CN108338073A - 一种辣椒的组织培养方法 - Google Patents

一种辣椒的组织培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108338073A
CN108338073A CN201810181873.5A CN201810181873A CN108338073A CN 108338073 A CN108338073 A CN 108338073A CN 201810181873 A CN201810181873 A CN 201810181873A CN 108338073 A CN108338073 A CN 108338073A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture
adventitious bud
capsicum
pepper
cotyledon
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810181873.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108338073B (zh
Inventor
张晓芬
耿三省
陈斌
杜和山
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Original Assignee
Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences filed Critical Beijing Academy of Agriculture and Forestry Sciences
Priority to CN201810181873.5A priority Critical patent/CN108338073B/zh
Publication of CN108338073A publication Critical patent/CN108338073A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108338073B publication Critical patent/CN108338073B/zh
Expired - Fee Related legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本发明公开了一种辣椒的组织培养方法。本发明保护一种辣椒的组织培养方法，包括如下步骤：(1)采用辣椒子叶切块作为外植体，进行不定芽诱导培养，得到不定芽；(2)完成步骤(1)后，选取长度大于2cm的不定芽，进行生根培养，得到再生植株。本发明的发明人通过对辣椒子叶、下胚轴、带病子叶、真叶等不同的组织进行重复的诱导再生试验，最终筛选出了一种以辣椒子叶为外植体、能让辣椒不定芽高效伸长的组织培养方法，成功建立了辣椒高效再生体系。该组织培养方法对辣椒的遗传转化和品种改良具有重要的意义，应用前景广阔。

Description

一种辣椒的组织培养方法
技术领域
本发明涉及一种辣椒的组织培养方法。
背景技术
组织培养和DNA重组技术作为关键的植物生物技术，是弥补作物常规育种不足和促进作物育种进程的强有力工具。然而，辣椒是一种非常顽拗的茄科作物，其“顽拗”体现在细胞培养、组织培养、器官分化、植株再生和遗传转化等多个方面，使得可对辣椒进行有效遗传改良的DNA重组技术进展非常困难(缓慢)。植物组培再生体系的构建是进行基因转化的前提。尽管有关于摸索研究辣椒再生体系构建的系列文献发表，而实际上辣椒作物一直没有构建起成熟、稳定的再生体系，这成为阻碍辣椒基因转化的一大阻碍。其中辣椒不定芽伸长异常困难成为辣椒遗传转化最大的限制因素。
发明内容
本发明的目的是提供一种辣椒的组织培养方法。
本发明提供了一种辣椒的组织培养方法，包括如下步骤：
(1)采用辣椒子叶切块作为外植体，进行不定芽诱导培养，得到不定芽；
(2)完成步骤(1)后，选取长度大于2cm的不定芽，进行生根培养，得到再生植株。
所述步骤(1)包括如下步骤(a)和步骤(b)：
(a)将辣椒子叶切块接种于诱导培养基A中进行诱导培养；
(b)完成步骤(a)后，将子叶切块接种于不定芽诱导培养基中进行不定芽诱导培养，得到不定芽；
所述诱导培养基A为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：
(a1)含有1.0-3.0mg/L TDZ、0.1-0.3mg/L NAA和1.0-3.0mg/L AgNo3的培养基；
(a2)含有1.8mg/L TDZ、0.2mg/LNAA和2.0mg/L AgNo3的培养基；
(a3)含有1.0-3.0mg/L TDZ、0.1-0.3mg/L NAA和1.0-3.0mg/LAgNo3的MS培养基；
(a4)含有1.8mg/L TDZ、0.2mg/LNAA和2.0mg/L AgNo3的MS培养基。
所述诱导培养基A为含有TDZ、NAA和AgNo3的MS固体培养基。
所述不定芽诱导培养基为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：
(b1)含有0.1-0.3mg/L IAA、1.0-3.0mg/L GA3和1.0-2.0mg/LAgNo3的培养基；
(b2)含有0.2mg/L IAA、1.0mg/L GA3和2.0mg/L AgNo3的培养基；
(b3)含有0.1-0.3mg/L IAA、1.0-3.0mg/L GA3和1.0-2.0mg/L ARNo3的MS培养基；
(b4)含有0.2mg/L IAA、1.0mg/L GA3和2.0mg/LAgNo3的MS培养基。
所述不定芽诱导培养基为含有IAA、GA3和AgNo3的MS固体培养基。
所述步骤(b)中，所述不定芽诱导培养的培养条件为25-28℃、16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗。
所述步骤(a)中，所述诱导培养的培养条件为25-28℃、16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗培养。
所述步骤(a)中，所述诱导培养的周期为1个月。
所述步骤(2)中，将长度大于2cm的不定芽接种于MS固体培养基中进行生根培养。
所述步骤(2)中，所述生根培养的培养条件为25-28℃、16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗培养。
所述辣椒子叶切块的制备方法如下：将辣椒的种子接种后培养得到无菌苗，取无菌苗的子叶，制备子叶切块。
所述辣椒子叶切块的制备方法中，将辣椒的种子接种于1/2MS固体培养基进行培养得到无菌苗。
选取苗龄8-10天的无菌苗的子叶制备子叶切块。
所述子叶切块的边长为0.5-0.7cm。
所述辣椒子叶切块的制备方法中，所述培养的培养条件为25-28℃、黑暗培养至种子发芽，发芽后将光照条件调整为16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗继续培养。
本发明还保护一种用于辣椒组织培养的试剂盒，为包括如下(c1)或(c2)或(c3)或(c4)的试剂盒：
(c1)所述不定芽诱导培养基和MS固体培养基；
(c2)所述不定芽诱导培养基和所述诱导培养基A；
(c3)所述不定芽诱导培养基、MS固体培养基和诱导培养基A；
(c4)所述不定芽诱导培养基、MS固体培养基、所述诱导培养基A和1/2MS固体培养基。
本发明的发明人通过对辣椒子叶、下胚轴、带病子叶、真叶等不同的组织进行重复的诱导再生试验，最终筛选出了一种以辣椒子叶为外植体、能让辣椒不定芽高效伸长的组织培养方法，成功建立了辣椒高效再生体系。该组织培养方法对辣椒的遗传转化和品种改良具有重要的意义，应用前景广阔。
附图说明
图1为不定芽诱导培养基I诱导的辣椒不定芽分化与伸长效果。
图2为不定芽诱导培养基II诱导的辣椒不定芽分化与伸长效果。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
辣椒品种“国福208”：北京市农林科学院蔬菜研究中心选育，审定编号：京品鉴椒2011015，京研益农(北京)种业科技有限公司销售；辣椒品种“国福208”在实施例中简称为Q7。
辣椒品种“国禧121”：北京市农林科学院蔬菜研究中心选育，已经获得植物新品种权，授权号：CNA20100909.6；辣椒品种“国禧121”在实施例中简称为Q8。
分化率＝分化出不定芽的外植体数/起始外植体数×100％；
伸长率＝分化出伸长芽的外植体数/起始外植体数×100％；
平均伸长芽数＝伸长的芽数/具有伸长芽的外植体数×100％；
不定芽伸长力＝平均伸长芽数×伸长率×100％；
生根率＝生根芽数/接种伸长芽数×100％。
伸长芽为长度＞2cm的不定芽。
实施例1、辣椒的组织培养方法建立
实验材料：Q7和Q8。
1、将实验材料的种子静置于含有1g/L百菌清的水溶液中浸泡5min，然后静置于75％(体积百分含量)的乙醇水溶液中浸泡30s，然后转移至8-10％的次氯酸钠溶液中振荡消毒10-20min，最后用无菌水清洗4次，每次3-5min。
2、完成步骤1后，将种子接种于于1/2MS固体培养基中，25-28℃、黑暗培养至种子发芽，发芽后将光照条件调整为16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗，继续培养至苗龄8-10天。
3、完成步骤2后，切取边长为0.5-0.7cm的子叶切块，接种于诱导培养基I(含有1.8mg/L TDZ、0.2mg/L NAA和2.0mg/L AgNo3的MS固体培养基)或诱导培养基II(含有1.0mg/L TDZ、0.1mg/L NAA和3.0mg/LAgNo3的MS固体培养基)或诱导培养基III(含有3.0mg/L TDZ、0.3mg/L NAA和1.0mg/LAgNo3的MS固体培养基)中，25-28℃、16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗培养一个月。
经过观察统计，接种于诱导培养基I时，子叶切块生长情况最优，接种于诱导培养基II和诱导培养基III时，子叶切块生长情况次之。
4、将步骤3接种于培养基I培养一个月得到的子叶切块接种至不定芽诱导培养基I(含有0.2mg/L IAA、1.0mg/L GA3和2.0mg/L AgNo3的MS固体培养基)或不定芽诱导培养基II(含有0.1mg/L IAA、1.0mg/L GA3和3.0mg/LAgNo3的MS固体培养基)或不定芽诱导培养基III(含有0.3mg/L IAA、3.0mg/L GA3和2.0mg/L AgNo3的MS固体培养基)中，25-28℃、16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗培养直至获得不定芽。
经过观察统计，接种于不定芽诱导培养基I的外植体分化率最高，不定芽伸长情况最优(图1)，接种于不定芽诱导培养基II和不定芽诱导培养基III的外植体分化率次之(图2)。
5、完成步骤4后，选取接种于不定芽诱导培养基I得到的长度＞2cm的伸长芽转接至MS固体培养基中，25-28℃、16h光照(1600-1800lx)/18h黑暗培养生根直至获得完整的辣椒植株。对分化率、伸长率、平均伸长芽数、不定芽伸长力、生根率进行统计。
结果如表1所示。
表1统计结果
结果表明，甜辣椒平均不定芽分化率为78.59％，其中Q7不定芽分化率最高为81.42％；平均不定芽伸长率平均为55.67％，Q7不定芽伸长率较高，为61.38％。以往报道的辣椒不定芽分化率最高为60.7％，不定芽伸长率最高为47.52％。

Claims (7)

1.一种辣椒的组织培养方法，包括如下步骤：
(1)采用辣椒子叶切块作为外植体，进行不定芽诱导培养，得到不定芽；
(2)完成步骤(1)后，选取长度大于2cm的不定芽，进行生根培养，得到再生植株。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)包括如下步骤(a)和步骤(b)：
(a)将辣椒子叶切块接种于诱导培养基A中进行诱导培养；
(b)完成步骤(a)后，将子叶切块接种于不定芽诱导培养基中进行不定芽诱导培养，得到不定芽；
所述诱导培养基A为如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：
(a1)含有1.0-3.0mg/L TDZ、0.1-0.3mg/L NAA和1.0-3.0mg/L AgNo3的培养基；
(a2)含有1.8mg/L TDZ、0.2mg/LNAA和2.0mg/L AgNo3的培养基；
(a3)含有1.0-3.0mg/L TDZ、0.1-0.3mg/L NAA和1.0-3.0mg/L AgNo3的MS培养基；
(a4)含有1.8mg/L TDZ、0.2mg/LNAA和2.0mg/L AgNo3的MS培养基。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于：所述不定芽诱导培养基为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：
(b1)含有0.1-0.3mg/L IAA、1.0-3.0mg/L GA3和1.0-2.0mg/L AgNo3的培养基；
(b2)含有0.2mg/L IAA、1.0mg/L GA3和2.0mg/L AgNo3的培养基；
(b3)含有0.1-0.3mg/L IAA、1.0-3.0mg/L GA3和1.0-2.0mg/L AgNo3的MS培养基；
(b4)含有0.2mg/L IAA、1.0mg/L GA3和2.0mg/L AgNo3的MS培养基。
4.如权利要求1至3任一所述的方法，其特征在于：所述辣椒子叶切块的制备方法如下：将辣椒的种子接种后培养得到无菌苗，取无菌苗的子叶，制备子叶切块。
5.如权利要求1至4任一所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，将长度大于2cm的不定芽接种于MS固体培养基中进行生根培养。
6.如权利要求4或5所述的方法，其特征在于：将辣椒的种子接种于1/2MS固体培养基进行培养得到无菌苗。
7.一种用于辣椒组织培养的试剂盒，为包括如下(c1)或(c2)或(c3)或(c4)的试剂盒：
(c1)权利要求3中所述的不定芽诱导培养基和MS固体培养基；
(c2)权利要求3中所述的不定芽诱导培养基和权利要求2中所述的诱导培养基A；
(c3)权利要求3中所述的不定芽诱导培养基、MS固体培养基和权利要求2中所述的诱导培养基A；
(c4)权利要求3中所述的不定芽诱导培养基、MS固体培养基、权利要求2中所述的诱导培养基A和1/2MS固体培养基。
CN201810181873.5A 2018-03-06 2018-03-06 一种辣椒的组织培养方法 Expired - Fee Related CN108338073B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810181873.5A CN108338073B (zh) 2018-03-06 2018-03-06 一种辣椒的组织培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810181873.5A CN108338073B (zh) 2018-03-06 2018-03-06 一种辣椒的组织培养方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108338073A true CN108338073A (zh) 2018-07-31
CN108338073B CN108338073B (zh) 2020-11-03

Family

ID=62957799

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810181873.5A Expired - Fee Related CN108338073B (zh) 2018-03-06 2018-03-06 一种辣椒的组织培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108338073B (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109169285A (zh) * 2018-10-15 2019-01-11 湖南省蔬菜研究所 一种辣椒未成熟种子培养和种苗快速扩繁的方法
CN109258469A (zh) * 2018-11-19 2019-01-25 海南大学 一种中国辣椒带柄子叶诱导再生植株的方法
CN109906939A (zh) * 2019-03-21 2019-06-21 湖南师范大学 一种辣椒离体再生方法及所用的培养基
CN110574682A (zh) * 2019-09-25 2019-12-17 海南大学 一种柔毛辣椒外植体诱导再生苗的方法
CN110982837A (zh) * 2019-12-16 2020-04-10 北京市农林科学院 一种辣椒遗传转化体系的制备方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105028205A (zh) * 2015-08-03 2015-11-11 河南科技大学 一种辣椒花药培养直接成苗的方法
US20170055478A1 (en) * 2015-08-31 2017-03-02 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Pepper hybrid sv0972pb

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105028205A (zh) * 2015-08-03 2015-11-11 河南科技大学 一种辣椒花药培养直接成苗的方法
US20170055478A1 (en) * 2015-08-31 2017-03-02 Seminis Vegetable Seeds, Inc. Pepper hybrid sv0972pb

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
龙凤等: "辣椒子叶和下胚轴的离体培养及高效再生体系的建立", 《甘肃农业大学学报》 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109169285A (zh) * 2018-10-15 2019-01-11 湖南省蔬菜研究所 一种辣椒未成熟种子培养和种苗快速扩繁的方法
CN109169285B (zh) * 2018-10-15 2021-11-09 湖南省蔬菜研究所 一种辣椒未成熟种子培养和种苗快速扩繁的方法
CN109258469A (zh) * 2018-11-19 2019-01-25 海南大学 一种中国辣椒带柄子叶诱导再生植株的方法
CN109258469B (zh) * 2018-11-19 2022-03-04 海南大学 一种中国辣椒带柄子叶诱导再生植株的方法
CN109906939A (zh) * 2019-03-21 2019-06-21 湖南师范大学 一种辣椒离体再生方法及所用的培养基
CN109906939B (zh) * 2019-03-21 2021-11-26 湖南师范大学 一种辣椒离体再生方法及所用的培养基
CN110574682A (zh) * 2019-09-25 2019-12-17 海南大学 一种柔毛辣椒外植体诱导再生苗的方法
CN110574682B (zh) * 2019-09-25 2022-05-27 海南大学 一种柔毛辣椒外植体诱导再生苗的方法
CN110982837A (zh) * 2019-12-16 2020-04-10 北京市农林科学院 一种辣椒遗传转化体系的制备方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN108338073B (zh) 2020-11-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108338073A (zh) 一种辣椒的组织培养方法
CN104542299A (zh) 一种提高普通野生稻杂交后代花药培养效率的方法
CN101142894A (zh) 野生稻远缘杂交高效培养优良后代的方法
CN107435079A (zh) 利用花药培养快速选育广亲和水稻材料的方法
CN107142277B (zh) 一种高效籼稻遗传转化方法
CN104686361B (zh) 一种葡萄胚性愈伤组织的诱导和培养方法
CN106035082B (zh) 一种西瓜的快速繁殖的方法
CN107691226B (zh) 荷花体细胞胚胎发生途径的再生用培养基及其应用
CN106234228A (zh) 一种培养籼稻愈伤组织的方法
CN109258469A (zh) 一种中国辣椒带柄子叶诱导再生植株的方法
CN111280057B (zh) 一种诱导火炬松胚性愈伤组织的方法及其专用培养基
CN109220809B (zh) 栾树体细胞胚胎发生及植株再生的培养方法
CN104620983B (zh) 一种稗草组织培养成苗的方法
CN101401550B (zh) 诱导茄子小孢子形成胚状体的方法及其专用培养基
CN104026017B (zh) 玉米单倍体植株的培育方法
CN103314849B (zh) 一种野生番茄里基茄体胚发生诱导方法
CN107012162A (zh) 农杆菌介导的棉花胚尖快速转化方法
CN113755521B (zh) 一种由农杆菌介导的草莓‘甜查理’遗传转化体系的构建方法
CN104115751A (zh) 一种利用大白菜球叶获得再生植株的培养方法
CN109997693B (zh) 一种紫花苜蓿的遗传转化方法
CN108925430B (zh) 一种利用红松催芽种子萌发芽体诱导不定芽的方法
CN108719046B (zh) 一种诱导培育杂种枫香四倍体的方法
CN106171981A (zh) 一种异花授粉植物愈伤组织高频再生系的获得方法及其在遗传转化中的应用
CN105123495A (zh) 一种偏籼型水稻显性矮秆突变体的应用
CN110447541A (zh) 一种生菜离体培养高频再生的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20201103

Termination date: 20210306

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee