CN104435015A - 一种高品质银杏黄酮提取工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种从银杏叶中提取高品质银杏黄酮的制备工艺。用去离子水从银杏叶中提取粗提液,经过滤后醇沉除杂、澄清剂除杂、富集银杏黄酮和内酯,利用极性、弱极性的大孔树脂进行初分离。树脂脱除银杏酸:最终银杏提取物产品。该发明的技术优势在于:a)联合使用不同性能的大孔树脂来富集银杏黄酮和内酯、脱出银杏酸,使产品品质明显提高,保证了产品。b)简化生产工艺,缩短生产周期,使生产成本有所降低。c)使用了无毒无害的有机溶剂及天然澄清剂,大大降低了产品中有毒有害物质的残留量,提高了产品的品质。
Description
技术领域
本发明涉及一种天然物提取工艺,具体涉及一种高品质银杏黄酮提取工艺。
背景技术
银杏黄酮主要存在于银杏科植物银杏Ginkgo biloba L.银杏的干燥茎叶中,银杏叶经过溶剂浸提分离、纯化等工艺过程制备的植物提取物,干燥叶中银杏黄酮的含量可达到2% -5%,银杏叶的有效成分包括:银杏双黄酮、异银杏双黄酮、白果素、槲皮素、山奈酚等,苦味成分为银杏酸A、B、C、M、J 等。
银杏总黄酮(FG),在20 世纪60 年代已经研究其扩血管活性,并初步应用于临床获得较好的疗效,后经专家多年的研究和开发,FG 不但有扩血管作用而且有抗炎、镇痛、抗自由基、降血脂、抗肿瘤及抗白血病等作用,已经被广泛应用于制药、保健品、日用品、化妆品等各个领域。
我国内外目前都主要以银杏叶为原料提取银杏黄酮。分离纯化银杏黄酮的方法很多,包括溶剂浸提法、超临界法、超声波法、微波辅助提法、微波法、高速逆流法、大孔树脂吸附法法、聚酰胺柱层析法、和酶法等,其中最成熟和最常用的提取工艺是溶剂浸提法,
一种精制银杏黄酮的方法( 申请号:200610038797),其特征是它基本上由下列步骤组成:步骤1.将1份质量的银杏叶提取物溶于200 份质量的乙醇质量分数为60%的乙醇—水中;步骤2.将步骤1中的GBE 溶液在0.05~0.3MPa 压力和10~50℃温度下进行第一次超滤,超滤膜为截留分子量为5000,10000 或30000dalton 的超滤膜,收集透过液;步骤3.将步骤2收集的透过液减压浓缩,再将1份质量的蒸干后的残留物溶于50份质量的无水乙醇;步骤4.在步骤3所得的溶液中加入β-环糊精或改性β-环糊精,使溶液中银杏黄酮与β-环糊精或改性β- 环糊精的物质的量之比为1∶9~1∶1,先在20~90℃水浴中反应15min~5h,再在常温下反应30min~24h ;步骤5.将步骤4中反应后的产物在0.05~0.3MPa 压力和10~50℃温度下进行第二次超滤,超滤膜为截留分子量为5000,10000 或30000dalton 的超滤膜,收集截留的浓缩后的液体,即得到精制的银杏黄酮乙醇溶液。
高纯度银杏黄酮类化合物高效提取制备方法( 申请号:200610068733),其特征在于包括以下步骤:A、采用秋天叶未黄时的银杏叶,烘干后保存;B. 将银杏叶粉碎,备用;C、用乙醇进行提取;D、提取液减压浓缩回收乙醇;E、将浓缩液稀释、冷却沉降;F 、清液进苯乙烯型大孔树脂吸附柱进行吸附;G、用醇类溶液洗脱;H、洗脱液减压浓缩,真空干燥,粉碎包装。
发明内容
故本发明的目的是为从银杏叶中制备高品质银杏黄酮制备工艺,以便解决目前市场上生产该产品的技术中所存在的问题,以便得到高回收率和高品质的银杏黄酮产品。
本发明的目的主要通过以下技术过程来实现:
具体步骤如下:
1) 从银杏叶中提取银杏黄酮:将银杏叶子粉碎过10目,加其重量5-8倍量的去离子水加热回流提取三次,每次提取1.5小时,过滤提取液,用去离子水洗涤提取渣,合并提取液及洗涤液,减压浓缩至一定的比重,就得到银杏黄酮的粗提液;
2) 醇沉除杂:将过程1)中得到的粗提液经过滤后,加入无水有机溶剂(Ⅰ),调节液体中有机溶剂含量到30-80%,充分搅拌、静置,沉降沉淀,过滤,清夜浓缩到无醇,待用;上述过程中有机溶剂(Ⅰ) 包括:甲醇、乙醇、丙酮;
3) 澄清剂除杂:将2)中待用的浓缩液,加热到30℃加入经过预处理过的澄清剂(Ⅱ),充分搅拌,沉降12H,每隔2H 搅拌一次,沉降完全后,过滤,清夜待用;上述过程中澄清剂(Ⅱ) 包括:壳聚糖、甲壳素、ZTC1+1 ;
4) 富集银杏黄酮和内酯:利用极性、弱极性的大孔树脂进行初分离。将非离子型的极性、弱极性大孔网状吸附树脂置于乙醇中浸泡24 小时,然后用乙醇、去离子水依次冲洗树脂;将经过上述过程活化过的树脂,用重力沉降法装柱;将3)中得到的清夜,上样于处理好、装填好的层析柱,在采用含水有机溶剂(Ⅲ) 对大孔树脂进行洗脱,分段收集,减压浓缩收集的含有银杏黄酮和内酯部分,得到富含银杏黄酮和内酯的浓缩液;上述含水有机溶剂(Ⅲ)中有机溶剂的含量为10-90v% ;上述含水有机溶剂(Ⅲ) 中的有机溶剂包括:甲醇、乙醇、丙酮、正丁醇。
5) 树脂脱除银杏酸:利用极性或者弱极性的大孔树脂进行初分离。将非离子型的极性或者弱极性大孔网状吸附树脂置于乙醇中浸泡24 小时,然后用乙醇、去离子水依次冲洗树脂;将经过上述过程活化过的树脂,用重力沉降法装柱;将4) 中得到的浓缩液,上样于处理好、装填好的层析柱,收集流出液,减压浓缩,干燥,等到最终银杏提取物产品;
所述步骤3) 中所用的澄清剂是通过规范要求经过预处理过的。
所述步骤4)、5) 中所用的大孔网状吸附树脂包括聚丙乙烯树脂、聚苯乙烯树脂、聚甲基丙烯酸酯树脂、丙烯酰胺与苯乙烯共聚物树脂。
该发明所述说的一种从银杏叶中制备高品质银杏黄酮的技术优势在于:
a) 联合使用不同性能的大孔树脂来富集银杏黄酮和内酯、脱出银杏酸,使产品品质明显提高,保证了产品。
b) 简化生产工艺,缩短生产周期,使生产成本有所降低。
c) 使用了无毒无害的有机溶剂及天然澄清剂,大大降低了产品中有毒有害物质的残留量,提高了产品的品质。
具体实施方式
实例1
1) 提取:将200g银杏黄酮含量为2.0%银杏叶原料经过粉碎,放入2000ml三角瓶中,加入1000ml 去离子水热回流提取,提取三次,一次1.5H/次,合并三次提取液,减压浓缩至d=1.05(比重),约400ml,经UV检测,浓缩液中银杏黄酮的浓度为9.8mg/ml,有效成分回收率为98%。
2) 醇沉:将过程1)中得到的浓缩液400ml,加入无水乙醇,调节液体中乙醇含量达50%,充分搅拌、静置,沉降沉淀,过滤,清夜浓缩到无醇,得到醇沉浓缩液380ml,经过UV检测,醇沉浓缩液中银杏黄酮的浓度为10.1mg/ml,有效成分回收率为95%。
3) 澄清剂除杂:将2)中待用的醇沉浓缩液380ml,加热到30℃后,加入液体量0.5%经过预处理过的澄清剂ZTC1+1,充分搅拌,沉降12H,每隔2H 搅拌一次,沉降完全后,过滤得到360ml 清夜待用,经UV 检测,清夜中银杏黄酮的浓度为10.6mg/ml,有效成分回收率为95%。
4) 富集银杏黄酮和内酯:将3) 中得到的清夜,上样于处理好、装填好的LS-46D 层析柱,在采用含水乙醇对大孔树脂进行洗脱,收集40-70%乙醇洗脱液,减压浓缩收集的含有银杏黄酮和内酯部分,得到富含银杏黄酮和内酯的浓缩液280ml,经UV 检测,浓缩液中银
杏黄酮的浓度为12.9mg/ml,有效成分回收率为90%。
5) 树脂脱出银杏酸:将4) 中得到的浓缩液,上样于处理好、装填好的HPD-5000层析柱,收集流出液,减压浓缩,干燥,等到最终银杏提取物产品12.3g,经UV 检测,最终产品中银杏黄酮的含量达到26.3%,HPLC 检测银杏内酯含量大于6%,银杏酸含量小于0.005ppm,有效成分回收率为80%。
实例2
1) 提取:将200g 银杏黄酮含量为2.0%银杏叶原料经过粉碎,放入2000ml 三角瓶中,加入1000ml去离子水热回流提取,提取三次,一次1.5H/次,合并三次提取液,减压浓缩至d=1.08(比重),约375ml,经UV 检测,浓缩液中银杏黄酮的浓度为10.45mg/ml,有效成分回收率为98%。
2) 醇沉:将过程1)中得到的浓缩液375ml,加入无水乙醇,调节液体中乙醇含量达65%,充分搅拌、静置,沉降沉淀,过滤,清夜浓缩到无醇,得到醇沉浓缩液500ml,经过UV检测,醇沉浓缩液中银杏黄酮的浓度为7.7mg/ml,有效成分回收率为96.3%。
3) 澄清剂除杂:将2)中待用的醇沉浓缩液500ml,加热到30℃后,加入液体量0.3%经过预处理过的澄清剂ZTC1+1,充分搅拌,沉降12H,每隔2H搅拌一次,沉降完全后,过滤得到485ml 清夜待用,经UV检测,清夜中银杏黄酮的浓度为7.92mg/ml,有效成分回收率为96%。
4) 富集银杏黄酮和内酯:将3)中得到的清夜,上样于处理好、装填好的LS-46D层析柱,在采用含水乙醇对大孔树脂进行洗脱,收集40-70%乙醇洗脱液,减压浓缩收集的含有银杏黄酮和内酯部分,得到富含银杏黄酮和内酯的浓缩液350ml,经UV 检测,浓缩液中银杏黄酮的浓度为9.9mg/ml,有效成分回收率为94%。
5) 树脂脱出银杏酸:将4)中得到的浓缩液,上样于处理好、装填好的HPD-5000层析柱,收集流出液,减压浓缩,干燥,等到最终银杏提取物产品12.76g,经UV 检测,最终产品中银杏黄酮的含量达到29.3%,HPLC 检测银杏内酯含量大于6%,银杏酸含量小于0.005ppm,有效成分回收率为93.5%。
实例3
1) 提取:将200g 银杏黄酮含量为2.0%银杏叶原料经过粉碎,放入2000ml 三角瓶中,加入1000ml 去离子水热回流提取,提取三次,一次1.5H/ 次,合并三次提取液,减压浓缩至d = 1.08( 比重),约375ml,经UV 检测,浓缩液中银杏黄酮的浓度为10.45mg/ml,有效成分回收率为98%。
2) 醇沉:将过程1) 中得到的浓缩液375ml,加入无水乙醇,调节液体中乙醇含量达80%,充分搅拌、静置,沉降沉淀,过滤,清夜浓缩到无醇,得到醇沉浓缩液355ml,经过UV检测,醇沉浓缩液中银杏黄酮的浓度为10.8mg/ml,有效成分回收率为95.4%。
3) 澄清剂除杂:将2) 中待用的醇沉浓缩液355ml,加热到30℃后,加入液体量0.5%经过预处理过的澄清剂ZTC1+1,充分搅拌,沉降12H,每隔2H 搅拌一次,沉降完全后,过滤得到342ml 清夜待用,经UV 检测,清夜中银杏黄酮的浓度为11.06mg/ml,有效成分回收率为94.6%。
4) 富集银杏黄酮和内酯:将3) 中得到的清夜,上样于处理好、装填好的LS-46D 层析柱,在采用含水乙醇对大孔树脂进行洗脱,收集40-70%乙醇洗脱液,减压浓缩收集的含有银杏黄酮和内酯部分,得到富含银杏黄酮和内酯的浓缩液273ml,经UV 检测,浓缩液中银杏黄酮的浓度为13.3mg/ml,有效成分回收率为90.8%。
5) 树脂脱出银杏酸:将4) 中得到的浓缩液,上样于处理好、装填好的HPD-5000层析柱,收集流出液,减压浓缩,干燥,等到最终银杏提取物产品11.99g,经UV 检测,最终产品中银杏黄酮的含量达到28.5%,HPLC 检测银杏内酯含量大于6%,银杏酸含量小于0.005ppm,有效成分回收率为85.7%。
Claims (3)
1.一种高品质银杏黄酮提取工艺,其特征在于:
1) 从银杏叶中提取银杏黄酮:将银杏叶子粉碎过10目,加其重量5-8倍量的去离子水加热回流提取三次,每次提取1.5小时,过滤提取液,用去离子水洗涤提取渣,合并提取液及洗涤液,减压浓缩至一定的比重,就得到银杏黄酮的粗提液;
2) 醇沉除杂:将过程1)中得到的粗提液经过滤后,加入无水有机溶剂(Ⅰ),调节液体中有机溶剂含量到30-80%,充分搅拌、静置,沉降沉淀,过滤,清夜浓缩到无醇,待用;上述过程中有机溶剂(Ⅰ) 包括:甲醇、乙醇、丙酮;
3) 澄清剂除杂:将2) 中待用的浓缩液,加热到30℃加入经过预处理过的澄清剂(Ⅱ),充分搅拌,沉降12H,每隔2H 搅拌一次,沉降完全后,过滤,清夜待用;上述过程中澄清剂(Ⅱ) 包括:壳聚糖、甲壳素、ZTC1+1 ;
4) 富集银杏黄酮和内酯:利用极性、弱极性的大孔树脂进行初分离,将非离子型的极性、弱极性大孔网状吸附树脂置于乙醇中浸泡24 小时,然后用乙醇、去离子水依次冲洗树脂;将经过上述过程活化过的树脂,用重力沉降法装柱;将3) 中得到的清夜,上样于处理
好、装填好的层析柱,在采用含水有机溶剂(Ⅲ) 对大孔树脂进行洗脱,分段收集,减压浓缩收集的含有银杏黄酮和内酯部分,得到富含银杏黄酮和内酯的浓缩液;上述含水有机溶剂(Ⅲ) 中有机溶剂的含量为10-90v% ;上述含水有机溶剂(Ⅲ) 中的有机溶剂包括:甲醇、
乙醇、丙酮、正丁醇;
5) 树脂脱除银杏酸:利用极性或者弱极性的大孔树脂进行初分离,将非离子型的极性或者弱极性大孔网状吸附树脂置于乙醇中浸泡24 小时,然后用乙醇、去离子水依次冲洗树脂;将经过上述过程活化过的树脂,用重力沉降法装柱;将4)中得到的浓缩液,上样于处理好、装填好的层析柱,收集流出液,减压浓缩,干燥,等到最终银杏提取物产品。
2.按权利要求1所述的一种高品质银杏黄酮的制备方法,其特征在于:所述步骤3)中所用的澄清剂是通过规范要求经过预处理过的。
3.按权利要求1所述的一种高品质银杏黄酮的制备方法,其特征在于:所述步骤4)、5)中所用的大孔网状吸附树脂包括聚丙乙烯树脂、聚苯乙烯树脂、聚甲基丙烯酸酯树脂、丙烯酰胺与苯乙烯共聚物树脂。
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CN105663520A (zh) * | 2016-02-29 | 2016-06-15 | 李宏 | 五虎口服液及其制备方法 |
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