CN108572163A - 荧光图像分析装置、分析方法及预处理的评价方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种能够精确判断试样是阳性还是阴性的荧光图像分析装置、分析方法及预处理的评价方法。预处理单元20进行预处理来制备试样20a，其中预处理包括用荧光色素标记靶位点的步骤在内。荧光图像分析装置10测定试样20a并进行分析。荧光图像分析装置10包括用光照射试样20a的光源121~124、拍摄因光照而从试样20a产生的荧光的拍摄部件154、对拍摄部件154拍摄的荧光图像进行处理的处理部件11。处理部件11就试样20a所含复数个细胞的每一个分别从荧光图像中提取标记靶位点的荧光色素所产生的荧光的光点，根据就复数个细胞中的每一个分别提取的光点生成用来判断试样20a是阳性还是阴性的信息。

Description

荧光图像分析装置、分析方法及预处理的评价方法
技术领域
本发明涉及一种荧光图像分析装置、分析方法及预处理的评价方法。
背景技术
特表（日本申请公开）2005-515408号公报上记述了一种将流式细胞仪等用于荧光原位杂交法（FISH法）下的检出作业时的细胞处理方法。根据FISH法，将标记探针与细胞中的检出对象DNA序列区域杂交，通过这一预处理对细胞染色，检出标记探针所引发的荧光，即可检出异常细胞。
发明内容
发明要解决的问题
要用上述检出异常细胞的方法精确判断采集的样本对特定疾病来说是阳性还是阴性，就要观察巨大数目的细胞，例如成千上万个，之后检出异常细胞。此时，操作人员检出异常细胞的工作量大增，同时异常细胞的检出取决于操作人员的感觉，判断试样是阳性还是阴性时很难保证判断的精度。
解决问题的手段
本发明第一技术方案涉及一种荧光图像分析装置，其测定经过预处理后制备的试样并进行分析，其中预处理包括用荧光色素标记靶位点的步骤。本技术方案涉及的荧光图像分析装置包括：光照试样的光源、对因光照而从试样产生的荧光进行拍摄的拍摄部件、和对拍摄部件拍摄的荧光图像进行处理的处理部件。处理部件就试样中所含复数个细胞的每一个分别从荧光图像中提取标记靶位点的荧光色素所产生的荧光光点，根据就复数个细胞的每一个分别提取的光点生成用于判断试样是阳性还是阴性的信息。
本发明第二技术方案涉及一种荧光图像分析装置，其测定经过预处理后制备的试样并进行分析，其中预处理包括用荧光色素标记靶位点的步骤。本技术方案涉及的荧光图像分析装置具有：光照试样的光源、对因光照而从试样产生的荧光进行拍摄的拍摄部件、对拍摄部件所拍摄的荧光图像进行处理的处理部件、显示部件。处理部件就试样中所含复数个细胞的每一个分别从荧光图像中提取标记靶位点的荧光色素所产生的荧光光点，根据就复数个细胞的每一个分别提取的光点使显示部件上显示用于判断试样是阳性还是阴性的信息。
本发明第三技术方案涉及一种对经过预处理后制备的试样进行分析的分析方法，其中预处理包括用荧光色素标记靶位点的步骤。本技术方案所涉及的分析方法包括以下步骤：用光照射在预处理中制备的试样；对因光照而从试样产生的荧光进行拍摄；就试样中所含复数个细胞的每一个分别从荧光图像中提取标记靶位点的荧光色素所产生的荧光光点；根据就复数个细胞中的每一个分别提取的光点生成用于判断试样是阳性还是阴性的信息。
本发明第四技术方案涉及一种含有靶位点被荧光色素标记的复数个细胞的试样的分析方法。本方案的分析方法包括以下步骤：从复数个细胞各自的荧光图像中提取荧光色素所产生的荧光光点的图形；根据光点的图形对复数个细胞分别进行分类；根据复数个细胞的分类结果生成用于判断试样是阳性还是阴性的信息。
本发明第五技术方案涉及一种测定经过预处理后制备的试样并进行分析的荧光图像分析装置，其中预处理包括用荧光色素标记靶位点的步骤。此技术方案的荧光图像分析装置具有：光照试样的光源、对因光照而从试样产生的荧光进行拍摄的拍摄部件、对拍摄部件所拍摄的荧光图像进行处理的处理部件。处理部件从荧光图像中提取标记靶位点的荧光色素所产生的荧光光点，根据提取的光点获取反映光点状态的指标，根据获取的指标判断预处理是否恰当。
本发明第六技术方案涉及一种测定经过预处理后制备的试样并进行分析的荧光图像分析装置，其中预处理包括用荧光色素标记靶位点的步骤。本技术方案涉及的荧光图像分析装置具有：光照试样的光源、对因光照而从试样产生的荧光进行拍摄的拍摄部件、对拍摄部件所拍摄的荧光图像进行处理的处理部件、显示部件。处理部件从荧光图像中提取标记靶位点的荧光色素所产生的荧光光点，根据提取的光点获取反映光点状态的指标，使显示部件上显示基于所获取的指标的信息。
本发明第七技术方案涉及一种针对包括用荧光色素标记靶位点的步骤在内的细胞分析预处理的评价方法。本技术方案涉及的预处理评价方法包括以下步骤：用光照射在预处理中制备的试样；对因光照而从试样产生的荧光进行拍摄；从荧光图像提取标记靶位点的荧光色素所产生的荧光光点；根据提取的光点获取反映光点状态的指标。
发明效果
采用本发明，可以精确判断试样是阳性还是阴性。
附图说明
图1为实施方式涉及的荧光图像分析装置及预处理单元的结构的示意图；
图2（a）为实施方式涉及的荧光图像分析装置所获取的第一~第三图像及明视野图像的例示图；图2（b）为实施方式涉及的荧光图像分析装置进行细胞核区域提取处理的说明图；图2（c）、（d）为实施方式涉及的荧光图像分析装置进行光点区域提取处理的说明图；
图3（a）~（d）分别是实施方式涉及的阴性图形、阳性图形1、阳性图形2、阳性图形3的光点布局例的示意图；
图4为实施方式涉及的第一指标的说明图；
图5为实施方式涉及的第二指标的说明图；
图6为实施方式涉及的第三指标的说明图；
图7为实施方式涉及的第三指标的说明图；
图8为实施方式涉及的第四指标的说明图；
图9为实施方式涉及的第五指标的说明图；
图10为实施方式涉及的第六指标的说明图；
图11（a）为实施方式1涉及的显示关于预处理是否恰当的判断结果的处理的流程图；图11（b）为实施方式1涉及的显示部件显示的界面的结构的示意图；
图12（a）为实施方式1涉及的显示分析结果的处理的流程图；图12（b）为实施方式1涉及的显示部件显示的界面的结构的示意图；
图13（a）为实施方式2涉及的显示关于预处理恰当与否的判断结果及分析结果的处理的流程图；图13（b）为实施方式2涉及的显示部件显示的界面结构的示意图；
图14（a）、（b）为实施方式3涉及的存储部件中所存储的数据库结构的概念图；
图15（a）为实施方式3涉及的显示关于预处理恰当与否的判断结果的处理的流程图；图15（b）为实施方式3涉及的显示部件显示的界面的结构示意图；
图16（a）为实施方式4涉及的显示关于预处理恰当与否的判断结果的相关图表的处理的流程图；图16（b）为实施方式4涉及的显示部件显示的界面的结构的示意图；
图17为实施方式5涉及的显示部件显示的界面的结构的示意图；
图18为实施方式6涉及的拍摄单元的结构示意图；
图19为实施方式7涉及的荧光图像分析装置的结构示意图；
图20（a）为实施方式8涉及的存储部件中所存储的光点的图形及与光点的图形相对应的判断的示意图；图20（b）为实施方式8涉及的显示部件显示的界面的结构示意图。
具体实施方式
以下实施方式是本发明在测定预处理所制备的试样并进行分析的装置中的应用，其中预处理包括使荧光色素标记的核酸探针和核酸中靶位点杂交的步骤。具体而言，在以下实施方式中，将核酸中的靶位点定为22号染色体中的BCR基因和9号染色体中的ABL基因，根据FISH法检出慢性髓细胞性白血病中会见到的、在9号染色体和22号染色体之间产生了易位的细胞作为异常细胞。即，在以下实施方式中，检出BCR基因或ABL基因易位并生成了BCR-ABL融合基因的细胞作为异常细胞。在以下实施方式中，作为检出对象的细胞为血液样本中的白细胞。
（装置结构）
如图1所示，荧光图像分析装置10测定由预处理单元20进行预处理所制备的试样20a并进行分析。操作人员对采自受检者的血液样本进行离心分离等处理，提取检出对象细胞，即白细胞。白细胞提取时也可以用溶血剂溶解其他血细胞并提取白细胞，以此取代离心分离。预处理单元20包括用于混合试剂和经离心分离等处理后的样本的混合容器、将样本和试剂分装到混合容器的分装单元、以及加热混合容器的加热部件等。预处理单元20进行包括以下步骤的预处理来制备试样20a：用荧光色素标记采自受检者的检出对象细胞的靶位点的步骤；用核染色用色素特异性地染色细胞核的步骤。具体而言，在用荧光色素标记靶位点的步骤中，使荧光色素所标记的核酸探针与核酸中的靶位点杂交。
与BCR基因杂交的核酸探针由在波长λ11的激发光照射下产生波长λ21的荧光的第一荧光色素标记。由此，BCR基因被第一荧光色素标记。与ABL基因杂交的核酸探针由在波长λ12的激发光照射下产生波长λ22的荧光的第二荧光色素标记。由此，ABL基因被第二荧光色素标记。细胞核由在波长λ13的激发光照射下产生波长λ23的荧光的核染色用色素染色。
更具体而言，预处理单元20进行的处理包括：固定细胞以免细胞因脱水而收缩的处理、在细胞上打开大小能将核酸探针导入细胞内的孔的膜透过处理、对细胞加热的热变性处理、靶位点与核酸探针杂交的处理、从细胞中除去不需要的核酸探针的清洗处理、以及细胞核染色处理。
荧光图像分析装置10具有：拍摄单元100、处理部件11、存储部件12、显示部件13和输入部件14。拍摄单元100具有：流动池110、光源121~124、聚光透镜131~134、分色镜141和142、聚光透镜151、光学单元152、聚光透镜153、拍摄部件154。流动池110的流路111供试样20a流动。
光源121~124向在流动池110流动的试样20a照射光。光源121~124由半导体激光光源构成。光源121~124射出的光分别为波长λ11~λ14的激光。聚光透镜131~134分别聚集光源121~124射出的光。分色镜141让波长λ11的光透过，反射波长λ12的光。分色镜142让波长λ11、λ12的光透过，反射波长λ13的光。于是，波长λ11~λ14的光照射到流经流动池110的流路111的试样。
波长λ11~λ13的光照射到在流动池110流动的试样后，已染色了细胞的荧光色素会产生荧光。具体而言，波长λ11的光照射到标记BCR基因的第一荧光色素后，第一荧光色素产生波长λ21的荧光。波长λ12的光照射到标记ABL基因的第二荧光色素后，第二荧光色素产生波长λ22的荧光。波长λ13的光照射到染色细胞核的核染色用色素后，核染色用色素产生波长λ23的荧光。波长λ14的光照射到在流动池110流动的试样后，此光透过细胞。透过细胞的波长λ14的光用于生成明视野图像。在实施方式中，波长λ21为绿色光的波段，波长λ22为红色光的波段，波长λ23为蓝色光的波段。
聚光透镜151聚集流经流动池110的流路111的试样产生的波长λ21~λ23的荧光和透过流经流动池110的流路111的试样的波长λ14的光。光学单元152有着四枚分色镜组合而成的结构。光学单元152的四枚分色镜以略微不同的角度反射波长λ21~λ23的荧光和波长λ14的光并使其在拍摄部件154的受光面上分离。聚光透镜153聚集波长λ21~λ23的荧光和波长λ14的光。
拍摄部件154由TDI（Time Delay Integration，时间延迟积分）相机构成。拍摄部件154拍摄波长λ21~λ23的荧光和波长λ14的光，作为拍摄信号输出分别与波长λ21~λ23的荧光相对应的荧光图像、以及与波长λ14的光相对应的明视野图像。以下将与波长λ21~λ23的荧光相对应的荧光图像分别称为“第一图像”、“第二图像”、“第三图像”。
在图2（a）的示例中，在第一图像，波长λ21的荧光光点为黑色且分布成点状，在第二图像，波长λ22的荧光光点为黑色且分布成点状，但比第一图像略浅。在第三图像，细胞核区域呈黑色分布。在明视野图像中能够确认实际的细胞状态。另外，图2（a）中所示各图像均为示例，是将预处理后的白细胞放置在载玻片上用显微镜观察所看到的，图2（a）的第一~第三图像是反转色阶后将色调变为灰色所得到的。如上所述，用拍摄部件154拍摄流经流动池110的试样20a时，细胞是以彼此分离的状态在流路111流动，故针对各个细胞分别获取荧光图像和明视野图像。
返回图1，处理部件11由CPU构成。处理部件11也可以由CPU和微型计算机构成。处理部件11根据存储部件12存储的程序进行各种处理。处理部件11与拍摄单元100、存储部件12、显示部件13及输入部件14连接，其接受各部件发出的信号并控制各部件。存储部件12由RAM、ROM、硬盘等构成。显示部件13由显示器构成。输入部件14由鼠标和键盘构成。
处理部件11对拍摄部件154拍摄的第一~第三图像进行处理。具体而言，处理部件11从基于波长λ21的荧光的第一图像提取波长λ21的荧光光点，从基于波长λ22的荧光的第二图像提取波长λ22的荧光光点。处理部件11从基于波长λ23的荧光的第三图像提取细胞核范围。
处理部件11根据第一图像和第二图像中光点的分布情况就各个细胞分别判断是否为BCR基因或ABL基因易位的异常细胞，并检出异常细胞。关于异常细胞的判断随后将参照图3（a）~（d）加以说明。
处理部件11根据就复数个细胞中的每一个分别提取的光点生成用于判断试样20a是阳性还是阴性的信息。通过上述结构，操作人员不必观察大量细胞来检出异常细胞，检出异常细胞不依赖于操作人员的感觉，因此异常细胞的检出精度得以提高。因此，用于判断试样20a是阳性还是阴性的信息的精度得到提高，医生等能够参照此信息精确地判断试样20a是阳性还是阴性。关于此信息，随后将参照图20（b）进行说明。
下面就荧光图像分析装置10所进行的细胞核区域的提取及光点区域的提取进行说明。
图2（b）左端所示第三图像、图2（c）左端所示第一图像、图2（d）左端所示第二图像是从流经流动池110的试样20a的同一区域获取的。
如图2（b）左端所示地获取到第三图像时，处理部件11根据第三图像上各个像素的亮度，绘制如图2（b）中间所示的亮度和次数图表。纵轴的次数表示像素的个数。处理部件11在此图表上设定亮度的阈值。然后，处理部件11如图2（b）右端虚线所示地提取亮度大于阈值的像素的分布范围作为细胞核区域。另外，在第三图像中当二个核重叠时，关于重叠细胞的第一~第三图像被排除在外，不用于判断预处理恰当与否，不用于判断异常细胞。
如图2（c）左端所示地获取到第一图像时，处理部件11根据第一图像上各像素的亮度如图2（c）中间所示地绘制亮度和次数图表。处理部件11在此图表上根据例如大津法（otsu法）这一方法设定亮度的阈值作为光点与背景的分界。然后，处理部件11如图2（c）右端的虚线所示提取亮度大于阈值的像素的分布范围作为光点区域。另外，从第一图像提取光点区域时，所具有的区域极小的光点、所具有的区域极大的光点、以及不包含在图2（b）右端所示细胞核区域的光点被排除在外。
如图2（d）左端所示地获取到第二图像时，与第一图像同样地，处理部件11根据第二图像上各个像素的亮度如图2（d）中间所示地绘制亮度和次数的图表。处理部件11在此图表上设定亮度的阈值，如图2（d）右端虚线所示地提取亮度大于阈值的像素的分布范围作为光点区域。另外，从第二图像提取光点区域时，所具有的区域极小的光点、所具有的区域极大的光点、以及不包含在图2（b）右端所示细胞核区域的光点被排除在外。
另外，处理部件11也可以不如图2（b）~（d）的中间所示地制成图表，而是按照上述步骤通过演算从第三图像提取细胞核区域，从第一图像和第二图像光点提取光点区域。光点的提取也可以是如下方式：判断正常的光点的分布波形和判断对象区域的吻合程度，当吻合程度高时提取判断对象区域作为光点。处理部件11在上述中通过从第三图像提取细胞核区域检出细胞，但其也可以根据明视野图像检出细胞。在根据明视野图像检出细胞的情况下，也可以省略获取第三图像这一点。本实施方式中所谓光点指荧光图像中产生的小荧光点。更具体而言，所谓光点指从与细胞核中靶位点基因结合的核酸探针的荧光色素获得的荧光的点。
下面，参照图3（a）~（d）就荧光图像分析装置10所进行的异常细胞判断作业进行说明。
图3（a）显示了阴性图形的光点布局例，图3（b）~（d）显示了阳性图形的1~3的光点布局例。在本实施方式中，异常细胞中光点的布局图形基本与图3（b）~（d）所示阳性图形1~3的其中之一吻合。
如图3（a）所示，当BCR基因和ABL基因未发生易位时，在第一图像，波长λ21的荧光即绿色荧光的光点在细胞核内有2点，在第二图像，波长λ22的荧光即红色荧光的光点在细胞核内有2点。此时，合成第一图像和第二图像，则在合成图像中2个绿色光点和2个红色光点存在于一个细胞核内。如此，当存在如图3（a）所示的各光点时，处理部件11判断此细胞BCR基因和ABL基因未发生易位，即判断为阴性。
如图3（b）所示，当易位导致ABL基因的一部分移到9号染色体时，在第一图像，绿色荧光光点在细胞核内有2点，在第二图像，红色光点在细胞核内有3点。此时，合成第一图像和第二图像，则在合成图像中，一个细胞核内有1个绿色光点、2个红色光点和1个黄色光点。当各光点如图3（b）所示存在时，处理部件11判断此细胞中BCR基因和ABL基因发生了易位，即判断为阳性。
如图3（c）所示，易位导致BCR基因的一部分移到22号染色体、ABL基因的一部分移到了9号染色体的情况下，在第一图像，绿色的光点在细胞核内有3点，在第二图像，红色的光点在细胞核内有3点。此时，合成第一图像和第二图像，则在合成图像中一个细胞核内有1个绿色的光点、1个红色的光点和2个黄色的光点。当各光点如图3（c）存在时，处理部件11判断此细胞中BCR基因和ABL基因发生了易位，即判断为阳性。
如图3（d）所示，在易位导致ABL基因移到9号染色体的情况下，在第一图像，绿色的光点在细胞核内有2点，在第二图像，红色的光点在细胞核内有2点。此时，合成第一图像和第二图像，则在合成图像中一个细胞核内有1个绿色的光点、1个红色的光点和1个黄色的光点。当各光点如图3（d）存在时，处理部件11判断此细胞的BCR基因和ABL基因发生了易位，即判断为阳性。
用荧光色素标记检出对象核酸序列区域——即靶位点时，在预处理中会有复杂的步骤，比如要进行加热细胞的处理、让核酸探针与靶位点杂交的处理、从细胞除去不需要的核酸探针的处理等。在预处理的各个步骤中，一旦处理温度、处理时间、试剂浓度和试剂量等有微小的变化，就可能破坏染色体、导致靶位点不能被核酸探针恰当标记。基于核酸探针观察靶位点，由此进行分析，所以预处理不恰当，分析结果就可能产生混乱，分析的可靠性就会下降。另外，操作人员要判断预处理是否恰当就需要观察大量细胞，同时判断是否恰当时要依赖操作人员的感觉，所以难以维持判断精度。
而荧光图像分析装置10具有判断预处理是否恰当的功能的话就能应对上述问题。
荧光图像分析装置10的处理部件11根据提取的光点，获取反映随预处理状态而变化的光点的状态的指标，通过比较所获取的指标和用于区分预处理恰当与否的阈值，判断预处理是否恰当。指标和预处理恰当与否的判断随后将参照图4~图10进行说明。
如此，荧光图像分析装置10获取反映随预处理状态而变化的光点状态的指标，根据获取的指标判断预处理是否恰当。以此就能精确判断预处理恰当与否。当预处理不恰当时，有机会通过纠正预处理的步骤等来使预处理恰当化，从而能够提高荧光图像分析装置10的分析的可靠性。另外，与操作人员凭感觉判断预处理恰当与否的情况相比，上述技术能够省去操作人员的麻烦，明确判断预处理是否恰当而不会产生混乱。
下面说明荧光图像分析装置10所获取的、反映随预处理状态而变化的光点状态的指标。
如果预处理不恰当，则会出现以下情况：由于核酸探针与靶位点以外的核酸位点结合，即由于所谓的非特异性结合而导致靶位点以外的核酸位点被荧光标记；或由于核酸探针未结合到靶位点而导致靶位点未得到充分荧光标记。
如何设定进行预处理时的温度和浓度等条件——即控制因子——才能恰当地对靶位点进行荧光标记发明人对此做了调查研究。在此过程中，发明人注意到，在光点状态最好的情况下改变控制因子就会造成光点状态的恶化，发明人发现，通过判断光点状态与光点状态最好时相比有多大程度的变化，就能判断预处理的状态。以下就判断预处理状态的第一~第六指标进行说明。
（第一指标）
第一指标着眼点在于：如果预处理进行得恰当，则靶位点得到恰当的荧光标记，第一图像和第二图像中的光点数目达到设想的数目。
如图4，发明人在No.1~8所示预处理条件下对标准试样即阴性样本进行了预处理。No.1~8的预处理条件分别设定了A~G所示七个控制因子。A~G所示七个控制因子分别是热变性温度、热变性时间、热变性方法、杂交温度、探针量、清洗液温度及清洗液盐浓度。
控制因子A是在杂交前使核酸及核酸探针热变性时的温度，单位为摄氏度。控制因子B是使核酸及核酸探针热变性的时间，单位为分钟。控制因子C是使核酸及核酸探针热变性的方法。方法2是一种核酸热变性与核酸探针热变性同时进行的方法。控制因子D是使核酸与核酸探针杂交时的温度，单位为摄氏度。控制因子E是核酸探针量相对于规定量的倍率。控制因子F是杂交后清洗试样的清洗液温度，单位是摄氏度。控制因子G是清洗液的盐浓度相对于规定量的倍率。
发明人在No.1~8所示预处理条件下对阴性样本进行预处理，制备试样，测定所制备的试样，获取了第一~第三图像。然后，发明人用第一图像和第二图像中光点为图3（a）~（d）所示阴性图形和阳性图形1~3其中之一的细胞的数目除以根据第三图像恰当提取了细胞核区域的细胞的数目，以此针对各No.算出比例。即，发明人算出检出的细胞中可作为分析对象的细胞的比例。以下将检出的细胞中可作为分析对象的细胞的比例称为“第一指标”。发明人验证发现，No.5中，第一指标为68%，与其他预处理条件相比为最高值。
发明人将No.5的预处理条件作为最能恰当进行预处理的条件，以此时的第一指标值68%为基准，设定了用于判断预处理恰当与否的阈值。具体而言，发明人将用来判断预处理状态为警告级别的阈值设定为50%，将用来判断预处理状态为异常级别的阈值设定为30%。另外，使警告级别的阈值比最恰当的预处理后获取的第一指标值小一定值即可，使异常级别的阈值比警告级别的阈值小一定值即可。
在图4所示发明人实际进行的预处理中，使用的是阴性样本，所以可作为分析对象的细胞限于阴性图形的细胞。然而，用实际样本进行预处理时，可作为分析对象的细胞大多数为阴性图形和阳性图形1~3其中之一所表示的细胞。因此，如上所述用成功提取了细胞核区域的细胞数目除符合阴性图形和阳性图形1~3其中之一的细胞数目所计算出的第一指标的作用不限于阴性样本，该指标也可以在用实际样本进行预处理是否恰当的判断时使用。另外，检出的细胞中不能作为分析对象的细胞是指由于未恰当进行预处理而不符合阴性图形和阳性图形1~3中任意一者的细胞。
下面说明用第一指标实际判断预处理恰当与否的步骤。
首先，在一定时刻，比如在一天中即将开始使用荧光图像分析装置10的时刻，操作人员用预处理单元20对作为标准试样的阴性样本进行预处理。然后，操作人员将通过对标准试样进行预处理而制备的试样20a放置到荧光图像分析装置10，测定试样20a。处理部件11就各个细胞分别获取第一~第三图像，提取细胞核区域和光点区域。
接着，处理部件11获取根据第三图像恰当提取了细胞核区域的细胞数目作为第一数目，获取第一图像和第二图像中光点符合阴性图形和阳性图形1~3其中之一的细胞数目作为第二数目。然后，处理部件11获取第二数目在第一数目的比例作为第一指标。处理部件11将警告级别和异常级别所对应的阈值与第一指标进行比较，以此判断预处理是否恰当。具体而言，处理部件11在第一指标不到警告级别但在异常级别以上时判断预处理状态为警告级别，在第一指标不到异常级别时判断预处理状态为异常级别。
如此，根据验证结果表明预处理进行得最恰当的第一指标来设定阈值，将实际根据标准试样获取的第一指标与所设定的阈值进行比较，判断预处理是否恰当。以此，当预处理未恰当进行时，实际获取的第一指标值就会小于预处理恰当进行时的第一指标。因此，比较实际获取的第一指标值和阈值就能精确判断预处理是否恰当。
另外，用对采自受检者的实际样本进行预处理所制备的试样20a，即实际进行分析时制备的试样20a，也能判断预处理是否恰当。基于实际样本制备的试样20a包括第一图像和第二图像中的光点符合图3（a）所示阴性图形的细胞和符合图3（b）~（d）所示阳性图形1~3的细胞。
此时，同样地，处理部件11获取第一图像和第二图像中的光点符合阴性图形和阳性图形1~3其中之一的细胞数目作为第二数目。此时的第二数目也是所检出细胞中可以作为分析对象的细胞数目。因此，此时，处理部件11用检出细胞数目即第一数目除第二数目，与上述基于阴性样本制备的试样20a同样地，获取第一指标。然后，处理部件11将获取的第一指标与上述基于阴性样本制备的试样20a一样的警告级别的阈值和异常级别的阈值进行比较，判断预处理是否恰当。
（第二指标）
如上所述，预处理未能恰当进行的情况下，靶位点可能无法被充分地荧光标记。第二指标着眼于在预处理未能恰当进行的情况下第一图像和第二图像的光点亮度会下降。下面说明用第二指标实际判断预处理恰当与否的步骤。
首先，操作人员用预处理单元20对作为标准试样的阴性样本进行预处理。然后，操作人员将通过对标准试样进行预处理制备的试样20a放置到荧光图像分析装置10，测定试样20a。处理部件11就各个细胞分别获取第一~第三图像，提取细胞核区域和光点。
接着，如图5所示，处理部件11从复数张第一图像获取细胞核内光点的亮度，根据获取的光点亮度算出关于第一图像的光点平均亮度。同样，处理部件11从复数张第二图像获取细胞核内光点的亮度，根据获取的光点亮度算出关于第二图像的光点的平均亮度。接下来，处理部件11根据关于第一图像的平均亮度和关于第二图像的平均亮度算出全部细胞的光点的平均亮度。以下称全部细胞的光点的平均亮度为“第二指标”。
然后，处理部件11将警告级别的阈值和异常级别的阈值与第二指标作比较，以此判断预处理是否恰当。具体而言，处理部件11在第二指标小于警告级别且在异常级别以上时判断预处理的状态为警告级别，当第二指标小于异常级别时判断预处理的状态为异常级别。
此时，操作人员事先在复数个预处理条件下对阴性样本进行预处理，获取预处理进行得最恰当时，即值最大时的第二指标。然后，操作人员事先设定警告级别的阈值使其比最大值时的第二指标小一定值，事先设定异常级别的阈值使其比警告级别的阈值小一定值。
另外，也可以用全体细胞数目除含亮度小于一定值的光点的细胞数目，将所得值作为第二指标。此时，如果预处理进行得不恰当，第二指标就变大。此外，使用第二指标时，与第一指标同样地，能够用对采自受检者的实际样本进行预处理而制备的试样20a判断预处理是否恰当。
（第三指标）
第三指标着眼点在于：预处理未能恰当进行的情况下，第一图像和第二图像中光点的亮度会降低，基于第一图像和第二图像的S/N比会变小。下面就用第三指标实际判断预处理是否恰当的步骤进行说明。
首先，操作人员用预处理单元20对作为标准试样的阴性样本进行预处理。然后，操作人员将通过对标准试样进行预处理而制备的试样20a放置到荧光图像分析装置10，测定试样20a。处理部件11就各个细胞分别获取第一~第三图像，提取细胞核区域和光点。
然后，如图6所示，处理部件11从复数张第一图像算出细胞核内光点的平均亮度、以及细胞核内光点区域以外的区域即光点背景区域的平均亮度。同样，处理部件11从复数张第二图像中获取细胞核内光点的平均亮度和光点背景区域的平均亮度。处理部件11针对各图像用背景的平均亮度除光点的平均亮度，以此算出S/N比。然后，处理部件11平均基于各图像的S/N比，算出全体细胞中的平均S/N比。以下称全体细胞中的平均S/N比为“第三指标”。
接着，处理部件11将警告级别的阈值和异常级别的阈值与第三指标进行比较，以此判断预处理是否恰当。具体而言，处理部件11在第三指标小于警告级别且在异常级别以上时判断预处理状态为警告级别，当第三指标小于异常级别时判断预处理的状态为异常级别。
此时，同样地，操作人员事先在复数个预处理条件下对阴性样本进行预处理，获取预处理进行得最恰当时即值最大时的平均S/N比。此外，操作人员事先设定警告级别的阈值使其比最大值时的第三指标小一定值，事先设定异常级别的阈值使其比警告级别的阈值小一定值。
在此，如图7所示，发明人在预处理中改变热变性温度和热变性时间，根据含有绿色光点的第一图像算出平均S/N比，根据含有红色光点的第二图像算出平均S/N比。在图7所示例中，当热变性温度为95℃，热变性时间为20分钟时，基于第一图像的平均S/N比和基于第二图像的平均S/N比两者均为最高。关于热变性温度为95℃，热变性时间为20分钟时即预处理进行地最恰当时的第三指标，由于基于第一图像的平均S/N比约为400%，基于第二图像的平均S/N比约为370%，所以其值约为385%。因此，根据图7所示验证结果，可以设250%为表示警告级别的阈值，设200%为表示异常级别的阈值。
另外，第三指标也可以采用全体细胞数目除平均S/N比小于一定值的细胞数目所得的值。此时，如果预处理未恰当进行，则第三指标会增大。使用第三指标时，与第一指标同样地，也能用对采自受检者的实际样本进行预处理所制备的试样20a判断预处理是否恰当。
（第四指标）
预处理恰当进行的情况下，在靶位点的一点产生荧光的状态下拍摄光点，荧光图像上的光点基本呈圆形。另一方面，如上所述，当预处理未能恰当进行时，会产生非特异性结合，靶位点周围部位可能会产生荧光。第四指标就是着眼于预处理未能恰当进行时第一图像和第二图像上的光点的圆度会降低。下面就用第四指标实际判断预处理是否恰当的步骤进行说明。
首先，操作人员用预处理单元20对作为标准试样的阴性样本进行预处理。然后，操作人员将对标准试样进行预处理所制备的试样20a放置到荧光图像分析装置10，测定试样20a。处理部件11就各个细胞分别获取第一~第三图像，提取细胞核区域和光点。
接着，如图8所示，处理部件11在第一图像和第二图像中算出细胞核内各光点的圆度，判断在各细胞中圆度低于一定值的光点即非圆形的光点是否在一定数目以上。在图8所示例中，处理部件11判断圆度低于一定值的光点是否存在一个以上。处理部件11用含有圆度低的光点的细胞数目除以全体细胞数目来算出含有圆度低的光点的细胞的比例。以下称含有圆度低的光点的细胞的比例为“第四指标”。
然后，处理部件11将警告级别的阈值和异常级别的阈值与第四指标进行比较，以此判断预处理是否恰当。具体而言，处理部件11在第四指标大于警告级别且在异常级别以下时判断预处理状态为警告级别，当第四指标大于异常级别时判断预处理的状态为异常级别。
此时，操作人员也同样事先在复数个预处理条件下对阴性样本进行预处理，获取预处理进行得最恰当时即值最小时的第四指标。此外，操作人员事先设定警告级别的阈值使其比最小值时的第四指标大一定值，事先设定异常级别的阈值使其比警告级别的阈值大一定值。
另外，第四指标也可以是全部细胞中全部光点的圆度的平均值。此时，如预处理未能恰当进行，则第四指标会变小。使用第四指标时，与第一指标同样地，能够用对采自受检者的实际样本进行预处理所制备的试样20a判断预处理恰当与否。
（第五指标）
如上所述，当预处理未能恰当进行时，有时会出现因非特异性结合而导致光点变大的情况。第五指标就是着眼于预处理未能恰当进行时第一图像和第二图像中的光点会变大。下面就用第五指标实际判断预处理恰当与否的步骤进行说明。
首先，操作人员用预处理单元20对作为标准试样的阴性样本进行预处理。然后，操作人员将对标准试样进行预处理所制备的试样20a放置到荧光图像分析装置10，测定试样20a。处理部件11就各个细胞分别获取第一~第三图像，提取细胞核区域和光点。
其次，如图9所示，处理部件11就第一图像和第二图像算出细胞核内各光点的大小，判断在各细胞中尺寸大于一定值的光点是否在一定数目以上。在图9所示例中，处理部件11判断尺寸大于一定值的光点是否有一个以上。另外，光点尺寸通过光点图像中的光点区域的面积获取。处理部件11用含有尺寸大的光点的细胞数目除以全体细胞数目，以此计算出含有尺寸大的光点的细胞的比例。以下称含有尺寸大的光点的细胞的比例为“第五指标”。
然后，处理部件11将警告级别的阈值和异常级别的阈值与第五指标进行比较，以此判断预处理是否恰当。具体而言，处理部件11在第五指标大于警告级别且在异常级别以下时判断预处理状态为警告级别，当第五指标大于异常级别时判断预处理的状态为异常级别。
此时，操作人员也同样事先在复数个预处理条件下对阴性样本进行预处理，获取预处理进行得最恰当时即值最小时的第五指标。此外，操作人员事先设定警告级别的阈值使其比最小值时的第五指标大一定值，事先设定异常级别的阈值使其比警告级别的阈值大一定值。
另外，第五指标也可以是全部细胞中全部光点的尺寸的平均值。此时，如预处理未能恰当进行，则第五指标会变大。使用第五指标时，与第一指标同样地，能够用对采自受检者的实际样本进行预处理所制备的试样20a判断预处理恰当与否。
（第六指标）
如上所述，预处理未能恰当进行的话，靶位点就可能无法被充分荧光标记。第六指标正是着眼于预处理未能恰当进行时第一图像和第二图像中的光点数目会减少。
首先，操作人员用预处理单元20对作为标准试样的阴性样本进行预处理。然后，操作人员将对标准试样进行预处理所制备的试样20a放置到荧光图像分析装置10，测定试样20a。处理部件11就各细胞分别获取第一~第三图像，提取细胞核区域和光点。
然后，如图10所示，处理部件11就第一图像和第二图像算出细胞核内的光点数目。然后，处理部件11平均基于各图像的光点数目，算出全部细胞中光点数目的平均值。以下称全部细胞中的光点数目平均值为“第六指标”。
然后，处理部件11将警告级别的阈值和异常级别的阈值与第六指标进行比较，以此判断预处理是否恰当。具体而言，处理部件11在第六指标小于警告级别且在异常级别以上时判断预处理状态为警告级别，当第六指标小于异常级别时判断预处理的状态为异常级别。另外，此时，如果预处理得以恰当地进行，则第六指标值为2。因此，操作人员预先设定警告级别的阈值使其比2小一定值，预先设定异常级别的阈值使其比警告级别的阈值小一定值。
另外，也可以将相对于预处理恰当进行时的理想值2的偏离程度作为第六指标。此时，如果预处理未恰当进行，则第六指标会增大。此外，第六指标也可以采用光点数目小于2个的细胞数目除以全体细胞数目所得到的值。此时，如果预处理未恰当进行，则第六指标增大。
在使用第六指标时，与第一指标同样地，能够用对采自受检者的实际样本进行预处理而制备的试样20a判断预处理恰当与否。此时，试样中有时会混有阳性细胞，所以预处理得以恰当进行时的第六指标的理想值略微大于2。然而，考虑到实际存在阳性细胞的概率等，可以如上所述地使用与基于阴性细胞的情况同样的警告级别阈值和异常级别阈值。
此外，第一~第六指标在上述内容中都是基于第一图像和第二图像两者算出的，但其也可以通过荧光图像中的其中一图像来算出。
下面说明用第一~第六指标判断预处理恰当与否并分析样本、检出异常细胞的实施方式1~7。在实施方式1~7，只要未特别说明，均默认使用图1所示荧光图像分析装置10和预处理单元20。
（实施方式1）
如图11（a）所示，在步骤S11，预处理单元20对作为标准试样的阴性样本进行预处理，制备试样20a。在步骤S11包括使荧光色素所标记的核酸探针和阴性样本的核酸中的BCR区域及ABL区域杂交的步骤。在步骤S12，处理部件11测定步骤S11的预处理所制备的试样20a。具体而言，处理部件11让由阴性样本构成的试样20a流入流动池110的流路111，用来自光源121~124的光照射流路111，通过拍摄部件154拍摄试样20a所产生的荧光和透过试样20a的光，获取第一~第三图像和明视野图像。处理部件11将第一~第三图像和明视野图像存储到存储部件12。
在步骤S13，处理部件11获取第一~第六指标和预处理恰当与否的判断结果作为基于指标的信息。具体而言，处理部件11根据第一~第三图像提取细胞核区域和光点区域。然后，处理部件11如上所述算出第一~第六指标，根据算出的第一~第六指标判断预处理恰当与否。基于第一~第六指标进行判断所用的警告级别阈值和异常级别阈值存储在存储部件12中。处理部件11将第一~第六指标的值和基于第一~第六指标的判断结果等存储到存储部件12。在步骤S14，处理部件11在显示部件13显示基于指标的信息。具体而言，处理部件11在显示部件13显示包括步骤S13获取的第一~第六指标和判断结果在内的界面210。
如图11（b）所示，界面210显示第一~第六指标的值和分别基于第一~第六指标的判断结果。界面210具有如此结构，则操作人员能够根据各指标判断预处理是否恰当进行。操作人员能够在判断预处理不恰当时重新审视预处理所含有的各个步骤，采取再次进行预处理等的措施。操作人员判断预处理恰当时，如图12（a）所示，对采自受检者的实际样本进行分析。
如图12（a）所示，在步骤S21，预处理单元20对采自受检者并经离心分离等处理的样本进行与图11（a）步骤S11同样的预处理，制备试样20a。在步骤S22，处理部件11与图11（a）步骤S12同样地测定通过步骤S21的预处理制备的试样20a。
在步骤S23，处理部件11进行分析。具体而言，处理部件11根据第一~第三图像计数光点为图3（a）所示阴性图形的细胞、即阴性细胞。此外，处理部件11还根据第一~第三图像计数光点为图3（b）~（d）所示阳性图形1~3其中任意一者的细胞，即阳性细胞。此外，处理部件11用全部细胞数目除阳性细胞数目，以此算出阳性细胞在全部细胞中所占比例。在步骤S24，处理部件11在显示部件13显示包括在步骤S23获取的分析结果的界面220。
如图12（b）所示，界面220显示用于识别样本的样本ID、阳性细胞数目、阴性细胞数目以及阳性细胞在全部细胞中所占比例。界面220具有如此结构，则医生等能够用界面220的显示内容来帮助判断样本是阳性还是阴性。此外还可采用如下结构：处理部件11在阳性细胞的比例超过一定阈值时显示如“可能阳性”等提示样本是阳性的内容。
另外，可以采用如下结构：处理部件11在步骤S13不判断预处理恰当与否而算出第一~第六指标，并在步骤S14在显示部件13上显示只包括第一~第六指标值的界面210。此时，操作人员例如确认第一~第六指标的值来判断预处理恰当与否。
（实施方式2）
在实施方式2，对采自受检者的实际样本进行预处理，根据经预处理后的实际样本构成的试样20a判断预处理恰当与否。
如图13（a）所示，在步骤S31，与图12（a）的步骤S21同样地，预处理单元20对采自受检者的、经离心分离等处理的样本进行预处理，制备试样20a。在步骤S32，处理部件11与图12（a）步骤S22同样地测定通过步骤S31的预处理制备的试样20a。
在步骤S33，处理部件11与图11（a）的步骤S13同样地获取基于指标的信息， 与图12（a）的步骤S23同样地进行分析。在步骤S34，处理部件11与图11（a）的步骤S14同样地在显示部件13显示基于指标的信息。与图12（a）的步骤S24同样地在显示部件13显示分析结果。具体而言，在步骤S34，处理部件11在显示部件13显示包括指标、判断结果和分析结果在内的界面230。
如图13（b）所示，界面230显示第一~第六指标的值、分别基于第一~第六指标的判断结果、用于识别样本的样本ID、阳性细胞数目、阴性细胞数目、以及阳性细胞在全部细胞中所占比例。界面230具有如此结构，则医生等能够确认样本的预处理恰当与否且判断样本是阳性还是阴性。例如，当预处理恰当与否的判断结果恰当时，医生等能够判断分析结果的可靠性高，能够精确地对样本进行诊断。另一方面，当判断预处理是否恰当的判断结果为不恰当时，医生等就能判断分析结果的可靠性低，能够暂停对样本的诊断或采取其他措施。此外，判断预处理恰当与否时不需要使用标准试样。
也可以采用如下结构：处理部件11在步骤S33不对预处理恰当与否作出判断而算出第一~第六指标，并在步骤S34在显示部件13上显示包括第一~第六指标值和分析结果在内的界面230。
（实施方式3）
在实施方式3，与实施方式2同样地，对采自受检者的实际样本进行预处理并判断预处理恰当与否。此外，在实施方式3，算出一定期间内的第一~第六指标并判断预处理恰当与否。
处理部件11每进行一次预处理都将进行预处理的日期及时间、样本ID、第一~第三图像、明视野图像存储到图14（a）所示数据库12a作为光点的相关信息。数据库12a存储在存储部件12中。还可以采用如下方式：处理部件11从第一~第三图像提取光点区域、光点亮度、背景区域，将提取的这些信息作为光点的相关信息存储到数据库12a。
处理部件11每进行一次预处理都会根据第一~第三图像获取第一~第六指标，将获取的第一~第六指标存储到图14（b）所示数据库12b。即，处理部件11针对经预处理制备的各试样20a分别获取第一~第六指标，将获取的第一~第六指标与试样20a关联起来存储到数据库12b。数据库12b存储在存储部件12。还可以采用如下方式：处理部件11将基于第一~第六指标的判断结果存储到数据库12b。如此针对各试样20a分别存储第一~第六指标，则处理部件11能够就过去所进行的预处理顺畅地在显示部件13上显示第一~第六指标。另外，也可以使处理部件11在一定时刻，比如1天的分析结束的时刻，将第一~第六指标存储到数据库12b。
如图15（a）所示，在步骤S41，处理部件11接受由操作人员通过输入部件14输入的期间。期间由开始日期及时间及结束日期及时间构成。
在步骤S42，处理部件11根据在步骤S41接受的期间内所包含的第一~第三图像从图14（a）所示数据库12a获取基于期间内的指标的信息。具体而言，处理部件11根据接受的期间内所包含的所有第一~第三图像与上述同样地算出第一~第六指标，根据算出的第一~第六指标与上述同样地判断预处理恰当与否。还可以采用如下方式：处理部件11根据图14（b）所示数据库12b平均所接受的期间内包含的相同指标，由此获取所接受的期间内的第一~第六指标。在步骤S43，处理部件11在显示部件13上显示包括步骤S42获取的基于指标的信息在内的界面240，其中步骤S42获取的基于指标的信息即第一~第六指标和预处理恰当与否的判断结果。
如图15（b）所示，界面240显示操作人员输入的期间、所接受期间内的第一~第六指标、基于第一~第六指标的判断结果。界面240具有如此结构，操作人员能够在一定时间幅度内得知第一~第六指标，得知预处理恰当与否的判断结果。在图15（b）所示例中，操作人员能够得知“2016/05/10”一天内的指标和判断结果。
另外，还可以采用如下方式：处理部件11在步骤S42不进行预处理恰当与否的判断而算出第一~第六指标，并在步骤S43在显示部件13上显示只包括第一~第六指标值的界面240。在上述部分，处理部件11在步骤S41根据操作人员输入的期间获取和显示基于指标的信息，但也可以根据操作人员的开始指示自动设定当日的0时~24时一天为期间。
（实施方式4）
在实施方式4，在实施方式3的基础上将指标的时间推移制成图表显示。
如图16（a）所示，在步骤S51，处理部件11接受操作人员通过输入部件14输入的期间、显示单位、及选择指标。期间与实施方式3同样地由开始日期及时间及结束日期及时间构成。显示单位为1天、1小时等的时间幅度。选择指标为第一~第六指标其中某一指标。
在步骤S52，处理部件11根据在步骤S51接受的期间内所包含的全部第一~第三图像，从图14（a）所示数据库12a获取每显示单位的基于选择指标的信息。比如，当显示单位为1天，选择指标为第一指标时，处理部件11在期间内按天获取第一指标和基于第一指标的预处理判断结果。此外，还可采用如下方式：处理部件11根据图14（b）所示数据库12b获取期间内每显示单位下的、基于选择指标的信息。在步骤S53，处理部件11在显示部件13显示界面250，该界面250包括基于步骤S52获取的信息的图表。
如图16（b）所示，界面250上显示用于显示操作人员输入的期间、显示单位及选择指标的区域，还显示基于步骤S52获取的信息的图表。在图16（b）所示例中，十天内每一天中第一指标随时间的变化都显示在图表上，图表中一并显示了警告级别和异常级别。界面250具有如此结构，则操作人员能够就一定期间一目了然地掌握第一~第六指标随时间的变化，因此能更准确地掌握预处理的状态。
另外，在上述方案下处理部件11根据步骤S51中操作人员输入的信息制成了图表，除此之外还可以自动地将期间设为从当日起的过去十天并设显示单位为1天。也可以使处理部件11不接受选择指标而在界面250显示基于第一~第六指标的6个图表。此外，还可以使处理部件11在图表内一并显示图表中各点的指标值。
（实施方式5）
在实施方式5，显示部件13上显示图17所示界面260，用其取代图11（b）所示实施方式1的界面210。如图17所示，界面260除显示第一~第六指标和判断结果外，还显示从视觉上表示第一~第六指标的相关关系的雷达图。此时，算出各指标，且保证第一~第六指标的值越大绘出的点越靠近外侧。比如，以上所述第四指标是含圆度低的光点的细胞的比例，而此时的第四指标为不含圆度低的光点的细胞的比例。
界面260具有如此结构，则操作人员能够一目了然地掌握第一~第六指标的相关关系。另外，也可以在图13（b）所示实施方式2的界面230中一并显示图17所示雷达图。
（实施方式6）
如图18所示，实施方式6的荧光图像分析装置10具有包括荧光显微镜的拍摄单元300并用其取代图1所示拍摄单元100。实施方式6的其他结构与图1所示结构相同。
拍摄单元300具有光源301~303、镜304、分色镜305和306、遮断器311、1/4波片312、光束扩展器313、聚光透镜314、分色镜315、物镜316、载置台320、聚光透镜331、拍摄部件332、控制器341和342。载置台320上放置载玻片321。载玻片321上承载预处理单元20进行预处理而制备的试样20a。
光源301~303分别与图1所示光源121~123相同。镜304反射来自光源301的光。分色镜305让来自光源301的光透过，并反射来自光源302的光。分色镜306让来自光源301、302的光透过，并反射来自光源303的光。来自光源301~303的光的光轴因镜304和分色镜305、306而相互一致。
遮断器311由控制器341驱动且在让光源301~303射出的光通过的状态和遮断光源301~303射出的光的状态之间切换。以此调整对试样20a光照的时间。1/4波片312将光源301~303射出的线偏振光转换为圆偏振光。与核酸探针结合的荧光色素对一定偏振方向的光有反应。因此，将光源301~303射出的激发用光转换为圆偏振光就易于使激发用光的偏振方向与荧光色素有反应的偏振方向一致。以此就能高效地激发荧光色素产生荧光。光束扩展器313扩大载玻片321上的光的照射区域。聚光透镜314使光聚集，使物镜316向载玻片321照射平行光。
分色镜315反射从光源301~303射出的光，使试样20a产生的荧光透过。物镜316将分色镜315反射的光导向载玻片321。载置台320由控制器342驱动。试样20a产生的荧光通过物镜316，透过分色镜315。聚光透镜331聚集透过分色镜315的荧光并导向拍摄部件332的拍摄面332a。拍摄部件332拍摄照射在拍摄面332a的荧光的像，生成荧光图像。拍摄部件332例如由CCD等构成。
控制器341、342和拍摄部件332与图1所示处理部件11连接，处理部件11控制控制器341、342和拍摄部件332并接受拍摄部件332拍摄的荧光图像。另外，与图1所示使用流动池110时不同，拍摄部件332拍摄的荧光图像中有时会出现图2（a）所示细胞密集接触的状态。因此，处理部件11要进行各种处理，例如对获取的荧光图像按细胞核进行划分的处理、或在荧光图像中设定对应于一个细胞核的区域的处理等。
实施方式6也与其他实施方式同样地能够获取第一~第三图像，因此能根据第一~第三图像获取第一~第六指标并根据获取的第一~第六指标判断预处理是否恰当。
（实施方式7）
如图19所示，实施方式7的荧光图像分析装置10具有图1所示预处理单元20。处理部件11连接着预处理单元20，其接受来自预处理单元20的信号，控制预处理单元20。预处理单元20接受了采自受检者并经离心分离等处理的样本10a后，对样本10a进行预处理，制备试样20a。拍摄单元100测定预处理单元20制备的试样20a，获取第一~第三图像和明视野图像。实施方式7的其他结构与图1所示结构相同。
如此，荧光图像分析装置10具有预处理单元20，这样一来，操作人员只要将样本10a放置到荧光图像分析装置10即可，装置能够自动进行预处理，自动分析预处理制备的试样20a。此外，处理部件11还获取第一~第六指标并判断预处理单元20的预处理是否恰当。以此，操作人员能够就荧光图像分析装置10自动进行的样本分析掌握预处理是否恰当。
（实施方式8）
如图20（a）所示，实施方式8的存储部件12存储着用于判断细胞是阳性还是阴性的光点图形。图20（a）的光点图形显示了图3（a）~(d)例示的荧光图像中的光点的状态。图20（a）所示光点图形中，“G”表示第一图像中的绿色的光点，“R”表示第二图像中的红色的光点，“F”表示叠合的光点，即合成图像中的黄色的光点。G、R、F后面紧跟的数字分别表示G、R、F光点数目。比如“G2R2F0”表示，第一图像中的绿色光点为2个，第二图像中的红色光点为2个，合成图像中的黄色光点为0个。
另外，也可以用G表示合成图像的绿色光点，用R表示合成图像的红色光点。此时，图20（a）第1~4行所示光点的图形分别为“G2R2F0”、“G1R2F1”、“G1R1F2”、“G1R1F1”。
图20（a）第1~4行所示光点的图形分别对应于图3（a）~（d）所示荧光图像的光点。图20（a）所示光点的图形与基于该光点图形的判断相对应。例如，第一行光点的图形与“阴性”相对应，第二行光点的图形与“阳性”相对应。存储部件12所存储的不限于图20（a）所示四个光点图形，还存储着可能产生的复数个组合。
在实施方式8中进行与图12（a）所示实施方式1相同的处理。以下就与实施方式1不同的处理进行说明。
在步骤S23，处理部件11同样地按照上文参照图2（a）~（d）说明的步骤针对试样20a所含有的复数个细胞的每一个分别从荧光图像提取光点。然后，处理部件11根据光点图形分类复数个细胞中的每一个，根据复数个细胞的分类结果生成用于判断试样20a是阳性还是阴性的信息。
具体而言，在步骤S23，处理部件11比较细胞的光点图形和图20（a）所示存储部件12中所存储的光点图形，就复数个细胞中的每一个分别判断细胞是阳性还是阴性。处理部件11在细胞的光点图形与阳性图形吻合时判断该细胞为阳性，在细胞光点图形与阴性图形吻合时判断该细胞为阴性。然后，处理部件11根据复数个细胞各自的判断结果生成阳性细胞数目、阴性细胞数目、阳性细胞数目在检出细胞数目中的比例、阴性细胞数目在检出细胞中的比例、基于光点数目和颜色而定的图形的相关信息、以及提示试样20a是阳性还是阴性的信息。关于在步骤S23生成的信息随后参照图20（b）进行说明。
在步骤S24，处理部件11在显示部件13上显示包括在步骤S23生成的信息在内的界面221。如图20（b）所示，界面221的显示内容均为用于判断试样20a是阳性还是阴性的信息。
如图20（b）所示，基于光点数目和颜色而定的图形的相关信息包括：图20（a）所示光点的图形、与该光点图形吻合的细胞数目、与该光点图形吻合的细胞数目在全部细胞数目中所占比例。如此，基于光点数目和颜色而定的图形的相关信息包括基于光点图形对复数个细胞中的每一个进行分类的结果。
另外，显示图20（b）所示界面221的话，事先从图20（a）所示阳性光点图形中选择被视为阳性的光点图形。然后，与所选阳性光点图形吻合的细胞被判断为阳性细胞。在界面221上显示的阳性细胞数目为与所选阳性光点图形吻合的细胞数目。因此，设阴性细胞数目为N1、此时的阳性细胞数目为N2时，阳性细胞的比例为N2除以N1+N2，阴性细胞的比例为N1除以N1+N2。
提示试样20a是阳性还是阴性的信息由“可能阳性”、“可能阴性”等文字信息构成。比如，当阳性细胞比例大于一定阈值时或阴性细胞比例小于一定阈值时，显示“可能阳性”。当阴性细胞比例大于一定阈值时或阳性细胞比例小于一定阈值时，显示“可能阴性”。也可以不采用“可能阴性”，不进行显示。此外，也可与图13（b）同样地在界面221中一并显示基于指标的信息。
根据实施方式8，医生等参照界面221的显示内容就能精确地判断试样20a和作为试样20a来源的样本是阳性还是阴性。
（其他实施方式）
在上述实施方式中靶位点为BCR基因和ABL基因，但靶位点不限于此，也可以是其他基因区域。在慢性髓细胞性白血病的情况下，BCR基因和ABL基因有时会发生易位，与之相同，在特定疾病中，有时也会在特定基因区域出现异常。当靶位点为其他基因区域时，同样地，处理部件11算出相对于特定疾病来说的阳性细胞数目或阳性细胞数目在检出细胞数目中的比例，使显示部件13上显示算出的数目或比例作为试样20a的分析结果。此时，可使处理部件11与实施方式8同样地生成图20（b）所示用于判断试样20a是阳性还是阴性的信息，并在显示部件13上显示生成的信息。
靶位点例如也可以是HER2基因和17号染色体的着丝粒区域CEP17。HER2基因会伴随细胞的癌变而扩增，CEP17不会伴随细胞的癌变而扩增。因此，以HER2基因和CEP17为靶位点时，例如可以根据对阴性样本进行预处理而制备的试样20a判断预处理恰当与否。即，关于阴性样本，根据细胞核内分别存在两个HER2基因的光点和CEP17的光点这一事实就能判断预处理恰当与否。此外，当用采自受检者的实际样本判断预处理恰当与否时，可以根据CEP17的光点判断预处理恰当与否。
此外，靶位点不限于核酸，其还可以是细胞表面等，还可以是细胞以外的物质。对靶位点的标记方法不限于杂交，也可以通过抗原抗体反应来对靶位点标记。还可以使预处理单元20自动进行离心分离等处理。在预处理单元20进行预处理的样本不限于血液样本，比如，还可以是血浆样本、从病变组织采集的样本等。作为分析对象的细胞也不限于白细胞，例如，也可以采用上皮细胞。
编号说明
10 荧光图像分析装置
11 处理部件
12 存储部件
13 显示部件
20 预处理单元
20a 试样
110 流动池
121~124、301~303 光源
154、332 拍摄部件

Claims (43)

1.一种荧光图像分析装置，其测定经过预处理后制备的试样并进行分析，其中预处理包括用荧光色素标记靶位点的步骤，所述荧光图像分析装置包括：
用光照射所述试样的光源、
对因所述光的照射而从所述试样产生的荧光进行拍摄的拍摄部件、
对所述拍摄部件拍摄的荧光图像进行处理的处理部件；
其中，所述处理部件就所述试样中所含复数个细胞中的每一个分别从所述荧光图像中提取标记所述靶位点的所述荧光色素所产生的荧光的光点，
所述处理部件根据就所述复数个细胞中的每一个分别提取的所述光点生成用于判断所述试样是阳性还是阴性的信息。
2.根据权利要求1所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件生成由阳性细胞数目、阴性细胞数目、阳性细胞数目在检出细胞数目中的比例、以及阴性细胞数目在检出细胞数目中的比例所构成的群中选出的至少一种信息来作为用于判断所述试样是阳性还是阴性的信息。
3.根据权利要求1所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件生成基于所述光点的颜色和数目而定的图形的相关信息来作为用于判断所述试样是阳性还是阴性的信息。
4.根据权利要求1所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件生成提示所述试样是阳性还是阴性的信息来作为用于判断所述试样是阳性还是阴性的信息。
5.根据权利要求1所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件在所述细胞的光点的图形与阳性图形吻合时判断所述细胞为阳性，
所述处理部件根据所述复数个细胞的判断结果算出阳性细胞数目以及阳性细胞数目在检出细胞数目中的比例中的至少其中之一来作为用于判断所述试样是阳性还是阴性的信息。
6.根据权利要求1所述的荧光图像分析装置，还包括：
存储部件，用于存储复数个用以判断所述细胞是阳性还是阴性的所述细胞的光点的图形；
其中，所述处理部件比较从所述荧光图像提取的所述光点的图形与所述存储部件中所存储的所述光点的图形，就所述复数个细胞中的每一个分别判断所述细胞是阳性还是阴性。
7.根据权利要求1所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述拍摄部件拍摄第一波长的第一图像和第二波长的第二图像，
所述处理部件根据所述第一图像的所述光点和所述第二图像的所述光点生成用于判断所述试样是阳性还是阴性的信息。
8.根据权利要求1所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
根据提取的所述光点获取反映所述光点的状态的指标，
根据获取的所述指标判断所述预处理是否恰当。
9.根据权利要求1所述的荧光图像分析装置，还包括供所述试样流动的流动池；
其中，所述光源用光照射在所述流动池流动的所述试样，
所述拍摄部件拍摄在所述流动池流动的试样所产生的荧光。
10.根据权利要求1所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
还包括用于进行所述预处理的预处理单元。
11.根据权利要求1所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
测定在所述预处理制备的试样并进行分析；
其中，所述预处理包括让所述荧光色素标记的核酸探针与所述靶位点杂交的步骤。
12.根据权利要求1所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件根据所述荧光图像中的所述光点的分布情况检出异常细胞。
13.根据权利要求12所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件检出BCR基因或ABL基因易位并生成了BCR-ABL融合基因的细胞作为异常细胞。
14.一种荧光图像分析装置，其测定经过预处理后制备的试样并进行分析，其中预处理包括用荧光色素标记靶位点的步骤，所述荧光图像分析装置包括：
用光照射所述试样的光源、
对因所述光的照射而从所述试样产生的荧光进行拍摄的拍摄部件、
对所述拍摄部件所拍摄的荧光图像进行处理的处理部件、
显示部件；
其中，所述处理部件就所述试样中所含复数个细胞中的每一个分别从所述荧光图像中提取标记所述靶位点的所述荧光色素所产生的荧光的光点，
所述处理部件根据就所述复数个细胞中的每一个分别提取的所述光点使所述显示部件上显示用于判断所述试样是阳性还是阴性的信息。
15.根据权利要求14所述的荧光图像分析装置，还包括：
存储部件，用于存储复数个用以判断所述细胞是阳性还是阴性的所述细胞的光点的图形；
其中，所述处理部件比较从所述荧光图像提取的所述光点的图形与所述存储部件中所存储的所述光点的图形，就所述复数个细胞中的每一个分别判断所述细胞是阳性还是阴性，并根据所述复数个细胞的每一个的判断结果使所述显示部件上显示用于判断所述试样是阳性还是阴性的信息。
16.根据权利要求14所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件使基于所述指标的信息和用于判断所述试样是阳性还是阴性的信息相关联地显示在所述显示部件上。
17.一种对经过预处理后制备的试样进行分析的分析方法，其中预处理包括用荧光色素标记靶位点的步骤，所述分析方法包括以下步骤：
用光照射在所述预处理中制备的所述试样；
对因所述光的照射而从所述试样产生的荧光进行拍摄；
就所述试样中所含复数个细胞的每一个分别从荧光图像中提取标记所述靶位点的所述荧光色素所产生的荧光的光点；
根据就所述复数个细胞的每一个分别提取的所述光点生成用于判断所述试样是阳性还是阴性的信息。
18.一种含有靶位点被荧光色素标记的复数个细胞的试样的分析方法，包括以下步骤：
从所述复数个细胞各自的荧光图像中提取所述荧光色素所产生的荧光的光点的图形；
根据所述光点的图形对所述复数个细胞的每一个进行分类；
根据所述复数个细胞的分类结果生成用于判断所述试样是阳性还是阴性的信息。
19.一种测定经过预处理后制备的试样并进行分析的荧光图像分析装置，其中预处理包括用荧光色素标记靶位点的步骤，所述荧光图像分析装置包括：
用光照射所述试样的光源、
对因所述光的照射而从所述试样产生的荧光进行拍摄的拍摄部件、
对所述拍摄部件所拍摄的荧光图像进行处理的处理部件；
其中，所述处理部件从所述荧光图像中提取标记所述靶位点的所述荧光色素所产生的荧光的光点，
所述处理部件根据提取的所述光点获取反映所述光点的状态的指标，
所述处理部件根据获取的所述指标判断所述预处理是否恰当。
20.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件根据所述拍摄部件拍摄的图像检出细胞，计数检出的细胞来获取第一数目，并计数根据所述光点被定为分析对象的细胞来获取第二数目，获取所述第二数目在所述第一数目中的比例来作为所述指标。
21.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件获取基于所述光点的亮度的值作为所述指标。
22.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件根据所述拍摄部件拍摄的图像检出细胞，并获取基于所述光点的亮度与所述细胞中所述光点的背景区域的亮度之比的值作为所述指标。
23.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件获取基于所述光点的形状的值作为所述指标。
24.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件获取基于所述光点的尺寸的值作为所述指标。
25.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件获取基于所述光点的数目的值作为所述指标。
26.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，还包括显示部件；
所述处理部件使所述显示部件上显示所述预处理恰当与否的判断结果。
27.根据权利要求26所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件测定标准试样并获取所述指标，且使所述显示部件上显示基于所获取的所述指标的、所述预处理恰当与否的判断结果。
28.根据权利要求26所述的荧光图像分析装置，还包括：
存储部件，用于存储在测定作业中获取的所述光点的相关信息；
其中，所述处理部件根据一定期间内存储在所述存储部件中的所述光点的相关信息获取所述指标，并使所述显示部件上显示基于所获取的所述指标的、所述预处理恰当与否的判断结果。
29.根据权利要求26所述的荧光图像分析装置，还包括存储部件；
所述处理部件根据在测定作业中获取的所述光点的相关信息就所述试样的每一个分别获取所述指标，并将获取的所述指标与所述试样相关联地存储到所述存储部件。
30.根据权利要求26所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件针对每一次所述试样的测定获取所述指标，并使所述显示部件上显示基于获取的所述指标的、所述预处理恰当与否的判断结果。
31.根据权利要求26所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件使所述显示部件上显示所述指标。
32.根据权利要求26所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件使所述显示部件上显示表示所述指标随时间的变化的图表。
33.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件通过比较一定阈值与所述指标来判断所述预处理恰当与否。
34.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，还包括：
供所述试样流动的流动池；
其中，所述光源用光照射在所述流动池流动的所述试样，
所述拍摄部件拍摄在所述流动池流动的试样所产生的荧光。
35.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，其特征在于还包括：
用于进行所述预处理的预处理单元。
36.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
测定在所述预处理制备的试样并进行分析；
其中，所述预处理包括让所述荧光色素所标记的核酸探针与所述靶位点杂交的步骤。
37.根据权利要求19所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件根据所述荧光图像中的所述光点的分布情况来检出异常细胞。
38.根据权利要求37所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件检出BCR基因或ABL基因易位并生成了BCR-ABL融合基因的细胞作为异常细胞。
39.一种测定经过预处理后制备的试样并进行分析的荧光图像分析装置，其中预处理包括用荧光色素标记靶位点的步骤，所述荧光图像分析装置包括：
用光照射所述试样的光源、
对因所述光的照射而从所述试样产生的荧光进行拍摄的拍摄部件、
对所述拍摄部件所拍摄的荧光图像进行处理的处理部件、
显示部件；
其中，所述处理部件从所述荧光图像中提取标记所述靶位点的所述荧光色素所产生的荧光的光点，
所述处理部件根据提取的所述光点获取反映所述光点的状态的指标，
所述处理部件使所述显示部件上显示基于所获取的所述指标的信息。
40.根据权利要求39所述的荧光图像分析装置，还包括存储部件；
其中，所述处理部件根据在测定作业中获取的所述光点的相关信息就所述试样中的每一个分别获取所述指标，并将获取的所述指标与所述试样相关联地存储到所述存储部件。
41.根据权利要求39所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件根据所述荧光图像算出在特定疾病中阳性细胞的数目或所述阳性细胞的数目在检出细胞数目中的比例来作为所述试样的分析结果显示在所述显示部件。
42.根据权利要求41所述的荧光图像分析装置，其特征在于：
所述处理部件将基于所述指标的信息和所述试样的分析结果相关联地显示在所述显示部件。
43.一种针对包括用荧光色素标记靶位点的步骤在内的细胞分析的预处理的评价方法，所述预处理的评价方法包括以下步骤：
用光照射在所述预处理中制备的试样；
对因所述光的照射而从所述试样产生的荧光进行拍摄；
从荧光图像提取标记所述靶位点的所述荧光色素所产生的荧光的光点；
根据提取的所述光点获取反映所述光点的状态的指标。
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