CN109369733A - 一种从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法 - Google Patents

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Abstract

一种从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法，包括以下步骤：（1）将苦荞叶粉碎，加碱水溶液，提取，过滤，调pH值，超滤；（2）上大孔吸附树脂层析柱，水洗，先后用低度和高度醇溶液洗脱，分别收集洗脱液，浓缩，干燥，得混合物、芦丁粗品；（3）将芦丁粗品用热水溶解，过滤，冷却，结晶，抽滤，滤饼搅拌、分散，抽滤，干燥，得芦丁精品；（4）将混合物用醋酸水溶液加热溶解，冷冻搅拌析晶，过滤，水洗，得山奈酚粗品；母液浓缩，水洗，得槲皮素粗品；（5）分别用醇溶液加热溶解，过滤，冷却，结晶，抽滤，干燥，得槲皮素和山奈酚精品。本发明方法可同时提取多种高纯度、高收率的黄酮类化合物，操作简单、成本低、适于工业化生产。

Description

一种从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法
技术领域
本发明涉及一种同时提取多种黄酮类化合物的方法，具体涉及一种从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法。
背景技术
苦荞即苦荞麦，学名鞑靼荞麦，别名荞叶七、野兰荞、万年荞、 菠麦、乌麦、花荞，是一种“药食同源”天然植物。苦荞被誉为“五谷之王”，三降食品（降血压，降血糖，降血脂）；苦荞还有通便排毒的功效，民间又称其为“净肠草”。苦荞拥有独特、全面、丰富的营养成分，而且药用特性好，有人体所必须的多种营养成份。
苦荞叶中含有丰富的黄酮类化合物，芦丁、槲皮素和山奈酚是其中三种最主要的成分。芦丁有维生素P样作用和抗炎作用，具有维持血管抵抗力、降低其通透性、减少脆性等作用，可用于防治脑溢血、高血压、视网膜出血、紫癜和急性出血性肾炎等疾病，另外，还可用作食用抗氧化剂和营养增强剂等；槲皮素具有较好的祛痰、止咳作用，并有一定的平喘作用，用于治疗慢性支气管炎，此外，还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量等作用，对冠心病及高血压患者有辅助治疗作用；山奈酚具有防癌、抗癌、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等多种功效。
CN106220697A公开了一种苦荞芦丁提取方法，是以苦荞籽为原料，通过清水浸泡、烘干、碱性溶液超声加热提取、调酸等步骤，得芦丁粉。但是，该方法仅得到了一种黄酮类化合物，产品芦丁粉的含量不明，且用碱性溶液浸提后的荞麦籽难以食用或加工，无疑是对资源极大的浪费。
CN1385428A公开了一种苦荞生物黄酮提取工艺，是以苦荞粉或苦荞叶为原料，用乙醇作溶剂，通过连续逆流提取、过滤、减压浓缩、真空干燥等步骤得苦荞黄酮。但是，该方法没有分离提纯工艺，所得产品为黄酮混合物。
CN104069187A公开了一种从苦荞麦中提取纯化苦荞黄酮的工艺方法，是以苦荞麦为原料，通过乙醇回流提取、离心、回收乙醇、加水沉淀、沉淀分离等步骤，得总含量为86.5%的苦荞黄酮。但是，该方法同样没有分离提纯工艺，所得产品为黄酮混合物。
CN1258999C公开了一种用苦荞麦做原料提取黄酮的制备工艺，是以苦荞麦为原料，通过挤压去皮、微波处理苦荞麦皮层粉、加入乙醇微波提取、减压浓缩、加酸沉淀、真空干燥等步骤，得芦丁成品。但是，该方法所得成品中芦丁的含量较低，仅30%。
CN106432387A公开了一种苦荞籽中芦丁和多糖的联合提取方法，是以新收获的饱满苦荞籽粒为原料，通过蒸馏水浸提、冷冻、离心、干燥、醇沉等步骤，获得芦丁和多糖。但是，该方法缺少分离纯化步骤，所得芦丁产品纯度不到60%。
CN103833808B公开了一种苦荞芦丁的提取分离方法，是以苦荞或苦荞加工副产物麸皮为原料，通过粉碎、有机溶剂渗滤、吸附柱层析、浓缩、结晶等步骤，得苦荞芦丁。但是，该方法的原料昂贵，且仅获得了一种活性成分——芦丁，原料成本过高，且芦丁的含量偏低，不适合工业化生产。
CN102731593A公开了一种从苦荞麦中提取芦丁的方法，是以苦荞麦为原料，通过粉碎、乙醇回流提取、浓缩、过滤、乙醇洗涤、水溶解、结晶、过滤等步骤，得芦丁精制品。但同样，该方法的原料昂贵，仅获得了一种产品，未将资源综合利用，不适合工业化生产。
CN103340938A公开了一种苦荞标准提取物FT83及高纯度槲皮素的制备方法，是以苦荞麸皮为原料，通过低级醇浸泡或超声提取、减压浓缩、喷雾干燥、柱层析纯化等步骤，得高含量的槲皮素。但是，该方法生产周期长、设备投入大，且仅得到了苦荞中的一种活性成分——槲皮素，还使用了有毒有害的化工溶剂，不适合工业化生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是，克服现有技术存在的上述缺陷，提供一种可同时提取多种高纯度、高收率的黄酮类化合物，且操作简单、成本低廉、环境友好、适宜于工业化生产的从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：一种从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法，包括以下步骤：
（1）将干燥的苦荞叶粉碎，加入碱水溶液，室温下搅拌提取，过滤，滤液用酸溶液调节pH值至中性或弱酸性，然后用超滤膜超滤，得超滤膜滤液；
（2）将步骤（1）所得超滤膜滤液上大孔吸附树脂层析柱，然后，先水洗层析柱至流出液清亮、透明，再先后用低度醇溶液和高度醇溶液对大孔吸附树脂层析柱进行洗脱，分别收集低度醇溶液洗脱液和高度醇溶液洗脱液，浓缩，干燥，分别得槲皮素和山奈酚的混合物、芦丁粗品；
（3）将步骤（2）所得芦丁粗品用热水溶解，趁热过滤，自然冷却至室温，静置结晶，抽滤，滤饼用醇溶液在室温下搅拌、分散，抽滤，干燥，得芦丁精品；
（4）将步骤（2）所得槲皮素和山奈酚的混合物用醋酸水溶液加热溶解，降温，冷冻搅拌析晶，过滤，水洗，得山奈酚粗品；将过滤所得母液浓缩至无醋酸，水洗，得槲皮素粗品；
（5）将步骤（4）所得山奈酚粗品以及槲皮素粗品分别用醇溶液加热溶解，趁热过滤，自然冷却至室温，静置结晶，抽滤，干燥，分别得槲皮素精品和山奈酚精品。
优选地，步骤（1）中，所述干燥的苦荞叶中，芦丁的质量含量为5～8%，槲皮素的质量含量为2～4%，山奈酚的质量含量为3～6%。所述干燥的苦荞叶中含水率≤5%。
优选地，步骤（1）中，所述粉碎至粒径为1～2mm。若粉碎的粒径过大，则原料中的黄酮类成分难以浸出，将造成收率偏低；若粉碎的粒径过小，将加大过滤的难度。
优选地，步骤（1）中，所述碱水溶液与干燥的苦荞叶的质量比为15～20:1。
优选地，步骤（1）中，所述碱水溶液的质量浓度为0.1～2.0%。
优选地，步骤（1）中，所述碱水溶液为氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化钾的水溶液。
优选地，步骤（1）中，所述搅拌提取的时间为3～6h。
若碱水溶液的用量过少、质量浓度过低或搅拌提取的时间过短，都将导致黄酮类化合物提取不完全，收率偏低；若碱水溶液的用量过多、质量浓度过高或搅拌提取的时间过长，都有可能破换黄酮类化合物的分子结构，并造成物料和能源的浪费。
优选地，步骤（1）中，所述酸溶液的质量浓度为5～10%。
优选地，步骤（1）中，所述酸溶液为盐酸溶液和/或硫酸溶液。
优选地，步骤（1）中，调节pH值至6.0～7.0。
用酸溶液调节pH值至中性或弱酸性的目的：一是，黄酮类化合物易与碱反应形成盐，呈离子状态，导致难以被大孔树脂吸附，只有加酸可使之转变为分子状态，才可以被树脂吸附；二是，大孔树脂在碱性的液体环境中，对黄酮类化合物的吸附能力减弱，难以发挥其最大的吸附分离效果。
优选地，步骤（1）中，所述超滤膜的截留分子量为1000～2000Da，超滤的压力为0.1～0.3MPa。超滤的目的是去除物料中的蛋白质、鞣质等大分子杂质以及调酸时析出的少量固形物。
优选地，步骤（2）中，上柱的流速为0.5～1.0 BV/h。
优选地，步骤（2）中，所述大孔吸附树脂与干燥的苦荞叶的体积质量比（L/kg）为0.2～0.5:1。
优选地，步骤（2）中，所述大孔吸附树脂层析柱的高径比为2～8:1（更优选4～7:1）。
优选地，步骤（2）中，所述大孔吸附树脂的型号为LSA-10型、LSA-12型、LX-38型或LX-162型等中的一种或几种。
若上柱的流速过快、大孔吸附树脂的用量过少或层析柱的高径比过小，都将造成黄酮类化合物难以全部被大孔树脂吸附而部分流失，导致收率偏低；若上柱的流速过慢、大孔吸附树脂的用量过多或层析柱的高径比过大，都将造成物料和能源的浪费。
优选地，步骤（2）中，所述水洗的流速为1.0～2.0 BV/h。水洗的目的是将残留在柱床中未被吸附的杂质冲洗干净。
优选地，步骤（2）中，所述水洗的用水量为2～3 BV。
优选地，步骤（2）中，所述低度醇溶液和高度醇溶液洗脱的流速均为1.0～2.0 BV/h。
优选地，步骤（2）中，所述低度醇溶液的用量为2～3 BV。
优选地，步骤（2）中，所述低度醇溶液的体积浓度为20～30%。
优选地，步骤（2）中，所述高度醇溶液的用量为2～3 BV。
优选地，步骤（2）中，所述高度醇溶液的体积浓度为70～80%。
优选地，步骤（2）中，所述低度醇溶液或高度醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇等中的一种或几种。
低度醇溶液洗脱的目的是将极性小的槲皮素和山奈酚洗脱，高度醇溶液洗脱的目的是将极性大的芦丁洗脱。若低度醇溶液洗脱的流速过快、用量过少或浓度过小，都将造成槲皮素和山奈酚洗脱不彻底，造成槲皮素和山奈酚的收率偏低，此外，未被洗脱的槲皮素和山奈酚将被后续的高度乙醇洗脱，造成芦丁粗品的含量偏低；若低度醇溶液洗脱的流速过慢、用量过多或浓度过大，都将使部分芦丁同时被洗脱，造成槲皮素和山奈酚粗品的含量偏低。若高度醇溶液洗脱的流速过快、用量过少或浓度过小，都将导致芦丁洗脱不彻底，使芦丁的收率偏低；若高度醇溶液洗脱的流速过慢、用量过多或浓度过大，都将造成物料和能源的浪费。
优选地，步骤（2）中，所述浓缩至固含量为30～45%。
优选地，步骤（2）中，所述干燥的温度为60～80℃，干燥至含水率为1～5%。
优选地，步骤（3）中，所述热水的用量为芦丁粗品质量的10～20倍。用热水精制芦丁的原理是：芦丁在热水和冷水中的溶解度差别极大，因此，可以用热水溶解、冷水结晶的方式提高芦丁的含量。
优选地，步骤（3）中，所述热水的温度为90～100℃。
优选地，步骤（3）中，所述静置结晶的时间为12～24h。
优选地，步骤（3）中，所述醇溶液与芦丁粗品的体积质量比（L/kg）为1～2:1。醇溶液搅拌、分散可去除芦丁结晶中少量的醇溶性杂质。先用水溶解是为了使芦丁重结晶；后用醇溶液搅拌、分散是为了溶解并去除结晶体中的醇溶杂质。
优选地，步骤（3）中，所述醇溶液的体积浓度为70～80%。若醇溶液的体积浓度过低或用量过少，将导致滤饼中的杂质无法溶解并去除，造成芦丁精品的含量偏低；若醇溶液的体积浓度过高或用量过多，将导致杂质去除的同时，部分芦丁也将溶解并损耗，造成芦丁精品的收率偏低。
优选地，步骤（3）中，所述醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇等中的一种或几种。
优选地，步骤（3）中，所述搅拌的时间为10～30min。
优选地，步骤（4）中，所述醋酸水溶液与槲皮素和山奈酚的混合物的体积质量比（L/kg）为5～8:1。
优选地，步骤（4）中，所述醋酸水溶液的质量浓度为10～20%。
优选地，步骤（4）中，所述加热溶解的温度为70～90℃。
用醋酸水溶液将槲皮素和山奈酚的混合物溶解，并利用槲皮素和山奈酚两者在醋酸水溶液中溶解度的差异，将两者通过结晶的方式分离；若醋酸水溶液的用量过少、质量浓度过低或加热溶解温度过低，都将导致槲皮素和山奈酚的混合物难以充分溶解，造成收率偏低；若醋酸水溶液的用量过多、质量浓度过高或加热溶解温度过高，都将导致山奈酚的析出不充分，造成山奈酚的收率偏低，且由于母液中仍然有山奈酚未析出，还将导致槲皮素的含量偏低。
优选地，步骤（4）中，所述冷冻搅拌析晶的温度为5～10℃，搅拌的速度为20～60r/min，时间为12～24 h。冷冻析晶的目的是使山奈酚充分析出，提高收率。
优选地，步骤（5）中，所述醇溶液与槲皮素粗品或山奈酚粗品的体积质量比（L/kg）为4～10:1。
优选地，步骤（5）中，所述醇溶液的体积浓度为80～90%。
优选地，步骤（5）中，所述醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇等中的一种或几种。
优选地，步骤（5）中，所述加热溶解的温度为60～70℃。
用醇溶液加热溶解有利于充分溶解，为结晶创造条件。若醇溶液的用量过少、体积浓度过低或加热溶解温度过低，都将导致山奈酚粗品或槲皮素粗品溶解不充分，过滤后结晶的收率偏低；若醇溶液的用量过多、体积浓度过高或加热溶解温度过高，不但会造成物料和能源的浪费，还将造成山奈酚或槲皮素难以充分析出，导致收率偏低。
优选地，步骤（5）中，所述静置结晶的时间为12～24 h。
本发明方法中，1 BV=1个柱体积。
本发明方法的原理是：芦丁、槲皮素和山奈酚是苦荞叶中三种最主要的黄酮类化合物，都易溶于碱水、都可以被大孔吸附树脂吸附，因此，都可以用碱水提取、大孔吸附树脂富集。由于槲皮素和山奈酚是黄酮苷元，极性小，易被低度醇洗脱；而芦丁属于黄酮苷，极性大，低度醇无法洗脱，因此，可以依次用梯度洗脱的方法将黄酮苷元和黄酮苷分离；而槲皮素和山奈酚两种黄酮苷元虽然被低度乙醇同时洗脱，但是由于两者在稀醋酸溶液中的溶解度差异很大，使用稀醋酸溶液结晶的方式可将两者分离。
本发明方法的有益效果如下：
（1）按照本发明方法所得芦丁精品中，芦丁的质量含量可高达99.5%，收率可高达96%；所得槲皮素精品中，槲皮素的质量含量可高达99.3%，收率可高达95%；所得山奈酚精品中，山奈酚的质量含量可高达98.7%，收率可高达94%；
（2）本发明方法可同时提取多种高纯度、高收率的黄酮类化合物，且操作简单、成本低廉、环境友好、适宜于工业化生产，不但综合利用了苦荞叶资源，还将创造极大的经济价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
本发明实施例所使用的干燥的苦荞叶（含水率≤5%）购于内蒙古赤峰，其中，芦丁、槲皮素和山奈酚的质量含量分别为6.7%、3.2%和4.1%；本发明实施例所使用的LSA-10型、LSA-12型、LX-38型大孔吸附树脂均购于西安蓝晓科技新材料股份有限公司；本发明实施例所使用的原料或化学试剂，如无特殊说明，均通过常规商业途径获得。
本发明实施例中，采用高效液相色谱外标法检测芦丁、槲皮素和山奈酚的质量含量。
实施例1
（1）将100kg干燥的苦荞叶粉碎至粒径为2mm，加入2000kg氢氧化钙水溶液（质量浓度为0.1%），室温下搅拌提取6h，过滤，滤液用质量浓度为5%的盐酸溶液调节pH值至6.0，然后在0.3MPa下，用截留分子量为1000Da的超滤膜超滤，得超滤膜滤液；
（2）将步骤（1）所得超滤膜滤液，以0.8 BV/h的流速，上LSA-10型大孔吸附树脂层析柱（LSA-10型大孔吸附树脂的用量为50L，层析柱的高径比为6:1），然后，先用2BV水，以1.0BV/h的流速，水洗层析柱至流出液清亮、透明，再以1.0BV/h的流速，先后用2BV、体积浓度为30%的低度乙醇溶液和2BV、体积浓度为80%的高度乙醇溶液，对LSA-10型大孔吸附树脂层析柱进行洗脱，分别收集低度乙醇溶液洗脱液和高度乙醇溶液洗脱液，浓缩至固含量为35%，在65℃下，干燥至含水率为3%，分别得槲皮素和山奈酚的混合物7.93kg、芦丁粗品7.45kg；
（3）将步骤（2）所得7.45kg芦丁粗品用75kg、90℃的热水溶解，趁热过滤，自然冷却至室温，静置结晶12h，抽滤，滤饼用14.9L、体积浓度为70%的乙醇溶液在室温下搅拌、分散15min，抽滤，干燥，得芦丁精品6.44kg；
（4）将步骤（2）所得7.93kg槲皮素和山奈酚的混合物用57.6L醋酸水溶液（质量浓度为10%），在75℃下，加热溶解，降温，在10℃、20 r/min的转速下，冷冻搅拌析晶12h，过滤，水洗，得山奈酚粗品7.88kg（湿重）；将过滤所得母液浓缩至无醋酸，水洗，得槲皮素粗品6.15kg（湿重）；
（5）将步骤（4）所得7.88kg（湿重）山奈酚粗品以及6.15kg（湿重）槲皮素粗品分别用32L、40L体积浓度均为85%的乙醇溶液，在65℃下，加热溶解，趁热过滤，自然冷却至室温，静置结晶12h，抽滤，干燥，分别得槲皮素精品2.99kg和山奈酚精品3.78kg。
经高效液相色谱外标法检测，本发明实施例所得芦丁精品中，芦丁的质量含量为98.9%，收率为95%；所得槲皮素精品中，槲皮素的质量含量为99.3%，收率为93%；所得山奈酚精品中，山奈酚的质量含量为98.7%，收率为91%。
实施例2
（1）将200kg干燥的苦荞叶粉碎至粒径为1mm，加入3000kg氢氧化钠水溶液（质量浓度为0.5%），室温下搅拌提取5h，过滤，滤液用质量浓度为8%的硫酸溶液调节pH值至7.0，然后在0.2MPa下，用截留分子量为1500Da的超滤膜超滤，得超滤膜滤液；
（2）将步骤（1）所得超滤膜滤液，以0.5 BV/h的流速，上LSA-12型大孔吸附树脂层析柱（LSA-12型大孔吸附树脂的用量为60L，层析柱的高径比为5:1），然后，先用2.5BV水，以1.5BV/h的流速，水洗层析柱至流出液清亮、透明，再以1.5BV/h的流速，先后用2.5BV、体积浓度为25%的低度乙醇溶液和2.5BV、体积浓度为75%的高度乙醇溶液，对LSA-12型大孔吸附树脂层析柱进行洗脱，分别收集低度乙醇溶液洗脱液和高度乙醇溶液洗脱液，浓缩至固含量为30%，在70℃下，干燥至含水率为2%，分别得槲皮素和山奈酚的混合物16.22kg、芦丁粗品15.23kg；
（3）将步骤（2）所得15.23kg芦丁粗品用230kg、95℃的热水溶解，趁热过滤，自然冷却至室温，静置结晶16h，抽滤，滤饼用23L、体积浓度为80%的乙醇溶液在室温下搅拌、分散20min，抽滤，干燥，得芦丁精品12.93kg；
（4）将步骤（2）所得16.22kg槲皮素和山奈酚的混合物用82L醋酸水溶液（质量浓度为18%），在80℃下，加热溶解，降温，在5℃、40 r/min的转速下，冷冻搅拌析晶16h，过滤，水洗，得山奈酚粗品17.44kg（湿重）；将过滤所得母液浓缩至无醋酸，水洗，得槲皮素粗品13.62kg（湿重）；
（5）将步骤（4）所得17.44kg（湿重）山奈酚粗品以及13.62kg（湿重）槲皮素粗品分别用108L、105L体积浓度均为80%的乙醇溶液，在70℃下，加热溶解，趁热过滤，自然冷却至室温，静置结晶16h，抽滤，干燥，分别得槲皮素精品6.01kg和山奈酚精品7.77kg。
经高效液相色谱外标法检测，本发明实施例所得芦丁精品中，芦丁的质量含量为99.5%，收率为96%；所得槲皮素精品中，槲皮素的质量含量为98.0%，收率为92%；所得山奈酚精品中，山奈酚的质量含量为98.1%，收率为93%。
实施例3
（1）将150kg干燥的苦荞叶粉碎至粒径为1mm，加入2700kg氢氧化钾水溶液（质量浓度为1.0%），室温下搅拌提取3h，过滤，滤液用质量浓度为10%的盐酸溶液调节pH值至6.5，然后在0.2MPa下，用截留分子量为2000Da的超滤膜超滤，得超滤膜滤液；
（2）将步骤（1）所得超滤膜滤液，以1.0BV/h的流速，上LX-38型大孔吸附树脂层析柱（LX-38型大孔吸附树脂的用量为60L，层析柱的高径比为7:1），然后，先用3BV水，以2.0BV/h的流速，水洗层析柱至流出液清亮、透明，再以2.0BV/h的流速，先后用3BV、体积浓度为20%的低度乙醇溶液和3BV、体积浓度为70%的高度乙醇溶液，对LX-38型大孔吸附树脂层析柱进行洗脱，分别收集低度乙醇溶液洗脱液和高度乙醇溶液洗脱液，浓缩至固含量为40%，在75℃下，干燥至含水率为3%，分别得槲皮素和山奈酚的混合物12.44kg、芦丁粗品11.69kg；
（3）将步骤（2）所得11.69kg芦丁粗品用210kg、98℃的热水溶解，趁热过滤，自然冷却至室温，静置结晶24h，抽滤，滤饼用18L、体积浓度为75%的乙醇溶液在室温下搅拌、分散25min，抽滤，干燥，得芦丁精品9.56kg；
（4）将步骤（2）所得12.44kg槲皮素和山奈酚的混合物用75L醋酸水溶液（质量浓度为15%），在85℃下，加热溶解，降温，在8℃、30 r/min的转速下，冷冻搅拌析晶20h，过滤，水洗，得山奈酚粗品11.6kg（湿重）；将过滤所得母液浓缩至无醋酸，水洗，得槲皮素粗品11.2kg（湿重）；
（5）将步骤（4）所得11.6kg（湿重）山奈酚粗品以及11.2kg（湿重）槲皮素粗品分别用68L、81L体积浓度均为90%的乙醇溶液，在60℃下，加热溶解，趁热过滤，自然冷却至室温，静置结晶20h，抽滤，干燥，分别得槲皮素精品4.6kg和山奈酚精品5.87kg。
经高效液相色谱外标法检测，本发明实施例所得芦丁精品中，芦丁的质量含量为97.8%，收率为93%；所得槲皮素精品中，槲皮素的质量含量为99.2%，收率为95%；所得山奈酚精品中，山奈酚的质量含量为98.5%，收率为94%。

Claims (9)

1.一种从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将干燥的苦荞叶粉碎，加入碱水溶液，室温下搅拌提取，过滤，滤液用酸溶液调节pH值至中性或弱酸性，然后用超滤膜超滤，得超滤膜滤液；
（2）将步骤（1）所得超滤膜滤液上大孔吸附树脂层析柱，然后，先水洗层析柱至流出液清亮、透明，再先后用低度醇溶液和高度醇溶液对大孔吸附树脂层析柱进行洗脱，分别收集低度醇溶液洗脱液和高度醇溶液洗脱液，浓缩，干燥，分别得槲皮素和山奈酚的混合物、芦丁粗品；
（3）将步骤（2）所得芦丁粗品用热水溶解，趁热过滤，自然冷却至室温，静置结晶，抽滤，滤饼用醇溶液在室温下搅拌、分散，抽滤，干燥，得芦丁精品；
（4）将步骤（2）所得槲皮素和山奈酚的混合物用醋酸水溶液加热溶解，降温，冷冻搅拌析晶，过滤，水洗，得山奈酚粗品；将过滤所得母液浓缩至无醋酸，水洗，得槲皮素粗品；
（5）将步骤（4）所得山奈酚粗品以及槲皮素粗品分别用醇溶液加热溶解，趁热过滤，自然冷却至室温，静置结晶，抽滤，干燥，分别得槲皮素精品和山奈酚精品。
2.根据权利要求1所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述干燥的苦荞叶中，芦丁的质量含量为5～8%，槲皮素的质量含量为2～4%，山奈酚的质量含量为3～6%；所述粉碎至粒径为1～2mm。
3.根据权利要求1或2所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述碱水溶液与干燥的苦荞叶的质量比为15～20:1；所述碱水溶液的质量浓度为0.1～2.0%；所述碱水溶液为氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化钾的水溶液；所述搅拌提取的时间为3～6h。
4.根据权利要求1～3之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述酸溶液的质量浓度为5～10%；所述酸溶液为盐酸溶液和/或硫酸溶液；调节pH值至6.0～7.0；所述超滤膜的截留分子量为1000～2000Da，超滤的压力为0.1～0.3MPa。
5.根据权利要求1～4之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（2）中，上柱的流速为0.5～1.0 BV/h；所述大孔吸附树脂与干燥的苦荞叶的体积质量比为0.2～0.5:1；所述大孔吸附树脂层析柱的高径比为2～8:1；所述大孔吸附树脂的型号为LSA-10型、LSA-12型、LX-38型或LX-162型中的一种或几种；所述水洗的流速为1.0～2.0 BV/h；所述水洗的用水量为2～3 BV。
6.根据权利要求1～5之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述低度醇溶液和高度醇溶液洗脱的流速均为1.0～2.0 BV/h；所述低度醇溶液的用量为2～3 BV；所述低度醇溶液的体积浓度为20～30%；所述高度醇溶液的用量为2～3 BV；所述高度醇溶液的体积浓度为70～80%；所述低度醇溶液或高度醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇中的一种或几种；所述浓缩至固含量为30～45%；所述干燥的温度为60～80℃，干燥至含水率为1～5%。
7.根据权利要求1～6之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（3）中，所述热水的用量为芦丁粗品质量的10～20倍；所述热水的温度为90～100℃；所述静置结晶的时间为12～24h；所述醇溶液与芦丁粗品的体积质量比为1～2:1；所述醇溶液的体积浓度为70～80%；所述醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇中的一种或几种；所述搅拌的时间为10～30min。
8.根据权利要求1～7之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（4）中，所述醋酸水溶液与槲皮素和山奈酚的混合物的体积质量比为5～8:1；所述醋酸水溶液的质量浓度为10～20%；所述加热溶解的温度为70～90℃；所述冷冻搅拌析晶的温度为5～10℃，搅拌的速度为20～60 r/min，时间为12～24 h。
9.根据权利要求1～8之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法，其特征在于：步骤（5）中，所述醇溶液与槲皮素粗品或山奈酚粗品的体积质量比为4～10:1；所述醇溶液的体积浓度为80～90%；所述醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇中的一种或几种；所述加热溶解的温度为60～70℃；所述静置结晶的时间为12～24 h。
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