CN106491720A - 一种从无花果叶提取植物黄酮的方法 - Google Patents

一种从无花果叶提取植物黄酮的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种从无花果叶提取植物黄酮的方法，以无花果叶为原料，经闭环除湿‑热泵干燥、回流脱脂、碱提酸沉、大孔树脂纯化得黄酮类化合物芦丁精品。本发明得到的产品中总黄酮含量高，而且工艺简单、产率高、生产成本低，且适合于工业化生产；不仅节能高效，而且易于自动化操作，具有良好的应用前景。

Description

一种从无花果叶提取植物黄酮的方法
技术领域
本发明涉及药品制造技术领域，具体涉及一种从无花果叶提取植物黄酮的方法。
背景技术
无花果是一种开花植物，隶属于桑科榕属，主要生长于热带和温带的地方，属亚热带落叶小乔木。果实呈球根状，尾部有一小孔，无花果除鲜食、药用外，还可加工制干、制果脯、果酱、果汁、果茶、果酒、饮料、罐头等。无花果干无任何化学添加剂，味道浓厚、甘甜。无花果汁、饮料具有独特的清香味，生津止渴，老幼皆宜。无花果树枝繁叶茂，树态优雅，具有较好的观赏价值，是良好的园林及庭院绿化观赏树种。无花果具一定的药用价值，健胃清肠，消肿解毒，用于食欲不振，脘腹胀痛，痔疮便秘，消化不良，痔疮，脱肛，腹泻、乳汁不足，咽喉肿痛，热痢，咳嗽多痰等症。
无花果叶含香柠檬内酯、补骨脂素、维生素C等生物活性物质，另外还含有丰富的黄酮类化合物。自古以来，人们就应用无花果叶入药治病，治疗痔疮、腹泻、肠炎等疾病。近代医学研究表明，无花果叶提取物具有抗肿瘤、抗菌、降血糖、降血脂等多项药理作用，而黄酮是无花果叶中主要药效成分之一。目前对无花果叶黄酮类化合物的研究主要集中在含量测定和提取工艺方面，纯化工艺的研究未见报道。黄酮类化合物广泛存在于植物界中，具有许多重要的生理效应和药理作用，一直得到研究学者的关注。目前国内外主要从银杏叶、沙棘叶、芝麻叶等材料中提取黄酮化合物，而对无花果叶黄酮的研究，尤其是采用碱提酸沉法从无花果叶中提取黄酮的研究还鲜有报道。近年利用大孔树脂纯化技术对藤茶总黄酮、山蜡梅叶总黄酮、千里光总黄酮进行分离纯化，取得良好的纯化效果，但未见应用于无花果叶中提取黄酮的研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种从无花果叶提取植物黄酮的方法，以无花果叶为原料，经闭环除湿-热泵干燥、回流脱脂、碱提酸沉、大孔树脂纯化得黄酮类化合物芦丁精品，产品中总黄酮含量高，而且工艺简单、产率高、生产成本低，且适合于工业化生产。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种从无花果叶提取植物黄酮的方法，以无花果叶为原料，包括如下步骤：
1)原料预处理：无花果叶采摘后，用清水洗去表面的灰尘和杂质，利用“闭环除湿-热泵干燥”技术烘干至含水量8wt％以下；
2)回流脱脂：将干无花果叶与石油醚置于回流装置提取器中，在60～90℃条件下，回流至样品无色，冷却至室温，过滤，回收石油醚，滤渣于60℃下烘干，得到脱脂无花果叶，再经粉碎，过20目筛，获得脱脂无花果叶粉；
3)碱提酸沉法提取总黄酮：向盛有脱脂无花果叶粉的容器中加入脱脂无花果叶粉质量8～12倍的水，煮沸，在搅拌下缓缓加入饱和石灰乳至pH值8～10，在此pH值条件下微沸20～30min，趁热抽滤；然后向残渣中再加入脱脂无花果叶粉质量3～5倍的水，再煮提一次，趁热抽滤，合并滤液；在60～70℃的条件下，用体积浓度为15％的盐酸溶液将合并后的滤液调至pH值4～6，搅匀后遮光静置20～30h，抽滤，用蒸馏水将滤渣(沉淀物)洗至中性，在60℃下干燥得黄酮类化合物芦丁粗品；芦丁粗品再用沸水重结晶，在70～80℃下干燥后得芦丁纯品，并测定总黄酮含量；
4)大孔树脂纯化：将芦丁纯品配成2mg/mL的样液，用大孔树脂纯化，充分吸附后，用去离子水冲洗，弃去洗脱液，然后再用体积浓度为75％～85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，将洗脱液旋转蒸发，在60℃下干燥得芦丁精品。
根据以上方案，所述石油醚与干无花果叶的质量比为3～8:1。
根据以上方案，所述黄酮类化合物的鉴定采用薄层色谱法：硅胶G板，用体积比为5:4:1的甲苯-醋酸乙酯-甲酸展开，3wt％三氯化铝乙醇液检验，紫外灯365nm处观察。
根据以上方案，所述总黄酮含量采用紫外分光光度法(UV)测定，于510nm处测定样品溶液吸光度，从标准曲线所得到回归方程中计算出样品溶液中总黄酮的浓度。
采用碱提取酸沉淀法进行提取纯化时，所用碱液浓度不宜过高，以免在强碱性下，尤其加热时破坏黄酮母核；在加酸酸化时，酸性也不宜过强，以免生成盐，致使析出的黄酮类化合物又重新溶解，降低产品收率。
采用UV法测定总黄酮含量的具体过程为：精密吸取芦丁对照品溶液2、4、6、8、10、12mL于50mL容量瓶中，各加水至12mL，加入2mL 5wt％的NaNO2溶液，摇匀放置6min，然后加入2mL 10wt％的AL(NO3)3溶液，摇匀放置6min，再加入20mL 4.3wt％的NaOH溶液，再加水定容至刻度，摇匀，放置15min后，以相应试剂为空白，照UV法(药典2005版附录VA)，在510nm处测定吸光度，照上述方法处理，于510nm处测定样品溶液吸光度，从标准曲线所得到回归方程中计算出样品溶液中总黄酮的浓度(mg/mL)。
本发明的有益效果是：
1)本发明采用碱提酸沉法提取总黄酮，并利用大孔树脂进一步纯化，获得黄酮类化合物芦丁精品，产品中总黄酮含量高，而且工艺简单、产率高、生产成本低，且适合于工业化生产；2)本发明不仅节能高效，而且易于自动化操作，具有良好的应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进行说明。
实施例1：
本发明提供一种从无花果叶提取植物黄酮的方法，以无花果叶为原料，包括如下步骤：
1)原料预处理：无花果叶采摘后，用清水洗去表面的灰尘和杂质，利用“闭环除湿-热泵干燥”技术烘干至含水量8wt％；
2)回流脱脂：将干无花果叶与石油醚(质量为干无花果叶的5倍)置于回流装置提取器中，在70℃条件下，回流至样品无色，冷却至室温，过滤，回收石油醚，滤渣于60℃下烘干，得到脱脂无花果叶，再经粉碎，过20目筛，获得脱脂无花果叶粉；
3)碱提酸沉法提取总黄酮：向盛有脱脂无花果叶粉的容器中加入脱脂无花果叶粉质量11倍的水，煮沸，在搅拌下缓缓加入饱和石灰乳至pH值8，在此pH值条件下微沸25min，趁热抽滤；然后向残渣中再加入脱脂无花果叶粉质量3倍的水，再煮提一次，趁热抽滤，合并滤液；在60℃的条件下，用体积浓度为15％的盐酸溶液将合并后的滤液调至pH值4.5，搅匀后遮光静置24h，抽滤，用蒸馏水将滤渣(沉淀物)洗至中性，在60℃下干燥得黄酮类化合物芦丁粗品；芦丁粗品再用沸水重结晶，在75℃下干燥后得芦丁纯品，并用UV法测定产品中总黄酮含量为401mg/g；
4)D140型大孔树脂纯化：将芦丁纯品配成2mg/mL的样液，2BV/h流速上样D140型大孔树脂纯化，充分吸附后，用2BV去离子水冲洗，弃去洗脱液，然后再用4BV 80v％乙醇以2BV/h流速洗脱，收集洗脱液，将洗脱液旋转蒸发，在60℃下干燥得芦丁精品。
采用薄层色谱法鉴定成品芦丁精品中黄酮类化合物，精制芦丁与标准品在相应的位置分别显黄色斑点，UV法测定产品中总黄酮纯度为89.6％。
实施例2：
本发明提供一种从无花果叶提取植物黄酮的方法，以无花果叶为原料，包括如下步骤：
1)原料预处理：无花果叶采摘后，用清水洗去表面的灰尘和杂质，利用“闭环除湿-热泵干燥”技术烘干至含水量7wt％；
2)回流脱脂：将干无花果叶与石油醚(质量为干无花果叶的6倍)置于回流装置提取器中，在60℃条件下，回流至样品无色，冷却至室温，过滤，回收石油醚，滤渣于60℃下烘干，得到脱脂无花果叶，再经粉碎，过20目筛，获得脱脂无花果叶粉；
3)碱提酸沉法提取总黄酮：向盛有脱脂无花果叶粉的容器中加入脱脂无花果叶粉质量9倍的水，煮沸，在搅拌下缓缓加入饱和石灰乳至pH值10，在此pH值条件下微沸20min，趁热抽滤；然后向残渣中再加入脱脂无花果叶粉质量3倍的水，再煮提一次，趁热抽滤，合并滤液；在65℃的条件下，用体积浓度为15％的盐酸溶液将合并后的滤液调至pH值5，搅匀后遮光静置22h，抽滤，用蒸馏水将滤渣(沉淀物)洗至中性，在60℃下干燥得黄酮类化合物芦丁粗品；芦丁粗品再用沸水重结晶，在70℃下干燥后得芦丁纯品，并用UV法测定产品中总黄酮含量为366mg/g；
4)D140型大孔树脂纯化：将芦丁纯品配成2mg/mL的样液，2BV/h流速上样D140型大孔树脂纯化，充分吸附后，用2BV去离子水冲洗，弃去洗脱液，然后再用4BV 75v％的乙醇以2BV/h流速洗脱，收集洗脱液，将洗脱液旋转蒸发，在60℃下干燥得芦丁精品。
采用薄层色谱法鉴定成品芦丁精品中黄酮类化合物，精制芦丁与标准品在相应的位置分别显黄色斑点，UV法测定产品中总黄酮纯度为94.8％。
实施例3：
本发明提供一种从无花果叶提取植物黄酮的方法，以无花果叶为原料，包括如下步骤：
1)原料预处理：无花果叶采摘后，用清水洗去表面的灰尘和杂质，利用“闭环除湿-热泵干燥”技术烘干至含水量6.5wt％；
2)回流脱脂：将干无花果叶与石油醚(质量为干无花果叶的7倍)置于回流装置提取器中，在60℃条件下，回流至样品无色，冷却至室温，过滤，回收石油醚，滤渣于60℃下烘干，得到脱脂无花果叶，再经粉碎，过20目筛，获得脱脂无花果叶粉；
3)碱提酸沉法提取总黄酮：向盛有脱脂无花果叶粉的容器中加入脱脂无花果叶粉质量10倍的水，煮沸，在搅拌下缓缓加入饱和石灰乳至pH值9，在此pH值条件下微沸30min，趁热抽滤；然后向残渣中再加入脱脂无花果叶粉质量4倍的水，再煮提一次，趁热抽滤，合并滤液；在70℃的条件下，用体积浓度为15％的盐酸溶液将合并后的滤液调至pH值5.5，搅匀后遮光静置30h，抽滤，用蒸馏水将滤渣(沉淀物)洗至中性，在60℃下干燥得黄酮类化合物芦丁粗品；芦丁粗品再用沸水重结晶，在70℃下干燥后得芦丁纯品，并用UV法测定产品中总黄酮含量为387mg/g；
4)D140型大孔树脂纯化：将芦丁纯品配成2mg/mL的样液，2BV/h流速上样D140型大孔树脂纯化，充分吸附后，用2BV去离子水冲洗，弃去洗脱液，然后再用4BV 85v％的乙醇以2BV/h流速洗脱，收集洗脱液，将洗脱液旋转蒸发，在60℃下干燥得芦丁精品。
采用薄层色谱法鉴定成品芦丁精品中黄酮类化合物，精制芦丁与标准品在相应的位置分别显黄色斑点，UV法测定产品中总黄酮纯度为92.1％。
以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的相关技术人员应当理解：可以对本发明进行修改或者同等替换，但不脱离本发明精神和范围的任何修改和局部替换均应涵盖在本发明的权利要求范围内。

Claims (4)

1.一种从无花果叶提取植物黄酮的方法，以无花果叶为原料，其特征在于，包括如下步骤：
1)原料预处理：无花果叶采摘后，用清水洗去表面的灰尘和杂质，利用“闭环除湿-热泵干燥”技术烘干至含水量8wt％以下；
2)回流脱脂：将干无花果叶与石油醚置于回流装置提取器中，在60～90℃条件下，回流至样品无色，冷却至室温，过滤，回收石油醚，滤渣于60℃下烘干，得到脱脂无花果叶，再经粉碎，过20目筛，获得脱脂无花果叶粉；
3)碱提酸沉法提取总黄酮：向盛有脱脂无花果叶粉的容器中加入脱脂无花果叶粉质量8～12倍的水，煮沸，在搅拌下缓缓加入饱和石灰乳至pH值8～10，在此pH值条件下微沸20～30min，趁热抽滤；然后向残渣中再加入脱脂无花果叶粉质量3～5倍的水，再煮提一次，趁热抽滤，合并滤液；在60～70℃的条件下，用体积浓度为15％的盐酸溶液将合并后的滤液调至pH值4～6，搅匀后遮光静置20～30h，抽滤，用蒸馏水将滤渣洗至中性，在60℃下干燥得黄酮类化合物芦丁粗品；芦丁粗品再用沸水重结晶，在70～80℃下干燥后得芦丁纯品，并测定总黄酮含量；
4)大孔树脂纯化：将芦丁纯品配成2mg/mL的样液，用大孔树脂纯化，充分吸附后，用去离子水冲洗，弃去洗脱液，然后再用体积浓度为75％～85％的乙醇洗脱，收集洗脱液，将洗脱液旋转蒸发，在60℃下干燥得芦丁精品。
2.根据权利要求1所述的从无花果叶提取植物黄酮的方法，其特征在于，所述石油醚与干无花果叶的质量比为3～8:1。
3.根据权利要求1所述的从无花果叶提取植物黄酮的方法，其特征在于，所述黄酮类化合物的鉴定采用薄层色谱法：硅胶G板，用体积比为5:4:1的甲苯-醋酸乙酯-甲酸展开，3wt％三氯化铝乙醇液检验，紫外灯365nm处观察。
4.根据权利要求1所述的从无花果叶提取植物黄酮的方法，其特征在于，所述总黄酮含量采用紫外分光光度法测定，于510nm处测定样品溶液吸光度，从标准曲线所得到回归方程中计算出样品溶液中总黄酮的浓度。
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