CN108409570A - 紫草中乙酰紫草素快速高效纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于药物提取技术领域，具体涉及紫草中乙酰紫草素快速高效纯化方法，紫草粉碎过筛，以非极性有机溶媒对紫草原料以回流方式充分提取后，浓缩获得总提取物浸膏，然后使用FLASH中压反相硅胶柱进行粗分，然后将乙酰紫草素的粗品进行正相硅胶柱层析，进一步获得乙酰紫草素。该方法所用设备简单，试剂常见廉价，工艺简洁，能够快速从中药材中获得高纯度的乙酰紫草素，可用于工业化生产。

Description

紫草中乙酰紫草素快速高效纯化方法

技术领域

本发明属于药物提取技术领域，具体涉及紫草中乙酰紫草素快速高效纯化方法。

背景技术

紫草，别名硬紫草、软紫草。中国药典2015版收载的紫草为新疆紫草Arnebiaeuchroma(Royle)Johnst.或内蒙紫草Arnebia guttala Bungede的干燥根。其味甘、咸，性寒，归肝、心包络经，有清热、活血、凉血、解毒等功效，临床主要用于痈疡、热结便秘、紫癜、湿性斑疹、淋浊和血痢等病。现代药学研究发现紫草根中主要化学成分为紫草萘醌类、生物碱类、黄酮类、酚酸类、三萜酸及甾醇类以及多糖类等物质。其中最主要的活性物质是紫草萘醌类化合物，有紫草素，乙酰紫草素，异戊酰紫草素，异丁酰紫草素等。该类化合物已被众多学者广泛研究确定为具有抗肿瘤活性的物质，且生物活性多样：抗病毒、抗菌、抗炎、强心等。由于紫草含有丰富的紫草萘醌红色素成分，其在食品业、化妆品业、医药行业等有广泛的应用，因此，紫草中该类化合物的提取、分离、纯化制备方法具有广阔的应用前景和使用价值。乙酰紫草素是这类化合物的典型代表，目前研究发现对多种肿瘤呈现出非常好的抑制作用。

除上述药典收集的紫草品种外，在目前也有作为其替代品，目前使用的较多的如硬紫草(Lithospermum erythrorhizon Sieb.et Zucc.)、滇紫草(Onosma paniculatumBur.et Franch.)等品种的根、根皮或根栓皮中，也含有乙酰紫草素及紫草萘醌类成分。

目前乙酰紫草素的提取方法未见专利报道，同类化合物紫草素的提取方法有众多学者研究。公开号CN1334103A等中国专利文献均报道了以超临界CO₂萃取的方法提取紫草素，其总提取物的收得率较低，加之设备限制，较难工业化大生产。CN1206726A介绍了用正己烷、石油醚、溶剂油于30～35℃直接浸泡紫草根，减压浓缩后得黑红色油膏状物，然后与吐温80共同制成水溶液，再用糊精进行吸附后，喷雾干燥制成水溶性红色固体粉末，油膏状提取物的提取率1～2％，收得率较低，原料的利用率低，不利于大生产。

发明内容

针对上述情况，本发明提供了一种由硬紫草(泰山紫草)原料提取乙酰紫草素的方法，可以使产物的收率和纯度均较满意，且简单方便，具有工业应用价值。

紫草中乙酰紫草素快速高效纯化方法，包括以下步骤：

(1)将紫草粉碎，过20目筛，用60～90℃的石油醚充分浸泡，回流提取3～6次，每次石油醚用量为药材重量的4～20倍，每次提取时间0.5～3小时，合并提取液，减压回收石油醚，浓缩得浸膏；

(2)将浸膏充分吸附于200-300目的正相硅胶，浸膏重量与吸附填料重量比1：1～5，然后进行FLASH反相中压柱层析，用体积分数0～95％甲醇水溶液洗脱，当体积分数取到0时即为纯水；流速为1～5ml/min，收集体积分数为90％甲醇水溶液洗脱部分，浓缩得乙酰紫草素粗品。

(3)将上述乙酰紫草素粗品充分吸附于200-300目正相硅胶，浸膏重量与吸附填料比1：1～5，然后进行200-300目正相硅胶柱层析，体积比为500：0.5～1：0.5～1的石油醚/乙酸乙酯/乙酸的流动相进行洗脱，TLC薄层板检测，收集第二个组分即为乙酰紫草素。

本发明提供的紫草中乙酰紫草素快速高效纯化方法，采用的是以非极性有机溶媒对紫草原料以回流方式充分提取后，浓缩获得总提取物浸膏，然后使用FLASH中压反相硅胶柱进行粗分，然后将乙酰紫草素的粗品进行正相硅胶柱层析，进一步获得乙酰紫草素。该方法所用设备简单，试剂常见廉价，工艺简洁，能够快速从中药材中获得高纯度的乙酰紫草素，可用于工业化生产。

具体实施方式

结合实施例说明本发明的具体技术方案。

紫草中乙酰紫草素快速高效纯化方法，包括以下步骤：

(1)将紫草粉碎，过20目筛，用60～90℃的石油醚充分浸泡，回流提取3～6次，每次石油醚用量为药材重量的4～20倍，每次提取时间0.5～3小时，合并提取液，减压回收石油醚，浓缩得浸膏；

(2)将浸膏充分吸附于200-300目的正相硅胶，浸膏重量与吸附填料重量比1：1～5，然后进行FLASH反相中压柱层析，用体积分数0～95％甲醇水溶液洗脱，当体积分数取到0时即为纯水；流速为1～5ml/min，收集体积分数为90％甲醇水溶液洗脱部分，浓缩得乙酰紫草素粗品。

(3)将上述乙酰紫草素粗品充分吸附于200-300目正相硅胶，浸膏重量与吸附填料比1：1～5，然后进行200-300目正相硅胶柱层析，体积比为500：0.5～1：0.5～1的石油醚/乙酸乙酯/乙酸的流动相进行洗脱，TLC薄层板检测，收集第二个组分即为乙酰紫草素。

本发明技术首先将粗提物经反相硅胶分离，大大减少了样品损失。因为乙酰紫草素存在一定酸性，在正相硅胶柱层析中的洗脱液中加酸可以有效减少乙酰紫草素在分离填料中的拖尾，利于富集样品，与杂质分开，提高纯度，经重结晶后纯度可达98％以上。

Claims (1)

1.紫草中乙酰紫草素快速高效纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将紫草粉碎，过20目筛，用60～90℃的石油醚充分浸泡，回流提取3～6次，每次石油醚用量为药材重量的4～20倍，每次提取时间0.5～3小时，合并提取液，减压回收石油醚，浓缩得浸膏；

(2)将浸膏充分吸附于200-300目的正相硅胶，浸膏重量与吸附填料重量比1：1～5，然后进行FLASH反相中压柱层析，用体积分数0～95％甲醇水溶液洗脱，流速为1～5ml/min，收集体积分数为90％甲醇水溶液洗脱部分，浓缩得乙酰紫草素粗品；

(3)将上述乙酰紫草素粗品充分吸附于200-300目正相硅胶，浸膏重量与吸附填料比1：1～5，然后进行200-300目正相硅胶柱层析，体积比为500：0.5～1：0.5～1的石油醚/乙酸乙酯/乙酸的流动相进行洗脱，TLC薄层板检测，收集第二个组分即为乙酰紫草素。