CN108289809A - 刺激透明质酸合成的方法 - Google Patents

刺激透明质酸合成的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108289809A
CN108289809A CN201580080673.5A CN201580080673A CN108289809A CN 108289809 A CN108289809 A CN 108289809A CN 201580080673 A CN201580080673 A CN 201580080673A CN 108289809 A CN108289809 A CN 108289809A
Authority
CN
China
Prior art keywords
resveratrol
hyaluronic acid
composition
carbon
monomer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201580080673.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108289809B (zh
Inventor
B·托马斯
M·托马斯
D·辛克莱尔
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Tom Carter International Ltd
Harvard College
Original Assignee
Caudal Ip Co Ltd
Harvard College
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Caudal Ip Co Ltd, Harvard College filed Critical Caudal Ip Co Ltd
Publication of CN108289809A publication Critical patent/CN108289809A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108289809B publication Critical patent/CN108289809B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/33—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds containing oxygen
    • A61K8/34—Alcohols
    • A61K8/347—Phenols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/02—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by special physical form
    • A61K8/0216—Solid or semisolid forms
    • A61K8/022—Powders; Compacted Powders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/72—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic macromolecular compounds
    • A61K8/73—Polysaccharides
    • A61K8/735—Mucopolysaccharides, e.g. hyaluronic acid; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
    • A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/84—Products or compounds obtained by lyophilisation, freeze-drying
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/91—Injection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
    • A61K2800/92—Oral administration

Abstract

允许通过增加has‑2表达来刺激(促进)透明质酸合成的组合物以及它们在治疗与透明质酸合成降低相关的状况中的用途。

Description

刺激透明质酸合成的方法
本发明涉及一种刺激(促进)透明质酸合成的新方法，刺激(促进)透明质酸合成的组合物，以及它们在美容、人和兽医药以及食品工业中的用途。
透明质酸是一种普遍存在的天然多糖，由D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-葡糖胺的二糖重复单元通过交替的β-1,4和β-1,3糖苷键相互键合而形成。它广泛分布于各种人体组织，如结缔组织，上皮组织和神经组织。因此适用于靶向这些组织的生物医学应用，并且例如用于治疗膝骨关节炎。透明质酸通常被用作关节内注射，因为它通过增加滑液的粘度通过使软骨更有弹性来保护关节。
透明质酸天然存在于皮肤中，在水合作用和皮肤的生物力学性质中起着重要作用。然而，透明质酸随着年龄的增长而数量和质量下降，导致皮肤干燥，生物力学性能下降，从而出现皱纹。
透明质酸代谢非常活跃。透明质酸的降解首先由透明质酸酶催化。另一方面，聚合透明质酸可以被自由基非酶促降解。
负责透明质酸合成的酶是透明质酸合成酶HAS-1，HAS-2和HAS-3。HAS-2似乎在发育过程中发挥重要作用，因为小鼠has-2基因的缺失在妊娠中期是致命的，其原因在于许多心血管畸形(Camenisch TD.等人,J.Clin.Invest,2000,106(3):349-60)。
透明质酸广泛用于皮肤病学和皮肤美学中治疗衰老迹象。将其注射到真皮中以填充皱纹，如文献Kogan，G.等人(Biotechno.Letter,2007,29:17-25)中所述。即使在几年的治疗情况下，它具有在注射不当和无副作用的情况下可吸收的优点。治疗需要以定期间隔(一般为6至12个月)进行重复注射，以保持填充作用。
白藜芦醇(3,5,4'-三羟基均二苯代乙烯)具有两种异构形式，即顺式和反式形式，并且是单体形式，或者是含有几个单体单元的低聚物形式。
白藜芦醇的性质研究突出了受关注的多种生物活性。白藜芦醇是一种具有心血管和抗癌作用的强效抗氧化剂和抗炎剂。其最有希望的作用之一是其抗衰老作用，因为它具有增加抗衰老酶(sirtuins)活性的能力，抗衰老酶(sirtuins)是一种能够延长细胞和生物寿命的长寿基因家族(Sinclair D.等人,Nature,2003,425:191-196；Steegborn C.等人,PLoS One,2012,7(11)；Wood J.G.等人Nature 430:686-689)。
申请人进行的研究已经证明，从葡萄茎干(葡萄苗，葡萄芽)(vine shoot)中提取的白藜芦醇自然增强了皮肤的紧致度和年轻。
通过烷基化过度活化的葡萄茎干(葡萄苗，葡萄芽)(vine shoot)中的白藜芦醇是国际申请WO9903816的目的。在这个申请中，发明人描述了提取方法，其产生单体和/或低聚富含白藜芦醇的提取物，使用酚官能保护基团，更特别是酯基团，能够提供具有空气和光稳定性的单体和低聚物白藜芦醇并使它们成为油溶性的。这些保护基团可以在确定的条件下去除，这使得白藜芦醇的性质能够以受控的方式被利用。
国际申请WO2009/063440特别涉及白藜芦醇-油烯基(Oleyl)，烷基化白藜芦醇，其通过混合能够阻碍糖化分子形成的脂肪酸链来稳定。白藜芦醇-油烯基(Oleyl)不仅可以防止羰基化(一种在衰老过程中发生的蛋白质修饰)，而且由于其稳定性和油酸导致的增溶作用，还可以提高皮肤的生物利用度。
迄今为止，不同的研究已经报道了白藜芦醇和透明质酸的作用之间的关联。
国际申请WO2014210308描述了将白藜芦醇与高分子量透明质酸结合用于伤口愈合的用途。
国际申请WO2012116391描述了化妆品或药物制剂，其包含透明质酸盐交联聚合物和一种或多种化合物，所述化合物选自特别包括白藜芦醇或其一种衍生物。这些组合物刺激(促进)真皮中的胶原形成并调节细胞更新。它们可以用来抵抗真皮的氧化损伤和色素沉着问题。
申请US2014363502涉及包含白藜芦醇的组合物及其用于比单独的白藜芦醇更显著地调节某些特别涉及衰老的基因的表达。它特别描述了白藜芦醇和透明质酸的组合。根据该文献，根据该发明的组合物的最显著的效果将归因于组合的白藜芦醇与单独的白藜芦醇相比更好的稳定性。这些组合物可用于治疗和预防癌症和年龄相关性疾病，特别是黄斑变性。
尽管存在许多含有单独的白藜芦醇或与透明质酸组合的白藜芦醇的化妆品和药物组合物，但是鉴于恢复或维持组织的生物和生物力学特性并具有治疗涉及透明质酸合成缺陷的功能障碍、特别是用于治疗和保护含有透明质酸的组织(皮肤，软骨...)、甚至更特别用于治疗、减缓和预防皮肤衰老的改善的性质，需要能够刺激(促进)透明质酸产生的组合物。
在此，发明人发现了白藜芦醇和透明质酸合成之间令人惊讶的联系。事实上，本发明人首次证实了白藜芦醇对哺乳动物细胞或组织中透明质酸产生的作用。此外，本发明人表明，白藜芦醇和透明质酸对透明质酸合成具有协同作用。
因此，本发明的一个实施方案是包含有效量的白藜芦醇或其类似物和衍生物的组合物用于刺激(促进)透明质酸合成的用途。更确切地说，它涉及使用这种组合物来修饰has-2的表达。
本发明的另一个实施方案是提供刺激(促进)体外或体内透明质酸产生的方法，包括使哺乳动物细胞或组织(特别是，成纤维细胞，角质形成细胞或上皮细胞，角膜的成纤维细胞，角质形成细胞或上皮细胞)与适量的白藜芦醇接触的步骤。
为了本发明的目的，哺乳动物是指人类或非人类哺乳动物。
根据本发明，白藜芦醇是指作为单体和低聚物的白藜芦醇及其衍生物，特别是顺式-白藜芦醇，反式-白藜芦醇，ε-葡萄素(葡萄抗毒素)(viniferin)，白藜芦醇酯，其为单体和低聚物，特别是甲基化或乙酰化白藜芦醇，和包括至少一个式-O-CO-A的酯基团的单体，以及通过碳-碳或醚键连接的单体单元和/或通过-O-CO-R-CO-O-基团交联的单体形成的低聚物，-A表示具有至少两个碳原子的烷基残基(所述残基是直链或支链的、饱和或不饱和的)，芳基，芳烷基或亚芳烷基残基，和-R代表0-10个碳原子的亚烷基残基(其是饱和的或不饱和的)，和/或具有1至3个环和/或杂环残基的1个亚芳基残基，以及这些单元的非对映异构体。在专利FR2766176中描述了这种衍生物。
白藜芦醇单体和/或低聚物可以化学合成或从选自下列组中的不同植物来源获得：葡萄科(Vitaceae)，伞形科(Umbelliferae)，桃金娘科(Myrtaceae)，龙脑香科(Dipterocarpaceae)，莎草科(Cyperaceae)，买麻藤科(Gnetaceae)，豆荚科(豆科植物)(legumes)，禾本科(Gramineae)，丝孢科(Sericeae)，血皮草科(Haemodoraceae)，芭蕉科(Musaceae)，蓼科(Polygonaceae)，松科(Pinaceae)，柏科(Cupressaceae)，云实科(Cesalpiniaceae)，禾本科(Poaceae)和茄科(Solanaceae)。
在本发明的有利实施方案中，白藜芦醇以来自葡萄(vine)(OR)的富含白藜芦醇的级分的形式来使用。
有利的是，使用的是，根据本领域技术人员已知的技术，特别是文献中描述的那些，从葡萄茎使用水和/或有机溶剂提取获得的白藜芦醇单体和/或低聚物。
白藜芦醇还可以通过以下获得：使用基因修饰的微生物，从动物组织，或通过植物的生物生产，特别是从葡萄(vine)细胞的悬浮液(Etude de la Synthèse du resvératrolet de ses dérivés par des suspensions de cellules de vigne et optimisation dela production en bioréacteur，Thomas Chastang 23juillet 2014https://tel.archives-ouvertes.fr/tel-01037913/document)。
根据特别有利的实施方案，所述组合物还包含作为活性成分的透明质酸或其盐。
根据本发明，术语“透明质酸”(或透明质酸(hyaluronane))是指由D-葡糖醛酸二糖和N-乙酰基-D-葡糖胺的重复组成的线性聚合物，D-葡糖醛酸二糖和N-乙酰基-D-葡糖胺通过交替的糖苷型β-1,4和β-1，3([-β(1，4)-GlcUA-β(1，3)-GlcNAc-]n).相互连接。透明质酸广泛地可商购或者可以通过本领域技术人员已知的任何技术制备或提取。这种聚合物可以是天然的或合成的。
根据本发明，术语“透明质酸”(或透明质酸(hyaluronane))也指透明质酸的同系物，类似物，衍生物，复合物，酯，片段和亚单位，透明质酸作为不饱和二糖天然纯在(ActaVet Scand.2015Mar 4；57(1):12)还可以进行化学修饰以改善其吸收特性，例如通过醚键对羟基进行修饰以获得半胱氨酸-透明质酸缀合物(Chem Commun(Camb).201551(47):9662-5)或通过酰胺键形成l-半胱氨酸乙基醚(C)(J Pharm Sci.2015Apr 21.doi:10.1002/jps.24456)。
所述组合物可以进一步包含作为活性成分的透明质酸，所述透明质酸通过碳-碳键或醚键或酯键共价连接于白藜芦醇单体或低聚物，例如透明质酸的羟基上的修饰。在本发明的一个有利的实施方案中，透明质酸通过透明质酸C6位上的碳-碳键或醚键或酯键与白藜芦醇单体或低聚物共价连接。
透明质酸和白藜芦醇也可以在载体中递送，所述载体包括脂质体，皮肤穿透肽，聚电解质复合物纳米载体复合物(Biomed Nanotechnol.2014Dec；10(12):3658-73)基于海藻酸钠的微粒(Surg Today.2015May 20),聚l-赖氨酸，或曲安西龙负载的聚合物胶束(Int JPharm.2015May 5；489(1-2):218-225)
根据本发明，所使用的透明质酸的平均分子量根据给药模式而变化。因此，对于通过局部途径给药，透明质酸的平均分子量有利地低于100kDa，甚至更有利地在5kDa和100kDa之间，甚至更有利地在50kDa和100kDa之间。对于通过口服或肠胃外途径给药，可以使用高分子量的透明质酸。
根据一个具体的实施方案，所述组合物是包含单独有效量的白藜芦醇或其衍生物或与有效量的透明质酸和进一步的至少一种化妆品可接受的赋形剂组合的有效量的白藜芦醇或其衍生物的局部用化妆品组合物，所述赋形剂选自油，蜡，润肤剂(软化剂)(emollient)，溶剂，颜料，着色剂，聚合物，表面活性剂，流变剂(rheology agent)，香料，电解质，pH调节剂，抗氧化剂和防腐剂。
因此，根据本发明，组合物可以含有单独的白藜芦醇，或白藜芦醇单独的衍生物中的至少一种，或白藜芦醇和至少一种其衍生物，或与透明质酸结合的单独白藜芦醇，或至少一种与透明质酸或白藜芦醇有关的衍生物和与透明质酸有关的至少一种衍生物。为了本发明的目的，透明质酸盐特别是指钠盐和钾盐。其他已知的透明质酸盐包括镁盐，铝盐或铵盐。
根据一个特别优选的实施方案，化妆品组合物是皮肤护理或化妆产品，并且呈例如凝胶，乳膏，洗剂、乳液，乳，油，油膏，泡沫，浆液(serum)，软膏或甚至水凝胶的形式，特别是面膜，或者是棒的形式，例如唇膏或者甚至是贴剂。
根据另一方面，本发明涉及一种美容护理方法，其特征在于其包括在皮肤上局部施用有效量的根据本发明的化妆品组合物，特别是用于维持或恢复皮肤水合作用和皮肤生物力学特性，以及或用于预防或延缓皮肤衰老迹象的出现，特别是皱纹的出现和皮肤紧实度的丧失或减慢其影响。
根据本发明的一个特别有利的替代方案，这种美容护理方法的特征在于进行旨在防止，减缓或修正皮肤衰老的化妆护理，特别是旨在使皮肤紧实和/或促进皱纹衰减和再吸收。
根据本发明的另一方面，所述组合物可以是用于局部应用的药物组合物(这被称为皮肤病学组合物)的形式或用于口服或肠胃外施用。它也可以是食品组合物的形式，特别是食物补充剂。所有这些形式包含，与生理学上可接受的载体结合的、单独的有效量的白藜芦醇或与有效量的透明质酸组合的有效量的白藜芦醇。
所有根据本发明的组合物，无论化妆品、药物或食品组合物，还可以包含其它活性成分，特别是具有抗氧化作用的产物，例如6-胡萝卜素，维生素E或维生素C，低聚-原花青素(Proanthocyanidine)(OPC)，视黄醇及其混合物。
白藜芦醇和透明质酸的量将由本领域技术人员根据他们的一般知识来确定。
举例来说，对于通过口服途径给药，可以配制组合物，使得白藜芦醇以10mg/d和5g/d之间的剂量给药；当与透明质酸结合时，其以能够给药10mg/d和5g/d之间的剂量的浓度存在。这些剂量可以以一个或几个日剂量给药。对于局部给药，可以配制化妆品或皮肤病学组合物，使得白藜芦醇占组合物的0.01-1重量％，透明质酸占组合物的0-0.4重量％。给药可以在一个或多个应用中进行。对于胃肠外途径，组合物可以配制成包含1μg/ml至100mg/ml白藜芦醇和0μg/ml至100mg/ml透明质酸的含水溶液。这些剂量可以一天给药一次或数次。
对于局部给药，药物组合物可以具有任何常用形式，例如凝胶，乳膏，洗剂，乳，油，油膏，泡沫，浆液(serum)，软膏，水凝胶或贴剂。
对于口服给药，药物或食品组合物可具有任何常用形式，并且优选为片剂，胶囊，粉剂，颗粒剂，冻干剂，溶质，混悬剂，糖浆剂，饮料，糊剂，口香糖或糖果剂(糖果)(sweets)的形式。
当给药是肠胃外类型给药时，根据本发明的组合物优选配制成可注射无菌溶液。它也可以是冻干粉末的形式，溶剂临时或在使用时加入。
根据本发明的药物组合物，兽药组合物或食品组合物更特别适用于治疗或预防骨关节炎和皮肤衰老。它们可以进一步用于预防和/或治疗影响气道粘膜的疾病，例如哮喘，呼吸过敏，呼吸窘迫综合征或消化障碍，特别是胃肠炎，缺血性坏死和胃肠粘膜溃疡。
根据本发明的组合物可以用于治疗眼障碍，特别是干燥性角膜炎，角膜损伤和角膜病的领域中。
因此，本发明的一个目的还是提供治疗性处理与透明质酸降低有关的功能障碍的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用有效量的单独或与透明质酸结合的白藜芦醇。
本发明的一个目的还是提供一种组合物，其在生理上可接受的介质中包括：
i)作为单体或低聚物的白藜芦醇或其衍生物，特别是顺式-白藜芦醇，反式-白藜芦醇，ε-葡萄素(葡萄抗毒素)(viniferin)，白藜芦醇酯，其是单体和低聚物，特别是甲基化和乙酰化白藜芦醇，和包括至少一个式-O-CO-A的酯基团的单体，以及通过碳-碳或醚键连接的单体单元和/或通过-O-CO-R-CO-O-基团交联的单体形成的低聚物，-A表示至少两个碳原子的烷基残基(所述残基是直链或支链的、饱和或不饱和的)，芳基，芳烷基或亚芳烷基残基，和-R代表0-10个碳原子的亚烷基残基(其是饱和的或不饱和的)，和/或具有1至3个环和/或杂环残基的1个亚芳基残基，以及这些单元的非对映异构体，和
ii)平均分子量在50kDa和100kDa之间，有利地等于50kDa的透明质酸或其盐，
所述透明质酸通过在透明质酸的羟基位置处的碳-碳键或醚键或酯键共价连接到单体或低聚物白藜芦醇或其衍生物，特别是顺式-白藜芦醇，反式-白藜芦醇，ε-葡萄素(葡萄抗毒素)(viniferin)。
通过下面的实施例1和2以及图1和2来说明本发明。
图1说明了在6小时孵育后观察到的白藜芦醇(RSV)和白藜芦醇低聚物(OR)对has-2表达的影响。“未处理”对应于在不存在待测试产物的情况下孵育的成纤维细胞。结果表示为每个处理的四个样品的平均值±标准偏差。
图2说明孵育23小时后观察到的白藜芦醇低聚物(OR)，透明质酸(HA)和白藜芦醇低聚物与透明质酸(OR+HA)的组合对has-2表达的影响。如果在OR和HA之间存在相加作用(叠加作用)，阴影柱OR+HA对应于理论值。黑色柱OR+HA对应于测量的协同效应。“未处理的”对应于在不存在待测试产物的情况下孵育的成纤维细胞。结果表示为每次处理的四个样品的平均值±标准偏差。
实施例1：白藜芦醇和白藜芦醇低聚物对成纤维细胞中has-2表达的作用
1.1.操作模式
将人皮肤成纤维细胞分散于含有10％胎牛血清(FBS)和抗生素(青霉素/链霉素)的DMEM培养基中并孵育至达到90％融合(汇合)。除去培养基并分别用包含白藜芦醇(RSV)或白藜芦醇低聚物(OR)的新鲜培养基代替。下面的表1显示了测试的不同条件和使用的浓度。
表1
将人皮肤成纤维细胞在37℃在5％CO2下孵育6小时。ARN提取通过使用ARN欧米茄提取试剂盒(ARN Omega extraction kit)进行。使用1μg ARN，并将其使用ADNc Bio-RadiScriptTM合成试剂盒重新转录到互补DNA中，之后进行实时定量PCR定量。使用Fast-StartTM DNA Master SYBR Green I实时PCR试剂盒(Roche Molecular Biochemicals)进行PCR反应。已经以20μl的最终体积进行了每个PCR，最终体积包含10μl的SYBR Green mix 2X(Fast start DNA master SYBR green+Taq DNA聚合酶)，2μl的10μM引物混合物(最终1μM)和8μl的ADNc溶液(50纳克(ng))。所用的引物描述于下表2中。
表2
低聚(Oligo)名称 序列 描述
f-qPCR-18S gag act ctg gca tgc taa cta g 18S rRNA
r-qPCR-18S gga cat cta agg gca tca cag 18S rRNA
f-qPCR-hHAS2 CTCTTTTGGACTGTATGGTGCC 透明质酸(Hyaluronan)合成酶2
r-qPCR-hHAS2 AGGGTAGGTTAGCCTTTTCACA 透明质酸(Hyaluronan)合成酶2
2.2.结果
结果如图1所示。
这些结果表明，6小时孵育后，白藜芦醇和低聚白藜芦醇(OR)显著诱导成纤维细胞的has-2表达，其因子(倍数)分别为1.18(+18％；p<0.043)和1.29(+29％；p<0.0045)。在这些条件下，白藜芦醇和白藜芦醇低聚物具有基本相同的活性。
实施例2：单独或与透明质酸结合的白藜芦醇低聚物对成纤维细胞中has-2表达的作用
2.1.操作模式
将人皮肤成纤维细胞分散在含有10％胎牛血清(FBS)和抗生素(青霉素/链霉素)的DMEM培养基中并孵育至达到60％汇合。除了孵育时间是23小时之外，操作模式的其余部分与上文所述的相同。下面的表3表示测试的不同条件和使用的浓度。
表3
2.2.结果
结果如图2所示。
这些结果显示白藜芦醇低聚物(OR)增加1.3倍(+29％)成纤维细胞has-2表达。HA将has-2表达增加2倍(+104％)。由于OR和HA混合物，这两种活性物的简单叠加效应将使理论上能够得到2.3(+133％)的诱导因子(图中的阴影柱/散列柱)。实际上，当成纤维细胞用HA/OR混合物处理23小时时，观察到对应于3.25倍(+226％)的has-2表达的显著增加。因此，HA+OR的效果与一方面单独HA治疗和另一方面单独OR治疗相比是协同的。
因此，这些结果首次显示白藜芦醇和白藜芦醇低聚物增加has-2基因的表达，从而刺激(促进)人成纤维细胞产生透明质酸。此外，这些结果显示白藜芦醇与透明质酸协同发挥作用，这些化合物的组合显著增加了has-2的表达。
这些结果证实，根据本发明的组合物可以用作化妆品，药物和/或食品组合物，用于治疗响应于透明质酸合成增加的功能障碍和/或状况。

Claims (14)

1.包含有效量的白藜芦醇或其衍生物的组合物用于刺激哺乳动物细胞或组织，特别是人哺乳动物的透明质酸产生的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，白藜芦醇选自顺式-白藜芦醇，反式-白藜芦醇和白藜芦醇酯，其为单体和低聚物，包括至少一个式-O-CO-A的酯基团的单体，以及通过碳-碳或醚键连接的单体单元和/或通过-O-CO-R-CO-O-基团交联的单体形成的低聚物，-A表示具有至少两个碳原子的烷基残基，所述残基是直链或支链的、饱和或不饱和的，芳基，芳烷基或亚芳烷基残基，和-R代表0-10个碳原子的亚烷基残基，其是饱和的或不饱和的，和/或具有1至3个环和/或杂环残基的1个亚芳基残基，以及这些单元的非对映异构体。
3.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其特征在于所述组合物还包含作为活性成分的透明质酸或其盐。
4.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其特征在于，所述组合物还包含在载体例如脂质体，微粒或胶束中递送的作为活性成分的透明质酸或其盐以及白藜芦醇。
5.根据前述权利要求中任一项的用途，其特征在于所述组合物还包含作为活性成分的透明质酸，其通过透明质酸C6位的碳-碳键或醚键或酯键与白藜芦醇单体或低聚物共价连接。
6.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其特征在于，所述组合物选自由以下组成的组：化妆品组合物，食品组合物，药物组合物和兽药组合物。
7.根据前述权利要求中任一项所述的用途，其特征在于，所述组合物是适用于口服或肠胃外给药的药物、食品或兽药组合物或适用于局部给药的组合物。
8.根据权利要求7的用途，其特征在于用于局部应用的组合物为凝胶、乳膏、洗剂、乳液、水凝胶、面膜、乳、油、油膏、泡沫、浆液(serum)、软膏、气雾剂、棒或贴剂的形式。
9.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述用于口服给药的组合物为片剂，胶囊剂，粉剂，颗粒剂，冻干剂，溶质，混悬剂，糖浆剂，饮料，软锭剂，口香糖，糖果，或糖果剂的形式。
10.根据权利要求7所述的用途，其特征在于所述用于肠胃外给药的组合物为含水溶液或冻干粉末的形式。
11.一种刺激由哺乳动物细胞或组织，特别是人类哺乳动物在体外或体内产生透明质酸的方法，包括给予包含有效量的可能与有效量的透明质酸结合的有效量的白藜芦醇的组合物。
12.一种组合物，其在生理上可接受的介质中包括：
i)单体或低聚物的白藜芦醇或其衍生物，特别是顺式-白藜芦醇，反式-白藜芦醇，ε-葡萄素(葡萄抗毒素)(viniferin)，白藜芦醇酯，其是单体和低聚物，特别是甲基化和乙酰化的白藜芦醇，和包括至少一个式-O-CO-A的酯基团的单体，以及通过碳-碳或醚键连接的单体单元和/或通过-O-CO-R-CO-O-基团交联的单体形成的低聚物，-A表示具有至少两个碳原子的烷基残基，所述残基是直链或支链的、饱和或不饱和的，芳基，芳烷基或亚芳烷基残基，和-R代表0-10个碳原子的亚烷基残基，其是饱和的或不饱和的，和/或具有1至3个环和/或杂环残基的1个亚芳基残基，以及这些单元的非对映异构体，和
ii)平均分子量在50kDa和100kDa之间的透明质酸或其盐
所述透明质酸通过在透明质酸的羟基位置处的碳-碳键或醚键或酯键共价连接到单体或低聚物白藜芦醇或其衍生物，特别是顺式-白藜芦醇，反式-白藜芦醇，ε-葡萄素(葡萄抗毒素)(viniferin)。
13.一种美容护理方法，其特征在于它包括局部施用有效量的根据权利要求7或权利要求12的组合物，用于维持或恢复皮肤水合作用和生物力学特性，或用于预防或延缓皮肤衰老迹象的出现或减缓其影响。
14.根据权利要求12所述的组合物，用于与透明质酸降低有关的功能障碍。
CN201580080673.5A 2015-06-05 2015-06-05 刺激透明质酸合成的方法 Active CN108289809B (zh)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/IB2015/054257 WO2016193791A1 (en) 2015-06-05 2015-06-05 Process for stimulating hyaluronic acid synthesis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108289809A true CN108289809A (zh) 2018-07-17
CN108289809B CN108289809B (zh) 2021-12-03

Family

ID=53490016

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201580080673.5A Active CN108289809B (zh) 2015-06-05 2015-06-05 刺激透明质酸合成的方法

Country Status (6)

Country Link
US (1) US10470987B2 (zh)
EP (1) EP3302409B1 (zh)
CN (1) CN108289809B (zh)
ES (1) ES2881360T3 (zh)
PT (1) PT3302409T (zh)
WO (1) WO2016193791A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021254637A1 (en) * 2020-06-19 2021-12-23 Tomcat International Limited Association of natural actives ingredients to fight skin aging
RU2745124C1 (ru) * 2020-07-02 2021-03-22 Общество с ограниченной ответственностью "МедикалСайнс" Биоактивная композиция на основе сшитой соли гиалуроновой кислоты, содержащая ресвератрол, и способ ее получения
KR20240046746A (ko) * 2021-08-12 2024-04-09 록 옵코 엘엘씨 히알루론산의 조성물 및 단독 및 레티노이드와의 조합으로의 피부를 개선시키기 위한 용도

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6572882B1 (en) * 1997-07-15 2003-06-03 Caudalie Compositions based on resveratrol
CN101795660A (zh) * 2007-08-13 2010-08-04 莱雅公司 包含透明质酸的化妆品或药物组合物和用于减轻老化迹象的美容方法
CN102958362A (zh) * 2010-06-28 2013-03-06 白藜芦醇合伙人有限责任公司 含有白藜芦醇的组合物和应用方法

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2777186B1 (fr) 1998-04-10 2001-03-09 Oreal Utilisation d'au moins un hydroxystilbene dans une composition raffermissante
US20090169585A1 (en) 2003-10-23 2009-07-02 Resveratrol Partners, Llc Resveratrol-Containing Compositions And Their Use In Modulating Gene Product Concentration Or Activity
ITMI20051416A1 (it) * 2005-07-22 2007-01-23 Beauty Farm Del Sorriso S R L Composizioni cosmetiche contenenti acido ialuronico e colostro
KR100927579B1 (ko) * 2006-12-13 2009-11-23 주식회사 엘지생명과학 히아루론산 및/또는 그것의 염을 함유하는 아토피성피부염의 개선 및 치료를 위한 조성물
FR2923717B1 (fr) 2007-11-15 2015-01-16 Caudalie Compositions de derives polyphenoliques stilbeniques et leurs applications pour lutter contre les pathologies et le veillissement des organismes vivants
GB2502029B (en) 2011-02-09 2018-02-21 Forward Scout Entpr Pty Ltd Cosmetic or pharmaceutical formulation comprising hyaluronate crosspolymer and one or more of; azelaic acid, or derivative, and natural oils
ES2378028B1 (es) * 2012-02-22 2013-02-18 Ignacio Umbert Millet Composición cosmética para el rejuvenecimiento de la piel y procedimiento y usos correspondientes
US20150005391A1 (en) 2013-06-26 2015-01-01 COLE Research & Design, Inc. Method of reducing scarring

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6572882B1 (en) * 1997-07-15 2003-06-03 Caudalie Compositions based on resveratrol
CN101795660A (zh) * 2007-08-13 2010-08-04 莱雅公司 包含透明质酸的化妆品或药物组合物和用于减轻老化迹象的美容方法
CN102958362A (zh) * 2010-06-28 2013-03-06 白藜芦醇合伙人有限责任公司 含有白藜芦醇的组合物和应用方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KEN SZULCZYK: "《Everything You Wanted To Know About Hyaluronic Acid》", 《BLOG》 *

Also Published As

Publication number Publication date
ES2881360T3 (es) 2021-11-29
PT3302409T (pt) 2021-07-08
EP3302409A1 (en) 2018-04-11
US10470987B2 (en) 2019-11-12
US20180161256A1 (en) 2018-06-14
CN108289809B (zh) 2021-12-03
WO2016193791A1 (en) 2016-12-08
EP3302409B1 (en) 2021-04-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2010500282A (ja) ケンペロールおよびケルセチンを含むヒアルロン酸の生成を促進するための組成物
JP4388289B2 (ja) 皮膚老化防止・改善剤及び／又は肌荒れ防止・改善剤キット
FR3018191A1 (fr) Utilisations cosmetiques de la swertiamarine
CN108289809A (zh) 刺激透明质酸合成的方法
CN112368367A (zh) 包含α-硫辛酸或α-硫辛酸盐、维生素C衍生物和透明质酸的组合物及其用途
WO2015015816A1 (ja) 繊維芽細胞賦活剤
CN111148506A (zh) 在化妆品和/或营养保健品中使用Let-7b抑制剂的方法
FR3036956A1 (fr) Methode de stimulation de la synthese de l&#39;acide hyaluronique
JPWO2016129174A1 (ja) ヒアルロン酸産生促進剤
JP6522286B2 (ja) ヒアルロン酸産生促進剤
KR101661288B1 (ko) 피부 개선용 조성물
JP6411778B2 (ja) 幹細胞の未分化状態維持剤及び増殖促進剤
JP6861955B2 (ja) ヒアルロン酸合成促進剤
JP2017132747A (ja) ＡＧＥｓ産生抑制剤
KR20170025352A (ko) 피부 개선용 조성물
WO2015015815A1 (ja) 繊維芽細胞賦活剤
KR20140089848A (ko) 에피프리델라놀을 함유하는 피부주름 개선용 조성물
WO2021254637A1 (en) Association of natural actives ingredients to fight skin aging
EP4252763A1 (en) Exosome secretion promoting agent
TW201347778A (zh) 玻尿酸產生促進劑
CN110573138B (zh) 皮肤抗衰老剂以及抗衰老相关基因表达调节剂
KR102635022B1 (ko) 자소엽 및 유칼립투스 혼합 엑소좀, 아줄렌, 아줄렌 유도체 또는 이들의 염을 함유하는 탄성 리포좀 및 펩타이드 혼합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물
KR20170136801A (ko) 피부 상태 개선용 조성물
CN113813202A (zh) 用于对抗皮肤老化的天然活性成分的联合
US11547652B2 (en) Combination products and cosmetic compositions for controlling skin disorders and skin aging that affect keratinocytes and/or fibroblasts and the dermis

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20190411

Address after: London, England

Applicant after: Tom Carter International Ltd.

Applicant after: PRESIDENT AND FELLOWS OF HARVARD COLLEGE

Address before: Gibraltar Airport

Applicant before: Caudal IP Co., Ltd.

Applicant before: PRESIDENT AND FELLOWS OF HARVARD COLLEGE

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant