CN116615236A - 用il-7蛋白和核苷酸疫苗的组合治疗肿瘤的方法 - Google Patents

用il-7蛋白和核苷酸疫苗的组合治疗肿瘤的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN116615236A
CN116615236A CN202180081884.6A CN202180081884A CN116615236A CN 116615236 A CN116615236 A CN 116615236A CN 202180081884 A CN202180081884 A CN 202180081884A CN 116615236 A CN116615236 A CN 116615236A
Authority
CN
China
Prior art keywords
days
administered
protein
fold
aspects
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180081884.6A
Other languages
English (en)
Inventor
李秉河
崔东勋
威廉·吉兰德斯
陈艾娜
西蒙·彼得·格德格布雷
黎立瑾
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
New Immune Technology Co ltd
University of Washington
Original Assignee
New Immune Technology Co ltd
University of Washington
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by New Immune Technology Co ltd, University of Washington filed Critical New Immune Technology Co ltd
Publication of CN116615236A publication Critical patent/CN116615236A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A61K38/2046—IL-7
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001136—Cytokines
    • A61K39/00114—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6813—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin the drug being a peptidic cytokine, e.g. an interleukin or interferon
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55522—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K2039/55527—Interleukins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本公开涉及用核苷酸疫苗(例如，编码肿瘤抗原的DNA疫苗)与IL‑7的组合治疗肿瘤的方法。在一些方面，所述IL‑7在所述核苷酸疫苗的施用之后(例如，在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后)施用。

Description

用IL-7蛋白和核苷酸疫苗的组合治疗肿瘤的方法
相关申请的交叉引用
此PCT申请要求2020年11月5日提交的美国临时申请号63/110,142的优先权权益，所述临时申请以引用的方式整体并入本文。
对经由EFS-WEB以电子方式提交的序列表的引用
与本申请一起提交的ASCII文本文件(名称：4241_017PC01_SeqListing_ST25.txt；大小：83,472字节；和创建日期：2021年11月5日)中的电子提交序列表的内容以引用的方式整体并入本文。
背景技术
癌症仍然是现代世界的主要死因之一。目前临床上实施的标准治疗，包括手术、放射、化学疗法和免疫疗法，收效甚微。这些疗法通常仅对早期局部肿瘤有效，而很少对晚期转移性恶性肿瘤有效，导致频繁复发或最终对所述疗法产生抗性。Sharma,P.,等人,Cell168(4):707-723(2017)。此外，放射和化学疗法中使用的各种剂都会损害正常组织，这会导致不合需要的副作用。因此，仍然需要在癌症患者中具有可接受的安全性和高功效的新治疗选择。
发明内容
本文公开了一种治疗有需要的受试者中的肿瘤的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中核苷酸疫苗的施用诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中IL-7在核苷酸疫苗施用后约14天内、约13天内、约12天内、约11天内、约10天内、约九天内、约八天内、约七天内、约六天内、约五天内、约四天内、约三天内、约两天内或约一天内施用于受试者。在一些方面，IL-7在核苷酸疫苗施用后约七天内施用。在一些方面，IL-7和核苷酸疫苗同时施用于受试者。
本文公开了一种治疗有需要的受试者中的肿瘤的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中核苷酸疫苗的施用诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用于受试者。
在一些方面，与参考(例如，接受单独IL-7或单独核苷酸疫苗的受试者的对应值)相比，受试者中的肿瘤体积在施用后减小。在某些方面，与参考相比，肿瘤体积在施用后减小至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约100％。
本文还提供了一种预防或减少有需要的受试者中的肿瘤发生的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中核苷酸疫苗的施用诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中核苷酸疫苗、IL-7，或核苷酸疫苗和IL-7两者在肿瘤发生之前施用于受试者。
在一些方面，IL-7在核苷酸疫苗施用后约14天内、约13天内、约12天内、约11天内、约10天内、约九天内、约八天内、约七天内、约六天内、约五天内、约四天内、约三天内、约两天内或约一天内施用于受试者。在一些方面，IL-7在核苷酸疫苗施用后约七天内施用于受试者。在一些方面，IL-7和核苷酸疫苗同时施用于受试者。
本文还提供了一种延长有需要的受试者中的肿瘤特异性T细胞免疫反应的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中核苷酸疫苗的施用诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用于受试者。
本公开还提供了一种延长有需要的受试者中的肿瘤特异性T细胞免疫反应的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中核苷酸疫苗的施用诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中IL-7在核苷酸疫苗施用后约14天内、约13天内、约12天内、约11天内、约10天内、约九天内、约八天内、约七天内、约六天内、约五天内、约四天内、约三天内、约两天内或约一天内施用于受试者。在一些方面，IL-7在核苷酸疫苗施用后约七天内施用。在一些方面，IL-7和核苷酸疫苗同时施用于受试者。
在一些方面，与参考(例如，接受单独IL-7或单独核苷酸疫苗的受试者的对应值)相比，在肿瘤特异性T细胞免疫反应的收缩阶段期间，IL-7的施用增加肿瘤特异性T细胞的存活率。在某些方面，与参考相比，收缩阶段期间的肿瘤特异性T细胞的存活率增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
在一些方面，与参考(例如，接受单独IL-7或单独核苷酸疫苗的受试者的对应值)相比，在肿瘤特异性T细胞免疫反应的收缩阶段期间，IL-7的施用增加肿瘤特异性T细胞的数目。在某些方面，与参考相比，肿瘤特异性T细胞反应的收缩阶段期间的肿瘤特异性T细胞的数目增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
本文提供了一种扩展有需要的受试者中的肿瘤特异性T细胞免疫反应的T细胞受体(TCR)库的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中核苷酸疫苗的施用诱导针对肿瘤抗原的一个或多个表位的肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用于受试者。
还提供了一种扩展有需要的受试者中的肿瘤特异性T细胞免疫反应的T细胞受体(TCR)库的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中核苷酸疫苗的施用诱导针对肿瘤抗原的一个或多个表位的肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中IL-7在核苷酸疫苗施用后约14天内、约13天内、约12天内、约11天内、约10天内、约九天内、约八天内、约七天内、约六天内、约五天内、约四天内、约三天内、约两天内或约一天内施用于受试者。在一些方面，IL-7在核苷酸疫苗施用后约七天内施用。在一些方面，IL-7和核苷酸疫苗同时施用于受试者。
在一些方面，与参考(例如，接受单独IL-7或单独核苷酸疫苗的受试者的对应值)相比，施用增加了针对其诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应的表位数目。在某些方面，与参考相比，针对其诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应的表位数目增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
在一些方面，肿瘤抗原来源于乳腺癌并且表位选自Lrrc27、Plekho1、Pttg1、Xpo4、Exoc4、Pank3、Tmem101、Map3k6、Met、BC057079、Hist1h3e、Prkag1、Neil3或它们的组合。
在一些方面，施用诱导针对肿瘤抗原上至少约三个、至少约四个、至少约五个、至少约六个、至少约七个、至少约八个、至少约九个、至少约10个、至少约11个、至少约12个、或至少约13个或更多个表位的肿瘤特异性T细胞免疫反应。
本公开还提供了一种增加有需要的受试者中的针对肿瘤抗原的亚显性表位的T细胞免疫反应的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原(其包含亚显性表位)的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用于受试者。
本文还公开了一种增加有需要的受试者中的针对肿瘤抗原的亚显性表位的T细胞免疫反应的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原(其包含亚显性表位)的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中IL-7在核苷酸疫苗施用后约14天内、约13天内、约12天内、约11天内、约10天内、约九天内、约八天内、约七天内、约六天内、约五天内、约四天内、约三天内、约两天内或约一天内施用于受试者。在一些方面，IL-7在核苷酸疫苗施用后约七天内施用。在一些方面，IL-7和核苷酸疫苗同时施用于受试者。
在一些方面，与参考(例如，接受单独IL-7或单独核苷酸疫苗的受试者的对应值)相比，针对肿瘤抗原的亚显性表位的T细胞免疫反应增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
在任何上述方法中，在一些方面，肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段发生在最初施用核苷酸疫苗后约七天、约八天、约九天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天或约15天。在一些方面，肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段发生在最初施用核苷酸疫苗后约11天。
在本文所公开的方法中，在一些方面，IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段后至少约一天、约两天、约三天、约四天、约五天、约六天、约七天、约八天、约九天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天、约20天、约21天、约22天、约23天、约24天、约25天、约26天、约27天、约28天、约29天、或约30天或更长时间施用。在某些方面，IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段后约两天施用。
在一些方面，IL-7以约5mg/kg与约15mg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7以约5mg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7以约20μg/kg与约600μg/kg之间的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约20μg/kg、约60μg/kg、约120μg/kg、约240μg/kg、约480μg/kg或约600μg/kg的剂量施用。
在一些方面，IL-7蛋白以大于约600μg/kg、大于约700μg/kg、大于约800μg/kg、大于约900μg/kg、大于约1,000μg/kg、大于约1,100μg/kg、大于约1,200μg/kg、大于约1,300μg/kg、大于约1,400μg/kg、大于约1,500μg/kg、大于约1,600μg/kg、大于约1,700μg/kg、大于约1,800μg/kg、大于约1,900μg/kg或大于约2,000μg/kg的剂量施用。
在一些方面，IL-7蛋白以约610μg/kg与约1,200μg/kg之间、约650μg/kg与约1,200μg/kg之间、约700μg/kg与约1,200μg/kg之间、约750μg/kg与约1,200μg/kg之间、约800μg/kg与约1,200μg/kg之间、约850μg/kg与约1,200μg/kg之间、约900μg/kg与约1,200μg/kg之间、约950μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,000μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,050μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,100μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,200μg/kg与约2,000μg/kg之间、约1,300μg/kg与约2,000μg/kg之间、约1,500μg/kg与约2,000μg/kg之间、约1,700μg/kg与约2,000μg/kg之间、约610μg/kg与约1,000μg/kg之间、约650μg/kg与约1,000μg/kg之间、约700μg/kg与约1,000μg/kg之间、约750μg/kg与约1,000μg/kg之间、约800μg/kg与约1,000μg/kg之间、约850μg/kg与约1,000μg/kg之间、约900μg/kg与约1,000μg/kg之间或约950μg/kg与约1,000μg/kg之间的剂量施用。
在一些方面，IL-7蛋白以约700μg/kg与约900μg/kg之间、约750μg/kg与约950μg/kg之间、约700μg/kg与约850μg/kg之间、约750μg/kg与约850μg/kg之间、约700μg/kg与约800μg/kg之间、约800μg/kg与约900μg/kg之间、约750μg/kg与约850μg/kg之间或约850μg/kg与约950μg/kg之间的剂量施用。
在一些方面，IL-7蛋白以约650μg/kg、约680μg/kg、约700μg/kg、约720μg/kg、约740μg/kg、约750μg/kg、约760μg/kg、约780μg/kg、约800μg/kg、约820μg/kg、约840μg/kg、约850μg/kg、约860μg/kg、约880μg/kg、约900μg/kg、约920μg/kg、约940μg/kg、约950μg/kg、约960μg/kg、约980μg/kg、约1000μg/kg、约1100μg/kg、约1200μg/kg、约1,300μg/kg、约1,400μg/kg、约1,440μg/kg、约1,500μg/kg、约1,600μg/kg、约1,700μg/kg、约1,800μg/kg、约1,900μg/kg或约2,000μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7以约一周一次、约两周一次、约三周一次、约四周一次、约五周一次、约六周一次、约七周一次、约八周一次、约九周一次、约10周一次、约11周一次或约12周一次的给药频率施用。
在此处所公开的任何方法中，在一些方面，核苷酸疫苗包括DNA疫苗、mRNA疫苗或两者。在某些方面，核苷酸疫苗是DNA疫苗。在一些方面，IL-7作为蛋白质(IL-7蛋白)、编码IL-7蛋白的核酸或两者施用。
在一些方面，受试者是人。
在一些方面，本文所公开的方法的IL-7蛋白不是野生型IL-7。在某些方面，IL-7蛋白是融合蛋白。在某些方面，IL-7蛋白包含由1至10个氨基酸残基组成的寡肽。在一些方面，寡肽包括蛋氨酸(M)、甘氨酸(G)、蛋氨酸-蛋氨酸(MM)、甘氨酸-甘氨酸(GG)、蛋氨酸-甘氨酸(MG)、甘氨酸-蛋氨酸(GM)、蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MMM)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MMG)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGM)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GMM)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MGG)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMG)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGM)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GGG)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGGM)(SEQ ID NO:41)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MMGG)(SEQ ID NO:42)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GGMM)(SEQ ID NO:43)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MGMG)(SEQ ID NO:44)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMMG)(SEQ ID NO:45)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGGM)(SEQ ID NO:46)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MGGG)(SEQ ID NO:47)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GMGG)(SEQ IDNO:48)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GGMG)(SEQ ID NO:49)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GGMMM)(SEQ ID NO:50)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GGGMM)(SEQ ID NO:51)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGGGM)(SEQ ID NO:52)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MGMMM)(SEQ ID NO:53)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MGGMM)(SEQ ID NO:54)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGGGM)(SEQID NO:55)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MMGMM)(SEQ ID NO:56)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MMGGM)(SEQ ID NO:57)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MMGGG)(SEQ ID NO:58)、蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MMMGM)(SEQ ID NO:59)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGMGM)(SEQ ID NO:60)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMGMG)(SEQ ID NO:61)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMMMG)(SEQ ID NO:62)，甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGMGM)(SEQ ID NO:63)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GGMMG)(SEQ ID NO:64)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GMMGM)(SEQ ID NO:65)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MGMMG)(SEQ ID NO:66)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GMGGM)(SEQ ID NO:67)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MMGMG)(SEQ ID NO:68)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GMMGG)(SEQ ID NO:69)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GMGGG)(SEQ ID NO:70)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GGMGG)(SEQ ID NO:71)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GGGGG)(SEQ ID NO:72)或它们的组合。在某些方面，寡肽是蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGM)。
在一些方面，IL-7蛋白包含半衰期延长部分。在某些方面，半衰期延长部分包括Fc、白蛋白、白蛋白结合多肽、Pro/Ala/Ser(PAS)、人绒毛膜促性腺激素β亚基的C末端肽(CTP)、聚乙二醇(PEG)、长的非结构化亲水氨基酸序列(XTEN)、羟乙基淀粉(HES)、白蛋白结合小分子或它们的组合。在一些方面，半衰期延长部分是Fc。在一些方面，Fc是杂合Fc，其包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域，其中铰链区包含人IgD铰链区，其中CH2结构域包含人IgD CH2结构域的一部分和人IgG4 CH2结构域的一部分，并且其中CH3结构域包含人IgG4CH3结构域的一部分。
在一些方面，IL-7蛋白包含与SEQ ID NO:1-6和15-25具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％序列同一性的氨基酸序列。
在一些方面，IL-7经胃肠外、肌肉内、皮下、眼部、静脉内、腹膜内、皮内、眶内、脑内、颅内、脊柱内、心室内、鞘内、脑池内、囊内、瘤内或它们的组合施用于受试者。在一些方面，核苷酸疫苗蛋白经胃肠外、肌肉内、经皮、皮下、眼部、静脉内、腹膜内、皮内、眶内、脑内、颅内、脊柱内、心室内、鞘内、脑池内、囊内、瘤内或它们的组合施用于受试者。
在一些方面，本文所提供的方法还包括向受试者施用至少一种另外的治疗剂。
在本文所提供的任何方法中，在某些方面，肿瘤抗原包括鸟苷酸环化酶C(GC-C)、表皮生长因子受体(EGFR或erbB-1)、人表皮生长因子受体2(HER2或erbB2)、erbB-3、erbB-4、MUC-1、黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)、间皮素(MSLN)、叶酸受体1(FOLR1)、CD4、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD123、CD138、CD171、CEA、CSPG4、CXCR5、c-Met、HERV-包膜蛋白、eriostin、Bigh3、SPARC、BCR、CD79、CD37、EGFRvIII、EGP2、EGP40、IGFr、L1CAM、AXL、组织因子(TF)、CD74、EpCAM、EphA2、MRP3钙粘蛋白19(CDH19)、表皮生长因子2(HER2)、5T4、8H9、αvβ6整合素、BCMA、B7-H3、B7-H6、CAIX、CA9、FAP、FBP、胎儿型AchR、FRcc、GD2、GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1(Glypican-1，GPC1)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-2(GPC2)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、HLA-A1+MAGE1、HLA-A1+NY-ESO-1、IL-13Rcc2、Lewis-Y、KDR、MCSP、间皮素、Muc1、Muc16、NCAM、NKG2D配体、NY-ESO-1、PRAME、PSC1、PSCA、PSMA、ROR1、ROR2、SP17、surviving、TAG72、TEM、癌胚抗原、HMW-MAA、VEGF、CLDN18.2、新抗原或它们的组合。在某些方面，肿瘤抗原来源于癌症，所述癌症包括乳腺癌、头颈癌、子宫癌、脑癌、皮肤癌、肾癌(renal cancer)、肺癌、结直肠癌、前列腺癌、肝癌、膀胱癌、肾癌(kidney cancer)、胰腺癌、甲状腺癌、食道癌、眼癌、胃癌(stomach(gastric)cancer)、胃肠癌、卵巢癌、癌瘤、肉瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或它们的组合。
附图说明
图1A、图1B、图1C、图1D、图1E和图1F示出了在施用DNA疫苗后在不同时间点施用IL-7的作用。图1A提供了实验设计的示意图。如图所示，动物以每三天一次的给药频率接受DNA疫苗的三次免疫接种。在最初DNA疫苗施用后第4天或第13天将IL-7施用于动物。在最初DNA疫苗施用后第11天观察到肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值。图1B提供了接受(i)单独对照载体或DNA疫苗(左图)或(ii)接受DNA疫苗+在最初DNA施用后第4天IL-7(右图)的动物在第11天的脾大小比较图。图1C和图1D提供了在最初DNA疫苗施用后第11天来自不同治疗组的肿瘤特异性T细胞(即，对以下表位之一具有特异性：Lrrc27、Plekho1或Pttg1)的频率(产生IFN-γ的T细胞的数目/106个总脾细胞)和每个脾的总数的比较。对于每个肽刺激(x轴)，示出的组如下(从左到右)(i)单独对照载体(G1)；(ii)单独DNA疫苗(G2)；和(iii)DNA疫苗+最初DNA施用后第4天IL-7(G3)。图1E和图1F提供了在最初DNA疫苗施用后第20天来自以下治疗组的肿瘤特异性T细胞(即，对以下表位之一具有特异性：Lrrc27、Plekho1或Pttg1)的频率(产生IFN-γ的T细胞的数目/106个总脾细胞)和总数的比较：(i)单独对照载体(G1)；(ii)单独DNA疫苗(G2)；(iii)DNA疫苗+最初DNA施用后第4天IL-7(G3)；和(iv)DNA疫苗+最初DNA施用后第13天IL-7(G4)。对于每个肽刺激(x轴)，示出的组如下(从左到右)(i)单独对照载体(G1)；(ii)单独DNA疫苗(G2)；(iii)DNA疫苗+最初DNA施用后第4天IL-7(G3)；和(iv)DNA疫苗+最初DNA施用后第13天IL-7(G4)。
图2A、图2B和图2C示出了IL-7剂量对DNA疫苗施用后肿瘤特异性T细胞免疫反应的作用。图2A提供了实验设计的示意图。如图所示，动物以每三天一次的给药频率接受DNA疫苗的三次免疫接种。在最初DNA疫苗施用后第13天以以下剂量之一将IL-7施用于动物：5、10或15mg/kg。图2B和图2C分别提供了在最初DNA疫苗施用后第20天脾和淋巴结中的肿瘤特异性T细胞(即，对以下表位之一具有特异性：Lrrc27、Plekho1或Pttg1)的频率(产生IFN-γ的T细胞的数目/106个总脾细胞)的比较。对于每个肽刺激(x轴)，示出的组如下(从左到右)(i)单独对照载体(G1)；(ii)单独DNA疫苗(G2)；(iii)DNA疫苗+5mg/kg IL-7(G3)；(iv)DNA疫苗+10mg/kg IL-7(G4)；和(v)DNA疫苗+15mg/kg IL-7(G5)。
图3A和图3B示出了本文所公开的核苷酸疫苗和IL-7组合疗法的抗肿瘤作用。图3A提供了实验设计的示意图。如图所示，动物以每三天一次的给药频率接受DNA疫苗的三次免疫接种。在最初DNA免疫接种后第8天，给动物皮下植入E0771肿瘤细胞(5x 105个细胞/小鼠)。在最初DNA免疫接种后约第10天观察到肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值。在最初DNA疫苗施用后第13天将IL-7施用于动物。图3B提供了在最初DNA疫苗施用后不同时间点来自不同治疗组的动物中肿瘤体积的比较。示出的组包括：(i)仅对照载体(圆圈)；(ii)仅DNA疫苗(正方形)；和(iii)DNA疫苗+IL-7(三角形)。
图4A和图4B示出了本文所述的核苷酸疫苗和IL-7组合疗法对T细胞介导的细胞毒性的作用，如使用体内CTL测定所测量的。图4A提供了实验设计的示意图。图4B提供了在最初免疫后第22、34、41和51天时来自不同治疗组的动物中经新抗原脉冲处理的脾细胞的杀伤百分比的比较。如实施例5所述，不同的治疗组包括：(i)仅对照载体(“载体”)；(ii)仅DNA疫苗(“nAg”)；(iii)单独IL-7蛋白(“IL-7”)；和(iv)DNA疫苗+IL-7蛋白(“nAg+IL-7”)。示出了归一化为未经脉冲处理的脾细胞对照的经脉冲处理的脾细胞的杀伤百分比。
图5A和图5B示出了在肿瘤发生后施用核苷酸疫苗和IL-7组合疗法的抗肿瘤作用。图5A提供了实验设计的示意图。图5B提供了在动物随机化后第20天肿瘤特异性T细胞(即，对以下表位之一具有特异性：Lrrc27、Plekho1、Pttg1、无肽("介质")——在示出的每个治疗组中从左到右)的频率(产生IFN-γ的T细胞的数目/106个总脾细胞)的比较。不同的治疗组沿x轴示出，并在实施例6中进一步描述。
图6A和图6B示出了核苷酸疫苗和IL-7组合疗法作为预防性疫苗的抗肿瘤作用。图6A提供了实验设计的示意图。图6B提供了在肿瘤接种后不同时间点来自不同治疗组的动物中肿瘤体积的比较。
具体实施方式
I.定义
为了更容易理解本公开，首先定义某些术语。如本申请中所使用的，除非本文另有明确规定，否则以下术语中的每一个应具有下文所述的含义。另外的定义在整个申请中阐述。
在整个本公开中，术语“一个”或“一种”实体是指一个(种)或多个(种)所述实体；例如，“一种抗体”应理解为表示一种或多种抗体。因此，术语“一个”(或“一种”)、“一个(种)或多个(种)”和“至少一个(种)”在本文中可互换使用。
此外，在本文中使用时将“和/或”视为对两个指定特征或组分中的每一个具有或不具有另一者的具体公开。因此，如本文中诸如“A和/或B”的短语中所用的术语“和/或”意图包括“A和B”、“A或B”、“A”(单独)和“B”(单独)。类似地，在短语中使用的术语“和/或”诸如“A、B和/或C”意图涵盖以下方面中的每一者：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。
应理解，每当在本文中以措辞“包含”描述各个方面的情况下，还提供了以“由……组成”和/或“基本上由……组成”描述的另外类似方面。
除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与由本公开所相关领域中的普通技术人员通常理解相同的含义。例如，Concise Dictionary of Biomedicineand Molecular Biology,Juo,Pei-Show,第2版,2002,CRC Press；Dictionary of Celland Molecular Biology,第3版,1999,Academic Press；和Oxford Dictionary OfBiochemistry And Molecular Biology,修订板,2000,Oxford University Press，给普通技术人员提供本公开中所使用的许多术语的通用字典。
单位、前缀和符号以它们的国际单位制(SI)接受形式表示。数值范围包括限定范围的数字。除非另外指明，否则氨基酸序列是以氨基至羧基定向自左至右书写。本文提供的标题不是对本公开的各个方面的限制，这些方面可通过参考整个说明书来获得。因此，即将在下文定义的术语通过参考说明书全文来更充分地定义。
术语“约”在本文中用于意指近似、大致、大约或在……左右。当术语“约”与数值范围结合使用时，它通过使边界延伸高于和低于数值来修饰范围。一般而言，术语“约”可通过例如上或下(高或低)10％的变化来修饰高于及低于所述值的数值。
如本文所用，“施用”是指使用本领域技术人员已知的各种方法和递送系统中的任一种将治疗剂或包含治疗剂的组合物以物理方式引入至受试者。本文所述的治疗剂的不同施用途径包括静脉内、腹膜内、肌肉内、经皮、皮下、脊髓、瘤内或其他胃肠外施用途径，例如通过注射或输注进行。如本文所用的短语“胃肠外施用”意指除肠内和外用(topical)施用以外的施用模式，通常通过注射进行，并且包括但不限于静脉内、腹膜内、肌肉内、动脉内、鞘内、淋巴内、病灶内、囊内、眶内、心脏内、皮内、经气管、气管内、肺、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、心室内、玻璃体内、硬膜外和胸骨内注射和输注，以及体内电穿孔。替代地，本文所述的治疗剂可经由非胃肠外途径施用，诸如局部、表皮或粘膜施用途径，例如鼻内、口服、阴道、直肠、舌下或局部施用。施用还可例如进行一次、多次和/或在一个或多个延长时间段内进行。
如本文所用，术语“抗原”是指任何天然或合成的免疫原性物质，诸如蛋白质、肽或半抗原。在某些方面，抗原包括肿瘤抗原。术语“肿瘤抗原”是指与正常健康细胞相比，在肿瘤细胞上独特或差异表达的抗原。
如本文所用，术语“表位”是指参与特定免疫球蛋白的识别的一组氨基酸残基，或在T细胞的情况下，是指T细胞受体蛋白和/或主要组织相容性复合体(MHC)受体的识别所必需的那些残基(例如，肿瘤特异性T细胞可识别和靶向的肿瘤抗原上的位点)。在体外或体内的免疫系统设置中，表位是分子的集体特征诸如一级、二级和三级肽结构，以及电荷，它们共同形成免疫球蛋白、T细胞受体或HLA分子识别的位点。表位可由邻接氨基酸(线性表位)形成或通过蛋白质的三级折叠并置(juxtaposed)的非邻接氨基酸(构象表位)形成。由邻接氨基酸形成的表位通常在暴露于变性溶剂时得以保留，而通过三级折叠形成的表位通常在用变性溶剂处理时丧失。表位通常包括独特空间构象中的至少3个，并且更通常至少5个或8-10个氨基酸。确定表位的空间构象的方法包括例如X射线晶体学和二维核磁共振。参见例如，Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology,第66卷,GlennE.Morris,编(1996)，所述文献以引用的方式整体并入本文。
如本文所述，术语表位可包括显性表位和亚显性表位。如本文所用，术语“显性表位”是指引起强烈免疫反应的表位(例如肿瘤抗原的表位)。如本文所用，术语“亚显性表位”是指引起微弱或无免疫反应的表位(例如肿瘤抗原的表位)。
如本文所用，术语“疫苗”是指能够在施用后诱导受试者中免疫的剂。在一些方面，疫苗是“防治性”疫苗，其被施用于未患有本文所公开的疾病或病症(例如癌症)的受试者。此类疫苗在本文中也称为“预防性”疫苗。在一些方面，疫苗是治疗性疫苗。如本文所用，术语“治疗性”疫苗是指施用于受试者以治疗疾病或病症(例如预防或减轻与疾病或病症相关的一种或多种症状)的疫苗。
如本文所用，术语“核苷酸疫苗”、“核酸疫苗”、“基于核酸的疫苗”和“基因疫苗”可互换使用并且指其中抗原组分包含核酸的疫苗。此类疫苗能够将编码感兴趣的抗原(例如肿瘤抗原)的遗传物质递送到宿主细胞中，所述宿主细胞随后产生抗原，从而启动能够保护宿主免受疾病或病症的免疫反应，所述抗原来源于所述疾病或病症。在一些方面，核苷酸疫苗包括DNA疫苗和RNA(例如mRNA)疫苗。在某些方面，核苷酸疫苗是DNA疫苗(即，抗原组分是DNA序列)。在某些方面，核苷酸疫苗是RNA(mRNA)疫苗(即，抗原组分是RNA序列)。
如本文所用的术语“天然存在的”当应用于对象时是指对象可见于自然界中的事实。例如，存在于生物体(包括病毒)中的可从自然界中的来源分离并且不是人在实验室中有意修饰的多肽或多核苷酸序列为天然存在的。
“多肽”是指包含至少两个连续连接的氨基酸残基的链，链的长度没有上限。蛋白质中的一个或多个氨基酸残基可包含修饰，诸如但不限于糖基化、磷酸化或二硫键形成。“蛋白质”可包含一种或多种多肽。除非另外说明，否则术语“蛋白质”和“多肽”可互换使用。
如本文所用的术语“核酸分子”，意图包括DNA分子和RNA分子。核酸分子可以是单链或双链的，并且可以是cDNA。
核酸可存在于完整细胞中，存在于细胞溶解物中或以部分纯化或基本上纯的形式存在。当通过标准技术，包括碱/SDS处理、CsCl显带(banding)、柱色谱、琼脂糖凝胶电泳和其他本领域众所周知的技术，从其他细胞组分或其他污染物例如其他细胞核酸(例如染色体的其他部分)或蛋白质中纯化出来时，核酸是“分离的”或“呈现为基本上纯的”。参见F.Ausubel,等人,编Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing andWiley Interscience,New York(1987)。
核酸，例如cDNA，可根据标准技术进行突变以提供基因序列。对于编码序列，这些突变可根据需要影响氨基酸序列。具体地说，考虑了与本文所述的天然V、D、J、恒定、转换和其他此类序列基本上同源或来源于这些序列的DNA序列(其中“来源于”表示序列与另一序列相同或从另一序列修饰)。
“保守氨基酸取代”是指氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代。具有相似侧链的氨基酸残基的家族在本领域中已被定义。这些家族包括：具有碱性侧链的氨基酸(例如，赖氨酸、精氨酸、组氨酸)；具有酸性侧链的氨基酸(例如，天冬氨酸、谷氨酸)；具有不带电荷的极性侧链的氨基酸(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)；具有非极性侧链的氨基酸(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸)；具有β-支化侧链的氨基酸(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)；以及具有芳族侧链的氨基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。在某些方面，抗体中预测的非必需氨基酸残基被来自同一侧链家族的另一氨基酸残基替换。鉴定不消除抗原结合的核苷酸和氨基酸保守取代的方法是本领域众所周知的(参见例如，Brummell等人,Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人Protein Eng.12(10):879-884(1999)；和Burks等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94:412-417(1997))。
对于核酸，术语“基本同源性”指示两种核酸或其指定序列在最佳对齐并且比较时，在适当的核苷酸插入或缺失的情况下，至少约80％的核苷酸、至少约90％至95％或至少约98％至99.5％的核苷酸是相同的。替代地，当区段将在选择性杂交条件下与所述链的互补链杂交时，存在基本同源性。
对于多肽，术语“基本同源性”指示两种多肽或其指定序列在最佳对齐并且比较时，在适当的氨基酸插入或缺失的情况下，至少约80％的氨基酸、至少约90％至95％或至少约98％至99.5％的氨基酸是相同的。
两个序列之间的百分比同一性是由序列共享的相同位置的数目的函数(即，％同源性＝相同的位置的数目/位置的总数x 100)，考虑了为优化两个序列的对齐而需要引入的空位的数目和各空位的长度。序列的比较两个序列之间的和百分比同一性的确定可使用数学算法来完成，例如以下在非限制性实例中所述。
可使用GCG软件包(可在Worldwideweb.gcg.com获得)中的GAP程序，使用使用NWSgapdna.CMP矩阵以及空间权重40、50、60、70或80和长度权重1、2、3、4、5或6来确定两个核苷酸序列之间的百分比同一性。还可使用已并入ALIGN程序(2.0版)中的E.Meyers和W.Miller(CABIOS,4:11-17(1989))的算法，使用PAM120权重残基表、空位长度罚分12和空位罚分4来确定两个核苷酸或氨基酸序列之间的百分比同一性。此外，可使用已并入GCG软件包(可在worldwideweb.gcg.com获得)中的GAP程序中的Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.(48):444-453(1970))算法，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵以及空位权重16、14、12、10、8、6或4和长度权重1、2、3、4、5或6来确定两个氨基酸序列之间的百分比同一性。
本文所述的核酸和蛋白质序列可进一步作为“查询序列”用于相对于公共数据库进行搜索以例如鉴定相关序列。此类搜索可使用Altschul,等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-10的NBLAST和XBLAST程序(2.0版)进行。BLAST核苷酸搜索可用NBLAST程序(计分＝100，字长＝12)来进行以获得与本文所述的核酸分子同源的核苷酸序列。BLAST蛋白质搜索可用XBLAST程序(计分＝50，字长＝3)来进行以获得与本文所述的蛋白质分子同源的氨基酸序列。为了出于比较目的获得空位比对，可如Altschul等人,(1997)Nucleic AcidsRes.25(17):3389-3402中所述利用空位BLAST。当使用BLAST和空位BLAST程序时，可使用各个程序(例如，XBLAST和NBLAST)的默认参数。参见worldwideweb.ncbi.nlm.nih.gov。
如本文所用，术语“效应子功能”是指分化的免疫细胞的特化功能。例如，T细胞的效应子功能可以是细胞溶解活性或辅助活性(包括细胞因子的分泌)。幼稚、记忆或记忆型T细胞中的效应子功能还可包括抗原依赖性增殖。
如本文所用，术语“免疫细胞”是指在免疫反应中起作用的细胞。因此，在一些方面，可用于本公开的免疫细胞是可在实体瘤的治疗和/或根除中起作用的那些细胞(例如，具有抗肿瘤活性)。在一些方面，免疫细胞包括淋巴细胞、嗜中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞、树突细胞或它们的任何组合。在某些方面，淋巴细胞包括T细胞、肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)、淋巴因子激活的杀伤细胞、自然杀伤T(NKT)细胞或它们的任何组合。在一些方面，淋巴细胞是T细胞。在一些方面，淋巴细胞是NKT细胞(例如，不变的NKT细胞)。
如本文所用，术语“载体”意图指能够转运已与其连接的另一核酸的核酸分子。一种类型的载体是“质粒”，其是指可将额外DNA区段连接到其中的环状双链DNA环。另一类型的载体是病毒载体，其中额外的DNA区段可连接到病毒基因组中。某些载体能够在引入了它们的宿主细胞中自主复制(例如，具有细菌复制起点的细菌载体和附加型(episomal)哺乳动物载体)。其他载体(例如，非附加型哺乳动物载体)可在引入到宿主细胞中之后整合到宿主细胞的基因组中，并且由此与宿主基因组一起复制。此外，某些载体能够指导它们可操作地连接的基因的表达。此类载体在本文中称为“重组表达载体”(或简称为“表达载体”)。一般而言，在重组DNA技术中有用的表达载体通常呈质粒的形式。在本说明书中，“质粒”和“载体”可互换使用，因为质粒是最常使用的载体形式。然而，还包括提供等效功能的其他形式的表达载体，诸如病毒载体(例如，复制缺陷型逆转录病毒、腺病毒和腺相关病毒)。
如本文所用，术语“重组宿主细胞”(或简称“宿主细胞”)旨意图指以下细胞，其包含不天然存在于细胞中的核酸，并且可以是已引入重组表达载体的细胞。应理解，此类术语不仅意图指特定的主题细胞，而且意图指这种细胞的后代。因为某些修饰可由于突变或环境影响而在下一代中出现，所以此类后代可能实际上与亲代细胞不相同，但仍然包括在如本文中所用的术语“宿主细胞”的范围内。
“癌症”是指特征在于体内异常细胞(或肿瘤)不受控制地生长的各种各样的疾病。不受调控的细胞分裂和生长导致恶性肿瘤的形成，所述恶性肿瘤侵入邻近组织，并且还可通过淋巴系统或血流转移到身体的远侧部分。可使用本公开治疗的癌症包括与实体瘤相关的癌症。除非另外指定，否则术语“癌症”和“肿瘤”可互换使用。
术语“融合蛋白”是指通过将两个或更多个最初编码单独的蛋白质的基因接合起来所产生的蛋白质。这种融合基因的翻译产生具有来源于每个原始蛋白质的功能特性的单个多肽或多个多肽。在一些方面，两个或更多个基因可在其核苷酸序列中包含取代、缺失和/或添加。
“Fc受体”或“FcR”是与免疫球蛋白的Fc区结合的受体。与IgG抗体结合的FcR包含FcγR家族的受体，包括这些受体的等位基因变体和替代的剪接形式。FcγR家族由三种激活性受体(小鼠中为FcγRI、FcγRIII和FcγRIV；人中为FcγRIA、FcγRIIA和FcγRIIIA)和一种抑制性受体(FcγRIIB)组成。人FcγR的各种特性是本领域已知的。大多数先天效应细胞类型共表达一种或多种激活性FcγR和抑制性FcγRIIB，而自然杀伤(NK)细胞选择性表达一种激活性Fc受体(小鼠中为FcγRIII，而人中为FcγRIIIA)，但不表达小鼠和人中的抑制性FcγRIIB。人IgG1与大多数人Fc受体结合，并且就其结合的激活性Fc受体的类型而言，认为它等效于鼠IgG2a。
“Fc区”(片段可结晶区)或“Fc结构域”或“Fc”是指抗体重链的C末端区，其介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括与位于免疫系统的各种细胞(例如效应细胞)上的Fc受体或经典补体系统的第一组分(C1q)的结合。因此，Fc区包含除第一恒定区免疫球蛋白结构域(例如，CH1或CL)以外的抗体恒定区。在IgG、IgA和IgD抗体同种型中，Fc区包含两个相同的蛋白质片段，其来源于抗体的两条重链的第二(CH2)和第三(CH3)恒定结构域；IgM和IgE Fc区包含每条多肽链中的三个重链恒定结构域(CH结构域2-4)。对于IgG，Fc区包含免疫球蛋白结构域CH2和CH3以及CH1与CH2结构域之间的铰链。虽然免疫球蛋白重链的Fc区边界的定义可能有所不同，但如本文所定义，人IgG重链Fc区定义为从IgG1的氨基酸残基D221、IgG2的氨基酸残基V222、IgG3的氨基酸残基L221和IgG4的氨基酸残基P224延伸到重链的羧基末端，其中编号是根据如Kabat中的EU索引进行的。人IgG Fc区的CH2结构域从氨基酸237延伸到氨基酸340，并且CH3结构域位于Fc区中CH2结构域的C末端侧，即其从IgG的氨基酸341延伸到氨基酸447或446(如果不存在C末端赖氨酸残基)或445(如果不存在C末端甘氨酸和赖氨酸残基)。如本文所用，Fc区可以是天然序列Fc，包括任何同种异型变体，或变体Fc(例如，非天然存在的Fc)。Fc也可单独地或在包含Fc的蛋白质多肽(诸如“包含Fc区的结合蛋白”，也称为“Fc融合蛋白”(例如，抗体或免疫粘附))的上下文中指此区域。
“天然序列Fc区”或“天然序列Fc”包含与天然存在的Fc区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fc区包括天然序列人IgG1 Fc区、天然序列人IgG2 Fc区、天然序列人IgG3 Fc区和天然序列人IgG4Fc区以及其天然存在的变体。天然序列Fc包括Fc的各种同种异型(参见例如，Jefferis等人(2009)mAbs 1:1)。
另外，本公开的Fc(天然或变体)可呈与天然形式相比，具有天然糖链、增加的糖链或减少的糖链的形式，或者可呈脱糖基化的形式。免疫球蛋白Fc糖链可通过常规方法，诸如化学法、酶法和使用微生物的基因工程方法进行修饰。从Fc片段中去除糖链导致与第一补体组分C1的C1q部分的结合亲和力急剧减小，以及ADCC或CDC的减小或丧失，从而不会在体内诱导任何不必要的免疫反应。在这点上，脱糖基化或无糖基化(aglycosylated)形式的免疫球蛋白Fc区作为药物载剂可能更适合本公开的目的。如本文所用，术语“脱糖基化”是指其中糖从Fc片段中被酶促去除的Fc区。另外，术语“无糖基化”意指Fc片段由原核生物以非糖基化形式产生，并且优选地在大肠杆菌(E.coli)中产生。
如本文所用，术语“免疫反应”是指脊椎动物内针对外来剂的生物学反应，所述反应保护生物体免受这些剂和由它们引起的疾病的影响。免疫反应是由免疫系统的细胞(例如，T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、树突细胞或中性粒细胞)和由这些细胞中的任一种或肝产生的可溶性大分子(包括抗体、细胞因子和补体)的作用介导的，所述免疫反应导致选择性靶向、结合、损伤、破坏侵入病原体、感染了病原体的细胞或组织、癌细胞或其他异常细胞或者(在自身免疫或病理性炎症的情况下)正常的人细胞或组织和/或将它们从脊椎动物体内消除。免疫反应包括例如T细胞的激活或抑制，例如效应T细胞或Th细胞，诸如CD4+或CD8+T细胞，或Treg细胞的抑制。
如本文所述，在一些方面，免疫反应(例如，诸如由本文所公开的核苷酸疫苗诱导的免疫反应)包括T细胞免疫反应。如本文所用，术语“T细胞免疫反应”是指由T细胞(例如，效应CD4+和/或CD8+T细胞)介导的免疫反应。T细胞免疫反应通常可分为三个阶段：(i)扩增，(ii)收缩和(iii)维持。Kumar等人,Immunity 48(2):202-213(2018年2月)；和Blair等人,JImmunol 187:2310-2321(2011)。在扩增阶段期间，识别其同源抗原的幼稚T细胞被激活，导致克隆扩增和获得效应子功能(例如，产生炎性细胞因子和表达效应分子，诸如颗粒酶和穿孔素)。在扩增阶段之后，大约90％-95％的处于反应峰值的激活T细胞经历细胞凋亡(即收缩阶段)。存活的激活T细胞群最终分化为记忆T细胞，其为宿主提供持久保护(即维持期)。
术语“免疫疗法”是指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式改变免疫反应的方法，对患有疾病或有感染或复发疾病风险的受试者进行治疗。受试者的“治疗”或“疗法”是指对受试者进行的任何类型的干预或处理，或者向受试者施用活性剂，目的是逆转、缓解、改善、抑制、减缓或预防与疾病相关的症状、并发症或病状或者生化指标的发作、进展、发展、严重性或复发。
如本文所用，术语“肿瘤浸润淋巴细胞”或“TIL”是指已从外周(例如，从血液)迁移到肿瘤中的淋巴细胞(例如，效应T细胞)。在一些方面，肿瘤浸润淋巴细胞是CD4+TIL。在一些方面，肿瘤浸润淋巴细胞是CD8+TIL。
刺激免疫反应或免疫系统的能力增强可能由T细胞共刺激受体的激动活性增强和/或抑制性受体的拮抗活性增强引起。刺激免疫反应或免疫系统的能力增强可通过在测量免疫反应的测定(例如，测量细胞因子或趋化因子释放、细胞溶解活性(直接在靶细胞上或间接地通过检测CD107a或颗粒酶确定)和增殖方面的变化的测定)中EC50或最大活性水平的倍数增加来反映。刺激免疫反应或免疫系统活性的能力可增强至少10％、30％、50％、75％、2倍、3倍、5倍或更多。
如本文所用，术语“白介素-7”或“IL-7”是指IL-7多肽及其衍生物和类似物，例如，在标准生物测定或对IL-7受体结合亲和力的测定中，其与野生型成熟哺乳动物IL-7蛋白具有基本氨基酸序列同一性和基本上等效的生物学活性。在本文其他地方提供了有关可与本公开一起使用的IL-7蛋白的另外公开。
IL-7蛋白的“变体”被定义为由一个或多个氨基酸改变的氨基酸序列。所述变体可具有“保守”变化，其中取代的氨基酸具有类似的结构或化学特性，例如，用异亮氨酸替换亮氨酸。更罕见地，变体可具有“非保守”变化，例如用色氨酸替换甘氨酸。相似的微小变化还可包括氨基酸缺失或插入，或两者兼有。可使用本领域众所周知的计算机程序(例如用于分子建模或用于产生对齐的软件)找到确定哪些和多少个氨基酸残基可被取代、插入或缺失而不丧失生物活性的指导。本公开中包括的变体IL-7蛋白包括保留IL-7活性的IL-7蛋白。还包括添加、取代或缺失的IL-7多肽也包括在本公开中，只要蛋白质保留基本上等效的生物IL-7活性即可。例如，保留与IL-7蛋白的全长形式相当的生物活性的IL-7的截短物包括在本公开中。在一些方面，变体IL-7蛋白还包含与野生型IL-7具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约93％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或更大的序列同一性的多肽。
如本文所用，术语“信号序列”或等效的“信号肽”是指指导生物活性分子药物和融合蛋白分泌的片段，并且它在宿主细胞中翻译后被切断。如本文所用的信号序列是编码启动蛋白质穿透内质网(ER)膜的运动的氨基酸序列的多核苷酸。有用的信号序列包括抗体轻链信号序列，例如抗体14.18(Gillies等人,J.Immunol.Meth 1989.125:191-202)；抗体重链信号序列，例如MOPC141抗体重链信号序列(Sakano等人,Nature,1980.286:676-683)；以及本领域已知的其他信号序列(例如，参见Watson等人,Nucleic Acid Research,1984.12:5145-5164)。信号肽的特征是本领域众所周知的，并且信号肽通常具有16至30个氨基酸，但它们可包括更多或更少数量的氨基酸残基。常规信号肽由三个区域组成：碱性N末端区域、中心疏水区域和更具极性的C末端区域。
“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括但不限于脊椎动物(诸如非人灵长类动物、绵羊、狗)和啮齿动物(诸如小鼠、大鼠和豚鼠)。在一些方面，受试者是人。术语“受试者”和“患者”在本文中可互换使用。
术语“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是指提供所需生物、治疗和/或预防结果的剂的量。所述结果可以是疾病的一种或多种体征、症状或病因的减少、改善、缓和、减轻、延迟和/或缓解，或者生物系统的任何其他所需的改变。关于实体瘤，有效量包括足以引起肿瘤缩小和/或降低肿瘤生长速率(诸如抑制肿瘤生长)或者预防或延迟其他不需要的细胞增殖的量。在一些方面，有效量是足以延迟肿瘤发展的量。在一些方面，有效量是足以预防或延迟肿瘤复发的量。有效量可在一次或多次施用中施用。有效量的药物或组合物可：(i)减少癌细胞的数量；(ii)减小肿瘤大小；(iii)在一定程度上抑制、延缓、减慢并可阻止癌细胞浸润到外周器官；(iv)抑制(即，在一定程度上减慢并可阻止肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)防止或延迟肿瘤的发生和/或复发；和/或(vii)在一定程度上缓解一种或多种与癌症相关的症状。在一些方面，“治疗有效量”是经临床证实实现癌症的显著减少或癌症(诸如晚期实体瘤)的进展(消退)的减慢的核苷酸疫苗和/或IL-7蛋白的量。治疗剂促进疾病消退的能力可使用熟练从业者已知的多种方法来评估，诸如在临床试验期间在人受试者中，在预测在人中的功效的动物模型系统中，或通过在体外测定中测定剂的活性。
术语“给药频率”、“给药时间表”和“给药间隔”可互换使用并且指在特定时间段内向受试者施用治疗剂(例如，核苷酸疫苗和/或IL-7)的次数。给药频率可表示为每给定时间的剂量数，例如，每天一次、每周一次或每两周一次。如本文所用，“给药频率”适用于受试者接受治疗剂的多次(或重复)施用的情况。
当用于描述本文所述的治疗剂(例如，核苷酸疫苗和/或IL-7)的施用时，术语“在……内”意指在伴随的持续时间或之前施用治疗剂。例如，当IL-7蛋白在施用核苷酸疫苗后“7天内”施用时，其可意指以下中的任一种：IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后7天施用、IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用6天后施用、IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后5天施用、IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用4天后施用、IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后3天施用，IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后2天施用、IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后1天施用、IL-7蛋白与核苷酸疫苗施用同时施用，以及其中的任何持续时间。
如本文所用，术语“护理标准”是指被医学专家接受为对某种类型的疾病的适当治疗并且被医疗保健专业人员广泛使用的治疗。所述术语可与以下术语中的任一者互换使用：“最佳实践”、“标准医疗护理”和“标准疗法”。
例如，“抗癌剂”促进受试者的癌症消退或预防进一步的肿瘤生长。在某些方面，治疗有效量的药物促进癌症消退至消除癌症的程度。“促进癌症消退”意指单独或与抗肿瘤剂组合施用有效量的药物导致肿瘤生长或大小减少、肿瘤坏死、至少一种疾病症状的严重性降低、疾病无症状期的频率和持续时间增加或预防由疾病折磨引起的损伤或残疾。此外，关于治疗的术语“有效”和“有效性”包括药理有效性和生理安全性。药理有效性是指药物促进患者的癌症消退的能力。生理安全性是指由药物施用引起的在细胞、器官和/或生物体水平上的毒性或其他不良生理反应(不良反应)的水平。
例如，对于肿瘤的治疗，相对于未经治疗的受试者，或在某些方面，相对于用护理标准疗法治疗的患者，治疗有效量的抗癌剂可抑制细胞生长或肿瘤生长至少约10％、至少约20％、至少约40％、至少约60％或至少约80％。在一些方面，可观察到肿瘤消退并且其持续至少约20天、至少约40天或至少约60天的时间段。虽然对治疗有效性进行了这些最终测量，但免疫治疗药物的评估也必须考虑到“免疫相关”的反应模式。
如本文所用，术语“免疫检查点抑制剂”是指完全地或部分地减少、抑制、干扰或调节一种或多种免疫检查点蛋白的分子。免疫检查点蛋白调控T细胞激活或功能。许多检查点蛋白是已知的，诸如CTLA-4及其配体CD80和CD86；和PD-1及其配体PD-L1和PD-L2。Pardoll,D.M.,Nat Rev Cancer 12(4):252-64(2012)。这些蛋白质负责T细胞反应的共刺激或抑制性相互作用。免疫检查点蛋白调控并维持自身耐受性以及生理免疫反应的持续时间和幅度。免疫检查点抑制剂包括抗体或来源于抗体。
如本文所用，术语“ug”和“uM”可分别与“μg”和“μΜ”互换使用。
本文所述的各个方面更详细描述于以下小节中。
II.本公开的方法
本文公开了一种用于治疗有需要的受试者中的肿瘤(或与肿瘤相关的癌症)的方法，其包括向所述受试者施用核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)蛋白的组合。在一些方面，核苷酸疫苗编码肿瘤抗原，使得核苷酸疫苗的施用能够诱导受试者中的肿瘤特异性T细胞免疫反应。在一些方面，IL-7蛋白在由核苷酸疫苗诱导的肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用于受试者。如本文所用，术语“峰值扩增阶段”是指例如由核苷酸疫苗诱导的肿瘤特异性T细胞数目最多的时间点。在某些方面，峰值扩增阶段标志着T细胞免疫反应收缩阶段的开始。从本公开中显而易见的是，核苷酸疫苗诱导的肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段可能不同，这取决于核苷酸疫苗是治疗性施用(即在肿瘤发生后)还是预防性施用(即，在肿瘤发生之前)。可使用本领域已知的任何合适的方法(例如，ELISPOT和流式细胞术)来确定T细胞免疫反应的峰值扩增阶段。
例如，当预防性施用核苷酸疫苗时，在一些方面，核苷酸疫苗诱导的肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增发生在抗原特异性T细胞的最初激活(即接触抗原)后(例如，在最初向受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗后)约七天、约八天、约九天、约十天、约11天、约12天、约13天、约14天或约15天。在某些方面，肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增发生在抗原特异性T细胞的最初激活后(例如，在向受试者最初施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗后)约11天。在一些方面，当治疗性施用核苷酸疫苗时，峰值扩展可发生得更早。例如，不受任何一种理论的约束，在治疗环境中，肿瘤特异性T细胞可能已经存在于受试者体内，这些细胞来自于较早与现有肿瘤的接触。因此，对于本领域技术人员而言显而易见的是，当将本文所述的核苷酸疫苗施用于此类受试者时，现有肿瘤特异性T细胞(例如，记忆T细胞)可更快地做出反应(与第一次见到抗原的T细胞相比)，导致更快的T细胞动力学(即，更早的峰值扩增)。
关于本公开，申请人已经发现，与在参考中观察到的对应值(即，肿瘤特异性T细胞免疫反应)相比，在峰值扩增阶段之后施用IL-7蛋白可改善肿瘤特异性T细胞免疫反应(例如，由本文所公开的核苷酸疫苗诱导的肿瘤特异性T细胞免疫反应)。如本文所用，术语“参考”可指对应个体，其(i)仅接受单独核苷酸疫苗，(ii)仅接受单独IL-7蛋白，(iii)接受核苷酸疫苗和IL-7蛋白两者，但IL-7蛋白在峰值扩增阶段之前施用，(iv)既未接受核苷酸疫苗也未接受IL-7蛋白，或(iv)它们的组合。
因此，如本文所证明的，本文所述的IL-7蛋白通常在施用核苷酸疫苗后施用于受试者。然而，也如本文所证明的，申请人已经进一步确定在核苷酸疫苗施用后的其他时间点(例如，除了在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后)施用IL-7蛋白也可具有治疗效果，例如，特别是在核苷酸疫苗作为治疗性疫苗施用的情况下。例如，在一些方面，IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后约六小时内、约12小时内、约一天内、约两天内、约三天内、约四天内、约五天内、约六天内、约一周内、约两周内、约三周内或约四个星期内施用于受试者。在一些方面，IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后约一周内施用。在一些方面，IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后约五天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后约四天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后约三天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后约两天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在核苷酸疫苗施用后约一天内施用。在一些方面，IL-7蛋白与核苷酸疫苗施用同时施用。
在一些方面，改善的肿瘤特异性T细胞免疫反应可导致受试者中的肿瘤生长减少。因此，在一些方面，施用核苷酸疫苗与IL-7蛋白的组合，其中IL-7蛋白在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用，与参考相比可抑制和/或减少受试者中的肿瘤生长(例如，肿瘤体积或重量)。在某些方面，与参考的对应值(即，肿瘤生长)相比，在施用后肿瘤生长减少至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约100％。类似地，在一些方面，与参考相比，(i)在施用核苷酸疫苗之后或(ii)与施用核苷酸疫苗同时施用IL-7蛋白可抑制和/或减少受试者中的肿瘤生长(例如，肿瘤体积或重量)。在某些方面，与参考的对应值(即，肿瘤生长)相比，在施用后肿瘤生长减少至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约100％。
在一些方面，改善的肿瘤特异性T细胞免疫反应可导致受试者中的延长的肿瘤特异性T细胞免疫反应。不受任何一种理论的约束，在某些方面，延长的肿瘤特异性T细胞免疫反应是由于肿瘤特异性T细胞的存活率(例如，在收缩阶段期间)增加。因此，在一些方面，施用核苷酸疫苗与IL-7蛋白的组合，其中IL-7蛋白在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用，与参考的对应值相比可增加受试者中的肿瘤特异性T细胞的存活率(例如，在收缩阶段期间)。在某些方面，与参考的对应值相比，肿瘤特异性T细胞的存活率(例如，在收缩阶段期间)增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。类似地，在一些方面，与参考相比，(i)在施用核苷酸疫苗之后或(ii)与施用核苷酸疫苗同时施用IL-7蛋白可延长受试者中的肿瘤特异性T细胞免疫反应。在某些方面，与参考的对应值相比，肿瘤特异性T细胞免疫反应延长至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
在一些方面，延长的肿瘤特异性T细胞免疫反应是由于肿瘤特异性T细胞对细胞凋亡的抵抗力增加(例如，在免疫反应的收缩阶段期间)。在某些方面，与参考的对应值相比，肿瘤特异性T细胞对细胞凋亡的抵抗力(例如，在收缩阶段期间)增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
在一些方面，增加肿瘤特异性T细胞的最初扩增也可帮助延长肿瘤特异性T细胞免疫反应(例如，通过增加肿瘤特异性T细胞的总数)。因此，在一些方面，与参考的对应值相比，(i)在施用核苷酸疫苗之后或(ii)与施用核苷酸疫苗同时施用IL-7蛋白可增加核苷酸疫苗诱导的肿瘤特异性T细胞的最初扩增至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
在一些方面，与参考的对应值相比，增加的存活率和/或增加的对细胞凋亡抵抗力可增加受试者中肿瘤特异性T细胞的数目。在某些方面，与参考的对应值相比，受试者中的肿瘤特异性T细胞的数目增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
在一些方面，改善的肿瘤特异性T细胞免疫反应包括增加的肿瘤特异性T细胞的细胞毒活性。例如，在一些方面，施用核苷酸疫苗与IL-7蛋白的组合增加肿瘤特异性T细胞杀死表达肿瘤抗原的细胞(例如，肿瘤细胞)的能力。在一些方面，与参考(例如，未接受组合治疗的对应受试者)的对应值相比，肿瘤特异性T细胞的细胞毒性增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
如本文所述，T细胞免疫反应的扩增阶段通常紧接着收缩阶段，在此期间，大部分(例如，90％-95％)激活的效应T细胞经历细胞凋亡，而存活的效应T细胞分化成长寿命记忆T细胞。因此，在一些方面，肿瘤特异性T细胞的存活率增加和/或对细胞凋亡的抵抗力(例如，在收缩阶段期间)可导致受试者中更大数目的肿瘤特异性记忆T细胞。类似地，在一些方面，增加肿瘤特异性T细胞的最初扩增也可帮助产生受试者中更大数目的肿瘤特异性记忆T细胞。在一些方面，与参考的对应值相比，受试者中的肿瘤特异性记忆T细胞的数目增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
在一些方面，改善的肿瘤特异性T细胞免疫反应包括扩展的肿瘤特异性T细胞免疫反应的T细胞受体库。例如，在某些方面，与参考的对应值相比，本公开的方法(例如，施用核苷酸疫苗与IL-7的组合，其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用于受试者)可增加针对其诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应的表位的数目。类似地，在一些方面，与参考的对应值相比，(i)在施用核苷酸疫苗之后或(ii)与施用核苷酸疫苗同时施用IL-7蛋白可增加针对其诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应的表位的数目。
在一些方面，与参考相比，针对其诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应的表位数目增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
在一些方面，本文所公开的肿瘤特异性T细胞(即，在施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与IL-7的组合后诱导，其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用)能够靶向肿瘤抗原的一个或多个表位，其包括Lrrc27、Plekho1、Pttg1、Xpo4、Exoc4、Pank3、Tmem101、Map3k6、Met、BC057079、Hist1h3e、Prkag1、Neil3或它们的组合。类似地，在一些方面，在(i)施用核苷酸疫苗之后或(ii)与施用核苷酸疫苗同时施用IL-7蛋白后产生的肿瘤特异性T细胞可靶向肿瘤抗原的一个或多个表位，其包括Lrrc27、Plekho1、Pttg1、Xpo4、Exoc4、Pank3、Tmem101、Map3k6、Met、BC057079、Hist1h3e、Prkag1、Neil3或它们的组合。在本公开的其他各处提供了关于可使用本文所公开的方法靶向的肿瘤抗原的额外公开内容。在某些方面，本文所述的肿瘤特异性T细胞可靶向上述肿瘤表位中的一种、两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种、11种、12种或所有上述肿瘤表位。在一些方面，本公开的肿瘤特异性T细胞能够靶向以下表位：Lrrc27、Plekho1和Pttg1。
因此，在一些方面，本公开涉及一种增加有需要的受试者中的针对肿瘤抗原的亚显性表位的T细胞免疫反应的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原(其包含亚显性表位)的核苷酸疫苗与IL-7的组合，其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用于受试者。在一些方面，一种增加有需要的受试者中的针对肿瘤抗原的亚显性表位的T细胞免疫反应的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原(其包含亚显性表位)的核苷酸疫苗与IL-7的组合，其中IL-7蛋白在以下时间施用：(i)在施用核苷酸疫苗之后或(ii)与施用核苷酸疫苗同时。在某些方面，与参考的对应值相比，针对肿瘤抗原的亚显性表位的T细胞免疫反应增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
如本文所述，在一些方面，本公开的方法包括施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与IL-7的组合，其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用。在一些方面，IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段后至少约一天、约两天、约三天、约四天、约五天、约六天、约七天、约八天、约九天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天、约20天、约21天、约22天、约23天、约24天、约25天、约26天、约27天、约28天、约29天、或约30天或更长时间施用于受试者(例如，罹患肿瘤的受试者)。在某些方面，IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段后约两天施用。
可用本文所公开的方法治疗的癌症(或肿瘤)的非限制性实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌(SCLC)、非小细胞肺癌、鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)、非鳞状NSCLC、胃肠癌、肾癌(例如透明细胞癌)、卵巢癌、肝癌(例如肝细胞癌)、结直肠癌、子宫内膜癌、肾癌(例如肾细胞癌(RCC))、前列腺癌(例如激素难治性前列腺腺癌)、甲状腺癌、胰腺癌、宫颈癌、胃癌、膀胱癌、肝细胞瘤(hepatoma)、乳腺癌、结肠癌，和头颈癌(或癌(carcinoma))、胃癌、生殖细胞肿瘤、小儿肉瘤、鼻窦自然杀伤、黑色素瘤(例如转移性恶性黑色素瘤，诸如皮肤或眼内恶性黑色素瘤)、骨癌、皮肤癌、子宫癌、肛门区域癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、宫颈癌、阴道癌、外阴癌、食道癌(例如食管胃结合部癌(gastroesophageal junction cancer))、小肠癌、内分泌系统癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、儿童实体瘤、输尿管癌、肾盂癌、肿瘤血管生成、垂体腺瘤、卡波西氏肉瘤(Kaposi'ssarcoma)、表皮样癌、鳞状细胞癌、T细胞淋巴瘤、环境诱导的癌症包括石棉诱导的癌症、病毒相关的癌症或病毒起源的癌症(例如人乳头瘤病毒(HPV相关或HPV起源的肿瘤))，和来源于两种主要血细胞谱系即髓系细胞系(其产生粒细胞、红细胞、血小板、巨噬细胞和肥大细胞)或淋巴样细胞系(其产生B细胞、T细胞、NK细胞和浆细胞)中的任一种的血液系统恶性肿瘤，诸如所有类型的白血病、淋巴瘤和骨髓瘤，例如急性、慢性、淋巴细胞和/或骨髓性白血病，诸如急性白血病(ALL)、急性骨髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)和慢性骨髓性白血病(CML)、未分化的AML(MO)、原始粒细胞性白血病(myeloblastic leukemia)(Ml)、原始粒细胞性白血病(M2；伴有细胞成熟)、早幼粒细胞白血病(promyelocytic leukemia)(M3或M3变体[M3V])、粒单核细胞白血病(myelomonocytic leukemia)(M4或具有嗜酸性粒细胞增多症的M4变体[M4E])、单核细胞白血病(monocytic leukemia)(M5)、红白血病(erythroleukemia)(M6)、巨核细胞白血病(megakaryoblastic leukemia)(M7)、孤立性粒细胞肉瘤(isolatedgranulocytic sarcoma)和绿色瘤(chloroma)；淋巴瘤，诸如霍奇金氏淋巴瘤(HL)、非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、B细胞血液系统恶性肿瘤例如B细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞样淋巴瘤(lymphoplasmacytoid lymphoma)、单核细胞样B细胞淋巴瘤、粘膜相关淋巴样组织(MALT)淋巴瘤、间变性(例如Ki1+)大细胞淋巴瘤、成人T细胞淋巴瘤/白血病、套细胞淋巴瘤、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(angio immunoblastic T-cell lymphoma)、血管中心性淋巴瘤(angiocentric lymphoma)、肠T细胞淋巴瘤、原发性纵隔B细胞淋巴瘤、前体T淋巴母细胞淋巴瘤、T淋巴母细胞；和淋巴瘤/白血病(T-Lbly/T-ALL)、外周T细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤、移植后淋巴增生性病症、真性组织细胞性淋巴瘤(true histiocyticlymphoma)、原发性渗出性淋巴瘤、B细胞淋巴瘤、淋巴母细胞淋巴瘤(LBL)、淋巴样谱系造血肿瘤、急性淋巴母细胞白血病(acute lymphoblastic leukemia)、弥漫性大B细胞淋巴瘤、伯基特氏淋巴瘤(Burkitt'slymphoma)、滤泡性淋巴瘤、弥漫性组织细胞性淋巴瘤(DHL)、免疫母细胞性大细胞淋巴瘤、前体B淋巴母细胞淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤(CTLC)(也称为蕈样肉芽肿或塞扎里综合征(Sezary syndrome))和淋巴浆细胞样淋巴瘤(LPL)伴华氏巨球蛋白血症(Waldenstrom'smacroglobulinemia)；骨髓瘤，诸如IgG骨髓瘤、轻链骨髓瘤、非分泌性骨髓瘤、阴燃性骨髓瘤(smoldering myeloma)(也称为惰性骨髓瘤(indolent myeloma))、孤立性浆细胞瘤(solitary plasmocytoma)和多发性骨髓瘤、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、毛细胞淋巴瘤；髓样谱系造血肿瘤、间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤和横纹肌肉瘤；精原细胞瘤、畸胎瘤、间质起源的肿瘤，包括纤维肉瘤、横纹肌肉瘤和骨肉瘤；以及其他肿瘤，包括黑色素瘤、着色性干皮病、角化棘皮瘤、精原细胞瘤、甲状腺滤泡癌(thyroid follicularcancer)和畸胎瘤、淋巴样谱系造血肿瘤，例如T细胞和B细胞肿瘤，包括但不限于T细胞病症，诸如T幼淋巴细胞白血病(T-prolymphocytic leukemia，T-PLL)，包括小细胞和脑形细胞(cerebriform cell)类型；T细胞类型的大颗粒淋巴细胞白血病(LGL)；和T-NHL肝脾淋巴瘤；外周/胸腺后T细胞淋巴瘤(多形性和免疫母细胞亚型)；血管中心性(鼻)T细胞淋巴瘤；头或颈部癌症、肾癌、直肠癌、甲状腺癌；急性髓系淋巴瘤和它们的任何组合。
在一些方面，可治疗的癌症(或肿瘤)包括乳腺癌、头颈癌、子宫癌、脑癌、皮肤癌、肾癌、肺癌、结直肠癌、前列腺癌、肝癌、膀胱癌、肾癌、胰腺癌、甲状腺癌、食道癌、眼癌、胃癌、胃肠癌、癌瘤、肉瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或它们的组合。在某些方面，可用本发明的方法治疗的癌症(或肿瘤)是乳腺癌。在一些方面，乳腺癌是三阴性乳腺癌(TNBC)。在一些方面，可治疗的癌症(或肿瘤)是脑癌。在某些方面，脑癌是胶质母细胞瘤。在一些方面，可用本发明的方法治疗的癌症(或肿瘤)是皮肤癌。在一些方面，皮肤癌是基底细胞癌(BCC)、皮肤鳞状细胞癌(cSCC)、黑色素瘤、默克尔细胞癌(MCC)或它们的组合。在某些方面，头颈癌是头颈鳞状细胞癌。在另外的方面，肺癌是小细胞肺癌(SCLC)。在一些方面，食道癌是食管胃结合部癌。在某些方面，肾癌是肾细胞癌。在一些方面，肝癌是肝细胞癌。
在一些方面，本文所述的方法(例如，施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与IL-7的组合，其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用，或者其中IL-7在以下时间施用：(i)在施用核苷酸疫苗之后或(ii)与施用核苷酸疫苗同时)也可用于治疗转移性癌症、不可切除的、难治性癌症(例如，先前的癌症疗法难以治愈的癌症，例如免疫疗法，例如使用阻断性抗PD-1抗体的免疫疗法)和/或复发性癌症。在某些方面，先前的癌症疗法包括化学疗法。在一些方面，化学疗法包括铂基(platinum-based)疗法。在一些方面，铂基疗法包括选自由顺铂、卡铂、奥沙利铂、奈达铂(nedaplatin)、四硝酸三铂(triplatintetranitrate)、菲铂(phenanthriplatin)、吡铂(picoplatin)、沙铂(satraplatin)和它们的任何组合组成的组的铂基抗肿瘤药。在某些方面，铂基疗法包括顺铂。在另外的方面，铂基疗法包括卡铂。
在一些方面，本文所公开的方法(例如，施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与IL-7的组合，其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用，或者其中IL-7在以下时间施用：(i)在施用核苷酸疫苗之后或(ii)与施用核苷酸疫苗同时)有效地增加有需要的受试者(例如，患有肿瘤的受试者)的存活期持续时间。例如，在一些方面，当与参考个体(例如，用单独IL-7蛋白或用单独双特异性抗体治疗的对应受试者)相比时，受试者的存活期持续时间增加至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月或至少约1年或更长时间。在其他方面，本文所公开的方法以比参考受试者的存活期持续时间高一定水平(高约一个月、高约两个月、高约三个月、高约四个月、高约五个月、高约六个月、高约七个月、高约八个月、高约九个月、高约十个月、高约十一个月或高约一年)地增加受试者的存活期持续时间。
在一些方面，本公开的方法(例如，施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与IL-7的组合，其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用，或者其中IL-7在以下时间施用：(i)在施用核苷酸疫苗之后或(ii)与施用核苷酸疫苗同时)有效地增加受试者(例如，癌症患者)的无进展存活期持续时间。例如，当与参考受试者相比时，受试者的无进展存活期增加了至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月或至少约1年。
在一些方面，本文所公开的方法(例如，施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与IL-7的组合，其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用，或者其中IL-7在以下时间施用：(i)在施用核苷酸疫苗之后或(ii)与施用核苷酸疫苗同时)有效地增加一组受试者的反应率。例如，当与参考受试者相比时，一组受试者的反应率增加了至少约2％、至少约3％、至少约4％、至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约99％或至少约100％。
如本文所证明的，在一些方面，本文所述的组合疗法(例如，核苷酸疫苗和IL-7蛋白的组合)也可用作针对本文所述的疾病或病症(例如，癌症)的预防性治疗。因此，在一些方面，本文提供了一种预防或减少有需要的受试者中的肿瘤发生的方法，其包括向受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与IL-7蛋白的组合，其中核苷酸疫苗的施用诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中核苷酸疫苗、IL-7蛋白，或核苷酸疫苗和IL-7蛋白两者在肿瘤发生之前施用于受试者。
在一些方面，将核苷酸疫苗、IL-7蛋白或核苷酸疫苗和IL-7蛋白两者在肿瘤发生前至少约一天、至少约两天、至少约三天、至少约四天、至少约五天、至少约六天、至少约七天、至少约两周、至少约三周、至少约四周、至少约两个月、至少约三个月、至少约四个月、至少约五个月、至少约六个月、至少约七个月、至少约八个月、至少约九个月、至少约10个月、至少约11个月或至少约一年施用于受试者。
在一些方面，与参考(例如，未接受如上所述的组合治疗的对应受试者)相比，如上所述施用核苷酸疫苗、IL-7蛋白或核苷酸疫苗和IL-7蛋白两者可帮助减少肿瘤发生至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或至少约100％。
在一些方面，本公开的方法中所治疗的受试者是非人动物，诸如大鼠或小鼠。在一些方面，所治疗的受试者是人。
在一些方面，IL-7(例如诸如本文所公开的那些)以基于体重的剂量施用。在某些方面，IL-7以约5mg/kg与约15mg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7以约5mg/kg的剂量施用。
在一些方面，本文所述的核苷酸疫苗(例如，编码肿瘤抗原和/或IL-7的核苷酸疫苗)可以约0.1μg至约200mg范围内的剂量施用。在某些方面，剂量在约0.6mg至约100mg的范围内。在另外的方面，剂量在约1.2mg至约50mg的范围内。在某些方面，编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗的每个剂量为约4μg。在一些方面，本文所公开的方法包括向受试者(例如，罹患肿瘤的受试者)施用单剂量的核苷酸疫苗。在一些方面，向受试者施用多剂量的核苷酸疫苗。在这些方面的一些中，核苷酸疫苗以约每天一次、约每两天一次、约每三天一次、约每四天一次、约每五天一次、约每六天一次或约每七天一次的给药频率施用于受试者。在一些方面，核苷酸疫苗约每七天施用一次(即，每周一次)。在一些方面，核苷酸疫苗约每月施用一次。在某些方面，核苷酸疫苗约每三天施用一次，总共三个剂量。
在一些方面，本文所公开的方法(例如，施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与IL-7的组合，其中IL-7在肿瘤特异性免疫反应的峰值扩增阶段之后施用)包括向受试者(例如，罹患肿瘤的受试者)施用单剂量的IL-7。在一些方面，受试者接受多剂量的IL-7(即，重复施用)。在此类方面，IL-7可以一周一次、两周一次、三周一次、四周一次、五周一次、六周一次、七周一次、八周一次、九周一次、10周一次、11周一次或12周一次的给药频率施用。
在一些方面，本文所公开的方法包括(i)以每三天一次的给药频率向受试者施用三个剂量的核苷酸疫苗(例如，编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗)，以及(ii)在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后向受试者施用单剂量的IL-7。在某些方面，单剂量的IL-7在核苷酸疫苗的最初施用后第13天施用。
在一些方面，本文所提供的方法包括施用多剂量的核苷酸疫苗(例如，编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗)与IL-7蛋白的组合，其中在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂之后施用IL-7蛋白。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约四周内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约三周内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约两周内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约13天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约12天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约11天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约10天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约九天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约八天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约一周内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约六天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约五天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约四天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约三天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约两天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约一天内施用。在一些方面，IL-7蛋白与多剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂同时施用于受试者。
在一些方面，本文所提供的方法包括(i)以每三天一次的给药频率向受试者施用三个剂量的核苷酸疫苗(例如，编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗)，以及(ii)IL-7蛋白，其中在施用多个剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约两天内施用IL-7蛋白。在一些方面，本文所提供的方法包括(i)以每三至五天一次的给药频率向受试者施用三个剂量的核苷酸疫苗(例如，编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗)，以及(ii)IL-7蛋白，其中IL-7蛋白在施用多个剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂后约一天内施用。在一些方面，本文所提供的方法包括(i)以每三天一次的给药频率向受试者施用三个剂量的核苷酸疫苗(例如，编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗)，以及(ii)IL-7蛋白，其中IL-7蛋白与多个剂量的核苷酸疫苗中的至少一剂同时施用。
在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗之后施用于受试者。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约四周内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约三周内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约两周内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约13天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约12天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约11天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约10天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约九天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约八天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约一周内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约六天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约五天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约四天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约三天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约两天内施用。在一些方面，IL-7蛋白在施用所有多剂量的核苷酸疫苗后约一天内施用。
在一些方面，本文所公开的IL-7蛋白可以基于重量的剂量施用于受试者。在某些方面，IL-7蛋白可以约20μg/kg与约600μg/kg之间的基于重量的剂量施用。在某些方面，本公开的IL-7蛋白可以约20μg/kg、约60μg/kg、约120μg/kg、约240μg/kg、约360μg/kg、约480μg/kg或约600μg/kg的基于重量的剂量施用。
在一些方面，本文所公开的IL-7蛋白可以大于约600μg/kg的剂量施用于受试者。在某些方面，IL-7蛋白以大于约600μg/kg、大于约700μg/kg、大于约800μg/kg、大于约900μg/kg、大于约1,000μg/kg、大于约1,100μg/kg、大于约1,200μg/kg、大于约1,300μg/kg、大于约1,400μg/kg、大于约1,500μg/kg、大于约1,600μg/kg、大于约1,700μg/kg、大于约1,800μg/kg、大于约1,900μg/kg或大于约2,000μg/kg的剂量施用于受试者。
在一些方面，本公开的IL-7蛋白以610μg/kg与约1,200μg/kg之间、650μg/kg与约1,200μg/kg之间、约700μg/kg与约1,200μg/kg之间、约750μg/kg与约1,200μg/kg之间、约800μg/kg与约1,200μg/kg之间、约850μg/kg与约1,200μg/kg之间、约900μg/kg与约1,200μg/kg之间、约950μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,000μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,050μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,100μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,200μg/kg与约2,000μg/kg之间、约1,300μg/kg与约2,000μg/kg之间、约1,500μg/kg与约2,000μg/kg之间、约1,700μg/kg与约2,000μg/kg之间、约610μg/kg与约1,000μg/kg之间、约650μg/kg与约1,000μg/kg之间、约700μg/kg与约1,000μg/kg之间、约750μg/kg与约1,000μg/kg之间、约800μg/kg与约1,000μg/kg之间、约850μg/kg与约1,000μg/kg之间、约900μg/kg与约1,000μg/kg之间或约950μg/kg与约1,000μg/kg之间的剂量施用。
在一些方面，本公开的IL-7蛋白以610μg/kg与约1,200μg/kg之间的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以650μg/kg与约1,200μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约700μg/kg与约1,200μg/kg之间的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以750μg/kg与约1,200μg/kg之间的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约800μg/kg与约1,200μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约850μg/kg与约1,200μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约900μg/kg与约1,200μg/kg之间的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约950μg/kg与约1,200μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，本文所公开的IL-7蛋白以约1,000μg/kg与约1,200μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,050μg/kg与约1,200μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,100μg/kg与约1,200μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,200μg/kg与约2,000μg/kg之间的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约1,300μg/kg与约2,000μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,500μg/kg与约2,000μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,700μg/kg与约2,000μg/kg之间的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约610μg/kg与约1,000μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约650μg/kg与约1,000μg/kg之间的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约700μg/kg与约1,000μg/kg之间的剂量施用。在又另外的方面，IL-7蛋白以约750μg/kg与约1,000μg/kg之间的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约800μg/kg与约1,000μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约850μg/kg与约1,000μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，本公开的IL-7蛋白以约900μg/kg与约1,000μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约950μg/kg与约1,000μg/kg之间的剂量施用。
在一些方面，IL-7蛋白以约700μg/kg与约900μg/kg之间、约750μg/kg与约950μg/kg之间、约700μg/kg与约850μg/kg之间、约750μg/kg与约850μg/kg之间、约700μg/kg与约800μg/kg之间、约800μg/kg与约900μg/kg之间、约750μg/kg与约850μg/kg之间或约850μg/kg与约950μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约700μg/kg与约900μg/kg之间的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约750μg/kg与约950μg/kg之间的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约700μg/kg与约850μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约750μg/kg与约850μg/kg之间的剂量施用。在其他方面，IL-7蛋白以约700μg/kg与约800μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约800μg/kg与约900μg/kg之间的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约750μg/kg与约850μg/kg之间的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约850μg/kg与约950μg/kg之间的剂量施用。
在一些方面，IL-7蛋白以约650μg/kg、约680μg/kg、约700μg/kg、约720μg/kg、约740μg/kg、约750μg/kg、约760μg/kg、约780μg/kg、约800μg/kg、约820μg/kg、约840μg/kg、约850μg/kg、约860μg/kg、约880μg/kg、约900μg/kg、约920μg/kg、约940μg/kg、约950μg/kg、约960μg/kg、约980μg/kg、约1,000μg/kg、约1,020μg/kg、约1,020μg/kg、约1,040μg/kg、约1,060μg/kg、约1,080μg/kg、约1,100μg/kg、约1,120μg/kg、约1,140μg/kg、约1,160μg/kg、约1,180μg/kg、约1,200μg/kg、约1,220μg/kg、约1,240μg/kg、约1,260μg/kg、约1,280μg/kg、约1,300μg/kg、约1,320μg/kg、约1,340μg/kg、约1,360μg/kg、约1,380μg/kg、约1,400μg/kg、约1,420μg/kg、约1,440μg/kg、约1,460μg/kg、约1,480μg/kg、约1,500μg/kg、约1,520μg/kg、约1,540μg/kg、约1,560μg/kg、约1,580μg/kg、约1,600μg/kg、约1,620μg/kg、约1,640μg/kg、约1,660μg/kg、约1,680μg/kg、约1,700μg/kg、约1,720μg/kg、约1,740μg/kg、约1,760μg/kg、约1,780μg/kg、约1,800μg/kg、约1,820μg/kg、约1,840μg/kg、约1,860μg/kg、约1,880μg/kg、约1,900μg/kg、约1,920μg/kg、约1,940μg/kg、约1,960μg/kg、约1,980μg/kg或约2,000μg/kg的剂量施用。
在一些方面，IL-7蛋白以约650μg/kg的剂量施用。在其他方面，本文所公开的IL-7蛋白以约680μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约700μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约720μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约740μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约750μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约760μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约780μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约800μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约820μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约840μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约850μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约860μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约880μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约900μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约920μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约940μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约950μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约960μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约980μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,000μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,020μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约1,040μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,060μg/kg的剂量施用。在其他方面，IL-7蛋白以约1,080μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,100μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,120μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约1,140μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,160μg/kg的剂量施用。在其他方面，IL-7蛋白以约1,180μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,200μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,220μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约1,240μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,260μg/kg的剂量施用。在其他方面，IL-7蛋白以约1,280μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,300μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,320μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约1,340μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,360μg/kg的剂量施用。在其他方面，IL-7蛋白以约1,380μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约1,400μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,420μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,440μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,460μg/kg的剂量施用。在其他方面，IL-7蛋白以约1,480μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,500μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,520μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约1,540μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,560μg/kg的剂量施用。在其他方面，IL-7蛋白以约1,580μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,600μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,620μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约1,640μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,660μg/kg的剂量施用。在其他方面，IL-7蛋白以约1,680μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,700μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,720μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约1,740μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,760μg/kg的剂量施用。在其他方面，IL-7蛋白以约1,780μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,800μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,820μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约1,840μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,860μg/kg的剂量施用。在其他方面，IL-7蛋白以约1,880μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,900μg/kg的剂量施用。在某些方面，IL-7蛋白以约1,920μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约1,940μg/kg的剂量施用。在一些方面，IL-7蛋白以约1,960μg/kg的剂量施用。在其他方面，IL-7蛋白以约1,980μg/kg的剂量施用。在另外的方面，IL-7蛋白以约2,000μg/kg的剂量施用。
在一些方面，IL-7蛋白以约一周一次、约两周一次、约三周一次、约四周一次、约五周一次、约六周一次、约七周一次、约八周一次、约九周一次、约10周一次、约11周一次或约12周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以约每10天一次、约每20天一次、约每30天一次、约每40天一次、约每50天一次、约每60天一次、约每70天一次、约每80天一次、约每90天一次或约每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白三周施用一次。在一些方面，IL-7蛋白每周施用一次。在一些方面，IL-7蛋白两周施用一次。在某些方面，IL-7蛋白三周施用一次。在一些方面，IL-7蛋白四周施用一次。在某些方面，IL-7蛋白六周施用一次。在另外的方面，IL-7蛋白八周施用一次。在一些方面，IL-7蛋白九周施用一次。在某些方面，IL-7蛋白12周施用一次。在一些方面，IL-7蛋白每10天施用一次。在某些方面，IL-7蛋白每20天施用一次。在其他方面，IL-7蛋白每30天施用一次。在一些方面，IL-7蛋白每40天施用一次。在某些方面，IL-7蛋白每50天施用一次。在一些方面，IL-7蛋白每60天施用一次。在另外的方面，IL-7蛋白每70天施用一次。在一些方面，IL-7蛋白每80天施用一次。在某些方面，IL-7蛋白每90天施用一次。在一些方面，IL-7蛋白每100天施用一次。
在一些方面，IL-7蛋白以约720μg/kg的量以约1周、约2周、约3周或约4周的间隔施用两次或更多次。在一些方面，IL-7蛋白以约840μg/kg的量以约2周、约3周、约4周或约5周的间隔施用两次或更多次。在一些方面，IL-7蛋白以约960μg/kg的量以约2周、约3周、约4周、约5周或约6周的间隔施用两次或更多次。在一些方面，IL-7蛋白以约1200μg/kg的量以约3周、约4周、约5周、约6周、约7周或约8周的间隔施用两次或更多次。在一些方面，IL-7蛋白以约1440μg/kg的量以约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约2个月、约8周、约10周、约12周或约3个月的间隔施用两次或更多次。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以每周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以两周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以四周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以五周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以六周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以七周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以八周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以九周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以九周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以九周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以九周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以九周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以九周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以九周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以九周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以三周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以九周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以九周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以10周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以11周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以12周一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以每10天一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以每20天一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以每30天一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以每40天一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以每50天一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以每60天一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以每70天一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以每80天一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以每90天一次的给药频率施用。
在一些方面，IL-7蛋白以60μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以120μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以240μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以480μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以720μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以960μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,200μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,300μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,400μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在其他方面，IL-7蛋白以1,420μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,440μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,460μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在某些方面，IL-7蛋白以1,480μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,500μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在另外的方面，IL-7蛋白以1,600μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以1,700μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。在一些方面，IL-7蛋白以2,000μg/kg的剂量以每100天一次的给药频率施用。
在一些方面，可用于本公开的核苷酸疫苗包括DNA疫苗、mRNA疫苗或两者。在某些方面，核苷酸疫苗是DNA疫苗。在某些方面，核苷酸疫苗是mRNA疫苗。
在一些方面，IL-7作为蛋白质(IL-7蛋白)、编码IL-7蛋白的核酸或两者施用于受试者(例如，罹患肿瘤的受试者)。
可通过任何相关施用途径将本文所述的核苷酸疫苗(例如，编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗)和IL-7施用于患有实体瘤的受试者。在一些方面，核苷酸疫苗和/或IL-7经胃肠外、肌肉内、经皮、皮下、眼部、静脉内、腹膜内、皮内、眶内、脑内、颅内、脊柱内、心室内、鞘内、脑池内、囊内或瘤内施用于受试者。
在一些方面，本文所公开的方法(例如，施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与IL-7的组合，其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用)可与一种或多种另外的治疗剂组合使用(例如，抗癌剂和/或免疫调节剂)。此类剂可包括例如化学疗法药物、小分子药物或刺激对给定癌症的免疫反应的抗体。在一些方面，本文所述的方法与护理标准(例如，手术、放射和化学疗法)组合使用。本文所述的方法还可用作维持疗法，例如，意图预防肿瘤发生或复发的疗法。
在一些方面，一种或多种另外的治疗剂包括免疫肿瘤剂，使得免疫途径的多个元件可被靶向。非限制性的此类组合包括：增强肿瘤抗原呈递的疗法(例如，树突细胞疫苗、分泌GM-CSF的细胞疫苗、CpG寡核苷酸、咪喹莫特)；抑制负免疫调控的疗法，例如，通过抑制CTLA-4和/或PD-1/PD-L1/PD-L2途径和/或耗尽或阻断Treg或其他免疫抑制细胞(例如，髓系源性抑制细胞)；刺激正免疫调控的疗法，例如使用刺激CD-137、OX-40和/或CD40或GITR途径和/或刺激T细胞效应子功能的激动剂；全身性增加抗肿瘤T细胞频率的疗法；耗尽或抑制Treg(诸如肿瘤中的Treg)的疗法，例如，使用CD25的拮抗剂(例如，达利珠单抗(daclizumab))或通过离体抗CD25珠的耗尽；影响肿瘤中抑制性髓系细胞功能的疗法；增强肿瘤细胞免疫原性的疗法(例如蒽环类药物)；过继性T细胞或NK细胞转移，包括基因修饰的细胞，例如由嵌合抗原受体修饰的细胞(CAR-T疗法)；抑制代谢酶(诸如吲哚胺双加氧酶(IDO)、双加氧酶、精氨酸酶或一氧化氮合成酶)的疗法；逆转/预防T细胞无能(anergy)或耗竭(exhaustion)的疗法；在肿瘤部位触发先天免疫激活和/或炎症的疗法；施用免疫刺激性细胞因子；或阻断免疫抑制性细胞因子。
在一些方面，可与本公开一起使用的免疫肿瘤剂包括免疫检查点抑制剂(即，阻断通过特定免疫检查点途径的信号传导)。可用于本方法的免疫检查点抑制剂的非限制性实例包括CTLA-4拮抗剂(例如，抗CTLA-4抗体)、PD-1拮抗剂(例如，抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体)、TIM-3拮抗剂(例如抗TIM-3抗体)或它们的组合。
在一些方面，免疫肿瘤剂包括免疫检查点激活剂(即，促进通过特定免疫检查点途径的信号传导)。在某些方面，免疫检查点激活剂包括OX40激动剂(例如抗OX40抗体)、LAG-3激动剂(例如抗LAG-3抗体)、4-1BB(CD137)激动剂(例如抗CD137抗体)、GITR激动剂(例如，抗GITR抗体)或它们的任何组合。
III.可用于本公开的IL-7蛋白
本文公开了可与核苷酸疫苗(例如，编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗)组合使用，例如以治疗肿瘤癌症(或癌症)的IL-7蛋白。在一些方面，可用于本发明的用途的IL-7蛋白可以是野生型IL-7或修饰的IL-7(即，非野生型IL-7蛋白)(例如，IL-7变体、IL-7功能片段、IL-7衍生物或它们的任何组合，例如融合蛋白、嵌合蛋白等)，只要IL-7蛋白含有IL-7的一种或多种生物活性，例如能够与IL-7R结合，例如诱导早期T细胞发育，促进T细胞稳态即可。参见ElKassar和Gress.JImmunotoxicol.2010年3月；7(1):1–7。在一些方面，本公开的IL-7蛋白不是野生型IL-7蛋白(即，包含一个或多个修饰)。此类修饰的非限制性实例可包括寡肽和/或半衰期延长部分。参见WO 2016/200219，其以引用的方式整体并入本文。
IL-7与其受体结合，所述受体由与胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromallymphopoietin，TSLP)(Ziegler和Liu,2006)共享的两条链IL-7Rα(CD127)，以及IL-2、IL-15、IL-9和IL-21的共用γ链(CD132)构成。γc由大多数造血细胞表达，而IL-7Rα几乎仅在淋巴样细胞上表达。在与其受体结合后，IL-7通过两种不同的途径发出信号：分别为负责分化和存活的Jak-Stat(Janus激酶信号转导子和转录激活剂)和PI3K/Akt。如在已接受抗IL-7中和单克隆抗体(MAb)的小鼠(Grabstein等人,1993)、IL-7-/-小鼠(von Freeden-Jeffry等人,1995)、IL-7Rα-/-小鼠(Peschon等人,1994；Maki等人,1996)、γc-/-小鼠(Malissen等人,1997)和Jak3-/-小鼠(Park等人,1995)中所观察到的，不存在IL-7信号传导导致胸腺细胞减少。在不存在IL-7信号传导的情况下，小鼠缺乏T细胞、B细胞和NK-T细胞。IL-7α-/-小鼠(Peschon等人,1994)具有与IL-7-/-小鼠(von Freeden-Jeffry等人,1995)相似但更严重的表型，可能是因为在IL-7α-/-小鼠中TSLP信号传导也被废除。IL-7是γδ细胞(Maki等人,1996)和NK-T细胞(Boesteanu等人,1997)发育所必需的。
在一些方面，可用于本公开的IL-7蛋白包含如在SEQ ID NO:1至6中任一者中所示的氨基酸序列。在一些方面，IL-7蛋白包含与序列SEQ ID NO:1至6具有约70％、约75％、约80％、约85％、约90％、约91％、约92％、约93％、约94％、约95％、约96％、约97％、约98％或约99％或更高的序列同一性的氨基酸序列。
在一些方面，IL-7蛋白包括修饰的IL-7或其片段，其中修饰的IL-7或片段保留野生型IL-7的一种或多种生物活性。在一些方面，IL-7蛋白可来源于人、大鼠、小鼠、猴、母牛或绵羊。
在一些方面，人IL-7可具有由SEQ ID NO:1(Genbank登录号P13232)表示的氨基酸序列；大鼠IL-7可具有由SEQ ID NO:2(Genbank登录号P56478)表示的氨基酸序列；小鼠IL-7可具有由SEQ ID NO:3(Genbank登录号P10168)表示的氨基酸序列；猴IL-7可具有由SEQID NO:4(Genbank登录号NP 001279008)表示的氨基酸序列；母牛IL-7可具有由SEQ ID NO:5(Genbank登录号P26895)表示的氨基酸序列；并且绵羊IL-7可具有由SEQ ID NO:6(Genbank登录号Q28540)表示的氨基酸序列。
在一些方面，可用于本公开的IL-7蛋白包括IL-7融合蛋白。在某些方面，IL-7融合蛋白包含(i)寡肽和(i)IL-7或其变体。在一些方面，寡肽连接至IL-7或其变体的N末端区域。
在一些方面，本文所公开的寡肽由1至10个氨基酸组成。在某些方面，寡肽由至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少6个、至少7个、至少8个、至少9个或10个氨基酸组成。在一些方面，寡肽的一个或多个氨基酸选自由蛋氨酸、甘氨酸及它们的组合组成的组。在某些方面，寡肽选自由以下组成的组：蛋氨酸(M)、甘氨酸(G)、蛋氨酸-蛋氨酸(MM)、甘氨酸-甘氨酸(GG)、蛋氨酸-甘氨酸(MG)、甘氨酸-蛋氨酸(GM)、蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MMM)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MMG)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGM)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GMM)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MGG)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMG)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGM)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GGG)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGGM)(SEQ IDNO:41)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MMGG)(SEQ ID NO:42)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GGMM)(SEQ ID NO:43)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MGMG)(SEQ ID NO:44)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMMG)(SEQ ID NO:45)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGGM)(SEQ ID NO:46)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MGGG)(SEQ ID NO:47)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GMGG)(SEQ ID NO:48)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GGMG)(SEQ ID NO:49)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GGMMM)(SEQ ID NO:50)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GGGMM)(SEQ ID NO:51)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGGGM)(SEQ ID NO:52)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MGMMM)(SEQID NO:53)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MGGMM)(SEQ ID NO:54)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGGGM)(SEQ ID NO:55)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MMGMM)(SEQ ID NO:56)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MMGGM)(SEQ ID NO:57)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MMGGG)(SEQ ID NO:58)、蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MMMGM)(SEQ ID NO:59)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGMGM)(SEQ ID NO:60)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMGMG)(SEQ ID NO:61)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMMMG)(SEQ ID NO:62)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGMGM)(SEQ ID NO:63)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GGMMG)(SEQ ID NO:64)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GMMGM)(SEQ ID NO:65)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MGMMG)(SEQ ID NO:66)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GMGGM)(SEQ ID NO:67)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MMGMG)(SEQ ID NO:68)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GMMGG)(SEQ ID NO:69)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GMGGG)(SEQ ID NO:70)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GGMGG)(SEQ ID NO:71)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GGGGG)(SEQ ID NO:72)或它们的组合。在一些方面，寡肽是蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGM)。
在一些方面，IL-7融合蛋白包含(i)IL-7或其变体，和(ii)半衰期延长部分。在一些方面，半衰期延长部分延长了IL-7或其变体的半衰期。在一些方面，半衰期延长部分连接至IL-7或其变体的C末端区域。
在一些方面，IL-7融合蛋白包含：(i)IL-7(第一结构域)；(ii)第二结构域，其包含具有1至10个由蛋氨酸、甘氨酸或它们的组合(例如MGM)组成的氨基酸残基的氨基酸序列；以及(iii)包含半衰期延长部分的第三结构域。在一些方面，半衰期延长部分可连接至第一结构域或第二结构域的N末端或C末端。另外，包含第一结构域和第二结构域的IL-7可连接至第三结构域的两个末端。
半衰期延长部分的非限制性实例包括：Fc、白蛋白、白蛋白结合多肽、Pro/Ala/Ser(PAS)、人绒毛膜促性腺激素β亚基的C末端肽(CTP)、聚乙二醇(PEG)、长的非结构化亲水氨基酸序列(XTEN)、羟乙基淀粉(HES)、白蛋白结合小分子及它们的组合。
在一些方面，半衰期延长部分是Fc。在某些方面，Fc来自修饰的免疫球蛋白，其中由于与Fc受体和/或补体的结合亲和力的修饰，抗体依赖性细胞毒性(ADCC)或补体依赖性细胞毒性(CDC)减弱。在一些方面，修饰的免疫球蛋白可选自由IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1、IgA2、IgD、IgE及它们的组合组成的组。在一些方面，Fc是杂合Fc(“hFc”或“hyFc”)，其包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域。在某些方面，本文所公开的杂合Fc的铰链区包含人IgD铰链区。在某些方面，杂合Fc的CH2结构域包含人IgD CH2结构域的一部分和人IgG4 CH2结构域的一部分。在某些方面，杂合Fc的CH3结构域包含人IgG4 CH3结构域的一部分。因此，在一些方面，本文所公开的杂合Fc包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域，其中铰链区包含人IgD铰链区，其中CH2结构域包含人IgD CH2结构域的一部分和人IgG4 CH2结构域的一部分，并且其中CH3结构域包含人IgG4 CH3结构域的一部分。
在一些方面，本文所公开的Fc可以是Fc变体。如本文所用，术语“Fc变体”是指通过取代Fc区中的一部分氨基酸或通过组合不同种类的Fc区而制备的Fc。Fc区变体可防止在铰链区被切断。具体地，在一些方面，Fc变体包含SEQ ID NO:9的第144个氨基酸和/或第145个氨基酸处的修饰。在某些方面，第144个氨基酸(K)和/或第145个氨基酸(K)被G或S取代。
在一些方面，本文所公开的Fc或Fc变体可由下式表示：N'-(Z1)p-Y-Z2-Z3-Z4-C，其中：
N'包含N末端；
Z1包含具有在SEQ ID NO:7的位置90至98处的氨基酸残基中的从位置98处的氨基酸残基至N末端的5至9个连续的氨基酸残基的氨基酸序列；
Y包含具有在SEQ ID NO:7的位置99至162处的氨基酸残基中的从位置162处的氨基酸残基至N末端的5至64个连续的氨基酸残基的氨基酸序列；
Z2包含具有在SEQ ID NO:7的位置163至199处的氨基酸残基中的从位置163处的氨基酸残基至C末端的4至37个连续的氨基酸残基的氨基酸序列；
Z3包含具有在SEQ ID NO:8的位置115至220处的氨基酸残基中的从位置220处的氨基酸残基至N末端的71至106个连续的氨基酸残基的氨基酸序列；并且
Z4包含具有在SEQ ID NO:8的位置221至327处的氨基酸残基中的从位置221处的氨基酸残基至C末端的80至107个连续的氨基酸残基的氨基酸序列。
在一些方面，本文所公开的Fc区可包括氨基酸序列SEQ ID NO:9(hyFc)、SEQ IDNO:10(hyFcM1)、SEQ ID NO:11(hyFcM2)、SEQ ID NO:12(hyFcM3)或SEQ ID NO:13(hyFcM4)。在一些方面，Fc区可包含氨基酸序列SEQ ID NO:14(非裂解性小鼠Fc)。
可与本公开一起使用的Fc区的其他非限制性实例描述于美国专利号7,867,491中，所述专利以引用的方式整体并入本文。
在一些方面，本文所公开的IL-7融合蛋白包含寡肽和半衰期延长部分两者。
在一些方面，IL-7蛋白可与白蛋白、其变体或片段融合。IL-7-白蛋白融合蛋白的实例可见于国际申请公布号WO 2011/124718 A1。在一些方面，IL-7蛋白任选地通过柔性接头与前祖B细胞生长刺激因子(PPBSF)融合。参见US 2002/0058791A1。在一些方面，可用于本公开的IL-7蛋白是具有特定三维结构的IL-7构象体。参见US 2005/0249701A1。在一些方面，IL-7蛋白可与Ig链融合，其中IL-7蛋白中的氨基酸残基70和91被糖基化，IL-7蛋白中的氨基酸残基116未被糖基化。参见US 7,323,549 B2。在一些方面，不包含潜在T细胞表位(从而减少抗IL-7T细胞反应)的IL-7蛋白也可用于本公开。参见US 2006/0141581 A1。在一些方面，在羧基末端螺旋D区具有一个或多个氨基酸残基突变的IL-7蛋白可用于本公开。尽管对受体的结合亲和力较低，但IL-7突变体仍可充当IL-7R部分激动剂。参见US 2005/0054054A1。上文列出的专利或出版物中描述的任何IL-7蛋白均以引用的方式整体并入本文。
此外，可用于本公开的另外的IL-7蛋白的非限制性实例描述于：US 7708985；US8034327；US 8153114；US 7589179；US 7323549；US 7960514；US 8338575；US 7118754；US7488482；US 7670607；US 6730512；WO0017362；GB2434578A；WO 2010/020766 A2；WO91/01143；Beq等人,Blood,第114卷(4),816,2009年7月23日；Kang等人,J.Virol.Doi:10.1128/JVI.02768-15；Martin等人,Blood,第121卷(22),4484,2013年5月30日；McBride等人,Acta Oncologica,34:3,447-451,2009年7月8日；和Xu等人,Cancer Science,109:279-288,2018，所述参考以引用的方式整体并入本文。
在一些方面，本文所公开的寡肽直接连接至IL-7或其变体的N末端区域。在一些方面，寡肽通过接头连接至N末端区域。在一些方面，本文所公开的半衰期延长部分直接连接至IL-7或其变体的C末端区域。在某些方面，半衰期延长部分通过接头连接至C末端区域。在一些方面，接头是肽接头。在某些方面，肽接头包含由Gly和Ser残基组成的10至20个氨基酸残基的肽。在一些方面，接头是白蛋白接头。在一些方面，接头是化学键。在某些方面，化学键包括二硫键、二胺键、硫-胺键、羧-胺键、酯键、共价键或它们的组合。当接头是肽接头时，在一些方面，所述连接可发生在任何连接区域中。它们可使用本领域已知的交联剂进行偶联。在一些方面，交联剂的实例可包括：N-羟基琥珀酰亚胺酯，诸如1,1-双(重氮乙酰基)-2-苯基乙烷、戊二醛和4-叠氮水杨酸；亚胺酸酯，包括二琥珀酰亚胺酯，诸如3,3'-二硫代双(琥珀酰亚胺丙酸酯)；以及双官能马来酰亚胺，诸如双-N-马来酰亚胺-1,8-辛烷，但不限于此。
在一些方面，本文所公开的IL-7融合蛋白的IL-7(或其变体)部分包含与在SEQ IDNO:15-20中所示的氨基酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。在某些方面，本文所公开的IL-7融合蛋白的IL-7(或其变体)部分包含在SEQ ID NO:15-20中所示的氨基酸序列。
在一些方面，IL-7融合蛋白包含：第一结构域，其包含具有IL-7活性或其相似活性的多肽；第二结构域，其包含由蛋氨酸、甘氨酸或它们的组合组成的1至10个氨基酸残基的氨基酸序列；以及第三结构域，其是与第一结构域的C末端偶联的修饰的免疫球蛋白的Fc区。
在一些方面，可与本方法一起使用的IL-7融合蛋白包含与在SEQ ID NO:21-25中所示的氨基酸序列具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少98％或至少99％同一性的氨基酸序列。在某些方面，本公开的IL-7融合蛋白包含在SEQ ID NO:21-25中所示的氨基酸序列。在某些方面，本文所公开的IL-7融合蛋白包含在SEQ ID NO:26和27中所示的氨基酸序列。
在一些方面，可用于本公开IL-7蛋白在施用于受试者时可增加受试者的绝对淋巴细胞计数。在某些方面，受试者患有本文所述的疾病或病症(例如，癌症)。在一些方面，受试者是健康个体(例如未患有本文所述的疾病或病症，例如癌症)。在某些方面，与参考(例如，未接受IL-7蛋白的受试者的对应水平)相比，绝对淋巴细胞计数增加了至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％或更多。
IV.核苷酸疫苗、载体、宿主细胞
如本文所述，在一些方面，本文所公开的方法包括向受试者(例如，罹患肿瘤的受试者)施用核苷酸疫苗与IL-7的组合。在一些方面，核苷酸疫苗可包含一种或多种载体，所述载体包括一种或多种编码肿瘤抗原的异源核酸。在一些方面，核苷酸疫苗还可包含一种或多种载体，所述载体包括一种或多种编码另外的剂，例如本文所公开的IL-7蛋白的异源核酸。在某些方面，肿瘤抗原和IL-7蛋白可在单个载体中编码。在一些方面，肿瘤抗原和IL-7蛋白在单独的载体中编码。
如本领域技术人员显而易见的，本文所公开的核苷酸疫苗可编码本领域已知的可用于治疗肿瘤(或癌症)的任何抗原或蛋白质。如本文所述，在一些方面，核苷酸疫苗编码肿瘤抗原。肿瘤抗原的非限制性实例包括Lrrc27、Plekho1、Pttg1、Xpo4、Exoc4、Pank3、Tmem101、Map3k6、Met、BC057079、Hist1h3e、Prkag1、Neil3、鸟苷酸环化酶C(GC-C)、表皮生长因子受体(EGFR或erbB-1)、人表皮生长因子受体2(HER2或erbB2)、erbB-3、erbB-4、MUC-1、黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)、间皮素(MSLN)、叶酸受体1(FOLR1)、CD4、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD123、CD138、CD171、CEA、CSPG4、CXCR5、c-Met、HERV-包膜蛋白、eriostin、Bigh3、SPARC、BCR、CD79、CD37、EGFRvIII、EGP2、EGP40、IGFr、L1CAM、AXL、组织因子(TF)、CD74、EpCAM、EphA2、MRP3钙粘蛋白19(CDH19)、表皮生长因子2(HER2)、5T4、8H9、αvβ6整合素、BCMA、B7-H3、B7-H6、CAIX、CA9、FAP、FBP、胎儿型AchR、FRcc、GD2、GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1(GPC1)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-2(GPC2)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、HLA-A1+MAGE1、HLA-A1+NY-ESO-1、IL-13Rcc2、Lewis-Y、KDR、MCSP、间皮素、Muc1、Muc16、NCAM、NKG2D配体、NY-ESO-1、PRAME、PSC1、PSCA、PSMA、ROR1、ROR2、SP17、surviving、TAG72、TEM、癌胚抗原、HMW-MAA、VEGF、CLDN18.2或它们的组合。在一些方面，肿瘤抗原包括癌症新抗原(即，由肿瘤组织特异性表达而不在正常细胞表面表达的突变抗原)。此类抗原的实例，包括鉴定方法，是本领域已知的。参见例如，Hutchison等人,Mamm Genome 29(11):714-730(2018年8月)，所述文献以引用的方式整体并入本文。
在一些方面，本公开的核苷酸疫苗编码至少约一种、至少约两种、至少约三种、至少约四种、至少约五种、至少约六种、至少约七种、至少约八种、至少约九种、至少约十种、至少约11种、至少约12种、至少约13种、至少约14种、至少约15种、至少约16种、至少约17种、至少约18种、至少约19种、至少约20种、至少约21种、至少约22种、至少约23种、至少约24种、至少约25种、至少约26种、至少约27种、至少约28种、至少约29种、至少约30种、至少约35种、至少约40种、至少约45种或至少约50种或更多种不同的肿瘤抗原。
如本文所述，本公开的核苷酸疫苗包括DNA疫苗和mRNA疫苗。DNA疫苗，包括制备方法，描述于例如美国专利号7,795,017B2和5,643,578A，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。mRNA疫苗，包括制备方法，描述于例如美国公布号2018/0311336A1和2020/0085852A1中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。
如本领域已知的，大量因素可影响抗原基因的表达效率和/或核苷酸疫苗的免疫原性。此类因素的非限制性实例包括接种的再现性、质粒载体的构建、用于驱动抗原基因表达的启动子的选择和插入基因在质粒中的稳定性。根据它们的来源，启动子在启动mRNA合成的组织特异性和效率方面有所不同(Xiang等人,Virology,209:564-579(1994)；Chapman等人,Nucle.Acids.Res.,19:3979-3986(1991))，所述文献以引用的方式整体并入本文。迄今为止，哺乳动物系统中的大多数DNA疫苗都依赖于来源于巨细胞病毒(CMV)的病毒启动子。这些病毒启动子在许多哺乳动物物种的肌肉和皮肤接种中都具有良好的效率。另一个已知影响核苷酸疫苗免疫引发的免疫反应的因素是递送方法。例如，胃肠外途径可产生低基因转移率并产生相当大的基因表达可变性(Montgomery等人,DNA Cell Bio.,12:777-783(1993))。已经证明使用基因枪高速接种质粒(例如DNA质粒)会增强小鼠中的免疫反应(Fynan等人,Proc.Natl.Acad.Sci.,90:11478-11482(1993)；Eisenbraun等人,DNA CellBiol.,12:791-797(1993)，所述文献以引用的方式整体并入本文)，推测是因为DNA转染效率更高以及树突细胞更有效地呈递抗原。还可通过本领域已知的其他方法，例如转染、电穿孔、显微注射、转导、细胞融合、DEAE葡聚糖、磷酸钙沉淀、脂质体转染(溶酶体融合)或DNA载体转运蛋白，将含有本公开的核苷酸疫苗的载体引入所需宿主中(参见例如，Wu等人,J.Biol.Chem.267:963-967(1992)；Wu和Wu,J.Biol.Chem.263:14621-14624(1988)；Hartmut等人,美国专利号5,792,645A)，所述文献各自以引用的方式整体并入本文。
在一些方面，用于构建本公开的核苷酸疫苗的一种或多种载体包括表达载体、病毒载体、质粒载体或它们的组合。
在一些方面，载体是表达载体。如本文所用，"表达载体"是指任何核酸构建体，其含有用于插入的编码序列的转录和翻译所必需的元件，或者对于RNA病毒载体而言，被引入到适当的宿主细胞中时，用于复制和翻译所必需的元件。表达载体可包括质粒、噬菌粒、病毒及其衍生物。一旦表达载体进入细胞内，所述基因编码的蛋白质就可由细胞转录和翻译机制核糖体复合物产生。在一些方面，质粒可被工程化以含有充当增强子和启动子区域并导致表达载体上携带的基因的高效转录的调控序列。
在一些方面，本文所述的核苷酸疫苗可包含环状质粒或线性核酸。在一些方面，环状质粒和线性核酸能够指导特定异源核苷酸序列(例如，编码本文所述的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)在适当的受试者细胞中的表达。在一些方面，载体可具有可操作地连接至核苷酸序列(例如，编码本文所述的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)的启动子，其能够可操作地连接至终止信号。在某些方面，载体还可含有正确翻译核苷酸序列(例如，编码本文所述的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)所需的序列。在一些方面，包含感兴趣的核苷酸序列(例如，编码本文所述的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)的载体可以是嵌合的，这表示它的至少一种组分相对于它的至少一种其他组分是异源的。在一些方面，表达盒中的核苷酸序列(例如，编码本文所述的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)的表达可在组成型启动子或诱导型启动子的控制下，只有当宿主细胞暴露于某些特定的外部刺激时才启动转录。在多细胞生物体的情况下，启动子也可对特定组织或器官或发育阶段具有特异性。
在一些方面，核苷酸疫苗包含环状质粒，其可通过整合到细胞基因组中或存在于染色体外来转化靶细胞(例如，具有复制起点的自主复制质粒)。在此类方面，载体可以是pVAX、pcDNA3.0、provax或能够表达异源核酸(例如，编码本文所述的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)并使细胞能够翻译被免疫系统识别的序列的表达载体。
在一些方面，核苷酸疫苗包含线性核酸(例如，编码本文所述的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)，其能够被高效地递送给受试者并表达一种或多种所需的蛋白质(例如，本文所公开的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)。在某些方面，线性核酸可含有启动子、内含子、终止密码子和/或聚腺苷酸化信号，其帮助调节所需蛋白质(例如，本文所公开的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)的表达。在某些方面，线性核酸不含有任何抗生素抗性基因和/或磷酸骨架。在一些方面，线性核酸不含有与所需蛋白质(例如，本文所公开的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)表达无关的其他核酸序列。
在一些方面，线性核酸(例如，本文所公开的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)可来源于能够被线性化的任何质粒。可使用的质粒的非限制性实例包括pNP(Puerto Rico/34)、pM2(New Caledonia/99)、WLV009、pVAX、pcDNA3.0、provax或它们的组合。
如本文所述，在一些方面，可用于构建本公开的核苷酸疫苗的载体可包含启动子。在一些方面，启动子可以是能够驱动基因表达和调节核酸(例如，编码本文所公开的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)的表达的任何启动子。在某些方面，启动子是经由DNA依赖性RNA聚合酶进行转录所需的顺式作用序列元件。用于指导异源核酸(例如，编码本文所公开的肿瘤抗原和/或IL-7蛋白)的表达的启动子的选择可取决于特定应用。在一些方面，启动子可以是CMV启动子、SV40早期启动子、SV40晚期启动子、金属硫蛋白启动子、鼠乳腺肿瘤病毒启动子、劳氏(Rous)肉瘤病毒启动子、多角体蛋白启动子或证明对在真核细胞中表达有效的另一种启动子。可用于本公开的启动子的非限制性实例描述于美国专利号7,557,200B2中，所述专利以引用的方式整体并入本文。
在一些方面，可用于本公开的载体包括增强子和具有功能性剪接供体和受体位点的内含子。在某些方面，载体可含有结构基因下游的转录终止区以提供高效终止。终止区可获自与启动子序列相同的基因或可获自不同基因。
在一些方面，载体是病毒载体。如本文所用，病毒载体包括但不限于来自以下病毒的核酸序列：逆转录病毒，诸如莫洛尼(Moloney)鼠白血病病毒、哈维(Harvey)鼠肉瘤病毒、鼠乳腺肿瘤病毒和劳氏肉瘤病毒；慢病毒；腺病毒；腺相关病毒；SV40型病毒；多瘤病毒；爱泼斯坦-巴尔(Epstein-Barr)病毒；乳头状瘤病毒；疱疹病毒；牛痘病毒；脊髓灰质炎病毒；以及RNA病毒，诸如逆转录病毒。人们可容易地使用本领域众所周知的其他载体。某些病毒载体基于其中非必需基因已被感兴趣的基因替换的非致细胞病变真核病毒。非致细胞病变病毒包括逆转录病毒，其生命周期包括将基因组病毒RNA逆转录为DNA，随后将原病毒整合到宿主细胞DNA中。
在一些方面，载体来源于腺相关病毒。在一些方面，载体来源于慢病毒。慢病毒载体的实例公开于WO9931251、W09712622、W09817815、W09817816和WO9818934中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。
本公开还涵盖一种用于制备本文所公开的治疗剂(例如IL-7蛋白)的方法。在一些方面，此方法可包括在细胞中表达治疗剂(例如IL-7蛋白)，所述细胞包含编码所述治疗剂的核酸分子，例如SEQ ID NO:29-39。在例如美国公布号2018/0273596A1中提供了关于用于制备本文所公开的IL-7蛋白的方法的另外的细节，所述专利以引用的方式整体并入本文。本文涵盖包含这些核苷酸序列的宿主细胞。可使用的宿主细胞的非限制性实例包括永生杂交瘤细胞、NS/0骨髓瘤细胞、293细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、HeLa细胞、人羊水来源的细胞(CapT细胞)、COS细胞或它们的组合。
V.药物组合物
本文还提供了组合物，其包含在生理上可接受的载剂、赋形剂或稳定剂中的具有所需纯度的一种或多种治疗剂(例如核苷酸疫苗和/或IL-7)(Remington'sPharmaceutical Sciences(1990)Mack Publishing Co.,Easton,PA)。在一些方面，本文所公开的组合物包含编码肿瘤抗原的一种或多种核苷酸疫苗。在一些方面，本文所公开的组合物包含IL-7(例如本文所公开的那些)。如本文所公开，此类组合物可组合使用(例如包含核苷酸疫苗的第一组合物和包含IL-7的第二组合物)。在这些方面的一些中，包含IL-7的组合物在施用包含核苷酸疫苗的组合物之后(例如，在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后)施用。在某些方面，组合物包含(i)编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗和(ii)IL-7。
可接受的载剂、赋形剂或稳定剂在采用的剂量和浓度下对接受者是无毒的，并且包括：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)的多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖类，诸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，诸如钠离子；金属络合物(例如，Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，诸如或聚乙二醇(PEG)。
在一些方面，本文所公开的组合物包含一种或多种选自以下的另外的组分：增量剂、稳定剂、表面活性剂、缓冲剂或它们的组合。
可用于本公开的缓冲剂可以是用于在添加另一种酸或碱后将溶液的酸度(pH)维持在选定值附近的弱酸或弱碱。合适的缓冲剂可通过维持组合物的pH控制来最大化药物组合物的稳定性。合适的缓冲剂还可确保生理相容性或优化溶解度。流变学、粘度和其他特性也可取决于组合物的pH。常见的缓冲剂包括但不限于Tris缓冲剂、Tris-Cl缓冲剂、组氨酸缓冲剂、TAE缓冲剂、HEPES缓冲剂、TBE缓冲剂、磷酸钠缓冲剂、MES缓冲剂、硫酸铵缓冲剂、磷酸钾缓冲剂、硫氰酸钾缓冲剂、琥珀酸盐缓冲剂、酒石酸盐缓冲剂、DIPSO缓冲剂、HEPPSO缓冲剂、POPSO缓冲剂、PIPES缓冲剂、PBS缓冲剂、MOPS缓冲剂、乙酸盐缓冲剂、磷酸盐缓冲剂、二甲胂酸盐缓冲剂、甘氨酸缓冲剂、硫酸盐缓冲剂、咪唑缓冲剂、盐酸胍缓冲剂、磷酸盐-柠檬酸盐缓冲剂、硼酸盐缓冲剂、丙二酸盐缓冲剂、3-甲基吡啶缓冲剂、2-甲基吡啶缓冲剂、4-甲基吡啶缓冲剂、3,5-二甲基吡啶缓冲剂、3,4-二甲基吡啶缓冲剂、2,4-二甲基吡啶缓冲剂、Aces、丙二酸二乙酯缓冲剂、N-甲基咪唑缓冲剂、1,2-二甲基咪唑缓冲剂、TAPS缓冲剂、bis-Tris缓冲剂、L-精氨酸缓冲剂、乳酸盐缓冲剂、乙醇酸盐缓冲剂或它们的组合。
在一些方面，本文所公开的组合物还包含增量剂。可将增量剂添加到药物产品中以增加产品的体积和质量，从而促进其精确计量和处理。可与本公开一起使用的增量剂包括但不限于氯化钠(NaCl)、甘露糖醇、甘氨酸、丙氨酸或它们的组合。
在一些方面，本文所公开的组合物还可包含稳定剂。可与本公开一起使用的稳定剂的非限制性实例包括：蔗糖、海藻糖、棉子糖、精氨酸或它们的组合。
在一些方面，本文所公开的组合物包含表面活性剂。在某些方面，表面活性剂可选自以下：烷基乙氧基化物、壬基酚乙氧基化物、胺乙氧基化物、聚环氧乙烷、聚环氧丙烷、脂肪醇如鲸蜡醇或油醇、椰油酰胺MEA、椰油酰胺DEA、聚山梨酯、十二烷基二甲胺氧化物或它们的组合。在一些方面，表面活性剂是聚山梨酯20或聚山梨酯80。
在一些方面，可使用用于配制包含IL-7的组合物的相同制剂来配制包含核苷酸疫苗的组合物。在一些方面，核苷酸疫苗和IL-7是使用不同的制剂来配制的。
在一些方面，本文所公开的IL-7被配制在组合物中，所述组合物包含(a)基础缓冲剂、(b)糖和(c)表面活性剂。在某些方面，基础缓冲剂包含组氨酸-乙酸盐或柠檬酸钠。在一些方面，基础缓冲剂的浓度为约10至约50nM。在一些方面，糖包括蔗糖、海藻糖、右旋糖或它们的组合。在一些方面，糖以约2.5至约5.0重量/体积％的浓度存在。在某些方面，表面活性剂选自聚山梨酯、聚氧乙烯烷基醚、聚氧乙烯硬脂酸酯、烷基硫酸盐、聚乙烯基吡啶酮、泊洛沙姆(poloxamer)或它们的组合。在一些方面，表面活性剂的浓度为约0.05％至约6.0重量/体积％。
在一些方面，本文所公开的组合物(例如，包含核苷酸疫苗和/或IL-7)还包含氨基酸。在某些方面中，氨基酸选自精氨酸、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸或它们的组合。在某些方面，组合物还包含糖醇。糖醇的非限制性实例包括：山梨糖醇、木糖醇、麦芽糖醇、甘露糖醇或它们的组合。
在一些方面，本文所公开的IL-7被配制在组合物中，所述组合物包含以下：(a)柠檬酸钠(例如约20mM)，(b)蔗糖(例如约5％)，(c)山梨糖醇(例如约1.5％)，以及(d)Tween80(例如约0.05％)。
在一些方面，IL-7如美国公布号2018/0327472A1所述进行配制，所述专利整体并入本文。
本文所公开的药物组合物可被配制用于向受试者的任何施用途径。施用途径的具体实例包括肌肉内、经皮、皮下、眼部、静脉内、腹膜内、皮内、眶内、脑内、颅内、脊柱内、心室内、鞘内、脑池内、囊内或瘤内。本文还预期了以例如皮肤、皮下、肌肉内或静脉内注射为特征的胃肠外施用。在一些方面，使用相同的施用途径来施用核苷酸疫苗和IL-7。在一些方面，使用不同的施用途径来施用核苷酸疫苗和IL-7。
可制备呈常规形式的注射剂，作为液体溶液或混悬液、适合用于在注射前在液体中溶解或悬浮的固体形式或作为乳剂。注射剂、溶液和乳剂还含有一种或多种赋形剂。合适的赋形剂是例如水、盐水、右旋糖、甘油或乙醇。另外，如果需要，待施用的药物组合物还可包含微量无毒的辅助物质，诸如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂、稳定剂、溶解增强剂和其他此类剂，例如像乙酸钠、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、三乙醇胺油酸酯和环糊精。
用于胃肠外制备剂的药学上可接受的载剂包括水性媒介物、非水性媒介物、抗微生物剂、等渗剂、缓冲剂、抗氧化剂、局部麻醉剂、悬浮剂和分散剂、乳化剂、多价螯合剂或螯合剂以及其他药学上可接受的物质。水性媒介物的实例包括氯化钠注射液、林格氏(Ringers)注射液、等渗右旋糖注射液、无菌水注射液、葡萄糖和乳酸林格氏注射液。非水性胃肠外媒介物包括植物来源的固定油、棉籽油、玉米油、芝麻油和花生油。可将抑菌或抑真菌浓度的抗微生物剂添加到包装在多剂量容器中的胃肠外制备剂中，所述抗微生物剂包括苯酚或甲酚、汞、苯甲醇、氯丁醇、对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、硫柳汞、苯扎氯铵和苄索氯铵。等渗剂包括氯化钠和右旋糖。缓冲剂包括磷酸盐和柠檬酸盐。抗氧化剂包括硫酸氢钠。局部麻醉剂包括盐酸普鲁卡因。悬浮剂和分散剂包括羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素和聚乙烯吡咯烷酮。乳化剂包括聚山梨酯80(80)。金属离子的多价螯合剂或螯合剂包括EDTA。药物载剂还包括用于水混溶性媒介物的乙醇、聚乙二醇和丙二醇；以及用于pH调节的氢氧化钠、盐酸、柠檬酸或乳酸。
用于胃肠外施用的制备剂包括：准备用于注射的无菌溶液；准备在使用前与溶剂组合的无菌干燥可溶性产品，诸如冻干粉末，包括皮下注射片剂；准备用于注射的无菌混悬液；准备在使用前与媒介物组合的无菌干燥不溶性产品；以及无菌乳剂。溶液可以是水性的或非水性的。
如果静脉内施用，则合适的载剂包括生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)以及含有增稠剂和增溶剂(诸如葡萄糖、聚乙二醇和聚丙二醇及其混合物)的溶液。
如用于局部和全身施用所述来制备包含抗体的外用混合物。所得混合物可以是溶液、悬浮液、乳液等，并且可配制成霜剂、凝胶、软膏、乳剂、溶液、酏剂、洗剂、混悬液、酊剂、糊剂、泡沫剂、气雾剂、冲洗剂、喷雾剂、栓剂、绷带、皮肤贴剂或适用于外用施用的任何其他制剂。
本文所述的治疗剂可配制成气雾剂，以用于外用应用，诸如通过吸入(参见例如，美国专利号4,044,126、4,414,209和4,364,923，所述专利描述了用于递送可用于治疗炎性疾病(特别是哮喘)的类固醇的气雾剂)。这些用于施用至呼吸道的制剂可以呈用于雾化器的气雾剂或溶液形式，或者作为单独或与惰性载剂(诸如乳糖)组合的用于吹入的微细粉末。在这种情况下，制剂的颗粒的直径可小于约50微米，例如小于10约微米。
本文所公开的治疗剂可被配制用于局部或外用应用，诸如以凝胶、霜剂和洗剂的形式外用应用至皮肤和粘膜(诸如眼)，以及用于应用至眼或用于脑池内或脊柱内应用。外用施用预期用于透皮递送，并且还用于施用至眼或粘膜，或用于吸入疗法。还可单独或与其他药学上可接受的赋形剂组合施用抗体的鼻溶液。
包括离子电渗和电泳装置的透皮贴剂是本领域技术人员众所周知的，并且可用于施用治疗剂(例如本文所公开的那些)。例如，此类贴剂公开于美国专利号6,267,983、6,261,595、6,256,533、6,167,301、6,024,975、6,010715、5,985,317、5,983,134、5,948,433和5,860,957中，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。
在某些方面，包含本文所述的治疗剂的药物组合物是冻干粉末，所述冻干粉末可被复原以用于作为溶液、乳剂和其他混合物施用。其还可被复原并配制成固体或凝胶。通过将本文所述的抗体或其抗原结合部分或其药学上可接受的衍生物溶解在合适的溶剂中来制备冻干粉末。在一些方面，冻干粉末是无菌的。溶剂可含有赋形剂，所述赋形剂改善粉末或由粉末制备的复原溶液的稳定性或其他药理组分。可使用的赋形剂包括但不限于右旋糖、山梨糖醇、果糖、玉米糖浆、木糖醇、甘油、葡萄糖、蔗糖或其他合适的剂。溶剂还可含有缓冲剂，诸如柠檬酸盐、磷酸钠或磷酸钾或本领域技术人员已知的其他此类缓冲剂，在一些方面，为约中性pH。随后对溶液进行无菌过滤，然后在本领域技术人员已知的标准条件下冻干，从而提供所需的制剂。在一些方面，可将所得溶液分配到小瓶中用于冻干。每个小瓶可包含单剂量或多剂量的化合物。冻干粉末可在适当的条件下储存，诸如在约4℃至室温下储存。
用注射用水复原此冻干粉末提供用于胃肠外施用的制剂。为了复原，将冻干粉末添加到无菌水或其他合适的载剂中。精确的量取决于所选的化合物。此类量可凭经验确定。
还可将本文提供的组合物配制为靶向待治疗受试者的特定组织、受体或身体的其他区域。许多此类靶向方法是本领域技术人员众所周知的。本文预期了用于本发明组合物的所有此类靶向方法。对于靶向方法的非限制性实例，参见例如，美国专利号6,316,652、6,274,552、6,271,359、6,253,872、6,139,865、6,131,570、6,120,751、6,071,495、6,060,082、6,048,736、6,039,975、6,004,534、5,985,307、5,972,366、5,900,252、5,840,674、5,759,542和5,709,874，所述专利各自以引用的方式整体并入本文。
待用于体内施用的组合物可以是无菌的。这易于通过例如无菌过滤膜的过滤来实现。
以下实施例仅是说明性的，并且不应解释为以任何方式限制本公开的范围，因为在阅读本公开后，许多改变和等效物对于本领域技术人员而言将变得清楚。
实施例
实施例1：分析IL-7和核苷酸疫苗组合疗法的施用方案
为了开始评定IL-7施用对核苷酸疫苗治疗肿瘤(或癌症)功效的影响，构建了编码来自雌激素受体阳性小鼠乳腺癌的一个或多个新抗原表位的DNA疫苗。简而言之，将编码以下表位中的一个或多个的核酸插入单个pcDNA3.1(+)骨架中：Lrrc27、Plekho1、Pttg1、Xpo4、Exoc4、Pank3、Tmem101、Map3k6、Met、BC057079、Hist1h3e、Prkag1和Neil3。参见Hundal等人,Genome Med 8(1):11(Jan.2016)，所述文献以引用的方式整体并入本文。
然后，以每三天一次的给药频率，用DNA疫苗构建体对初试C57BL6小鼠进行总共三个剂量(4μg/剂量)的免疫接种。参见图1A。使用基因枪将DNA疫苗经皮施用于小鼠。一些动物在最初DNA疫苗施用后第4天或第13天接受单剂量的IL-7(10mg/kg)。不同的治疗组如下：(i)单独对照载体(G1)；(ii)单独DNA疫苗(G2)；(iii)DNA疫苗+最初DNA疫苗施用后第4天IL-7施用(G3)；和(iv)DNA疫苗+最初DNA疫苗施用后第13天IL-7施用(G4)。在最初DNA疫苗施用后第11、20和29天处死来自每个治疗组的一些动物，并使用IFN-γELISPOT测定评定脾中的肿瘤特异性T细胞免疫反应。
如图1C所示，与用单独DNA疫苗(G2)治疗的动物相比，在最初DNA疫苗施用后第4天(即，肿瘤特异性T细胞免疫反应的扩增阶段)施用IL-7(G3)不会导致脾中肿瘤特异性T细胞(即，对Lrrc27、Plekho1或Pttg1表位具有特异性)的频率明显增加。然而，如图1B所示，用IL-7与DNA疫苗的组合治疗的动物表现出脾肿大，导致总脾细胞数目增加。因此，与接受单独DNA疫苗的动物相比，在扩增阶段期间用IL-7治疗的动物脾中肿瘤特异性T细胞的总数更高(参见图1D)。然而，到最初DNA疫苗施用后第20天，与用单独DNA疫苗治疗的动物相比，肿瘤特异性T细胞免疫反应(无论是在频率还是总数方面)没有显著差异(比较图1E和图1F中的G2和G3)。
在肿瘤特异性T细胞免疫反应的收缩阶段期间(即，在最初DNA疫苗施用后第13天)用IL-7治疗的动物中，与其他治疗组相比，脾中肿瘤特异性T细胞的频率和总数都有显著增加(分别参见图1E和图1F)。
上述结果证明，在T细胞收缩阶段期间施用IL-7可延长肿瘤特异性T细胞免疫反应，这可用于治疗肿瘤(或癌症)。
实施例2：分析IL-7对IL-7和核苷酸疫苗组合疗法功效的剂量效应
为了鉴定与本文所公开的核苷酸疫苗组合施用时IL-7的最佳剂量，如实施例1中所述，用DNA疫苗构建体对初试C57BL6小鼠进行免疫接种(参见图2A)。然后在最初DNA疫苗施用后第13天(即，在收缩阶段期间)，以以下剂量之一将单剂量的IL-7施用于动物：5、10或15mg/kg。不同的治疗组如下：(i)仅对照载体(G1)；(ii)仅DNA疫苗(G2)；(iii)DNA疫苗+5mg/kg IL-7(G3)；(iv)DNA疫苗+10mg/kg IL-7(G4)；和(v)DNA疫苗+15mg/kg IL-7(G5)。在最初DNA疫苗施用后第20天处死动物，并使用IFN-γELISPOT测定评定脾和淋巴结中的肿瘤特异性T细胞免疫反应。
如图2B所示，与早期数据(参见实施例1)一致，与单独用DNA疫苗治疗的动物相比，在收缩阶段期间用10mg/kg IL-7治疗的动物在脾中具有更高频率的肿瘤特异性T细胞(即，对Lrrc27、Plekho1或Pttg1表位具有特异性)。与仅DNA疫苗的组相比，在收缩阶段期间用其他剂量IL-7(即5mg/kg或15mg/kg)治疗的动物也具有更高频率的肿瘤特异性T细胞。虽然差异似乎没有统计学显著性，但在用5mg/kg IL-7治疗的动物中，脾中肿瘤特异性T细胞的频率似乎略高。在淋巴结中观察到类似的结果(参见图2C)。
上述数据进一步证明了在DNA疫苗施用后T细胞免疫反应的收缩阶段期间施用IL-7的治疗效果。结果另外提供了可以约5mg/kg至约15mg/kg的剂量施用IL-7。
实施例3：分析核苷酸疫苗和IL-7组合疗法的抗肿瘤作用
为了评定本文所公开的DNA疫苗和IL-7组合疗法的能力，使用了同基因乳腺癌动物模型(E0771)。简而言之，用如实施例1和2中所述的DNA疫苗构建体来对动物进行免疫接种(参见图3A)。在最初DNA疫苗施用后第8天，给动物皮下植入E0771肿瘤细胞(5x 105个细胞/小鼠)。然后，在最初DNA疫苗施用后13天，一些动物接受单次施用的IL-7(5mg/kg)。治疗组如下：(i)单独对照载体(G1)；(ii)单独DNA疫苗(G2)；(iii)DNA疫苗+最初DNA疫苗施用后第13天IL-7(5mg/kg)。然后，定期测量动物的肿瘤体积。
如图3B所示，与对照动物(即G1)相比，接受单独DNA疫苗的动物在实验结束时(即，最初DNA疫苗施用后第28天)肿瘤体积略小。在收缩阶段期间另外接受IL-7的动物中，肿瘤体积甚至更小。
这些结果证明，本文所公开的组合疗法(即，施用核苷酸疫苗与IL-7的组合，其中IL-7在肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增期之后施用)可用于治疗肿瘤(或癌症)。
实施例4：分析IL-7施用对核苷酸疫苗施用后诱导的记忆T细胞的作用
为了评估本文所公开的DNA疫苗和IL-7组合疗法对新抗原特异性记忆T细胞反应的作用，将使用卵清蛋白(OVA)动物模型。卵清蛋白是一种模型抗原，并且有充分的证据表明，使用基于DNA的OVA疫苗接种会诱导可检测的记忆反应。动物将接受以下治疗之一：(i)无治疗；(ii)单独基于DNA的OVA疫苗；(iii)单独编码肿瘤抗原(例如诸如实施例1中描述的那些)的DNA疫苗；(iv)编码肿瘤抗原的DNA疫苗+IL-7。在一些方面，IL-7将在肿瘤特异性T细胞免疫反应的收缩阶段期间(例如，在最初DNA疫苗施用后第13天)以5mg/kg的单剂量施用于动物。
在最初DNA疫苗施用后约60天，将处死小鼠并收集外周(脾、血液)和骨髓的单核细胞用于免疫监测。从脾和血液中分离出的PBMC，经过48小时的离体抗原攻击后，将使用流式细胞术进行分析，使用抗体面板鉴定以下T细胞群(CD3+)：细胞毒性T细胞(CD8+、CD11a/b+、IFNγ+)、TH1细胞(CD4+、CD69、IFNγ+)、记忆T细胞(CD44+、CD62L+)和调节性T细胞(CD4+、CD25+)。另外，还将使用CFSE增殖测定评定新抗原特异性T细胞的增殖。
实施例5：分析IL-7施用对核苷酸疫苗施用后T细胞介导的细胞毒性的作用
为了进一步评定本文所述的DNA疫苗和IL-7组合疗法的治疗效果，用如实施例1和2中所述的DNA疫苗构建体来对初试小鼠进行免疫接种(参见图4A)。在最初免疫后第13天(即，收缩阶段及其)，一些动物接受单次施用的IL-7蛋白(5mg/kg)。不同的治疗组如下：(i)仅对照载体(G1)；(ii)仅DNA疫苗(G2)；(iii)单独IL-7蛋白(G3)；和(iv)DNA疫苗+IL-7蛋白(G4)。在最初免疫后的第22、34、45或51天，给动物静脉注射CFSE标记的幼稚脾细胞，所述脾细胞未用或用新抗原脉冲。然后，24小时后，处死来自不同治疗组的动物，并经由流式细胞术测量CFSE表达来评定脉冲脾细胞的杀伤百分比。
如图4B所示，与用对照载体(G1)和单独IL-7蛋白(G3)治疗的动物相比，用单独DNA疫苗构建体(描述于实施例1中)免疫接种的动物(G2)表现出增加的T细胞介导的杀伤。然而，在用DNA疫苗和IL-7蛋白组合疗法(G4)治疗的动物中观察到对新抗原脉冲的脾细胞的最大杀伤。对于分析的所有四个时间点，这通常都是正确的。
上述结果证实本文所述的DNA疫苗和IL-7组合治疗方案可诱导有效的细胞毒性T细胞，其可用于治疗各种癌症。
实施例6：进一步分析核苷酸疫苗和IL-7组合疗法的抗肿瘤作用
除了实施例3中提供的抗肿瘤数据，接下来评定本文所述的DNA疫苗和IL-7组合疗法在肿瘤诱导后施用时是否也能具有治疗效果。简而言之，如图5A所示，在小鼠两侧皮下植入E0771肿瘤细胞(参见例如实施例3)。一旦达到可触知的肿瘤大小(在约25-100mm3之间；肿瘤植入后大约3-6天)，对动物进行随机化(即第0天)。然后，在随机化后第1、4和9天，一些动物用实施例1和2中描述的对照载体或DNA疫苗构建体进行免疫接种。在随机化后第2天或第14天，一些动物用IL-7蛋白(5mg/kg)静脉注射治疗。治疗组如下：(i)单独对照载体(“载体”)；(ii)单独IL-7蛋白(“IL-7”)；(iii)单独DNA疫苗(“nAg”)；(iv)DNA疫苗+IL-7，其中在随机化后第2天施用IL-7蛋白(“nAg+IL-7D2”)；和(v)DNA疫苗+IL-7，其中在随机化后第14天施用IL-7蛋白(“nAg+IL-7D14”)。在随机化后第20和30天，处死来自每个治疗组的一些动物，并使用IFN-γELISPOT测定评定脾中的肿瘤特异性T细胞免疫反应。
如图5B所示，在随机化后第20天，与来自不同治疗组的动物相比，用组合疗法(DNA疫苗+IL-7)治疗的肿瘤动物通常具有更强的肿瘤特异性T细胞免疫反应。针对评定的所有三个表位都观察到增加的T细胞免疫反应：Lrrc27、Plekho1和Pttg1。
上述结果进一步证明了本文所述的DNA疫苗+IL-7组合疗法的抗肿瘤作用，并且表明在肿瘤发作后施用此疗法也可具有治疗效果。实施例7：分析作为预防性癌症疫苗的核苷酸疫苗和IL-7组合疗法
为了评定本文所述的DNA疫苗和IL-7组合疗法是否能够预防性使用，如实施例1和2中所述，用对照载体或DNA疫苗构建体对初试小鼠进行免疫接种。具体而言，小鼠以每三天一次的给药频率(即第0、3和6天)接受总共三个剂量剂(4μg/剂量)的DNA疫苗。参见图6A。在最初DNA疫苗施用后13天，一些动物接受单次静脉内剂量的IL-7蛋白(5mg/kg)。治疗组如下：(i)单独对照载体("vector")；(ii)单独DNA疫苗("nAg")；(iii)单独IL-7蛋白("仅IL-7")；和(iv)DNA疫苗和IL-7("nAg+IL-7")。在最初DNA疫苗施用后第27天，在来自不同治疗组的动物两侧皮下植入E0771肿瘤细胞(参见例如实施例3)。在肿瘤植入后的不同时间，评定动物中的肿瘤体积。
如图6B所示，用单独对照载体或单独DNA疫苗治疗的动物未能控制肿瘤的生长。然而，在用DNA疫苗和IL-7的组合治疗的动物中，几乎没有观察到肿瘤生长。而且，在用IL-7蛋白治疗的动物中，肿瘤生长也减少了，至少与对照载体或仅用DNA疫苗治疗的动物相比是这样。
上述结果证明本文所述的组合疗法也可用作预防和/或最小化肿瘤生长的预防性疫苗。数据进一步证明，在某些情况下，单独IL-7蛋白也可帮助预防和/或最小化肿瘤生长。
序列表
<110> 新免疫技术有限公司
华盛顿大学
<120> 用IL-7蛋白和核苷酸疫苗的组合治疗肿瘤的方法
<130> 4241.017PC01/C-K/DKC
<150> US 63/110,142
<151> 2020-11-05
<160> 72
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 177
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Leu Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys
20 25 30
Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu
35 40 45
Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe
50 55 60
Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe
65 70 75 80
Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr
100 105 110
Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala
115 120 125
Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu
130 135 140
Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu
145 150 155 160
Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu
165 170 175
His
<210> 2
<211> 154
<212> PRT
<213> 褐家鼠(Rattus norvegicus)
<400> 2
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Thr Ser Ser Asp Cys His Ile Lys Asp Lys
20 25 30
Asp Gly Lys Ala Phe Gly Ser Val Leu Met Ile Ser Ile Asn Gln Leu
35 40 45
Asp Lys Met Thr Gly Thr Asp Ser Asp Cys Pro Asn Asn Glu Pro Asn
50 55 60
Phe Phe Lys Lys His Leu Cys Asp Asp Thr Lys Glu Ala Ala Phe Leu
65 70 75 80
Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
85 90 95
Glu Glu Phe Asn Asp His Leu Leu Arg Val Ser Asp Gly Thr Gln Thr
100 105 110
Leu Val Asn Cys Thr Ser Lys Glu Glu Lys Thr Ile Lys Glu Gln Lys
115 120 125
Lys Asn Asp Pro Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Arg Glu Ile Lys Thr
130 135 140
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Lys Gly Ser Ile
145 150
<210> 3
<211> 154
<212> PRT
<213> 小家鼠(Mus Musculus)
<400> 3
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Thr Ser Ser Glu Cys His Ile Lys Asp Lys
20 25 30
Glu Gly Lys Ala Tyr Glu Ser Val Leu Met Ile Ser Ile Asp Glu Leu
35 40 45
Asp Lys Met Thr Gly Thr Asp Ser Asn Cys Pro Asn Asn Glu Pro Asn
50 55 60
Phe Phe Arg Lys His Val Cys Asp Asp Thr Lys Glu Ala Ala Phe Leu
65 70 75 80
Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
85 90 95
Glu Glu Phe Asn Val His Leu Leu Thr Val Ser Gln Gly Thr Gln Thr
100 105 110
Leu Val Asn Cys Thr Ser Lys Glu Glu Lys Asn Val Lys Glu Gln Lys
115 120 125
Lys Asn Asp Ala Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Arg Glu Ile Lys Thr
130 135 140
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Lys Gly Ser Ile
145 150
<210> 4
<211> 177
<212> PRT
<213> 非洲绿猴(Cercopithecus aethiops)
<400> 4
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Leu Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys
20 25 30
Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu
35 40 45
Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe
50 55 60
Asn Phe Phe Lys Arg His Leu Cys Asp Asp Asn Lys Glu Gly Met Phe
65 70 75 80
Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser
85 90 95
Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr
100 105 110
Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Lys Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala
115 120 125
Leu Gly Glu Pro Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu
130 135 140
Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Ser Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu
145 150 155 160
Gln Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu
165 170 175
His
<210> 5
<211> 176
<212> PRT
<213> 普通牛(Bos taurus)
<400> 5
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Ser Gly Lys
20 25 30
Asp Gly Gly Ala Tyr Gln Asn Val Leu Met Val Asn Ile Asp Asp Leu
35 40 45
Asp Asn Met Ile Asn Phe Asp Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Pro Asn
50 55 60
Phe Phe Lys Lys His Ser Cys Asp Asp Asn Lys Glu Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Asn Arg Ala Ser Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
85 90 95
Asp Asp Phe Lys Leu His Leu Ser Thr Val Ser Gln Gly Thr Leu Thr
100 105 110
Leu Leu Asn Cys Thr Ser Lys Gly Lys Gly Arg Lys Pro Pro Ser Leu
115 120 125
Ser Glu Ala Gln Pro Thr Lys Asn Leu Glu Glu Asn Lys Ser Ser Lys
130 135 140
Glu Gln Lys Lys Gln Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Ile Leu Leu Gln
145 150 155 160
Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Arg Gly Ile Lys Glu His
165 170 175
<210> 6
<211> 176
<212> PRT
<213> 绵羊(Ovis aries)
<400> 6
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
1 5 10 15
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Phe Ser Gly Lys
20 25 30
Asp Gly Gly Ala Tyr Gln Asn Val Leu Met Val Ser Ile Asp Asp Leu
35 40 45
Asp Asn Met Ile Asn Phe Asp Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Pro Asn
50 55 60
Phe Phe Lys Lys His Ser Cys Asp Asp Asn Lys Glu Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
85 90 95
Asp Asp Phe Lys Leu His Leu Ser Thr Val Ser Gln Gly Thr Leu Thr
100 105 110
Leu Leu Asn Cys Thr Ser Lys Gly Lys Gly Arg Lys Pro Pro Ser Leu
115 120 125
Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Asn Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys
130 135 140
Glu Gln Arg Lys Gln Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Ile Leu Leu Gln
145 150 155 160
Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Arg Gly Ile Thr Glu His
165 170 175
<210> 7
<211> 384
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IgD恒定区的氨基酸序列(Genbank登录号P01880)
<400> 7
Ala Pro Thr Lys Ala Pro Asp Val Phe Pro Ile Ile Ser Gly Cys Arg
1 5 10 15
His Pro Lys Asp Asn Ser Pro Val Val Leu Ala Cys Leu Ile Thr Gly
20 25 30
Tyr His Pro Thr Ser Val Thr Val Thr Trp Tyr Met Gly Thr Gln Ser
35 40 45
Gln Pro Gln Arg Thr Phe Pro Glu Ile Gln Arg Arg Asp Ser Tyr Tyr
50 55 60
Met Thr Ser Ser Gln Leu Ser Thr Pro Leu Gln Gln Trp Arg Gln Gly
65 70 75 80
Glu Tyr Lys Cys Val Val Gln His Thr Ala Ser Lys Ser Lys Lys Glu
85 90 95
Ile Phe Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro
100 105 110
Thr Ala Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala
115 120 125
Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys
130 135 140
Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu
145 150 155 160
Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala
165 170 175
Val Gln Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val
180 185 190
Val Gly Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly
195 200 205
Lys Val Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser
210 215 220
Asn Gly Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu
225 230 235 240
Trp Asn Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu
245 250 255
Pro Pro Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro
260 265 270
Val Lys Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala
275 280 285
Ala Ser Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile
290 295 300
Leu Leu Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe
305 310 315 320
Ala Pro Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala
325 330 335
Trp Ser Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr
340 345 350
Tyr Thr Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala
355 360 365
Ser Arg Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His Gly Pro Met Lys
370 375 380
<210> 8
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 部分人IgG4恒定区的氨基酸序列
(Genbank登录号AAH25985)
<400> 8
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 9
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hyFc的氨基酸序列
<400> 9
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys
1 5 10 15
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
20 25 30
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
115 120 125
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Gly Lys
245
<210> 10
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hyFcM1的氨基酸序列
<400> 10
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Gly Gly Lys Glu Lys
1 5 10 15
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
20 25 30
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
115 120 125
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Gly Lys
245
<210> 11
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hyFcM2的氨基酸序列
<400> 11
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Gly Ser Lys Glu Lys
1 5 10 15
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
20 25 30
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
115 120 125
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Gly Lys
245
<210> 12
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hyFcM3的氨基酸序列
<400> 12
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Ser Gly Lys Glu Lys
1 5 10 15
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
20 25 30
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
115 120 125
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Gly Lys
245
<210> 13
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> hyFcM4的氨基酸序列
<400> 13
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Ser Ser Lys Glu Lys
1 5 10 15
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
20 25 30
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
115 120 125
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Gly Lys
245
<210> 14
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 小鼠IgG Fc变体的氨基酸序列
<400> 14
Ala Ser Ala Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys
1 5 10 15
Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe
20 25 30
Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val
35 40 45
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile
50 55 60
Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr
65 70 75 80
His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro
85 90 95
Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Ala Phe Ala Cys Ala Val
100 105 110
Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro
115 120 125
Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu
130 135 140
Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp
145 150 155 160
Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr
165 170 175
Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
180 185 190
Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu
195 200 205
Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His
210 215 220
His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys Gly Gly Gly Asn
225 230 235 240
Ser Gly Ser
<210> 15
<211> 153
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(M)的氨基酸序列
<400> 15
Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val
1 5 10 15
Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly
20 25 30
Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys
35 40 45
Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu
50 55 60
Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu
65 70 75 80
Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln
85 90 95
Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys
100 105 110
Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp
115 120 125
Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn
130 135 140
Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
145 150
<210> 16
<211> 154
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MM)的氨基酸序列
<400> 16
Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser
1 5 10 15
Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile
20 25 30
Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile
35 40 45
Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys
50 55 60
Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His
65 70 75 80
Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly
85 90 95
Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr
100 105 110
Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn
115 120 125
Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp
130 135 140
Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
145 150
<210> 17
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MMM)的氨基酸序列
<400> 17
Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
1 5 10 15
Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
20 25 30
Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
35 40 45
Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg
50 55 60
Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu
65 70 75 80
His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr
85 90 95
Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro
100 105 110
Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu
115 120 125
Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys
130 135 140
Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
145 150 155
<210> 18
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MGM)的氨基酸序列
<400> 18
Met Gly Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
1 5 10 15
Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
20 25 30
Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
35 40 45
Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg
50 55 60
Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu
65 70 75 80
His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr
85 90 95
Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro
100 105 110
Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu
115 120 125
Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys
130 135 140
Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
145 150 155
<210> 19
<211> 155
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(DDD)的氨基酸序列
<400> 19
Asp Asp Asp Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
1 5 10 15
Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
20 25 30
Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
35 40 45
Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg
50 55 60
Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu
65 70 75 80
His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr
85 90 95
Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro
100 105 110
Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu
115 120 125
Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys
130 135 140
Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
145 150 155
<210> 20
<211> 156
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MMMM)的氨基酸序列
<400> 20
Met Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr
1 5 10 15
Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys
20 25 30
Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg
35 40 45
His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala
50 55 60
Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp
65 70 75 80
Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys
85 90 95
Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln
100 105 110
Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys
115 120 125
Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr
130 135 140
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
145 150 155
<210> 21
<211> 398
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(M)融合hyFc的氨基酸序列
<400> 21
Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val
1 5 10 15
Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly
20 25 30
Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys
35 40 45
Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu
50 55 60
Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu
65 70 75 80
Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln
85 90 95
Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys
100 105 110
Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp
115 120 125
Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn
130 135 140
Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly
145 150 155 160
Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu
165 170 175
Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe
180 185 190
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
195 200 205
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
210 215 220
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
225 230 235 240
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
245 250 255
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
260 265 270
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
275 280 285
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
290 295 300
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
305 310 315 320
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
325 330 335
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
340 345 350
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
355 360 365
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
370 375 380
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
385 390 395
<210> 22
<211> 399
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MM)融合hyFc的氨基酸序列
<400> 22
Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser
1 5 10 15
Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile
20 25 30
Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile
35 40 45
Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys
50 55 60
Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His
65 70 75 80
Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly
85 90 95
Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr
100 105 110
Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn
115 120 125
Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp
130 135 140
Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg Gly
145 150 155 160
Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg
165 170 175
Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val
180 185 190
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
195 200 205
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
210 215 220
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
225 230 235 240
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
245 250 255
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
260 265 270
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
275 280 285
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
290 295 300
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
305 310 315 320
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
325 330 335
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
340 345 350
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
355 360 365
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
370 375 380
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
385 390 395
<210> 23
<211> 400
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MMM)融合hyFc的氨基酸序列
<400> 23
Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
1 5 10 15
Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
20 25 30
Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
35 40 45
Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg
50 55 60
Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu
65 70 75 80
His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr
85 90 95
Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro
100 105 110
Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu
115 120 125
Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys
130 135 140
Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg
145 150 155 160
Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu
165 170 175
Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly
180 185 190
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
195 200 205
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
210 215 220
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
225 230 235 240
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
245 250 255
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
260 265 270
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
275 280 285
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
290 295 300
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
305 310 315 320
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
325 330 335
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
340 345 350
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
355 360 365
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
370 375 380
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
385 390 395 400
<210> 24
<211> 400
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MGM)融合hyFc的氨基酸序列
<400> 24
Met Gly Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
1 5 10 15
Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
20 25 30
Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
35 40 45
Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg
50 55 60
Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu
65 70 75 80
His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr
85 90 95
Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro
100 105 110
Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu
115 120 125
Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys
130 135 140
Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg
145 150 155 160
Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu
165 170 175
Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly
180 185 190
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
195 200 205
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
210 215 220
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
225 230 235 240
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
245 250 255
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
260 265 270
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
275 280 285
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
290 295 300
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
305 310 315 320
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
325 330 335
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
340 345 350
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
355 360 365
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
370 375 380
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
385 390 395 400
<210> 25
<211> 401
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MMMM)融合hyFc的氨基酸序列
<400> 25
Met Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr
1 5 10 15
Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys
20 25 30
Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg
35 40 45
His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala
50 55 60
Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp
65 70 75 80
Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys
85 90 95
Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln
100 105 110
Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys
115 120 125
Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr
130 135 140
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly
145 150 155 160
Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu
165 170 175
Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu
180 185 190
Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
195 200 205
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
210 215 220
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
225 230 235 240
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
245 250 255
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
260 265 270
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
275 280 285
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
290 295 300
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
305 310 315 320
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
325 330 335
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
340 345 350
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
355 360 365
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
370 375 380
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
385 390 395 400
Lys
<210> 26
<211> 397
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IL-7融合hyFc的氨基酸序列
<400> 26
Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu
1 5 10 15
Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser
20 25 30
Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp
35 40 45
Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg
50 55 60
Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu
65 70 75 80
Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val
85 90 95
Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser
100 105 110
Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu
115 120 125
Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys
130 135 140
Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu
145 150 155 160
Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr
165 170 175
Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu
180 185 190
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
195 200 205
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
210 215 220
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
225 230 235 240
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
245 250 255
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
260 265 270
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
275 280 285
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
290 295 300
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
305 310 315 320
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
325 330 335
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
340 345 350
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
355 360 365
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
370 375 380
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
385 390 395
<210> 27
<211> 395
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IL-7融合非裂解性小鼠Fc的氨基酸序列
<400> 27
Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu
1 5 10 15
Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser
20 25 30
Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp
35 40 45
Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg
50 55 60
Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu
65 70 75 80
Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val
85 90 95
Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser
100 105 110
Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu
115 120 125
Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys
130 135 140
Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ala Ser Ala Glu Pro Arg Gly Pro
145 150 155 160
Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu
165 170 175
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu
180 185 190
Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
195 200 205
Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu
210 215 220
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr
225 230 235 240
Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser
245 250 255
Gly Lys Ala Phe Ala Cys Ala Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro
260 265 270
Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln
275 280 285
Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val
290 295 300
Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val
305 310 315 320
Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu
325 330 335
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg
340 345 350
Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val
355 360 365
Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg
370 375 380
Thr Pro Gly Lys Gly Gly Gly Asn Ser Gly Ser
385 390 395
<210> 28
<211> 531
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人IL-7的核苷酸序列
<400> 28
atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60
cctgtggcca gctccgactg cgacatcgag ggaaaagacg gcaagcagta cgaaagcgtg 120
ctgatggtgt ccatcgacca gctgctggat tctatgaagg agattgggag taactgcctg 180
aacaatgagt tcaacttctt caaacggcac atttgtgatg ccaacaagga gggaatgttc 240
ctgtttcggg ccgctagaaa actgaggcag ttcctgaaga tgaacagcac cggagacttt 300
gatctgcatc tgctgaaagt gtctgagggc accacaatcc tgctgaactg cactgggcag 360
gtgaaaggaa ggaagcctgc cgctctggga gaggctcagc caaccaagtc actggaggaa 420
aacaaaagcc tgaaggaaca gaagaaactg aatgacctgt gctttctgaa acggctgctg 480
caggagatca aaacatgttg gaacaagatt ctgatgggca caaaggaaca c 531
<210> 29
<211> 534
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(M)的核苷酸序列
<400> 29
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgga ctgcgacatc gagggcaagg acggcaagca gtacgagagc 120
gtgctgatgg tgagcatcga ccagctgctg gacagcatga aggagatcgg cagcaactgc 180
ctgaacaacg agttcaactt cttcaagaga cacatctgcg acgccaacaa ggagggcatg 240
ttcctgttca gagccgccag aaagctgaga cagttcctga agatgaacag caccggcgac 300
ttcgacctgc acctgctgaa ggtgagcgag ggcacaacca tcctgctgaa ctgcaccggc 360
caggtgaagg gcagaaagcc cgccgccctg ggcgaggccc agcccaccaa gagcctggag 420
gagaacaaga gcctgaagga gcagaagaag ctgaacgacc tgtgcttcct gaagagactg 480
ctgcaggaga tcaagacctg ctggaacaag atcctgatgg gcaccaagga gcac 534
<210> 30
<211> 537
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MM)的核苷酸序列
<400> 30
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat ggactgcgac atcgagggca aggacggcaa gcagtacgag 120
agcgtgctga tggtgagcat cgaccagctg ctggacagca tgaaggagat cggcagcaac 180
tgcctgaaca acgagttcaa cttcttcaag agacacatct gcgacgccaa caaggagggc 240
atgttcctgt tcagagccgc cagaaagctg agacagttcc tgaagatgaa cagcaccggc 300
gacttcgacc tgcacctgct gaaggtgagc gagggcacaa ccatcctgct gaactgcacc 360
ggccaggtga agggcagaaa gcccgccgcc ctgggcgagg cccagcccac caagagcctg 420
gaggagaaca agagcctgaa ggagcagaag aagctgaacg acctgtgctt cctgaagaga 480
ctgctgcagg agatcaagac ctgctggaac aagatcctga tgggcaccaa ggagcac 537
<210> 31
<211> 540
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MMM)的核苷酸序列
<400> 31
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat gatggactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120
gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180
aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240
ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300
ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360
accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420
ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480
agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540
<210> 32
<211> 540
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MGM)的核苷酸序列
<400> 32
atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60
cctgtggcca gctccatggg gatggactgc gacatcgagg gaaaagacgg caagcagtac 120
gaaagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag ctgctggatt ctatgaagga gattgggagt 180
aactgcctga acaatgagtt caacttcttc aaacggcaca tttgtgatgc caacaaggag 240
ggaatgttcc tgtttcgggc cgctagaaaa ctgaggcagt tcctgaagat gaacagcacc 300
ggagactttg atctgcatct gctgaaagtg tctgagggca ccacaatcct gctgaactgc 360
actgggcagg tgaaaggaag gaagcctgcc gctctgggag aggctcagcc aaccaagtca 420
ctggaggaaa acaaaagcct gaaggaacag aagaaactga atgacctgtg ctttctgaaa 480
cggctgctgc aggagatcaa aacatgttgg aacaagattc tgatgggcac caaggagcac 540
<210> 33
<211> 540
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(DDD)的核苷酸序列
<400> 33
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcgacga tgacgactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120
gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180
aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240
ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300
ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360
accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420
ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480
agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540
<210> 34
<211> 543
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MMMM)的核苷酸序列
<400> 34
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat gatgatggac tgcgacatcg agggcaagga cggcaagcag 120
tacgagagcg tgctgatggt gagcatcgac cagctgctgg acagcatgaa ggagatcggc 180
agcaactgcc tgaacaacga gttcaacttc ttcaagagac acatctgcga cgccaacaag 240
gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc 300
accggcgact tcgacctgca cctgctgaag gtgagcgagg gcacaaccat cctgctgaac 360
tgcaccggcc aggtgaaggg cagaaagccc gccgccctgg gcgaggccca gcccaccaag 420
agcctggagg agaacaagag cctgaaggag cagaagaagc tgaacgacct gtgcttcctg 480
aagagactgc tgcaggagat caagacctgc tggaacaaga tcctgatggg caccaaggag 540
cac 543
<210> 35
<211> 1284
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(M)融合hyFc的核苷酸序列
<400> 35
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgga ctgcgacatc gagggcaagg acggcaagca gtacgagagc 120
gtgctgatgg tgagcatcga ccagctgctg gacagcatga aggagatcgg cagcaactgc 180
ctgaacaacg agttcaactt cttcaagaga cacatctgcg acgccaacaa ggagggcatg 240
ttcctgttca gagccgccag aaagctgaga cagttcctga agatgaacag caccggcgac 300
ttcgacctgc acctgctgaa ggtgagcgag ggcacaacca tcctgctgaa ctgcaccggc 360
caggtgaagg gcagaaagcc cgccgccctg ggcgaggccc agcccaccaa gagcctggag 420
gagaacaaga gcctgaagga gcagaagaag ctgaacgacc tgtgcttcct gaagagactg 480
ctgcaggaga tcaagacctg ctggaacaag atcctgatgg gcaccaagga gcacaggaac 540
acaggcagag gcggcgagga gaagaagaag gagaaggaga aggaggagca ggaggaaaga 600
gagaccaaga cccccgagtg ccccagccac acccagcccc tgggcgtgtt cctgttccct 660
cccaagccca aggacaccct gatgatcagc agaacccccg aggtgacctg cgtggtcgtg 720
gatgtgagcc aggaagatcc cgaagtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaagtg 780
cacaacgcca agaccaagcc cagagaagag cagttcaact ccacctacag agtggtgagc 840
gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtgtcc 900
aacaaaggcc tgcccagctc catcgagaag accatcagca aagccaaagg ccagcccaga 960
gaaccccagg tgtacaccct gcctcccagc caggaagaga tgaccaagaa ccaggtgtcc 1020
ctgacctgcc tggtgaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggaaagcaac 1080
ggccagcccg agaacaatta caagacaacc cctcccgtgc tggatagcga tggcagcttc 1140
tttctgtaca gcagactgac cgtggacaag agcagatggc aggaaggcaa cgtgttcagc 1200
tgcagcgtga tgcacgaagc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gtccctgagc 1260
ctgggcaagt gactcgagtc taga 1284
<210> 36
<211> 1272
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MM)融合hyFc的核苷酸序列
<400> 36
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat ggactgcgac atcgagggca aggacggcaa gcagtacgag 120
agcgtgctga tggtgagcat cgaccagctg ctggacagca tgaaggagat cggcagcaac 180
tgcctgaaca acgagttcaa cttcttcaag agacacatct gcgacgccaa caaggagggc 240
atgttcctgt tcagagccgc cagaaagctg agacagttcc tgaagatgaa cagcaccggc 300
gacttcgacc tgcacctgct gaaggtgagc gagggcacaa ccatcctgct gaactgcacc 360
ggccaggtga agggcagaaa gcccgccgcc ctgggcgagg cccagcccac caagagcctg 420
gaggagaaca agagcctgaa ggagcagaag aagctgaacg acctgtgctt cctgaagaga 480
ctgctgcagg agatcaagac ctgctggaac aagatcctga tgggcaccaa ggagcacagg 540
aacacaggca gaggcggcga ggagaagaag aaggagaagg agaaggagga gcaggaggaa 600
agagagacca agacccccga gtgccccagc cacacccagc ccctgggcgt gttcctgttc 660
cctcccaagc ccaaggacac cctgatgatc agcagaaccc ccgaggtgac ctgcgtggtc 720
gtggatgtga gccaggaaga tcccgaagtg cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggaa 780
gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagaa gagcagttca actccaccta cagagtggtg 840
agcgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg 900
tccaacaaag gcctgcccag ctccatcgag aagaccatca gcaaagccaa aggccagccc 960
agagaacccc aggtgtacac cctgcctccc agccaggaag agatgaccaa gaaccaggtg 1020
tccctgacct gcctggtgaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggaaagc 1080
aacggccagc ccgagaacaa ttacaagaca acccctcccg tgctggatag cgatggcagc 1140
ttctttctgt acagcagact gaccgtggac aagagcagat ggcaggaagg caacgtgttc 1200
agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaagag cctgtccctg 1260
agcctgggca ag 1272
<210> 37
<211> 1275
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MMM)融合hyFc的核苷酸序列
<400> 37
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat gatggactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac 120
gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc 180
aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag 240
ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc 300
ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc 360
accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc 420
ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag 480
agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac 540
aggaacacag gcagaggcgg cgaggagaag aagaaggaga aggagaagga ggagcaggag 600
gaaagagaga ccaagacccc cgagtgcccc agccacaccc agcccctggg cgtgttcctg 660
ttccctccca agcccaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgcgtg 720
gtcgtggatg tgagccagga agatcccgaa gtgcagttca actggtacgt ggatggcgtg 780
gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaagagcagt tcaactccac ctacagagtg 840
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 900
gtgtccaaca aaggcctgcc cagctccatc gagaagacca tcagcaaagc caaaggccag 960
cccagagaac cccaggtgta caccctgcct cccagccagg aagagatgac caagaaccag 1020
gtgtccctga cctgcctggt gaaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa 1080
agcaacggcc agcccgagaa caattacaag acaacccctc ccgtgctgga tagcgatggc 1140
agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg 1200
ttcagctgca gcgtgatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgtcc 1260
ctgagcctgg gcaag 1275
<210> 38
<211> 1275
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MGM)融合hyFc的核苷酸序列
<400> 38
atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg 60
cctgtggcca gctccatggg gatggactgc gacatcgagg gaaaagacgg caagcagtac 120
gaaagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag ctgctggatt ctatgaagga gattgggagt 180
aactgcctga acaatgagtt caacttcttc aaacggcaca tttgtgatgc caacaaggag 240
ggaatgttcc tgtttcgggc cgctagaaaa ctgaggcagt tcctgaagat gaacagcacc 300
ggagactttg atctgcatct gctgaaagtg tctgagggca ccacaatcct gctgaactgc 360
actgggcagg tgaaaggaag gaagcctgcc gctctgggag aggctcagcc aaccaagtca 420
ctggaggaaa acaaaagcct gaaggaacag aagaaactga atgacctgtg ctttctgaaa 480
cggctgctgc aggagatcaa aacatgttgg aacaagattc tgatgggcac aaaggaacac 540
cgcaatactg ggcggggcgg ggaggaaaag aaaaaggaga aggaaaagga ggaacaggag 600
gaaagagaga ctaagacccc agaatgtccc agccatactc agcccctggg ggtgttcctg 660
tttcccccta aacctaagga taccctgatg atcagcagga cacccgaggt gacctgcgtg 720
gtcgtggatg tgagccagga agatcccgaa gtgcagttca actggtacgt ggatggcgtg 780
gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaagagcagt tcaactccac ctacagagtg 840
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 900
gtgtccaaca aaggcctgcc cagctccatc gagaagacca tcagcaaagc caaaggccag 960
cccagagaac cccaggtgta caccctgcct cccagccagg aagagatgac caagaaccag 1020
gtgtccctga cctgcctggt gaaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa 1080
agcaacggcc agcccgagaa caattacaag acaacccctc ccgtgctgga tagcgatggc 1140
agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg 1200
ttcagctgca gcgtgatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgtcc 1260
ctgagcctgg gcaag 1275
<210> 39
<211> 1278
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 修饰的IL-7(MMMM)融合hyFc的核苷酸序列
<400> 39
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg 60
cccgtggcca gcagcatgat gatgatggac tgcgacatcg agggcaagga cggcaagcag 120
tacgagagcg tgctgatggt gagcatcgac cagctgctgg acagcatgaa ggagatcggc 180
agcaactgcc tgaacaacga gttcaacttc ttcaagagac acatctgcga cgccaacaag 240
gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc 300
accggcgact tcgacctgca cctgctgaag gtgagcgagg gcacaaccat cctgctgaac 360
tgcaccggcc aggtgaaggg cagaaagccc gccgccctgg gcgaggccca gcccaccaag 420
agcctggagg agaacaagag cctgaaggag cagaagaagc tgaacgacct gtgcttcctg 480
aagagactgc tgcaggagat caagacctgc tggaacaaga tcctgatggg caccaaggag 540
cacaggaaca caggcagagg cggcgaggag aagaagaagg agaaggagaa ggaggagcag 600
gaggaaagag agaccaagac ccccgagtgc cccagccaca cccagcccct gggcgtgttc 660
ctgttccctc ccaagcccaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgc 720
gtggtcgtgg atgtgagcca ggaagatccc gaagtgcagt tcaactggta cgtggatggc 780
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaagagc agttcaactc cacctacaga 840
gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc 900
aaggtgtcca acaaaggcct gcccagctcc atcgagaaga ccatcagcaa agccaaaggc 960
cagcccagag aaccccaggt gtacaccctg cctcccagcc aggaagagat gaccaagaac 1020
caggtgtccc tgacctgcct ggtgaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg 1080
gaaagcaacg gccagcccga gaacaattac aagacaaccc ctcccgtgct ggatagcgat 1140
ggcagcttct ttctgtacag cagactgacc gtggacaaga gcagatggca ggaaggcaac 1200
gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaagcc ctgcacaacc actacaccca gaagagcctg 1260
tccctgagcc tgggcaag 1278
<210> 40
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 40
Met Met Met Met
1
<210> 41
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 41
Met Gly Gly Met
1
<210> 42
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 42
Met Met Gly Gly
1
<210> 43
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 43
Gly Gly Met Met
1
<210> 44
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 44
Met Gly Met Gly
1
<210> 45
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 45
Gly Met Met Gly
1
<210> 46
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 46
Gly Gly Gly Met
1
<210> 47
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 47
Met Gly Gly Gly
1
<210> 48
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 48
Gly Met Gly Gly
1
<210> 49
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 49
Gly Gly Met Gly
1
<210> 50
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 50
Gly Gly Met Met Met
1 5
<210> 51
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 51
Gly Gly Gly Met Met
1 5
<210> 52
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 52
Gly Gly Gly Gly Met
1 5
<210> 53
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 53
Met Gly Met Met Met
1 5
<210> 54
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 54
Met Gly Gly Met Met
1 5
<210> 55
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 55
Met Gly Gly Gly Met
1 5
<210> 56
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 56
Met Met Gly Met Met
1 5
<210> 57
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 57
Met Met Gly Gly Met
1 5
<210> 58
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 58
Met Met Gly Gly Gly
1 5
<210> 59
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 59
Met Met Met Gly Met
1 5
<210> 60
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 60
Met Gly Met Gly Met
1 5
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 61
Gly Met Gly Met Gly
1 5
<210> 62
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 62
Gly Met Met Met Gly
1 5
<210> 63
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 63
Gly Gly Met Gly Met
1 5
<210> 64
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 64
Gly Gly Met Met Gly
1 5
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 65
Gly Met Met Gly Met
1 5
<210> 66
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 66
Met Gly Met Met Gly
1 5
<210> 67
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 67
Gly Met Gly Gly Met
1 5
<210> 68
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 68
Met Met Gly Met Gly
1 5
<210> 69
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 69
Gly Met Met Gly Gly
1 5
<210> 70
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 70
Gly Met Gly Gly Gly
1 5
<210> 71
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 71
Gly Gly Met Gly Gly
1 5
<210> 72
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 合成寡肽片段
<400> 72
Gly Gly Gly Gly Gly
1 5

Claims (63)

1.一种治疗有需要的受试者中的肿瘤的方法，其包括向所述受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中所述核苷酸疫苗的施用诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中所述IL-7在所述核苷酸疫苗的施用后约14天内、约13天内、约12天内、约11天内、约10天内、约九天内、约八天内、约七天内、约六天内、约五天内、约四天内、约三天内、约两天内或约一天内施用于所述受试者。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述IL-7在所述核苷酸疫苗施用后约七天内施用。
3.如权利要求1所述的方法，其中所述IL-7和所述核苷酸疫苗同时施用于所述受试者。
4.一种治疗有需要的受试者中的肿瘤的方法，其包括向所述受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中所述核苷酸疫苗的施用诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中所述IL-7在所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用于所述受试者。
5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中与参考(例如，接受单独IL-7或单独核苷酸疫苗的受试者的对应值)相比，所述受试者中的肿瘤体积在所述施用后减小。
6.如权利要求5所述的方法，其中与所述参考相比，所述肿瘤体积在所述施用后减小至少约5％、至少约10％、至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约100％。
7.一种预防或减少有需要的受试者中的肿瘤发生的方法，其包括向所述受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中所述核苷酸疫苗的施用诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中所述核苷酸疫苗、所述IL-7，或所述核苷酸疫苗和所述IL-7两者在所述肿瘤发生之前施用于所述受试者。
8.如权利要求7所述的方法，其中所述IL-7在所述核苷酸疫苗施用后约14天内、约13天内、约12天内、约11天内、约10天内、约九天内、约八天内、约七天内、约六天内、约五天内、约四天内、约三天内、约两天内或约一天内施用于所述受试者。
9.如权利要求7或8所述的方法，其中所述IL-7在所述核苷酸疫苗施用后约七天内施用于所述受试者。
10.如权利要求7或8所述的方法，其中所述IL-7和所述核苷酸疫苗同时施用于所述受试者。
11.一种延长有需要的受试者中的肿瘤特异性T细胞免疫反应的方法，其包括向所述受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中所述核苷酸疫苗的施用诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中所述IL-7在所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用于所述受试者。
12.一种延长有需要的受试者中的肿瘤特异性T细胞免疫反应的方法，其包括向所述受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中所述核苷酸疫苗的施用诱导肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中所述IL-7在所述核苷酸疫苗施用后约14天内、约13天内、约12天内、约11天内、约10天内、约九天内、约八天内、约七天内、约六天内、约五天内、约四天内、约三天内、约两天内或约一天内施用于所述受试者。
13.如权利要求12所述的方法，其中所述IL-7在所述核苷酸疫苗施用后约七天内施用。
14.如权利要求12所述的方法，其中所述IL-7和所述核苷酸疫苗同时施用于所述受试者。
15.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中与参考(例如，接受单独IL-7或单独核苷酸疫苗的受试者的对应值)相比，在所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的收缩阶段期间，所述IL-7的施用增加肿瘤特异性T细胞的存活率。
16.如权利要求15所述的方法，其中与所述参考相比，所述收缩阶段期间的所述肿瘤特异性T细胞的存活率增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
17.如权利要求1至16中任一项所述的方法，其中与参考(例如，接受单独IL-7或单独核苷酸疫苗的受试者的对应值)相比，在所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的收缩阶段期间，所述IL-7的施用增加肿瘤特异性T细胞的数目。
18.如权利要求17所述的方法，其中与所述参考相比，所述肿瘤特异性T细胞反应的所述收缩阶段期间的所述肿瘤特异性T细胞的数目增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
19.一种扩展有需要的受试者中的肿瘤特异性T细胞免疫反应的T细胞受体(TCR)库的方法，其包括向所述受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中所述核苷酸疫苗的施用诱导针对所述肿瘤抗原的一个或多个表位的肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中所述IL-7在所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用于所述受试者。
20.一种扩展有需要的受试者中的肿瘤特异性T细胞免疫反应的T细胞受体(TCR)库的方法，其包括向所述受试者施用编码肿瘤抗原的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中所述核苷酸疫苗的施用诱导针对所述肿瘤抗原的一个或多个表位的肿瘤特异性T细胞免疫反应，并且其中所述IL-7在所述核苷酸疫苗施用后约14天内、约13天内、约12天内、约11天内、约10天内、约九天内、约八天内、约七天内、约六天内、约五天内、约四天内、约三天内、约两天内或约一天内施用于所述受试者。
21.如权利要求20所述的方法，其中所述IL-7在所述核苷酸疫苗施用后约七天内施用。
22.如权利要求20所述的方法，其中所述IL-7和所述核苷酸疫苗同时施用于所述受试者。
23.如权利要求19至22中任一项所述的方法，其中与参考(例如，接受单独IL-7或单独核苷酸疫苗的受试者的对应值)相比，所述施用增加了针对其诱导所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的表位数目。
24.如权利要求23所述的方法，其中与所述参考相比，针对其诱导所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的所述表位数目增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
25.如权利要求19至24中任一项所述的方法，其中所述肿瘤抗原来源于乳腺癌并且所述表位选自Lrrc27、Plekho1、Pttg1、Xpo4、Exoc4、Pank3、Tmem101、Map3k6、Met、BC057079、Hist1h3e、Prkag1、Neil3或它们的组合。
26.如权利要求19至24中任一项所述的方法，其中所述施用诱导针对所述肿瘤抗原上至少约三个、至少约四个、至少约五个、至少约六个、至少约七个、至少约八个、至少约九个、至少约10个、至少约11个、至少约12个、或至少约13个或更多个表位的肿瘤特异性T细胞免疫反应。
27.一种增加有需要的受试者中的针对肿瘤抗原的亚显性表位的T细胞免疫反应的方法，其包括向所述受试者施用编码肿瘤抗原(其包含所述亚显性表位)的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中所述IL-7在所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的峰值扩增阶段之后施用于所述受试者。
28.一种增加有需要的受试者中的针对肿瘤抗原的亚显性表位的T细胞免疫反应的方法，其包括向所述受试者施用编码肿瘤抗原(其包含所述亚显性表位)的核苷酸疫苗与白介素-7(IL-7)的组合，其中所述IL-7在所述核苷酸疫苗施用后约14天内、约13天内、约12天内、约11天内、约10天内、约九天内、约八天内、约七天内、约六天内、约五天内、约四天内、约三天内、约两天内或约一天内施用于所述受试者。
29.如权利要求28所述的方法，其中所述IL-7在所述核苷酸疫苗施用后约七天内施用。
30.如权利要求28所述的方法，其中所述IL-7和所述核苷酸疫苗同时施用于所述受试者。
31.如权利要求27至30中任一项所述的方法，其中与参考(例如，接受单独IL-7或单独核苷酸疫苗的受试者的对应值)相比，针对肿瘤抗原的亚显性表位的T细胞免疫反应增加至少约1倍、至少约2倍、至少约3倍、至少约4倍、至少约5倍、至少约6倍、至少约7倍、至少约8倍、至少约9倍、至少约10倍、至少约15倍、至少约20倍、至少约25倍、至少约30倍、至少约35倍、至少约40倍、至少约45倍、或至少约50倍或更多。
32.如权利要求4至6、11、15至19、21至27和31中任一项所述的方法，其中所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的所述峰值扩增阶段发生在所述核苷酸疫苗的最初施用后约七天、约八天、约九天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天或约15天。
33.如权利要求32所述的方法，其中所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的所述峰值扩增阶段发生在所述核苷酸疫苗的最初施用后约11天。
34.如权利要求32或33所述的方法，其中所述IL-7在所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的所述峰值扩增阶段后至少约一天、约两天、约三天、约四天、约五天、约六天、约七天、约八天、约九天、约10天、约11天、约12天、约13天、约14天、约15天、约16天、约17天、约18天、约19天、约20天、约21天、约22天、约23天、约24天、约25天、约26天、约27天、约28天、约29天、或约30天或更长时间施用。
35.如权利要求24所述的方法，其中所述IL-7在所述肿瘤特异性T细胞免疫反应的所述峰值扩增阶段后约两天施用。
36.如权利要求1至35中任一项所述的方法，其中所述IL-7以约5mg/kg与约15mg/kg之间的剂量施用。
37.如权利要求36所述的方法，其中所述IL-7以约5mg/kg、约10mg/kg或约15mg/kg的剂量施用。
38.如权利要求1至35中任一项所述的方法，其中所述IL-7以约20μg/kg与约600μg/kg之间的剂量施用。
39.如权利要求38所述的方法，其中所述IL-7蛋白以约20μg/kg、约60μg/kg、约120μg/kg、约240μg/kg、约480μg/kg或约600μg/kg的剂量施用。
40.如权利要求1至35中任一项所述的方法，其中所述IL-7蛋白以大于约600μg/kg、大于约700μg/kg、大于约800μg/kg、大于约900μg/kg、大于约1,000μg/kg、大于约1,100μg/kg、大于约1,200μg/kg、大于约1,300μg/kg、大于约1,400μg/kg、大于约1,500μg/kg、大于约1,600μg/kg、大于约1,700μg/kg、大于约1,800μg/kg、大于约1,900μg/kg或大于约2,000μg/kg的剂量施用。
41.如权利要求40所述的方法，其中所述IL-7蛋白以约610μg/kg与约1,200μg/kg之间、约650μg/kg与约1,200μg/kg之间、约700μg/kg与约1,200μg/kg之间、约750μg/kg与约1,200μg/kg之间、约800μg/kg与约1,200μg/kg之间、约850μg/kg与约1,200μg/kg之间、约900μg/kg与约1,200μg/kg之间、约950μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,000μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,050μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,100μg/kg与约1,200μg/kg之间、约1,200μg/kg与约2,000μg/kg之间、约1,300μg/kg与约2,000μg/kg之间、约1,500μg/kg与约2,000μg/kg之间、约1,700μg/kg与约2,000μg/kg之间、约610μg/kg与约1,000μg/kg之间、约650μg/kg与约1,000μg/kg之间、约700μg/kg与约1,000μg/kg之间、约750μg/kg与约1,000μg/kg之间、约800μg/kg与约1,000μg/kg之间、约850μg/kg与约1,000μg/kg之间、约900μg/kg与约1,000μg/kg之间或约950μg/kg与约1,000μg/kg之间的剂量施用。
42.如权利要求40或41所述的方法，其中所述IL-7蛋白以约700μg/kg与约900μg/kg之间、约750μg/kg与约950μg/kg之间、约700μg/kg与约850μg/kg之间、约750μg/kg与约850μg/kg之间、约700μg/kg与约800μg/kg之间、约800μg/kg与约900μg/kg之间、约750μg/kg与约850μg/kg之间或约850μg/kg与约950μg/kg之间的剂量施用。
43.如权利要求40至42中任一项所述的方法，其中所述IL-7蛋白以约650μg/kg、约680μg/kg、约700μg/kg、约720μg/kg、约740μg/kg、约750μg/kg、约760μg/kg、约780μg/kg、约800μg/kg、约820μg/kg、约840μg/kg、约850μg/kg、约860μg/kg、约880μg/kg、约900μg/kg、约920μg/kg、约940μg/kg、约950μg/kg、约960μg/kg、约980μg/kg、约1000μg/kg、约1100μg/kg、约1200μg/kg、约1,300μg/kg、约1,400μg/kg、约1,440μg/kg、约1,500μg/kg、约1,600μg/kg、约1,700μg/kg、约1,800μg/kg、约1,900μg/kg或约2,000μg/kg的剂量施用。
44.如权利要求1至43中任一项所述的方法，其中所述IL-7以约一周一次、约两周一次、约三周一次、约四周一次、约五周一次、约六周一次、约七周一次、约八周一次、约九周一次、约10周一次、约11周一次或约12周一次的给药频率施用。
45.如权利要求1至44中任一项所述的方法，其中所述核苷酸疫苗包括DNA疫苗、mRNA疫苗或两者。
46.如权利要求45所述的方法，其中所述核苷酸疫苗是DNA疫苗。
47.如权利要求1至46中任一项所述的方法，其中所述IL-7作为蛋白质(IL-7蛋白)、编码所述IL-7蛋白的核酸或两者施用。
48.如权利要求1至47中任一项所述的方法，其中所述受试者是人。
49.如权利要求47或48所述的方法，其中所述IL-7蛋白不是野生型IL-7。
50.如权利要求47至49中任一项所述的方法，其中所述IL-7蛋白是融合蛋白。
51.如权利要求47至50中任一项所述的方法，其中所述IL-7蛋白包含由1至10个氨基酸残基组成的寡肽。
52.如权利要求51所述的方法，其中所述寡肽包括蛋氨酸(M)、甘氨酸(G)、蛋氨酸-蛋氨酸(MM)、甘氨酸-甘氨酸(GG)、蛋氨酸-甘氨酸(MG)、甘氨酸-蛋氨酸(GM)、蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MMM)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MMG)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGM)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GMM)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MGG)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMG)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGM)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GGG)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGGM)(SEQ ID NO:41)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MMGG)(SEQ ID NO:42)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GGMM)(SEQ ID NO:43)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MGMG)(SEQ IDNO:44)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMMG)(SEQ ID NO:45)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGGM)(SEQ ID NO:46)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MGGG)(SEQ ID NO:47)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GMGG)(SEQ ID NO:48)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GGMG)(SEQ ID NO:49)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GGMMM)(SEQ ID NO:50)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(GGGMM)(SEQ ID NO:51)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGGGM)(SEQ ID NO:52)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MGMMM)(SEQ ID NO:53)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MGGMM)(SEQ ID NO:54)、蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGGGM)(SEQ ID NO:55)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸(MMGMM)(SEQ ID NO:56)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MMGGM)(SEQID NO:57)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(MMGGG)(SEQ ID NO:58)、蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MMMGM)(SEQ ID NO:59)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGMGM)(SEQ ID NO:60)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMGMG)(SEQ ID NO:61)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GMMMG)(SEQ ID NO:62)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GGMGM)(SEQ ID NO:63)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(GGMMG)(SEQ ID NO:64)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GMMGM)(SEQ ID NO:65)、蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MGMMG)(SEQ ID NO:66)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(GMGGM)(SEQ ID NO:67)、蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸(MMGMG)(SEQ ID NO:68)、甘氨酸-蛋氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GMMGG)(SEQ ID NO:69)、甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GMGGG)(SEQ ID NO:70)、甘氨酸-甘氨酸-蛋氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GGMGG)(SEQ ID NO:71)、甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(GGGGG)(SEQ ID NO:72)或它们的组合。
53.如权利要求52所述的方法，其中所述寡肽是蛋氨酸-甘氨酸-蛋氨酸(MGM)。
54.如权利要求47至53中任一项所述的方法，其中所述IL-7蛋白包含半衰期延长部分。
55.如权利要求54所述的方法，其中所述半衰期延长部分包括Fc、白蛋白、白蛋白结合多肽、Pro/Ala/Ser(PAS)、人绒毛膜促性腺激素β亚基的C末端肽(CTP)、聚乙二醇(PEG)、长的非结构化亲水氨基酸序列(XTEN)、羟乙基淀粉(HES)、白蛋白结合小分子或它们的组合。
56.如权利要求55所述的方法，其中所述半衰期延长部分是Fc。
57.如权利要求56所述的方法，其中所述Fc是杂合Fc，其包含铰链区、CH2结构域和CH3结构域，
其中所述铰链区包含人IgD铰链区，
其中所述CH2结构域包含人IgD CH2结构域的一部分和人IgG4CH2结构域的一部分，并且
其中所述CH3结构域包含人IgG4 CH3结构域的一部分。
58.如权利要求47至57中任一项所述的方法，其中所述IL-7蛋白包含与SEQ ID NO:1-6和15-25具有至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％序列同一性的氨基酸序列。
59.如权利要求1至58中任一项所述的方法，其中所述IL-7经胃肠外、肌肉内、皮下、眼部、静脉内、腹膜内、皮内、眶内、脑内、颅内、脊柱内、心室内、鞘内、脑池内、囊内、瘤内或它们的组合施用于所述受试者。
60.如权利要求1至59中任一项所述的方法，其中所述核苷酸疫苗经胃肠外、肌肉内、皮肤、皮下、眼部、静脉内、腹膜内、皮内、眶内、脑内、颅内、脊柱内、心室内、鞘内、脑池内、囊内、瘤内或它们的组合施用于所述受试者。
61.如权利要求1至60中任一项所述的方法，其还包括向所述受试者施用至少一种另外的治疗剂。
62.如权利要求1至61中任一项所述的方法，其中所述肿瘤抗原包括鸟苷酸环化酶C(GC-C)、表皮生长因子受体(EGFR或erbB-1)、人表皮生长因子受体2(HER2或erbB2)、erbB-3、erbB-4、MUC-1、黑色素瘤相关硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)、间皮素(MSLN)、叶酸受体1(FOLR1)、CD4、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD44、CD44v6、CD44v7/8、CD70、CD123、CD138、CD171、CEA、CSPG4、CXCR5、c-Met、HERV-包膜蛋白、eriostin、Bigh3、SPARC、BCR、CD79、CD37、EGFRvIII、EGP2、EGP40、IGFr、L1CAM、AXL、组织因子(TF)、CD74、EpCAM、EphA2、MRP3钙粘蛋白19(CDH19)、表皮生长因子2(HER2)、5T4、8H9、αvβ6整合素、BCMA、B7-H3、B7-H6、CAIX、CA9、FAP、FBP、胎儿型AchR、FRcc、GD2、GD3、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-1(GPC1)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-2(GPC2)、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)、HLA-A1+MAGE1、HLA-A1+NY-ESO-1、IL-13Rcc2、Lewis-Y、KDR、MCSP、间皮素、Muc1、Muc16、NCAM、NKG2D配体、NY-ESO-1、PRAME、PSC1、PSCA、PSMA、ROR1、ROR2、SP17、surviving、TAG72、TEM、癌胚抗原、HMW-MAA、VEGF、CLDN18.2或它们的组合。
63.如权利要求1至62中任一项所述的方法，其中所述肿瘤抗原来源于癌症，所述癌症包括乳腺癌、头颈癌、子宫癌、脑癌、皮肤癌、肾癌、肺癌、结直肠癌、前列腺癌、肝癌、膀胱癌、肾癌、胰腺癌、甲状腺癌、食道癌、眼癌、胃癌、胃肠癌、卵巢癌、癌瘤、肉瘤、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或它们的组合。
CN202180081884.6A 2020-11-05 2021-11-05 用il-7蛋白和核苷酸疫苗的组合治疗肿瘤的方法 Pending CN116615236A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202063110142P 2020-11-05 2020-11-05
US63/110,142 2020-11-05
PCT/US2021/058273 WO2022099022A1 (en) 2020-11-05 2021-11-05 Method of treating a tumor with a combination of an il-7 protein and a nucleotide vaccine

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116615236A true CN116615236A (zh) 2023-08-18

Family

ID=79018597

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180081884.6A Pending CN116615236A (zh) 2020-11-05 2021-11-05 用il-7蛋白和核苷酸疫苗的组合治疗肿瘤的方法

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20240115675A1 (zh)
EP (1) EP4240408A1 (zh)
JP (1) JP2023549112A (zh)
KR (1) KR20230104175A (zh)
CN (1) CN116615236A (zh)
AU (1) AU2021376396A1 (zh)
CA (1) CA3195594A1 (zh)
IL (1) IL302482A (zh)
WO (1) WO2022099022A1 (zh)

Family Cites Families (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4044126A (en) 1972-04-20 1977-08-23 Allen & Hanburys Limited Steroidal aerosol compositions and process for the preparation thereof
GB1429184A (en) 1972-04-20 1976-03-24 Allen & Hanburys Ltd Physically anti-inflammatory steroids for use in aerosols
US5354844A (en) 1989-03-16 1994-10-11 Boehringer Ingelheim International Gmbh Protein-polycation conjugates
AU648509B2 (en) 1989-07-14 1994-04-28 Wyeth Holdings Corporation Stable vaccine compositions containing interleukins
US5585112A (en) 1989-12-22 1996-12-17 Imarx Pharmaceutical Corp. Method of preparing gas and gaseous precursor-filled microspheres
IT1246382B (it) 1990-04-17 1994-11-18 Eurand Int Metodo per la cessione mirata e controllata di farmaci nell'intestino e particolarmente nel colon
US5543390A (en) 1990-11-01 1996-08-06 State Of Oregon, Acting By And Through The Oregon State Board Of Higher Education, Acting For And On Behalf Of The Oregon Health Sciences University Covalent microparticle-drug conjugates for biological targeting
US5643578A (en) 1992-03-23 1997-07-01 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of DNA transcription unit
US6010715A (en) 1992-04-01 2000-01-04 Bertek, Inc. Transdermal patch incorporating a polymer film incorporated with an active agent
US6024975A (en) 1992-04-08 2000-02-15 Americare International Diagnostics, Inc. Method of transdermally administering high molecular weight drugs with a polymer skin enhancer
US6274552B1 (en) 1993-03-18 2001-08-14 Cytimmune Sciences, Inc. Composition and method for delivery of biologically-active factors
US5985307A (en) 1993-04-14 1999-11-16 Emory University Device and method for non-occlusive localized drug delivery
US5523092A (en) 1993-04-14 1996-06-04 Emory University Device for local drug delivery and methods for using the same
US6004534A (en) 1993-07-23 1999-12-21 Massachusetts Institute Of Technology Targeted polymerized liposomes for improved drug delivery
US5759542A (en) 1994-08-05 1998-06-02 New England Deaconess Hospital Corporation Compositions and methods for the delivery of drugs by platelets for the treatment of cardiovascular and other diseases
US5660854A (en) 1994-11-28 1997-08-26 Haynes; Duncan H Drug releasing surgical implant or dressing material
US5983134A (en) 1995-04-23 1999-11-09 Electromagnetic Bracing Systems Inc. Electrophoretic cuff apparatus drug delivery system
US6316652B1 (en) 1995-06-06 2001-11-13 Kosta Steliou Drug mitochondrial targeting agents
US6167301A (en) 1995-08-29 2000-12-26 Flower; Ronald J. Iontophoretic drug delivery device having high-efficiency DC-to-DC energy conversion circuit
US6013516A (en) 1995-10-06 2000-01-11 The Salk Institute For Biological Studies Vector and method of use for nucleic acid delivery to non-dividing cells
US6039975A (en) 1995-10-17 2000-03-21 Hoffman-La Roche Inc. Colon targeted delivery system
WO1998008947A1 (en) * 1995-12-19 1998-03-05 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Enhancement of dna immunization through the use of cytokines
TW345603B (en) 1996-05-29 1998-11-21 Gmundner Fertigteile Gmbh A noise control device for tracks
US7118754B1 (en) 1996-07-30 2006-10-10 Transgene S.A. Pharmaceutical composition for treating papillomavirus tumors and infection
US5985317A (en) 1996-09-06 1999-11-16 Theratech, Inc. Pressure sensitive adhesive matrix patches for transdermal delivery of salts of pharmaceutical agents
IL129242A0 (en) 1996-10-01 2000-02-17 Cima Labs Inc Taste-masked microcapsule compositions and methods of manufacture
GB9621680D0 (en) 1996-10-17 1996-12-11 Oxford Biomedica Ltd Lentiviral vectors
DE69703974T2 (de) 1996-10-17 2001-07-19 Oxford Biomedica Ltd Retrovirale vektoren
GB9622500D0 (en) 1996-10-29 1997-01-08 Oxford Biomedica Ltd Therapeutic gene
US6131570A (en) 1998-06-30 2000-10-17 Aradigm Corporation Temperature controlling device for aerosol drug delivery
US5860957A (en) 1997-02-07 1999-01-19 Sarcos, Inc. Multipathway electronically-controlled drug delivery system
US6120751A (en) 1997-03-21 2000-09-19 Imarx Pharmaceutical Corp. Charged lipids and uses for the same
US6730512B2 (en) 1997-04-09 2004-05-04 Amdl, Inc. Combination immunogene therapy
US6060082A (en) 1997-04-18 2000-05-09 Massachusetts Institute Of Technology Polymerized liposomes targeted to M cells and useful for oral or mucosal drug delivery
US5948433A (en) 1997-08-21 1999-09-07 Bertek, Inc. Transdermal patch
DE69839179T2 (de) 1997-10-28 2009-02-19 Bando Chemical Industries, Ltd., Kobe Dermatologisches pflaster und verfahren zur herstellung seiner basisschicht
US5994136A (en) 1997-12-12 1999-11-30 Cell Genesys, Inc. Method and means for producing high titer, safe, recombinant lentivirus vectors
US6048736A (en) 1998-04-29 2000-04-11 Kosak; Kenneth M. Cyclodextrin polymers for carrying and releasing drugs
CA2343979C (en) 1998-09-21 2011-11-15 Schering Corporation Human interleukin-b50, therapeutic uses
US6271359B1 (en) 1999-04-14 2001-08-07 Musc Foundation For Research Development Tissue-specific and pathogen-specific toxic agents and ribozymes
US6256533B1 (en) 1999-06-09 2001-07-03 The Procter & Gamble Company Apparatus and method for using an intracutaneous microneedle array
US6261595B1 (en) 2000-02-29 2001-07-17 Zars, Inc. Transdermal drug patch with attached pocket for controlled heating device
EP2388015A1 (en) 2000-03-02 2011-11-23 Emory University DNA expression vectors and methods of use
WO2001075140A1 (en) 2000-03-30 2001-10-11 University Of Connecticut HYBRID CYTOKINE OF IL-7 AND β-CHAIN OF HEPATOCYTE GROWTH FACTOR
EP1363660A4 (en) 2001-02-01 2006-06-21 Univ Johns Hopkins HIGHER MOLECULAR VACCINE BASED ON AUTOMPLICATIVE RNA, SUICIDE DNA OR UNDNA DNA VECTOR, WHICH LINKS ANTIGEN WITH A POLYPEPTIDE WHICH PROMOTES THE PRESENTATION OF THE ANTIGEN
EP1391513A1 (en) 2002-08-08 2004-02-25 Cytheris IL-7 drug substance, IL-7 comprising composition, preparation and uses thereof
US20050054054A1 (en) 2002-11-12 2005-03-10 Foss Francine M. Interleukin-7 molecules with altered biological properties
WO2005063820A2 (en) 2003-12-30 2005-07-14 Merck Patent Gmbh Il-7 fusion proteins
US7589179B2 (en) 2004-12-09 2009-09-15 Merck Patent Gmbh IL-7 variants with reduced immunogenicity
EP1746161A1 (en) 2005-07-20 2007-01-24 Cytheris Glycosylated IL-7, preparation and uses
GB2434578A (en) 2006-01-26 2007-08-01 Univ Basel Transgenic animals
ES2415604T3 (es) 2007-05-30 2013-07-26 Postech Academy-Industry- Foundation Proteínas de fusión de inmunoglobulina
GB0815216D0 (en) 2008-08-21 2008-09-24 Asterion Ltd Interleukin
US10233228B2 (en) 2010-04-09 2019-03-19 Albumedix Ltd Albumin derivatives and variants
CN114853873A (zh) 2015-06-11 2022-08-05 格纳西尼有限公司 经修饰的白细胞介素-7蛋白及其用途
EP3331555A1 (en) 2015-08-05 2018-06-13 CureVac AG Epidermal mrna vaccine
MA46023A (fr) 2015-10-22 2019-07-03 Modernatx Inc Vaccin contre le virus de la grippe à large spectre
KR102386735B1 (ko) 2015-11-06 2022-04-14 주식회사 제넥신 변형된 인터루킨-7 융합 단백질의 제형
WO2019151760A1 (ko) * 2018-02-02 2019-08-08 주식회사 에스엘백시젠 신규 다가 hpv 백신 조성물
CN111741764A (zh) * 2018-02-12 2020-10-02 生物技术Rna制药有限公司 使用细胞因子编码rna的治疗

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022099022A1 (en) 2022-05-12
AU2021376396A1 (en) 2023-06-08
JP2023549112A (ja) 2023-11-22
US20240115675A1 (en) 2024-04-11
EP4240408A1 (en) 2023-09-13
IL302482A (en) 2023-06-01
KR20230104175A (ko) 2023-07-07
CA3195594A1 (en) 2022-05-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20180104597A (ko) 암 치료를 위한 종양 억제 유전자 요법 및 면역관문 봉쇄를 포함하는 조성물
CN108093638A (zh) 经修饰的白细胞介素-7蛋白及其用途
CN113365650A (zh) 用il-7蛋白和免疫检查点抑制剂的组合治疗肿瘤的方法
KR20170066265A (ko) 면역글로불린 Fc가 융합된 인터루킨-7 융합 단백질을 포함하는 사람 파필로마바이러스 유래 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102604595B1 (ko) 면역글로불린 Fc가 융합된 인터루킨-7 융합 단백질을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20220150274A (ko) Il-7 단백질과 이중특이적 항체의 조합물을 사용한 종양의 치료 방법
CN114599400A (zh) 用于治疗癌症的医药、组合医药、医药组合物、免疫应答细胞、核酸递送介质和制品
JP2022528422A (ja) インターロイキン２（ｉｌ２）およびインターフェロン（ｉｆｎ）を含む治療
KR20220137630A (ko) Il-7 단백질과 car-보유 면역 세포의 조합물로 고형 종양을 치료하는 방법
JP2024514707A (ja) 免疫療法における使用のための組成物及び方法
CN116615236A (zh) 用il-7蛋白和核苷酸疫苗的组合治疗肿瘤的方法
KR20240019135A (ko) 작제물과 면역자극 화합물의 공동발현
KR20230098201A (ko) 줄기 세포 동원의 유도 방법
CA3163865A1 (en) Method of treating a tumor with a combination of il-7 protein and a bispecific antibody
CN114787181A (zh) 用抗pd-1/il-15免疫细胞因子靶向pd-1的新型免疫疗法
KR20220079541A (ko) 종양에서 il-7 융합 단백질을 이용한 림프구 수치를 증가시키는 방법
WO2024102722A1 (en) Methods of treating a tumor with an unmethylated mgmt promoter
WO2023130081A1 (en) Method of treating a tumor with a combination of il-7 protein and vegf antagonist
CA3194929A1 (en) Modified cxcl10 for immunotherapy of cancer diseases
CN118043066A (zh) 构建体和免疫刺激性化合物的共表达
WO2024030970A2 (en) Genetic editing of target genes to enhance natural killer cell function

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination