WO2023085882A1 - 코로나바이러스 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 인터루킨-7 융합단백질의 투여 요법 - Google Patents

코로나바이러스 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 인터루킨-7 융합단백질의 투여 요법 Download PDF

Info

Publication number
WO2023085882A1
WO2023085882A1 PCT/KR2022/017865 KR2022017865W WO2023085882A1 WO 2023085882 A1 WO2023085882 A1 WO 2023085882A1 KR 2022017865 W KR2022017865 W KR 2022017865W WO 2023085882 A1 WO2023085882 A1 WO 2023085882A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
lys
leu
glu
ser
val
Prior art date
Application number
PCT/KR2022/017865
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
성영철
허민규
Original Assignee
주식회사 제넥신
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 주식회사 제넥신 filed Critical 주식회사 제넥신
Publication of WO2023085882A1 publication Critical patent/WO2023085882A1/ko

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/20—Interleukins [IL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]

Definitions

  • the present invention relates to an administration regimen of a long-acting recombinant interleukin-7 fusion protein for the treatment or prevention of a coronavirus infectious disease, and more specifically, interleukin-7 (IL-7) and a domain extending half-life. It relates to a preventive or therapeutic use of a coronavirus infectious disease comprising a long-acting recombinant IL-7 fusion protein.
  • IL-7 interleukin-7
  • SARS-CoV-2 People infected with SARS-CoV-2 may show asymptomatic to mild, moderate or severe symptoms, and chronically ill or elderly people may die. Fever, shortness of breath, and dry cough are the most common early symptoms, but other symptoms such as fatigue, sore throat, nausea or vomiting, diarrhea, loss of taste or smell, muscle pain, headache, congestion or runny nose, and later shortness of breath
  • hypoxemia often occurs and can rapidly progress to acute respiratory distress syndrome, septic shock, metabolic acidosis, coagulopathy, and multi-organ failure.
  • Veklury Gilead
  • Rekirona Celltrion
  • interleukin-7 regulates the development of lymph nodes through lymphoid tissue inducer (LTi) cells, and the expansion and expansion of naive T cells or memory T cells. promote survival. According to the results of recently published clinical trials on viral infections, it was reported that IL-7 maintains naive T and memory T cells (Amila Patel, J Antimicrob Chemother 2010). In addition, IL-7 enhances the human immune response by promoting the secretion of IL-2 and interferon- ⁇ .
  • LTi lymphoid tissue inducer
  • IL-7 enhances the human immune response by promoting the secretion of IL-2 and interferon- ⁇ .
  • IL-7 is a cytokine that promotes the survival and proliferation of T cells, B cells, and other immune cells, and is an excellent immunotherapeutic candidate that can be applied to various diseases such as viral infection, cancer, and immune system damage.
  • IL-7 has an effect on increasing the body's immunity (Fry TJ et al., 2002, Blood 99 (11): 3892-904; Muegge K et al., 1993, Science 261(5117): 93-5; Rosenberg SA et al., J. Immunother. 29(3): 313-9).
  • IL-7 is also used for immune recovery after allogenic stem cell transplantation (Snyder KM, 2006, Leuk. Lymphoma 47(7): 1222-8) and lymphopenia treatment.
  • SARS-CoV-2 infects and kills T lymphocyte cells.
  • patients with COVID-19 may develop severe lymphopenia.
  • viral inflammatory responses consisting of innate and acquired immune responses (including humoral and cell-mediated immunity) impair lymphopoiesis and increase lymphocyte apoptosis.
  • the present inventors investigated whether the long-acting recombinant interleukin-7 fusion protein (hereinafter referred to as 'rhIL-7-hyFc') could be safely administered to COVID-19 patients without exacerbating inflammation or lung damage, as well as the safety and safety of the present inventors. It was confirmed that rhIL-7-hyFc administration could increase the absolute lymphocyte count, and as a result, administration of rhIL-7-hyFc in COVID-19 patients increased the absolute lymphocyte count, especially in patients with more than moderate COVID-19. The present invention was completed by confirming that symptoms can be significantly alleviated.
  • An object of the present invention is to provide an administration regimen of a long-acting recombinant interleukin-7 fusion protein (rhIL-7-hyFc) for the treatment or prevention of a coronavirus infectious disease.
  • rhIL-7-hyFc recombinant interleukin-7 fusion protein
  • the present invention is (a) interleukin-7 (interleukin-7, IL-7) or a modified interleukin-7 (interleukin-7, IL-7) of formula (I):
  • A is an oligopeptide consisting of 1 to 10 amino acid residues
  • the IL-7 may be an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 1 to 6.
  • the A may be linked to the N-terminus of the IL-7.
  • A may be an oligopeptide composed of an amino acid residue selected from the group consisting of methionine, glycine, or a combination thereof.
  • A is methionine, glycine, methionine-methionine, glycine-glycine, methionine-glycine, glycine-methionine, methionine-methionine-methionine, methionine-methionine-glycine, methionine-glycine-methionine, glycine-methionine- methionine, methionine-glycine, glycine-methionine- methionine, methionine-glycine, glycine-methionine-glycine, glycine-glycine-methionine, or glycine-glycine-glycine.
  • the domain may be linked to the N-terminus or C-terminus of IL-7 or modified IL-7.
  • the domain is an immunoglobulin Fc region or part thereof, albumin, albumin-binding polypeptide, Pro / Ala / Ser (PAS), C-terminal peptide of the ⁇ -subunit of human chorionic gonadotropin (CTP), polyethylene glycol (PEG), long unstructured hydrophilic sequences of amino acids (XTEN), hydroxyethyl starch (HES), albumin-binding small molecules, and combinations thereof.
  • albumin albumin
  • albumin-binding polypeptide Pro / Ala / Ser
  • CTP C-terminal peptide of the ⁇ -subunit of human chorionic gonadotropin
  • PEG polyethylene glycol
  • XTEN long unstructured hydrophilic sequences of amino acids
  • HES hydroxyethyl starch
  • the domain may include a modified immunoglobulin Fc region.
  • the Fc region of the modified immunoglobulin may be selected from the group consisting of IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE, and combinations thereof.
  • the modified immunoglobulin Fc region may be selected from the group consisting of IgG1, IgG2, IgG3, IgD, IgG4, and combinations thereof.
  • the Fc region of the modified immunoglobulin includes a hinge region, a CH2 domain and a CH3 domain in the direction from the N-terminus to the C-terminus,
  • the hinge region includes a human IgD hinge region
  • the CH2 domain comprises a portion of amino acid residues of the CH2 domains of human IgD and human IgG4;
  • the CH3 domain may include a portion of amino acid residues of a human IgG4 CH3 domain.
  • the Fc region of the modified immunoglobulin may be represented by the following formula (II):
  • N' is the N-terminus of the polypeptide and C' is the C-terminus of the polypeptide;
  • p is an integer of 0 or 1;
  • Z1 is an amino acid sequence having 5 to 9 amino acid residues consecutively in the N-terminal direction from the amino acid residue at position 98 among the amino acid residues at positions 90 to 98 of SEQ ID NO: 7;
  • Y is an amino acid sequence having 5 to 64 consecutive amino acid residues in the N-terminal direction from the amino acid residue at position 162 among the amino acid residues at positions 99 to 162 of SEQ ID NO: 7;
  • Z2 is an amino acid sequence having 4 to 37 consecutive amino acid residues in the C-terminal direction from the amino acid residue at position 163 among the amino acid residues at positions 163 to 199 of SEQ ID NO: 7;
  • Z3 is an amino acid sequence having 71 to 106 consecutive amino acid residues in the N-terminal direction from the amino acid residue at position 220 among the amino acid residues at positions 115 to 220 of SEQ ID NO: 8;
  • Z4 is an amino acid sequence having 80 to 107 amino acid residues consecutively in the C-terminal direction from the amino acid residue at position 221 among the amino acid residues at positions 221 to 327 of SEQ ID NO: 8.
  • the domain may have an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 9 to 14.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein may be administered once.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein may include the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24.
  • the coronaviruses are human coronavirus 229E (HCoV-229E), human coronavirus OC43 (HCoV-OC43), human coronavirus HKU1 (HCoV-HKU1), human coronavirus NL63 (HCoV-NL63), severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus (SARS-CoV), Severe Acute Respiratory Syndrome virus-2 (Sars-CoV-2), Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus (MERS-CoV), Swine Transmissible Diarrhea Virus ( porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), transmissible gastroenteritis virus (TGEV), porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus (PHEV), bovine coronavirus (BCoV), equine coronavirus; EqCoV), murine coronavirus (MuCoV), canine coronavirus (CCoV), feline coronavirus (FCoV), Miniopterus bat coronavirus1, Miniopterus
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein may be administered in a dose of 10 ug/kg to 1,000 ug/kg.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein may be administered at a dose of 10 ug/kg to 300 ug/kg.
  • the pharmaceutical composition may be administered intramuscularly, subcutaneously, intravenously, intraperitoneally, cutaneously, intranasally or capsuleally.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein according to the present invention When the long-acting recombinant IL-7 fusion protein according to the present invention is administered to a patient with a coronavirus infectious disease, the absolute lymphocyte count (ALC) increases and the symptoms of moderate or severe patients are mildly or asymptomatically alleviated.
  • ALC absolute lymphocyte count
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein according to the present invention is effective in treating or preventing coronavirus infectious diseases.
  • FIG. 1 shows the result of intramuscular injection (120 ⁇ g/kg, 240 ⁇ g/kg) of long-acting recombinant IL-7 fusion protein to asymptomatic or mild COVID-19 patients and confirmation of absolute lymphocyte count (ALC).
  • composition is defined herein to mean a mixture or solution containing at least one therapeutic agent to be administered to a mammal to prevent or treat a particular disease or condition affecting the mammal.
  • the mammal can be a human.
  • pharmaceutically acceptable means a compound suitable for contact with the tissue of a human patient without excessive toxicity, irritating allergic reactions and other problematic complications commensurate with a reasonable benefit/risk ratio within the scope of sound medical judgment; It is defined herein to mean a substance, composition and/or dosage form.
  • treating refers to relieving, decreasing, reducing or alleviating at least one symptom or disease in a human patient.
  • treatment to delay the progression of
  • treatment may be reduction of one or several symptoms of a disorder or complete eradication of a disorder.
  • the term “treat” also means arresting or delaying onset (ie, the period prior to clinical signs of a disease) and/or reducing the risk of developing or worsening a disease. do.
  • the term “protect” is used herein to mean preventing, delaying, or treating the development or continuation or worsening of a disease in a subject, or both.
  • prevent include prevention of at least one symptom associated with or caused by the condition, disease, or disorder being prevented. do.
  • pharmaceutically effective amount or “clinically effective amount” is an amount sufficient to provide an observable improvement in the underlying clinically observable signs and symptoms of the disorder being treated.
  • a human patient in need of such treatment refers to a human patient diagnosed with or suffering from a confirmed coronavirus infectious disease.
  • “decreased” or “decrease” is generally used herein to mean a decrease by a statistically significant amount.
  • “decreased” or “decrease” is a decrease of at least 10% compared to a reference level, for example at least about 20%, or at least about 30%, or at least about 40%. or a reduction of at least about 50%, or at least about 60%, or at least about 70%, or at least about 80%, or at least about 90% or more, and a reduction including a 100% reduction (e.g., from a reference level level of absence or undetectable compared to
  • “increased” or “increase” are generally used herein to mean an increase by a statistically significant amount. In some embodiments, “increased” or “increase” is an increase of at least 10% compared to a reference level, for example at least about 20%, or at least about 30%, or at least about 40%. or an increase of at least about 50%, or at least about 60%, or at least about 70%, or at least about 80%, or at least about 90% or more.
  • protein protein
  • polypeptide peptide
  • Interleukin-7 (IL-7)
  • Interleukin-7 which can be used in one aspect of the present application, is interleukin 7, a polypeptide capable of binding to the IL-7 receptor (also known as CD127), or IL-7 activity or similar It may be a polypeptide having an activity.
  • a polypeptide having the activity of IL-7 or a similar activity thereof refers to a polypeptide having the same sequence and activity as IL-7. Means a peptide or protein.
  • IL-7 herein includes polypeptides composed of amino acid sequences represented by SEQ ID NOs: 1 to 6.
  • IL-7 is about 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93% with respect to the sequences of SEQ ID NOs: 1 to 6 %, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, or 99% or more sequence identity.
  • IL-7 may include an IL-7 protein or a fragment thereof, and the fragment is capable of binding to an IL-7 receptor.
  • IL-7 protein may be used as a concept including "IL-7 protein and fragments thereof capable of binding to the IL-7 receptor".
  • IL-7 may be obtained from humans, rats, mice, monkeys, cattle or sheep.
  • human IL-7 may have an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 1 (Genbank Accession No. P13232); Rat IL-7 may have an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 2 (Genbank Accession No. P56478); Mouse IL-7 may have an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 3 (Genbank Accession No. P10168); Monkey IL-7 may have an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 4 (Genbank Accession No. NP_001279008); Bovine IL-7 may have an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 5 (Genbank Accession No. P26895), and sheep IL-7 may have an amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 6 (Genbank Accession No. Q28540).
  • the IL-7 protein or fragment thereof may include variously modified proteins or peptides, that is, variants. The modification may be performed by substituting, deleting, or adding one or more proteins to wild-type IL-7 without altering the function of IL-7.
  • These various proteins or peptides are at least about 70%, at least about 75%, at least about 80%, at least about 85%, at least about 86%, at least about 87%, at least about 88%, at least about 89% relative to the wild-type protein, At least about 90%, at least about 91%, at least about 92%, at least about 93%, at least about 94%, at least about 95%, at least about 96%, at least about 97%, at least about 98%, or at least about 99% may have sequence identity.
  • wild-type amino acid residues are substituted with alanine, but substitutions can be made with conservative amino acid substitutions that have no or weak effect on the overall protein charge, i.e., polarity or hydrophobicity.
  • homologs For each amino acid, additional conservative substitutions include “homologs” of the amino acid.
  • homologue refers to an amino acid in which a methylene group (CH 2 ) is inserted into the beta position side chain of the amino acid side chain.
  • congeners may include, but are not limited to, homophenylalanine, homoarginine, homoserine, and the like.
  • IL-7 Modified interleukin-7 (IL-7) that can be used in one aspect of the present invention may have the following structure:
  • A is an oligopeptide consisting of 1 to 10 amino acid residues, and IL-7 is interleukin 7, a polypeptide capable of binding to the IL-7 receptor (also known as CD127), or IL-7 activity or similar activity. It is a polypeptide with
  • the A residue may be directly linked to the N-terminus of IL-7 or linked via a linker.
  • the result may be in the form of A-IL-7 or A-linker-IL-7.
  • linkage can occur at any linking region.
  • crosslinking agents include N-hydroxysuccinimide esters such as 1,1-bis(diazoacetyl)-2-phenylethane, glutaraldehyde, 4-azidosalicylic acid; disuccinimidyl esters such as 3,3′-dithiobis(succinimidylpropionate) and imidoesters including bifunctional maleimides such as bis-N-maleimido-1,8-octane.
  • crosslinking agents include N-hydroxysuccinimide esters such as 1,1-bis(diazoacetyl)-2-phenylethane, glutaraldehyde, 4-azidosalicylic acid; disuccinimidyl esters such as 3,3′-dithiobis(succinimidylpropionate) and imidoesters including bifunctional maleimides such as bis-N-maleimido-1,8-octane.
  • the linker may be an albumin linker or a peptide linker.
  • a peptide linker can be a peptide of 10 to 20 amino acid residues composed of Gly and Ser residues.
  • the linker is formed of one selected from the group consisting of chemical bonds
  • the chemical bond may be a disulfide bond, a diamine bond, a sulfide-amine bond, a carboxy-amine bond, an ester bond, and a covalent bond.
  • A may be linked to the N-terminus of IL-7.
  • A is characterized by comprising 1 to 10 amino acids, and the amino acids may be selected from the group consisting of methionine, glycine, and combinations thereof. In one embodiment, when A is a single amino acid residue, it is glycine.
  • Methionine and glycine do not induce an immune response in the body. Protein therapeutics produced in E. coli always contain methionine at the N-terminus, but no adverse reactions have been reported. In addition, glycine is widely used as a GS linker, and it has been reported that commercial products, such as Dulaglutide, do not induce an immune response (Cell Biophys. 1993 Jan-Jun; 22(103):189-224). .
  • A may be an oligopeptide containing 1 to 10 amino acids selected from the group consisting of methionine (Met, M), glycine (Gly, G), and combinations thereof. In one embodiment, A may be an oligopeptide composed of 1 to 5 amino acids.
  • A is methionine, glycine, methionine-methionine, glycine-glycine, methionine-glycine, glycine-methionine, methionine-methionine-methionine, methionine-methionine-glycine, methionine-glycine-methionine, glycine-methionine-methionine, methionine-glycine, glycine-methionine-methionine, methionine-glycine, glycine-methionine-glycine, glycine-glycine-methionine, or glycine-glycine-glycine-glycine.
  • Modified IL-7 may have a structure of A-IL-7 including a polypeptide having IL-7 activity or similar activity and an oligopeptide composed of 1 to 10 amino acids.
  • the modified IL-7 may have an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 15 to 20.
  • the modified IL-7 is at least about 70%, at least about 75%, at least about 80%, at least about 85%, at least about 86% relative to the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, 16, 17, 18, 19, or 20 %, at least about 87%, at least about 88%, at least about 89%, at least about 90%, at least about 91%, at least about 92%, at least about 93%, at least about 94%, at least about 95%, at least about 96% %, at least about 97%, at least about 98%, or at least about 99% sequence identity.
  • IL-7 interleukin-7
  • interleukin-7 IL-7
  • modified interleukin-7 IL-7
  • A is an oligopeptide consisting of 1 to 10 amino acid residues
  • B When the domain extending the half-life of IL-7 or modified IL-7 is represented by B, B may be directly linked to IL-7 or modified IL-7 or linked by a linker. Specifically, as a result, A-IL-7-B, B-A-IL-7, A-IL-7-linker-B, B-linker-A-IL-7, A-linker-IL-7-linker- B, or B-linker-A-IL-7.
  • linkage can occur at any linking region.
  • crosslinking agents include N-hydroxysuccinimide esters such as 1,1-bis(diazoacetyl)-2-phenylethane, glutaraldehyde, 4-azidosalicylic acid; disuccinimidyl esters such as 3,3′-dithiobis(succinimidylpropionate) and imidoesters including bifunctional maleimides such as bis-N-maleimido-1,8-octane.
  • crosslinking agents include N-hydroxysuccinimide esters such as 1,1-bis(diazoacetyl)-2-phenylethane, glutaraldehyde, 4-azidosalicylic acid; disuccinimidyl esters such as 3,3′-dithiobis(succinimidylpropionate) and imidoesters including bifunctional maleimides such as bis-N-maleimido-1,8-octane.
  • the linker may be an albumin linker or a peptide linker.
  • a peptide linker can be a peptide of 10 to 20 amino acid residues composed of Gly and Ser residues.
  • the linker is formed of one selected from the group consisting of chemical bonds
  • the chemical bond may be a disulfide bond, a diamine bond, a sulfide-amine bond, a carboxy-amine bond, an ester bond, and a covalent bond.
  • the domain extending the half-life of IL-7 or modified IL-7 may be a fusion partner for increasing the half-life of IL-7 or modified IL-7 in vivo, and is preferably an immunoglobulin Fc region or its domain.
  • the domain when it is an immunoglobulin Fc region, it may be a modified immunoglobulin Fc region.
  • the Fc region of the modified immunoglobulin may have attenuated antibody-dependent cytotoxicity (ADCC) or complement-dependent cytotoxicity (CDC) due to modification of binding affinity to an Fc receptor and/or complement.
  • the modified immunoglobulin Fc region may be selected from the group consisting of IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE, and combinations thereof.
  • the modified immunoglobulin Fc region may be selected from the group consisting of IgG1, IgG2, IgG3, IgD, IgG4, and combinations thereof.
  • the Fc region of the modified immunoglobulin may include a hinge region, a CH2 domain and a CH3 domain from the N-terminus to the C-terminus.
  • the hinge region may include a human IgD hinge region;
  • the CH2 domain may comprise part of the amino acid residues of a human IgD and part of the amino acid residues of a human IgG4 CH2 domain;
  • the CH3 domain may comprise some of the amino acid residues of a human IgG4 CH3 domain.
  • two long-acting recombinant IL-7 fusion proteins can form a dimer.
  • the domain extending the half-life of the IL-7 or modified IL-7 is an Fc region
  • the Fc regions bind to each other. to form dimers.
  • Fc region includes the heavy chain constant region 2 (CH2) and heavy chain constant region 3 (CH3) of an immunoglobulin; It refers to a protein that does not include the heavy chain and light chain variable regions and the light chain constant region (CL1), and may further include a hinge region of the heavy chain constant region.
  • a hybrid Fc or hybrid Fc fragment thereof may be named “hFc” or “hyFc”.
  • Fc region variant means one prepared by substituting a part of an amino acid in an Fc region or combining heterologous Fc regions. Fc region variants can prevent cleavage in the hinge region.
  • the 144th amino acid and/or the 145th amino acid of SEQ ID NO: 9 may be modified.
  • the variant may be one in which the 144th amino acid K is substituted with G or S and the 145th amino acid E is substituted with G or S.
  • modified immunoglobulin Fc region or Fc region variant may be represented by the following formula (II):
  • N' is the N-terminus of the polypeptide and C' is the C-terminus of the polypeptide;
  • p is an integer of 0 or 1;
  • Z1 is an amino acid sequence having 5 to 9 amino acid residues consecutively in the N-terminal direction from the amino acid residue at position 98 among the amino acid residues at positions 90 to 98 of SEQ ID NO: 7;
  • Y is an amino acid sequence having 5 to 64 consecutive amino acid residues in the N-terminal direction from the amino acid residue at position 162 among the amino acid residues at positions 99 to 162 of SEQ ID NO: 7;
  • Z2 is an amino acid sequence having 4 to 37 consecutive amino acid residues in the C-terminal direction from the amino acid residue at position 163 among the amino acid residues at positions 163 to 199 of SEQ ID NO: 7;
  • Z3 is an amino acid sequence having 71 to 106 consecutive amino acid residues in the N-terminal direction from the amino acid residue at position 220 among the amino acid residues at positions 115 to 220 of SEQ ID NO: 8;
  • Z4 is an amino acid sequence having 80 to 107 consecutive amino acid residues in the C-terminal direction from the amino acid residue at position 221 among the amino acid residues at positions 221 to 327 of SEQ ID NO: 8.
  • the domain may have an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 9 to 14.
  • the Fc fragment may be in a form having natural sugar chains, increased sugar chains, or reduced sugar chains compared to its native form, or may be in a deglycosylated form.
  • Immunoglobulin Fc sugar chains can be modified by conventional methods such as chemical methods, enzymatic methods, and genetic engineering methods using microorganisms. When the sugar chain is removed from the Fc fragment, the binding affinity to the C1q portion of the first complement component C1 is rapidly reduced and ADCC or CDC is reduced or lost, so that unnecessary immune responses are not induced in vivo.
  • a deglycosylated or aglycosylated form of the immunoglobulin Fc region may be more suitable for the purpose of one embodiment as a drug carrier.
  • the term “deglycosylation” refers to an Fc region in which sugars have been enzymatically removed from an Fc fragment.
  • the term “aglycosylation” means that the Fc fragment is produced in a non-glycosylated form by a prokaryotic organism, preferably Escherichia coli.
  • the Fc region of the modified immunoglobulin includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 (hyFc), SEQ ID NO: 10 (hyFcM1), SEQ ID NO: 11 (hyFcM2), SEQ ID NO: 12 (hyFcM3), or SEQ ID NO: 13 (hyFcM4). can do.
  • the Fc region of the modified immunoglobulin may include the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 (insoluble mouse Fc).
  • the Fc region of the modified immunoglobulin may be described in U.S. Patent No. 7,867,491, and the production of the Fc region of the modified immunoglobulin may be performed with reference to the disclosure of U.S. Patent No. 7,867,491, the entire contents of which are herein included by reference.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein may have an amino acid sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 21 to 25.
  • the IL-7 fusion protein is at least about 70%, at least about 75%, at least about 80%, 85%, at least about 86%, at least about 70% of the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21, 22, 23, 24, or 25 87%, at least about 88%, at least about 89%, at least about 90%, at least about 91%, at least about 92%, at least about 93%, at least about 94%, at least about 95%, at least about 96%, at least about It may have sequences with 97%, at least about 98%, or at least about 99% sequence identity.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion proteins of SEQ ID NOs: 21 to 25 may be encoded by a polynucleotide sequence selected from the group consisting of SEQ ID NOs: 35 to 39.
  • a nucleic acid molecule may further include a signal sequence or leader sequence.
  • signal sequence refers to a fragment that directs secretion of a biologically active molecule drug and fusion protein, which is cleaved after translation in a host cell.
  • a signal sequence in one embodiment is a polynucleotide encoding an amino acid sequence that initiates movement of a protein across the endoplasmic reticulum (ER) membrane.
  • Signal sequences useful in one embodiment include an antibody light chain signal sequence, eg, antibody 14.18 (Gillies et al., J. Immunol. Meth 1989. 125:191-202), an antibody heavy chain signal sequence, eg, MOPC141 antibody. The heavy chain signal sequence (Sakano et al., Nature, 1980. 286: 676-683), and other signal sequences known in the art (e.g., Watson et al., Nucleic Acid Research, 1984. 12:5145-5164) reference).
  • signal peptides typically have 16 to 30 amino acids, but may contain more or fewer amino acid residues.
  • a typical signal peptide consists of three regions: a basic N-terminal region, a central hydrophobic region and a more polar C-terminal region.
  • the central hydrophobic region contains 4 to 12 hydrophobic residues, which anchor the signal sequence through the membrane lipid bilayer during translocation of the immature polypeptide.
  • the signal sequence is cleaved primarily within the lumen of the ER by cellular enzymes known as signal peptidases.
  • the signal sequence may be a secretion signal sequence for tissue plasminogen activation (tPa), a signal sequence for herpes simplex virus glycoprotein D (HSV gD), or growth hormone.
  • tPa tissue plasminogen activation
  • HSV gD herpes simplex virus glycoprotein D
  • a secretion signal sequence used in higher eukaryotic cells including mammals and the like can be used.
  • a signal sequence included in wild-type IL-7 may be used, or it may be used after being substituted with a codon with high expression frequency in the host cell.
  • An isolated nucleic acid molecule encoding the long-acting recombinant IL-7 fusion protein can be included in an expression vector.
  • vector is understood as a nucleic acid vehicle comprising a nucleotide sequence capable of being introduced into a host cell and then recombination and integration into the genome of the host cell or spontaneously replicating as an episome.
  • Vectors can include linear nucleic acids, plasmids, phagemids, cosmids, RNA vectors, viral vectors, and the like.
  • examples of viral vectors may include, but are not limited to, retroviruses, adenoviruses, and adeno_associated viruses.
  • gene expression or "expression” of a target protein is understood to mean transcription of DNA sequences, translation of mRNA transcripts, and secretion of fusion protein products or fragments thereof. .
  • the term “host cell” refers to prokaryotic and eukaryotic cells into which a recombinant expression vector may be introduced.
  • the terms “transduced,” “transformed,” and “transfected” refer to the introduction of a nucleic acid (eg, vector) into a cell using techniques known in the art. means to introduce into
  • gene expression or “expression” of a target protein is understood to mean transcription of DNA sequences, translation of mRNA transcripts, and secretion of Fc fusion protein products or antibodies or antibody fragments thereof.
  • a useful expression vector can be RcCMV (Invitrogen, Carlsbad) or variants thereof.
  • the expression vector may contain a polyadenylation signal sequence from human cytomegalovirus (CMV) to promote sustained transcription of the target gene in mammalian cells and bovine growth hormone to increase the stability state of RNA after transcription. there is.
  • CMV human cytomegalovirus
  • the expression vector is pAD15, a modified form of RcCMV.
  • the expression vector may be incorporated into an appropriate host cell suitable for expression and/or secretion of a target protein by transduction or transfection of the DNA sequence of one embodiment.
  • suitable host cells may include, but are not limited to, immortal hybridoma cells, NS/0 myeloma cells, 293 cells, Chinese Hamster Ovary (CHO) cells, HeLa cells, human amniotic fluid derived cells (CapT cells) or COS cells. It is not limited.
  • Modified IL-7 or long-acting recombinant IL-7 fusion proteins can be produced by the methods described in co-pending application (US application Ser. No. 15/126,313), the entire contents of which are incorporated herein by reference.
  • compositions containing the long-acting recombinant IL-7 fusion protein may be administered directly (eg, topically by injection into a tissue area, implantation, or administration via topical administration) or system via appropriate means (eg, parenteral or oral) may be administered to a subject.
  • the composition is intravenous, subcutaneous, ocular, intraperitoneal, intramuscular, oral, intrarectal, intraorbital, intracerebral, intracranial, intraspinal, intraventricular, intrathecal, intracistenally, intracapsular, intranasal, or when administered parenterally by aerosol administration, the composition preferably contains part of an aqueous or physiologically acceptable suspension of bodily fluid or a solution thereof.
  • a physiologically acceptable carrier or transporter can be added to the composition and delivered to the patient, which does not adversely affect the electrolyte and/or volume balance of the patient.
  • the physiologically acceptable carrier or transporter may be physiological saline.
  • the carrier or transporter may be a pharmaceutically acceptable agent.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein can be prepared to be administered in a pharmaceutically effective amount ranging from 10 ug/kg to 1,000 ug/kg to a subject in need thereof. there is.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein may include the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24, for example, may have the amino acid sequence of SEQ ID NO: 24.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein is about 10 ug / kg to about 900 ug / kg, about 10 ug / kg to about 800 ug / kg, About 10 ug/kg to about 700 ug/kg, about 10 ug/kg to about 600 ug/kg, about 10 ug/kg to about 500 ug/kg, about 10 ug/kg to about 400 ug/kg, about 10 ug/kg to about 300 ug/kg, It can be prepared to be administered in a pharmaceutically effective amount ranging from about 10 ug/kg to about 200 ug/kg, or from about 10 ug/kg to about 100 ug/kg.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein may be administered once.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein is about 10 ug / kg, about 20 ug / kg, about 30 ug / kg, about 40 ug / kg, about 50 ug / kg, about 60 ug / kg, about 60 ug / kg, About 70ug/kg, About 80ug/kg, About 90ug/kg, About 100ug/kg, About 110ug/kg, About 120ug/kg, About 130ug/kg, About 140ug/kg, About 150ug/kg, About 160ug/kg, About 170ug/kg, About 180ug/kg, About 190ug/kg, About 200ug/kg, About 210ug/kg, About 220ug/kg, About 230ug/kg, About 240ug/kg, About 250ug/kg, About 260ug/kg, About 270ug/kg, About 280ug/kg, About 290ug/kg, About 10
  • the coronavirus infectious disease for said use is human coronavirus 229E (HCoV-229E), human coronavirus OC43 (HCoV-OC43), human coronavirus HKU1 (HCoV-HKU1), human coronavirus NL63 (HCoV -NL63), Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus (SARS-CoV), Severe Acute Respiratory Syndrome virus-2; Sars-CoV-2, Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus (MERS-CoV), Porcine epidemic diarrhea virus (PEDV), transmissible gastroenteritis virus (TGEV), porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus (PHEV), bovine coronavirus (BCoV), equine corona equine coronavirus (EqCoV), murine coronavirus (MuCoV), canine coronavirus (CCoV), feline coronavirus (FCoV), Miniopterus bat coronavirus1, bat Miniopterus bat
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein, or the pharmaceutical composition containing the same can be administered parenthetically, intramuscularly, subcutaneously, ocularly, intravenously, intraperitoneally, intracutaneously, intraorbitally, intracerebralally, intracranially, intraspinalally. , intraventricularly, intrathecally, intracistemally or intracapsularly.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein or a pharmaceutical composition containing the same may be administered intramuscularly, subcutaneously, intravenously, intraperitoneally, cutaneously, intranasally, or intraperitoneally. More preferably, the long-acting recombinant IL-7 fusion protein or a pharmaceutical composition containing the same may be injected intravenously.
  • the subject may be a subject determined to be moderate or severe based on the Baseline severity categorization according to Table 2 below or the WHO ordinal scale according to Table 3 below.
  • the absolute lymphocyte count can be significantly increased.
  • the absolute lymphocyte count is increased by at least 10%, for example by at least about 20%, or at least about 30%, or at least about 40% or at least about 50%, or at least about 60%, or at least about 70%, or at least about 80%, or at least about 90% or at least about 100%, or at least about 110%, or at least about 120%, or to at least about 130%, or at least about 140%, or at least about 150%, or at least about 160%, or at least about 170%, or at least about 180%, or at least about 190%, or at least about 200% or more means an increase in
  • the subject may have received, is receiving, or will be receiving Standard of Care (SoC) therapy.
  • SoC Standard of Care
  • the Standard of Care (SoC) therapy and long-acting recombinant IL-7 fusion protein can be administered simultaneously or sequentially.
  • Hybrid Fc used hFc (hybrid Fc) disclosed in US Patent No. 7,867,491, the entire contents of which are incorporated herein by reference. Since hFc can bind to physiologically active proteins, it exhibits an excellent half-life in vivo compared to the Fc region of conventional modified immunoglobulins.
  • the long-acting recombinant IL-7 fusion protein ((rhIL-7-hyFc) having SEQ ID NO: 24 was used.
  • the dosage range of the long-acting recombinant IL-7 fusion protein (rhIL-7-hyFc) determined through subcutaneous administration in the mouse model was 1.25 mg/kg - 10 mg/kg. Since the exposure amount during intramuscular administration is about twice as high as that during subcutaneous administration, the dosage range for intramuscular administration was determined to be 0.63 mg/kg to 5 mg/kg.
  • mice model were converted to human equivalent dose (HED) and converted to 49 ⁇ g/kg to 410 ⁇ g/kg.
  • the NOAEL of the long-acting recombinant IL-7 fusion protein was calculated to be 6 mg/kg/week, and the NOAEL value was It was calculated as 2 mg/kg in terms of human equivalent dose (HED).
  • the NOAEL of rhIL-7-hyFc was calculated to be 3 mg/kg/week, and the NOAEL value was converted to HED to be about 1 mg /kg was calculated.
  • a safety factor of 15 was applied to provide a safe margin to protect patients receiving subsequent intravenous infusion doses, and the starting dose for intravenous infusions was calculated to be approximately 60 ⁇ g/kg.
  • phase 1b trial using a long-acting recombinant IL-7 fusion protein as a single agent using a 3+3 dose escalation approach to determine the recommended phase 2 dose (RP2D) was conducted in patients with advanced solid tumors in Korea (Study No. GX-I7 -CA-003).
  • 60 ⁇ g/kg, 120 ⁇ g/kg, 240 ⁇ g/kg, 480 ⁇ g/kg, 720 ⁇ g/kg, 960 ⁇ g/kg, 1200 ⁇ g/kg and 1700 ⁇ g/kg were tested intramuscularly (IM) every 3 weeks (q3w).
  • Pharmacodynamic (PD) data from a phase 1b trial in patients with solid cancer showed absolute lymphocyte count (ALC) and naive/less differentiated memory subsets of CD4+ and CD8+ T cells in patients with advanced solid tumors. suggests that it increases in a dose-dependent manner after administration of the long-acting recombinant IL-7 fusion protein.
  • the pharmacodynamic profile of the long-acting recombinant IL-7 fusion protein in the studies so far has been similar to the safety profile observed in studies targeting healthy volunteers, and has been used in patients with solid cancer, glioblastoma, and triple-negative breast cancer up to a dose of 1,440 ⁇ g/kg muscle. The safety of administration was confirmed.
  • phase 1 clinical trials in healthy adults and phase 1b clinical trials in patients with advanced solid cancer
  • the starting dose and route of clinical trials in patients with COVID-19 were determined as 120 ⁇ g/kg intramuscular injection.
  • the administration dose of the long-acting recombinant IL-7 fusion protein was selected as 60, 120, and 240 ⁇ g/kg intramuscular or intravenous administration.
  • Example 3 Analysis of intramuscular injection efficacy in asymptomatic or mild patients
  • Treatment group 1 after intramuscular injection (IM) of 120 ⁇ g/kg long-acting recombinant IL-7 fusion protein on day 1 (baseline), continuing SoC (Standard of Care) therapy as needed
  • Treatment Group 2 After intramuscular injection (IM) of 240 ⁇ g/kg long-acting recombinant IL-7 fusion protein on day 1 (baseline), standard of care (SoC) therapy continued as needed
  • Treatment group 3 After placebo intramuscular injection (IM) on day 1 (baseline), continuing standard of care (SoC) therapy as needed
  • Absolute lymphocyte count was measured using the analyzer on days 3, 7, 14, 21, 28, and 56 post-baseline.
  • Treatment Group 1 After intravenous infusion (IV bolus) of 30 ⁇ g/kg long-acting recombinant IL-7 fusion protein on day 1 (baseline), standard of care (SoC) therapy continued as needed
  • Treatment Group 2 After intravenous infusion (IV bolus) of 60 ⁇ g/kg long-acting recombinant IL-7 fusion protein on day 1 (baseline), continue SoC (Standard of Care) therapy as needed
  • Absolute lymphocyte count was measured using the analyzer on days 3, 7, 14, 21, 28, and 56 after baseline (day 1).
  • ALC increased with time after drug administration in all moderate and severe patients participating in the experiment. Specifically, it was confirmed that the drug was injected intravenously in all of the subjects administered with 30 ⁇ g/kg and 60 ⁇ g/kg, respectively, and the ALC increased approximately 2-fold or more at about 4 to 8 days (Table 4, FIG. 2).
  • nucleotide sequence of human IL-7 (Artificial Sequence)
  • nucleotide sequence of modified IL-7(M) (Artificial Sequence)
  • nucleotide sequence of modified IL-7(MM) (Artificial Sequence)
  • nucleotide sequence of modified IL-7(MMMM) (Artificial Sequence)
  • gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc
  • cacaacgcca agaccaagcc cagagaagag cagttcaact ccacctacag agtggtgagc
  • gaaccccagg tgtacaccct gcctcccagc caggaagaga tgaccaagaa ccaggtgtcc
  • agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg
  • agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg
  • nucleotide sequence of modified IL-7(MMMM) fused hyFc (Artificial Sequence)
  • gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc
  • gaggaaagag agaccaagac ccccgagtgc cccagccaca cccagccct gggcgtgttc

Abstract

본 발명은 코로나바이러스 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 지속형 재조합 인터루킨-7 융합단백질의 투여 요법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 코로나바이러스 감염성 질환 환자에게 투여하는 경우, 절대 림프구 수치(ALC)가 증가하고 중등도 또는 중증 환자의 증상이 경증 또는 무증상으로 완화되는 효과가 발휘된다.

Description

코로나바이러스 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 인터루킨-7 융합단백질의 투여 요법
본 발명은 코로나바이러스 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 지속형 재조합 인터루킨-7 융합단백질의 투여 요법에 관한 것으로, 더 상세하게는 인터루킨-7(interleukin-7, IL-7)과 반감기를 연장하는 도메인을 포함하는 지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 포함하는 코로나바이러스(coronavirus) 감염성 질환의 예방 또는 치료 용도에 관한 것이다.
2019년 12월, 중국 후베이성 우한에서 신종 코로나바이러스가 발생하였다. 우한 시의 수산물시장에서부터 번지기 시작한 이 바이러스는 폐렴을 유발하기 때문에 초기에 우한 폐렴 바이러스(Wuhan seafood market pneumonia virus)라고 불렸으나, 이후 WHO에서 공식적으로 COVID-19라는 질병으로 명명하였고, 베타 코로나바이러스에 속하는 SARS-CoV와 유전자 서열이 매우 유사하기에 국제바이러스 분류위원회에서는 Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus2 (SARS-CoV-2)라 명명하였다.
SARS-CoV-2에 감염된 사람들은 무증상에서부터 경증, 중증도, 중증의 증상을 보일 수 있으며, 만성질환자나 노인은 사망할 가능성이 있다. 주요 증상으로는 발열, 숨가쁨 및 마른 기침이 가장 흔한 초기 증상이지만, 피로, 인후통, 메스꺼움 또는 구토, 설사, 미각 또는 후각 상실, 근육통, 두통, 울혈 또는 콧물과 같은 증상이 나타나기도 하며, 이후 호흡곤란이나 저산소혈증이 발생하는 경우가 많으며 급성 호흡곤란 증후군, 패혈성 쇼크, 대사성 산증, 응고 장애 및 다기관 부전으로 빠르게 진행될 수 있다. SARS-CoV-2에 감염된 환자 중 약 15%는 입원이 필요한 중등도 또는 중증 질환으로 진행된다.
SARS-CoV-2 바이러스는 빠른 진화로 새로운 변이주가 지속적으로 출현하고 있으며 백신 접종자의 돌파감염이 증가하는 등 COVID-19 대유행 장기화로 COVID-19 치료제 개발의 중요성이 나날이 강조되고 있다.
COVID-19 감염 초기에는 주로 SARS-CoV-2의 복제에 의해 질병이 유발되며, 이후에는 조직 손상을 유도하는 SARS-CoV-2에 대해 조절되지 않은 면역 및 염증 반응에 의해 질병이 유발되는 것으로 알려져 있다. 이러한 이해를 바탕으로 SARS-CoV-2에 직접 작용하는 항바이러스 치료제는 질병 초기에 가장 큰 효과를 나타내는 반면, 면역억제 또는 항염증 치료제는 COVID-19 후기 단계에서 더 유리한 효과를 나타낼 것으로 여겨지고 있다.
현재 상용화된 경구용 COVID-19 항바이러스 치료제는 팍스로비드정(화이자)과 라게브리오캡슐(머크)로, COVID-19 감염 초기에 SARS-CoV-2 바이러스 유입이나 증식을 억제하여 치료효과를 나타내는 것으로 알려져 있다.
또한, 국내 허가된 주사용 COVID-19 항바이러스 치료제로 베클루리주(길리어드), 렉키로나주(셀트리온)가 있는데, 이 중 렉키로나주는 단클론 항체의약품으로 바이러스의 인간숙주세포 수용체(ACE2) 부착을 매개하는 바이러스 스파이크 단백질에 결합하여 바이러스 유입 및 복제를 억제하는 작용을 나타내나, 오미크론 변이주에 대한 효능이 낮아 신규 공급이 중단된 상황이다.
한편, 인터루킨-7(interleukin-7, IL-7)은 LTi(lymphoid tissue inducer) 세포를 통하여 림프절(lymph nodes) 발달을 조절하고, 나이브(naive) T 세포나 기억(memory) T 세포의 팽창 및 생존을 증진시킨다. 최근에 발표된 바이러스 감염에 대한 임상시험 결과에 따르면, IL-7이 나이브 T 및 기억 T 세포를 유지시키는 것이 보고되었다 (Amila Patel, J Antimicrob Chemother 2010). 또한, IL-7은 IL-2 및 인터페론 감마(interferon-γ의 분비를 촉진하여 인간의 면역 반응을 증진시킨다.
즉, IL-7은 T 세포, B 세포 및 기타 면역 세포의 생존 및 증식을 촉진하는 사이토카인으로, 바이러스 감염, 암, 면역계 손상 등 다양한 질환에 적용 가능한, 뛰어난 면역치료제 후보 물질이다. 최근, 악성종양 (malignancies)과 사람면역결핍바이러스 감염(HIV infection)에 대한 몇몇의 임상연구에서 IL-7이 인체의 면역력 증가에 영향을 주는 것이 확인되었다(Fry TJ et al., 2002, Blood 99(11): 3892-904; Muegge K et al., 1993, Science 261(5117): 93-5; Rosenberg SA et al., J. Immunother. 29(3): 313-9). 또한, IL-7은 동종 줄기세포(allogenic stem cell) 이식 후 면역회복(Snyder KM, 2006, Leuk. Lymphoma 47(7): 1222-8) 및 림프구감 소증(lymphopenia) 치료에도 활용되고 있다.
SARS-CoV-2는 T 림프구 세포를 감염시켜 사멸시킨다. 이에, COVID-19에 걸린 환자는 심각한 림프구감소증을 유발할 수 있다. 또한, 선천성 및 후천성 면역 반응 (체액성 및 세포 매개 면역 포함)으로 구성된 바이러스 염증 반응은 림프구 형성을 손상시키고 림프구 세포자멸사를 증가시킨다.
이에, 본 발명자들은 지속형 재조합 인터루킨-7 융합단백질(이하, 'rhIL-7-hyFc'라 함)가 염증이나 폐 손상을 악화시키지 않고 COVID-19 환자에게 안전하게 투여할 수 있는지에 대한 안전성과 함께 rhIL-7-hyFc 투여가 절대 림프구 수치를 증가시킬 수 있는지 확인하였고, 그 결과, COVID-19 환자에서 rhIL-7-hyFc를 투여하는 경우 절대 림프구 수치를 증가시키고, 특히 중증도 이상의 COVID-19 환자에서 증상을 현저히 완화시킬 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 코로나바이러스 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 지속형 재조합 인터루킨-7 융합단백질(rhIL-7-hyFc)의 투여 요법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 인터루킨-7(interleukin-7, IL-7) 또는 하기 화학식 (I)의 변형된　인터루킨-7(interleukin-7, IL-7):
A - IL-7 화학식 (I)
여기서 A는 1 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드임; 및
(b) 인터루킨-7 또는 변형된 인터루킨-7의 반감기를 연장하는 도메인;을 포함하는 지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 포함하는 코로나바이러스(coronavirus) 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에 있어서, 상기 IL-7은 서열번호 1 내지 6으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 A는 상기 IL-7의 N-말단에 연결된 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 A는 메티오닌, 글리신, 또는 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 A는 메티오닌, 글리신, 메티오닌-메티오닌, 글리신-글리신, 메티오닌-글리신, 글리신-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-글리신, 메티오닌-글리신-메티오닌, 글리신-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-글리신-글리신, 글리신-메티오닌-글리신, 글리신-글리신-메티오닌, 또는 글리신-글리신-글리신일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 도메인은 인터루킨-7 또는 변형된 인터루킨-7의 N-말단 또는 C-말단에 연결되는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 도메인은 면역글로불린의 Fc 영역 또는 그의 일부, 알부민, 알부민-결합 폴리펩타이드, Pro/Ala/Ser (PAS), 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 β-서브유닛의 C-말단 펩타이드 (CTP), 폴리에틸렌글리콜(PEG), 아미노산의 긴 구조화되지 않은 친수성 서열 (XTEN), 하이드록시에틸 전분 (HES), 알부민-결합 소분자, 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 도메인은 변형된 면역글로불린의 Fc 영역을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 변형된 면역글로불린 Fc영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgD, IgG4 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 N-말단에서 C-말단 방향으로 힌지 영역, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하고,
상기 힌지 영역은 인간 IgD 힌지 영역을 포함하며,
상기 CH2 도메인은 인간 IgD 및 인간 IgG4의 CH2 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함하고,
상기 CH3 도메인은 인간 IgG4 CH3 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 하기 화학식 (II)로 표시되는 것일 수 있다:
화학식 (II)
N'-(Z1)p-Y-Z2-Z3-Z4-C'
여기서 N'은 폴리펩타이드의 N-말단이고 C'는 폴리펩타이드의 C-말단이며;
p는 0 또는 1의 정수이고;
Z1은 서열번호 7의 90 내지 98 위치의 아미노산 잔기 중 98 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 9개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
Y는 서열번호 7의 99 내지 162 위치의 아미노산 잔기 중 162 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 64개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고;
Z2는 서열번호 7의 163 내지 199 위치의 아미노산 잔기 중 163 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 4 내지 37개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
Z3은 서열번호 8의 115 내지 220 위치의 아미노산 잔기 중 220 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 71 내지 106개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고; 및
Z4는 서열번호 8의 221 내지 327 위치의 아미노산 잔기 중 221 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 80 내지 107개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열임.
본 발명에 있어서, 상기 도메인은 서열번호 9 내지 14로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 1회 투여되는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 코로나바이러스는 인간 코로나바이러스 229E(HCoV-229E), 인간 코로나바이러스 OC43(HCoV-OC43), 인간 코로나바이러스 HKU1(HCoV-HKU1), 인간 코로나바이러스 NL63(HCoV-NL63), 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스(SARS-CoV), 중증 급성 호흡기 증후군-2 바이러스(Severe Acute Respiratory Syndrome virus-2; Sars-CoV-2), 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV), 돼지 전염성 설사 바이러스(porcine epidemic diarrhea virus; PEDV), 전염성 위장염 바이러스(transmissible gastroenteritis virus; TGEV), 돼지 혈구 응집성뇌척수염 바이러스(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus; PHEV), 우 코로나바이러스(bovine coronavirus; BCoV), 말 코로나바이러스(equine coronavirus; EqCoV), 쥐 코로나바이러스(murine coronavirus; MuCoV), 개코로나바이러스(canine coronavirus; CCoV), 고양이 코로나바이러스 (feline coronavirus; FCoV), 박쥐 코로나바이러스-1(Miniopterus bat coronavirus1), 박쥐 코로나바이러스 HKU8(Miniopterus bat coronavirus HKU8), 박쥐 코로나바이러스 HKU2(Rhinolophus bat coronavirus HKU2), 박쥐 코로나바이러스 512(Scotophilus bat coronavirus 512), 박쥐 코로나바이러스 HKU4(Tylonycteris bat coronavirus HKU4), 박쥐 코로나바이러스 HKU5(Pipistrellus bat coronavirus HKU5), 박쥐 코로나바이러스 HKU9(Rousettus bat coronavirus HKU9), 새 코로나바이러스(Avian coronavirus), 흰색 돌고래 코로나바이러스 SW1(Beluga whale coronavirus SW1), 제주직박구리 코로나바이러스 HKU11(Bulbul coronavirus HKU11), 개똥지빠귀 코로나바이러스 HKU12(Thrush coronavirus HKU12) 및 킨바라 코로나바이러스 HKU13(Munia coronavirus HKU13)로 구성된 군에서 선택된 1종 이상인 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 10ug/kg 내지 1,000ug/kg 용량으로 투여되는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 10ug/kg 내지 300ug/kg 용량으로 투여되는 것일 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물은 근육, 피하, 정맥, 복강, 피부, 비강 또는 피막 투여되는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 코로나바이러스 감염성 질환 환자에게 투여하는 경우, 절대 림프구 수치(ALC)가 증가하고 중등도 또는 중증 환자의 증상이 경증 또는 무증상으로 완화되는 효과가 발휘되어, 본 발명에 따른 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 코로나바이러스 감염성 질환을 치료 또는 예방하는 효과가 있다.
도 1은 무증상 또는 경증 COVID-19 환자를 대상으로 지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 근육 주사(120㎍/kg, 240㎍/kg)하고 절대 림프구 수치(ALC)를 확인한 결과이다.
도 2는 중등도 또는 중증 COVID-19 환자를 대상으로 지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 정맥 주입(30㎍/kg, 60㎍/kg)하고 절대 림프구 수치 (ALC)를 확인한 결과이다.
정의
달리 언급되지 않거나 문맥에서 암시되지 않는 한, 다음 용어 및 구문은 하기 제공된 의미를 포함한다. 달리 명시적으로 언급되지 않거나 문맥상 명백하지 않는 한, 하기 용어 및 문구는 해당 용어 또는 문구가 관련된 기술분야에서 획득한 의미를 배제하지 않는다. 정의는 특정 구현예를 설명하는 데 도움을 주기 위해 제공되며, 본원에 제공된 관점의 범위는 청구범위에 의해서만 제한되기 때문에 본원에 제공된 관점을 제한하도록 의도되지 않는다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본원에 제공된 관점이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
용어 "약학적 조성물(pharmaceutical composition)"은 포유동물에 영향을 미치는 특정 질병 또는 질환을 예방 또는 치료하기 위해 포유동물에 투여될 적어도 하나의 치료제를 함유하는 혼합물 또는 용액을 의미하는 것으로 본원에서 정의된다. 일 구현예에서, 포유동물은 인간일 수 있다.
용어 "약학적으로 허용 가능한(pharmaceutically acceptable)"은 타당한 의학적 판단의 범위 내에서 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 과도한 독성, 자극 알레르기 반응 및 기타 문제 합병증 없이 인간 환자의 조직과의 접촉에 적합한 화합물, 물질, 조성물 및/또는 투여 형태를 의미하는 것으로 본원에서 정의된다.
본원에 사용된 용어 "치료하는(treating)" 또는 "치료(treatment)"는 인간 환자에서 적어도 하나의 증상을 경감(relieving), 감소(decreasing), 축소(reducing) 또는 완화(alleviating)시키거나 질병의 진행을 지연시키는 치료를 포함한다. 예를 들어, 치료는 장애의 하나 또는 여러 증상의 감소 또는 장애의 완전한 근절일 수 있다. 본 개시내용의 의미 내에서, 용어 "치료하다(treat)"는 또한 발병(즉, 질병의 임상적 징후 이전의 기간)의 정지 또는 지연 및/또는 질병의 발달 또는 악화의 위험을 감소시키는 것을 의미한다. 본원에서 용어 "보호하다(protect)"는 대상체에서 질병의 발달 또는 지속 또는 악화를 예방, 지연 또는 치료하거나 이 모두를 의미하는 것으로 사용된다.
본원에 사용된 용어 "예방하다(prevent)", "예방하는(preventing)" 또는 "예방(prevention)"은 예방되는 상태, 질병 또는 장애와 관련되거나 이에 의해 야기되는 적어도 하나의 증상의 예방을 포함한다.
용어 "약학적 유효량(pharmaceutically effective amount)" 또는 "임상적 유효량(clinically effective amount)"은 치료되는 장애의 기본적인 임상적으로 관찰가능한 징후 및 증상에 대해 관찰가능한 개선을 제공하기에 충분한 양이다.
본원에 사용된 문구 "이러한 치료가 필요한 인간 환자(a human patient in need of such treatment)"는 확인된 코로나바이러스 감염성 질환으로 진단되거나 이를 앓고 있는 인간 환자를 의미한다.
용어 "약(about)" 또는 "대략(approximately)"은 주어진 값 또는 범위의 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 또는 5% 이내의 의미를 갖는다.
용어 "감소된(decreased)" 또는 "감소하다(decrease)"는 일반적으로 통계적으로 유의한 양만큼 감소를 의미하는 것으로 본원에서 사용된다. 일부 구현예에서, "감소된(decreased)" 또는 "감소하다(decrease)"는 기준 수준과 비교하여 적어도 10% 감소, 예를 들어 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40% 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지의 감소 및 100% 감소를 포함하는 감소 (예를 들어, 기준 수준과 비교하여 부재의 수준 또는 감지할 수 없는 수준)를 의미한다.
용어 "증가된(increased)" 또는 "증가하다(increase)"는 일반적으로 통계적으로 유의한 양만큼 증가를 의미하는 것으로 본원에서 사용된다. 일부 구현예에서, "증가된(increased)" 또는 "증가하다(increase)"는 기준 수준과 비교하여 적어도 10% 증가, 예를 들어 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40% 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 그 이상까지의 증가를 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, 용어 "단백질(protein)", "폴리펩타이드(polypeptide)" 및 "펩타이드(peptide)"는 상호교환 가능한 개념으로 사용될 수 있다.
인터루킨-7 (IL-7)
본원의 일 양태로 사용될 수 있는 인터루킨-7(interleukin-7, IL-7)은 인터루킨 7, IL-7 수용체에 결합할 수 있는 폴리펩타이드(CD127로도 알려짐), 또는 IL-7의 활성 또는 이와 유사한 활성을 갖는 폴리펩타이드 일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "IL-7의 활성 또는 이와 유사한 활성을 갖는 폴리펩타이드(a polypeptide having the activity of IL-7 or a similar activity thereof)"는 IL-7과 동일하거나 유사한 서열 및 활성을 가지는 폴리펩타이드 또는 단백질을 의미한다.
본원에서 IL-7은 서열번호 1 내지 6으로 표시되는 아미노산 서열로 구성된 폴리펩타이드를 포함한다. 또한, IL-7은 서열번호 1 내지 6의 서열에 대해 약 70%, 75%, 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 또는 그 이상의 서열 동일성을 가질 수 있다. 펩타이드 서열의 서열 동일성은 공지된 서열 정렬 또는 비교 소프트웨어를 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 서열 동일성은 기본 설정으로 BLASTP 프로그램(blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PAGE=Proteins)을 사용하여 결정될 수 있다.
IL-7은 IL-7 단백질 또는 이의 단편을 포함할 수 있으며, 상기 단편은 IL-7 수용체에 결합할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "IL-7 단백질(IL-7 protein)"은 "IL-7 수용체에 결합할 수 있는 IL-7 단백질 및 이의 단편"을 포함하는 개념으로 사용될 수 있다. IL-7은 인간, 랫트(rats), 마우스(mice), 원숭이, 소 또는 양에서 얻은 것일 수 있다.
구체적으로, 인간 IL-7은 서열번호 1(Genbank Accession No. P13232)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고; 랫트 IL-7은 서열번호 2(Genbank Accession No. P56478)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고; 마우스 IL-7은 서열번호 3(Genbank Accession No. P10168)으로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고; 원숭이 IL-7은 서열번호 4(Genbank Accession No. NP_001279008)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고; 소 IL-7은 서열번호 5(Genbank Accession No. P26895)로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있고, 양 IL-7은 서열번호 6(Genbank Accession No. Q28540)으로 표시되는 아미노산 서열을 가질 수 있다.
또한, IL-7 단백질 또는 이의 단편은 다양하게 변형된 단백질 또는 펩타이드, 즉 변이체를 포함할 수 있다. 상기 변형은 IL-7의 기능을 변형시키지 않고, 야생형 IL-7에 하나 이상의 단백질을 치환, 결실 또는 첨가하는 방법으로 수행될 수 있다. 이들 다양한 단백질 또는 펩타이드는 야생형 단백질에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 가질 수 있다.
통상적으로, 야생형 아미노산 잔기는 알라닌으로 치환되지만, 치환은 전체 단백질 전하, 즉 극성 또는 소수성에 영향을 미치지 않거나 약한 영향을 주는 보존적 아미노산 치환으로 수행될 수 있다.
보존적 아미노산 치환은 하기 표 1을 참조할 수 있다.
염기성
(Basic) 		아르기닌 (Arg, R)
리신 (Lys, K)
히스티딘 (His, H)
산성
(Acidic) 		글루탐산 (Glu, E)
아스파르트산 (Asp, D)
비전하성 극성
(Uncharged polar) 		글루타민 (Gln, O)
아스파라긴 (Asn, N)
세린 (Ser, S)
트레오닌 (Thr, T)
티로신 (Tyr, Y)
비극성
(Non-polar) 		페닐알라닌 (Phe, F)
트립토판 (Trp, W)
시스테인 (Cys, C)
글리신 (Gly, G)
알라닌 (Ala, A)
발란 (Val, V)
프롤린 (Pro, P)
메티오닌 (Met, M)
루신 (Leu, L)
노르루신 (Norleucine)
이소루신 (Isoleucine)
각각의 아미노산에 대해, 추가적인 보존적 치환은 아미노산의 "상동체(homolog)"를 포함한다. 특히, "상동체"는 아미노산 측쇄의 베타 위치 측쇄에 메틸렌기(CH2)가 삽입된 아미노산을 의미한다. "동족체"의 예는 호모페닐알라닌, 호모아르기닌, 호모세린 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
변형된 인터루킨-7
본 발명의 일 양태로 사용될 수 있는 변형된 인터루킨-7(IL-7)은 다음 구조를 가질 수 있다:
A - IL-7 화학식 (I)
상기 A는 1 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드이고, IL-7은 인터루킨 7, IL-7 수용체에 결합할 수 있는 폴리펩타이드(CD127로도 알려짐), 또는 IL-7의 활성 또는 이와 유사한 활성을 갖는 폴리펩타이드이다.
A-IL-7의 변형된 IL-7의 구조에서, A 잔기는 IL-7의 N-말단에 직접 연결되거나 링커를 통해 연결될 수 있다.
구체적으로, 그 결과는 A-IL-7 또는 A-링커-IL-7의 형태일 수 있다.
링커가 펩타이드 링커인 경우, 연결은 임의의 연결 영역에서 발생할 수 있다. 이들은 당업계에 공지된 가교제를 사용하여 커플링될 수 있다. 가교제의 예는 1,1-비스(디아조아세틸)-2-페닐에탄, 글루타르알데히드, 4-아지도살리실산과 같은 N-하이드록시숙신이미드 에스터; 3,3'-디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트)와 같은 디숙신이미딜 에스터 및 비스-N-말레이미도-1,8-옥탄과 같은 이기능성 말레이미드를 포함하는 이미도에스터를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 링커는 알부민 링커 또는 펩타이드 링커일 수 있다. 펩타이드 링커는 Gly 및 Ser 잔기로 구성된 10 내지 20개의 아미노산 잔기의 펩타이드일 수 있다.
링커가 화학 결합으로 구성된 군에서 선택되는 하나로 형성되는 경우, 화학 결합은 이황화 결합, 디아민 결합, 설파이드-아민 결합, 카르복시-아민 결합, 에스터 결합 및 공유 결합일 수 있다.
일 구현예에서, A는 IL-7의 N-말단에 연결될 수 있다. A는 1 내지 10개의 아미노산을 포함하는 것을 특징으로 하며, 상기 아미노산은 메티오닌, 글리신 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 일 구현예에서, A가 단일 아미노산 잔기인 경우, 이는 글리신이다.
메티오닌과 글리신은 인체에서 면역반응을 유도하지 않는다. 대장균에서 생산된 단백질 치료제는 항상 N-말단에 메티오닌을 포함하지만 이상반응은 보고된 바 없다. 또한, 글리신은 GS 링커로서 널리 사용되며, 둘라글루타이드(Dulaglutide)와 같이 상업용 제품에서 면역반응을 유도하지 않는 것으로 보고되어 있다(Cell Biophys. 1993 Jan-Jun; 22(103):189-224).
일 예시적인 구현예에서, A는 메티오닌(Met, M), 글리신(Gly, G) 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 1 내지 10개의 아미노산을 포함하는 올리고펩타이드일 수 있다. 일 구현예에서, A는 1 내지 5개의 아미노산으로 구성된 올리고펩타이드일 수 있다. 예를 들어, A는 메티오닌, 글리신, 메티오닌-메티오닌, 글리신-글리신, 메티오닌-글리신, 글리신-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-글리신, 메티오닌-글리신-메티오닌, 글리신-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-글리신-글리신, 글리신-메티오닌-글리신, 글리신-글리신-메티오닌, 또는 글리신-글리신-글리신일 수 있다.
변형된 IL-7은 IL-7의 활성 또는 이와 유사한 활성을 갖는 폴리펩타이드 및 1 내지 10개의 아미노산으로 구성된 올리고펩타이드를 포함하는 A-IL-7의 구조를 가질 수 있다.
일 구현예에서, 변형된 IL-7은 서열번호 15 내지 20으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 또한, 변형된 IL-7은 서열번호 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 가질 수 있다.
지속형 재조합 IL-7 융합단백질
본 발명의 일 양태로 사용될 수 있는 지속형 재조합 인터루킨-7(IL-7) 융합단백질은
(a) 인터루킨-7(interleukin-7, IL-7) 또는 하기 화학식 (I)의 변형된　인터루킨-7(interleukin-7, IL-7):
A - IL-7 화학식 (I)
여기서 A는 1 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드임; 및
(b) 인터루킨-7 또는 변형된 인터루킨-7의 반감기를 연장하는 도메인;을 포함할 수 있다.
상기 인터루킨-7 또는 변형된 인터루킨-7의 반감기를 연장하는 도메인을 B로 표시하는 경우, B는 IL-7 또는 변형된 IL-7에 직접 연결되거나 링커에 의해 연결될 수 있다. 구체적으로, 그 결과, A-IL-7-B, B-A-IL-7, A-IL-7-링커-B, B-링커-A-IL-7, A-링커-IL-7-링커-B, 또는 B-링커-A-IL-7의 형태일 수 있다.
링커가 펩타이드 링커인 경우, 연결은 임의의 연결 영역에서 발생할 수 있다. 이들은 당업계에 공지된 가교제를 사용하여 커플링될 수 있다. 가교제의 예는 1,1-비스(디아조아세틸)-2-페닐에탄, 글루타르알데히드, 4-아지도살리실산과 같은 N-하이드록시숙신이미드 에스터; 3,3'-디티오비스(숙신이미딜프로피오네이트)와 같은 디숙신이미딜 에스터 및 비스-N-말레이미도-1,8-옥탄과 같은 이기능성 말레이미드를 포함하는 이미도에스터를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
또한, 링커는 알부민 링커 또는 펩타이드 링커일 수 있다. 펩타이드 링커는 Gly 및 Ser 잔기로 구성된 10 내지 20개의 아미노산 잔기의 펩타이드일 수 있다.
링커가 화학 결합으로 구성된 군에서 선택되는 하나로 형성되는 경우, 화학 결합은 이황화 결합, 디아민 결합, 설파이드-아민 결합, 카르복시-아민 결합, 에스터 결합 및 공유 결합일 수 있다.
상기 인터루킨-7 또는 변형된 인터루킨-7의 반감기를 연장하는 도메인은 인터루킨-7 또는 변형된 인터루킨-7의 생체 내 반감기를 증가시키기 위한 융합 파트너일 수 있으며, 바람직하게는 면역글로불린의 Fc 영역 또는 그의 일부, 알부민, 알부민-결합 폴리펩타이드, Pro/Ala/Ser (PAS), 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 β서브유닛의 C-말단 펩타이드 (CTP), 폴리에틸렌글리콜(PEG), 아미노산의 긴 구조화되지 않은 친수성 서열(XTEN), 하이드록시에틸 전분 (HES), 알부민-결합 소분자, 및 이들의 조합을 포함한다.
상기 도메인이 면역글로불린의 Fc 영역인 경우, 이는 변형된 면역글로불린의 Fc 영역일 수 있다. 특히, 상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 Fc 수용체 및/또는 보체와의 결합 친화도의 변형으로 인해 항체의존세포독성(ADCC) 또는 보체의존세포독성(CDC)이 약화된 것일 수 있다. 상기 변형된 면역글로불린 Fc 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택될 수 있다.
상기 변형된 면역글로불린 Fc영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgD, IgG4 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택될 수 있다. 구체적으로, 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 N-말단에서 C-말단까지 힌지 영역, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함할 수 있다. 특히, 힌지 영역은 인간 IgD 힌지 영역을 포함할 수 있고; CH2 도메인은 인간 IgD의 아미노산 잔기의 일부 및 인간 IgG4 CH2 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함할 수 있고; CH3 도메인은 인간 IgG4 CH3 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함할 수 있다.
한편, 2개의 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 이량체를 형성할 수 있으며, 예를 들어 상기 IL-7 또는 변형된 IL-7의 반감기를 연장하는 도메인이 Fc 영역인 경우 Fc 영역은 서로 결합하여 이량체를 형성할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "Fc 영역(Fc region)", "Fc 단편(Fc fragment)", 또는 "Fc"는 면역글로불린의 중쇄 불변 영역 2(CH2) 및 중쇄 불변 영역 3(CH3)을 포함하지만, 중쇄 및 경쇄의 가변영역 및 경쇄 불변영역 (CL1)은 포함하지 않는 단백질을 의미하고, 중쇄 불변영역의 힌지 영역을 추가로 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 하이브리드 Fc 또는 그의 하이브리드 Fc 단편은 "hFc" 또는 "hyFc"로 명명될 수 있다.
또한, 본원에 사용된 용어 "Fc 영역 변이체(Fc region variant)"는 Fc 영역 중 아미노산의 일부를 치환하거나 이종 Fc 영역을 조합하여 제조된 것을 의미한다. Fc 영역 변이체는 힌지 영역에서 절단되는 것을 방지할 수 있다. 구체적으로, 서열번호 9의 144번째 아미노산 및/또는 145번째 아미노산이 변형될 수 있다. 바람직하게는 변이체는 144번째 아미노산 K가 G 또는 S로 치환된 것 및 145번째 아미노산 E가 G 또는 S로 치환된 것일 수 있다.
또한, 변형된 면역글로불린의 Fc 영역 또는 Fc 영역 변이체는 하기 화학식 (II)로 표시될 수 있다:
화학식 (II)
N'-(Z1)p-Y-Z2-Z3-Z4-C'.
N'은 폴리펩타이드의 N-말단이고 C'는 폴리펩타이드의 C-말단이며;
p는 0 또는 1의 정수이고;
Z1은 서열번호 7의 90 내지 98 위치의 아미노산 잔기 중 98 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 9개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
Y는 서열번호 7의 99 내지 162 위치의 아미노산 잔기 중 162 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 64개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고;
Z2는 서열번호 7의 163 내지 199 위치의 아미노산 잔기 중 163 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 4 내지 37개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
Z3은 서열번호 8의 115 내지 220 위치의 아미노산 잔기 중 220 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 71 내지 106개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고; 및
Z4는 서열번호 8의 221 내지 327 위치의 아미노산 잔기 중 221 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 80 내지 107개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이다.
본 발명에서 상기 도메인은 서열번호 9 내지 14로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.
또한, Fc 단편은 천연 형태에 비해 천연 당쇄(sugar chains), 증가된 당쇄, 또는 감소된 당쇄를 갖는 형태일 수 있거나, 탈당화된 형태일 수 있다. 면역글로불린 Fc 당쇄는 화학적 방법, 효소적 방법, 미생물을 이용한 유전공학적 방법 등 통상적인 방법에 의해 변형될 수 있다. Fc 단편에서 당쇄를 제거하면 제1 보체 성분 C1의 C1q 부분에 대한 결합 친화도가 급격히 감소하고 ADCC 또는 CDC가 감소 또는 손실되어, 생체 내에서 불필요한 면역 반응을 유도하지 않는다. 이와 관련하여, 탈당화 또는 비당화된 형태의 면역글로불린 Fc 영역이 약물 담체로서 일 구현예의 목적에 보다 적합할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "탈당화(deglycosylation)"는 Fc 단편으로부터 당이 효소적으로 제거된 Fc 영역을 의미한다. 또한, 용어 "비당화(aglycosylation)"는 Fc 단편이 원핵생물, 바람직하게는 대장균에 의해 당화되지 않은 형태로 생산되는 것을 의미한다.
또한, 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 서열번호 9 (hyFc), 서열번호 10 (hyFcM1), 서열번호 11 (hyFcM2), 서열번호 12 (hyFcM3), 또는 서열번호 13 (hyFcM4)의 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 또한, 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 서열번호 14 (비용해성 마우스 Fc)의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 미국 특허 제7,867,491호에 기재된 것일 수 있으며, 변형된 면역글로불린의 Fc 영역의 생산은 미국 특허 제7,867,491호의 개시내용을 참조하여 수행될 수 있으며, 그의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 서열번호 21 내지 25로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 가질 수 있다. 또한, IL-7 융합단백질은 서열번호 21, 22, 23, 24, 또는 25의 아미노산 서열에 대해 적어도 약 70%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 85%, 적어도 약 86%, 적어도 약 87%, 적어도 약 88%, 적어도 약 89%, 적어도 약 90%, 적어도 약 91%, 적어도 약 92%, 적어도 약 93%, 적어도 약 94%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 갖는 서열을 가질 수 있다.
서열번호 21 내지 25의 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 서열번호 35 내지 39로 구성된 군에서 선택되는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화될 수 있다.
핵산 분자는 신호 서열 또는 리더 서열을 추가로 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "신호 서열(signal sequence)"은 생물학적 활성 분자 약물 및 융합단백질의 분비를 지시하는 단편을 의미하며, 이는 숙주 세포에서 번역된 후 절단된다. 일 구현예의 신호 서열은 소포체(ER) 막을 관통하는 단백질의 이동을 개시하는 아미노산 서열을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드다. 일 구현예에서 유용한 신호서열은 항체 경쇄 신호 서열, 예를 들어, 항체 14.18 (Gillies et al., J. Immunol. Meth 1989. 125:191-202), 항체 중쇄 신호 서열, 예를 들어, MOPC141 항체 중쇄 신호 서열(Sakano et al., Nature, 1980. 286: 676-683), 및 당업계에 공지된 다른 신호 서열(예를 들어, Watson et al., Nucleic Acid Research, 1984. 12:5145-5164 참조)을 포함한다.
신호 펩타이드의 특징은 당업계에 잘 알려져 있으며, 신호 펩타이드는 통상적으로 16 내지 30개의 아미노산을 갖지만, 더 많거나 더 적은 수의 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 통상적인 신호 펩타이드는 염기성 N-말단 영역, 중심 소수성 영역 및 더 극성인 C-말단 영역의 3개 영역으로 구성된다.
중심 소수성 영역은 4 내지 12개의 소수성 잔기를 포함하며, 이는 미성숙 폴리펩타이드의 전위 동안 막 지질 이중층을 통해 신호 서열을 고정화한다. 개시 후, 신호 서열은 신호 펩티다아제로 알려진 세포 효소에 의해 ER의 내강 내에서 주로 절단된다. 특히, 신호 서열은 조직 플라스미노겐 활성화 (tPa)를 위한 분비 신호 서열, 단순 포진 바이러스 당단백질 D (HSV gD)의 신호 서열, 또는 성장 호르몬일 수 있다. 바람직하게는 포유동물 등을 포함한 고등 진핵 세포에서 사용되는 분비 신호 서열이 사용될 수 있다. 또한, 분비 신호 서열로서, 야생형 IL-7에 포함된 신호 서열이 사용되거나 숙주 세포에서 발현 빈도가 높은 코돈으로 치환 후 사용될 수 있다.
지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 암호화하는 분리된 핵산 분자는 발현 벡터에 포함될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "벡터(vector)"는 숙주 세포 내로 도입되어 숙주 세포의 게놈 내로 재조합 및 삽입되거나 에피솜으로서 자발적으로 복제될 수 있는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 수단으로서 이해된다. 벡터는 선형 핵산, 플라스미드, 파지미드, 코스미드, RNA 벡터, 바이러스 벡터 및 이들의 유사체를 포함할 수 있다. 바이러스 벡터의 예는 레트로바이러스(retrovirus), 아데노바이러스(adenovirus) 및 아데노 관련 바이러스(adeno_associated virus)를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원에 사용된 용어 "유전자 발현(gene expression)" 또는 표적 단백질의 "발현(expression)"은 DNA 서열의 전사, mRNA 전사체의 번역, 및 융합단백질 생성물 또는 이의 단편의 분비를 의미하는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 용어 "숙주 세포(host cell)"는 재조합 발현 벡터가 도입될 수 있는 원핵 세포 및 진핵 세포를 의미한다. 본원에 사용된 용어 "형질도입된(transduced)", "형질전환된(transformed)" 및 "형질감염된 (transfected)"은 당업계에 공지된 기술을 사용하여 핵산(예를 들어, 벡터)을 세포 내로 도입하는 것을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "유전자 발현" 또는 표적 단백질의 "발현"은 DNA 서열의 전사, mRNA 전사체의 번역, 및 Fc 융합단백질 생성물 또는 항체 또는 이의 항체 단편의 분비를 의미하는 것으로 이해된다.
유용한 발현 벡터는 RcCMV(Invitrogen, Carlsbad) 또는 이의 변이체일 수 있다. 발현 벡터는 포유동물 세포에서 표적 유전자의 지속적인 전사를 촉진하기 위한 인간 사이토메갈로바이러스(human cytomegalovirus, CMV) 및 전사 후 RNA의 안정성 상태를 증가시키기 위한 소 성장 호르몬의 폴리아데닐화 신호 서열을 포함할 수 있다. 예시적인 구현예에서, 발현 벡터는 RcCMV의 변형된 형태인 pAD15이다.
발현 벡터는 일 구현예의 DNA 서열의 형질도입 또는 형질감염에 의해 표적 단백질의 발현 및/또는 분비에 적합한 적절한 숙주 세포에 포함될 수 있다.
적절한 숙주 세포의 예는 불멸 하이브리도마 세포, NS/0 골수종 세포, 293 세포, 차이니즈 햄스터 난소 (CHO) 세포, HeLa 세포, 인간 양수 유래 세포 (CapT 셀) 또는 COS 세포를 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
변형된 IL-7 또는 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 동시 계류 중인 출원(미국 출원 제15/126,313호)에 기재된 방법에 의해 생성될 수 있으며, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
투여경로
지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 함유하는 약학적 조성물은 직접 투여(예를 들어, 조직 영역으로의 주사, 이식 또는 국소 투여를 통한 투여에 의해 국소적으로) 또는 적절한 수단을 통한 시스템(예: 비경구 또는 경구)에 의해 대상체에게 투여될 수 있다. 조성물이 정맥내, 피하, 안구, 복강내, 근육내, 경구, 직장내, 안와내, 대뇌내, 두개내, 척수내, 심실내, 척추강내, 수조내(intracistenally), 피막내, 비강내, 또는 에어로졸 투여에 의해 비경구적으로 투여되는 경우, 조성물은 바람직하게는 체액의 수성 또는 생리학적으로 적용 가능한 현탁액 또는 이의 용액의 일부를 함유한다. 이와 같이, 생리학적으로 허용되는 담체 또는 수송체는 조성물에 첨가되어 환자에게 전달될 수 있으며, 이는 환자의 전해질 및/또는 체적 균형에 부정적인 영향을 미치지 않는다. 따라서, 생리학적으로 허용되는 담체 또는 수송체는 생리식염수일 수 있다. 상기 담체 또는 수송체는 약학적으로 허용 가능한 제제일 수 있다.
지속형 재조합 IL-7 융합단백질의 용도 및 치료 요법
코로나 바이러스 감염성 질환을 치료하기 위한 용도의 약물을 제조함에 있어서, 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 이를 필요로 하는 대상체에게10ug/kg 내지 1,000ug/kg 범위의 약학적 유효량으로 투여되도록 제조될 수 있다.
본 발명에서, 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 것일 수 있고, 예컨대 서열번호 24의 아미노산 서열을 갖는 것일 수 있다.
일 양태로서, 코로나 바이러스 감염성 질환을 치료하기 위한 용도의 약물을 제조함에 있어서, 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 약 10ug/kg 내지 약 900ug/kg, 약 10ug/kg 내지 약 800ug/kg, 약 10ug/kg 내지 약 700ug/kg, 약 10ug/kg 내지 약 600ug/kg, 약 10ug/kg 내지 약 500ug/kg, 약 10ug/kg 내지 약 400ug/kg, 약 10ug/kg 내지 약 300ug/kg, 약 10ug/kg 내지 약 200ug/kg, 또는 약 10ug/kg 내지 약 100ug/kg 범위의 약학적 유효량으로 투여되도록 제조될 수 있다.
코로나 바이러스 감염성 질환을 치료하기 위한 용도로, 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 1회 투여되는 것일 수 있다.
예컨대, 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 코로나 바이러스 감염성 질환을 치료하기 위하여 약 10ug/kg, 약 20ug/kg, 약 30ug/kg, 약 40ug/kg, 약 50ug/kg, 약 60ug/kg, 약 70ug/kg, 약 80ug/kg, 약 90ug/kg, 약 100ug/kg, 약 110ug/kg, 약 120ug/kg, 약 130ug/kg, 약 140ug/kg, 약 150ug/kg, 약 160ug/kg, 약 170ug/kg, 약 180ug/kg, 약 190ug/kg, 약 200ug/kg, 약 210ug/kg, 약 220ug/kg, 약 230ug/kg, 약 240ug/kg, 약 250ug/kg, 약 260ug/kg, 약 270ug/kg, 약 280ug/kg, 약 290ug/kg, 약 300ug/kg, 약 310ug/kg, 약 320ug/kg, 약 330ug/kg, 약 340ug/kg, 약 350ug/kg, 약 360ug/kg, 약 370ug/kg, 약 380ug/kg, 약 390ug/kg, 약 400ug/kg, 약 410ug/kg, 약 420ug/kg, 약 430ug/kg, 약 440ug/kg, 약 450ug/kg, 약 460ug/kg, 약 470ug/kg, 약 480ug/kg, 약 490ug/kg, 약 500ug/kg, 약 510ug/kg, 약 520ug/kg, 약 530ug/kg, 약 540ug/kg, 약 550ug/kg, 약 560ug/kg, 약 570ug/kg, 약 580ug/kg, 약 590ug/kg, 약 600ug/kg, 약 610ug/kg, 약 620ug/kg, 약 630ug/kg, 약 640ug/kg, 약 650ug/kg, 약 660ug/kg, 약 670ug/kg, 약 680ug/kg, 약 690ug/kg, 약 700ug/kg, 약 710ug/kg, 약 720ug/kg, 약 730ug/kg, 약 740ug/kg, 약 750ug/kg, 약 760ug/kg, 약 770ug/kg, 약 780ug/kg, 약 790ug/kg, 약 800ug/kg, 약 810ug/kg, 약 820ug/kg, 약 830ug/kg, 약 840ug/kg, 약 850ug/kg, 약 860ug/kg, 약 870ug/kg, 약 880ug/kg, 약 890ug/kg, 약 900ug/kg, 약 910ug/kg, 약 920ug/kg, 약 930ug/kg, 약 940ug/kg, 약 950ug/kg, 약 960ug/kg, 약 970ug/kg, 약 980ug/kg, 약 990ug/kg 또는 약 1000ug/kg의 용량으로 1회 투여되는 것일 수 있다.
일 구현예에서, 상기 용도를 위한 코로나바이러스 감염성 질환은 인간 코로나바이러스 229E(HCoV-229E), 인간 코로나바이러스 OC43(HCoV-OC43), 인간 코로나바이러스 HKU1(HCoV-HKU1), 인간 코로나바이러스 NL63(HCoV-NL63), 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스(SARS-CoV), 중증 급성 호흡기 증후군-2 바이러스(Severe Acute Respiratory Syndrome virus-2; Sars-CoV-2), 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV), 돼지 전염성 설사 바이러스(porcine epidemic diarrhea virus; PEDV), 전염성 위장염 바이러스(transmissible gastroenteritis virus; TGEV), 돼지 혈구 응집성뇌척수염 바이러스(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus; PHEV), 우 코로나바이러스(bovine coronavirus; BCoV), 말 코로나바이러스(equine coronavirus; EqCoV), 쥐 코로나바이러스(murine coronavirus; MuCoV), 개코로나바이러스(canine coronavirus; CCoV), 고양이 코로나바이러스 (feline coronavirus; FCoV), 박쥐 코로나바이러스-1(Miniopterus bat coronavirus1), 박쥐 코로나바이러스 HKU8(Miniopterus bat coronavirus HKU8), 박쥐 코로나바이러스 HKU2(Rhinolophus bat coronavirus HKU2), 박쥐 코로나바이러스 512(Scotophilus bat coronavirus 512), 박쥐 코로나바이러스 HKU4(Tylonycteris bat coronavirus HKU4), 박쥐 코로나바이러스 HKU5(Pipistrellus bat coronavirus HKU5), 박쥐 코로나바이러스 HKU9(Rousettus bat coronavirus HKU9), 새 코로나바이러스(Avian coronavirus), 흰색 돌고래 코로나바이러스 SW1(Beluga whale coronavirus SW1), 제주직박구리 코로나바이러스 HKU11(Bulbul coronavirus HKU11), 개똥지빠귀 코로나바이러스 HKU12(Thrush coronavirus HKU12) 및 킨바라 코로나바이러스 HKU13(Munia coronavirus HKU13)로 구성된 군에서 선택된 1종 이상의 코로나바이러스 감염성 질환일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
지속형 재조합 IL-7 융합단백질은, 또는 이를 포함하는 약학적 조성물은 삽입구적(parenthetically), 근육내, 피하, 안구, 정맥내, 복강내, 피내, 안와내, 대뇌내, 두개내, 척수내, 심실내, 척추강내, 수조내(intracistemally) 또는 피막내로 투여될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명에 따른 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 또는 이를 포함하는 약학적 조성물은 근육, 피하, 정맥, 복강, 피부, 비강 또는 피막 투여되는 것일 수 있다. 더 바람직하게는 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 또는 이를 포함하는 약학적 조성물은 정맥 주입되는 것일 수 있다.
상기 대상체는 하기 표 2에 따른 Baseline severity categorization 또는 표 3에 따른 WHO ordinal scale을 기준으로 중증도 또는 중증으로 판정된 대상체일 수 있다.
코로나 바이러스 감염성 질환을 치료하기 위하여 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 또는 이를 포함하는 약학적 조성물을 투여하는 경우, 절대 림프구 수치가 유의하게 증가될 수 있다.
절대 림프구 수치는 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 또는 이를 포함하는 약학적 조성물 투여 시점(base line)과 비교하여 적어도 10% 증가, 예를 들어 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40% 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 또는 적어도 약 100%, 또는 적어도 약 110%, 또는 적어도 약 120%, 또는 적어도 약 130%, 또는 적어도 약 140%, 또는 적어도 약 150%, 또는 적어도 약 160%, 또는 적어도 약 170%, 또는 적어도 약 180%, 또는 적어도 약 190%, 또는 적어도 약 200% 또는 그 이상까지의 증가를 의미한다.
일 구현예에서, 상기 대상체는 SoC (Standard of Care) 요법을 받았거나, 받고 있거나, 받을 예정인 것일 수 있다. SoC (Standard of Care) 요법 및 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
실시예
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지 않는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
하이브리드 Fc는 미국 특허 제7,867,491호에 개시되어 있는 hFc(하이브리드 Fc)를 사용하였으며, 그 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다. hFc는 생리학적으로 활성인 단백질과 결합할 수 있어 기존의 변형된 면역글로불린의 Fc 영역에 비해 우수한 생체 내 반감기를 나타낸다. 이하 실시예에서는 서열번호 24을 갖는 지속형 재조합 IL-7 융합단백질((rhIL-7-hyFc )이 사용되었다.
실시예 1. 시험 집단(Study Population)
다음 조건을 충족하는 COVID-19 환자를 대상으로 시험을 진행하였다:
FDA 승인 분자 타액 기반 테스트 또는 역전사 중합효소 연쇄 반응(RT-PCR) 테스트를 통해 COVID-19 확진자로 분류되고, NIH에 의해 분류된 중증도 분류의 무증상 또는 경증 사례(WHO ordinal scale에서 1에서 2까지의 점수에 해당), 중등도 또는 중증 사례 (WHO ordinal scale에에서 3에서 6까지의 점수에 해당)를 가지는 환자로, 무증상 또는 경증의 경우 임의의 증상 발생 후 7일 이내에 약물 투여가 가능한 환자 또는 중등도 또는 중증의 COVID-19 증상이 있는 환자를 대상으로 하였다.
FDA COVID-19 성인 중증도 분류기준
무증상 ·무증상
경증 ·경증의 COVID-19 증상* 발현
(증상: 숨가쁨 또는 호흡곤란 증상 없이 발열, 기침, 인후통, 권태감, 두통, 근육통, 오심, 구토, 설사, 미각 또는 후각 이상 등)
·중등증, 중증 또는 심각 단계에 해당하는 임상적 징후 없음
중등증 ·경증의 COVID-19 증상이 발현되거나 운동시 호흡곤란 증상 발현
·호흡수 ≥ 분당 20회, 심박수 ≥ 분당 90회, 실내 공기에서 산 소투여없이 산소포화도(SpO2) > 93%
·중증 또는 위중 단계에 해당하는 임상적 징후 없음
중증 ·중등증의 COVID-19 증상이 발현되거나, 휴식 시 숨가쁨 또는 호흡곤란 증상 발현 ·호흡수 ≥ 분당 20회, 심박수 ≥ 분당 90회, 실내 공기에서 산소포 화도(SpO2) ≤ 93% 또는 PaO2/FiO2 < 300 mmHg
·위중 단계에 해당하는 임상적 징후 없음
위중 ·적어도 1개 이상 다음 증상이 나타난 경우
- 다음 중 하나 이상의 장치가 필요한 호흡부전: 기관내 삽관, 기계환기, 고유량 비강 캐뉼라로 산소 투여(흡입 산소 농도 ≥ 0.5, 산소유량 > 20 L/분에서 강화된 비강 캐뉼라를 통해 투여되는 가열 및 가습 산소), 비침습적 양압환기, 체외막산소 요법(ECMO) 또는 호흡부전의 임상진단(즉, 선행 치료 중 1가 지가 임상적으로 필요하나 자원 부족으로 선행 치료들을 적용 할 수 없는 경우)
- 쇼크 (수축기 혈압 < 90 mmHg 또는 이완기 혈압 < 60 mmHg 또는 혈압승압제 필요)
- 다발성 장기부전
COVID-19 순위척도 (WHO ordinal scale)
중증도 분류 정의 스코어
미감염
(Uninfected)		 감염의 임상적 또는 바이러스학적 증거 없음 0
외래
(Ambulatory)		 활동 제한 없음 1
활동의 제한 2
입원
(Hospitalized)
경증
(Mild disease)		 입원, 산소 요법 없음 3
마스크 또는 비강 프롱(nasal prong)에 의한 산소 4
입원
(Hospitalized)
중증
(Severe disease)		 5
삽관법 및 기계적 인공호흡 6
인공호흡 + 추가 장기 지원 - 승압기, RRT, ECMO 7
사망(Dead) 사망 8
실시예 2. 약물 투여량 결정
마우스 모델에서 피하 투여를 통해 결정된 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 (rhIL-7-hyFc) 투여 용량 범위는 1.25 mg/kg - 10 mg/kg이었다. 근육 내 투여시 노출량이 피하 투여시보다 약 2배 많기 때문에 근육내 투여시 투여 용량 범위는 0.63 mg/kg 내지 5 mg/kg으로 결정하였다.
마우스 모델의 결과를 인간 등가 용량(HED)으로 전환하여 49 ㎍/kg 내지 410 ㎍/kg으로 환산하였다.
독성 연구에서, 4주 동안 cynomolgus macaques에 지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 반복적으로 피하 투여한 후, 지속형 재조합 IL-7융합단백질의 NOAEL은 6 mg/kg/week으로 계산되었으며, NOAEL 값을 인간 등가 용량(HED)으로 환산하여 2 mg/kg으로 계산하였다. 또한, cynomolgus macaques에 지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 4주간 반복 정맥 주사한 결과, rhIL-7-hyFc의 NOAEL은 3 mg/kg/week으로 계산되었으며, NOAEL 값을 HED로 환산하여 약 1 mg/kg으로 계산하였다.
이후 정맥 주입 용량을 받는 환자를 보호하기 위한 안전한 마진을 제공하기 위해 안전 계수 15를 적용하였으며, 정맥 주입을 위한 시작 용량은 약 60 μg/kg으로 계산하였다.
또한 국내 진행성 고형암 환자를 대상으로 한 지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 이용한 임상 1b상(연구번호 GX-I7-CA-003)의 약동학 프로파일을 이용한 모델링 및 시뮬레이션 분석을 통해, 480 ㎍/kg에서 1시간 동안 정맥 주입시의 Cmax는 안전성 및 약력학적 효과가 확인된 최고 용량인 근육 주사 1,200 ㎍/kg에서의 Cmax와 유사할 것으로 예측되었다.
건강한 지원자 10명(8명은 rhIL-7-hyFc, 2명은 플라시보 투여)을 대상으로 실시한 1상 무작위 이중 맹검 플라시보 대조 시험에서, 20 ㎍/kg(코호트 1, 피하[SC]) 내지 60 ㎍/kg(코호트 2, SC; 코호트 3, 근육내[IM]) 범위의 지속형 재조합 IL-7 융합단백질의 단일 투여의 내약성과 안전성을 확인하였다. 3가지 용량 코호트 모두에서 절대 림프구 수(ALC)는 투여 후 3일에 일시적으로 감소하고 7일까지 회복되어 21일 경에 용량 의존적 방식으로 최대 수준에 도달하였다. 해당 임상 시험 기간 동안 심각한 부작용은 보고되지 않았으며 임상 실험실 테스트, 활력 징후, 12-리드 ECG 또는 신체 검사에서 임상적으로 유의한 이상이 발견되지 않았다.
2상 권장 용량(RP2D)을 결정하기 위해 3+3 용량 증량 접근법을 사용하여 지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 단일 제제로 사용하는 1b상 시험이 한국의 진행성 고형 종양 환자(연구 번호 GX-I7-CA-003)에서 수행되었다.
60μg/kg, 120μg/kg, 240μg/kg, 480μg/kg, 720μg/kg, 960μg/kg, 1200μg/kg 및 1700μg/kg을 3주마다(q3w) 근육 주사(IM)하여 테스트되었다.
고형암 환자 대상 1b상 시험(연구 번호 GX-I7-CA-003)의 약력학(PD) 데이터는 절대 림프구 수(ALC)와 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 나이브/덜 분화된 기억 하위 집합이 진행성 고형 종양 환자에서 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 투여 후 용량 의존적 방식으로 증가함을 시사한다. 지금까지 연구에서 지속형 재조합 IL-7 융합단백질의 약력학적 프로파일은 건강한 지원자를 대상으로 한 연구에서 관찰된 안전성 프로파일과 유사하였으며, 고형암 및 교모세포종, 삼중음성유방암 환자 등에서 1,440 μg/kg 용량까지 근육투여의 안전성을 확인하였다.
비임상 연구, 건강한 성인 대상 임상 1상, 진행성 고형암 환자 대상 임상 1b상을 근거로 COVID-19 환자를 대상으로 한 임상 시험의 시작 용량과 경로는 120㎍/kg의 근육주사로 결정되었다. 결론적으로, 선행 임상시험에서 축적된 임상 경험을 바탕으로 지속형 재조합 IL-7 융합단백질의 투여 용량을 60, 120, 240 μg/kg 근육 또는 정맥투여로 선택하였다.
실시예 3. 무증상 또는 경증 환자를 대상으로 한 근육 주사 효능 분석
무증상 또는 경증 COVID-19가 있는 고령 대상자(성인 ≥50세)들을 대상으로 1 일차(기준선)에 각각 120 및 240 μg/kg의 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 또는 플라시보를 투여하였으며, COVID-19에 대한 지속형 재조합 IL-7 융합단백질의 안전성, 내약성 및 약력학 변수(ALC)를 평가하였다.
치료 그룹 1: 1 일차에 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 120 ㎍/kg 근육 주사(IM) 후(기준선), 필요에 따라 SoC (Standard of Care) 요법을 지속
치료 그룹 2: 1 일차에 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 240 ㎍/kg 근육 주사(IM) 후(기준선), 필요에 따라 SoC (Standard of Care) 요법을 지속
치료 그룹 3: 1 일차에 플라시보 근육 주사(IM) 후(기준선), 필요에 따라, SoC (Standard of Care) 요법을 지속
절대 림프구 수치 (ALC)는 기준선 이후 3일, 7일, 14일, 21일, 28일, 56일에 분석기를 이용하여 측정하였다.
그 결과, ALC는 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 투여시 플라시보와 비교하여 농도 의존적으로 증가하는 것을 확인하였다 (도 1). 각각 120㎍/kg, 240㎍/kg 투여 후 3일에는 ALC가 일시적으로 감소하는 양상을 보이다가 7일부터 28일까지 지속적으로 증가하고, 그 이후에는 유사한 수치를 나타내었다.
실시예 4. 중등도 또는 중증 환자를 대상으로 한 정맥 주입 효능 분석
중등도 또는 중증 COVID-19감염증이 확인된 성인 대상자에서지속형 재조합 IL-7 융합단백질 단일 IV 주입 치료의 안전성 및 약력학 변수(ALC) 평가하였다.
치료 그룹 1: 1 일차에 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 30㎍/kg 정맥 주입 (IV bolus) 후(기준선), 필요에 따라 SoC (Standard of Care) 요법을 지속
치료 그룹 2: 1 일차에 지속형 재조합 IL-7 융합단백질 60㎍/kg 정맥 주입 (IV bolus) 후(기준선), 필요에 따라 SoC (Standard of Care) 요법을 지속
절대 림프구 수치 (ALC)는 기준선(1일) 이후 3일, 7일, 14일, 21일, 28일, 56일에 분석기를 이용하여 측정하였다.
그 결과, 실험에 참여한 모든 중증도 및 중증 환자에서 약물 투여 후 시간이 경과함에 따라 ALC가 증가하는 것을 확인하였다. 구체적으로, 각각 30㎍/kg, 60㎍/kg을 투여한 대상자에서 모두에서 약물을 정맥 주입하고 약 4일 내지 8일째 ALC가 대체로 2배 이상 증가하는 것으로 확인되었다(표 4, 도 2).
Figure PCTKR2022017865-appb-img-000001
실시예 5. 서열정보
1. amino acid sequence of human IL-7 (Accession number: P13232) - signal peptide 제외
Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val
Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile
Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala
Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe
Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu
Asn Cys Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly
Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys
Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu
Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys
Glu His
2. amino acid sequence of rat IL-7 (Accession number: P56478)
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
Leu Val Leu Leu Pro Val Thr Ser Ser Asp Cys His Ile Lys Asp Lys
Asp Gly Lys Ala Phe Gly Ser Val Leu Met Ile Ser Ile Asn Gln Leu
Asp Lys Met Thr Gly Thr Asp Ser Asp Cys Pro Asn Asn Glu Pro Asn
Phe Phe Lys Lys His Leu Cys Asp Asp Thr Lys Glu Ala Ala Phe Leu
Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
Glu Glu Phe Asn Asp His Leu Leu Arg Val Ser Asp Gly Thr Gln Thr
Leu Val Asn Cys Thr Ser Lys Glu Glu Lys Thr Ile Lys Glu Gln Lys
Lys Asn Asp Pro Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Arg Glu Ile Lys Thr
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Lys Gly Ser Ile
3. amino acid sequence of mouse IL-7 (Accession number: P10168)
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
Leu Val Leu Leu Pro Val Thr Ser Ser Glu Cys His Ile Lys Asp Lys
Glu Gly Lys Ala Tyr Glu Ser Val Leu Met Ile Ser Ile Asp Glu Leu
Asp Lys Met Thr Gly Thr Asp Ser Asn Cys Pro Asn Asn Glu Pro Asn
Phe Phe Arg Lys His Val Cys Asp Asp Thr Lys Glu Ala Ala Phe Leu
Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
Glu Glu Phe Asn Val His Leu Leu Thr Val Ser Gln Gly Thr Gln Thr
Leu Val Asn Cys Thr Ser Lys Glu Glu Lys Asn Val Lys Glu Gln Lys
Lys Asn Asp Ala Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Arg Glu Ile Lys Thr
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Lys Gly Ser Ile
4. amino acid sequence of monkey IL-7 (Accession number: NP_001279008)
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Leu Pro Pro Leu Ile
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys
Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu
Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe
Asn Phe Phe Lys Arg His Leu Cys Asp Asp Asn Lys Glu Gly Met Phe
Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser
Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr
Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Lys Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala
Leu Gly Glu Pro Gln Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu
Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Ser Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu
Gln Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu
His
5. amino acid sequence of cow IL-7 (Accession number: P26895)
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Ile Ser Gly Lys
Asp Gly Gly Ala Tyr Gln Asn Val Leu Met Val Asn Ile Asp Asp Leu
Asp Asn Met Ile Asn Phe Asp Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Pro Asn
Phe Phe Lys Lys His Ser Cys Asp Asp Asn Lys Glu Ala Ser Phe Leu
Asn Arg Ala Ser Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
Asp Asp Phe Lys Leu His Leu Ser Thr Val Ser Gln Gly Thr Leu Thr
Leu Leu Asn Cys Thr Ser Lys Gly Lys Gly Arg Lys Pro Pro Ser Leu
Ser Glu Ala Gln Pro Thr Lys Asn Leu Glu Glu Asn Lys Ser Ser Lys
Glu Gln Lys Lys Gln Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Ile Leu Leu Gln
Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Arg Gly Ile Lys Glu His
6. amino acid sequence of sheep IL-7 (Accession number : Q28540)
Met Phe His Val Ser Phe Arg Tyr Ile Phe Gly Ile Pro Pro Leu Ile
Leu Val Leu Leu Pro Val Ala Ser Ser Asp Cys Asp Phe Ser Gly Lys
Asp Gly Gly Ala Tyr Gln Asn Val Leu Met Val Ser Ile Asp Asp Leu
Asp Asn Met Ile Asn Phe Asp Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Pro Asn
Phe Phe Lys Lys His Ser Cys Asp Asp Asn Lys Glu Ala Ser Phe Leu
Asn Arg Ala Ala Arg Lys Leu Lys Gln Phe Leu Lys Met Asn Ile Ser
Asp Asp Phe Lys Leu His Leu Ser Thr Val Ser Gln Gly Thr Leu Thr
Leu Leu Asn Cys Thr Ser Lys Gly Lys Gly Arg Lys Pro Pro Ser Leu
Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Asn Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys
Glu Gln Arg Lys Gln Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Ile Leu Leu Gln
Lys Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys Ile Leu Arg Gly Ile Thr Glu His
7. amino acid sequence of human IgD constant region (Genbank accession No. P01880)
Ala Pro Thr Lys Ala Pro Asp Val Phe Pro Ile Ile Ser Gly Cys Arg
His Pro Lys Asp Asn Ser Pro Val Val Leu Ala Cys Leu Ile Thr Gly
Tyr His Pro Thr Ser Val Thr Val Thr Trp Tyr Met Gly Thr Gln Ser
Gln Pro Gln Arg Thr Phe Pro Glu Ile Gln Arg Arg Asp Ser Tyr Tyr
Met Thr Ser Ser Gln Leu Ser Thr Pro Leu Gln Gln Trp Arg Gln Gly
Glu Tyr Lys Cys Val Val Gln His Thr Ala Ser Lys Ser Lys Lys Glu
Ile Phe Arg Trp Pro Glu Ser Pro Lys Ala Gln Ala Ser Ser Val Pro
Thr Ala Gln Pro Gln Ala Glu Gly Ser Leu Ala Lys Ala Thr Thr Ala
Pro Ala Thr Thr Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys
Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu
Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Tyr Leu Leu Thr Pro Ala
Val Gln Asp Leu Trp Leu Arg Asp Lys Ala Thr Phe Thr Cys Phe Val
Val Gly Ser Asp Leu Lys Asp Ala His Leu Thr Trp Glu Val Ala Gly
Lys Val Pro Thr Gly Gly Val Glu Glu Gly Leu Leu Glu Arg His Ser
Asn Gly Ser Gln Ser Gln His Ser Arg Leu Thr Leu Pro Arg Ser Leu
Trp Asn Ala Gly Thr Ser Val Thr Cys Thr Leu Asn His Pro Ser Leu
Pro Pro Gln Arg Leu Met Ala Leu Arg Glu Pro Ala Ala Gln Ala Pro
Val Lys Leu Ser Leu Asn Leu Leu Ala Ser Ser Asp Pro Pro Glu Ala
Ala Ser Trp Leu Leu Cys Glu Val Ser Gly Phe Ser Pro Pro Asn Ile
Leu Leu Met Trp Leu Glu Asp Gln Arg Glu Val Asn Thr Ser Gly Phe
Ala Pro Ala Arg Pro Pro Pro Gln Pro Gly Ser Thr Thr Phe Trp Ala
Trp Ser Val Leu Arg Val Pro Ala Pro Pro Ser Pro Gln Pro Ala Thr
Tyr Thr Cys Val Val Ser His Glu Asp Ser Arg Thr Leu Leu Asn Ala
Ser Arg Ser Leu Glu Val Ser Tyr Val Thr Asp His Gly Pro Met Lys
8. amino acid sequence of Partial human IgG4 constant region (Genbank accession No. AAH25985)
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
9. amino acid sequence of hyFc (Artificial Sequence)
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
Leu Ser Leu Gly Lys
10. amino acid sequence of hyFcM1 (Artificial Sequence)
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Gly Gly Lys Glu Lys
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
Leu Ser Leu Gly Lys
11. amino acid sequence of hyFcM2 (Artificial Sequence)
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Gly Ser Lys Glu Lys
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
Leu Ser Leu Gly Lys
12. amino acid sequence of hyFcM3 (Artificial Sequence)
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Ser Gly Lys Glu Lys
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
Leu Ser Leu Gly Lys
13. amino acid sequence of hyFcM4 (Artificial Sequence)
Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Ser Ser Lys Glu Lys
Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His
Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
Leu Ser Leu Gly Lys
14. amino acid sequence of mouse IgG Fc variant (Artificial Sequence)
Ala Ser Ala Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys
Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe
Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile
Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr
His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro
Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Ala Phe Ala Cys Ala Val
Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro
Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu
Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp
Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr
Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu
Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn His
His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys Gly Gly Gly Asn
Ser Gly Ser
15. amino acid sequence of modified IL-7(M) (Artificial Sequence)
Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val
Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly
Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys
Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu
Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu
Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln
Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys
Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp
Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn
Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
16. amino acid sequence of modified IL-7(MM) (Artificial Sequence)
Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser
Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile
Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile
Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys
Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His
Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly
Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr
Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn
Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp
Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
17. amino acid sequence of modified IL-7(MMM)
Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg
Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu
His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr
Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro
Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu
Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys
Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
18. amino acid sequence of modified IL-7(MGM) (Artificial Sequence)
Met Gly Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg
Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu
His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr
Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro
Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu
Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys
Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
19. amino acid sequence of modified IL-7(DDD) (Artificial Sequence)
Asp Asp Asp Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg
Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu
His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr
Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro
Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu
Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys
Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
20. amino acid sequence of modified IL-7(MMMM) Artificial Sequence
Met Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr
Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys
Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg
His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala
Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp
Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys
Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln
Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys
Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His
21. amino acid sequence of modified IL-7(M) fused hyFc (Artificial Sequence)
Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val
Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly
Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys
Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu
Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu
Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln
Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys
Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp
Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn
Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly
Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu
Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
22. amino acid sequence of modified IL-7(MM) fused hyFc (Artificial Sequence)
Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser
Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile
Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile
Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys
Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His
Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly
Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr
Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn
Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp
Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg Gly
Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg
Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
23. amino acid sequence of modified IL-7(MMM) fused hyFc (Artificial Sequence)
Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg
Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu
His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr
Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro
Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu
Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys
Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg
Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu
Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
24. amino acid sequence of modified IL-7(MGM) fused hyFc (Artificial Sequence)
Met Gly Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu
Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu
Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His
Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg
Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu
His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr
Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro
Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu
Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys
Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg
Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu
Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
25. amino acid sequence of modified IL-7(MMMM) fused hyFc (Artificial Sequence)
Met Met Met Met Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr
Glu Ser Val Leu Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys
Glu Ile Gly Ser Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg
His Ile Cys Asp Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala
Arg Lys Leu Arg Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp
Leu His Leu Leu Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys
Thr Gly Gln Val Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln
Pro Thr Lys Ser Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys
Leu Asn Asp Leu Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr
Cys Trp Asn Lys Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly
Arg Gly Gly Glu Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu
Glu Arg Glu Thr Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu
Gly Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
Lys
26. amino acid sequence of human IL-7 fused hyFc (Artificial Sequence)
Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu
Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser
Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp
Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg
Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu
Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val
Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser
Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu
Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys
Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Arg Asn Thr Gly Arg Gly Gly Glu
Glu Lys Lys Lys Glu Lys Glu Lys Glu Glu Gln Glu Glu Arg Glu Thr
Lys Thr Pro Glu Cys Pro Ser His Thr Gln Pro Leu Gly Val Phe Leu
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
27. amino acid sequence of human IL-7 fused nonlytic mouse Fc (Artificial Sequence)
Asp Cys Asp Ile Glu Gly Lys Asp Gly Lys Gln Tyr Glu Ser Val Leu
Met Val Ser Ile Asp Gln Leu Leu Asp Ser Met Lys Glu Ile Gly Ser
Asn Cys Leu Asn Asn Glu Phe Asn Phe Phe Lys Arg His Ile Cys Asp
Ala Asn Lys Glu Gly Met Phe Leu Phe Arg Ala Ala Arg Lys Leu Arg
Gln Phe Leu Lys Met Asn Ser Thr Gly Asp Phe Asp Leu His Leu Leu
Lys Val Ser Glu Gly Thr Thr Ile Leu Leu Asn Cys Thr Gly Gln Val
Lys Gly Arg Lys Pro Ala Ala Leu Gly Glu Ala Gln Pro Thr Lys Ser
Leu Glu Glu Asn Lys Ser Leu Lys Glu Gln Lys Lys Leu Asn Asp Leu
Cys Phe Leu Lys Arg Leu Leu Gln Glu Ile Lys Thr Cys Trp Asn Lys
Ile Leu Met Gly Thr Lys Glu His Ala Ser Ala Glu Pro Arg Gly Pro
Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Glu
Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu
Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr
Leu Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser
Gly Lys Ala Phe Ala Cys Ala Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro
Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln
Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val
Thr Leu Thr Cys Met Val Thr Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val
Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg
Val Glu Lys Lys Asn Trp Val Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val
Val His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg
Thr Pro Gly Lys Gly Gly Gly Asn Ser Gly Ser
28. nucleotide sequence of human IL-7 (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg
cctgtggcca gctccgactg cgacatcgag ggaaaagacg gcaagcagta cgaaagcgtg
ctgatggtgt ccatcgacca gctgctggat tctatgaagg agattgggag taactgcctg
aacaatgagt tcaacttctt caaacggcac atttgtgatg ccaacaagga gggaatgttc
ctgtttcggg ccgctagaaa actgaggcag ttcctgaaga tgaacagcac cggagacttt
gatctgcatc tgctgaaagt gtctgagggc accacaatcc tgctgaactg cactgggcag
gtgaaaggaa ggaagcctgc cgctctggga gaggctcagc caaccaagtc actggaggaa
aacaaaagcc tgaaggaaca gaagaaactg aatgacctgt gctttctgaa acggctgctg
caggagatca aaacatgttg gaacaagatt ctgatgggca caaaggaaca c
29. nucleotide sequence of modified IL-7(M) (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg
cccgtggcca gcagcatgga ctgcgacatc gagggcaagg acggcaagca gtacgagagc
gtgctgatgg tgagcatcga ccagctgctg gacagcatga aggagatcgg cagcaactgc
ctgaacaacg agttcaactt cttcaagaga cacatctgcg acgccaacaa ggagggcatg
ttcctgttca gagccgccag aaagctgaga cagttcctga agatgaacag caccggcgac
ttcgacctgc acctgctgaa ggtgagcgag ggcacaacca tcctgctgaa ctgcaccggc
caggtgaagg gcagaaagcc cgccgccctg ggcgaggccc agcccaccaa gagcctggag
gagaacaaga gcctgaagga gcagaagaag ctgaacgacc tgtgcttcct gaagagactg
ctgcaggaga tcaagacctg ctggaacaag atcctgatgg gcaccaagga gcac
30. nucleotide sequence of modified IL-7(MM) (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg
cccgtggcca gcagcatgat ggactgcgac atcgagggca aggacggcaa gcagtacgag
agcgtgctga tggtgagcat cgaccagctg ctggacagca tgaaggagat cggcagcaac
tgcctgaaca acgagttcaa cttcttcaag agacacatct gcgacgccaa caaggagggc
atgttcctgt tcagagccgc cagaaagctg agacagttcc tgaagatgaa cagcaccggc
gacttcgacc tgcacctgct gaaggtgagc gagggcacaa ccatcctgct gaactgcacc
ggccaggtga agggcagaaa gcccgccgcc ctgggcgagg cccagcccac caagagcctg
gaggagaaca agagcctgaa ggagcagaag aagctgaacg acctgtgctt cctgaagaga
ctgctgcagg agatcaagac ctgctggaac aagatcctga tgggcaccaa ggagcac
31. nucleotide sequence of modified IL-7(MMM) (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg
cccgtggcca gcagcatgat gatggactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac
gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc
aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag
ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc
ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc
accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc
ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag
agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac
32. nucleotide sequence of modified IL-7(MGM) (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg
cctgtggcca gctccatggg gatggactgc gacatcgagg gaaaagacgg caagcagtac
gaaagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag ctgctggatt ctatgaagga gattgggagt
aactgcctga acaatgagtt caacttcttc aaacggcaca tttgtgatgc caacaaggag
ggaatgttcc tgtttcgggc cgctagaaaa ctgaggcagt tcctgaagat gaacagcacc
ggagactttg atctgcatct gctgaaagtg tctgagggca ccacaatcct gctgaactgc
actgggcagg tgaaaggaag gaagcctgcc gctctgggag aggctcagcc aaccaagtca
ctggaggaaa acaaaagcct gaaggaacag aagaaactga atgacctgtg ctttctgaaa
cggctgctgc aggagatcaa aacatgttgg aacaagattc tgatgggcac caaggagcac
33. nucleotide sequence of modified IL-7(DDD) (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg
cccgtggcca gcagcgacga tgacgactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac
gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc
aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag
ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc
ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc
accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc
ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag
agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac
34. nucleotide sequence of modified IL-7(MMMM) (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg
cccgtggcca gcagcatgat gatgatggac tgcgacatcg agggcaagga cggcaagcag
tacgagagcg tgctgatggt gagcatcgac cagctgctgg acagcatgaa ggagatcggc
agcaactgcc tgaacaacga gttcaacttc ttcaagagac acatctgcga cgccaacaag
gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc
accggcgact tcgacctgca cctgctgaag gtgagcgagg gcacaaccat cctgctgaac
tgcaccggcc aggtgaaggg cagaaagccc gccgccctgg gcgaggccca gcccaccaag
agcctggagg agaacaagag cctgaaggag cagaagaagc tgaacgacct gtgcttcctg
aagagactgc tgcaggagat caagacctgc tggaacaaga tcctgatggg caccaaggag
cac
35. nucleotide sequence of modified IL-7(M) fused hyFc (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg
cccgtggcca gcagcatgga ctgcgacatc gagggcaagg acggcaagca gtacgagagc
gtgctgatgg tgagcatcga ccagctgctg gacagcatga aggagatcgg cagcaactgc
ctgaacaacg agttcaactt cttcaagaga cacatctgcg acgccaacaa ggagggcatg
ttcctgttca gagccgccag aaagctgaga cagttcctga agatgaacag caccggcgac
ttcgacctgc acctgctgaa ggtgagcgag ggcacaacca tcctgctgaa ctgcaccggc
caggtgaagg gcagaaagcc cgccgccctg ggcgaggccc agcccaccaa gagcctggag
gagaacaaga gcctgaagga gcagaagaag ctgaacgacc tgtgcttcct gaagagactg
ctgcaggaga tcaagacctg ctggaacaag atcctgatgg gcaccaagga gcacaggaac
acaggcagag gcggcgagga gaagaagaag gagaaggaga aggaggagca ggaggaaaga
gagaccaaga cccccgagtg ccccagccac acccagcccc tgggcgtgtt cctgttccct
cccaagccca aggacaccct gatgatcagc agaacccccg aggtgacctg cgtggtcgtg
gatgtgagcc aggaagatcc cgaagtgcag ttcaactggt acgtggatgg cgtggaagtg
cacaacgcca agaccaagcc cagagaagag cagttcaact ccacctacag agtggtgagc
gtgctgaccg tgctgcacca ggactggctg aacggcaagg agtacaagtg caaggtgtcc
aacaaaggcc tgcccagctc catcgagaag accatcagca aagccaaagg ccagcccaga
gaaccccagg tgtacaccct gcctcccagc caggaagaga tgaccaagaa ccaggtgtcc
ctgacctgcc tggtgaaagg cttctacccc agcgacatcg ccgtggagtg ggaaagcaac
ggccagcccg agaacaatta caagacaacc cctcccgtgc tggatagcga tggcagcttc
tttctgtaca gcagactgac cgtggacaag agcagatggc aggaaggcaa cgtgttcagc
tgcagcgtga tgcacgaagc cctgcacaac cactacaccc agaagagcct gtccctgagc
ctgggcaagt gactcgagtc taga
36. nucleotide sequence of modified IL-7(MM) fused hyFc (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg
cccgtggcca gcagcatgat ggactgcgac atcgagggca aggacggcaa gcagtacgag
agcgtgctga tggtgagcat cgaccagctg ctggacagca tgaaggagat cggcagcaac
tgcctgaaca acgagttcaa cttcttcaag agacacatct gcgacgccaa caaggagggc
atgttcctgt tcagagccgc cagaaagctg agacagttcc tgaagatgaa cagcaccggc
gacttcgacc tgcacctgct gaaggtgagc gagggcacaa ccatcctgct gaactgcacc
ggccaggtga agggcagaaa gcccgccgcc ctgggcgagg cccagcccac caagagcctg
gaggagaaca agagcctgaa ggagcagaag aagctgaacg acctgtgctt cctgaagaga
ctgctgcagg agatcaagac ctgctggaac aagatcctga tgggcaccaa ggagcacagg
aacacaggca gaggcggcga ggagaagaag aaggagaagg agaaggagga gcaggaggaa
agagagacca agacccccga gtgccccagc cacacccagc ccctgggcgt gttcctgttc
cctcccaagc ccaaggacac cctgatgatc agcagaaccc ccgaggtgac ctgcgtggtc
gtggatgtga gccaggaaga tcccgaagtg cagttcaact ggtacgtgga tggcgtggaa
gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagaa gagcagttca actccaccta cagagtggtg
agcgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg
tccaacaaag gcctgcccag ctccatcgag aagaccatca gcaaagccaa aggccagccc
agagaacccc aggtgtacac cctgcctccc agccaggaag agatgaccaa gaaccaggtg
tccctgacct gcctggtgaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggaaagc
aacggccagc ccgagaacaa ttacaagaca acccctcccg tgctggatag cgatggcagc
ttctttctgt acagcagact gaccgtggac aagagcagat ggcaggaagg caacgtgttc
agctgcagcg tgatgcacga agccctgcac aaccactaca cccagaagag cctgtccctg
agcctgggca ag
37. nucleotide sequence of modified IL-7(MMM) fused hyFc (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg
cccgtggcca gcagcatgat gatggactgc gacatcgagg gcaaggacgg caagcagtac
gagagcgtgc tgatggtgag catcgaccag ctgctggaca gcatgaagga gatcggcagc
aactgcctga acaacgagtt caacttcttc aagagacaca tctgcgacgc caacaaggag
ggcatgttcc tgttcagagc cgccagaaag ctgagacagt tcctgaagat gaacagcacc
ggcgacttcg acctgcacct gctgaaggtg agcgagggca caaccatcct gctgaactgc
accggccagg tgaagggcag aaagcccgcc gccctgggcg aggcccagcc caccaagagc
ctggaggaga acaagagcct gaaggagcag aagaagctga acgacctgtg cttcctgaag
agactgctgc aggagatcaa gacctgctgg aacaagatcc tgatgggcac caaggagcac
aggaacacag gcagaggcgg cgaggagaag aagaaggaga aggagaagga ggagcaggag
gaaagagaga ccaagacccc cgagtgcccc agccacaccc agcccctggg cgtgttcctg
ttccctccca agcccaagga caccctgatg atcagcagaa cccccgaggt gacctgcgtg
gtcgtggatg tgagccagga agatcccgaa gtgcagttca actggtacgt ggatggcgtg
gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaagagcagt tcaactccac ctacagagtg
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag
gtgtccaaca aaggcctgcc cagctccatc gagaagacca tcagcaaagc caaaggccag
cccagagaac cccaggtgta caccctgcct cccagccagg aagagatgac caagaaccag
gtgtccctga cctgcctggt gaaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa
agcaacggcc agcccgagaa caattacaag acaacccctc ccgtgctgga tagcgatggc
agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg
ttcagctgca gcgtgatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgtcc
ctgagcctgg gcaag
38. nucleotide sequence of modified IL-7(MGM) fused hyFc (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag gtacatcttc ggcctgccac ccctgatcct ggtgctgctg
cctgtggcca gctccatggg gatggactgc gacatcgagg gaaaagacgg caagcagtac
gaaagcgtgc tgatggtgtc catcgaccag ctgctggatt ctatgaagga gattgggagt
aactgcctga acaatgagtt caacttcttc aaacggcaca tttgtgatgc caacaaggag
ggaatgttcc tgtttcgggc cgctagaaaa ctgaggcagt tcctgaagat gaacagcacc
ggagactttg atctgcatct gctgaaagtg tctgagggca ccacaatcct gctgaactgc
actgggcagg tgaaaggaag gaagcctgcc gctctgggag aggctcagcc aaccaagtca
ctggaggaaa acaaaagcct gaaggaacag aagaaactga atgacctgtg ctttctgaaa
cggctgctgc aggagatcaa aacatgttgg aacaagattc tgatgggcac aaaggaacac
cgcaatactg ggcggggcgg ggaggaaaag aaaaaggaga aggaaaagga ggaacaggag
gaaagagaga ctaagacccc agaatgtccc agccatactc agcccctggg ggtgttcctg
tttcccccta aacctaagga taccctgatg atcagcagga cacccgaggt gacctgcgtg
gtcgtggatg tgagccagga agatcccgaa gtgcagttca actggtacgt ggatggcgtg
gaagtgcaca acgccaagac caagcccaga gaagagcagt tcaactccac ctacagagtg
gtgagcgtgc tgaccgtgct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag
gtgtccaaca aaggcctgcc cagctccatc gagaagacca tcagcaaagc caaaggccag
cccagagaac cccaggtgta caccctgcct cccagccagg aagagatgac caagaaccag
gtgtccctga cctgcctggt gaaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggaa
agcaacggcc agcccgagaa caattacaag acaacccctc ccgtgctgga tagcgatggc
agcttctttc tgtacagcag actgaccgtg gacaagagca gatggcagga aggcaacgtg
ttcagctgca gcgtgatgca cgaagccctg cacaaccact acacccagaa gagcctgtcc
ctgagcctgg gcaag
39. nucleotide sequence of modified IL-7(MMMM) fused hyFc (Artificial Sequence)
atgttccacg tgagcttcag atacatcttc ggcctgcccc ccctgatcct ggtgctgctg
cccgtggcca gcagcatgat gatgatggac tgcgacatcg agggcaagga cggcaagcag
tacgagagcg tgctgatggt gagcatcgac cagctgctgg acagcatgaa ggagatcggc
agcaactgcc tgaacaacga gttcaacttc ttcaagagac acatctgcga cgccaacaag
gagggcatgt tcctgttcag agccgccaga aagctgagac agttcctgaa gatgaacagc
accggcgact tcgacctgca cctgctgaag gtgagcgagg gcacaaccat cctgctgaac
tgcaccggcc aggtgaaggg cagaaagccc gccgccctgg gcgaggccca gcccaccaag
agcctggagg agaacaagag cctgaaggag cagaagaagc tgaacgacct gtgcttcctg
aagagactgc tgcaggagat caagacctgc tggaacaaga tcctgatggg caccaaggag
cacaggaaca caggcagagg cggcgaggag aagaagaagg agaaggagaa ggaggagcag
gaggaaagag agaccaagac ccccgagtgc cccagccaca cccagcccct gggcgtgttc
ctgttccctc ccaagcccaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgc
gtggtcgtgg atgtgagcca ggaagatccc gaagtgcagt tcaactggta cgtggatggc
gtggaagtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaagagc agttcaactc cacctacaga
gtggtgagcg tgctgaccgt gctgcaccag gactggctga acggcaagga gtacaagtgc
aaggtgtcca acaaaggcct gcccagctcc atcgagaaga ccatcagcaa agccaaaggc
cagcccagag aaccccaggt gtacaccctg cctcccagcc aggaagagat gaccaagaac
caggtgtccc tgacctgcct ggtgaaaggc ttctacccca gcgacatcgc cgtggagtgg
gaaagcaacg gccagcccga gaacaattac aagacaaccc ctcccgtgct ggatagcgat
ggcagcttct ttctgtacag cagactgacc gtggacaaga gcagatggca ggaaggcaac
gtgttcagct gcagcgtgat gcacgaagcc ctgcacaacc actacaccca gaagagcctg
tccctgagcc tgggcaag
40. Synthetic oligopeptide (Artificial Sequence)
Met Met Met Met
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시 양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (19)

  1. (a) 인터루킨-7(interleukin-7, IL-7) 또는 하기 화학식 (I)의 변형된　인터루킨-7(interleukin-7, IL-7):
    A - IL-7 화학식 (I)
    여기서 A는 1 내지 10개의 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드임; 및
    (b) 인터루킨-7 또는 변형된 인터루킨-7의 반감기를 연장하는 도메인;을 포함하는 지속형 재조합 IL-7 융합단백질을 포함하는 코로나바이러스(coronavirus) 감염성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 IL-7은 서열번호 1 내지 6으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 것인, 약학적 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 A는 상기 IL-7의 N-말단에 연결된 것인, 약학적 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 A는 메티오닌, 글리신, 또는 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 잔기로 구성된 올리고펩타이드인, 약학적 조성물.
  5. 제4항에 있어서,
    상기 A는 메티오닌, 글리신, 메티오닌-메티오닌, 글리신-글리신, 메티오닌-글리신, 글리신-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-메티오닌-글리신, 메티오닌-글리신-메티오닌, 글리신-메티오닌-메티오닌, 메티오닌-글리신-글리신, 글리신-메티오닌-글리신, 글리신-글리신-메티오닌, 또는 글리신-글리신-글리신인 것인, 약학적 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 도메인은 인터루킨-7 또는 변형된 인터루킨-7의 N-말단 또는 C-말단에 연결되는 것인, 약학적 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 도메인은 면역글로불린의 Fc 영역 또는 그의 일부, 알부민, 알부민-결합 폴리펩타이드, Pro/Ala/Ser (PAS), 인간 융모성 생식선 자극호르몬의 β서브유닛의 C-말단 펩타이드 (CTP), 폴리에틸렌글리콜(PEG), 아미노산의 긴 구조화되지 않은 친수성 서열 (XTEN), 하이드록시에틸 전분 (HES), 알부민-결합 소분자, 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 어느 하나인 것인, 약학적 조성물.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 도메인은 변형된 면역글로불린의 Fc 영역을 포함하는 것인, 약학적 조성물.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, IgD, IgE 및 이들의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것인, 약학적 조성물.
  10. 제9항에 있어서,
    상기 변형된 면역글로불린 Fc영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgD, IgG4 및 이의 조합으로 구성된 군에서 선택되는 것인, 약학적 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 N-말단에서 C-말단 방향으로 힌지 영역, CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하고,
    상기 힌지 영역은 인간 IgD 힌지 영역을 포함하며,
    상기 CH2 도메인은 인간 IgD 및 인간 IgG4의 CH2 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함하고,
    상기 CH3 도메인은 인간 IgG4 CH3 도메인의 아미노산 잔기의 일부를 포함하는 것인, 약학적 조성물.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 변형된 면역글로불린의 Fc 영역은 하기 화학식 (II)로 표시되는 것인, 약학적 조성물:
    화학식 (II)
    N'-(Z1)p-Y-Z2-Z3-Z4-C'
    여기서 N'은 폴리펩타이드의 N-말단이고 C'는 폴리펩타이드의 C-말단이며;
    p는 0 또는 1의 정수이고;
    Z1은 서열번호 7의 90 내지 98 위치의 아미노산 잔기 중 98 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 9개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
    Y는 서열번호 7의 99 내지 162 위치의 아미노산 잔기 중 162 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 5 내지 64개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고;
    Z2는 서열번호 7의 163 내지 199 위치의 아미노산 잔기 중 163 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 4 내지 37개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이며;
    Z3은 서열번호 8의 115 내지 220 위치의 아미노산 잔기 중 220 위치의 아미노산 잔기로부터 N-말단 방향으로 연속된 71 내지 106개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열이고; 및
    Z4는 서열번호 8의 221 내지 327 위치의 아미노산 잔기 중 221 위치의 아미노산 잔기로부터 C-말단 방향으로 연속된 80 내지 107개의 아미노산 잔기를 갖는 아미노산 서열임.
  13. 제12항에 있어서,
    상기 도메인은 서열번호 9 내지 14로 구성된 군에서 선택되는 아미노산 서열을 갖는 것인, 약학적 조성물.
  14. 제1항에 있어서, 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 1회 투여되는 것인, 약학적 조성물.
  15. 제1항에 있어서, 상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 서열번호 24의 아미노산 서열을 포함하는 것인, 약학적 조성물.
  16. 제1항에 있어서,
    상기 코로나바이러스는 인간 코로나바이러스 229E(HCoV-229E), 인간 코로나바이러스 OC43(HCoV-OC43), 인간 코로나바이러스 HKU1(HCoV-HKU1), 인간 코로나바이러스 NL63(HCoV-NL63), 중증 급성 호흡기 증후군 코로나바이러스(SARS-CoV), 중증 급성 호흡기 증후군-2 바이러스(Severe Acute Respiratory Syndrome virus-2; Sars-CoV-2), 중동 호흡기 증후군 코로나바이러스(MERS-CoV), 돼지 전염성 설사 바이러스(porcine epidemic diarrhea virus; PEDV), 전염성 위장염 바이러스(transmissible gastroenteritis virus; TGEV), 돼지 혈구 응집성뇌척수염 바이러스(porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus; PHEV), 우 코로나바이러스(bovine coronavirus; BCoV), 말 코로나바이러스(equine coronavirus; EqCoV), 쥐 코로나바이러스(murine coronavirus; MuCoV), 개코로나바이러스(canine coronavirus; CCoV), 고양이 코로나바이러스 (feline coronavirus; FCoV), 박쥐 코로나바이러스-1(Miniopterus bat coronavirus1), 박쥐 코로나바이러스 HKU8(Miniopterus bat coronavirus HKU8), 박쥐 코로나바이러스 HKU2(Rhinolophus bat coronavirus HKU2), 박쥐 코로나바이러스 512(Scotophilus bat coronavirus 512), 박쥐 코로나바이러스 HKU4(Tylonycteris bat coronavirus HKU4), 박쥐 코로나바이러스 HKU5(Pipistrellus bat coronavirus HKU5), 박쥐 코로나바이러스 HKU9(Rousettus bat coronavirus HKU9), 새 코로나바이러스(Avian coronavirus), 흰색 돌고래 코로나바이러스 SW1(Beluga whale coronavirus SW1), 제주직박구리 코로나바이러스 HKU11(Bulbul coronavirus HKU11), 개똥지빠귀 코로나바이러스 HKU12(Thrush coronavirus HKU12) 및 킨바라 코로나바이러스 HKU13(Munia coronavirus HKU13)로 구성된 군에서 선택된 1종 이상인, 약학적 조성물.
  17. 제1항에 있어서,
    상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 10ug/kg 내지 1,000ug/kg 용량으로 투여되는 것인, 약학적 조성물.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 지속형 재조합 IL-7 융합단백질은 10ug/kg 내지 300ug/kg 용량으로 투여되는 것인, 약학적 조성물.
  19. 제1항에 있어서,
    근육, 피하, 정맥, 복강, 피부, 비강 또는 피막 투여되는 것인, 약학적 조성물.
PCT/KR2022/017865 2021-11-12 2022-11-14 코로나바이러스 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 인터루킨-7 융합단백질의 투여 요법 WO2023085882A1 (ko)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2021-0155656 2021-11-12
KR20210155656 2021-11-12

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2023085882A1 true WO2023085882A1 (ko) 2023-05-19

Family

ID=86336417

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2022/017865 WO2023085882A1 (ko) 2021-11-12 2022-11-14 코로나바이러스 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 인터루킨-7 융합단백질의 투여 요법

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2023085882A1 (ko)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160146584A (ko) * 2015-06-11 2016-12-21 주식회사 제넥신 변형된 인터루킨-7 단백질 및 이의 용도
KR20170066255A (ko) * 2015-12-04 2017-06-14 주식회사 제넥신 면역글로불린 Fc가 융합된 인터루킨-7 융합 단백질을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2021046404A1 (en) * 2019-09-04 2021-03-11 Genexine, Inc. Method for increasing lymphocyte count by using il-7 fusion protein in tumors

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20160146584A (ko) * 2015-06-11 2016-12-21 주식회사 제넥신 변형된 인터루킨-7 단백질 및 이의 용도
KR20170066255A (ko) * 2015-12-04 2017-06-14 주식회사 제넥신 면역글로불린 Fc가 융합된 인터루킨-7 융합 단백질을 포함하는 인플루엔자 바이러스 감염의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2021046404A1 (en) * 2019-09-04 2021-03-11 Genexine, Inc. Method for increasing lymphocyte count by using il-7 fusion protein in tumors

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ANONYMOUS: "A Study to Evaluate the Safety and Efficacy of GX-I7 in Elderly Patients With Asymptomatic or Mild Symptoms of COVID-19", CLINICAL TRIALS.GOV CLINICAL TRIALS.GOV, 23 March 2021 (2021-03-23), XP093066459, Retrieved from the Internet <URL:https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT04810637> [retrieved on 20230723] *
ANONYMOUS: "Genexine and NeoImmuneTech (NIT) - GX-I7 [also called NT-17 or Hyleukin-7™ (rhIL-7-hyFc)]", GENETIC ENGINEERING & BIOTECHNOLOGY NEWS, 9 July 2020 (2020-07-09), XP093066463, Retrieved from the Internet <URL:https://www.genengnews.com/news/genexine-and-neoimmunetech-nit-gx-i7-also-called-nt-17-or-hyleukin-7-rhil-7-hyfc/> [retrieved on 20230723] *
ANONYMOUS: "Safety and Preliminary Efficacy Study of GX-I7 in Patients With COVID-19", CLINICALTRIALS.GOV IDENTIFIER: NCT04730427, 29 January 2021 (2021-01-29), XP093066460, Retrieved from the Internet <URL:https://classic.clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT04730427> [retrieved on 20230723] *
BEKELE YONAS, SUI YONGJUN, BERZOFSKY JAY A.: "IL-7 in SARS-CoV-2 Infection and as a Potential Vaccine Adjuvant", FRONTIERS IN IMMUNOLOGY, vol. 12, 17 September 2021 (2021-09-17), pages 737406, XP093066458, DOI: 10.3389/fimmu.2021.737406 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2017116205A1 (ko) 글루카곤, glp-1 및 gip 수용체 모두에 활성을 갖는 삼중 활성체의 지속형 결합체
WO2020060122A1 (ko) Il-2 단백질 및 cd80 단백질을 포함하는 융합단백질 및 이의 용도
WO2016200219A1 (en) Modified interleukin-7 protein and uses thereof
WO2019039891A1 (ko) 중동호흡기증후군 코로나바이러스의 스파이크 단백질에 대한 단일클론항체 및 이의 용도
WO2017052321A1 (ko) 다수의 생리활성 폴리펩타이드 및 면역글로불린 Fc 영역을 포함하는, 단백질 결합체
WO2015108398A1 (ko) 지속형 인슐린 및 그 용도
WO2019066586A1 (ko) 글루카곤 유사 펩타이드-2(glp-2) 유도체의 지속형 결합체
WO2019031938A2 (ko) 암 치료를 위한 t 세포의 활성화 방법
WO2017003267A1 (ko) 항바이러스 활성 효능을 가지는 펩티드 및 이를 포함하는 조성물
WO2018174668A2 (ko) 인슐린 수용체와의 결합력이 감소된 인슐린 아날로그의 결합체 및 이의 용도
WO2017116207A1 (ko) Fgf21 아날로그, fgf21 결합체, 및 이의 용도
WO2019066570A1 (ko) 지속형 단쇄 인슐린 아날로그 및 이의 결합체
WO2023085882A1 (ko) 코로나바이러스 감염성 질환의 치료 또는 예방을 위한 인터루킨-7 융합단백질의 투여 요법
WO2021145552A1 (ko) 글루카곤, glp-1 및 gip 수용체 모두에 활성을 갖는 삼중 활성체의 지속형 결합체의 폐질환의 치료 용도
WO2016200189A1 (ko) 광견병 바이러스 g 단백질의 에피토프 및 이에 특이적으로 결합하는 광견병 바이러스 중화 결합 분자
WO2022119380A1 (ko) 신규한 ace2 변이체 및 그의 이용
WO2022080986A1 (ko) Glp-1/gip 이중작용제, 이의 지속형 결합체, 및 이를 포함하는 약학적 조성물
WO2022015115A1 (ko) 3중 작용성 지속형 결합체 또는 3중 작용제를 포함하는 조합물의 치료학적 용도
WO2022019665A1 (ko) 면역 치료제용 펩타이드
WO2022035200A1 (ko) Il-12 및 항-cd20 항체를 포함하는 융합단백질 및 이의 용도
WO2021215801A1 (ko) 글루카곤, glp-1 및 gip 수용체 모두에 활성을 갖는 삼중 활성체 또는 이의 결합체를 포함하는 고지혈증 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 예방 또는 치료 방법
WO2021133087A1 (ko) Glp-2 또는 이의 결합체를 포함하는 골 대사성 질환에 대한 예방 또는 치료용 약학적 조성물
WO2020214013A1 (ko) 글루카곤, glp-1 및 gip 수용체 모두에 활성을 갖는 삼중 활성체 또는 이의 결합체의 고지혈증에 대한 치료적 용도
WO2020162696A1 (ko) 암 치료를 위한 t 세포의 활성화 방법
WO2020138868A1 (ko) 타입 1 인터페론 중화 fc-융합 단백질 및 이의 용도

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 22893301

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1