CN108640975A - 一种n端乙酰化抗菌肽的合成方法 - Google Patents

一种n端乙酰化抗菌肽的合成方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108640975A
CN108640975A CN201810221263.3A CN201810221263A CN108640975A CN 108640975 A CN108640975 A CN 108640975A CN 201810221263 A CN201810221263 A CN 201810221263A CN 108640975 A CN108640975 A CN 108640975A
Authority
CN
China
Prior art keywords
resin
antibacterial peptide
terminal acetylation
synthetic method
trifluoroacetic acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810221263.3A
Other languages
English (en)
Inventor
于日磊
史娟
江涛
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ocean University of China
Original Assignee
Ocean University of China
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ocean University of China filed Critical Ocean University of China
Priority to CN201810221263.3A priority Critical patent/CN108640975A/zh
Publication of CN108640975A publication Critical patent/CN108640975A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明公开了一种N端乙酰化抗菌肽的合成方法，用二氯甲烷、N，N‑二甲基甲酰胺对树脂进行活化；采用固相合成方法得到直链肽；将树脂在含乙酸酐和N,N'‑二异丙基乙胺的N，N‑二甲基甲酰胺中振摇，完成乙酰化反应；随后使用三氟乙酸：水：苯酚：三异丙基硅烷的混合溶液对树脂进行切割，过滤得到的滤液旋蒸除去三氟乙酸，加入冰乙醚，有白色固体析出，使用冻干机对其冻干，得到固体粉末；构建其中的两对二硫键，3位，16位半胱氨酸选用的巯基保护基为三苯甲基，7位和12位的半胱氨酸选用的巯基保护基为乙酰胺甲基。本发明的有益效果是在保持原本抗菌活性的基础上，溶血活性有了明显降低。

Description

一种N端乙酰化抗菌肽的合成方法
技术领域
本发明属于药物技术领域，涉及一种N端乙酰化抗菌肽的合成方法。
背景技术
Tachyplesin I是一种具有广谱抗菌活性的抗菌肽，但由于其溶血性问题，它的应用有限。已知N端乙酰化作用可以减少多肽的整体电荷，可以增加多肽的稳定性，末端封闭使其与母本蛋白更为接近，因而这样的修饰有增强多肽的生物学活性的可能。
发明内容
本发明的目的在于提供一种N端乙酰化抗菌肽的合成方法，本发明的有益效果是在保持原本抗菌活性的基础上，溶血活性有了明显降低。
本发明所采用的技术方案是按照以下步骤进行：
步骤1：用二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺对树脂进行活化；
步骤2：采用固相合成方法得到直链肽；
步骤3：将树脂在含乙酸酐和N,N'-二异丙基乙胺的N，N-二甲基甲酰胺中振摇，完成乙酰化反应；
步骤4：随后使用三氟乙酸：水：苯酚：三异丙基硅烷的混合溶液对树脂进行切割，过滤得到的滤液旋蒸除去三氟乙酸，加入冰乙醚，有白色固体析出，使用冻干机对其冻干，得到固体粉末；
步骤5：构建其中的两对二硫键，3位，16位半胱氨酸选用的巯基保护基为三苯甲基，7位和12位的半胱氨酸选用的巯基保护基为乙酰胺甲基。
进一步，步骤1中用1：1的二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺对Rink-Amide树脂进行活化。
进一步，步骤3中将树脂在含10％乙酸酐和6％的N,N'-二异丙基乙胺的N，N-二甲基甲酰胺中振摇30min。
进一步，步骤4中使用三氟乙酸：水：苯酚：三异丙基硅烷，比例为88：5：5：2的混合溶液对树脂进行切割。
进一步，步骤5中首先对3位16位的二硫键进行构建：三苯甲基保护基在切割过程中被同时脱去，因此采用空气氧化，取50mg的固体粉末，以0.2mg/mL的浓度溶入150mL 0.2M碳酸氢铵水溶液，电磁搅拌，室温条件下反应48h，反应结束后进行HPLC分离分析，对目标产物对应峰进行收集，同时辅以ESI-MS检测，使用冻干机得到白色固体粉末；然后对7位12位的二硫键进行构建：称取10mg白色固体粉末溶10mL反应溶剂中，其中水：乙腈：TFA＝5：5：0.01，V/V，加入3mL碘/乙腈溶液5mg/mL，使溶液保持发黄的状态；搅拌反应30分钟后，加入抗坏血酸水溶液5mg/mL，混匀，使溶液呈无色澄清，进行HPLC分离分析，对目标产物对应峰进行收集，同时辅以ESI-MS检测，冻干后得到最终产物白色固体粉末2mg。
附图说明
图1是本发明合成方法示意图；
图2中A为TPAC终产物的ESI-MS质谱图，B为Tachyplesin I终产物的ESI-MS质谱图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。
N端乙酰化抗菌肽Tachyplesin I(TPAC)的合成：选用Rink-Amide树脂，用1：1的二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺对树脂进行活化，后遵循固相合成方法得到直链肽KWCFRVCYRGICYRRCR*，然后将树脂在含10％乙酸酐和6％的N,N'-二异丙基乙胺(DIPEA)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中振摇30min，完成乙酰化反应，随后使用三氟乙酸：水：苯酚：三异丙基硅烷＝88：5：5：2的混合溶液对树脂进行切割，过滤后得到滤液，随后旋蒸除去三氟乙酸，加入冰乙醚，有白色固体析出，使用冻干机对其冻干，得到固体粉末。然后构建其中的两对二硫键，3位，16位半胱氨酸选用的巯基保护基为三苯甲基(Trt)，而7位和12位的半胱氨酸选用的巯基保护基为乙酰胺甲基(Acm)。首先对3位7位的二硫键进行构建：Trt保护基在切割过程中被同时脱去，因此采用空气氧化，取50mg的固体粉末，以0.2mg/mL的浓度溶入150mL 0.2M碳酸氢铵水溶液，电磁搅拌，室温条件下反应48h，反应结束后进行HPLC(高效液相色谱)分离分析，同时辅以ESI-MS(电喷雾离子化质谱)检测，收集所得目标峰，使用冻干机得到白色固体粉末。然后对12位16位的二硫键进行构建：称取10mg白色固体粉末(3位7位二硫键构建得到)溶于10mL反应溶剂(水：乙腈：TFA(三氟乙酸)＝5：5：0.01，V/V)中，加入3mL碘/乙腈溶液(5mg/mL)，使溶液保持发黄的状态；搅拌反应30分钟后，加入抗坏血酸水溶液(5mg/mL)，混匀，使溶液呈无色澄清，进行HPLC分离分析，同时辅以ESI-MS检测，收集得到的目标峰进行冻干，冻干后得到最终产物白色固体粉末2mg。
本发明的合成方法使N端乙酰化的Tachyplesin I的溶血活性相对于TachyplesinI有了明显下降，其中，Tachyplesin I的半数致溶血浓度(HC50)为159.2μg/mL，而N端乙酰化后的产物其半数致溶血浓度为229.1μg/mL。
图2中A为TPAC终产物的ESI-MS质谱图，B为Tachyplesin I终产物的ESI-MS质谱图。
以上所述仅是对本发明的较佳实施方式而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

Claims (5)

1.一种N端乙酰化抗菌肽的合成方法，其特征在于按照以下步骤进行：
步骤1：用二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺对树脂进行活化；
步骤2：采用固相合成方法得到直链肽；
步骤3：将树脂在含乙酸酐和N,N'-二异丙基乙胺的N，N-二甲基甲酰胺中振摇，完成乙酰化反应；
步骤4：随后使用三氟乙酸：水：苯酚：三异丙基硅烷的混合溶液对树脂进行切割，过滤得到的滤液旋蒸除去三氟乙酸，加入冰乙醚，有白色固体析出，使用冻干机对其冻干，得到固体粉末；
步骤5：构建其中的两对二硫键，3位，16位半胱氨酸选用的巯基保护基为三苯甲基，7位和12位的半胱氨酸选用的巯基保护基为乙酰胺甲基。
2.按照权利要求1所述一种N端乙酰化抗菌肽的合成方法，其特征在于：所述步骤1中用1：1的二氯甲烷、N，N-二甲基甲酰胺对Rink-Amide树脂进行活化。
3.按照权利要求1所述一种N端乙酰化抗菌肽的合成方法，其特征在于：所述步骤3中将树脂在含10％乙酸酐和6％的N,N'-二异丙基乙胺的N，N-二甲基甲酰胺中振摇30min。
4.按照权利要求1所述一种N端乙酰化抗菌肽的合成方法，其特征在于：所述步骤4中使用三氟乙酸：水：苯酚：三异丙基硅烷，比例为88：5：5：2的混合溶液对树脂进行切割。
5.按照权利要求1所述一种N端乙酰化抗菌肽的合成方法，其特征在于：所述步骤5中首先对3位16位的二硫键进行构建：三苯甲基保护基在切割过程中被同时脱去，因此采用空气氧化，取50mg的固体粉末，以0.2mg/mL的浓度溶入150mL 0.2M碳酸氢铵水溶液，电磁搅拌，室温条件下反应48h，反应结束后进行HPLC分离分析，对目标产物对应峰进行收集，同时辅以ESI-MS检测，使用冻干机得到白色固体粉末；然后对7位12位的二硫键进行构建：称取10mg白色固体粉末溶10mL反应溶剂中，其中水：乙腈：TFA＝5：5：0.01，V/V，加入3mL碘/乙腈溶液5mg/mL，使溶液保持发黄的状态；搅拌反应30分钟后，加入抗坏血酸水溶液5mg/mL，混匀，使溶液呈无色澄清，进行HPLC分离分析，对目标产物对应峰进行收集，同时辅以ESI-MS检测，冻干后得到最终产物白色固体粉末2mg。
CN201810221263.3A 2018-03-17 2018-03-17 一种n端乙酰化抗菌肽的合成方法 Pending CN108640975A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810221263.3A CN108640975A (zh) 2018-03-17 2018-03-17 一种n端乙酰化抗菌肽的合成方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810221263.3A CN108640975A (zh) 2018-03-17 2018-03-17 一种n端乙酰化抗菌肽的合成方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108640975A true CN108640975A (zh) 2018-10-12

Family

ID=63744264

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810221263.3A Pending CN108640975A (zh) 2018-03-17 2018-03-17 一种n端乙酰化抗菌肽的合成方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108640975A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109206474A (zh) * 2018-11-27 2019-01-15 青岛海洋生物医药研究院 一种线性肽合成方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102079777A (zh) * 2009-11-26 2011-06-01 浙江海洋学院 一种人工合成抗菌肽、制备方法及其应用
CN103880945A (zh) * 2013-12-28 2014-06-25 郑州大明药物科技有限公司 制备高纯度胸腺法新的方法
CN106243214A (zh) * 2016-08-29 2016-12-21 济南康和医药科技有限公司 一种美拉诺坦ⅰ的制备方法
CN106518973A (zh) * 2016-11-09 2017-03-22 成都山信药业有限公司 一组Protegrin‑1抗菌肽衍生物及其制备方法与应用
CN107434820A (zh) * 2017-08-07 2017-12-05 南京工业大学 一种维拉卡肽的合成方法
CN107638561A (zh) * 2017-08-04 2018-01-30 广东医科大学 一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物和保健品中的应用

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102079777A (zh) * 2009-11-26 2011-06-01 浙江海洋学院 一种人工合成抗菌肽、制备方法及其应用
CN103880945A (zh) * 2013-12-28 2014-06-25 郑州大明药物科技有限公司 制备高纯度胸腺法新的方法
CN106243214A (zh) * 2016-08-29 2016-12-21 济南康和医药科技有限公司 一种美拉诺坦ⅰ的制备方法
CN106518973A (zh) * 2016-11-09 2017-03-22 成都山信药业有限公司 一组Protegrin‑1抗菌肽衍生物及其制备方法与应用
CN107638561A (zh) * 2017-08-04 2018-01-30 广东医科大学 一种鲎素肽在制备防治肺纤维化药物和保健品中的应用
CN107434820A (zh) * 2017-08-07 2017-12-05 南京工业大学 一种维拉卡肽的合成方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALAN CUTHBERTSON ET AL: "Regioselective Formation, Using Orthogonal Cysteine Protection, of an α-Conotoxin Dimer Peptide Containing Four Disulfide Bonds", 《ORGANIC LETTERS》 *
D. V. KUZMIN ET AL: "Effect of N- and С-Terminal Modifications on Cytotoxic Properties of Antimicrobial Peptide Tachyplesin I", 《PHARMACOLOGY AND TOXICOLOGY》 *
HONG DING ET AL: "Effects of tachyplesin I on human U251 glioma stem cells", 《MOLECULAR MEDICINE REPORTS》 *
王良友等: "多肤合成中几种形成二硫键方法的介绍", 《有机化学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109206474A (zh) * 2018-11-27 2019-01-15 青岛海洋生物医药研究院 一种线性肽合成方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103613642B (zh) 一种六胜肽的液相分段合成方法
CN108623659B (zh) 一种氨基酸全部选用d型氨基酸的抗菌肽合成方法
CN106632609B (zh) 一种六胜肽的制备方法及其产品
CN106928320B (zh) 一种合成Etelcalcetide的方法
KR860000526B1 (ko) 아미노-기능이 부여된 아크릴 공중합체의 제조방법
CN108440654B (zh) 一种抗菌活性环六肽Thermoactinoamide A的合成方法
CN107573408A (zh) 一种高纯度亮丙瑞林的合成方法
CN104861042A (zh) 特异性微波合成制备醋酸西曲瑞克的方法
CN108440652A (zh) 一种普卡那肽的固相合成方法
CN108640975A (zh) 一种n端乙酰化抗菌肽的合成方法
CN103421079A (zh) 蛋白质的聚乙二醇化修饰方法
CN105111265A (zh) 一种使用“一锅法”标记修饰生物大分子的方法
CN103980357B (zh) 一种合成胸腺法新的方法
CN106929488A (zh) 一种具有生物活性的cox52‑69多肽的固相合成方法及其用途
CN110882357A (zh) 一种高纯度竹叶黄酮粉及其制备方法
CN110903352A (zh) 一种西曲瑞克的制备方法
CN103539885B (zh) 一种具有生物特异性识别的温敏性含糖聚合物的制备方法
CN105777863B (zh) 一种从咪唑类离子液体中分离多肽的方法
CN103897029A (zh) 一种罗米地辛的制备方法
CN106866744A (zh) 一种四价铂配合物氧化剂及其制备方法和应用
CN104109190B (zh) 一种制备单一多肽-Zn（Ⅱ）配合物的方法
CN106749497B (zh) 套索多肽的化学全合成
Abiko et al. Identification and synthesis of a tripeptide in ECUM fluid of an upemic patient
CN106008982B (zh) 一种硼酸硅胶前处理材料的制备方法
CN107857796A (zh) 一种三氟乙酰三肽‑2的合成方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20181012

RJ01 Rejection of invention patent application after publication