CN108451970B - 一种提取银杏叶多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物有效成分提取技术领域,具体涉及一种提取银杏叶多糖的方法。本发明所述提取银杏叶多糖的方法,采用了现有技术中常规的水提醇沉的方法从银杏叶中提取银杏叶多糖,并在水提的同时加入选定的氨基酸离子液体进行活化提取,在有效促进目标产物银杏叶多糖溶出的同时,有效抑制了副产物银杏酸的溶出,进一步提升了目标产物的品质,降低了后续降毒处理的工艺;同时,所述氨基酸离子液体的加入,也使得整个水提步骤可以在较低的温度下进行,有效降低了能耗。
Description
技术领域
本发明属于植物有效成分提取技术领域,具体涉及一种提取银杏叶多糖的方法。
背景技术
银杏树为古老的树种,被称为“活化石”植物,是神奇的医疗之树,也是我国特有的珍贵树种。2亿5千多年前侏罗纪恐龙掌控地球时,银杏已经是最繁盛的植物之一。地球生命历经千亿年的变动,尤其是第四世纪冰川覆盖之后,只有银杏仍保持它最原始的面貌,在生物演化学史上被称为“活化石”。其叶、果实、种子均有较高的药用价值,其药理作用不断被认识,临床应用范围逐步扩大。
银杏叶,又称白果叶,是一种具有很高药用价值的植物,随着银杏叶中有效成分的药用、保健等综合价值的挖掘和开发,对银杏叶的系统研究在世界范围内掀起了高潮。银杏叶中蛋白质含量10.9%-15.5%,总糖含量7.3%-8.7%,还原糖含量4.0%-5.6%,黄酮含量0.4%-1.2%。目前,已开发的银杏叶提取物主要包括银杏叶总黄酮、银杏叶多糖、银杏酸等。银杏叶黄酮具有清除自由基和扩张血管、拮抗血小板因子的作用;银杏叶多糖则具有降低血糖、延缓衰老、提高免疫力的作用;银杏酸则具有抗肿瘤、抗微生物的作用,但又有较强的胚胎毒性和细胞毒性,因此,银杏酸也是银杏叶提取物中主要的毒性成分。
银杏叶多糖由于具有延缓衰老,免疫调节和抗肿瘤等作用,成为了诸多保健品中常用的营养成分。而现有技术中对于银杏叶多糖的提取,无论采用水提醇沉的方法还是酶法提取,都存在提取物中银杏酸含量过高的问题,进一步影响了后续的提纯成本,也造成了一点的资源浪费。
发明内容
为此,本发明所要解决的技术问题在于提供一种提取银杏叶多糖的方法,以解决现有技术中银杏叶多糖提取中银杏酸含量过高的问题。
为解决上述技术问题,本发明所述的一种提取银杏叶多糖的方法,包括如下步骤:
(1)取干燥的银杏叶粉碎并过筛,备用;
(2)将所述银杏叶加水,并加入氨基酸离子液体进行提取;
(3)收集提取液进行固液分离,并收集上清液,并进行浓缩;
(4)向浓缩后的浓缩液中加入乙醇进行醇沉处理,并进行固液分离;
(5)收集沉淀物洗涤,并进行真空冷冻干燥,即得。
所述步骤(2)中,所述氨基酸离子液体为四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体[TBP][Ala]。
所述步骤(2)中,所述氨基酸离子液体与水的加入量比为1:10-20。
所述步骤(2)中,所述银杏叶与水的固液比为1:25-30。
所述步骤(2)中,所述提取温度为50-60℃。
所述步骤(3)中,所述浓缩步骤将所述提取液浓缩至原体积的30-35%。
所述步骤(3)中,还包括收集残渣进行二次提取的步骤。
所述步骤(4)中,所述乙醇为无水乙醇。
所述步骤(4)中,所述乙醇的加入量为所述浓缩液体积的1.5-2体积倍量。
所述步骤(4)中,所述醇沉步骤为2-3次。
本发明所述提取银杏叶多糖的方法,采用了现有技术中常规的水提醇沉的方法从银杏叶中提取银杏叶多糖,并在水提的同时加入选定的氨基酸离子液体进行活化提取,在有效促进目标产物银杏叶多糖溶出的同时,有效抑制了副产物银杏酸的溶出,进一步提升了目标产物的品质,降低了后续降毒处理的工艺;同时,所述氨基酸离子液体的加入,也使得整个水提步骤可以在较低的温度下进行,有效降低了能耗。
具体实施方式
本发明下述实施例中,所述四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体[TBP][Ala]可以为现有市售产品,也可以按照现有技术方案进行合成,即可参考如《氨基酸离子液体研究进展》(吴阳等,渤海大学学报,2008年3月)中记载的方法进行合成。
本发明下述实施例中对于目标产物银杏叶多糖含量的测定方法,可以参照如毕业论文《银杏叶多糖的提取与含量测定》中记载的方法进行,即采用苯酚-硫酸法,以葡萄糖为标准样品,具体包括:精确称取0.1g葡萄糖,用蒸馏水定容至100mL容量瓶中,摇匀备用;吸取上述1mg/mL的葡萄糖溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00ml,分别用蒸馏水稀释至50mL容量瓶中,得到不同浓度的葡萄糖标准溶液;从各个瓶中准确移取2.00mL,置于25mL具塞比色管中,加入5%苯酚溶液1.00mL,摇匀,迅速加入浓硫酸5.00mL,静置5min后,置于沸水浴中加热15min,冷却至室温,用分光光度计在490nm处测定吸光度,制作标准曲线。取各实施例样品按标准曲线绘制项下方法测定其吸光值并计算多糖含量。
本发明下述实施例中银杏酸含量测定方法,采用固相萃取HPLC法,色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为甲醇-3%冰醋酸(9:1),检测波长为310nm,柱温为30℃,流速为1.0mL/min。
实施例1
本实施例所述提取银杏叶多糖的方法,包括如下步骤:
(1)取干燥的银杏叶粉碎并过筛,精确称取1kg银杏叶,备用;
(2)将所述银杏叶加水30kg,并加入2kg四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体[TBP][Ala]进行提取,混匀,并于55℃进行恒温提取3h;
(3)收集提取物进行固液分离,分别收集上清液和残渣,取残渣按照步骤(2)中条件进行第二次提取,收集两次上清液合并,并进行真空浓缩至提取液体积的30%;
(4)向浓缩后的浓缩液中加入1.5体积倍量的无水乙醇进行醇沉处理,并进行固液分离,收集沉淀物后按照上述条件进行二次沉淀;
(5)收集沉淀物洗涤,并进行真空冷冻干燥,即得。
经检测计算,所得银杏叶多糖的提取率为8.5%,银杏酸的含量为0.2ppm。
可见,本发明所述方法在有效提高银杏叶多糖提取率的基础上,有效抑制了银杏酸的溶出。
实施例2
本实施例所述提取银杏叶多糖的方法,包括如下步骤:
(1)取干燥的银杏叶粉碎并过筛,精确称取1kg银杏叶,备用;
(2)将所述银杏叶加水25kg,并加入2kg四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体[TBP][Ala]进行提取,混匀,并于50℃进行恒温提取3h;
(3)收集提取物进行固液分离,分别收集上清液和残渣,取残渣按照步骤(2)中条件进行第二次提取,收集两次上清液合并,并进行真空浓缩至提取液体积的35%;
(4)向浓缩后的浓缩液中加入1.5体积倍量的无水乙醇进行醇沉处理,并进行固液分离,收集沉淀物后按照上述条件进行二次沉淀;
(5)收集沉淀物洗涤,并进行真空冷冻干燥,即得。
经检测计算,所得银杏叶多糖的提取率为8.2%,银杏酸的含量为0.3ppm。
可见,本发明所述方法在有效提高银杏叶多糖提取率的基础上,有效抑制了银杏酸的溶出。
实施例3
本实施例所述提取银杏叶多糖的方法,包括如下步骤:
(1)取干燥的银杏叶粉碎并过筛,精确称取1kg银杏叶,备用;
(2)将所述银杏叶加水28kg,并加入2kg四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体[TBP][Ala]进行提取,混匀,并于60℃进行恒温提取3h;
(3)收集提取物进行固液分离,分别收集上清液和残渣,取残渣按照步骤(2)中条件进行第二次提取,收集两次上清液合并,并进行真空浓缩至提取液体积的30%;
(4)向浓缩后的浓缩液中加入2体积倍量的无水乙醇进行醇沉处理,并进行固液分离,收集沉淀物后按照上述条件进行二次沉淀;
(5)收集沉淀物洗涤,并进行真空冷冻干燥,即得。
经检测计算,所得银杏叶多糖的提取率为8.3%,银杏酸的含量为0.3ppm。
可见,本发明所述方法在有效提高银杏叶多糖提取率的基础上,有效抑制了银杏酸的溶出。
实施例4
本实施例所述提取银杏叶多糖的方法,包括如下步骤:
(1)取干燥的银杏叶粉碎并过筛,精确称取1kg银杏叶,备用;
(2)将所述银杏叶加水30kg,并加入1.5kg四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体[TBP][Ala]进行提取,混匀,并于55℃进行恒温提取3h;
(3)收集提取物进行固液分离,分别收集上清液和残渣,取残渣按照步骤(2)中条件进行第二次提取,收集两次上清液合并,并进行真空浓缩至提取液体积的30%;
(4)向浓缩后的浓缩液中加入2体积倍量的无水乙醇进行醇沉处理,并进行固液分离,收集沉淀物后按照上述条件进行二次沉淀;
(5)收集沉淀物洗涤,并进行真空冷冻干燥,即得。
经检测计算,所得银杏叶多糖的提取率为8.3%,银杏酸的含量为0.2ppm。
可见,本发明所述方法在有效提高银杏叶多糖提取率的基础上,有效抑制了银杏酸的溶出。
实施例5
本实施例所述提取银杏叶多糖的方法,包括如下步骤:
(1)取干燥的银杏叶粉碎并过筛,精确称取1kg银杏叶,备用;
(2)将所述银杏叶加水30kg,并加入2.5kg四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体[TBP][Ala]进行提取,混匀,并于60℃进行恒温提取3h;
(3)收集提取物进行固液分离,分别收集上清液和残渣,取残渣按照步骤(2)中条件进行第二次提取,收集两次上清液合并,并进行真空浓缩至提取液体积的35%;
(4)向浓缩后的浓缩液中加入2体积倍量的无水乙醇进行醇沉处理,并进行固液分离,收集沉淀物后按照上述条件进行沉淀3次;
(5)收集沉淀物洗涤,并进行真空冷冻干燥,即得。
经检测计算,所得银杏叶多糖的提取率为8.4%,银杏酸的含量为0.3ppm。
可见,本发明所述方法在有效提高银杏叶多糖提取率的基础上,有效抑制了银杏酸的溶出。
对比例
本对比例中所述银杏叶多糖的提取方法同实施例1,其区别仅在于,在水提步骤中不加入所述四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体[TBP][Ala]。
经检测计算,所得银杏叶多糖的提取率为5.4%,银杏酸的含量为1.1ppm。
显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例,而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (7)
1.一种提取银杏叶多糖的方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)取干燥的银杏叶粉碎并过筛,备用;
(2)将所述银杏叶加水,并加入氨基酸离子液体四丁基磷酸盐丙氨酸离子液体[TBP][Ala]进行提取;
所述氨基酸离子液体与水的加入量比为1:10-20;所述银杏叶与水的固液比为1:25-30;
(3)收集提取液进行固液分离,并收集上清液,并进行浓缩;
(4)向浓缩后的浓缩液中加入乙醇进行醇沉处理,并进行固液分离;
(5)收集沉淀物洗涤,并进行真空冷冻干燥,即得。
2.根据权利要求1所述的提取银杏叶多糖的方法,其特征在于,所述步骤(2)中,所述提取温度为50-60℃。
3.根据权利要求2所述的提取银杏叶多糖的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,所述浓缩步骤将所述提取液浓缩至原体积的30-35%。
4.根据权利要求3所述的提取银杏叶多糖的方法,其特征在于,所述步骤(3)中,还包括收集残渣进行二次提取的步骤。
5.根据权利要求1-4任一项所述的提取银杏叶多糖的方法,其特征在于,所述步骤(4)中,所述乙醇为无水乙醇。
6.根据权利要求5所述的提取银杏叶多糖的方法,其特征在于,所述步骤(4)中,所述乙醇的加入量为所述浓缩液体积的1.5-2体积倍量。
7.根据权利要求6所述的提取银杏叶多糖的方法,其特征在于,所述步骤(4)中,所述醇沉步骤为2-3次。
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