CN103897029B - 一种罗米地辛的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药合成领域，公开了一种罗米地辛的制备方法。本发明基于固相合成的方法，首先让树脂与3‑羟基‑7‑巯基‑4‑庚烯酸上的羧基偶联，而后将罗米地辛上4个氨基酸按顺序依次偶联，随后脱除羟基、环化成二硫键、酰胺键，形成罗米地辛。本发明所述方法最终制备的产品纯度大于99%，总收率大于30%，并且该方法操作简单，合成周期短，成本低，利于作为罗米地辛的大规模生产。

Description

一种罗米地辛的制备方法

技术领域

本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种罗米地辛的制备方法。

背景技术

罗米地辛，英文名为Romidepsin，其化学名称为（1S,4S,7Z,10S,16E,21R）-7-乙叉基-4,21-二异丙基-2-氧杂-12,13-二硫-5,8,20,23-四氮杂双环［8,7,6］二十三碳-16-烯-3,6,9,19,22-五酮,分子式为C₂₄H₃₆N₄O₆S₂，是一种双环四肽，具有稳定的疏水结构，其结构中特有的二硫键是发挥活性的关键基团。2009年，罗米地辛获得美国食品药品管理局（FDA）批准，用于治疗皮肤T细胞淋巴瘤（CTCL）。其化学结构如下：

罗米地辛

罗米地辛为组蛋白去乙酰化酶（HDACs）抑制剂，透过肿瘤细胞膜进入细胞质，在细胞内二硫键被谷胱甘肽还原成巯基，与锌依赖的HDACs中的锌相结合而发挥抑制HDACs的作用，从而进一步诱导肿瘤细胞分化和凋亡。

目前，主要有两种方法来制备罗米地辛，一是生物发酵法，二是通过化学合成来制备。关于化学合成有多个文章报道，如1996年Knhn等人用全液相合成罗米地辛（J.AM.Chem.Soc，118:7237-7238），该文献中的方法采用缬氨酸甲酯为原料，偶联相应的氨基酸，然后氢氧化锂脱除甲酯，再在DEAD和PPh₃条件下成酯，最后采用碘氧化合成二硫键，共经过14步反应合成罗米地辛醋酸盐（在临床应用中，罗米地辛本身不太稳定，需要制成罗米地辛醋酸盐）。但是，这种方法步骤繁琐，不够简便，更为重要的是其液相总收率仅在18%左右，这些问题一直是影响罗米地辛生产效率的主要因素。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种罗米地辛的制备方法，使得本发明所述方法能够提高其总收率，同时减少制备步骤。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种罗米地辛的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、在活化剂的作用下，树脂与3-羟基-7-（R）巯基-4-庚烯酸上的羧基偶联得到式1化合物；

步骤2、Fmoc-L-Val-OH与式1化合物上的羟基偶联，脱Fmoc保护基后，依次逐个将Fmoc-L-Thr-OH、Fmoc-D-Cys（R）-OH、Fmoc-D-Val-OH进行多肽链延伸偶联，得到式2化合物；

步骤3、式2化合物脱除Fmoc保护基以及L-Thr残基侧链上的羟基得到式3化合物；

步骤4、式3化合物通过碘氧化法环化形成二硫键得到式4化合物；

步骤5、式4化合物裂解脱除树脂得到式5化合物；

步骤6、式5化合物上的羧基和D-Val残基的N端环化形成酰胺键得到罗米地辛；

式1化合物

式2化合物

式3化合物

式4化合物 式5化合物

本发明所述各保护基是在涉及氨基酸合成领域常用的保护氨基酸主链以及侧链上氨基、羧基、巯基等干扰合成的基团的保护基团，防止氨基、羧基、巯基等在制备目标产物过程中发生反应，生成杂质，对于本发明中需要保护侧链的氨基酸来说，本领域技术人员公知其侧链结构以及知晓采用常用保护基来保护氨基酸侧链上的氨基、羧基、巯基等基团，其中，所述R为巯基保护基，所述Fmoc为氨基酸N端保护基，所述Resin为树脂。Fmoc-L-Val-OH是指在N端偶联有Fmoc保护基L-Val，Fmoc-L-Thr-OH是指在N端偶联有Fmoc保护基的L-Thr，Fmoc-D-Cys（R）-OH是指在N端偶联有Fmoc保护基、在侧链巯基处偶联有R保护基的D-Cys，Fmoc-D-Val-OH指在N端偶联有Fmoc保护基的D-Val，上述简式表示为本领域常用形式。

作为优选，所述巯基保护基为三苯甲基或乙酰胺基甲基，更优选为三苯基；作为优选，所述树脂为CTC Resin（CTC树脂）或Wang Resin（王树脂），更优选为CTC Resin，最优选为替代度为0.5mmol/g的CTC Resin。

本发明针对现有罗米地辛制备方法较为繁琐、收率较低的问题，基于固相合成的方法，首先让固相载体（即树脂）与3-羟基-7-巯基-4-庚烯酸上的羧基偶联，而后将罗米地辛上4个氨基酸按顺序依次偶联，随后脱除羟基、环化成二硫键、酰胺键，形成罗米地辛，明显的减少了合成步骤，而且收率提高至30%左右。

在本发明制备方法的步骤1中，作为优选，所述树脂、活化剂和3-羟基-7-（R）巯基-4-庚烯酸的摩尔比为1:6:3。

最为优选方案，步骤1为：

3-羟基-7-（R）巯基-4-庚烯酸溶解后加入DIPEA活化，然后和经洗涤、溶胀后的树脂进行偶联得到式1化合物。其中，本步骤用于溶解、洗涤和溶胀树脂的溶剂优选为DMF。

在本发明制备方法的步骤2中，所述多肽链延伸偶联是指在Fmoc-L-Val-OH与式1化合物偶联后，剩余氨基酸按照其在罗米地辛结构中的连接顺序逐个和前一个偶联的氨基酸发生缩合反应（主链氨基和羧基的缩合反应）进行偶联。在多肽链延伸偶联中，由于每个氨基酸N端都有保护基，因此需要先脱除N端保护基再偶联，这对本领域技术人员来说是公知常识，本发明优选用DBLK脱除N端保护基。

作为优选方案，步骤2为：

Fmoc-L-Val-OH溶解后加入偶联剂和DMAP，然后和式1化合物偶联，用DBLK脱除Fmoc保护基，接着重复上述加入偶联剂和DMAP、加入氨基酸以及脱除Fmoc保护基的步骤，依次逐个完成Fmoc-L-Thr-OH、Fmoc-D-Cys（R）-OH、Fmoc-D-Val-OH的多肽链延伸的偶联，得到式2化合物。

其中，所述偶联剂优选为HOBT/DIC双体系偶联剂、PyBOP/HOBt双体系偶联剂或TBTU/HOBt双体系偶联剂，最优选为PyBOP/HOBt双体系偶联剂。对于这些多体系的偶联剂，其各组分的配比在本领域中是一定的且是公知的，在此不再赘述。步骤2中所述用于溶解的溶剂优选为DMF、DCM、NMP、DMSO中的一种和两种，更优选为采用体积比DMF:NMP为1:1的混合溶剂。作为优选，所述偶联剂的用量以步骤1中树脂用量为参照，两者的摩尔比偶联剂：树脂为3:1，所述DMAP的用量以步骤1中树脂用量为参照，两者的摩尔比DMAP：树脂为0.2:1。

在本发明制备方法的步骤3中，作为优选方案，步骤3为：

向式2化合物中加入三乙胺和溶解后的DMAP活化，然后滴加甲基磺酰氯反应1-5小时，接着再加入溶解后的DABCO反应1-5小时脱除整个羟基，最后用DBLK脱除Fmoc保护基得到式3化合物。

在步骤3优选方案中，所述反应时间均优选为2小时；所述反应的温度优选为-5℃至5℃，更优选为0℃；所述用于溶解的溶剂优选为DMF、DCM或THF；所述三乙胺的用量以步骤1中树脂用量为参照，两者的摩尔比三乙胺：树脂优选为2:1，所述甲基磺酰氯的用量以步骤1中树脂用量为参照，两者的摩尔比甲基磺酰氯：树脂优选为1.5:1，所述DMAP的用量以步骤1中树脂用量为参照，两者的摩尔比DMAP：树脂优选为0.2:1，所述DABCO的用量以步骤1中树脂用量为参照，两者的摩尔比DABCO：树脂优选为2:1。

在本发明制备方法的步骤4中，作为优选方案，步骤4为：

碘溶解后加入式3化合物反应1-4小时，然后经洗涤、收缩树脂、干燥后得到式4化合物。

在步骤4优选方案中，所述反应时间优选为2小时；所述用于溶解的溶剂优选为DMF或MeOH；所述碘的用量以步骤1中树脂用量为参照，两者的摩尔比优选为4-10:1，更优选为6:1。

在本发明制备方法的步骤5中，作为优选方案，步骤5为：

向式4化合物中加入裂解试剂反应2小时，过滤，滤液用乙醚沉淀，收集沉淀即为式5化合物，所述裂解试剂为体积比TFA:H₂O为95:5的混合裂解液、体积比TFA:EDT:PHOH:H₂O为95:5:3:2的混合裂解液或体积比TFA:EDT:TIS:PHOH:H₂O为80:5:5:5:5的混合裂解液。

在本发明制备方法的步骤6中，作为优选方案，步骤6为：

式5化合物溶解后加入偶联剂和DIPEA反应2-5小时得到罗米地辛。

其中，所述偶联剂优选为HOBT/DIC双体系偶联剂、PyBOP/HOBt双体系偶联剂或TBTU/HOBt双体系偶联剂，最优选为PyBOP/HOBt双体系偶联剂。对于这些多体系的偶联剂，其各组分的配比在本领域中是一定的且是公知的，在此不再赘述。步骤6中所述用于溶解的溶剂优选为DMF；所述反应时间优选为4小时。作为优选，所述偶联剂的用量以步骤1中树脂用量为参照，两者的摩尔比偶联剂：树脂为3:1，所述DIPEA的用量以步骤1中树脂用量为参照，两者的摩尔比DIPEA：树脂为6:1。

此外，根据罗米地辛的实际临床应用，其为了稳定需要制备成醋酸盐，故本发明在步骤6之后还包括纯化罗米地辛并制成罗米地辛醋酸盐工序，具体为：

将步骤6得到的罗米地辛加水稀释，然后通过RP-HPLC系统纯化获得罗米地辛纯品，接着以乙腈-醋酸溶液为流动相继续用RP-HPLC系统转盐，收集目的峰馏分进行浓缩、冻干即为罗米地辛醋酸盐。

其中，所述醋酸溶液的质量百分含量优选为0.2%。

按照本发明所述制备方法制备的罗米地辛醋酸盐和现有技术相比（即背景技术中提到的制备工艺，其同样是制成罗米地辛醋酸盐），收率由18%提高至30%左右，而且大大减少了制备工序。

由以上技术方案可知，提供了一种基于固相合成原理的罗米地辛制备方法，本发明所述方法最终制备的的产品纯度大于99%，总收率大于30%，并且该方法操作简单，合成周期短，成本低，利于作为罗米地辛的大规模生产。

具体实施方式

本发明公开了一种罗米地辛的制备方法，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的的化合物和制备方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

在本发明具体实施方式中，所有偶联由保护基的氨基酸均可通过市售获得，本发明中的保护氨基酸购自于吉尔生化有限公司，所用CTC Resin（CTC树脂）和Wang Resin（王树脂）脂购自于天津南开和成有限公司，申请文件中所用英文缩写对应的中文含义见表1。

表1英文缩写释义

下面结合实施例，进一步阐述本发明。

实施例1：式1化合物的制备

称取替代度为0.5mmol/g的CTC Resin2g（合成规模1mmol），加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，称取1.26g3-羟基-7-（三苯甲基）巯基-4-庚烯酸用DMF溶解，冰水浴下加入0.6mL DIPEA活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时反应结束，用DMF洗涤6次获得式1化合物。

实施例2：式2化合物的制备

将1.01gFmoc-Val-OH、0.38g HOBt、0.03g DMAP溶于体积比为1:1的DMF和NMP混合溶液，冰水浴下加入0.3mL DIC活化后，加入到实施例1中固相反应柱和式1化合物反应，室温反应2h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。然后用DBLK脱除Fmoc保护基并用DMF洗涤6次。

接着重复上述加入偶联剂和DMAP、加入氨基酸以及脱除Fmoc保护基的步骤，依次逐个完成Fmoc-L-Thr-OH、Fmoc-D-Cys（Trt）-OH、Fmoc-D-Val-OH的多肽链延伸的偶联，得到式2化合物。

实施例3：式3化合物的制备

称取0.03g DMAP用无水二氯甲烷溶解后，加入0.6ml三乙胺，将混合液温度降到0℃后，加入到实施例2反应柱中，并且滴加0.3ml甲基磺酰氯，反应2小时，反应温度保持在0℃，反应结束后用DMF洗涤6次，再加入2.2gDABCO和50mml DCM，反应2小时后反应结束后用DMF洗涤6次，得到式3化合物。

实施例4：式3化合物的制备

称取0.03g DMAP用无水二氯甲烷溶解后，加入0.6ml三乙胺，将混合液温度降到5℃后，加入实施例2反应柱中，并且滴加0.3ml甲基磺酰氯，反应1小时，反应温度保持在5℃，反应结束后用DMF洗涤6次，再加入2.2gDABCO和50mml DCM，反应2小时后反应结束后用DMF洗涤6次，得到式3化合物。

实施例5：式3化合物的制备

称取0.03g DMAP用无水二氯甲烷溶解后，加入0.6ml三乙胺，将混合液温度降到-5℃后，加入实施例2反应柱中，并且滴加0.3ml甲基磺酰氯，反应5小时，反应温度保持在5℃，反应结束后用DMF洗涤6次，再加入2.2gDABCO和50mml DCM，反应2小时后反应结束后用DMF洗涤6次，得到式3化合物。

实施例6：式4化合物的制备

称取1.5g碘用DMF溶解后，加入到实施例3反应柱中和式3化合物反应2小时，反应结束后用DMF洗涤6次，再用甲醇收缩3次，真空干燥得到2.4g式4化合物。

实施例7：式4化合物的制备

称取1.5g碘用DMF溶解后，加入到实施例4反应柱中和式3化合物反应2小时，反应结束后用DMF洗涤6次，再用甲醇收缩3次，真空干燥得到2.4g式4化合物。

实施例8：式4化合物的制备

称取1.5g碘用DMF溶解后，加入到实施例5反应柱中和式3化合物反应2小时，反应结束后用DMF洗涤6次，再用甲醇收缩3次，真空干燥得到2.4g式4化合物。

实施例9：式5化合物的制备

将实施例6中的2.4g式4化合物加入到50ml烧瓶中，配置裂解试剂（体积比，TFA:H₂O=95:5），将裂解试剂倒入烧瓶中，室温反应2小时。反应结束，过滤收集滤液。滴加至240ml乙醚试剂中，离心，无水乙醚洗涤沉淀，并且真空干燥沉淀，得到0.52g式5化合物，纯度72.52%。

实施例10：式5化合物的制备

将实施例7中的2.4g式4化合物脂加入到50ml烧瓶中，配置裂解试剂（体积比，TFA:EDT:PHOH:H₂O=95:5:3:2），将裂解试剂倒入烧瓶中，室温反应2小时。反应结束，过滤收集滤液。滴加至240ml乙醚试剂中，离心，无水乙醚洗涤沉淀，并且真空干燥沉淀，得到0.50g式5化合物，纯度65.42%。

实施例11：式5化合物的制备

将实施例8中的2.4g式4化合物加入到50ml烧瓶中，配置裂解试剂（体积比，TFA:EDT:TIS:PHOH:H₂O=80:5:5:5:5），将裂解试剂倒入烧瓶中，室温反应2小时。反应结束，过滤收集滤液。滴加至240ml乙醚试剂中，离心，无水乙醚洗涤沉淀，并且真空干燥沉淀，得到0.48g式5化合物，纯度61.48%。

实施例12：罗米地辛粗品的制备

将实施例9中的0.52g式5化合物用DMF溶剂后加入0.38g HOBt和1.56gPyBOP，往反应瓶中滴加0.3ml DIPEA，反应4小时，得到粗品罗米地辛，纯度68.13%。

实施例13：纯化粗品罗米地辛制备罗米地辛醋酸盐

将实施例12中的粗品罗米地辛加水稀释10倍，采用RP-HPLC系统，波长230nm，色谱柱为50×250mm反相C18柱，规0.2%TFA/乙腈流动相纯化，收集目的峰馏分，得到纯度大于98.5%的精品罗米地辛。将精品罗米地辛溶液采用RP-HPLC系统，色谱柱为50×250mm反相C18柱，0.2%醋酸溶液/乙腈流动相转盐，收集目的峰馏分，旋转蒸发浓缩，冻干得到罗米地辛醋酸盐0.17g，HPLC纯度98.5%，总收率31.5%。

实施例14：式1化合物的制备

称取替代度为0.5mmol/g的CTC Resin2g（合成规模1mmol），加入到固相反应柱中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，称取1.15g3-羟基-7-（乙酰胺基甲基）巯基-4-庚烯酸用DMF溶解，冰水浴下加入0.6mLDIPEA活化后，加入上述装有树脂的反应柱中，反应2小时反应结束，用DMF洗涤6次获得式1化合物。

实施例15：式2化合物的制备

将1.01g Fmoc-Val-OH，0.38g HOBt，0.03gDMAP、溶于体积比为1:1的DMF和NMP混合溶液，冰水浴下加入0.3mL DIC活化后,加入实施例14中固相反应柱和式1化合物反应，室温反应2h（反应终点以茚三酮法检测为准，如果树脂无色透明，则反应完全，树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应1h）。然后用DBLK脱除Fmoc保护基并用DMF洗涤6次。

接着重复上述加入偶联剂和DMAP、加入氨基酸以及脱除Fmoc保护基的步骤，依次逐个完成Fmoc-L-Thr-OH、Fmoc-D-Cys（Acm）-OH、Fmoc-D-Val-OH的多肽链延伸的偶联，得到式2化合物。

实施例16：式3化合物的制备

称取0.03g DMAP用无水二氯甲烷溶解后，加入0.6ml三乙胺，将混合液温度降到0℃后，加入实施例15反应柱中，并且滴加0.3ml甲基磺酰氯，反应2小时，反应温度保持在0℃，反应结束后用DMF洗涤6次，再加入2.2gDABCO和50mml DCM，反应2小时后反应结束后用DMF洗涤6次，得到式3化合物。

实施例17：式4化合物的制备

称取1.5g碘用DMF溶解后，加入到实施例16反应柱中和式3化合物反应2小时，反应结束后用DMF洗涤6次，再用甲醇收缩3次，真空干燥得到2.3g式4化合物。

实施例18：式5化合物的制备

将实施例17中的2.3g式4化合物加入到50ml烧瓶中，配置裂解试剂（体积比，TFA:H2O=95:5），将裂解试剂倒入烧瓶中，室温反应2小时。反应结束，过滤树脂，收集滤液。滴加至240ml乙醚试剂中，离心，无水乙醚洗涤沉淀，并且真空干燥沉淀，得到0.50g式5化合物，纯度70.45%。

实施例19：罗米地辛粗品的制备

将实施例18中的0.50g式5化合物用DMF溶剂后加入0.38g HOBt和1.56g PyBOP，往反应瓶中滴加0.3ml DIPEA，反应4小时，得到粗品罗米地辛，纯度65.83%。

实施例20：纯化粗品罗米地辛制备罗米地辛醋酸盐

将实施例19中的粗品罗米地辛加水稀释10倍，采用RP-HPLC系统，波长230nm，色谱柱为50×250mm反相C18柱，规0.2%TFA/乙腈流动相纯化，收集目的峰馏分，得到纯度大于98.5%的精品罗米地辛。将精品罗米地辛溶液采用RP-HPLC系统，色谱柱为50×250mm反相C18柱，0.2%醋酸溶液/乙腈流动相转盐，收集目的峰馏分，旋转蒸发浓缩，冻干得到罗米地辛醋酸盐精肽0.16g，HPLC纯度98.5％，总收率30.0%。

实施例21：罗米地辛粗品的制备

将实施例18中的0.50g式5化合物用DMF溶剂后加入0.38g HOBt和1.56g PyBOP往反应瓶中滴加0.3ml DIPEA,反应4小时，得到粗品罗米地辛，纯度67.53%。

实施例22：纯化粗品罗米地辛制备罗米地辛醋酸盐

将实施例21中的粗品罗米地辛加水稀释10倍，采用RP-HPLC系统，波长230nm，色谱柱为50×250mm反相C18柱，规0.2%TFA/乙腈流动相纯化，收集目的峰馏分，得到纯度大于98.5%的精品罗米地辛。将精品罗米地辛溶液采RP-HPLC系统，色谱柱为50×250mm反相C18柱，0.2%醋酸溶液/乙腈流动相转盐，收集目的峰馏分，旋转蒸发浓缩，冻干得到罗米地辛醋酸盐精肽0.18g，HPLC纯度98.5％，总收率33.7%。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (11)

1.一种罗米地辛的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、在活化剂的作用下，树脂与3-羟基-7-(R)巯基-4-庚烯酸上的羧基偶联得到式1化合物；

步骤2、Fmoc-L-Val-OH与式1化合物上的羟基偶联，脱Fmoc保护基后，依次逐个将Fmoc-L-Thr-OH、Fmoc-D-Cys(R)-OH、Fmoc-D-Val-OH进行多肽链延伸偶联，得到式2化合物；

步骤3、式2化合物脱除Fmoc保护基以及L-Thr残基侧链上的羟基得到式3化合物；

步骤4、式3化合物通过碘氧化法环化形成二硫键得到式4化合物；

步骤5、式4化合物裂解脱除树脂得到式5化合物；

步骤6、式5化合物上的羧基和D-Val残基的N端环化形成酰胺键得到罗米地辛；

其中，所述R为巯基保护基，所述Fmoc为氨基酸N端保护基，所述Resin为树脂。

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述巯基保护基为三苯甲基或乙酰胺基甲基。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述树脂为CTC Resin或Wang Resin。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤1具体为：

3-羟基-7-(R)巯基-4-庚烯酸溶解后加入DIPEA活化，然后和经洗涤、溶胀后的树脂进行偶联得到式1化合物。

5.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤2具体为：

Fmoc-L-Val-OH溶解后加入偶联剂和DMAP，然后和式1化合物偶联，用DBLK脱除Fmoc保护基，接着重复上述加入偶联剂和DMAP、加入氨基酸以及脱除Fmoc保护基的步骤，依次逐个完成Fmoc-L-Thr-OH、Fmoc-D-Cys(R)-OH、Fmoc-D-Val-OH的多肽链延伸的偶联，得到式2化合物。

6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3具体为：

向式2化合物中加入三乙胺和溶解后的DMAP活化，然后滴加甲基磺酰氯反应1-5小时，接着再加入溶解后的DABCO反应1-5小时脱除整个羟基，最后用DBLK脱除Fmoc保护基得到式3化合物。

7.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤4具体为：

碘溶解后加入式3化合物反应1-4小时，然后经洗涤、收缩树脂、干燥后得到式4化合物。

8.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤5具体为：

向式4化合物中加入裂解试剂反应2小时，过滤，滤液用乙醚沉淀，收集沉淀即为式5化合物，所述裂解试剂为体积比TFA:H₂O为95:5的混合裂解液、体积比TFA:EDT:PHOH:H₂O为95:5:3:2的混合裂解液或体积比TFA:EDT:TIS:PHOH:H₂O为80:5:5:5:5的混合裂解液。

9.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤6具体为：

式5化合物溶解后加入偶联剂和DIPEA反应2-5小时得到罗米地辛。

10.根据权利要求5或9所述制备方法，其特征在于，所述偶联剂为HOBT/DIC双体系偶联剂、PyBOP/HOBt双体系偶联剂或TBTU/HOBt双体系偶联剂。

11.一种罗米地辛醋酸盐的制备方法，其特征在于，具体为：

步骤1、在活化剂的作用下，树脂与3-羟基-7-(R)巯基-4-庚烯酸上的羧基偶联得到式1化合物；

步骤2、Fmoc-L-Val-OH与式1化合物上的羟基偶联，脱Fmoc保护基后，依次逐个将Fmoc-L-Thr-OH、Fmoc-D-Cys(R)-OH、Fmoc-D-Val-OH进行多肽链延伸偶联，得到式2化合物；

步骤3、式2化合物脱除Fmoc保护基以及L-Thr残基侧链上的羟基得到式3化合物；

步骤4、式3化合物通过碘氧化法环化形成二硫键得到式4化合物；

步骤5、式4化合物裂解脱除树脂得到式5化合物；

步骤6、式5化合物上的羧基和D-Val残基的N端环化形成酰胺键得到罗米地辛；

步骤7、将步骤6得到的罗米地辛加水稀释，然后通过RP-HPLC系统纯化获得罗米地辛纯品，接着以乙腈-醋酸溶液为流动相继续用RP-HPLC系统转盐，收集目的峰馏分进行浓缩、冻干即为罗米地辛醋酸盐；

其中，所述R为巯基保护基，所述Fmoc为氨基酸N端保护基，所述Resin为树脂。