CN108324921B - 一种具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物及其制备方法，药物组合物按重量计包括蜂胶2～10份，三七8～13份，黄芪27～44份，白及18～36份，牡蛎肽3～8份，玄参5～12份，翻白草4～10份。本发明的药物组合物中三七、白及为君药，具有散瘀止血、消肿生肌、消疮解毒、保护胃粘膜的功效；黄芪、蜂胶为臣药，黄芪能补气升阳、利水消肿、托毒排脓，蜂胶可解毒消肿、收敛生肌；玄参和翻白草为佐药，玄参能清热凉血、解毒散结，翻白草可清热解毒、止痢止血、消肿去疮。特别添加的牡蛎肽能供给肌体营养物质，增强免疫力并保护胃粘膜。本发明将各组分的用量合理配比，使各组分药物协同增效，充分发挥其祛除囊肿、保护胃粘膜的功效。

Description

一种具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物及其制备 方法

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体指一种具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物及其制备方法。

背景技术

胃是食道的扩大部分，位于膈下，上接食道，下通小肠，通过蠕动搅磨食物，使食物与胃液充分混合，胃作为人体的消化器官，在机体物质代谢中占据不可取代的重要地位。胃有以下四大主要功能：其一，储存食物功能，进食时胃底和胃体部的肌肉产生反射性的舒张，而幽门是关闭的，这样食物便会暂时停留在胃内进行消化；其二，消化和吸收功能，通过胃的蠕动及胃酸、胃蛋白酶的分泌等对食物进行机械和化学的消化，胃可吸收乙醇和少量的水分；其三，分泌功能，胃可分泌胃液及胃泌素、胃动素、生长抑素等；其四，防御功能，胃的黏膜屏障、胃酸、分泌型免疫球蛋白IgG，IgA以及淋巴组织等，可防止病原微生物及异物的侵入。

胃粘膜是指存在于胃部内壁上的一层很薄、很脆弱的黏膜组织，柔软且呈橘红色。胃粘膜如同一堵天然“屏障”，对胃具有特殊的保护作用，但其本身很脆弱，环境因素、饮食、药物、吸烟、酗酒、细菌感染、情绪变化等，都可对其造成损伤。胃粘膜的损伤与自我修复始终处于动态平衡中，如此才能保护胃部的正常运作。一旦外界给予胃的负担过重或刺激过强，动态平衡就会被打破，胃酸便开始对胃壁进行自我消化，继而形成凹入表面的破损，胃粘膜受损，很难再恢复如初，随之而来的就是一系列胃部不适的症状，常见的有上腹部不适或疼痛、恶心、呕吐、腹泻、食欲不振等。保护胃粘膜免受伤害，除了要减少不良因素对胃的刺激外，还需同时保护和修复相对脆弱的胃粘膜，这样才能避免胃病的产生及反复发作。

随着人们日常生活水平的提高，生活节奏的加快，压力情绪的变化将直接影响人身体的器官发生变化，而表现最为敏感的就是胃，不良情绪可以通过大脑皮层导致下丘脑功能紊乱，进而导致胃功能紊乱。长期饮食不规律，大量的饮酒及食用刺激性食物，暴饮暴食或由于工作顾不上吃饭，会导致胃的蠕动功能紊乱，胃液分泌不规律，胃粘膜损坏，久而久之导致消化不良、急性胃炎、溃疡、胃穿孔等等。此外，现代人工作压力大、经常熬夜加班这些都容易引起胃供血不足而出现无法控制的疲惫感、免疫力下降、很难缓解的亚健康状态。

我国是胃病大国，而且大多数人对胃病引起的反酸、嗳气、厌食、恶心、呕吐、疼痛、腹胀、腹泻、出血、溃疡、痉挛等等症状并不十分重视。胃病往往起病缓慢，病程经年累月，呈持续性或反复发作，很难治愈。

近年来，欧美及日韩畅销的治疗胃病药多为阿托品、扑热息痛、多潘立酮、氢氧化铝、氢氧化镁、碳酸氢钠、抗生素、维生素和矿物质等，这些物质只能暂时缓解胃部症状，对胃损伤并无确切疗效，治标不治本，且长期食用会造成铝、镁、钙、钠等成分摄入过多，从而引发各种各样的副作用。如高血压病、肾功能不好的患者长期吃碳酸氢钠可能会加重病情；长期不当使用含铝的制剂会造成便秘、肠梗阻或软骨病；碳酸钙容易引发胃肠道胀气；含镁制剂常见副作用是腹泻；长久服用抗生素类消炎药会损伤胃肠道黏膜，加重病情，大伤元气，且其本身会造成病菌耐药性增强，杀死大量的胃肠道有益菌，破坏胃肠道微生态平衡。随着胃功能紊乱、胃器质性疾病人数的不断暴增，迫切需要开发出能够真正修复胃粘膜、改善胃功能且副作用较小的产品。

囊肿是一种良性疾病，一般多位于真皮及皮下组织，它可以长在人体表面，也可以长在内脏里；囊肿具有囊腔结构，外有囊壁，内有液体或其他成分，可来源于皮肤也可来源于间叶组织。一般来说，常见的囊肿有“肾囊肿”、“肝囊肿”、“单纯性的卵巢囊肿”和“巧克力囊肿”。肾囊肿又分为单纯的孤立性肾囊肿和多囊肾。囊肿形态大多为圆形突出，皮肤表面为半圆形。因有囊壁包裹故边缘光滑整齐，与周围组织粘连少，故触之光滑有弹性，其表面皮肤多无炎症，而呈正常皮色。

囊肿是由于气滞血瘀，湿浊缠绵，恶瘀内阻而形成积聚。久病致气血亏虚、情志失调、精神萎靡、新陈代谢缓慢、毒素堆积、肝气郁结日久，致气血瘀滞，湿热稽留、寒凝气滞、散布失司而成“症瘕痞块”，故此得病。传统的内科治疗消肿散瘀祛毒中药多为红粉、蓖麻子、蜈蚣、全蝎等，有较大的毒性，存在严重的食用安全风险。

目前，对囊肿的外科治疗方法，主要有三种：一是传统的开刀切囊肿法，此法切口长，流血多、创伤重、花费多，而且易复发；二是腹腔镜下切囊肿，虽然只是打个孔，创伤也比开刀小得多，但还是要住院，费用也不算少；三是超声介入技术，在超声引导下可以刺中几厘米至十几厘米大小不等的囊肿，吸掉囊内液体，注入囊壁硬化药物，破坏分泌旺盛的柱状细胞，此法提升了穿刺命中成功率，躲避了开刀剖腹之苦。但以上方法的共同缺点是治标不治本且费用昂贵，复发率高达60％以上，因为囊壁细胞的共同特点是排列一层层的柱状细胞，这种细胞生长旺盛，分泌功能极强，很难彻底铲除干净，只要留下一点点细胞，就会象种子一样发芽，囊肿就复发了。所以迫切需要开发出能够真正祛除囊肿，标本兼治，且复发率、副作用较小的产品。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种通过补气活血化瘀、祛除瘀滞以使血气顺畅、促进囊内液的重吸收及排出，以达到清热解毒、消肿止痛目的，从而抑制囊壁柱状细胞的增生趋势，大幅缩小囊肿的药物组合物，该药物组合物还具有散瘀止血、消肿生肌、消疮解毒、保护胃粘膜的功效。

本发明所要解决的另一个技术问题是针对现有技术的现状，提供一种上述药物组合物的制备方法，该方法最大程度的保留了药材中的功效成分不受破坏，提高了药材利用率及生物利用度。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物，其特征在于：按重量计，包括以下组分

作为优选，所述的具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物按重量计，包括4份蜂胶、13份三七、37份黄芪、21份白及、5份牡蛎肽、12份玄参以及8份翻白草。

黄芪为豆科植物黄芪的干燥根，味甘，微温，归肺脾经。具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、生津养血、行滞通痹、托毒排脓、敛疮生肌的作用。用于气虚乏力、食少便溏、中气下陷、久泻脱肛、便血崩漏、表虚自汗、气虚水肿、内热消渴、血虚萎黄、半身不遂、痹痛麻木、痈疽难溃、久溃不敛。

白及为兰科植物白及的干燥块茎，味苦、甘、涩，微寒，归肺、肝、胃经。白及富含黏性多糖，具有收敛止血、消肿生肌的作用，用于出血咯血、疮疡肿毒、皮肤皲裂，对于消疮解毒、缓解胃肠道内出血、保护胃粘膜疗效特别好。

蜂胶为蜜蜂科工蜂采集的植物油脂与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成的具有黏性的固体胶状物。味苦、辛，寒，归脾、胃经。具有补虚弱、化浊脂、消饥渴、解毒消肿、收敛生肌的作用，亦可抑制胃内幽门螺杆菌的生长从而保护胃粘膜，用于体虚早衰、高脂血症、消渴，皮肤皲裂烧烫伤等。

三七为五加科植物三七的干燥根茎，味甘、微苦，性温，归肝、胃经。具有散瘀止血、消肿定痛的功效，用于咯血吐血、衄血便血、崩漏、外伤出血、胸腹刺痛、跌扑肿痛。

牡蛎肽是运用肽分子生物技术，将牡蛎肉酶解制成的小分子低聚肽，完全保留了牡蛎原有的维生素、微量元素和牛磺酸等营养成份，且更容易被肌体吸收。牡蛎肽具有保护肝脏、增强免疫力、保护胃粘膜、降血糖、抗肿瘤、预防心脑血管疾病等功效。

玄参为玄参科植物玄参的干燥根，味甘、苦、咸，微寒，归肺、胃、肾经。具有清热凉血、滋阴降火、解毒散结的功效，用于热入营血、温毒发斑、目赤咽痛、痈肿疮毒。玄参其清热解毒消肿的疗效特别显著。

翻白草为蔷薇科植物翻白草的干燥全草，味甘、微苦，性平，归肝、胃、大肠经。具有清热解毒、止痢止血、消肿去疮的功效，用于湿热泻痢、痈肿疮毒、血热吐衄、便血崩漏。

本发明充分发掘了三七、白及在散瘀清疮解毒、消肿生肌等方面的独特功效，经过大量试验验证，选用补气的黄芪，解毒消肿生肌的蜂胶，清热解毒、消肿去疮的玄参及翻白草与其配伍，明确其量效关系，合理组方，达到协同增效的奇效。本发明药物组合物主要从病症的源头出发，标本兼治，通过补气活血化瘀、祛除瘀滞，以使血气顺畅，促进囊内液的重吸收及排出，各中药中功效成分能协同作用于病灶，清热解毒、消肿止痛，抑制囊壁柱状细胞的增生趋势，大幅缩小囊肿，减少并发症的发生，提高免疫力，制得的药物组合物在祛除囊肿方面效果显著、复发率、副作用较小，切实满足了本发明药物组合物祛除囊肿的功能述求。

本发明完全遵循君臣佐使、升降浮沉的传统中医药理念，该药物组合物中三七、白及为君药，具有散瘀止血、消肿生肌、消疮解毒、保护胃粘膜的功效；黄芪、蜂胶为臣药，其中黄芪能补气升阳、利水消肿、托毒排脓，蜂胶可解毒消肿、收敛生肌；玄参和翻白草为佐药，其中玄参能清热凉血、解毒散结，翻白草可清热解毒、止痢止血、消肿去疮。三七和白及中大量的总皂苷、粘性多糖能迅速止血并在胃粘膜上形成一层保护膜，阻止胃酸继续腐蚀胃粘膜，刺激粘膜组织的再生功能，促进胃粘膜加快愈合，蜂胶的杀菌作用能作用于幽门螺杆菌，抑制其生理活性，减少溃疡的发展，加速修复受损组织。牡蛎肽能供给肌体营养物质，增强免疫力并保护胃粘膜。本发明充分掌握其量效关系，上述药物组合物中各组分能协同增效，充分发挥其保护胃粘膜的功效。

传统的治疗囊肿、消肿散瘀祛毒中药具有较大的毒性，存在严重的食用安全风险；传统的胃病用药长期食用会引发各种各样的副作用、加重病情、杀死胃肠道有益菌、破坏胃肠道微生态平衡、损伤胃粘膜，不能真正意义上解决胃病的问题，不能对胃粘膜给予足够的保护。而本发明药物组合物，筛选毒副作用极小的中药原料，潜心研究以明确中药配比及其量效关系，精心组方，食用安全有保障，无毒无副作用，既达到改善胃功能的效果又不损伤脏器，温和调理排毒、祛除囊肿、修复并保护胃粘膜组织，从而切实实现其祛除囊肿、保护胃粘膜的功能述求。

一种上述具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物的制备方法，其特征在于：包括以下步骤

(1)将蜂胶加入蜂胶质量6～12倍的乙醇溶液中，渗漉提取，收集渗漉液并离心去杂，离心液减压真空浓缩至相对密度为1.03～1.06，浓缩液静置过夜，去除上层蜂蜡，下层浓缩液置于真空干燥箱中干燥6～12h，制得蜂胶醇提物；

(2)将上述蜂胶醇提物单独粉碎成蜂胶粉，三七进行低温破壁超微粉碎得到800～1000目的三七超细粉；

(3)将黄芪、白及分别经过保温提取，所得提取液依次经过离心分离、减压浓缩、喷雾干燥得到黄芪提取物、白及提取物；

(4)将玄参及翻白草分别经过切片或粗粉前处理后，分别投入超临界CO₂萃取装置中进行CO₂超临界萃取，所得萃取物经过真空冷冻干燥及粉碎工艺得到玄参及翻白草萃取物；

(5)将牡蛎肉破碎匀浆，加入纯净水混匀调浆，加热静置离心脱脂，调节PH至7，添加蛋白酶制剂，经过酶解灭酶、离心脱脂、微滤纳滤，浓缩、活性炭脱色、灭菌、喷雾干燥制得牡蛎肽；

(6)将制得的蜂胶粉、三七超细粉、黄芪提取物、白及提取物、牡蛎肽、玄参萃取物、翻白草萃取物均匀混合5～10min得混合物，即得到所述的药物组合物。

上述三七采用低温超微粉碎成800～1000目的药物超细粉，完成了对三七药材的破壁，其破壁率高达90％以上，大幅增加了人体对于三七中功效成分的消化吸收率。

优选地，步骤(1)中所述蜂胶醇提前，先将蜂胶在-18℃下冷冻12～24h后粉碎成细粉。

优选地，步骤(1)中离心液减压真空浓缩的浓缩温度为55～65℃，真空度保持在-0.08～-0.09Mpa。

优选地，步骤(1)中下层浓缩液的干燥温度为60～70℃，真空度保持在-0.07～-0.09Mpa。

优选地，步骤(1)中乙醇溶液的体积浓度为65～95％。

作为改进，步骤(3)中黄芪提取物/白及提取物通过以下步骤制备

(a)取切片过的黄芪/白及，加入物料质量8～10倍的水，于90～100℃下保温提取，提取次数为1～3次，提取时间每次为1～2h，得到提取液；

(b)离心分离：将提取液进行离心分离，获得澄清液；

(c)减压浓缩：将澄清液进行减压浓缩，浓缩温度控制在65～85℃，真空度控制在-0.05～-0.08Mpa，相对密度控制在1.04～1.06之间，获得浸膏；

(d)喷雾干燥：将浸膏灭菌过滤后喷雾干燥，工艺参数为喷口温度175～185℃，出口温度85-92℃，上料速度1.5～2.5L/min，得到黄芪提取物/白及提取物。

通过提取浓缩干燥工艺处理之后的黄芪、白及提取物，相对于生药来说量大幅减少，药物服用量大幅降低，功效成分得到极大富集，更有利于提高生物利用度，提升药效及用户体验，充分发挥其补气止血化瘀的功效。

作为改进，步骤(4)中玄参萃取物的制备方法如下：

(a)将玄参粗粉成细颗粒并过筛，目数控制在8～14目之间；

(b)将上述玄参细颗粒用CO₂超临界萃取法提取，萃取温度40～48℃，萃取压力25～40Mpa，夹带剂为60～80％乙醇溶液，夹带剂用量为1.0～1.4mL/g，CO₂流量10～12kg/h，萃取时间120～180min，得到玄参萃取液；

(c)将上述制得的玄参萃取液通过真空冷冻干燥及粉碎工艺制得玄参萃取物干粉，其中，预冻初始温度-30～-35℃，预冻速率0.3～0.6℃/min，预冻终点温度-65℃，干燥室压力35～75pa，加热板温度30～40℃，干燥时间为12～18h。

作为改进，步骤(4)中翻白草萃取物的制备方法如下：

(a)将翻白草粗粉成细颗粒并过筛，目数控制在10～16目之间；

(b)将上述翻白草细颗粒用CO₂超临界萃取法提取，萃取温度30～40℃，萃取压力30～35Mpa，CO₂流量8～12kg/h，萃取时间90～120min，得到翻白草萃取液；

(c)将上述制得的翻白草萃取液通过真空冷冻干燥及粉碎工艺制得翻白草萃取物干粉，其中，预冻初始温度-35～-40℃，预冻速率0.5～0.8℃/min，预冻终点温度-60℃，干燥室压力60～90pa，加热板温度35～45℃，干燥时间为14～20h。

CO₂超临界萃取法能提取出极性范围较宽的多种成分，而真空冷冻干燥技术的应用保留了萃取物中绝大部分的功效成分，加工工艺功效成分损失较小。由此方法制备的玄参萃取物较传统醇提、渗漉法，萃取时间大幅缩短50％以上，提取收率提升20％以上，功效成分哈巴苷和哈巴俄苷的总量达到0.8％以上；制备的翻白草萃取物较传统醇提法，萃取时间大幅缩短35％以上，提取收率提升12％以上。

将牡蛎肉破碎匀浆，加入纯净水混匀调浆，加热静置离心脱脂，调节PH至7，添加蛋白酶制剂，经过酶解灭酶、离心脱脂、微滤纳滤，浓缩、活性炭脱色、灭菌、喷雾干燥制得牡蛎肽；

作为改进，步骤(5)中牡蛎肽通过以下步骤制备

(a)破碎匀浆脱脂：将牡蛎肉解冻后，经破碎机破碎匀浆，加入55℃的纯净水使固形物与纯净水按照1:3～5的比例混匀调浆，开启均质乳化，将料液加热至55℃，通过静置、离心工艺进行初步脱脂；

(b)酶解：料液调节PH至7，添加料液重0.5％～1.5％比例的复合蛋白酶制剂(木瓜蛋白酶和中性蛋白酶按1:1比例混合均匀)，将PH稳定在7.0±0.5，酶解3～5h，酶解液过滤后经过超高温杀菌机灭酶，温度120～135℃，保持时间为15～20s，出口温度65±0.5℃，然后酶解液进行离心脱脂；

(c)过滤浓缩脱色：酶解液依次经过微滤陶瓷膜过滤，纳滤陶瓷膜脱盐，使用浓缩蒸发器将酶解液浓缩至35±0.5Brix，按6kg/100L的量添加活性炭，将物料温度控制在75±2℃保持20～40min保温脱色；

(d)灭菌喷雾：将浓缩液煮沸灭菌并降温至55±5℃，最后进行喷雾干燥，进风温度170～185℃，出风温度65～90℃，最后得到水分≤6％的牡蛎肽干粉。

通过肽分子生物技术处理之后得到的牡蛎肽，服用量大幅降低，功效成分得到极大富集且更容易被肌体吸收，更有利于提高生物利用度，提升药效及用户体验，充分发挥其功效。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明的药物组合物遵循君臣佐使、升降浮沉的传统中医药理念，三七、白及为君药，具有散瘀止血、消肿生肌、消疮解毒、保护胃粘膜的功效；黄芪、蜂胶为臣药，黄芪能补气升阳、利水消肿、托毒排脓，蜂胶可解毒消肿、收敛生肌；玄参和翻白草为佐药，玄参能清热凉血、解毒散结，翻白草可清热解毒、止痢止血、消肿去疮。牡蛎肽能供给肌体营养物质，增强免疫力并保护胃粘膜。本发明将各组分的用量合理配比，使各组分药物协同增效，充分发挥其祛除囊肿、保护胃粘膜的功效。

针对现有技术中药物服用量较多的状况，本发明将黄芪、白及通过保温提取、真空浓缩、喷雾制成提取物，玄参、翻白草通过超临界CO₂萃取并用真空冷冻干燥技术制成萃取物干粉，而蜂胶、三七通过前处理、低温超微粉碎技术破壁处理得到超细粉，牡蛎通过酶解技术处理得到牡蛎肽，将上述提取物、超细粉、酶解物、萃取物干粉混合均匀制备的药物组合物最大程度地保留了药物的主要功效成分，服用量显著下降的同时也极大地提高了药物的生物利用度，显著提升了药效。

本发明具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物，其制备方法的普遍适用性较强，适合于片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、颗粒剂等各种剂型的生产与加工，操作易行、工艺稳定、质量可控、生产效率高、经济附加值高，适合规模化、工业化大生产。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明作进一步详细描述。

实施例1：

本实施例具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物按重量计，包括2份蜂胶、13份三七、40份黄芪、27份白及、3份牡蛎肽、5份玄参及10份翻白草。

实施例2：

本实施例具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物按重量计，包括4份蜂胶、13份三七、37份黄芪、21份白及、5份牡蛎肽、12份玄参以及8份翻白草。

实施例3：

本实施例具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物按重量计，4份蜂胶、8份三七、40份黄芪、24份白及、8份牡蛎肽、12份玄参及4份翻白草。

实施例4：

本实施例具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物按重量计，6份蜂胶、10份三七、29份黄芪、36份白及、3份牡蛎肽、8份玄参及8份翻白草。

上述实施例1～4中具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物的制备方法为：

(1)将原蜂胶经过-18℃冷冻12h后，粉碎成细粉，加入蜂胶质量12倍的乙醇溶液，乙醇溶液的浓度为75％，渗漉提取，收集渗漉液离心去杂，离心液减压真空浓缩(浓缩温度为60℃，真空度保持在-0.085Mpa)至相对密度为1.03，浓缩液静置过夜，去除上层蜂蜡，下层浓缩液置于真空干燥箱中干燥12h(干燥温度为60℃，真空度保持在-0.09Mpa)，制得蜂胶醇提物；

(2)将上述蜂胶醇提物单独粉碎成蜂胶粉，三七进行低温破壁超微粉碎得到800目的三七超细粉；

(3)将黄芪、白及分别经过保温提取，所得提取液依次经过离心分离、减压浓缩、喷雾干燥得到黄芪提取物、白及提取物；

黄芪提取物的制备过程如下：

(a)取实施例中相应重量份数的黄芪切片处理，加入物料质量8倍的水，于94℃下保温提取，提取次数为1次，提取时间每次为2h，得到提取液；

(b)离心分离：将提取液进行离心分离，获得澄清液；

(c)减压浓缩：将澄清液进行减压浓缩，浓缩温度控制在70℃，真空度控制在-0.07Mpa，相对密度控制在1.06之间，获得浸膏；

(d)喷雾干燥：将浸膏灭菌过滤后喷雾干燥，工艺参数为喷口温度185℃，出口温度88℃，上料速度1.8L/min，得到黄芪提取物；

白及提取物的制备过程如下：

(a)取实施例中相应重量份数的白及切片处理，加入物料质量10倍的水，于90℃下保温提取，提取次数为2次，提取时间每次为1.5h，得到提取液；

(b)离心分离：将提取液进行离心分离，获得澄清液；

(c)减压浓缩：将澄清液进行减压浓缩，浓缩温度控制在68℃，真空度控制在-0.08Mpa，相对密度控制在1.04之间，获得浸膏；

(d)喷雾干燥：将浸膏灭菌过滤后喷雾干燥，工艺参数为喷口温度180℃，出口温度86℃，上料速度2.0L/min，得到白及提取物；

(4)将玄参及翻白草分别经过切片或粗粉前处理后，分别投入超临界CO₂萃取装置中进行CO₂超临界萃取，所得萃取物经过真空冷冻干燥及粉碎工艺得到玄参及翻白草萃取物；

玄参萃取物的制备过程如下：

(a)将实施例中相应重量份数的玄参粗粉成细颗粒并过筛，目数控制在8目；

(b)将上述玄参细颗粒用CO₂超临界萃取法提取(萃取温度42℃，萃取压力30Mpa，夹带剂为80％乙醇溶液，夹带剂用量为1.0mL/g，CO₂流量12kg/h，萃取时间120min)，得到玄参萃取液；

(c)将上述制得的玄参萃取液通过真空冷冻干燥及粉碎工艺制得玄参萃取物干粉，其中预冻初始温度-30℃，预冻速率0.6℃/min，预冻终点温度-65℃，干燥室压力45pa，加热板温度35℃，干燥时间为14h；

翻白草萃取物的制备过程如下：

(a)将实施例中相应重量份数的翻白草粗粉成细颗粒并过筛，目数控制在12目；

(b)将上述翻白草细颗粒用CO₂超临界萃取法提取(萃取温度35℃，萃取压力30Mpa，CO₂流量8kg/h，萃取时间120min)，得到翻白草萃取液；

(c)将上述制得的翻白草萃取液通过真空冷冻干燥及粉碎工艺制得翻白草萃取物干粉，其中预冻初始温度-35℃，预冻速率0.7℃/min，预冻终点温度-60℃，干燥室压力60pa，加热板温度38℃，干燥时间为14h。

CO₂超临界萃取法能提取出极性范围较宽的多种成分，而真空冷冻干燥技术的应用保留了萃取物中绝大部分的功效成分，加工工艺功效成分损失较小。由此方法制备的翻白草萃取物较传统醇提法，萃取时间大幅缩短40％，提取收率提升16％；

(5)将牡蛎肉破碎匀浆，加入纯净水混匀调浆，加热静置离心脱脂，调节PH至7，添加蛋白酶制剂，经过酶解灭酶、离心脱脂、微滤纳滤，浓缩、活性炭脱色、灭菌、喷雾干燥制得牡蛎肽；

牡蛎肽的制备过程如下：

(a)破碎匀浆脱脂：将牡蛎肉解冻后，经破碎机破碎匀浆，加入55℃的纯净水使固形物与纯净水按照1:3的比例混匀调浆，开启均质乳化，将料液加热至55℃，通过静置、离心工艺进行初步脱脂；

(b)酶解：料液调节PH至7，添加料液重1.0％比例的复合蛋白酶制剂(木瓜蛋白酶和中性蛋白酶按1:1比例混合均匀)，将PH稳定在7.0，酶解4h，酶解液过滤后经过超高温杀菌机灭酶，温度130℃，保持时间为15s，出口温度65℃，然后酶解液进行离心脱脂；

(c)过滤浓缩脱色：酶解液依次经过微滤陶瓷膜过滤，纳滤陶瓷膜脱盐，使用浓缩蒸发器将酶解液浓缩至35Brix，按6kg/100L的量添加活性炭，将物料温度控制在75℃保持30min保温脱色；

(d)灭菌喷雾：将浓缩液煮沸灭菌并降温至50℃，最后进行喷雾干燥，进风温度180℃，出风温度80℃，最后得到水分≤6％的牡蛎肽干粉。

通过肽分子生物技术处理之后得到的牡蛎肽，服用量大幅降低，功效成分得到极大富集且更容易被肌体吸收，更有利于提高生物利用度，提升药效及用户体验，充分发挥其功效。

(6)将制得的蜂胶粉、三七超细粉、黄芪提取物、白及提取物、牡蛎肽、玄参萃取物、翻白草萃取物均匀混合10min得混合物，即得到所述的药物组合物。

本发明的药物组合物通过常规制剂工艺，可以制成药剂学上的多种剂型，如硬胶囊、软胶囊、颗粒剂或片剂等，以便于保存及控制药物含量。

本发明对上述制备的含有药物组合的胶囊或颗粒剂进行了试验：

实验例1：安全性试验

样品：样品为上述颗粒剂，每日推荐剂量为5g，按照成人体重60kg计，样品推荐剂量为0.083g/kg·BW。

1.1小鼠急性毒性试验：

选用健康、成熟，体重18～22gICR小鼠20只，雌雄小鼠各10只。按最大耐受量法设20.0g/kg·BW一个剂量组。称取样品20g，以1％羧甲基纤维素钠为溶媒配制成40mL混悬液。小鼠灌胃前禁食(不禁水)16h，按20mL/Kg·BW灌胃容量灌胃两次，间隔4h。末次灌胃2h后动物自由进食、饮水，记录动物中毒表现及死亡情况。观察期限为7天，记录小鼠实验期初及期末体重，实验数据见表1。

表1.样品经口急性毒性死亡情况

实验期间，各小鼠均未见明显中毒表现，也无死亡。本发明药物组合物对雌雄小鼠经口MTD均大于20.0g/kg·BW，属无毒级。

1.2Ames试验：

选用组氨酸营养缺陷型鼠伤寒沙门氏菌，共四株，即TA_97a、TA₉₈、TA₁₀₀、TA₁₀₂。试验采用平板掺入法，称取样品0.50g，以DMSO搅拌配制成10.0mL溶液，0.103Mpa、20min灭菌，实验时以灭菌DMSO梯度稀释至各剂量。用TA₁₀₀菌株的非代谢活化系统进行预试验，结果在剂量5000μg/皿时未出现明显的增菌和抑菌现象，故正式试验时选择试验浓度为8、40、200、1000、5000μg/皿五个剂量组，外加空白对照、溶剂对照和阳性对照组(叠氮钠、敌克松、2-乙酰氨基芴、1,8-二羟基蒽醌)，每种菌株每个测试浓度设三皿平行，在加和不加S₉条件下进行试验，重复测试一次。结果观察指标为直接计数培养基上各菌株的回变菌落数。

试验结果：不同浓度受试物在加和不加S9条件下的回变菌落与阴性对照组相近似，而阳性对照组回变菌落数均高于阴性对照组回变菌落数2倍以上。本发明Ames试验检测结果为阴性。

1.3小鼠骨髓细胞微核试验：

选用健康、成熟、体重为25～30g的小鼠50只，雌雄各半。小鼠随机分成5组，每组10只，雌雄各半。实验设2.5、5.0、10.0g/kg·BW三个剂量组，分别称取样品5.0、10.0、20.0g，以1％羧甲基纤维素钠为溶媒分别配制成40mL样品液。另设一个阴性对照组(1％羧甲基纤维素钠)和一个阳性对照组(环磷酰胺40mg/kg·BW，称取环磷酰胺80mg，加蒸馏水溶解至40mL备用)。小鼠按20mL/kg·BW灌胃容量经口灌胃给予受试物，灌胃两次，间隔24h。于第二次灌胃后6h颈椎脱臼处死动物，取胸骨骨髓制成骨髓片，甲醇固定，Giemsa染色。镜检时每只动物计数1000个嗜多染红细胞，计算微核千分率及PCE/NCE值，数据用SPSS统计软件进行统计分析。

雌雄各剂量组PCE/NCE比值未低于阴性对照组的20％，符合技术规范要求。本发明药物组合物对小鼠微核率的影响见表2。与阴性对照组相比较，雌雄各剂量组微核千分率均无显著性差异(P＞0.05)；阳性对照组微核率则显著高于阴性对照组，其差异有非常显著性意义(P＜0.01)。表明本发明药物组合物对小鼠骨髓细胞微核率未见明显影响，检测结果为阴性。

表2.样品对小鼠微核率的影响

与阴性对照组比较，*P＜0.01

1.4小鼠精子畸形试验：

选用健康、成熟、体重为25～30g的雄性小鼠25只。小鼠随机分成5组，每组5只。实验设2.5、5.0、10.0g/kg·BW三个剂量组，分别称取样品5.0、10.0、20.0g，以1％羧甲基纤维素钠为溶媒分别配制成40mL样品液。另设一个阴性对照组(1％羧甲基纤维素钠)和一个阳性对照组(丝裂霉素C 1.5mg/kg·BW，称取丝裂霉素C 1.5mg，加生理盐水溶解至20mL备用)。小鼠按20mL/kg·BW灌胃容量经口灌胃给予受试物，连续5天，每天1次。于首次灌胃后第35天颈椎脱臼处死动物，取两侧附睾，制成吸滤液直接涂片，自然干燥，甲醇固定，1％伊红染色。高倍镜下观察精子形态并计数，每只小鼠计数完整精子1000条，计算精子畸形发生率(％)，数据用SPSS统计软件进行统计分析。

本发明药物组合物对小鼠精子畸形发生率的影响见表3。与阴性对照组比较，各剂量组小鼠精子畸形发生率均无显著性差异(P＞0.05)；阳性对照组则明显高于阴性对照组，其差异有非常显著性意义(P＜0.01)，表明本发明药物组合物对小鼠精子畸形发生率未见明显影响，检测结果为阴性。

表3.样品对小鼠精子畸形发生率的影响

与阴性对照组比较，*P＜0.01，注：MMC，丝裂霉素C

1.5大鼠30天喂养试验：

样品选择本发明药物组合物上述实施例颗粒剂，30天喂养试验设2.10、4.15、8.30g/kg·BW三个剂量组，相当于人体推荐剂量的25、50、100倍，另设一个阴性对照组。大鼠为清洁级健康、断乳、体重为60～80g的SD大鼠80只，雌雄各半。取样品按剂量以体重10％折算分别均匀拌入基础饲料，大鼠自由进食，连续喂饲30天。

试验结果未见动物出现中毒体征，大体解剖及组织学观察也未见异常病理改变，对大鼠体重、进食量、食物利用率、血象、血生化、主要脏器重及其脏体比等各项观察指标均无不良影响。本次实验本发明药物组合物最大未观察到有害作用剂量为8.30g/kg·BW。

1.6总结：本发明药物组合物小鼠经口急性毒性最大耐受量(MTD)，雌雄两性别均大于20.0g/kg·BW，按急性毒性分级标准判定，该样品属于无毒级。本发明药物组合物遗传毒性试验：Ames试验、小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形试验结果均为阴性，提示在本次试验条件下，该样品未显示有致突变性。30天喂养试验最大未观察到有害作用剂量为8.30g/kg·BW。

实验例2：对胃粘膜损伤有辅助保护功能人体试食试验

样品：使用上述制备的药物组合物片剂作为试食样品，人口服推荐剂量为每日2次，每次5片，口服，总计每日服药量为5g。

纳入受试者标准：符合慢性浅表性胃炎诊断标准且经胃镜筛选确诊为浅表性胃炎的自愿受试者。

慢性浅表性胃炎诊断标准：病程迁延，有不同程度的消化不良、上腹痛、烧心、嗳气、反酸、腹胀等临床症状，可有上腹部轻度压痛。

排除受试者标准：年龄在18岁以下或65岁以上，妊娠或哺乳期妇女，过敏体质及对本发明药物组合物过敏者；继发性慢性胃炎；合并有心血管、脑血管、肝、肾和造血系统严重全身性疾病者；症状和体征分级为重症者；经常用药、嗜酒、大量吸烟者；有消化系统溃疡的病人；正在服用其它治疗药物或接受其它治疗者；短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者；未按规定服用样品，无法判断功效，或资料不全等影响功效或安全性判断者。

试验方案：采用自身和组间两种对照设计，按照上述标准选择120例按受试者的症状轻重随机分成试食组和对照组，每组60例，尽可能考虑到影响结果的主要因素如年龄、性别、病程等，进行均衡性检验，以保证组间的可比性。试食组按照推荐服用方法、服用量服用受试样品，在试验期间停用所有其它用于慢性胃病的药品或物品，对照组服用相同剂量的安慰剂。受试者每日口服2次，每次5片。受试样品给予时间为30天，试验期间不改变原来的饮食习惯，正常饮食，观察期限为30天。

胃镜检查：检查40例(其中试食组合对照组各20例)，试食前后进行胃镜检查，比较试食前后胃内部状态的改变情况。

症状分观察：胃痛、嗳气、反酸、腹胀、食欲不振、少食等临床症状，按照症状轻重统计积分(重症3分，中度2分，轻度1分)。

体征分观察：剑突下压痛程度检查，根据疼痛程度积分(轻度1分，中度2分，重症3分)。

结果判定：试食前后试食组自身比较及试食后试食组与对照组组间比较，临床症状、体征积分明显减少，胃镜复查结果有改善或不加重，即可判定该受试样品对胃粘膜损伤有辅助保护功能。

结果：

2.1一般情况：

初始试验人群试食组60例，对照组60例，试食前后，受试者精神、睡眠、饮食、大小便状态正常，无异常现象发生。例数、性别、人数、年龄、病程见表4所示。

表4.试食前自愿者一般资料对比

2.2症状、体征积分改变情况：

症状积分、体征积分比较结果见表5所示。

表5.试食前后自愿者症状积分、体征积分比较

^**与试食前比较，P＜0.01，^##组间比较P＜0.01。

受试药物食用一个月以后，两组临床症状积分均有改善，试食组试食前后症状积分改善极为明显(P＜0.01)，且明显好于对照组，两组间差异极为显著(P＜0.01)。

本发明药物组合物食用一个月以后，两组体征积分均有改善，试食组试食前后体征积分改善极为明显(P＜0.01)，且明显好于对照组，两组间差异极为显著(P＜0.01)。

2.3胃镜检查情况：

试食后，试食组胃镜复查结果表明，胃内部色泽红白相间，均匀且鲜艳，胃窦部片状渗出明显改善或消失，无病情加重状况；对照组多未曾改善，无加重现象。

2.4常规检查及生化指标检查

对照组及试食组试食前后，体重、血压、心率、血常规、尿常规、大便常规变化情况对比数据如表6所示。

表6.试食前后自愿者常规检查数据比较

试食前后，对照组及试食组生化指标变化情况对比数据如表7所示。

表7.试食前后自愿者常规检查数据比较

由表6、表7对比数据可知，对照组及试食组在试食前后的常规检查及血液生化指标检查均在正常范围内，且无明显变化趋势，说明受试药物安全性极佳。

2.5结果：

试食组与对照组服用受试药物30天后，试食组试食前后自身比较及试食后与对照组组间比较，临床症状、体征积分并明显减小(P＜0.01)，其改善效果极为显著；试食组胃镜复查结果改善明显；试食组、对照组试食前后体重、血压、心率均未见明显异常改变，尿常规、大便常规、血常规和生化指标均在正常范围以内，提示受试药物对机体健康不造成明显损害；所以，本发明药物组合物对胃炎、胃粘膜损伤有明显效果。

实验例3：祛除囊肿功能人体试食试验

样品：使用实施例7.2药物组合物硬胶囊剂作为试食样品，人口服推荐剂量为每日3次，每次5粒，口服，总计每日服药量为5.25g。

纳入受试者标准：符合囊肿诊断标准且经B超确诊为囊肿的自愿受试者。

囊肿诊断标准：长在体内某一脏器或表皮下、囊状的良性包块，呈球形或卵圆形，其内容物性质是液态的。

疗效评价标准：治愈(临床症状完全消失，B超检查囊肿消失)，显效(临床症状基本消失，B超检查囊肿缩小1/2以上)，显效(临床症状基本消失，B超检查囊肿缩小1/2以上)，有效(临床症状有所改善失，B超检查囊肿缩小不到1/2)，无效(临床症状无改变甚至加重)，总有效率＝治愈率+显效率+有效率。

3.1一般情况：

初始试验人群试食组30例，阴性对照组30例，阳性对照组30例，试食前后，受试者精神、睡眠、饮食、大小便状态正常，无异常现象发生。例数、性别、人数、年龄、病程见表8所示。

表8.试食前自愿者一般资料对比

3.2试验方法

试食组服用实施例7.2药物组合物硬胶囊剂，每日15粒，每日服药量为5.25g；阳性对照组服用大黄蛰虫胶囊，每日13粒，每日服药量为5.2g；阴性对照组服用相同剂量的安慰剂，观察时间为30天。30天后，通过B超诊断观察囊肿的个数、大小、部位变化情况，统计诊断数据进行综合分析。

3.3试验结果

试食后三个组别自愿者服用效果数据对比如表9所示：

表9.试食后自愿者服用效果对比

由表9结果可知，试食组治愈8例，显效12例，有效8例，总有效率为93.3％，试食组总有效率显著高于阴性对照组(P＜0.01)，也高于阳性对照组。三组患者均无明显不良反应。

3.4总结

试食组按照规定的方法及服用量服用受试药物以后，临床症状大有好转直至痊愈，总体有效率高于阴性对照组及阳性对照组，提示本发明药物组合物在祛除囊肿方面确有其独特功效。

以上所述仅为本发明的优选实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明权利要求书内容所作的等效结构或流程变换，或在不脱离本发明原理的前提下做出的若干改进和润饰，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (5)

1.一种具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物的制备方法，其特征在于：

按重量计，所述组合物采用以下原料组分进行制备：

蜂胶 2～10份，

三七 8～13份，

黄芪 27～44份，

白及 18～36份，

牡蛎肽 3~8份，

玄参 5～12份，

翻白草 4～10份；

采用以上原料组分制备所述组合物的方法包括以下步骤：

（1）将蜂胶加入蜂胶质量6~12倍的乙醇溶液中，渗漉提取，收集渗漉液并离心去杂，离心液减压真空浓缩至相对密度为1.03~1.06，浓缩液静置过夜，去除上层蜂蜡，下层浓缩液置于真空干燥箱中干燥6~12h，制得蜂胶醇提物；

（2）将上述蜂胶醇提物单独粉碎成蜂胶粉，三七进行低温破壁超微粉碎得到800～1000目的三七超细粉；

（3）将黄芪、白及分别经过保温提取，所得提取液依次经过离心分离、减压浓缩、喷雾干燥得到黄芪提取物、白及提取物；所述黄芪提取物/白及提取物通过以下步骤制备：

（a）取切片过的黄芪/白及，加入物料质量8~10倍的水，于90~100℃下保温提取，提取次数为1~3次，提取时间每次为1~2h，得到提取液；

（b）离心分离：将提取液进行离心分离，获得澄清液；

（c）减压浓缩：将澄清液进行减压浓缩，浓缩温度控制在65～85℃，真空度控制在-0.05～-0.08Mpa，相对密度控制在1.04~1.06之间，获得浸膏；

（d）喷雾干燥：将浸膏灭菌过滤后喷雾干燥，工艺参数为喷口温度175～185℃，出口温度85-92℃，上料速度1.5～2.5L/min，得到黄芪提取物/白及提取物；

（4）将玄参及翻白草分别经过切片或粗粉前处理后，分别投入超临界CO₂萃取装置中进行CO₂超临界萃取，所得萃取物经过真空冷冻干燥及粉碎工艺得到玄参及翻白草萃取物；

所述玄参萃取物的制备方法具体如下：

（a）将玄参粗粉成细颗粒并过筛，目数控制在8~14目之间；

（b）将上述玄参细颗粒用CO₂超临界萃取法提取，萃取温度40～48℃，萃取压力25～40Mpa，夹带剂为60～80%乙醇溶液，夹带剂用量为1.0～1.4mL/g，CO₂流量10～12kg/h，萃取时间120～180min，得到玄参萃取液；

（c）将上述制得的玄参萃取液通过真空冷冻干燥及粉碎工艺制得玄参萃取物干粉，其中，预冻初始温度-30～-35℃，预冻速率0.3~ 0.6℃/min，预冻终点温度-65℃，干燥室压力35~75pa，加热板温度30~40℃，干燥时间为12~18h；

所述翻白草萃取物的制备方法具体如下：

（a）将翻白草粗粉成细颗粒并过筛，目数控制在10~16目之间；

（b）将上述翻白草细颗粒用CO₂超临界萃取法提取，萃取温度30~40℃，萃取压力30~35Mpa，CO₂流量8~12kg/h，萃取时间90~120min，得到翻白草萃取液；

（c）将上述制得的翻白草萃取液通过真空冷冻干燥及粉碎工艺制得翻白草萃取物干粉，其中，预冻初始温度-35～-40℃，预冻速率0.5~0.8℃/min，预冻终点温度-60℃，干燥室压力60~90pa，加热板温度35~45℃，干燥时间为14~20h；

（5）将牡蛎肉破碎匀浆，加入纯净水混匀调浆，加热静置离心脱脂，调节pH至7，添加蛋白酶制剂，经过酶解灭酶、离心脱脂、微滤纳滤，浓缩、活性炭脱色、灭菌、喷雾干燥制得牡蛎肽；该牡蛎肽具体通过以下步骤制备：

（a）破碎匀浆脱脂：将牡蛎肉解冻后，经破碎机破碎匀浆，加入55℃的纯净水使固形物与纯净水按照1:3~5的比例混匀调浆，开启均质乳化，将料液加热至55℃，通过静置、离心工艺进行初步脱脂；

（b）酶解：料液调节pH至7，添加料液重0.5%~1.5%比例的复合蛋白酶制剂，该复合蛋白酶制剂由木瓜蛋白酶和中性蛋白酶按1:1比例混合均匀，将pH稳定在7.0±0.5，酶解3~5h，酶解液过滤后经过超高温杀菌机灭酶，温度120~135℃，保持时间为15~20s，出口温度65±0.5℃，然后酶解液进行离心脱脂；

（c）过滤浓缩脱色：酶解液依次经过微滤陶瓷膜过滤，纳滤陶瓷膜脱盐，使用浓缩蒸发器将酶解液浓缩至35±0.5Brix，按6kg/100L的量添加活性炭，将物料温度控制在75±2℃保持20~40min保温脱色；

（d）灭菌喷雾：将浓缩液煮沸灭菌并降温至55±5℃，最后进行喷雾干燥，进风温度170~185℃，出风温度65~90℃，最后得到水分≤6%的牡蛎肽干粉；

（6）将制得的蜂胶粉、三七超细粉、黄芪提取物、白及提取物、牡蛎肽、玄参萃取物、翻白草萃取物均匀混合5~10min得混合物，即得到所述的药物组合物。

2.根据权利要求1所述的具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中所述蜂胶醇提前，先将蜂胶在-18℃下冷冻12~24h后粉碎成细粉。

3.根据权利要求1所述的具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中离心液减压真空浓缩的浓缩温度为55~65℃，真空度保持在-0.08～-0.09Mpa。

4.根据权利要求1所述的具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物的制备方法，其特征在于：步骤（1）中下层浓缩液的干燥温度为60~70℃，真空度保持在-0.07～-0.09Mpa；乙醇溶液的体积浓度为65~95%。

5.根据权利要求1所述的具有祛除囊肿、保护胃粘膜功能的药物组合物的制备方法，其特征在于：按重量计，所述组合物采用以下原料组分进行制备：4份蜂胶、13份三七、37份黄芪、21份白及、5份牡蛎肽、12份玄参以及8份翻白草。