CN108403730A - 一种去除银杏叶中银杏酸的方法及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种去除银杏叶中银杏酸的方法及其应用。本发明所述去除银杏叶中银杏酸的方法，以选定的氨基酸离子液体为预处理溶剂对银杏叶进行浸渍预处理，有效抑制了银杏叶中银杏酸的溶出，降低了后续银杏叶提取物中银杏酸的含量，有效抑制了副产物银杏酸的溶出，进一步提升了目标产物的品质，降低了后续降毒处理的工艺，并在有效降低银杏酸含量的同时，保证了银杏叶多糖和银杏叶黄酮的提取效率。

Description

一种去除银杏叶中银杏酸的方法及其应用

技术领域

本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种去除银杏叶中银杏酸的方法及其应用。

背景技术

银杏树为古老的树种，被称为“活化石”植物，是神奇的医疗之树，也是我国特有的珍贵树种。2亿5千多年前侏罗纪恐龙掌控地球时，银杏已经是最繁盛的植物之一。地球生命历经千亿年的变动，尤其是第四世纪冰川覆盖之后，只有银杏仍保持它最原始的面貌，在生物演化学史上被称为“活化石”。其叶、果实、种子均有较高的药用价值，其药理作用不断被认识，临床应用范围逐步扩大。

银杏叶，又称白果叶，是一种具有很高药用价值的植物，随着银杏叶中有效成分的药用、保健等综合价值的挖掘和开发，对银杏叶的系统研究在世界范围内掀起了高潮。银杏叶中蛋白质含量10.9％-15.5％，总糖含量7.3％-8.7％，还原糖含量4.0％-5.6％，黄酮含量0.4％-1.2％。目前，已开发的银杏叶提取物主要包括银杏叶总黄酮、银杏叶多糖、银杏酸等。银杏叶黄酮具有清除自由基和扩张血管、拮抗血小板因子的作用；银杏叶多糖则具有降低血糖、延缓衰老、提高免疫力的作用；银杏酸则具有抗肿瘤、抗微生物的作用，但又有较强的胚胎毒性和细胞毒性，因此，银杏酸也是银杏叶提取物中主要的毒性成分。

若不控制银杏果中银杏酸的含量，势必给安全食用带来隐患。如何在银杏加工过程中降低银杏酸含量，同时有效保证银杏叶多糖和银杏叶黄酮等功能性成分的的提取效果，是目前银杏果加工的技术难题。

发明内容

为此，本发明所要解决的技术问题在于提供一种去除银杏叶中银杏酸的方法，以解决现有技术中银杏叶提取物中银杏酸含量过高的问题。

为解决上述技术问题，本发明提供了一种去除银杏叶中银杏酸的方法，即包括以氨基酸离子液体为预处理溶剂，对银杏叶进行浸渍预处理的步骤，固液分离脱除溶剂后，收集所得银杏叶。

所述氨基酸离子液体为丙氨酸四氟化硼盐【AlaBF₄】。

所述银杏叶与所述氨基酸离子液体的用量比为1：10-15。

控制所述浸渍预处理步骤的温度为40-50℃。

还包括对预处理后的银杏叶进行干燥处理的步骤。

本发明还提供了由所述去除银杏叶中银杏酸的方法处理得到的银杏叶。

本发明还提供了所述去除银杏叶中银杏酸的方法在银杏叶有效成分提取技术领域中的应用。

所述银杏叶有效成分包括银杏叶多糖和/或银杏叶黄酮。

本发明还提供了一种提取银杏叶有效成分的方法，包括按照所述方法对银杏叶进行预处理的步骤。

所述的提取银杏叶有效成分的方法，包括如下步骤：

(1)包括按照所述方法对银杏叶进行预处理，得到干燥的银杏叶，并粉碎；

(2)取银杏叶加水进行提取，固液分离，分别收集提取液和银杏叶渣，提取液用于银杏叶多糖的提取，银杏叶渣用于银杏叶黄酮的提取；

(3)取所述提取液，加入乙醇进行醇沉处理，固液分离后分别收集上清液和沉淀，沉淀即为银杏叶多糖；

(4)调整上述上清液的乙醇浓度至50％-70％，与收集的银杏叶渣进行混合，并回流提取，固液分离并收集滤液，即为银杏叶黄酮粗提取物。

本发明所述去除银杏叶中银杏酸的方法，以选定的氨基酸离子液体为预处理溶剂对银杏叶进行浸渍预处理，有效抑制了银杏叶中银杏酸的溶出，降低了后续银杏叶提取物中银杏酸的含量，有效抑制了副产物银杏酸的溶出，进一步提升了目标产物的品质，降低了后续降毒处理的工艺。

经本发明所述方法预处理后的银杏叶可以采用现有技术一般方法进行其他有效成分的提取，并在有效降低银杏酸含量的同时，保证了银杏叶多糖和银杏叶黄酮的提取效率。

具体实施方式

本发明下述实施例中，所述丙氨酸四氟化硼盐【AlaBF₄】可以为现有市售产品，也可以按照现有技术方案进行合成，即可参考如《氨基酸离子液体研究进展》(吴阳等，渤海大学学报，2008年3月)中记载的方法进行合成。

本发明下述实施例中对于目标产物银杏叶多糖含量的测定方法，可以参照如毕业论文《银杏叶多糖的提取与含量测定》中记载的方法进行，即采用苯酚-硫酸法，以葡萄糖为标准样品，具体包括：精确称取0.1g葡萄糖，用蒸馏水定容至100mL容量瓶中，摇匀备用；吸取上述1mg/mL的葡萄糖溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00ml，分别用蒸馏水稀释至50mL容量瓶中，得到不同浓度的葡萄糖标准溶液；从各个瓶中准确移取2.00mL，置于25mL具塞比色管中，加入5％苯酚溶液1.00mL，摇匀，迅速加入浓硫酸5.00mL，静置5min后，置于沸水浴中加热15min，冷却至室温，用分光光度计在490nm处测定吸光度，制作标准曲线。取各实施例样品按标准曲线绘制项下方法测定其吸光值并计算多糖含量。

本发明下述实施例中，黄酮含量的测定以芦丁标样进行总黄酮含量的测定，按照现有技术中一般方法测定即可，具体包括：称取0.010g芦丁，用30％乙醇溶解并定容至100ml的容量瓶中，制成0.1mg/ml的芦丁标准溶液；分别吸取刚配制好的芦丁标液0.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml置于6个50ml的容量瓶中，依次编号0-5，用30％乙醇补至10ml后，加入0.8ml的5％的NaNO₂摇匀，静置6分钟再加入0.8ml的10％的硝酸铝摇匀，静置6min，加入10ml的1mol/l的氢氧化钠，摇匀15min后显色置于510nm处分光光度计测吸光度。并在此条件下测定提取液中黄酮的吸光度，在标准曲线上，读出黄酮含量就是芦丁含量，并计算出总黄酮提取率。

本发明下述实施例中银杏酸含量测定方法，采用固相萃取HPLC法，色谱柱为十八烷基硅烷键合硅胶柱(150mm×4.6mm，5μm)，流动相为甲醇-3％冰醋酸(9：1)，检测波长为310nm，柱温为30℃，流速为1.0mL/min。

实施例1

本实施例所述去除银杏叶中银杏酸的方法，具体包括：取干燥后的银杏叶1kg，加入至12kg的丙氨酸四氟化硼盐【AlaBF₄】中，于45℃温度下进行浸渍预处理2h，随后经固液分离和常规洗涤除去溶剂，收集所得银杏叶，并经真空干燥，即得。

实施例2

本实施例所述去除银杏叶中银杏酸的方法，具体包括：取干燥后的银杏叶1kg，加入至15kg的丙氨酸四氟化硼盐【AlaBF₄】中，于40℃温度下进行浸渍预处理2h，随后经固液分离和常规洗涤除去溶剂，收集所得银杏叶，并经真空干燥，即得。

实施例3

本实施例所述去除银杏叶中银杏酸的方法，具体包括：取干燥后的银杏叶1kg，加入至10kg的丙氨酸四氟化硼盐【AlaBF₄】中，于50℃温度下进行浸渍预处理2h，随后经固液分离和常规洗涤除去溶剂，收集所得银杏叶，并经真空干燥，即得。

实施例4

本实施例所述提取银杏叶多糖和银杏叶黄酮的方法，包括如下步骤：

(1)按照实施例1中方法对银杏叶进行预处理，并收集干燥后的银杏叶，粉碎过筛，备用；

(2)取预处理后的银杏叶1kg，加水30kg混匀，并于55℃进行恒温提取3h；将提取物进行固液分离，分别收集提取液和银杏叶渣，提取液用于银杏叶多糖的提取，银杏叶渣用于银杏叶黄酮的提取；

(3)取所述提取液，进行真空浓缩至提取液体积的30％，随后加入占所得浓缩液体积1.5体积倍量的无水乙醇进行醇沉处理，固液分离后分别收集上清液和沉淀，沉淀即为银杏叶多糖；

(4)调整上述上清液的乙醇浓度至50％，与步骤(2)收集的银杏叶渣进行混合，并回流提取，提取物经固液分离并收集滤液，即为银杏叶黄酮粗提取物。

实施例5

本实施例所述提取银杏叶多糖和银杏叶黄酮的方法，包括如下步骤：

(1)按照实施例2中方法对银杏叶进行预处理，并收集干燥后的银杏叶，粉碎过筛，备用；

(2)取预处理后的银杏叶1kg，加水25kg混匀，并于50℃进行恒温提取3h；将提取物进行固液分离，分别收集提取液和银杏叶渣，提取液用于银杏叶多糖的提取，银杏叶渣用于银杏叶黄酮的提取；

(3)取所述提取液，进行真空浓缩至提取液体积的30％，随后加入占所得浓缩液体积1.5体积倍量的无水乙醇进行醇沉处理，固液分离后分别收集上清液和沉淀，沉淀即为银杏叶多糖；

(4)调整上述上清液的乙醇浓度至60％，与步骤(2)收集的银杏叶渣进行混合，并回流提取，提取物经固液分离并收集滤液，即为银杏叶黄酮粗提取物。

实施例6

本实施例所述提取银杏叶多糖和银杏叶黄酮的方法，包括如下步骤：

(1)按照实施例1中方法对银杏叶进行预处理，并收集干燥后的银杏叶，粉碎过筛，备用；

(2)取预处理后的银杏叶1kg，加水28kg混匀，并于60℃进行恒温提取3h；将提取物进行固液分离，分别收集提取液和银杏叶渣，提取液用于银杏叶多糖的提取，银杏叶渣用于银杏叶黄酮的提取；

(3)取所述提取液，进行真空浓缩至提取液体积的30％，随后加入占所得浓缩液体积2体积倍量的无水乙醇进行醇沉处理，固液分离后分别收集上清液和沉淀，沉淀即为银杏叶多糖；

(4)调整上述上清液的乙醇浓度至70％，与步骤(2)收集的银杏叶渣进行混合，并回流提取，提取物经固液分离并收集滤液，即为银杏叶黄酮粗提取物。

对比例1

本对比例所述提取银杏叶多糖和银杏叶黄酮的方法同实施例4，其区别仅在于，不进行步骤(1)中对银杏叶进行预处理的步骤，直接以常规银杏叶进行银杏叶多糖和银杏叶黄酮的提取。

对比例2

本对比例所述提取银杏叶多糖和银杏叶黄酮的方法同实施例5，其区别仅在于，不进行步骤(1)中对银杏叶进行预处理的步骤，直接以常规银杏叶进行银杏叶多糖和银杏叶黄酮的提取。

对比例3

本对比例所述提取银杏叶多糖和银杏叶黄酮的方法同实施例6，其区别仅在于，不进行步骤(1)中对银杏叶进行预处理的步骤，直接以常规银杏叶进行银杏叶多糖和银杏叶黄酮的提取。

实验例

按照前述方法分别测定各实施例及对比例中银杏叶多糖、银杏叶黄酮，以及银杏酸(银杏叶多糖、银杏叶黄酮提取物中总量)的含量，计算其提取率，记录于下表1。

表1银杏叶多糖、银杏叶黄酮，以及银杏酸的含量测定

编号	银杏叶多糖	银杏叶黄酮	银杏酸
				实施例4	8.1％	91.2％	0.4ppm
实施例5	8.2％	91.1％	0.4ppm
				实施例6	8.5％	91.4％	0.3ppm
对比例1	6.8％	85.2％	1.5ppm
				对比例2	6.7％	85.3％	1.5ppm
对比例3	6.9％	85.5％	1.4ppm

从上表数据可知，本发明所述方法通过对银杏叶进行预处理的方式，有效抑制了副产物银杏酸的溶出，进一步提升了目标产物的品质，并在有效降低银杏酸含量的同时，保证了银杏叶多糖和银杏叶黄酮的提取效率，取得了预料不到的技术效果。

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (10)

1.一种去除银杏叶中银杏酸的方法，其特征在于，包括以氨基酸离子液体为预处理溶剂，对银杏叶进行浸渍预处理的步骤，固液分离脱除溶剂后，收集所得银杏叶。

2.根据权利要求1所述的去除银杏叶中银杏酸的方法，其特征在于，所述氨基酸离子液体为丙氨酸四氟化硼盐【AlaBF₄】。

3.根据权利要求1或2所述的去除银杏叶中银杏酸的方法，其特征在于，所述银杏叶与所述氨基酸离子液体的用量比为1：10-15。

4.根据权利要求1-3任一项所述的去除银杏叶中银杏酸的方法，其特征在于，控制所述浸渍预处理步骤的温度为40-50℃。

5.根据权利要求1-4任一项所述的去除银杏叶中银杏酸的方法，其特征在于，还包括对预处理后的银杏叶进行干燥处理的步骤。

6.由权利要求1-5任一项所述去除银杏叶中银杏酸的方法处理得到的银杏叶。

7.权利要求1-5任一项所述去除银杏叶中银杏酸的方法在银杏叶有效成分提取技术领域中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述银杏叶有效成分包括银杏叶多糖和/或银杏叶黄酮。

9.一种提取银杏叶有效成分的方法，其特征在于，包括按照权利要求1-5任一项所述方法对银杏叶进行预处理的步骤。

10.根据权利要求9所述的提取银杏叶有效成分的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)包括按照权利要求1-5任一项所述方法对银杏叶进行预处理，得到干燥的银杏叶，并粉碎；

(2)取银杏叶加水进行提取，固液分离，分别收集提取液和银杏叶渣，提取液用于银杏叶多糖的提取，银杏叶渣用于银杏叶黄酮的提取；

(3)取所述提取液，加入乙醇进行醇沉处理，固液分离后分别收集上清液和沉淀，沉淀即为银杏叶多糖；

(4)调整上述上清液的乙醇浓度至50％-70％，与收集的银杏叶渣进行混合，并回流提取，固液分离并收集滤液，即为银杏叶黄酮粗提取物。