CN108623659B - 一种氨基酸全部选用d型氨基酸的抗菌肽合成方法 - Google Patents

一种氨基酸全部选用d型氨基酸的抗菌肽合成方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108623659B
CN108623659B CN201810221262.9A CN201810221262A CN108623659B CN 108623659 B CN108623659 B CN 108623659B CN 201810221262 A CN201810221262 A CN 201810221262A CN 108623659 B CN108623659 B CN 108623659B
Authority
CN
China
Prior art keywords
amino acids
white solid
solid powder
antibacterial peptide
solution
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810221262.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108623659A (zh
Inventor
于日磊
史娟
江涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ocean University of China
Original Assignee
Ocean University of China
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ocean University of China filed Critical Ocean University of China
Priority to CN201810221262.9A priority Critical patent/CN108623659B/zh
Publication of CN108623659A publication Critical patent/CN108623659A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108623659B publication Critical patent/CN108623659B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种氨基酸全部选用D型氨基酸的抗菌肽合成方法，将树脂用二氯甲烷、N，N‑二甲基甲酰胺进行活化，后遵循固相合成方法得到直链肽KWCFRVCYRGICYRRCR*；使用三氟乙酸、水、苯酚和三异丙基硅烷的混合溶液对树脂进行切割，旋蒸除去三氟乙酸，加入冰乙醚，有白色固体析出，使用冻干机对其冻干，得到固体粉末；构建其中的两对二硫键，3位，16位半胱氨酸选用的巯基保护基为三苯甲基，7位和12位的半胱氨酸选用的巯基保护基为乙酰胺甲基。本发明的有益效果是在保持原本抗菌活性的基础上，溶血活性有了显著降低。

Description

一种氨基酸全部选用D型氨基酸的抗菌肽合成方法
技术领域
本发明属于化学技术领域，涉及一种氨基酸全部选用D型氨基酸的抗菌肽合成方法。
背景技术
Tachyplesin I是一种具有广谱抗菌活性的抗菌肽，但由于其溶血性问题，它的研究和应用受限。已有研究表明，将D型氨基酸应用于多肽中，可提高其稳定性。因此，对原多肽进行这样的改造可能会增强其生物活性。
考虑到D性异亮氨酸价格昂贵，野生型多肽(KWCFRVCYRGICYRRCR*)序列中的异亮氨酸，被采用亮氨酸取代，因此新设计多肽序列为KWCFRVCYRGLCYRRCR*。
发明内容
本发明的目的在于提供一种氨基酸全部选用D型氨基酸的抗菌肽合成方法，本发明的有益效果是在保持原本抗菌活性的基础上，溶血活性有了显著降低。
本发明一种氨基酸全部选用D型氨基酸的抗菌肽合成方法所采用的技术方案是按照以下步骤进行：
步骤1：将树脂用二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺进行活化，后遵循固相合成方法得到直链肽KWCFRVCYRGLCYRRCR*；
步骤2：使用三氟乙酸、水、苯酚和三异丙基硅烷的混合溶液对树脂进行切割，旋蒸除去三氟乙酸，加入冰乙醚，有白色固体析出，离心后的固体加水溶解，使用冻干机对其冻干，得到固体粉末；
步骤3：构建其中的两对二硫键，3位，16位半胱氨酸选用的巯基保护基为三苯甲基，7位和12位的半胱氨酸选用的巯基保护基为乙酰胺甲基。
进一步，步骤1中用1：1的二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺对树脂进行活化。
进一步，步骤1中17个氨基酸全部采用D型氨基酸。
进一步，步骤2中三氟乙酸：水：苯酚：三异丙基硅烷＝88：5：5：2。
进一步，步骤3中对3位16位的二硫键进行构建：采用空气氧化法，取50mg的固体粉末，以0.2mg/mL的浓度溶解在150mL 0.2M碳酸氢铵水溶液中，于250mL茄形瓶，电磁搅拌，室温条件下反应48h，使用冻干机得到白色固体粉末。
进一步，步骤3中对7位12位的二硫键进行构建：称取10mg白色固体粉末溶于反应溶剂中，其中水：乙腈：TFA＝5：5：0.01，V/V，反应溶剂中加入3mL碘/乙腈溶液，使溶液保持发黄的状态；于50mL茄形瓶，室温搅拌反应30分钟后，加入抗坏血酸水溶液，混匀，使溶液呈无色澄清，冻干后得到最终产物白色固体粉末TPAD。
进一步，碘/乙腈溶液为5mg/mL，抗坏血酸水溶液5mg/mL。
附图说明
图1是本发明合成方法示意图；
图2是Tachyplesin I与TPAD的溶血活性示意图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。如图1所示，本发明合成方法如下：
1、D型Tachyplesin I(TPAD)的合成：选用Rink-Amide树脂，用1：1的二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺对树脂进行活化，后遵循固相合成方法得到直链肽KWCFRVCYRGICYRRCR*，其中的17个氨基酸全部采用D型氨基酸。
2、随后使用三氟乙酸(TFA)：水：苯酚：三异丙基硅烷＝88：5：5：2的20mL混合溶液对树脂进行切割，旋蒸除去三氟乙酸，加入冰乙醚，有白色固体析出，离心后的固体加水溶解，使用冻干机对其冻干，得到固体粉末。
3、然后开始构建其中的两对二硫键，3位，16位半胱氨酸选用的巯基保护基为三苯甲基(Trt)，而7位和12位的半胱氨酸选用的巯基保护基为乙酰胺甲基(Acm)。
(1)首先对3位16位的二硫键进行构建：Trt保护基在切割过程中被同时脱去，因此采用空气氧化法，取50mg的固体粉末，以0.2mg/mL的浓度溶入150mL0.2M碳酸氢铵水溶液，250mL茄形瓶，电磁搅拌，室温条件下反应48h，反应结束后进行HPLC分离分析，同时辅以ESI-MS检测，收集目标峰后，使用冻干机得到白色固体粉末。
(2)然后对7位12位的二硫键进行构建：称取10mg白色固体粉末溶10mL反应溶剂(水：乙腈：TFA＝5：5：0.01，V/V)中，加入3mL碘/乙腈溶液(5mg/mL)，使溶液保持发黄的状态；50mL茄形瓶，室温搅拌反应30分钟后，加入抗坏血酸水溶液(5mg/mL)，混匀，使溶液呈无色澄清，进行HPLC分离分析，同时辅以ESI-MS检测，收集目标峰，冻干后得到最终产物白色固体粉末TPAD 2mg。
本发明实施例积极效果：发现TPAD仍保持着与原Tachyplesin I相当的抗菌活性而其溶血活性相对于TachyplesinI有了明显下降。野生型Tachyplesin I的HC50(半数致溶血浓度)为159.2μg/ml时，而全D型氨基酸合成的Tachyplesin I的HC50(半数致溶血浓度)大于512μg/ml，因此该方法有助于降低该多肽的溶血性。图2是TachyplesinI与TPAD的溶血活性示意图。
表1(TPAD与Tachyplesin I的最小抑菌浓度)
Figure BDA0001600054450000031
以上所述仅是对本发明的较佳实施方式而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

Claims (3)

1.一种氨基酸全部选用D型氨基酸的抗菌肽合成方法，其特征在于按照以下步骤进行：
步骤1：将树脂用二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺进行活化，后遵循固相合成方法得到直链肽KWCFRVCYRGICYRRCR*；
步骤2：使用三氟乙酸、水、苯酚和三异丙基硅烷的混合溶液对树脂进行切割，旋蒸除去三氟乙酸，加入冰乙醚，有白色固体析出，使用冻干机对其冻干，得到固体粉末；
步骤3：构建其中的两对二硫键，首先对3位，16位的二硫键进行构建，然后对7位和12位的二硫键进行构建，3位，16位半胱氨酸选用的巯基保护基为三苯甲基，7位和12位的半胱氨酸选用的巯基保护基为乙酰胺甲基；
所述步骤1中用1：1的二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺对树脂进行活化；
所述步骤1中17个氨基酸全部采用D型氨基酸；
所述步骤3中对3位16位的二硫键进行构建：采用空气氧化法，取50mg的固体粉末，以0.2mg/mL的浓度溶解于150mL 0.2M碳酸氢铵水溶液，250mL茄形瓶，电磁搅拌，室温条件下反应48h，使用冻干机得到白色固体粉末；
所述步骤3中对7位12位的二硫键进行构建：称取10mg白色固体粉末溶10mL，反应溶剂水：乙腈：TFA＝5：5：0.01，V/V，反应溶剂中加入3mL碘/乙腈溶液，使溶液保持发黄的状态；50mL茄形瓶，室温搅拌反应30分钟后，加入抗坏血酸水溶液，混匀，使溶液呈无色澄清，冻干后得到最终产物白色固体粉末的抗菌肽。
2.按照权利要求1所述一种氨基酸全部选用D型氨基酸的抗菌肽合成方法，其特征在于：所述步骤2中三氟乙酸：水：苯酚：三异丙基硅烷＝88：5：5：2。
3.按照权利要求1所述一种氨基酸全部选用D型氨基酸的抗菌肽合成方法，其特征在于：所述碘/乙腈溶液为5mg/mL，抗坏血酸水溶液5mg/mL。
CN201810221262.9A 2018-03-17 2018-03-17 一种氨基酸全部选用d型氨基酸的抗菌肽合成方法 Active CN108623659B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810221262.9A CN108623659B (zh) 2018-03-17 2018-03-17 一种氨基酸全部选用d型氨基酸的抗菌肽合成方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810221262.9A CN108623659B (zh) 2018-03-17 2018-03-17 一种氨基酸全部选用d型氨基酸的抗菌肽合成方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108623659A CN108623659A (zh) 2018-10-09
CN108623659B true CN108623659B (zh) 2021-09-14

Family

ID=63706348

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810221262.9A Active CN108623659B (zh) 2018-03-17 2018-03-17 一种氨基酸全部选用d型氨基酸的抗菌肽合成方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108623659B (zh)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109206474A (zh) * 2018-11-27 2019-01-15 青岛海洋生物医药研究院 一种线性肽合成方法
WO2021073131A1 (zh) * 2019-10-16 2021-04-22 中国海洋大学 高效杀灭耐药病害菌的药物及在抑制耐药病害菌中的应用
CN111518187B (zh) * 2020-04-16 2022-05-10 中国农业科学院饲料研究所 抗菌肽dn6nh2及其应用
CN113621029B (zh) * 2021-09-27 2023-03-21 青岛科技大学 一组Tachyplesin I抗菌肽衍生物及其制备方法和应用

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA1337781C (en) * 1987-08-21 1995-12-19 Takanori Nakamura Polypeptide from horseshoe crab exhibiting affinity for lipopolysaccharide and method of preparation
NO921715L (no) * 1991-05-02 1992-11-03 Seikagaku Kogyo Co Ltd Nye polypeptider med affinitet for lipopolysakkarider og anvendelser derav
DE69418353T2 (de) * 1993-01-13 1999-10-28 Takeda Chemical Industries, Ltd. Cyclische Pentapeptide mit Beta-Turn und Gamma-Turn
CN1182135A (zh) * 1996-11-07 1998-05-20 中国农业科学院生物技术研究中心 一种抗真菌多肽鲎素的遗传工程合成方法
KR100319529B1 (ko) * 1998-06-09 2002-01-09 김일웅 펩타이드 항생물질의 대량 생산 방법 및 그에 유용한 유전자 구조물
CN101208099A (zh) * 2004-07-21 2008-06-25 Ambrx公司 利用非天然编码氨基酸的生物合成多肽
CN101429233B (zh) * 2008-10-06 2011-10-19 南开大学 聚乙二醇修饰抗菌肽及用途
CN102079777A (zh) * 2009-11-26 2011-06-01 浙江海洋学院 一种人工合成抗菌肽、制备方法及其应用
CN101914565B (zh) * 2010-07-27 2012-07-25 中国农业科学院饲料研究所 一种在毕赤酵母中有效的表达阳离子抗菌肽的方法
CN106518973A (zh) * 2016-11-09 2017-03-22 成都山信药业有限公司 一组Protegrin‑1抗菌肽衍生物及其制备方法与应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108623659A (zh) 2018-10-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108623659B (zh) 一种氨基酸全部选用d型氨基酸的抗菌肽合成方法
EP3398957B1 (en) Method for synthesizing etelcalcetide
CN101412752B (zh) 齐考诺肽的固相合成方法
EP3266792A1 (en) Peptide synthesis method
CN110835365B (zh) 一种普卡那肽的制备方法
CN108864254B (zh) 一种普利卡那肽的制备方法
CN106167514A (zh) 一种利那洛肽的合成和纯化方法
CN104450746A (zh) 一种向蛋白质定点引入非天然氨基酸的方法
CN104861045A (zh) 环肽化合物gg6f及其制备方法
CN108440652A (zh) 一种普卡那肽的固相合成方法
US10906933B2 (en) Coupled peptide chain for dissolving poorly soluble polypeptides and application thereof for separation and purification in liquid chromatography
CN106554391B (zh) 一种海洋生物肽Xen2174的合成方法
CN107383170A (zh) 一种普卡那肽的简易合成方法
CN107056894B (zh) 一种片段法固相合成醋酸加尼瑞克的方法
CN108079954B (zh) 一种功能化氧化石墨烯复合纳米材料及制备和应用
CN107033033A (zh) 一种Nα‑芴甲氧羰基‑间羟基酪氨酸的合成方法
CN103897029B (zh) 一种罗米地辛的制备方法
CN106749497B (zh) 套索多肽的化学全合成
CN106478778A (zh) 一种磷酸化多肽的固相合成方法
CN103467593B (zh) 一种胸腺法新的纯化方法
CN112830975B (zh) α-螺旋构象稳定的促凋亡双环多肽及制备方法与应用
CN105622424B (zh) 化合物及其制备方法和应用
CN114790226A (zh) 一种抗菌肽及其制备方法
CN110724179B (zh) 一种抗肿瘤多肽及其制备方法和用途
CN108640975A (zh) 一种n端乙酰化抗菌肽的合成方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant