CN109369733A - 一种从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法 - Google Patents
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Abstract
一种从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法,包括以下步骤:(1)将苦荞叶粉碎,加碱水溶液,提取,过滤,调pH值,超滤;(2)上大孔吸附树脂层析柱,水洗,先后用低度和高度醇溶液洗脱,分别收集洗脱液,浓缩,干燥,得混合物、芦丁粗品;(3)将芦丁粗品用热水溶解,过滤,冷却,结晶,抽滤,滤饼搅拌、分散,抽滤,干燥,得芦丁精品;(4)将混合物用醋酸水溶液加热溶解,冷冻搅拌析晶,过滤,水洗,得山奈酚粗品;母液浓缩,水洗,得槲皮素粗品;(5)分别用醇溶液加热溶解,过滤,冷却,结晶,抽滤,干燥,得槲皮素和山奈酚精品。本发明方法可同时提取多种高纯度、高收率的黄酮类化合物,操作简单、成本低、适于工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种同时提取多种黄酮类化合物的方法,具体涉及一种从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法。
背景技术
苦荞即苦荞麦,学名鞑靼荞麦,别名荞叶七、野兰荞、万年荞、 菠麦、乌麦、花荞,是一种“药食同源”天然植物。苦荞被誉为“五谷之王”,三降食品(降血压,降血糖,降血脂);苦荞还有通便排毒的功效,民间又称其为“净肠草”。苦荞拥有独特、全面、丰富的营养成分,而且药用特性好,有人体所必须的多种营养成份。
苦荞叶中含有丰富的黄酮类化合物,芦丁、槲皮素和山奈酚是其中三种最主要的成分。芦丁有维生素P样作用和抗炎作用,具有维持血管抵抗力、降低其通透性、减少脆性等作用,可用于防治脑溢血、高血压、视网膜出血、紫癜和急性出血性肾炎等疾病,另外,还可用作食用抗氧化剂和营养增强剂等;槲皮素具有较好的祛痰、止咳作用,并有一定的平喘作用,用于治疗慢性支气管炎,此外,还有降低血压、增强毛细血管抵抗力、减少毛细血管脆性、降血脂、扩张冠状动脉、增加冠脉血流量等作用,对冠心病及高血压患者有辅助治疗作用;山奈酚具有防癌、抗癌、抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒等多种功效。
CN106220697A公开了一种苦荞芦丁提取方法,是以苦荞籽为原料,通过清水浸泡、烘干、碱性溶液超声加热提取、调酸等步骤,得芦丁粉。但是,该方法仅得到了一种黄酮类化合物,产品芦丁粉的含量不明,且用碱性溶液浸提后的荞麦籽难以食用或加工,无疑是对资源极大的浪费。
CN1385428A公开了一种苦荞生物黄酮提取工艺,是以苦荞粉或苦荞叶为原料,用乙醇作溶剂,通过连续逆流提取、过滤、减压浓缩、真空干燥等步骤得苦荞黄酮。但是,该方法没有分离提纯工艺,所得产品为黄酮混合物。
CN104069187A公开了一种从苦荞麦中提取纯化苦荞黄酮的工艺方法,是以苦荞麦为原料,通过乙醇回流提取、离心、回收乙醇、加水沉淀、沉淀分离等步骤,得总含量为86.5%的苦荞黄酮。但是,该方法同样没有分离提纯工艺,所得产品为黄酮混合物。
CN1258999C公开了一种用苦荞麦做原料提取黄酮的制备工艺,是以苦荞麦为原料,通过挤压去皮、微波处理苦荞麦皮层粉、加入乙醇微波提取、减压浓缩、加酸沉淀、真空干燥等步骤,得芦丁成品。但是,该方法所得成品中芦丁的含量较低,仅30%。
CN106432387A公开了一种苦荞籽中芦丁和多糖的联合提取方法,是以新收获的饱满苦荞籽粒为原料,通过蒸馏水浸提、冷冻、离心、干燥、醇沉等步骤,获得芦丁和多糖。但是,该方法缺少分离纯化步骤,所得芦丁产品纯度不到60%。
CN103833808B公开了一种苦荞芦丁的提取分离方法,是以苦荞或苦荞加工副产物麸皮为原料,通过粉碎、有机溶剂渗滤、吸附柱层析、浓缩、结晶等步骤,得苦荞芦丁。但是,该方法的原料昂贵,且仅获得了一种活性成分——芦丁,原料成本过高,且芦丁的含量偏低,不适合工业化生产。
CN102731593A公开了一种从苦荞麦中提取芦丁的方法,是以苦荞麦为原料,通过粉碎、乙醇回流提取、浓缩、过滤、乙醇洗涤、水溶解、结晶、过滤等步骤,得芦丁精制品。但同样,该方法的原料昂贵,仅获得了一种产品,未将资源综合利用,不适合工业化生产。
CN103340938A公开了一种苦荞标准提取物FT83及高纯度槲皮素的制备方法,是以苦荞麸皮为原料,通过低级醇浸泡或超声提取、减压浓缩、喷雾干燥、柱层析纯化等步骤,得高含量的槲皮素。但是,该方法生产周期长、设备投入大,且仅得到了苦荞中的一种活性成分——槲皮素,还使用了有毒有害的化工溶剂,不适合工业化生产。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是,克服现有技术存在的上述缺陷,提供一种可同时提取多种高纯度、高收率的黄酮类化合物,且操作简单、成本低廉、环境友好、适宜于工业化生产的从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下:一种从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法,包括以下步骤:
(1)将干燥的苦荞叶粉碎,加入碱水溶液,室温下搅拌提取,过滤,滤液用酸溶液调节pH值至中性或弱酸性,然后用超滤膜超滤,得超滤膜滤液;
(2)将步骤(1)所得超滤膜滤液上大孔吸附树脂层析柱,然后,先水洗层析柱至流出液清亮、透明,再先后用低度醇溶液和高度醇溶液对大孔吸附树脂层析柱进行洗脱,分别收集低度醇溶液洗脱液和高度醇溶液洗脱液,浓缩,干燥,分别得槲皮素和山奈酚的混合物、芦丁粗品;
(3)将步骤(2)所得芦丁粗品用热水溶解,趁热过滤,自然冷却至室温,静置结晶,抽滤,滤饼用醇溶液在室温下搅拌、分散,抽滤,干燥,得芦丁精品;
(4)将步骤(2)所得槲皮素和山奈酚的混合物用醋酸水溶液加热溶解,降温,冷冻搅拌析晶,过滤,水洗,得山奈酚粗品;将过滤所得母液浓缩至无醋酸,水洗,得槲皮素粗品;
(5)将步骤(4)所得山奈酚粗品以及槲皮素粗品分别用醇溶液加热溶解,趁热过滤,自然冷却至室温,静置结晶,抽滤,干燥,分别得槲皮素精品和山奈酚精品。
优选地,步骤(1)中,所述干燥的苦荞叶中,芦丁的质量含量为5~8%,槲皮素的质量含量为2~4%,山奈酚的质量含量为3~6%。所述干燥的苦荞叶中含水率≤5%。
优选地,步骤(1)中,所述粉碎至粒径为1~2mm。若粉碎的粒径过大,则原料中的黄酮类成分难以浸出,将造成收率偏低;若粉碎的粒径过小,将加大过滤的难度。
优选地,步骤(1)中,所述碱水溶液与干燥的苦荞叶的质量比为15~20:1。
优选地,步骤(1)中,所述碱水溶液的质量浓度为0.1~2.0%。
优选地,步骤(1)中,所述碱水溶液为氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化钾的水溶液。
优选地,步骤(1)中,所述搅拌提取的时间为3~6h。
若碱水溶液的用量过少、质量浓度过低或搅拌提取的时间过短,都将导致黄酮类化合物提取不完全,收率偏低;若碱水溶液的用量过多、质量浓度过高或搅拌提取的时间过长,都有可能破换黄酮类化合物的分子结构,并造成物料和能源的浪费。
优选地,步骤(1)中,所述酸溶液的质量浓度为5~10%。
优选地,步骤(1)中,所述酸溶液为盐酸溶液和/或硫酸溶液。
优选地,步骤(1)中,调节pH值至6.0~7.0。
用酸溶液调节pH值至中性或弱酸性的目的:一是,黄酮类化合物易与碱反应形成盐,呈离子状态,导致难以被大孔树脂吸附,只有加酸可使之转变为分子状态,才可以被树脂吸附;二是,大孔树脂在碱性的液体环境中,对黄酮类化合物的吸附能力减弱,难以发挥其最大的吸附分离效果。
优选地,步骤(1)中,所述超滤膜的截留分子量为1000~2000Da,超滤的压力为0.1~0.3MPa。超滤的目的是去除物料中的蛋白质、鞣质等大分子杂质以及调酸时析出的少量固形物。
优选地,步骤(2)中,上柱的流速为0.5~1.0 BV/h。
优选地,步骤(2)中,所述大孔吸附树脂与干燥的苦荞叶的体积质量比(L/kg)为0.2~0.5:1。
优选地,步骤(2)中,所述大孔吸附树脂层析柱的高径比为2~8:1(更优选4~7:1)。
优选地,步骤(2)中,所述大孔吸附树脂的型号为LSA-10型、LSA-12型、LX-38型或LX-162型等中的一种或几种。
若上柱的流速过快、大孔吸附树脂的用量过少或层析柱的高径比过小,都将造成黄酮类化合物难以全部被大孔树脂吸附而部分流失,导致收率偏低;若上柱的流速过慢、大孔吸附树脂的用量过多或层析柱的高径比过大,都将造成物料和能源的浪费。
优选地,步骤(2)中,所述水洗的流速为1.0~2.0 BV/h。水洗的目的是将残留在柱床中未被吸附的杂质冲洗干净。
优选地,步骤(2)中,所述水洗的用水量为2~3 BV。
优选地,步骤(2)中,所述低度醇溶液和高度醇溶液洗脱的流速均为1.0~2.0 BV/h。
优选地,步骤(2)中,所述低度醇溶液的用量为2~3 BV。
优选地,步骤(2)中,所述低度醇溶液的体积浓度为20~30%。
优选地,步骤(2)中,所述高度醇溶液的用量为2~3 BV。
优选地,步骤(2)中,所述高度醇溶液的体积浓度为70~80%。
优选地,步骤(2)中,所述低度醇溶液或高度醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇等中的一种或几种。
低度醇溶液洗脱的目的是将极性小的槲皮素和山奈酚洗脱,高度醇溶液洗脱的目的是将极性大的芦丁洗脱。若低度醇溶液洗脱的流速过快、用量过少或浓度过小,都将造成槲皮素和山奈酚洗脱不彻底,造成槲皮素和山奈酚的收率偏低,此外,未被洗脱的槲皮素和山奈酚将被后续的高度乙醇洗脱,造成芦丁粗品的含量偏低;若低度醇溶液洗脱的流速过慢、用量过多或浓度过大,都将使部分芦丁同时被洗脱,造成槲皮素和山奈酚粗品的含量偏低。若高度醇溶液洗脱的流速过快、用量过少或浓度过小,都将导致芦丁洗脱不彻底,使芦丁的收率偏低;若高度醇溶液洗脱的流速过慢、用量过多或浓度过大,都将造成物料和能源的浪费。
优选地,步骤(2)中,所述浓缩至固含量为30~45%。
优选地,步骤(2)中,所述干燥的温度为60~80℃,干燥至含水率为1~5%。
优选地,步骤(3)中,所述热水的用量为芦丁粗品质量的10~20倍。用热水精制芦丁的原理是:芦丁在热水和冷水中的溶解度差别极大,因此,可以用热水溶解、冷水结晶的方式提高芦丁的含量。
优选地,步骤(3)中,所述热水的温度为90~100℃。
优选地,步骤(3)中,所述静置结晶的时间为12~24h。
优选地,步骤(3)中,所述醇溶液与芦丁粗品的体积质量比(L/kg)为1~2:1。醇溶液搅拌、分散可去除芦丁结晶中少量的醇溶性杂质。先用水溶解是为了使芦丁重结晶;后用醇溶液搅拌、分散是为了溶解并去除结晶体中的醇溶杂质。
优选地,步骤(3)中,所述醇溶液的体积浓度为70~80%。若醇溶液的体积浓度过低或用量过少,将导致滤饼中的杂质无法溶解并去除,造成芦丁精品的含量偏低;若醇溶液的体积浓度过高或用量过多,将导致杂质去除的同时,部分芦丁也将溶解并损耗,造成芦丁精品的收率偏低。
优选地,步骤(3)中,所述醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇等中的一种或几种。
优选地,步骤(3)中,所述搅拌的时间为10~30min。
优选地,步骤(4)中,所述醋酸水溶液与槲皮素和山奈酚的混合物的体积质量比(L/kg)为5~8:1。
优选地,步骤(4)中,所述醋酸水溶液的质量浓度为10~20%。
优选地,步骤(4)中,所述加热溶解的温度为70~90℃。
用醋酸水溶液将槲皮素和山奈酚的混合物溶解,并利用槲皮素和山奈酚两者在醋酸水溶液中溶解度的差异,将两者通过结晶的方式分离;若醋酸水溶液的用量过少、质量浓度过低或加热溶解温度过低,都将导致槲皮素和山奈酚的混合物难以充分溶解,造成收率偏低;若醋酸水溶液的用量过多、质量浓度过高或加热溶解温度过高,都将导致山奈酚的析出不充分,造成山奈酚的收率偏低,且由于母液中仍然有山奈酚未析出,还将导致槲皮素的含量偏低。
优选地,步骤(4)中,所述冷冻搅拌析晶的温度为5~10℃,搅拌的速度为20~60r/min,时间为12~24 h。冷冻析晶的目的是使山奈酚充分析出,提高收率。
优选地,步骤(5)中,所述醇溶液与槲皮素粗品或山奈酚粗品的体积质量比(L/kg)为4~10:1。
优选地,步骤(5)中,所述醇溶液的体积浓度为80~90%。
优选地,步骤(5)中,所述醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇等中的一种或几种。
优选地,步骤(5)中,所述加热溶解的温度为60~70℃。
用醇溶液加热溶解有利于充分溶解,为结晶创造条件。若醇溶液的用量过少、体积浓度过低或加热溶解温度过低,都将导致山奈酚粗品或槲皮素粗品溶解不充分,过滤后结晶的收率偏低;若醇溶液的用量过多、体积浓度过高或加热溶解温度过高,不但会造成物料和能源的浪费,还将造成山奈酚或槲皮素难以充分析出,导致收率偏低。
优选地,步骤(5)中,所述静置结晶的时间为12~24 h。
本发明方法中,1 BV=1个柱体积。
本发明方法的原理是:芦丁、槲皮素和山奈酚是苦荞叶中三种最主要的黄酮类化合物,都易溶于碱水、都可以被大孔吸附树脂吸附,因此,都可以用碱水提取、大孔吸附树脂富集。由于槲皮素和山奈酚是黄酮苷元,极性小,易被低度醇洗脱;而芦丁属于黄酮苷,极性大,低度醇无法洗脱,因此,可以依次用梯度洗脱的方法将黄酮苷元和黄酮苷分离;而槲皮素和山奈酚两种黄酮苷元虽然被低度乙醇同时洗脱,但是由于两者在稀醋酸溶液中的溶解度差异很大,使用稀醋酸溶液结晶的方式可将两者分离。
本发明方法的有益效果如下:
(1)按照本发明方法所得芦丁精品中,芦丁的质量含量可高达99.5%,收率可高达96%;所得槲皮素精品中,槲皮素的质量含量可高达99.3%,收率可高达95%;所得山奈酚精品中,山奈酚的质量含量可高达98.7%,收率可高达94%;
(2)本发明方法可同时提取多种高纯度、高收率的黄酮类化合物,且操作简单、成本低廉、环境友好、适宜于工业化生产,不但综合利用了苦荞叶资源,还将创造极大的经济价值。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
本发明实施例所使用的干燥的苦荞叶(含水率≤5%)购于内蒙古赤峰,其中,芦丁、槲皮素和山奈酚的质量含量分别为6.7%、3.2%和4.1%;本发明实施例所使用的LSA-10型、LSA-12型、LX-38型大孔吸附树脂均购于西安蓝晓科技新材料股份有限公司;本发明实施例所使用的原料或化学试剂,如无特殊说明,均通过常规商业途径获得。
本发明实施例中,采用高效液相色谱外标法检测芦丁、槲皮素和山奈酚的质量含量。
实施例1
(1)将100kg干燥的苦荞叶粉碎至粒径为2mm,加入2000kg氢氧化钙水溶液(质量浓度为0.1%),室温下搅拌提取6h,过滤,滤液用质量浓度为5%的盐酸溶液调节pH值至6.0,然后在0.3MPa下,用截留分子量为1000Da的超滤膜超滤,得超滤膜滤液;
(2)将步骤(1)所得超滤膜滤液,以0.8 BV/h的流速,上LSA-10型大孔吸附树脂层析柱(LSA-10型大孔吸附树脂的用量为50L,层析柱的高径比为6:1),然后,先用2BV水,以1.0BV/h的流速,水洗层析柱至流出液清亮、透明,再以1.0BV/h的流速,先后用2BV、体积浓度为30%的低度乙醇溶液和2BV、体积浓度为80%的高度乙醇溶液,对LSA-10型大孔吸附树脂层析柱进行洗脱,分别收集低度乙醇溶液洗脱液和高度乙醇溶液洗脱液,浓缩至固含量为35%,在65℃下,干燥至含水率为3%,分别得槲皮素和山奈酚的混合物7.93kg、芦丁粗品7.45kg;
(3)将步骤(2)所得7.45kg芦丁粗品用75kg、90℃的热水溶解,趁热过滤,自然冷却至室温,静置结晶12h,抽滤,滤饼用14.9L、体积浓度为70%的乙醇溶液在室温下搅拌、分散15min,抽滤,干燥,得芦丁精品6.44kg;
(4)将步骤(2)所得7.93kg槲皮素和山奈酚的混合物用57.6L醋酸水溶液(质量浓度为10%),在75℃下,加热溶解,降温,在10℃、20 r/min的转速下,冷冻搅拌析晶12h,过滤,水洗,得山奈酚粗品7.88kg(湿重);将过滤所得母液浓缩至无醋酸,水洗,得槲皮素粗品6.15kg(湿重);
(5)将步骤(4)所得7.88kg(湿重)山奈酚粗品以及6.15kg(湿重)槲皮素粗品分别用32L、40L体积浓度均为85%的乙醇溶液,在65℃下,加热溶解,趁热过滤,自然冷却至室温,静置结晶12h,抽滤,干燥,分别得槲皮素精品2.99kg和山奈酚精品3.78kg。
经高效液相色谱外标法检测,本发明实施例所得芦丁精品中,芦丁的质量含量为98.9%,收率为95%;所得槲皮素精品中,槲皮素的质量含量为99.3%,收率为93%;所得山奈酚精品中,山奈酚的质量含量为98.7%,收率为91%。
实施例2
(1)将200kg干燥的苦荞叶粉碎至粒径为1mm,加入3000kg氢氧化钠水溶液(质量浓度为0.5%),室温下搅拌提取5h,过滤,滤液用质量浓度为8%的硫酸溶液调节pH值至7.0,然后在0.2MPa下,用截留分子量为1500Da的超滤膜超滤,得超滤膜滤液;
(2)将步骤(1)所得超滤膜滤液,以0.5 BV/h的流速,上LSA-12型大孔吸附树脂层析柱(LSA-12型大孔吸附树脂的用量为60L,层析柱的高径比为5:1),然后,先用2.5BV水,以1.5BV/h的流速,水洗层析柱至流出液清亮、透明,再以1.5BV/h的流速,先后用2.5BV、体积浓度为25%的低度乙醇溶液和2.5BV、体积浓度为75%的高度乙醇溶液,对LSA-12型大孔吸附树脂层析柱进行洗脱,分别收集低度乙醇溶液洗脱液和高度乙醇溶液洗脱液,浓缩至固含量为30%,在70℃下,干燥至含水率为2%,分别得槲皮素和山奈酚的混合物16.22kg、芦丁粗品15.23kg;
(3)将步骤(2)所得15.23kg芦丁粗品用230kg、95℃的热水溶解,趁热过滤,自然冷却至室温,静置结晶16h,抽滤,滤饼用23L、体积浓度为80%的乙醇溶液在室温下搅拌、分散20min,抽滤,干燥,得芦丁精品12.93kg;
(4)将步骤(2)所得16.22kg槲皮素和山奈酚的混合物用82L醋酸水溶液(质量浓度为18%),在80℃下,加热溶解,降温,在5℃、40 r/min的转速下,冷冻搅拌析晶16h,过滤,水洗,得山奈酚粗品17.44kg(湿重);将过滤所得母液浓缩至无醋酸,水洗,得槲皮素粗品13.62kg(湿重);
(5)将步骤(4)所得17.44kg(湿重)山奈酚粗品以及13.62kg(湿重)槲皮素粗品分别用108L、105L体积浓度均为80%的乙醇溶液,在70℃下,加热溶解,趁热过滤,自然冷却至室温,静置结晶16h,抽滤,干燥,分别得槲皮素精品6.01kg和山奈酚精品7.77kg。
经高效液相色谱外标法检测,本发明实施例所得芦丁精品中,芦丁的质量含量为99.5%,收率为96%;所得槲皮素精品中,槲皮素的质量含量为98.0%,收率为92%;所得山奈酚精品中,山奈酚的质量含量为98.1%,收率为93%。
实施例3
(1)将150kg干燥的苦荞叶粉碎至粒径为1mm,加入2700kg氢氧化钾水溶液(质量浓度为1.0%),室温下搅拌提取3h,过滤,滤液用质量浓度为10%的盐酸溶液调节pH值至6.5,然后在0.2MPa下,用截留分子量为2000Da的超滤膜超滤,得超滤膜滤液;
(2)将步骤(1)所得超滤膜滤液,以1.0BV/h的流速,上LX-38型大孔吸附树脂层析柱(LX-38型大孔吸附树脂的用量为60L,层析柱的高径比为7:1),然后,先用3BV水,以2.0BV/h的流速,水洗层析柱至流出液清亮、透明,再以2.0BV/h的流速,先后用3BV、体积浓度为20%的低度乙醇溶液和3BV、体积浓度为70%的高度乙醇溶液,对LX-38型大孔吸附树脂层析柱进行洗脱,分别收集低度乙醇溶液洗脱液和高度乙醇溶液洗脱液,浓缩至固含量为40%,在75℃下,干燥至含水率为3%,分别得槲皮素和山奈酚的混合物12.44kg、芦丁粗品11.69kg;
(3)将步骤(2)所得11.69kg芦丁粗品用210kg、98℃的热水溶解,趁热过滤,自然冷却至室温,静置结晶24h,抽滤,滤饼用18L、体积浓度为75%的乙醇溶液在室温下搅拌、分散25min,抽滤,干燥,得芦丁精品9.56kg;
(4)将步骤(2)所得12.44kg槲皮素和山奈酚的混合物用75L醋酸水溶液(质量浓度为15%),在85℃下,加热溶解,降温,在8℃、30 r/min的转速下,冷冻搅拌析晶20h,过滤,水洗,得山奈酚粗品11.6kg(湿重);将过滤所得母液浓缩至无醋酸,水洗,得槲皮素粗品11.2kg(湿重);
(5)将步骤(4)所得11.6kg(湿重)山奈酚粗品以及11.2kg(湿重)槲皮素粗品分别用68L、81L体积浓度均为90%的乙醇溶液,在60℃下,加热溶解,趁热过滤,自然冷却至室温,静置结晶20h,抽滤,干燥,分别得槲皮素精品4.6kg和山奈酚精品5.87kg。
经高效液相色谱外标法检测,本发明实施例所得芦丁精品中,芦丁的质量含量为97.8%,收率为93%;所得槲皮素精品中,槲皮素的质量含量为99.2%,收率为95%;所得山奈酚精品中,山奈酚的质量含量为98.5%,收率为94%。
Claims (9)
1.一种从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将干燥的苦荞叶粉碎,加入碱水溶液,室温下搅拌提取,过滤,滤液用酸溶液调节pH值至中性或弱酸性,然后用超滤膜超滤,得超滤膜滤液;
(2)将步骤(1)所得超滤膜滤液上大孔吸附树脂层析柱,然后,先水洗层析柱至流出液清亮、透明,再先后用低度醇溶液和高度醇溶液对大孔吸附树脂层析柱进行洗脱,分别收集低度醇溶液洗脱液和高度醇溶液洗脱液,浓缩,干燥,分别得槲皮素和山奈酚的混合物、芦丁粗品;
(3)将步骤(2)所得芦丁粗品用热水溶解,趁热过滤,自然冷却至室温,静置结晶,抽滤,滤饼用醇溶液在室温下搅拌、分散,抽滤,干燥,得芦丁精品;
(4)将步骤(2)所得槲皮素和山奈酚的混合物用醋酸水溶液加热溶解,降温,冷冻搅拌析晶,过滤,水洗,得山奈酚粗品;将过滤所得母液浓缩至无醋酸,水洗,得槲皮素粗品;
(5)将步骤(4)所得山奈酚粗品以及槲皮素粗品分别用醇溶液加热溶解,趁热过滤,自然冷却至室温,静置结晶,抽滤,干燥,分别得槲皮素精品和山奈酚精品。
2.根据权利要求1所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述干燥的苦荞叶中,芦丁的质量含量为5~8%,槲皮素的质量含量为2~4%,山奈酚的质量含量为3~6%;所述粉碎至粒径为1~2mm。
3.根据权利要求1或2所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述碱水溶液与干燥的苦荞叶的质量比为15~20:1;所述碱水溶液的质量浓度为0.1~2.0%;所述碱水溶液为氢氧化钙、氢氧化钠或氢氧化钾的水溶液;所述搅拌提取的时间为3~6h。
4.根据权利要求1~3之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法,其特征在于:步骤(1)中,所述酸溶液的质量浓度为5~10%;所述酸溶液为盐酸溶液和/或硫酸溶液;调节pH值至6.0~7.0;所述超滤膜的截留分子量为1000~2000Da,超滤的压力为0.1~0.3MPa。
5.根据权利要求1~4之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法,其特征在于:步骤(2)中,上柱的流速为0.5~1.0 BV/h;所述大孔吸附树脂与干燥的苦荞叶的体积质量比为0.2~0.5:1;所述大孔吸附树脂层析柱的高径比为2~8:1;所述大孔吸附树脂的型号为LSA-10型、LSA-12型、LX-38型或LX-162型中的一种或几种;所述水洗的流速为1.0~2.0 BV/h;所述水洗的用水量为2~3 BV。
6.根据权利要求1~5之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法,其特征在于:步骤(2)中,所述低度醇溶液和高度醇溶液洗脱的流速均为1.0~2.0 BV/h;所述低度醇溶液的用量为2~3 BV;所述低度醇溶液的体积浓度为20~30%;所述高度醇溶液的用量为2~3 BV;所述高度醇溶液的体积浓度为70~80%;所述低度醇溶液或高度醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇中的一种或几种;所述浓缩至固含量为30~45%;所述干燥的温度为60~80℃,干燥至含水率为1~5%。
7.根据权利要求1~6之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法,其特征在于:步骤(3)中,所述热水的用量为芦丁粗品质量的10~20倍;所述热水的温度为90~100℃;所述静置结晶的时间为12~24h;所述醇溶液与芦丁粗品的体积质量比为1~2:1;所述醇溶液的体积浓度为70~80%;所述醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇中的一种或几种;所述搅拌的时间为10~30min。
8.根据权利要求1~7之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法,其特征在于:步骤(4)中,所述醋酸水溶液与槲皮素和山奈酚的混合物的体积质量比为5~8:1;所述醋酸水溶液的质量浓度为10~20%;所述加热溶解的温度为70~90℃;所述冷冻搅拌析晶的温度为5~10℃,搅拌的速度为20~60 r/min,时间为12~24 h。
9.根据权利要求1~8之一所述从苦荞叶中同时提取多种黄酮类化合物的方法,其特征在于:步骤(5)中,所述醇溶液与槲皮素粗品或山奈酚粗品的体积质量比为4~10:1;所述醇溶液的体积浓度为80~90%;所述醇溶液中的醇为甲醇、乙醇或丙醇中的一种或几种;所述加热溶解的温度为60~70℃;所述静置结晶的时间为12~24 h。
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