ± 3297.6 | 231 | ||
| IM | 0.1 mg/kg | 48.3 ± 12.3 | 10.0 ± 7.0 | 12.5 ± 3.1 | 732.3 ± 112.8 | 209 | |
| 0.3 mg/kg | 39.0 ± 6.9 | 10.0 ± 0.0 | 51.2 ± 24.5 | 2898.3 ± 576.3 | 201 | ||
| 1.0 mg/kg | 25.6 ± 10.3 | 10.0 ± 7.0 | 147.9 ± 18.0 | 11027.8 ± 1591.1 | 261 | ||
| 게잡이(cynomolgus) 원숭이 | SC | 0.6 mg/kg | 164 ± 106 | 40 ± 63 | 6 ± 2 | 608 ± 156 | - |
| 2 mg/kg | 90 ± 43 | 22 ± 24 | 29 ± 6 | 2730 ± 712 | - | ||
| 6 mg/kg | 69 ± 37 | 26 ± 23 | 172 ± 50 | 15,824 ± 2700 | - | ||
1)
ND: 검출되지 않음
C. 정상 랫트와 원숭이를 이용한 안전성 시험
IL-7 융합 단백질의 반복 투여 독성에 대한 투여량을 설정하기 위해, 정상 랫트와 게잡이(cynomolgus) 원숭이를 이용하여 2주간 시험을 수행하였고, 설정된 약물 투여의 용량 및 기간에서 반복 투여에 따른 (아)만성 독성을 측정하였다. 독성 현상의 악화, 지연 발생, 가역성을 평가하기 위해 4주간 반복 독성 시험을 수행하였다. 안전성 약리 시험은 정상 랫트에서 0, 1.2, 4, 12 mg/kg의 IL-7 융합 단백질(GX-I7), 게잡이 원숭이에서 0, 0.6, 2, 6 mg/kg의 용량으로 수행되었다. 정상 랫트와 게잡이 원숭이 둘 다에서, IL-7 융합 단백질(GX-I7)의 모든 평가된 용량은 테스트 동물의 일반적인 행동, 신경계, 호흡기계 및 심혈관계에 유의한 영향을 나타내지 않았다.
IL-7 융합 단백질(GX-I7)이 정상 랫트에게 주 1회, 4주 동안 총 5회 피하 투여되었을 때, 최대 12 mg/kg/주 용량에서도 약물에 의한 독성학적 소견은 관찰되지 않았다. 시험 약물과 관련된 증상이 관찰되었으나, 반복 투여 후 혈액 내 약물 노출은 관찰되지 않았다. 이는 약물특이적 항체(anti-drug antibody)에 의한 차폐효과인 것으로 보이며, 결과적으로 정상 랫트에게 4주 동안 IL-7 융합 단백질(GX-I7)을 주 1회 투여하기 위한 최대 무독성 용량 (NOAEL)을 결정할 수 없었다. 게잡이 원숭이에서 4주간 반복된 피하 독성 시험에서, 6 mg/kg/주의 용량에서도 약물 독성이 관찰되지 않아, IL-7 융합단백질(GX-I7)의 최대 무독성 용량 (NOAEL)은 6 mg/kg/주로 설정되었다. 이는 인간 등가 용량 (HED)으로 환산할 때 약 2 mg/kg에 해당한다.
Ⅱ. 임상 연구
A. 목적 및 인구통계
이 임상 시험은 (a) 국소 진행성 또는 전이성 고형암 환자 및 (b) 보조 화학 요법 후 중증 치료 관련 림프구감소증이 있는 교모세포종 환자에 대해 수행되었다. IL-7 융합 단백질을 3주 간격, 4주 간격, 6주 간격, 8주 간격, 9주 간격 또는 12주 간격으로 투여하여 안전성, 내약성(tolerability) 및 절대 림프구 수치 증가 효과를 평가하였다.
(1) 전이성 고형암 환자 그룹의 용량 증량기에 등록된 모든 대상체는 기존의 표준 치료로 이전에 실패했거나 조직학적으로 국소 진행성, 재발성 또는 전이성 비치료성 고형암으로 진단되었다. 환자들은 암 진단 및 관련 치료 이력을 통해 확인되었으며, 다른 병력 및 선별 검사를 통해 본 연구의 선택/제외 기준에 부합함을 확인하였다. 등록된 21명의 대상자는 결장암 10(47.6%), 직장암 5(23.8%), 유방암 2(9.5%), 난소암 1(4.7%), 활막 육종 1(4.7%), 항문암 1(4.7%) 및 자궁경부암 1(4.7%)으로 구성되었다. 수집된 모든 안전성, 약동학/약동학/면역원성 분석 결과를 토대로, 용량 증량 단계(2상 권장 용량, RP2D)에서 평가할 용량 및 투여 간격을 선택하였다.
(2) 교모세포종 환자에 대한 임상 연구는 코호트 1-5 용량 증량 단계에 등록된 환자(총 15명의 환자)의 안전성, 약역학적(pharmacodynamic)/면역원성 분석 결과를 기반으로, 2상 권장 용량 (RP2D)을 선택하기 위해 수행되었다. 심각한 독성이 없고 질병 진행의 임상적 유의성이 없는 대상체는 조사자의 임상적 유의성 및 위험 평가에 기초하여 시험 약물을 계속 투여되었다.
참여 환자의 연령 범위는 32세 내지 81세이며 여성 및 남성 모두를 포함한다. 상기 환자는 이전에 활막 육종, 침윤성 관 암종(infiltrating duct carcinoma), 직장암, 결장암, 난소암, 상행 결장암, 항문암, 침윤성 유관암(invasive ductal carcinoma), 선암종(adenocarcinoma), 전이성 대동맥 주위의 직장암(rectal cancer with paraaortic in metastatis), 신경내분비암종(자궁경부), S상 결장암 또는 교모세포종으로 진단되었다. 참여 환자는 수술, 방사선 및 화학 요법을 포함한 암 치료 중 하나 이상을 이전에 받았다.
B. 연구 설계
용량 증량 단계(1주기당 21, 28, 42, 56, 63 또는 84일)에 등록된 국소 진행성 또는 전이성 고형암 및 교모세포종 환자는 21, 28, 42, 56, 63 또는 84일 동안 각 주기의 첫날에 고정 용량의 변형된 IL-7 융합 단백질(GX-I7)을 근육내 투여되었다.
용량 증량 단계는 표 3에 나타낸 바와 같이 9단계 (또는 5단계) 용량 (60, 120, 240, 480, 720, 960, 1,200, 1,700, 및 2,000 μg/kg; 또는 60, 360, 600, 840, 1,440 μg/kg)으로 IL-7 융합 단백질의 근육내 투여를 포함하고, 안전성, 내약성 및 약동학/약역학적 변화를 평가하였다. 근육내 주사 동안, 주사부위당 주사량이 2mL를 초과하지 않도록 주사부위를 나누어 투여한다.
| 고형암 환자 | 교모세포종 환자 | 대상체 수 | ||
| 코호트(Cohort) | 용량 (μg/kg) |
코호트(Cohort) | 용량 (μg/kg) |
|
| Cohort 1 | 60 | Cohort 1 | 60 | 3+3 |
| Cohort 2 | 120 | - | - | 3+3 |
| Cohort 3 | 240 | - | - | 3+3 |
| - | - | Cohort 2 | 360 | 3+3 |
| Cohort 4 | 480 | - | - | 3+3 |
| - | - | Cohort 3 | 600 | 3+3 |
| Cohort 5 | 720 | - | - | 3+3 |
| - | - | Cohort 4 | 840 | 3+3 |
| Cohort 6 | 960 | - | - | 3+3 |
| Cohort 7 | 1,200 | - | - | 3+3 |
| - | - | Cohort 5 | 1,440 | 3+3 |
| Cohort 8 | 1,700 | - | - | 3+3 |
| Cohort 9 | 2,000 | - | - | 3+3 |
C. 안전성
1. 고형 종양 환자
용량 증량 단계 대상체(국소 진행성 또는 전이성 고형암을 앓는 총 21명의 환자)의 이상반응(비정상 실험실 시험 값, 대상체가 불평하는 임상 증상 및 징후, 연구원 평가 등)을 통해 안전성을 평가하였다. 결과는 표 4에 도시되어 있다.
총 이상반응 중, 21 중 16명(76.2%)에서 "시험 약물과 관련이 있다"고 판단된 44건의 약물 이상반응 (ADRs)이 발생했다. NCI-CTCAE (버전 4.0)에 따라 약물 이상반응 (ADR)의 중증도 등급을 분류했을 때, 29건은 경증(Grade 1), 15건은 중등도(Grade 2), ADR이 없는 grades 3, 4, 5이 보고되었다. 총 3건의 중대한 이상반응 (SAEs)이 보고되었으며, 모두 "시험 약물과의 관계 없음"으로 평가되었다. 보고된 ADR 빈도에 따르면, 주사 부위 반응이 21 중 14건(66.7%)에서 보고된 25건으로 가장 빈번하게 발생했고, 발열이 8건, 발진 또는 구진상 발진(Rash popular)이 4건, 식욕부진 2건, 무력증, 요통, 변비, 인플루엔자 유사 질환 및 근육통이 각 1건으로 보고되었다. 따라서, 약물로 인한 심각한 이상반응은 없는 것으로 확인되었다.
| n(%),[case] | GX-I7 (hIL-7-hyFc) | Total (n=21) |
|||||||
| 60 μg/kg (n=3) |
120 μg/kg (n=3) |
240 μg/kg (n=3) |
480 μg/kg (n=3) |
720 μg/kg (n=3) |
960 μg/kg (n=3) |
1200 μg/kg (n=3) |
|||
| 임의의 TEAE* | 3(100.0),[13] | 3(100.0),[29] | 3(100.0),[14] | 3(100.0),[18] | 3(100.0),[18] | 3(100.0),[4] | 3(100.0),[14] | 21(100.0),[110] | |
| ADR | 3(100.0),[6] | 2(66.7),[9] | 3(100.0),[6] | 2(66.7),[6] | 1(33.3),[5] | 2(66.7),[2] | 3(100.0),[10] | 16(76.2),[44] | |
| 중증도 | Gr1 | 2(66.7),[4] | 2(66.7),[7] | 3(100.0),[4] | 2(66.7),[4] | 1(33.3),[2] | 1(33.3),[1] | 2(66.7),[7] | 13(61.9),[29] |
| Gr2 | 1(33.3),[2] | 2(66.7),[2] | 2(66.7),[2] | 2(66.7),[2] | 1(33.3),[3] | 1(33.3),[1] | 3(100.0),[3] | 12(57.1),[15] | |
| Gr3 | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| Gr4 | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| Gr5 | - | - | - | - | - | - | - | - | |
| ADR 선호 용어 | |||||||||
| 주사 부위 반응 | 3(100.0),[6] | 2(66.7),[5] | 3(100.0),[3] | 2(66.7),[4] | 1(33.3),[3] | - | 3(100.0),[4] | 14(66.7),[25] | |
| 발열 | 1(33.3),[1] | 1(33.3),[1] | 1(33.3),[2] | - | 1(33.3),[1] | 2(66.7),[3] | 6(28.6),[8] | ||
| 발진/구진상 발진 | 1(33.3),[1] | - | - | 1(33.3),[1] | 1(33.3),[1] | 1(33.3),[1] | 4(19.0),[4] | ||
| 식욕부진 | 1(33.3),[1] | - | - | - | - | 1(33.3),[1] | 2(9.5),[2] | ||
| 무력증 | - | - | 1(33.3),[1] | - | - | - | 1(4.8),[1] | ||
| 요통 | 1(33.3),[1] | - | - | - | - | 1(4.8),[1] | |||
| 변비 | - | - | - | - | 1(33.3),[1] | - | 1(4.8),[1] | ||
| 인플루엔자 유사 질환 | - | - | - | - | - | - | 1(33.3),[1] | 1(4.8),[1] | |
| 근육통 | - | - | 1(33.3),[1] | - | - | - | 1(4.8),[1] | ||
* TEAE: 치료 응급 이상반응
2. 교모세포종 환자
용량 증량 단계 동안 보고된 15명의 교모세포종 환자의 이상반응(비정상 실험실 시험 값, 대상체가 불평하는 임상 증상 및 징후, 조사자 평가 등)을 통해 안전성을 평가하였다. 표 5 참조.
총 이상반응 중, 15 중 13명(86.7%)의 대상체에서 "시험 약물과 관련이 있다"고 판단된 32건의 약물 이상반응이 발생하였다. 각 군에서 60㎍/kg군 1명(33.3%, 2건), 360μg/kg군 3명(100.0%, 10건), 600μg/kg군 3명(100.0%, 5건), 840 μg/kg 군 3명(100.0%, 7건), 및 1,440 μg/kg 군 3명(100.0%, 8건)이었다. NCI-CTCAE (버전 4.0)에 따라 약물 이상반응 (ADR)의 중증도에 따라 등급을 분류했을 때, 21건은 경증(Grade 1), 11건은 중등도(Grade 2), grades 3, 4, 5의 ADR은 없는 것으로 보고되었다. 보고된 ADR의 빈도에 따르면, 주사 부위 반응이 15 중 11건(66.0%)에서 보고된 9건으로 가장 빈번하게 발생했다. 두드러기 6건, 가려움증 3건, 열감, 발열, 및 종창(Swelling) 각각 2건 및 주사 부위 통증, 근육통, 말초 부종, 피로, 발진 각각 1건이 보고되었다. 따라서, 약물로 인한 심각한 이상반응은 없는 것으로 확인되었다.
| n(%),[case] | GX-I7 (변형된 IL-7 - Fc 융합 단백질) | Total (n=15) |
|||||
| 60 μg/kg (n=3) |
360 μg/kg (n=3) |
600 μg/kg (n=3) |
840 μg/kg (n=3) |
1,440 μg/kg (n=3) |
|||
| 임의의 TEAE* | 3(100.0),[22] | 3(100.0),[22] | 3(100.0),[24] | 3(100.0),[18] | 3(100.0),[9] | 15(100.0),[95] | |
| ADR | 1(33.3),[2] | 3(100.0),[10] | 3(100.0),[5] | 3(100.0),[7] | 3(100.0),[8] | 13(86.7),[32] | |
| 중증도 | Gr1 | 1(33.3),[1] | 3(100.0),[7] | 3(100.0),[5] | 2(66.7),[2] | 2(66.7),[6] | 11(73.3),[21] |
| Gr2 | 1(33.3),[1] | 1(33.3),[3] | 0(0.0),[0] | 3(100.0),[5] | 2(66.7),[2] | 8(53.3),[11] | |
| Gr3 | |||||||
| Gr4 | |||||||
| Gr5 | |||||||
| ADR 선호 용어 | |||||||
| 주사 부위 반응 | 1(33.3),[1] | 3(100.0),[5] | 1(33.3),[1] | 2(66.7),[2] | 2(66.7),[2] | 9(66.0),[11] | |
| 주사 부위 통증 | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 1(33.3),[1] | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 1(6.7),[1] | |
| 두드러기 | 1(33.3),[1] | 1(33.3),[1] | 2(66.7),[2] | 1(33.3),[1] | 1(33.3),[1] | 6(66.7),[6] | |
| 가려움증 | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 1(33.3),[1] | 2(66.7),[2] | 3(20.0),[3] | |
| 열감 | 0(0.0),[0] | 1(33.3),[1] | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 1(33.3),[1] | 2(13.3),[2] | |
| 발열 | 0(0.0),[0] | 1(33.3),[1] | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 1(33.3),[1] | 2(13.3),[2] | |
| 종창 | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 1(33.3),[1] | 1(33.3),[1] | 2(13.3),[2] | |
| 근육통 | 0(0.0),[0] | 1(33.3),[1] | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 1(6.7),[1] | |
| 말초 부종 | 0(0.0),[0] | 1(33.3),[1] | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 1(6.7),[1] | |
| 피로 | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 1(33.3),[1] | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 1(6.7),[1] | |
| 발진 | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 0(0.0),[0] | 1(33.3),[2] | 0(0.0),[0] | 1(6.7),[2] | |
* TEAE: 치료 응급 이상반응
3. 약동학
약동학적 파라미터의 경우, 각 대상체에 대해 값을 계산하고, 이들의 평균, 표준 편차, 최소값 및 최대값을 각 용량 그룹에 대한 기술 통계로서 제시했다.
변형된 IL-7 융합 단백질 GX-I7의 투여 전 (0시간) 및 투여 후 0.5, 6, 12, 24, 48, 72, 168, 336 및 504시간에 혈액을 수집하고, 혈액 내 IL-7의 농도는 상업적으로 이용가능한 ELISA 키트(R&D Systems의 Human IL-7 Quantikine HS ELISA Kit HS750)를 사용하여 분석하였고, 그 결과는 표(PK 파라미터) 및 그래프에 도시되어 있다.
각 용량 그룹에서 각 대상체에 대한 혈중 농도-시간 곡선은 [도 2]에 도시되어 있고, 약동학적 파라미터는 표 6에 제시되어 있다. 모든 용량 그룹에서 투여 전 및 투여 후, IL-7 융합 단백질의 근육내 투여에 따른 혈중 농도 측정 결과. IL-7의 혈중 농도는 용량 의존적으로 증가하는 것으로 관찰되었다.
첫 번째 근육내 투여에서, 변형된 IL-7 융합 단백질의 혈중 농도는 각 용량에 대해 평균 12 내지 48시간 내에 최고 혈중 농도에 도달한 후 감소하였고, 반감기(t1/2)는 33 내지 147시간이었다. 사이에 차이가 있었다.
개체 간에 차이가 있지만, Cmax 및 AUClast는 시험 약물의 용량이 증가함에 따라 증가하는 경향이 있었고, Cmax 및 AUClast 는 960㎍/kg에서 보다 1,200㎍/kg에서 증가된 용량보다 더 많이 증가하였다. 용량에 따른 Cmax 및 AUClast 변화 사이의 상관관계는 도 3A 및 3B에 제시되어 있다.
| 코호트(Cohort) | 용량 (μg/kg) |
tmax 1) | Cmax 2) | AUC0-168hr 2) | AUClast 2) |
| (h) | (ng/mL) | (h*ng/mL) | (h*ng/mL) | ||
| Cohort 1 (n=3) |
60 | 12(6,12) | 2.08±0.47 | 109.1±13.2 | 207.8±131.2 |
| Cohort 2(n=3) | 120 | 12(12, 72) | 2.74±9.42 | 221.5±570.4 | 380.0±722.4 |
| Cohort 3(n=3) | 240 | 48(12, 48) | 4.89±10.04 | 402.6±499.5 | 523.1±534.8 |
| Cohort 4(n=3) | 480 | 24(6, 24) | 6.87±7.17 | 565.1±413.6 | 821.5±314.1 |
| Cohort 5(n=3) | 720 | 48(12, 72) | 22.4±7.77 | 1932.9±96.4 | 2309.2±119.7 |
| Cohort 6(n=3) | 960 | 24(12, 72) | 25.2±20.1 | 2567.0±1990.7 | 3444.3±2300.3 |
| Cohort 7(n=3) | 1200 | 24(24, 48) | 82.9±58.0 | 6858.9±2442.8 | 8161.7±3027.7 |
| Cohort 8 (n=2) |
1700 | 36 (24, 48) | 75.8±41.6 | 7220.6±1773.3 | 7875.1±2923.2 |
[참고] Cmax=최대 농도; tmax=최대 농도까지의 시간; AUC0-168h=0 시간에서 168h 시점까지의 곡선 아래 면적; 1) 중앙값 (min,max), 2)Geomean ± SD
4. 약역학적(PD) 특성
(a) 고형암 환자에 대한 임상 시험
국소 진행성 또는 전이성 고형암 환자에서 IL-7 융합 단백질의 활성에 대한 탐색적 약역학적 지표로 적용될 수 있는 바이오마커를 평가하기 위해, 용량 증량 단계에 등록된 21명의 대상체에게 시험 약물을 투여하였다. 전후에 말초 혈액을 채취하여 다양한 면역세포의 종류와 혈액 내 변화율을 측정하였다.
(b) 교모세포종 환자에 대한 임상 시험
교모세포종 환자에서 IL-7 융합 단백질의 활성에 대한 탐색적 약역학적 지표로 적용될 수 있는 바이오마커 평가를 위한 용량 증량 단계에 등록된 15명의 대상체에서 시험 약물 투여 전후 말초. 혈액을 채취하여 다양한 면역 세포 유형 및 혈액 내 비율 변화를 측정하였다.
4.1 IL-7 융합 단백질의 투여에 의한 절대 림프구 수치 (ALC)의 변화
절대 림프구 수치 (ALC)를 측정하기 위해, 전체 환자 그룹에 대한 각 투여 그룹(코호트, Cohort)에 따라, 환자의 혈액을 IL-7 융합 단백질 투여 전 및 투여 3주 후에 수집하였다. ALC의 절대값은 분석기를 이용하여 측정하였다.
저용량(60-120㎍/kg & 60㎍/kg), 중간 용량(240-480㎍/kg & 360-600㎍/kg), 고용량(720-1,200㎍/kg & 840- 1,440 μg/kg) 그룹의 고형암 및 교모세포종 환자 그룹 ㎍/kg & 840-1,440 ㎍/kg) 및 기준선으로부터 3주 동안의 절대 ALC 값의 변화는 도 4A 및 4B에 제시되어 있다. 그 결과, 고용량 그룹(720-1,440㎍/kg)에서 ALC의 절대값 변화가 기준선 값에 비해 4.4배까지 증가함을 확인하였다. 이 패턴은 CD3+, CD4+, 및 CD8+ T 세포에서 동일한 증가 패턴을 나타내는 것으로 확인되었다. 도 5A, 5B, 6A, 6B, 7A 및 7B 참조.
4.2 림프구감소증 환자에서 ALC의 변화
모든 고형암 환자 및 교모세포종 환자의 경우, IL-7 융합 단백질 투여 전에 기준선 ALC 수준이 1,000 cells/mm3 미만인 환자는 림프구감소증 환자로 분류되었고, IL-7 융합 단백질은 3주마다 또는 6주마다 (고형암) 및 4주마다, 8주마다, 9주마다 또는 12주마다 (GBM)의 간격으로 투여되었다. 이후 림프구감소증 및 비림프구감소증 환자군별로 ALC의 변화를 관찰하였으며, 그 결과는 도 8A, 8B, 9A 및 9B에 도시되어 있다.
분석 결과, 비림프구감소증 환자군에서 ALC 값이 유의하게 증가하였고, ALC가 1,000 cells/mm3 미만인 림프구감소증 환자군에서 투여 3주 후 ALC 값이 정상 범위 내로 증가함을 확인하였다. 또한, 비림프구감소증 환자군에서 기준선 값 대비 변화의 크기가 림프구감소증 환자군, 특히 고용량 그룹에서 유사하게 증가함을 확인하였다.
4.3 Ki67, CD127(IL-7Rα) 및 T 세포 아형(서브세트) 분석 결과
고형암 환자에서 ALC 증가의 선행 지표인 Ki67 발현의 변화로부터, CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포 둘 다에서의 Ki67 발현량이 용량 의존적으로 CD4+ T 세포와 CD8+ T 세포 둘 다에서 증가되었음을 확인하였다. 한편, IL-7의 수용체인 CD127의 발현 수준은 고용량에서 기준 수준에 비해 현저히 감소함을 확인하였다. 또한, 면역계를 조절하는 조절 T 세포(Treg 세포)와 비교하여 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포(CD4+/Treg 비율 및 CD8+/Treg 비율) 수의 변화는 모든 용량 그룹에서 기준선과 비교하여 CD4+ 및 CD8+ T 세포가 Treg 세포의 증가보다 더 증가했음을 나타낸다. 도 10A, 10B 및 10C 참조.
4.4 최적 투여 간격 설정을 위한 Ki67 발현 및 ALC 변화 분석
4.4.A. 투여 간격을 설정하기 위한 전임상 연구 결과
투여 간격을 설정하기 위한 IL-7 융합 단백질의 반응성을 확인하기 위해, 원숭이 실험에서 얻은 혈액 샘플을 사용하여 시험관 내 각 시점에서 IL-7 융합 단백질의 자극 7일 후 Ki67 반응성을 확인하였다. 이의 혈액 샘플링 시점은 도 11에 도시되어 있다.
그 결과, PBMCs에서, IL-7 융합 단백질 투여 14, 10 및 3일 전에는 Ki67의 발현이 IL-7 융합 단백질의 자극에 의해 증가된 반면, IL-7 융합 단백질의 투여 후. 4일, 11일, 및 18일째에 수득한 혈액 샘플에서 IL-7 융합 단백질에 의한 Ki67의 발현은 감소하는 것을 확인하였다. 이러한 경향은 CD4+ 및 CD8+ T 세포 모두에서 관찰되었으며, 31일, 45일, 59일, 및 73일째에 혈액 샘플에서 Ki67 발현이 증가하는 것을 확인하였다.
상기 결과는 IL-7 융합 단백질에 의한 T 세포의 첫 번째 증식 후, 재증식이 나타나기까지 특정 기간의 시간이 걸릴 수 있음을 시사한다. 변곡점이 증가할 것으로 예상된다. 또한, 일부 개체(ZC5M03)는 약 5-6주에 그들의 반응성을 회복하는 것으로 관찰되었다. 도 12A 및 12B.
4.4.B. 투여 간격 설정에 대한 임상 연구 결과
암 환자에서 단일 요법으로 IL-7 융합 단백질의 단회 투여에 따른 ALC의 변화를 측정한 결과, 고용량 그룹에서 1차 투여에 의해 증가된 ALC가 최대 12주 동안 유지되는 것으로 나타났다. 이는 투여 간격을 설정함에 있어 8~12주 이상(예: 15주)의 간격을 유지하는 것이 가능함을 시사한다. 도 13A 및 13B 참조.
교모세포종 환자에 대한 연구에서, 실제 IL-7 융합 단백질은 단독으로 투여되었을 뿐만 아니라, 교모세포종 환자에 대한 표준 치료법으로서 화학 요법(TMZ)을 포함한 다양한 다른 항암제와 조합하여 투여되었다. ALC는 반복 투여에 의해 유의하게 증가하였다. 그 결과는 IL-7 융합 단백질의 단회 또는 반복 투여에 의해 기존 화학 요법 약물(급속 증식하는 세포를 우선적으로 사멸시킴)에 의해 일반적으로 감소되는 절대 림프구 수치(ALC)의 수를 일정 수준 이상으로 유지할 수 있음을 보여주었다. 따라서, IL-7 융합 단백질은 기존의 항암치료를 강화하거나 개선할 것으로 기대된다. 도 14A, 14B, 및 14C.
4.5 IL-7 융합 단백질의 투여 후 T 세포 서브세트, NK 세포 및 B 세포의 변화
IL-7 융합 단백질로서 GX-I7을 투여받은 환자군에서 CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 아형 분석 결과, CD4+ T 세포 및 CD8+ T 세포의 용량 의존적 증가가 관찰되었다. 나이브(Naive) CD4+ 및 CD8+ T 세포의 증가는 기준선과 비교하여 가장 컸다. 또한, 이들의 CCR5 발현은 각 용량에서 기준선 값과 비교하여 증가되었으며, 이는 IL-7 융합 단백질 투여가 T 세포의 종양 부위로의 이동을 유도할 수 있음을 시사한다. NK 세포도 기준선에 비해 용량 의존적 증가를 나타냈다. 그러나, 기준선과 비교하여 B 세포의 증가는 관찰되지 않았다. 도 15A 및 15B 참조.
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Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Leu Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys
20 25 30
Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu
35 40 45
Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe
50 55 60
Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe
65 70 75 80
Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr
100 105 110
Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala
115 120 125
Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu
130 135 140
Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu
145 150 155 160
Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu
165 170 175
His
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Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Thr Ser Ser Asp Cys His Ile Lys Asp Lys
20 25 30
Asp Gly Lys Ala Phe Gly Ser Val Leu Met Ile Ser Ile Asn Gln Leu
35 40 45
Asp Lys Met Thr Gly Thr Asp Ser Asp Cys Pro Asn Asn Glu Pro Asn
50 55 60
Phe Phe Lys Lys His Leu Cys Asp Asp Thr Lys Glu Ala Ala Phe Leu
65 70 75 80
Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
85 90 95
Glu Glu Phe Asn Asp His Leu Leu Arg Val Ser Asp Gly Thr Gln Thr
100 105 110
Leu Val Asn Cys Thr Ser Lys Glu Glu Lys Thr Ile Lys Glu Gln Lys
115 120 125
Lys Asn Asp Pro Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Arg Glu Ile Lys Thr
130 135 140
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Lys Gly Ser Ile
145 150
<210> 3
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<400> 3
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Thr Ser Ser Glu Cys His Ile Lys Asp Lys
20 25 30
Glu Gly Lys Ala Tyr Glu Ser Val Leu Met Ile Ser Ile Asp Glu Leu
35 40 45
Asp Lys Met Thr Gly Thr Asp Ser Asn Cys Pro Asn Asn Glu Pro Asn
50 55 60
Phe Phe Arg Lys His Val Cys Asp Asp Thr Lys Glu Ala Ala Phe Leu
65 70 75 80
Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
85 90 95
Glu Glu Phe Asn Val His Leu Leu Thr Val Ser Gln Gly Thr Gln Thr
100 105 110
Leu Val Asn Cys Thr Ser Lys Glu Glu Lys Asn Val Lys Glu Gln Lys
115 120 125
Lys Asn Asp Ala Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Arg Glu Ile Lys Thr
130 135 140
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Lys Gly Ser Ile
145 150
<210> 4
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<212> PRT
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Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Leu Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys
20 25 30
Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu
35 40 45
Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe
50 55 60
Asn Phe Phe Lys Arg His Leu Cys Asp Asp Asn Lys Glu Gly Met Phe
65 70 75 80
Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr
100 105 110
Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Lys Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala
115 120 125
Leu Gly Glu Pro Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu
130 135 140
Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Ser Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu
145 150 155 160
Gln Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu
165 170 175
His
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<400> 5
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Ser Gly Lys
20 25 30
Asp Gly Gly Ala Tyr Gln Asn Val Leu Met Val Asn Ile Asp Asp Leu
35 40 45
Asp Asn Met Ile Asn Phe Asp Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Pro Asn
50 55 60
Phe Phe Lys Lys His Ser Cys Asp Asp Asn Lys Glu Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Asn Arg Ala Ser Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
85 90 95
Asp Asp Phe Lys Leu His Leu Ser Thr Val Ser Gln Gly Thr Leu Thr
100 105 110
Leu Leu Asn Cys Thr Ser Lys Gly Lys Gly Arg Lys Pro Pro Ser Leu
115 120 125
Ser Glu Ala Gln Pro Thr Lys Asn Leu Glu Glu Asn Lys Ser Ser Lys
130 135 140
Glu Gln Lys Lys Gln Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Ile Leu Leu Gln
145 150 155 160
Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Arg Gly Ile Lys Glu His
165 170 175
<210> 6
<211> 176
<212> PRT
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<223> amino acid sequence of sheep IL-7 (Accession number : Q28540)
<400> 6
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Phe Ser Gly Lys
20 25 30
Asp Gly Gly Ala Tyr Gln Asn Val Leu Met Val Ser Ile Asp Asp Leu
35 40 45
Asp Asn Met Ile Asn Phe Asp Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Pro Asn
50 55 60
Phe Phe Lys Lys His Ser Cys Asp Asp Asn Lys Glu Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
85 90 95
Asp Asp Phe Lys Leu His Leu Ser Thr Val Ser Gln Gly Thr Leu Thr
100 105 110
Leu Leu Asn Cys Thr Ser Lys Gly Lys Gly Arg Lys Pro Pro Ser Leu
115 120 125
Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Asn Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys
130 135 140
Glu Gln Arg Lys Gln Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Ile Leu Leu Gln
145 150 155 160
Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Arg Gly Ile Thr Glu His
165 170 175
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<212> PRT
<213> Homo sapiens
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accession No. P01880)
<400> 7
Ala Pro Thr Lys Ala Pro Asp Val Phe Pro Ile Ile Ser Gly Cys Arg
1 5 10 15
His Pro Lys Asp Asn Ser Pro Val Val Leu Ala Cys Leu Ile Thr Gly
20 25 30
Tyr His Pro Thr Ser Val Thr Val Thr Trp Tyr Met Gly Thr Gln Ser
35 40 45
Gln Pro Gln Arg Thr Phe Pro Glu Ile Gln Arg Arg Asp Ser Tyr Tyr
50 55 60
Met Thr Ser Ser Gln Leu Ser Thr Pro Leu Gln Gln Trp Arg Gln Gly
65 70 75 80
Glu Tyr Lys Cys Val Val Gln His Thr Ala Ser Lys Ser Lys Lys Glu
85 90 95
Ile Phe Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro
100 105 110
Thr Ala Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala
115 120 125
Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys
130 135 140
Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu
145 150 155 160
Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala
165 170 175
Val Gln Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val
180 185 190
Val Gly Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly
195 200 205
Lys Val Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser
210 215 220
Asn Gly Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu
225 230 235 240
Trp Asn Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu
245 250 255
Pro Pro Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro
260 265 270
Val Lys Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala
275 280 285
Ala Ser Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile
290 295 300
Leu Leu Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe
305 310 315 320
Ala Pro Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala
325 330 335
Trp Ser Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr
340 345 350
Tyr Thr Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala
355 360 365
Ser Arg Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His Gly Pro Met Lys
370 375 380
<210> 8
<211> 327
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<223> amino acid sequence of Partial human IgG4 constant region
(Genbank accession No. AAH25985)
<400> 8
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 9
<211> 245
<212> PRT
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<220>
<223> amino acid sequence of hyFc
<400> 9
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys
1 5 10 15
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
20 25 30
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
115 120 125
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Gly Lys
245
<210> 10
<211> 245
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> amino acid sequence of hyFcM1
<400> 10
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Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
85 90 95
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165 170 175
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180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Gly Lys
245
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<211> 245
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
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35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
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115 120 125
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130 135 140
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180 185 190
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210 215 220
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Leu Ser Leu Gly Lys
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Leu Ser Leu Gly Lys
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<213> Artificial Sequence
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Ser Gly Ser
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<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> amino acid sequence of modified IL-7(M)
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<213> Artificial Sequence
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<213> Artificial Sequence
<220>
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<400> 18
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20 25 30
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50 55 60
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<212> PRT
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Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
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Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg
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<213> Artificial Sequence
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35 40 45
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Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val
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Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly
20 25 30
Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys
35 40 45
Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu
50 55 60
Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu
65 70 75 80
Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln
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Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys
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Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp
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Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn
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Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly
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Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu
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<213> Artificial Sequence
<220>
<223> amino acid sequence of modified IL-7(MM) fused hyFc
<400> 22
Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser
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Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
275 280 285
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
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<211> 400
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> amino acid sequence of modified IL-7(MMM) fused hyFc
<400> 23
Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
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Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
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Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg
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Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu
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Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly
180 185 190
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
195 200 205
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
210 215 220
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
225 230 235 240
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
245 250 255
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
260 265 270
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
275 280 285
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
290 295 300
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
305 310 315 320
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
325 330 335
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
340 345 350
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
355 360 365
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
370 375 380
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
385 390 395 400
<210> 24
<211> 400
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> amino acid sequence of modified IL-7(MGM) fused hyFc
<400> 24
Met Gly Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
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Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
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Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro
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Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu
115 120 125
Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys
130 135 140
Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg
145 150 155 160
Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu
165 170 175
Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly
180 185 190
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
195 200 205
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
210 215 220
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
225 230 235 240
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
245 250 255
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
260 265 270
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
275 280 285
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
290 295 300
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
305 310 315 320
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
325 330 335
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
340 345 350
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
355 360 365
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
370 375 380
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
385 390 395 400
<210> 25
<211> 401
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> amino acid sequence of modified IL-7(MMMM) fused hyFc
<400> 25
Met Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr
1 5 10 15
Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys
20 25 30
Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg
35 40 45
His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala
50 55 60
Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp
65 70 75 80
Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys
85 90 95
Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln
100 105 110
Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys
115 120 125
Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr
130 135 140
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly
145 150 155 160
Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu
165 170 175
Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu
180 185 190
Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
195 200 205
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
210 215 220
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
225 230 235 240
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
245 250 255
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
260 265 270
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
275 280 285
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
290 295 300
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
305 310 315 320
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
325 330 335
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
340 345 350
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
355 360 365
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
370 375 380
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
385 390 395 400
Lys
<210> 26
<211> 397
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> amino acid sequence of human IL-7 fused hyFc
<400> 26
Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu
1 5 10 15
Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser
20 25 30
Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp
35 40 45
Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg
50 55 60
Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu
65 70 75 80
Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val
85 90 95
Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser
100 105 110
Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu
115 120 125
Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys
130 135 140
Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu
145 150 155 160
Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr
165 170 175
Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu
180 185 190
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
195 200 205
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
210 215 220
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
225 230 235 240
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
245 250 255
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
260 265 270
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
275 280 285
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
290 295 300
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
305 310 315 320
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
325 330 335
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
340 345 350
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
355 360 365
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
370 375 380
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
385 390 395
<210> 27
<211> 395
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> amino acid sequence of human IL-7 fused nonlytic mouse Fc
<400> 27
Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu
1 5 10 15
Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser
20 25 30
Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp
35 40 45
Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg
50 55 60
Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu
65 70 75 80
Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val
85 90 95
Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser
100 105 110
Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu
115 120 125
Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys
130 135 140
Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ala Ser Ala Glu Pro Arg Gly Pro
145 150 155 160
Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu
165 170 175
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu
180 185 190
Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
195 200 205
Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu
210 215 220
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr
225 230 235 240
Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser
245 250 255
Gly Lys Ala Phe Ala Cys Ala Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro
260 265 270
Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln
275 280 285
Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val
290 295 300
Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val
305 310 315 320
Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu
325 330 335
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg
340 345 350
Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val
355 360 365
Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg
370 375 380
Thr Pro Gly Lys Gly Gly Gly Asn Ser Gly Ser
385 390 395
<210> 28
<211> 531
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of human IL-7
<400> 28
atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60
cctgtggcca gctccgactg cgacatcgag ggaaaagacg gcaagcagta cgaaagcgtg 120
ctgatggtgt ccatcgacca gctgctggat tctatgaagg agattgggag taactgcctg 180
aacaatgagt tcaacttctt caaacggcac atttgtgatg ccaacaagga gggaatgttc 240
ctgtttcggg ccgctagaaa actgaggcag ttcctgaaga tgaacagcac cggagacttt 300
gatctgcatc tgctgaaagt gtctgagggc accacaatcc tgctgaactg cactgggcag 360
gtgaaaggaa ggaagcctgc cgctctggga gaggctcagc caaccaagtc actggaggaa 420
aacaaaagcc tgaaggaaca gaagaaactg aatgacctgt gctttctgaa acggctgctg 480
caggagatca aaacatgttg gaacaagatt ctgatgggca caaaggaaca c 531
<210> 29
<211> 534
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of modified IL-7(M)
<400> 29
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgga ctgcgacatc gagggcaagg acggcaagca gtacgagagc 120
gtgctgatgg tgagcatcga ccagctgctg gacagcatga aggagatcgg cagcaactgc 180
ctgaacaacg agttcaactt cttcaagaga cacatctgcg acgccaacaa ggagggcatg 240
ttcctgttca gagccgccag aaagctgaga cagttcctga agatgaacag caccggcgac 300
ttcgacctgc acctgctgaa ggtgagcgag ggcacaacca tcctgctgaa ctgcaccggc 360
caggtgaagg gcagaaagcc cgccgccctg ggcgaggccc agcccaccaa gagcctggag 420
gagaacaaga gcctgaagga gcagaagaag ctgaacgacc tgtgcttcct gaagagactg 480
ctgcaggaga tcaagacctg ctggaacaag atcctgatgg gcaccaagga gcac 534
<210> 30
<211> 537
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of modified IL-7(MM)
<400> 30
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat ggactgcgac atcgagggca aggacggcaa gcagtacgag 120
agcgtgctga tggtgagcat cgaccagctg ctggacagca tgaaggagat cggcagcaac 180
tgcctgaaca acgagttcaa cttcttcaag agacacatct gcgacgccaa caaggagggc 240
atgttcctgt tcagagccgc cagaaagctg agacagttcc tgaagatgaa cagcaccggc 300
gacttcgacc tgcacctgct gaaggtgagc gagggcacaa ccatcctgct gaactgcacc 360
ggccaggtga agggcagaaa gcccgccgcc ctgggcgagg cccagcccac caagagcctg 420
gaggagaaca agagcctgaa ggagcagaag aagctgaacg acctgtgctt cctgaagaga 480
ctgctgcagg agatcaagac ctgctggaac aagatcctga tgggcaccaa ggagcac 537
<210> 31
<211> 540
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of modified IL-7(MMM)
<400> 31
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat gatggactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120
gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180
aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240
ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300
ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360
accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420
ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480
agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540
<210> 32
<211> 540
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of modified IL-7(MGM)
<400> 32
atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60
cctgtggcca gctccatggg gatggactgc gacatcgagg gaaaagacgg caagcagtac 120
gaaagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag ctgctggatt ctatgaagga gattgggagt 180
aactgcctga acaatgagtt caacttcttc aaacggcaca tttgtgatgc caacaaggag 240
ggaatgttcc tgtttcgggc cgctagaaaa ctgaggcagt tcctgaagat gaacagcacc 300
ggagactttg atctgcatct gctgaaagtg tctgagggca ccacaatcct gctgaactgc 360
actgggcagg tgaaaggaag gaagcctgcc gctctgggag aggctcagcc aaccaagtca 420
ctggaggaaa acaaaagcct gaaggaacag aagaaactga atgacctgtg ctttctgaaa 480
cggctgctgc aggagatcaa aacatgttgg aacaagattc tgatgggcac caaggagcac 540
<210> 33
<211> 540
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of modified IL-7(DDD)
<400> 33
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcgacga tgacgactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120
gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180
aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240
ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300
ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360
accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420
ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480
agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540
<210> 34
<211> 543
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of modified IL-7(MMMM)
<400> 34
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat gatgatggac tgcgacatcg agggcaagga cggcaagcag 120
tacgagagcg tgctgatggt gagcatcgac cagctgctgg acagcatgaa ggagatcggc 180
agcaactgcc tgaacaacga gttcaacttc ttcaagagac acatctgcga cgccaacaag 240
gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc 300
accggcgact tcgacctgca cctgctgaag gtgagcgagg gcacaaccat cctgctgaac 360
tgcaccggcc aggtgaaggg cagaaagccc gccgccctgg gcgaggccca gcccaccaag 420
agcctggagg agaacaagag cctgaaggag cagaagaagc tgaacgacct gtgcttcctg 480
aagagactgc tgcaggagat caagacctgc tggaacaaga tcctgatggg caccaaggag 540
cac 543
<210> 35
<211> 1284
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of modified IL-7(M) fused hyFc
<400> 35
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgga ctgcgacatc gagggcaagg acggcaagca gtacgagagc 120
gtgctgatgg tgagcatcga ccagctgctg gacagcatga aggagatcgg cagcaactgc 180
ctgaacaacg agttcaactt cttcaagaga cacatctgcg acgccaacaa ggagggcatg 240
ttcctgttca gagccgccag aaagctgaga cagttcctga agatgaacag caccggcgac 300
ttcgacctgc acctgctgaa ggtgagcgag ggcacaacca tcctgctgaa ctgcaccggc 360
caggtgaagg gcagaaagcc cgccgccctg ggcgaggccc agcccaccaa gagcctggag 420
gagaacaaga gcctgaagga gcagaagaag ctgaacgacc tgtgcttcct gaagagactg 480
ctgcaggaga tcaagacctg ctggaacaag atcctgatgg gcaccaagga gcacaggaac 540
acaggcagag gcggcgagga gaagaagaag gagaaggaga aggaggagca ggaggaaaga 600
gagaccaaga cccccgagtg ccccagccac acccagcccc tgggcgtgtt cctgttccct 660
cccaagccca aggacaccct gatgatcagc agaacccccg aggtgacctg cgtggtcgtg 720
gatgtgagcc aggaagatcc cgaagtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaagtg 780
cacaacgcca agaccaagcc cagagaagag cagttcaact ccacctacag agtggtgagc 840
gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtgtcc 900
aacaaaggcc tgcccagctc catcgagaag accatcagca aagccaaagg ccagcccaga 960
gaaccccagg tgtacaccct gcctcccagc caggaagaga tgaccaagaa ccaggtgtcc 1020
ctgacctgcc tggtgaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggaaagcaac 1080
ggccagcccg agaacaatta caagacaacc cctcccgtgc tggatagcga tggcagcttc 1140
tttctgtaca gcagactgac cgtggacaag agcagatggc aggaaggcaa cgtgttcagc 1200
tgcagcgtga tgcacgaagc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gtccctgagc 1260
ctgggcaagt gactcgagtc taga 1284
<210> 36
<211> 1272
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of modified IL-7(MM) fused hyFc
<400> 36
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat ggactgcgac atcgagggca aggacggcaa gcagtacgag 120
agcgtgctga tggtgagcat cgaccagctg ctggacagca tgaaggagat cggcagcaac 180
tgcctgaaca acgagttcaa cttcttcaag agacacatct gcgacgccaa caaggagggc 240
atgttcctgt tcagagccgc cagaaagctg agacagttcc tgaagatgaa cagcaccggc 300
gacttcgacc tgcacctgct gaaggtgagc gagggcacaa ccatcctgct gaactgcacc 360
ggccaggtga agggcagaaa gcccgccgcc ctgggcgagg cccagcccac caagagcctg 420
gaggagaaca agagcctgaa ggagcagaag aagctgaacg acctgtgctt cctgaagaga 480
ctgctgcagg agatcaagac ctgctggaac aagatcctga tgggcaccaa ggagcacagg 540
aacacaggca gaggcggcga ggagaagaag aaggagaagg agaaggagga gcaggaggaa 600
agagagacca agacccccga gtgccccagc cacacccagc ccctgggcgt gttcctgttc 660
cctcccaagc ccaaggacac cctgatgatc agcagaaccc ccgaggtgac ctgcgtggtc 720
gtggatgtga gccaggaaga tcccgaagtg cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggaa 780
gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagaa gagcagttca actccaccta cagagtggtg 840
agcgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg 900
tccaacaaag gcctgcccag ctccatcgag aagaccatca gcaaagccaa aggccagccc 960
agagaacccc aggtgtacac cctgcctccc agccaggaag agatgaccaa gaaccaggtg 1020
tccctgacct gcctggtgaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggaaagc 1080
aacggccagc ccgagaacaa ttacaagaca acccctcccg tgctggatag cgatggcagc 1140
ttctttctgt acagcagact gaccgtggac aagagcagat ggcaggaagg caacgtgttc 1200
agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaagag cctgtccctg 1260
agcctgggca ag 1272
<210> 37
<211> 1275
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of modified IL-7(MMM) fused hyFc
<400> 37
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat gatggactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120
gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180
aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240
ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300
ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360
accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420
ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480
agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540
aggaacacag gcagaggcgg cgaggagaag aagaaggaga aggagaagga ggagcaggag 600
gaaagagaga ccaagacccc cgagtgcccc agccacaccc agcccctggg cgtgttcctg 660
ttccctccca agcccaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgcgtg 720
gtcgtggatg tgagccagga agatcccgaa gtgcagttca actggtacgt ggatggcgtg 780
gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaagagcagt tcaactccac ctacagagtg 840
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 900
gtgtccaaca aaggcctgcc cagctccatc gagaagacca tcagcaaagc caaaggccag 960
cccagagaac cccaggtgta caccctgcct cccagccagg aagagatgac caagaaccag 1020
gtgtccctga cctgcctggt gaaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa 1080
agcaacggcc agcccgagaa caattacaag acaacccctc ccgtgctgga tagcgatggc 1140
agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg 1200
ttcagctgca gcgtgatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgtcc 1260
ctgagcctgg gcaag 1275
<210> 38
<211> 1275
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of modified IL-7(MGM) fused hyFc
<400> 38
atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60
cctgtggcca gctccatggg gatggactgc gacatcgagg gaaaagacgg caagcagtac 120
gaaagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag ctgctggatt ctatgaagga gattgggagt 180
aactgcctga acaatgagtt caacttcttc aaacggcaca tttgtgatgc caacaaggag 240
ggaatgttcc tgtttcgggc cgctagaaaa ctgaggcagt tcctgaagat gaacagcacc 300
ggagactttg atctgcatct gctgaaagtg tctgagggca ccacaatcct gctgaactgc 360
actgggcagg tgaaaggaag gaagcctgcc gctctgggag aggctcagcc aaccaagtca 420
ctggaggaaa acaaaagcct gaaggaacag aagaaactga atgacctgtg ctttctgaaa 480
cggctgctgc aggagatcaa aacatgttgg aacaagattc tgatgggcac aaaggaacac 540
cgcaatactg ggcggggcgg ggaggaaaag aaaaaggaga aggaaaagga ggaacaggag 600
gaaagagaga ctaagacccc agaatgtccc agccatactc agcccctggg ggtgttcctg 660
tttcccccta aacctaagga taccctgatg atcagcagga cacccgaggt gacctgcgtg 720
gtcgtggatg tgagccagga agatcccgaa gtgcagttca actggtacgt ggatggcgtg 780
gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaagagcagt tcaactccac ctacagagtg 840
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 900
gtgtccaaca aaggcctgcc cagctccatc gagaagacca tcagcaaagc caaaggccag 960
cccagagaac cccaggtgta caccctgcct cccagccagg aagagatgac caagaaccag 1020
gtgtccctga cctgcctggt gaaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa 1080
agcaacggcc agcccgagaa caattacaag acaacccctc ccgtgctgga tagcgatggc 1140
agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg 1200
ttcagctgca gcgtgatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgtcc 1260
ctgagcctgg gcaag 1275
<210> 39
<211> 1278
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> nucleotide sequence of modified IL-7(MMMM) fused hyFc
<400> 39
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat gatgatggac tgcgacatcg agggcaagga cggcaagcag 120
tacgagagcg tgctgatggt gagcatcgac cagctgctgg acagcatgaa ggagatcggc 180
agcaactgcc tgaacaacga gttcaacttc ttcaagagac acatctgcga cgccaacaag 240
gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc 300
accggcgact tcgacctgca cctgctgaag gtgagcgagg gcacaaccat cctgctgaac 360
tgcaccggcc aggtgaaggg cagaaagccc gccgccctgg gcgaggccca gcccaccaag 420
agcctggagg agaacaagag cctgaaggag cagaagaagc tgaacgacct gtgcttcctg 480
aagagactgc tgcaggagat caagacctgc tggaacaaga tcctgatggg caccaaggag 540
cacaggaaca caggcagagg cggcgaggag aagaagaagg agaaggagaa ggaggagcag 600
gaggaaagag agaccaagac ccccgagtgc cccagccaca cccagcccct gggcgtgttc 660
ctgttccctc ccaagcccaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgc 720
gtggtcgtgg atgtgagcca ggaagatccc gaagtgcagt tcaactggta cgtggatggc 780
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaagagc agttcaactc cacctacaga 840
gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 900
aaggtgtcca acaaaggcct gcccagctcc atcgagaaga ccatcagcaa agccaaaggc 960
cagcccagag aaccccaggt gtacaccctg cctcccagcc aggaagagat gaccaagaac 1020
caggtgtccc tgacctgcct ggtgaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1080
gaaagcaacg gccagcccga gaacaattac aagacaaccc ctcccgtgct ggatagcgat 1140
ggcagcttct ttctgtacag cagactgacc gtggacaaga gcagatggca ggaaggcaac 1200
gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaagcc ctgcacaacc actacaccca gaagagcctg 1260
tccctgagcc tgggcaag 1278
<210> 40
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Synthetic oligopeptide
<400> 40
Met Met Met Met
1
Claims (50)
- 필요로 하는 대상체에서 림프구 수치를 증가시키는 방법으로서,
(i) 하기 화학식 (I)의 변형된 인터루킨-7(interleukin-7):
A - IL-7 화학식 (I)
여기서 A는 1 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드이고,
상기 IL-7은 IL-7 수용체에 결합할 수 있는 폴리펩타이드임; 또는
(ii) 다음을 포함하는 인터루킨-7(interleukin-7) 융합 단백질
(a) 변형된 인터루킨-7,
(b) 메티오닌, 글리신, 또는 이들의 조합으로 구성된 1 내지 10개의 아미노산 잔기를 갖는 올리고펩타이드를 포함하는 제2 도메인; 및
(c) 인터루킨-7 융합 단백질의 반감기를 연장하는 제3 도메인;
을 약 600 μg/kg 초과의 용량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 방법.
- 제1항에 있어서,
상기 대상체는 암; 전염병; 심장 우심실의 만성 부전; 호지킨병; 흉관(thoracic duct)내 누출 또는 파열; 항암제(예: 화학 요법), 항바이러스제 또는 글루코코르티코이드를 포함하는 처방 약물의 부작용; 저단백 식이 요법, 방사선 요법, 요독증, 자가면역 장애, 면역 결핍 증후군, 흉선절제술 또는 이들의 조합으로 인한 영양실조; 또는 특발성, 급성 방사선 증후군 (ARS) 또는 이들의 조합을 앓고 있는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 IL-7은 서열번호 1 내지 6으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 것인, 방법.
- 제3항에 있어서,
상기 A는 상기 IL-7의 N-말단에 연결된 것인, 방법.
- 제3항에 있어서,
상기 A는 메티오닌, 글리신, 메티오닌-메티오닌, 글리신-글리신, 메티오닌-글리신, 글리신-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-글리신, 메티오닌-글리신-메티오닌, 글리신-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-글리신-글리신, 글리신-메티오닌-글리신, 글리신-글리신-메티오닌, 또는 글리신-글리신-글리신인 것인, 방법.
- 제5항에 있어서,
상기 제3 도메인은 제1 도메인 또는 제2 도메인의 N-말단 또는 C-말단에 연결되는 것인, 방법.
- 제4항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 제3 도메인은 면역글로불린의 Fc 영역 또는 그의 일부, 알부민, 알부민-결합 폴리펩타이드, Pro/Ala/Ser (PAS), 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 β 서브유닛의 C-말단 펩타이드 (CTP), 폴리에틸렌글리콜(PEG), 아미노산의 긴 구조화되지 않은 친수성 서열 (XTEN), 하이드록시에틸 전분 (HES), 알부민-결합 소분자, 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나인 것인, 방법.
- 제7항에 있어서,
상기 제3 도메인은 변형된 면역글로불린의 Fc 영역을 포함하는 것인, 방법.
- 제8항에 있어서,
상기 변형된 면역글로불린은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것인, 방법.
- 제9항에 있어서,
상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 N-말단에서 C-말단 방향으로 힌지 영역, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하고,
상기 힌지 영역은 인간 IgD 힌지 영역을 포함하며,
상기 CH2 도메인은 인간 IgD 및 인간 IgG4의 CH2 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함하고,
상기 CH3 도메인은 인간 IgG4 CH3 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함하는 것인, 방법.
- 제10항에 있어서,
상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 하기 화학식 (I)로 표시되는 것인, 방법:
화학식 (I)
N'-(Z1)p-Y-Z2-Z3-Z4-C'
여기서 N'은 폴리펩타이드의 N-말단이고 C'는 폴리펩타이드의 C-말단이며;
p는 0 또는 1의 정수이고;
Z1은 서열번호 7의 90 내지 98 위치의 아미노산 잔기 중 98 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 9개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
Y는 서열번호 7의 99 내지 162 위치의 아미노산 잔기 중 162 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 64개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고;
Z2는 서열번호 7의 163 내지 199 위치의 아미노산 잔기 중 163 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 4 내지 37개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
Z3은 서열번호 8의 115 내지 220 위치의 아미노산 잔기 중 220 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 71 내지 106개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고; 및
Z4는 서열번호 8의 221 내지 327 위치의 아미노산 잔기 중 221 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 80 내지 107개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열임.
- 제1항에 있어서,
상기 제3 도메인은 서열번호 9 내지 14로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 것인, 방법.
- 제2항에 있어서,
상기 암은 고형 종양, 림프계 암 또는 백혈병인 것인, 방법.
- 제13항에 있어서,
상기 고형 종양은 활막 육종, 침윤성 관 암종(infiltrating duct carcinoma), 직장암, 결장암, 난소암, 상행 결장암, 항문암, 침윤성 유관암(invasive ductal carcinoma), 선암종(adenocarcinoma), 전이성 대동맥 주위의 직장암(rectal cancer with paraaortic in metastatis), 신경내분비암종(자궁경부), S상(sigmoid) 결장암 또는 교모세포종인 것인, 방법.
- 제1항, 제2항, 제13항 또는 제14항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 대상체는 수술, 방사선 및/또는 화학 요법을 포함하는 암 치료 중 하나 이상을 이전에 받았거나, 동시에 받거나, 받을 예정인 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 600 μg/kg 초과 내지 약 2,000 μg/kg 범위의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 720 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 1,200 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 720 μg/kg 이상, 약 840 μg/kg, 또는 약 1,440 μg/kg 이상의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 720 μg/kg 이상, 약 840 μg/kg 이상, 약 960 μg/kg 이상, 약 1,200 μg/kg 이상, 약 1,440 μg/kg 이상, 약 1,700 μg/kg 이상, 또는 약 2,000 μg/kg의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 7주, 8주, 9주, 10주, 11주, 12주, 13주, 14주, 또는 15주의 간격으로 2회 이상 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 10일, 20일, 30일, 40일, 50일, 60일, 70일, 80일, 90일, 또는 100일의 간격으로 2회 이상 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 삽입구적(parenthetically), 근육내, 피하, 안구, 정맥내, 복강내, 피내, 안와내, 대뇌내, 두개내, 척수내, 심실내, 척추강내, 수조내(intracistemally), 피막내, 또는 종양내로 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (ii) 인터류킨-7 융합 단백질을 투여하는 것을 포함하는 것인, 방법.
- 제23항에 있어서,
상기 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 대상체는 이상반응 공통 용어 기준 (Common Terminology Criteria for Adverse Events, CTCAE) 4.0 버전에 따라 결정될 때, 약 1000개 림프구 세포/혈액 μl 이하의 림프구 수치를 갖는 것인, 방법.
- 제25항에 있어서,
상기 림프구는 T 세포인 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 1주, 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 또는 약 6주의 간격으로 약 720 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 또는 약 6주의 간격으로 약 840 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 2주, 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주 또는 약 9주의 간격으로 약 960 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 또는 약 10주의 간격으로 약 1,200 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 3주, 약 4주, 약 5주, 약 6주, 약 7주, 약 8주, 약 9주, 약 10주, 약 11주, 약 12주, 약 13주, 약 14주, 약 15주, 약 2개월, 또는 약 3개월의 간격으로 약 1,440 μg/kg의 양으로 2회 이상 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 600 μg/kg 초과, 약 700 μg/kg 초과, 약 800 μg/kg 초과, 약 900 μg/kg 초과, 약 1,000 μg/kg 초과, 약 1,100 μg/kg 초과, 약 1,200 μg/kg 초과, 약 1,300 μg/kg 초과, 약 1,400 μg/kg 초과, 약 1,500 μg/kg 초과, 약 1,600 μg/kg 초과, 약 1,700 μg/kg 초과, 약 1,800 μg/kg 초과, 약 1,900 μg/kg 초과, 또는 약 2,000 μg/kg 초과의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 610 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 650 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 800 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 850 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 900 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 950 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,000 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,050 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,100 μg/kg 내지 약 1,200 μg/kg, 약 1,200 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 1,300 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 1,500 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 1,700 μg/kg 내지 약 2,000 μg/kg, 약 610 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 650 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 800 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 850 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 약 900 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg, 또는 약 950 μg/kg 내지 약 1,000 μg/kg의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 700 μg/kg 내지 약 900 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 950 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 850 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 850 μg/kg, 약 700 μg/kg 내지 약 800 μg/kg, 약 800 μg/kg 내지 약 900 μg/kg, 약 750 μg/kg 내지 약 850 μg/kg, 또는 약 850 μg/kg 내지 약 950 μg/kg의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 약 650 μg/kg, 약 680 μg/kg, 약 700 μg/kg, 약 720 μg/kg, 약 740 μg/kg, 약 750 μg/kg, 약 760 μg/kg, 약 780 μg/kg, 약 800 μg/kg, 약 820 μg/kg, 약 840 μg/kg, 약 850 μg/kg, 약 860 μg/kg, 약 880 μg/kg, 약 900 μg/kg, 약 920 μg/kg, 약 940 μg/kg, 약 950 μg/kg, 약 960 μg/kg, 약 980 μg/kg, 약 1,000 μg/kg, 약 1,020 μg/kg, 약 1,040 μg/kg, 약 1,060 μg/kg, 약 1,080 μg/kg, 약 1,100 μg/kg, 약 1,120 μg/kg, 약 1,140 μg/kg, 약 1,160 μg/kg, 약 1,180 μg/kg, 약 1,200 μg/kg, 약 1,220 μg/kg, 약 1,240 μg/kg, 약 1,260 μg/kg, 약 1,280 μg/kg, 약 1,300 μg/kg, 약 1,320 μg/kg, 약 1,340 μg/kg, 약 1,360 μg/kg, 약 1,380 μg/kg, 약 1,400 μg/kg, 약 1,420 μg/kg, 약 1,440 μg/kg, 약 1,460 μg/kg, 약 1,480 μg/kg, 약 1,500 μg/kg, 약 1,520 μg/kg, 약 1,540 μg/kg, 약 1,560 μg/kg, 약 1,580 μg/kg, 약 1,600 μg/kg, 약 1,620 μg/kg, 약 1,640 μg/kg, 약 1,660 μg/kg, 약 1,680 μg/kg, 약 1,700 μg/kg, 약 1,720 μg/kg, 약 1,740 μg/kg, 약 1,760 μg/kg, 약 1,780 μg/kg, 약 1,800 μg/kg, 약 1,820 μg/kg, 약 1,840 μg/kg, 약 1,860 μg/kg, 약 1,880 μg/kg, 약 1,900 μg/kg, 약 1,920 μg/kg, 약 1,940 μg/kg, 약 1,960 μg/kg, 약 1,980 μg/kg, 또는 약 2,000 μg/kg의 용량으로 투여되는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질은 1주에 1회, 2주에 1회, 3주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 8주에 1회, 9주에 1회, 10주에 1회, 11주에 1회, 12주에 1회, 13주에 1회, 14주에 1회, 또는 15주에 1회의 투약 빈도로 투여되는 것인, 방법.
- 제26항에 있어서,
상기 T 세포는 CD4+ 및/또는 CD8+ T 세포인 것인, 방법.
- 제26항에 있어서,
상기 T 세포는 CD4+/CD8+ T 세포인 것인, 방법.
- 제25항에 있어서,
상기 대상체는 약 800개 림프구 세포/혈액 μl 이하의 림프구 수치를 갖는 것인, 방법.
- 제25항에 있어서,
상기 대상체는 약 500개 림프구 세포/혈액 μl 이하의 림프구 수치를 갖는 것인, 방법.
- 제25항에 있어서,
상기 대상체는 약 200개 림프구 세포/혈액 μl 이하의 림프구 수치를 갖는 것인, 방법.
- 제1항 또는 제2항에 있어서,
상기 대상체는 항암제를 투여받았거나, 동시에 투여받거나, 투여될 것인, 방법.
- 제42항에 있어서,
상기 항암제는 항암 화합물인 것인, 방법.
- 제25항 또는 제42항에 있어서,
종양내 종양 침윤 림프구 (TILs)의 수는 투여 전 종양내 TILs의 수와 비교하여 상기 (i) 변형된 인터루킨-7 또는 (ii) 인터루킨-7 융합 단백질의 투여 후에 증가된 것인, 방법.
- 제44항에 있어서,
상기 TILs는 CD4+ TILs인 것인, 방법.
- 제44항에 있어서,
상기 TILs는 CD8+ TILs인 것인, 방법.
- 제44항에 있어서,
상기 TILs의 수는 투여 후 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 100%, 적어도 약 125%, 적어도 약 150%, 적어도 약 200%, 적어도 약 250%, 또는 적어도 약 300% 증가된 것인, 방법.
- 필요로 하는 대상체에서 림프구 수치를 증가시키기 위한 하기 (i) 및/또는 (ii)의 용도로서,
(i) 하기 화학식 (I)의 변형된 인터루킨-7(interleukin-7):
A - IL-7 화학식 (I)
여기서 A는 1 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드이고,
상기 IL-7은 IL-7 수용체에 결합할 수 있는 폴리펩타이드임; 및/또는
(ii) 다음을 포함하는 인터루킨-7(interleukin-7) 융합 단백질
(a) 변형된 인터루킨-7,
(b) 메티오닌, 글리신, 또는 이들의 조합으로 구성된 1 내지 10개의 아미노산 잔기를 갖는 올리고펩타이드를 포함하는 제2 도메인; 및
(c) 인터루킨-7 융합 단백질의 반감기를 연장하는 제3 도메인;
을 약 600 μg/kg 초과의 용량으로 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 용도.
- 필요로 하는 대상체에서 림프구 수치를 증가시키기 위한 의약을 제조함에 있어서 하기 (i) 및/또는 (ii)의 용도로서,
(i) 하기 화학식 (I)의 변형된 인터루킨-7(interleukin-7):
A - IL-7 화학식 (I)
여기서 A는 1 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드이고,
상기 IL-7은 IL-7 수용체에 결합할 수 있는 폴리펩타이드임; 및/또는
(ii) 다음을 포함하는 인터루킨-7(interleukin-7) 융합 단백질
(a) 변형된 인터루킨-7,
(b) 메티오닌, 글리신, 또는 이들의 조합으로 구성된 1 내지 10개의 아미노산 잔기를 갖는 올리고펩타이드를 포함하는 제2 도메인; 및
(c) 인터루킨-7 융합 단백질의 반감기를 연장하는 제3 도메인;
이고,
상기 의약은 약 600 μg/kg 초과의 용량으로 환자에게 투여되는, 용도.
- 필요로 하는 대상체에서 림프구 수치를 증가시키기 위한 약학 조성물로서,
(i) 하기 화학식 (I)의 변형된 인터루킨-7(interleukin-7):
A - IL-7 화학식 (I)
여기서 A는 1 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드이고,
상기 IL-7은 IL-7 수용체에 결합할 수 있는 폴리펩타이드임; 및/또는
(ii) 다음을 포함하는 인터루킨-7(interleukin-7) 융합 단백질
(a) 변형된 인터루킨-7,
(b) 메티오닌, 글리신, 또는 이들의 조합으로 구성된 1 내지 10개의 아미노산 잔기를 갖는 올리고펩타이드를 포함하는 제2 도메인; 및
(c) 인터루킨-7 융합 단백질의 반감기를 연장하는 제3 도메인;
을 유효성분으로 포함하고,
상기 약학 조성물은 약 600 μg/kg 초과의 용량으로 대상체에게 투여되는 것인, 약학 조성물.
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