CN108148912A - 肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒 - Google Patents

肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN108148912A
CN108148912A CN201810190175.1A CN201810190175A CN108148912A CN 108148912 A CN108148912 A CN 108148912A CN 201810190175 A CN201810190175 A CN 201810190175A CN 108148912 A CN108148912 A CN 108148912A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dna
artificial sequence
seq
primer
lesion detection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810190175.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108148912B (zh
Inventor
彭勇
魏于全
谭双燕
苟启桁
巫轲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Sichuan University
Original Assignee
Sichuan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sichuan University filed Critical Sichuan University
Priority to CN201810190175.1A priority Critical patent/CN108148912B/zh
Priority to PCT/CN2018/086201 priority patent/WO2019169730A1/zh
Publication of CN108148912A publication Critical patent/CN108148912A/zh
Priority to US17/013,947 priority patent/US11608534B2/en
Application granted granted Critical
Publication of CN108148912B publication Critical patent/CN108148912B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/112—Disease subtyping, staging or classification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/118—Prognosis of disease development
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/178—Oligonucleotides characterized by their use miRNA, siRNA or ncRNA

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒，涉及生物技术及医学领域。本发明的研究表明，肿瘤患者例如含有EML4‑ALK或SLC34a2‑ROS1融合基因的非小细胞肺癌患者血液中存在特定的环状RNA，其碱基序列如SEQ ID NO.1‑6所示；揭示SEQ ID NO.1‑6所示环状RNA与非小细胞肺癌相关，该环状RNA在血浆样本中稳定、恒定的存在，具有高度特异性和有效性，其可以作为肿瘤检测的生物标志物；其相应的检测该环状RNA的试剂例如引物和探针均可以用于制备肿瘤检测试剂盒，为肿瘤检测、诊断、治疗以及预后评估提供一种新的思路和手段。

Description

肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒
技术领域
本发明涉及生物技术及医学领域，具体而言，涉及肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒。
背景技术
肺癌是目前全球致死率和发生率最高位的肿瘤，其中超过85％为非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)。传统的化疗在治疗非小细胞肺癌方面作用有限，诊断后中位生存期往往不足一年。近年来，针对肺癌的分子机制的研究取得了长足进步，明确肺癌的分子分型，选择适合其靶点的靶向药物，对非小细胞肺癌治疗可以取得令人满意的疗效。
基因融合是由两个或多个基因的编码区首尾相连,置于同一套调控序列(包括启动子、增强子、核糖体结合序列、终止子等)控制之下,构成的嵌合基因。在NSCLC中已发现棘皮动物微管结合蛋白4(EML4)基因和间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因的融合。EML4-ALK融合基因是发生于非小细胞肺癌中的促癌的基因突变，占非小细胞肺癌发生率的4-5％。EML4-ALK导致酪氨酸激酶异常表达，引起细胞的恶性转化。目前，靶向药物克唑替尼(Crizotinib)已在临床中用于EML4-ALK融合基因检测阳性的晚期NSCLC患者，能明显延长EML4-ALK融合基因检测阳性患者的总生存期。SL34A2-ROS1融合基因在NSCLC中的发生率约为1.0％-3.4％，在EGFR/KRAS/ALK均阴性的人群中的发生率则可至5.7％，病理类型主要是腺癌。SL34A2-ROS1基因发生融合时丢失细胞外区域，保留跨膜和细胞内酪氨酸激酶区域，融合位点主要发生在ROS1基因的第32、34、35、36号外显子。ROS1受体酪氨酸激酶参与激活多条下游信号转导通路，包括RAS-MAPK/ERK、PI3K/AKT/mTOR、JAK/STAT3、PLCγ/IP3和SHP2/VAV3途径，进而调控肿瘤细胞的生长增殖、细胞周期、分化、转移和迁移。ROS1基因和ALK基因在酪氨酸激酶区域序列存在49％同源性，而在激酶催化区的ATP结合位点二者同源性高达77％，因此ALK抑制剂克唑替尼在治疗ROS1融合基因阳性的NSCLC中具有明显疗效。ROS1融合基因为肺癌的个体化治疗提供新的方案，明确ROS1融合基因在肺腺癌中的阳性率，了解阳性患者临床病理特征及推断好发人群对临床实践具有重要的意义。
研究发现，EML4与ALK的融合机制为在2号染色体短臂上的发生了臂内倒位继而产生融合基因，而且通常为EML4不同外显子与ALK20号外显子之间的融合从而产生了不同的融合类型。融合类型包括E13-A20，E6a/b-A20，E20-A20，E15-A20，E14-A20，E18-A20，E2-A20，E17-A20等，目前常见的类型为V1、V3a/b，其结果导致ALK激酶活性的激活从而产生致癌活性。目前，针对EML4-ALK和SL34A2-ROS1融合蛋白的分子靶向药物克唑替尼(crizotinib)已在III期临床试验中取得令人振奋的疗效，在非小细胞肺癌ALK和ROS1阳性的患者中，克唑替尼正逐渐取代标准的一、二线化疗方案。同时，二代的ALK抑制剂色瑞替尼(ceritinib)和艾乐替尼(alectinib)业已面世，在针对克唑替尼耐药的ALK阳性的非小细胞肺癌患者的使用中获得了美国食品与药品总局(US Food and Drug Administration)的审批。同时，使用色瑞替尼(ceritinib)和艾乐替尼(alectinib)治疗ROS1阳性的临床前研究也在紧锣密鼓的进行。
随着针对ALK及ROS1阳性的药物的顺利研发与临床使用，随之而来的问题是采取何种技术手段筛选明确基因融合变异的患者？目前常规使用的方法是：1.检测肺癌组织中DNA水平的荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybridization，FISH)；2.检测肺癌组织中mRNA水平的PCR技术；3.基于ALK基因在与EML4基因融合之后ALK蛋白水平会显著增加，也可从肺癌组织的ALK免疫组化(immunohistochemistry，IHC)水平反映融合状态。
FISH技术是目前临床上针对ALK及ROS1融合基因检测的金标准。但是其也存在一些问题：1.检测相对复杂，对人员、设备、检测过程、结果判读要求较高，存在主客观因素偏倚；2.存在假阳性的可能性；3.阳性阈值的选择对检测的敏感性及特异性也会产生影响。研究报道，当参考值设定为≥10％时，特异性只有23％，这种较低的特异性可能与＜2个信号距离的标准设定有关，当参考值提高到20％时，特异性上升至66％，而敏感性却只有64％。
RT-PCR检测特异性及敏感性均较高，理论上，合适的引物设计能扩增出微量的核酸。虽然PCR检测具有高敏感性、高特异性的特点，但操作相对复杂，成本高，对组织样本要求高，对变异类型的检测存在盲区，经改进方法后敏感性进一步提高，但是操作仍相对复杂，临床推广存在一定困难。IHC检测特点为低成本、相对简单、检测周期短，理论上能检测所有融合变异类型，但是在实际应用中，商业化抗体的检测敏感性和特异性有待进一步提高，发展方向为研发更具特异性的抗体。此外，以上方法均需要可观的临床组织样本，往往只有术后或者多次穿刺的患者样本能够满足需求。因此，临床上亟需建立一种快速有效的可以直接通过检测血液，兼顾灵敏性和特异性的新的EML4-ALK及SLC34a2-ROS1融合基因的检测方法。
发明内容
环状RNA(circular RNA，circRNA)是一类内源性的非编码RNA。研究表明，circRNAs广泛存在于不同细胞中，且具有组织特异性。而且，血浆等体液中发现也存在circRNAs，这表明circRNA可以作为肿瘤的生物标志物。
为提高肺癌病人的生存率，越来越多的研究者期望找到可用于临床诊断、分型和预后等相关的生物标记物，而circRNA具备成为新型肺癌生物标志物的潜力。
本发明的目的在于提供一种肿瘤的生物标志物，其为环状RNA，该环状RNA选自碱基序列如SEQ ID NO.1-6中任意一种所示的序列。
本发明的另一目的在于提供上述生物标志物的应用。
本发明的另一目的在于提供一种肿瘤检测试剂盒。
本发明是这样实现的：
一种肿瘤的生物标志物，其为环状RNA，所述环状RNA选自SEQ ID NO.1-6。
需要说明的是，SEQ ID NO.1-6所示的序列为环状RNA的线性形式。
用于检测如上所述的生物标志物的引物或探针在制备肿瘤检测试剂盒中的应用。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述肿瘤为肺癌。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述肺癌为非小细胞肺癌。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述非小细胞肺癌与棘皮动物微管结合蛋白4(EML4)基因和间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因的融合(EML4-ALK)相关，或者所述非小细胞肺癌与溶质转运蛋白家族34磷酸钠协同转运蛋白2(SLC34a2)基因和c-ros肉瘤致癌因子-受体酪氨酸激酶(ROS1)基因的融合(SLC34a2-ROS1)相关。
其中，SEQ ID NO.1-4为EML4和ALK两个基因以V3a和V3b进行融合的标志物，SEQID NO.5-6为SLC34a2和ROS1两个基因进行融合的标志物。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述引物的碱基序列如SEQ ID NO.7-371所示。
一种肿瘤检测试剂盒，其包括用于检测样品中环状RNA的试剂，该环状RNA选自碱基序列如SEQ ID NO.1-6中任意一种所示的序列。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，所述试剂为引物，所述引物选自SEQ IDNO.7-58中的任意一种和SEQ ID NO.59-100中的一种，或者所述引物选自SEQ ID NO.111-239中的任意一种和SEQ ID NO.240-371中的任意一种。
其中，SEQ ID NO.7-58中的任意一种和SEQ ID NO.59-100中的一种的组合可以检测SEQ ID NO.1-4所示的环状RNA，SEQ ID NO.111-239中的任意一种和SEQ ID NO.240-371中的任意一种的组合可以检测SEQ ID NO.5-6所示的环状RNA。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述试剂为探针。
进一步地，在本发明的一些实施方案中，上述样品为血液和由其制备的血液产品如血浆。
本发明具有以下有益效果：
本发明的研究表明，肿瘤患者例如含有EML4-ALK或SLC34a2-ROS1融合基因的非小细胞肺癌患者血液中存在特定的环状RNA，其碱基序列如SEQ ID NO.1-6所示；揭示SEQ IDNO.1-6所示环状RNA与非小细胞肺癌相关，可作为EML4-ALK V3a/3b融合基因及SLC34a2-ROS1融合基因的判断标志，该环状RNA在血液及其相关样本中稳定、恒定的存在，具有高度特异性和有效性，其可以作为肿瘤检测的生物标志物；其相应的检测该环状RNA的试剂例如引物和探针均可以用于制备肿瘤检测试剂盒，为肿瘤检测、诊断、治疗以及预后评估提供一种新的思路和手段。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例1中的EML4-ALKV3a/3b融合基因阳性病人血浆中的环状RNA的检测结果；
图2为本发明实施例2中的SLC34A2-ROS1融合基因阳性病人血浆中的环状RNA的检测结果；
图3为本发明实施例3中的采用G102/G103和G103/G106的引物组合方式确定SLC34a2-ROS1融合基因类型的PCR结果；
图4为本发明实施例3中的引物G103、G102和G106对应SLC34a2和ROS1不同融合类型上的位置结构示意图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供了检测肺癌病人是否具有EML4-ALK融合基因或其融合类型的方法，具体如下：
取三份EML4-ALKV3a/3b融合基因阳性和三例非EML4-ALK融合基因的华西医院肺癌病人血浆样本，均签署知情同意书。
检测样本中环状RNA的步骤如下：
1.提取血浆RNA
1)提取血浆RNA:在250μl血浆中加入750μl Trizol LS试剂裂解血浆，充分混匀，室温静置5min；
2)加200μl氯仿，充分混匀，室温静置3min，然后于4℃，12000g离心15min；
3)取上清约500μl，加入500μl异丙醇，充分混匀，室温静置10min，然后于4℃，12000g离心10min；
4)弃上清，留沉淀，加入1ml 75％的乙醇洗涤后，于4℃，7500g离心5min；
5)重复步骤4)一次；
6)弃乙醇，晾至略干，加入10μl RNase-free的水溶解RNA后，立即置于冰上；
7)用1μl RNA测RNA浓度
3.逆转录体系
使用Kit试剂盒(Life，USA,货号AM1710)进行，按其说明书方法进行：取由血浆中抽提的RNA、10μl和试剂盒中的Random Decamers、2μl，混合均匀，85℃加热3min后立即放冰上，再加入以下成分：
10x RT Buffer 2μl
dNTP Mix 4μl
RNase Inhibitor 1μl
MMLV-RT 1μl
Total 20μl
混合均匀，55℃加热1hr，92℃孵育10min后放冰上待用。
4.PCR体系及引物：
4.1第一轮PCR
引物序列：EA-F1:5’-GCAGAGCCCTGAGTACAAGC-3’(SEQ ID NO.7)；EA-R1:5’-GCTTGGTTGATGATGACATCTTTATG-3’(SEQ ID NO.59)。
使用Vazyme Biotech,Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymeras(p505-d1-AB)PCR试剂盒进行第一轮PCR
PCR体系如下：
2x Phanta Max Buffer 25μl
dNTP 1μl
上述引物EA-F1(10μM) 2μl
上述引物EA-R1(10μM) 2μl
Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 1μl
步骤3的cDNA 2μl
ddH2O 17μl
Total 50μl
PCR反应条件：
步骤1：95℃3min，
步骤2：95℃15s，
步骤3：55℃15s，
步骤4：72℃35s，
步骤5：返回步骤2，40个循环，
步骤6：72℃5min
PCR产物片段理论长度为503bp或者505bp，分别对应EML4-ALK V3a/V3b融合基因产生的F-cricEA-2A和F-cricEA-4A。但由于血浆样本中F-circEA含量较低，第一轮PCR后用1.5％琼脂糖胶电泳可能未见明显理论长度的条带，所以进行下面的巢式PCR。
4.2巢式PCR
所用引物序列：EA-F2:5’-CAACTACTGCTTTGCTGGCA-3’(SEQ ID NO.8)；EA-R2:5’-TCTGTGTATTTGGAGAGGTTGTG-3’(SEQ ID NO.60)。
使用Vazyme Biotech,Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymeras(p505-d1-AB)PCR试剂盒，PCR体系如下：
2x Phanta Max Buffer 25μl
dNTP 1μl
上述引物EA-F2(10μM) 2μl
上述引物EA-R2(10μM) 2μl
Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 1μl
第一轮PCR产物 2μl
ddH2O 17μl
Total 50μl
PCR反应条件：
步骤1：95℃3min
步骤2：95℃15s
步骤3：55℃15s
步骤4：72℃30s，
步骤5：返回步骤2，40个循环，
步骤6：72℃5min。
1.5％琼脂糖胶电泳检测，若PCR片段长度约为是271bp，鉴定出病人组织中有F-circEA-4A:EML4-ALK(V3a/3b)；若PCR片段长度约为是269bp，鉴定出病人组织中有F-circEA-2A:EML4-ALK(V3a/3b)。纯化回收PCR产物进行测序确认环状RNA序列，进一步判断病人含有融合基因。
结果如图1所示，图1中：A为各样本的PCR产物电泳图，其中：Positive表示阳性对照，negative表示阴性对照，M表示Marker，数字1，2，3表示EML4-ALK融合基因阳性病人血浆样本，4，5，6表示非EML4-ALK病人血浆样本；B为1号病人组织样本PCR产物的测序图，中间箭头所指表示环状RNA的环化位点。
根据图1的结果可以看出，EML4-ALK阳性样本(图中1、2和3)中存在环状RNA，其中1号样本检测出的环状RNA的线性形式的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，长度550nt，融合类型：F-circEA-4A:EML4-ALK(V3a)型；
2号样本检测出的环状RNA的线性形式的碱基序列如SEQ ID NO.2所示，长度548nt，融合类型：F-circEA-2A:EML4-ALK(V3a)型；
3号样本检测出的环状RNA有2个，其的线性形式的碱基序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，SEQ ID NO.3的长度583nt，融合类型：F-cricEA-4A:EML4-ALK(V3b)型；SEQ ID NO.4的长度581nt，融合类型：F-cricEA-2A:EML4-ALK(V3b)型；
而非EML4-ALK阳性样本未检测出如SEQ ID NO.1-4所述的环状RNA(图1A中的4/5/6)；由此说明，SEQ ID NO.1-4所述的环状RNA特异性地存在于EML4-ALK(V3a/V3b)阳性患者中，其可作为判断EML4-ALK融合基因的标志物，并可进一步作为非小细胞肺癌尤其是与棘皮动物微管结合蛋白4(EML4)基因和间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因的融合(EML4-ALK)相关导致的非小细胞肺癌的标志物。
实施例2
本实施例提供了检测ALK阳性病人是否具有EML4-ALK融合基因或其融合类型的方法，具体如下：
1.收集待测病人的全血，4℃，1500g离心10min，收集上清血浆，-80℃保存；
2.提取血浆RNA
同实施例1。
3.逆转录体系
同实施例1。
4.PCR体系及引物：
4.1第一轮PCR
所用引物序列：EA-F1:5’-GCAGAGCCCTGAGTACAAGC-3’(SEQ ID NO.7)；EA-R1:5’-GCTTGGTTGATGATGACATCTTTATG-3’(SEQ ID NO.59)。
使用Vazyme Biotech,Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymeras(p505-d1-AB)PCR试剂盒进行第一轮PCR
PCR体系如下：
2x Phanta Max Buffer 25μl
dNTP 1μl
EA-F1(10μM) 2μl
EA-R1(10μM) 2μl
Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 1μl
步骤3的cDNA 2μl
ddH2O 17μl
Total 50μl
PCR反应条件：
步骤1：95℃3min，
步骤2：95℃15s，
步骤3：55℃15s，
步骤4：72℃35s，
步骤5：返回步骤2，40个循环，
步骤6：72℃5min
PCR产物片段理论长度为503bp或者505bp。
4.2巢式PCR
引物序列：EA-F2:5’-CAACTACTGCTTTGCTGGCA-3’(SEQ ID NO.8)；EA-R2:5’-TCTGTGTATTTGGAGAGGTTGTG-3’(SEQ ID NO.60)。
使用Vazyme Biotech,Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymeras(p505-d1-AB)PCR试剂盒，PCR体系如下：
2x Phanta Max Buffer 25μl
dNTP 1μl
EA-F2(10μM) 2μl
EA-R2(10μM) 2μl
Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase 1μl
第一轮PCR产物 2μl
ddH2O 17μl
Total 50μl
PCR反应条件：
步骤1：95℃3min
步骤2：95℃15s
步骤3：55℃15s
步骤4：72℃30s，
步骤5：返回步骤2，40个循环，
步骤6：72℃5min
1.5％琼脂糖胶电泳检测，若PCR片段长度约为是271bp，鉴定出病人组织中有F-circEA-4A:EML4-ALK(V3a/3b)；若PCR片段长度约为是269bp，鉴定出病人组织中有F-circEA-2A:EML4-ALK(V3a/3b)。纯化回收PCR产物进行测序确认环状RNA序列，进一步判断病人含有融合基因。
此外，需要说明的是，在其他的实施例中，还可以使用如表1上游引物和表2中的下游引物进行组合来检测以确定该名患者具有EML4-ALK v3a/b的融合基因型。
表1用于检测EML4-ALK v3a/b的融合基因型的上游引物
表2用于检测EML4-ALK v3a/b的融合基因型的下游引物
实施例3
本实施例提供了检测肺癌病人是否具有SLC34a2-ROS1融合基因的方法，具体如下：
取4例肺癌患者(其中两例是具有SLC34a2-ROS1融合基因的病人，两例是没有SLC34a2-ROS1融合基因的病人)的血浆样本，均签署知情同意书。
1.提取血浆RNA
同实施例1。
2.逆转录体系
同实施例1。
3.PCR体系及引物：
所用引物序列：G103：5’-TCCTGAAGAGTGGGTAGGTT-3’(SEQ ID NO.111)；WK23：5’-TGTATGAAGGAACAGCAGTGG-3’(SEQ ID NO.242)；WK24：5’-GTGAAGATTGGAGACTTTGGAC-3’(SEQID NO.243)。
PCR反应体系：
体系1(WK24/G103检测CF1)：
2x Phanta Max Buffer 25μl
dNTP 1μl
WK24(10μM) 2μl
G103(10μM) 2μl
Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 1μl
cDNA 1μl
ddH2O 18μl
Total 50μl
体系2(WK23/G103检测CF2)：
2x Phanta Max Buffer 25μl
dNTP 1μl
WK23(10μM) 2μl
G103(10μM) 2μl
Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 1μl
cDNA 1μl
ddH2O 18μl
Total 50μl
PCR反应条件：
步骤1：95℃3min
步骤2：95℃15s
步骤3：61℃15s
步骤4：72℃2min，
步骤5：返回步骤2；44个循环，
步骤6：72℃5min。
4.PCR产物电泳和测序：
1.5％琼脂糖胶电泳检测，并纯化回收PCR产物进行测序。
结果如图2所示，图2A和2C中：--表示阴性对照，+表示阳性对照，M表示Marker，数字1，2表示检测CF1的病人血浆样本，3，4表示检测CF2的病人血浆样本。图2B和2D分别为2号和4号病人样本的测序图，中间箭头所指表示环状RNA的环化位点。
根据图2可以看出，SLC34a2-ROS1阳性样本(图2A中2和图2C中4)中存在环状RNA，其中2号样本检测出的环状RNA碱基序列如SEQ ID NO.5所示，长度1867bp，融合类型CF1；4号样本检测出的环状RNA碱基序列如SEQ ID NO.6所示，长度834bp，融合类型CF2；而非SLC34a2-ROS1阳性样本未检测出如SEQ ID NO.5-6所述的环状RNA；由此说明，SEQ IDNO.5-6所述的环状RNA特异性存在于SLC34a2-ROS1融合阳性患者中，其可作为判断SLC34a2-ROS1融合基因的标志物，并可进一步作为非小细胞肺癌尤其是溶质转运蛋白家族34磷酸钠协同转运蛋白2和c-ros1肉瘤致癌因子-受体酪氨酸激酶基因融合(SLC34a2-ROS1)导致的非小细胞肺癌的标志物。
实施例4
本实施例提供了一种检测ROS1阳性病人(具有SLC34a2-ROS1融合基因的病人)的血浆RNA中是否存在环状RNA的方法。具体如下：
1.收集病人全血，4℃，1500g离心10min，收集上清血浆，-80℃保存；
2.提取血浆RNA
同实施例1。
3.逆转录体系
同实施例1。
4.PCR体系及引物：
所用引物序列：G103：5’-TCCTGAAGAGTGGGTAGGTT-3’(SEQ ID NO.111)；G102：5’-TTCCAACCCAAGAGGAGATTG-3’(SEQ ID NO.240)；G106：5’-CAGTGGGAGAAAGCTGAAGATAA-3’(SEQ ID NO.241)。
PCR反应体系：
PCR反应体系：
体系1(G102/G103)：
2x Phanta Max Buffer 25μl
dNTP 1μl
G102(10μM) 2μl
G103(10μM) 2μl
Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 1μl
cDNA 1μl
ddH2O 18μl
Total 50μl
体系2(G103/G106)
2x Phanta Max Buffer 25μl
dNTP 1μl
G103(10μM) 2μl
G106(10μM) 2μl
Phanta Max Super-Fidelity DNA Polymerase 1μl
cDNA 1μl
ddH2O 18μl
Total 50μl
PCR反应条件：
步骤1：95℃3min
步骤2：95℃15s
步骤3：61℃15s
步骤4：72℃2min，
步骤5：返回步骤2；44个循环，
步骤6：72℃5min。
5PCR产物电泳
电泳结果图如3所示，如果1.5％琼脂糖胶电泳引物为G103/G102(SEQ ID NO.111/240)的PCR片段长度是1184bp，则可鉴定出病人血浆中有含有CF1。
若琼脂糖胶电泳引物为G103/G106(SEQ ID NO.111/241)的PCR片段长度是1659bp，则可鉴定出病人血浆中有含有CF1。
若琼脂糖胶电泳引物为G103/G102(SEQ ID NO.111/240)的PCR片段长度是456bp，鉴定出病人血浆中有含有CF2。
G103、G102和G106对应在SLC34a2和ROS1不同融合类型的位置如图4所示，图中4中，F1代表SLC34a2外显子2-4与ROS1基因的外显子32-42的融合；F2代表ROS1与ROS1基因的外显子34-37的融合；由于PCR引物设计的位置不同，可以确定G103/G106的扩增产物是来自与F1融合方式的环状RNA即CF1；而G103/G102扩增产物是来自与F2融合方式的环状RNA即CF2。
此外，还可以通过表3中所述的上游引物和4所示下游引物组合进行PCR确定患者具有SLC34a2-ROS1的融合基因型。
表3用于检测SLC34a2-ROS1的融合基因型的上游引物
表4用于检测SLC34a2-ROS1的融合基因型的下游引物
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 四川大学
<120> 肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒
<160> 371
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 550
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 1
aauucgagca ucaccuucuc cccagcccuc uucacaaccu cuccaaauac acagacaaac 60
uccagaaagc aagaaugcua cucccaccaa aagcauaaaa cgaccaucac cagcugaaaa 120
gucacauaau ucuugggaaa auucagauga uagccguaau aaauugucga aaauaccuuc 180
aacacccaaa uuaauaccaa aaguuaccaa aacugcagac aagcauaaag augucaucau 240
caaccaagug uaccgccgga agcaccagga gcugcaagcc augcagaugg agcugcagag 300
cccugaguac aagcugagca agcuccgcac cucgaccauc augaccgacu acaaccccaa 360
cuacugcuuu gcuggcaaga ccuccuccau cagugaccug aaggaggugc cgcggaaaaa 420
caucacccuc auucgggguc ugggccaugg agccuuuggg gagguguaug aaggccaggu 480
guccggaaug cccaacgacc caagcccccu gcaaguggcu gugaagacgc ugccugaagu 540
gugcucugaa 550
<210> 2
<211> 548
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 2
auucgagcau caccuucucc ccagcccucu ucacaaccuc uccaaauaca cagacaaacu 60
ccagaaagca agaaugcuac ucccaccaaa agcauaaaac gaccaucacc agcugaaaag 120
ucacauaauu cuugggaaaa uucagaugau agccguaaua aauugucgaa aauaccuuca 180
acacccaaau uaauaccaaa aguuaccaaa acugcagaca agcauaaaga ugucaucauc 240
aaccaagugu accgccggaa gcaccaggag cugcaagcca ugcagaugga gcugcagagc 300
ccugaguaca agcugagcaa gcuccgcacc ucgaccauca ugaccgacua caaccccaac 360
uacugcuuug cuggcaagac cuccuccauc agugaccuga aggaggugcc gcggaaaaac 420
aucacccuca uucggggucu gggccaugga gccuuugggg agguguauga aggccaggug 480
uccggaaugc ccaacgaccc aagcccccug caaguggcug ugaagacgcu gccugaagug 540
ugcucuga 548
<210> 3
<211> 583
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 3
aauucgagca ucaccuucuc cccagcccuc uucacaaccu cuccaaauac acagacaaac 60
uccagaaagc aagaaugcua cucccaccaa aagcauaaaa cgaccaucac cagcugaaaa 120
gucacauaau ucuugggaaa auucagauga uagccguaau aaauugucga aaauaccuuc 180
aacacccaaa uuaauaccaa aaguuaccaa aacugcagac aagcauaaag augucaucau 240
caaccaagca aaaaugucaa cucgcgaaaa aaacagccaa guguaccgcc ggaagcacca 300
ggagcugcaa gccaugcaga uggagcugca gagcccugag uacaagcuga gcaagcuccg 360
caccucgacc aucaugaccg acuacaaccc caacuacugc uuugcuggca agaccuccuc 420
caucagugac cugaaggagg ugccgcggaa aaacaucacc cucauucggg gucugggcca 480
uggagccuuu ggggaggugu augaaggcca gguguccgga augcccaacg acccaagccc 540
ccugcaagug gcugugaaga cgcugccuga agugugcucu gaa 583
<210> 4
<211> 581
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 4
auucgagcau caccuucucc ccagcccucu ucacaaccuc uccaaauaca cagacaaacu 60
ccagaaagca agaaugcuac ucccaccaaa agcauaaaac gaccaucacc agcugaaaag 120
ucacauaauu cuugggaaaa uucagaugau agccguaaua aauugucgaa aauaccuuca 180
acacccaaau uaauaccaaa aguuaccaaa acugcagaca agcauaaaga ugucaucauc 240
aaccaagcaa aaaugucaac ucgcgaaaaa aacagccaag uguaccgccg gaagcaccag 300
gagcugcaag ccaugcagau ggagcugcag agcccugagu acaagcugag caagcuccgc 360
accucgacca ucaugaccga cuacaacccc aacuacugcu uugcuggcaa gaccuccucc 420
aucagugacc ugaaggaggu gccgcggaaa aacaucaccc ucauucgggg ucugggccau 480
ggagccuuug gggaggugua ugaaggccag guguccggaa ugcccaacga cccaagcccc 540
cugcaagugg cugugaagac gcugccugaa gugugcucug a 581
<210> 5
<211> 1867
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 5
accauggcuc ccuggccuga auugggagau gcccagccca accccgauaa guaccucgaa 60
ggggccgcag gucagcagcc cacugccccu gauaaaagca aagagaccaa caaaacagau 120
aacacugagg caccuguaac caagauugaa cuucugccgu ccuacuccac ggcuacacug 180
auagaugagc ccacugaggu ggaugacccc uggaaccuac ccacucuuca ggacucgggg 240
aucaaguggu cagagagaga caccaaaggg aagauucucu guuucuucca agggauuggg 300
agauugauuu uacuucucgg auuucucuac uuuuucgugu gcucccugga uauucuuagu 360
agcgccuucc agcugguugg agcuggaguc ccaaauaaac caggcauucc caaauuacua 420
gaagggagua aaaauucaau acagugggag aaagcugaag auaauggaug uagaauuaca 480
uacuauaucc uugagauaag aaagagcacu ucaaauaauu uacagaacca gaauuuaagg 540
uggaagauga cauuuaaugg auccugcagu aguguuugca cauggaaguc caaaaaccug 600
aaaggaauau uucaguucag aguaguagcu gcaaauaauc uaggguuugg ugaauauagu 660
ggaaucagug agaauauuau auuaguugga gaugauuuuu ggauaccaga aacaaguuuc 720
auacuuacua uuauaguugg aauauuucug guuguuacaa ucccacugac cuuugucugg 780
cauagaagau uaaagaauca aaaaagugcc aaggaagggg ugacagugcu uauaaacgaa 840
gacaaagagu uggcugagcu gcgaggucug gcagccggag uaggccuggc uaaugccugc 900
uaugcaauac auacucuucc aacccaagag gagauugaaa aucuuccugc cuucccucgg 960
gaaaaacuga cucugcgucu cuugcuggga aguggagccu uuggagaagu guaugaagga 1020
acagcagugg acaucuuagg aguuggaagu ggagaaauca aaguagcagu gaagacuuug 1080
aagaaggguu ccacagacca ggagaagauu gaauuccuga aggaggcaca ucugaugagc 1140
aaauuuaauc aucccaacau ucugaagcag cuuggaguuu gucugcugaa ugaaccccaa 1200
uacauuaucc uggaacugau ggagggagga gaccuucuua cuuauuugcg uaaagcccgg 1260
auggcaacgu uuuauggucc uuuacucacc uugguugacc uuguagaccu guguguagau 1320
auuucaaaag gcugugucua cuuggaacgg augcauuuca uucacaggga ucuggcagcu 1380
agaaauugcc uuguuuccgu gaaagacuau accaguccac ggauagugaa gauuggagac 1440
uuuggacucg ccagagacau cuauaaaaau gauuacuaua gaaagagagg ggaaggccug 1500
cucccaguuc gguggauggc uccagaaagu uugauggaug gaaucuucac uacucaaucu 1560
gauguauggu cuuuuggaau ucugauuugg gagauuuuaa cucuugguca ucagccuuau 1620
ccagcucauu ccaaccuuga uguguuaaac uaugugcaaa caggagggag acuggagcca 1680
ccaagaaauu guccugauga ucuguggaau uuaaugaccc agugcugggc ucaagaaccc 1740
gaccaaagac cuacuuuuca uagaauucag gaccaacuuc aguuauucag aaauuuuuuc 1800
uuaaauagca uuuauaaguc cagagaugaa gcaaacaaca guggagucau aaaugaaagc 1860
uuugaag 1867
<210> 6
<211> 830
<212> RNA
<213> 人工序列
<400> 6
accauggcuc ccuggccuga auugggagau gcccagccca accccgauaa guaccucgaa 60
ggggccgcag gucagcagcc cacugccccu gauaaaagca aagagaccaa caaaacagau 120
aacacugagg caccuguaac caagauugaa cuucugccgu ccuacuccac ggcuacacug 180
auagaugagc ccacugaggu ggaugacccc uggaaccuac ccacucuuca ggacucgggg 240
aucaaguggu cagagagaga caccaaaggg aagauucucu guuucuucca agggauuggg 300
agauugauuu uacuucucgg auuucucuac uuuuucgugu gcucccugga uauucuuagu 360
agcgccuucc agcugguugg agaugauuuu uggauaccag aaacaaguuu cauacuuacu 420
auuauaguug gaauauuucu gguuguuaca aucccacuga ccuuugucug gcauagaaga 480
uuaaagaauc aaaaaagugc caaggaaggg gugacagugc uuauaaacga agacaaagag 540
uuggcugagc ugcgaggucu ggcagccgga guaggccugg cuaaugccug cuaugcaaua 600
cauacucuuc caacccaaga ggagauugaa aaucuuccug ccuucccucg ggaaaaacug 660
acucugcguc ucuugcuggg aaguggagcc uuuggagaag uguaugaagg aacagcagug 720
gacaucuuag gaguuggaag uggagaaauc aaaguagcag ugaagacuuu gaagaagggu 780
uccacagacc aggagaagau ugaauuccug aaggaggcac aucugaugag 830
<210> 7
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
gcagagccct gagtacaagc 20
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
caactactgc tttgctggca 20
<210> 9
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
ttgtagtcgg tcatgatggt c 21
<210> 10
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
ggagaaggtg atgctcgaat t 21
<210> 11
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
gcttgctcag cttgtactca 20
<210> 12
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
ttcaggtcac tgatggagga 20
<210> 13
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
tttgcttggt tgatgatgac atc 23
<210> 14
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
aattcgagca tcaccttctc cccag 25
<210> 15
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
aattcgagca tcaccttctc cc 22
<210> 16
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
agccctcttc acaacctctc 20
<210> 17
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
cacaacctct ccaaatacac aga 23
<210> 18
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
aaactccaga aagcaagaat gc 22
<210> 19
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 19
gaccatcacc agctgaaaag tc 22
<210> 20
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
tgcagagccc tgagtacaag c 21
<210> 21
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
ccaactactg ctttgctggc a 21
<210> 22
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
ctgcaagtgg ctgtgaaga 19
<210> 23
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 23
gtgaagacgc tgcctgaa 18
<210> 24
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 24
ccatcatgac cgactacaac 20
<210> 25
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 25
tgtatgaagg ccaggtgt 18
<210> 26
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 26
ctgagtacaa gctgagcaag 20
<210> 27
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 27
catcagtgac ctgaaggag 19
<210> 28
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 28
gaagacgctg cctgaag 17
<210> 29
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 29
tgcaagtggc tgtgaag 17
<210> 30
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 30
cctgaagtgt gctctgaaa 19
<210> 31
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 31
cccaactact gctttgct 18
<210> 32
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 32
cgctgcctga agtgtgctct gaaaa 25
<210> 33
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 33
gctgcctgaa gtgtgctctg aaaat 25
<210> 34
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 34
ctgcctgaag tgtgctctga aaatt 25
<210> 35
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 35
tgcctgaagt gtgctctgaa aattc 25
<210> 36
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 36
gcctgaagtg tgctctgaaa attcg 25
<210> 37
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 37
cctgaagtgt gctctgaaaa ttcga 25
<210> 38
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 38
ctgaagtgtg ctctgaaaat tcgag 25
<210> 39
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 39
tgaagtgtgc tctgaaaatt cgagc 25
<210> 40
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 40
gaagtgtgct ctgaaaattc gagca 25
<210> 41
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 41
aagtgtgctc tgaaaattcg agcat 25
<210> 42
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 42
agtgtgctct gaaaattcga gcatc 25
<210> 43
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 43
gtgtgctctg aaaattcgag catca 25
<210> 44
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 44
tgtgctctga aaattcgagc atcac 25
<210> 45
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 45
gtgctctgaa aattcgagca tcacc 25
<210> 46
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 46
tgctctgaaa attcgagcat cacct 25
<210> 47
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 47
gctctgaaaa ttcgagcatc acctt 25
<210> 48
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 48
ctctgaaaat tcgagcatca ccttc 25
<210> 49
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 49
tctgaaaatt cgagcatcac cttct 25
<210> 50
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 50
ctgaaaattc gagcatcacc ttctc 25
<210> 51
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 51
tgaaaattcg agcatcacct tctcc 25
<210> 52
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 52
gaaaattcga gcatcacctt ctccc 25
<210> 53
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 53
tgtgctctga aaattcgagc at 22
<210> 54
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 54
gctctgaaaa ttcgagcatc accttc 26
<210> 55
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 55
gctctgaaaa ttcgagcatc ac 22
<210> 56
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 56
agtgtgctct gaattcgagc 20
<210> 57
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 57
gctctgaatt cgagcatcac c 21
<210> 58
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 58
gcctgaagtg tgctctgaat t 21
<210> 59
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 59
gcttggttga tgatgacatc tttatg 26
<210> 60
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 60
tctgtgtatt tggagaggtt gtg 23
<210> 61
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 61
aaacatcacc ctcattcggg 20
<210> 62
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 62
caagaatgct actcccacca a 21
<210> 63
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 63
tcctccatca gtgacctgaa 20
<210> 64
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 64
gtgtatgaag gccaggtgtc 20
<210> 65
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 65
gagtacaagc tgagcaagct 20
<210> 66
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 66
ttcagagcac acttcaggca gc 22
<210> 67
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 67
tctgtgtatt tggagaggtt gtga 24
<210> 68
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 68
gcattcttgc tttctggagt tt 22
<210> 69
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 69
gcttggttga tgatgacatc tttatgc 27
<210> 70
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 70
tgccagcaaa gcagtagttg 20
<210> 71
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 71
cacctggcct tcatacacct 20
<210> 72
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 72
tcttcacagc cacttgcag 19
<210> 73
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 73
ttcaggcagc gtcttcac 18
<210> 74
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 74
ggtttaaacg ctagcaccgg ttt 23
<210> 75
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 75
ttctgaagaa tcaaacttac tt 22
<210> 76
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 76
tctggagttt gtctgtgtat tt 22
<210> 77
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 77
gagaaggtga tgctcgaatt t 21
<210> 78
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 78
tttgtctgtg tatttggaga gg 22
<210> 79
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 79
gagtagcatt cttgctttct g 21
<210> 80
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 80
tttcccaaga attatgtgac ttt 23
<210> 81
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 81
tatttggaga ggttgtgaag ag 22
<210> 82
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 82
ggtgggagta gcattcttg 19
<210> 83
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 83
tcttgctttc tggagtttgt 20
<210> 84
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 84
ttttcagagc acacttcagg cagcg 25
<210> 85
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 85
attttcagag cacacttcag gcagc 25
<210> 86
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 86
aattttcaga gcacacttca ggcag 25
<210> 87
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 87
gaattttcag agcacacttc aggca 25
<210> 88
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 88
cgaattttca gagcacactt caggc 25
<210> 89
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 89
tcgaattttc agagcacact tcagg 25
<210> 90
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 90
ctcgaatttt cagagcacac ttcag 25
<210> 91
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 91
gctcgaattt tcagagcaca cttca 25
<210> 92
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 92
tgctcgaatt ttcagagcac acttc 25
<210> 93
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 93
atgctcgaat tttcagagca cactt 25
<210> 94
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 94
gatgctcgaa ttttcagagc acact 25
<210> 95
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 95
tgatgctcga attttcagag cacac 25
<210> 96
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 96
gtgatgctcg aattttcaga gcaca 25
<210> 97
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 97
ggtgatgctc gaattttcag agcac 25
<210> 98
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 98
aggtgatgct cgaattttca gagca 25
<210> 99
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 99
aaggtgatgc tcgaattttc agagc 25
<210> 100
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 100
gaaggtgatg ctcgaatttt cagag 25
<210> 101
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 101
agaaggtgat gctcgaattt tcaga 25
<210> 102
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 102
gagaaggtga tgctcgaatt ttcag 25
<210> 103
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 103
ggagaaggtg atgctcgaat tttca 25
<210> 104
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 104
gaaaattcga gcatcacctt ctcccca 27
<210> 105
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 105
atgctcgaat tttcagagca ca 22
<210> 106
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 106
aggtgatgct cgaattttca gag 23
<210> 107
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 107
gtgatgctcg aattttcaga gc 22
<210> 108
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 108
gctcgaattc agagcacact 20
<210> 109
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 109
ggtgatgctc gaattcagag c 21
<210> 110
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 110
aattcagagc acacttcagg c 21
<210> 111
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 111
tcctgaagag tgggtaggtt 20
<210> 112
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 112
tttatttggg actccagctc c 21
<210> 113
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 113
tcatacactt ctccaaaggc tc 22
<210> 114
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 114
caatctcctc ttgggttgga a 21
<210> 115
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 115
ctaagaatat ccagggagca cac 23
<210> 116
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 116
ggataaggct gatgaccaag ag 22
<210> 117
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 117
tcaatctcct cttgggttgg aa 22
<210> 118
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 118
tatcagtgta gccgtggagt a 21
<210> 119
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 119
aatcatctcc aaccagctgg 20
<210> 120
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 120
taagatgtcc actgctgttc c 21
<210> 121
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 121
aatcttccct ttggtgtctc tc 22
<210> 122
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 122
cataaatgaa agctttgaag accat 25
<210> 123
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 123
tcataaatga aagctttgaa gacca 25
<210> 124
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 124
gtcataaatg aaagctttga agacc 25
<210> 125
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 125
agtcataaat gaaagctttg aagac 25
<210> 126
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 126
ataaatgaaa gctttgaaga ccatg 25
<210> 127
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 127
taaatgaaag ctttgaagac catgg 25
<210> 128
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 128
aaatgaaagc tttgaagacc atggc 25
<210> 129
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 129
aatgaaagct ttgaagacca tggct 25
<210> 130
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 130
atgaaagctt tgaagaccat ggctc 25
<210> 131
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 131
tgaaagcttt gaagaccatg gctcc 25
<210> 132
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 132
gaaagctttg aagaccatgg ctccc 25
<210> 133
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 133
aaagctttga agaccatggc tccct 25
<210> 134
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 134
aagctttgaa gaccatggct ccctg 25
<210> 135
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 135
agctttgaag accatggctc cctgg 25
<210> 136
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 136
gctttgaaga ccatggctcc ctggc 25
<210> 137
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 137
ctttgaagac catggctccc tggcc 25
<210> 138
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 138
tttgaagacc atggctccct ggcct 25
<210> 139
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 139
ttgaagacca tggctccctg gcctg 25
<210> 140
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 140
tgaagaccat ggctccctgg cctga 25
<210> 141
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 141
gaagaccatg gctccctggc ctgaa 25
<210> 142
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 142
aagaccatgg ctccctggcc tgaat 25
<210> 143
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 143
agaccatggc tccctggcct gaatt 25
<210> 144
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 144
ctgaaggagg cacatctgat gagac 25
<210> 145
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 145
tgaaggaggc acatctgatg agacc 25
<210> 146
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 146
gaaggaggca catctgatga gacca 25
<210> 147
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 147
aaggaggcac atctgatgag accat 25
<210> 148
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 148
aggaggcaca tctgatgaga ccatg 25
<210> 149
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 149
ggaggcacat ctgatgagac catgg 25
<210> 150
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 150
gaggcacatc tgatgagacc atggc 25
<210> 151
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 151
aggcacatct gatgagacca tggct 25
<210> 152
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 152
ggcacatctg atgagaccat ggctc 25
<210> 153
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 153
gcacatctga tgagaccatg gctcc 25
<210> 154
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 154
cacatctgat gagaccatgg ctccc 25
<210> 155
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 155
acatctgatg agaccatggc tccct 25
<210> 156
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 156
catctgatga gaccatggct ccctg 25
<210> 157
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 157
atctgatgag accatggctc cctgg 25
<210> 158
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 158
tctgatgaga ccatggctcc ctggc 25
<210> 159
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 159
ctgatgagac catggctccc tggcc 25
<210> 160
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 160
tgatgagacc atggctccct ggcct 25
<210> 161
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 161
gatgagacca tggctccctg gcctg 25
<210> 162
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 162
atgagaccat ggctccctgg cctga 25
<210> 163
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 163
tgagaccatg gctccctggc ctgaa 25
<210> 164
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 164
gagaccatgg ctccctggcc tgaat 25
<210> 165
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 165
aagaccatgg ctccctggcc tgaatt 26
<210> 166
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 166
gatggatgga atcttcacta ctc 23
<210> 167
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 167
ctcaagaacc cgaccaaag 19
<210> 168
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 168
cttaaatagc atttataagt ccagagatg 29
<210> 169
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 169
cagccttatc cagctcattc 20
<210> 170
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 170
tgtggaattt aatgacccag t 21
<210> 171
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 171
gaccaacttc agttattcag aaat 24
<210> 172
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 172
tgaagcaaac aacagtggag 20
<210> 173
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 173
ttcatagaat tcaggaccaa ct 22
<210> 174
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 174
agtgctgggc tcaagaa 17
<210> 175
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 175
accaagaaat tgtcctgatg at 22
<210> 176
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 176
tgcaaacagg agggaga 17
<210> 177
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 177
ctggagccac caagaaat 18
<210> 178
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 178
attcaggacc aacttcagtt at 22
<210> 179
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 179
gtcctgatga tctgtggaat tta 23
<210> 180
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 180
actcaatctg atgtatggtc ttt 23
<210> 181
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 181
caaacaacag tggagtcata aat 23
<210> 182
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 182
gtccagagat gaagcaaaca 20
<210> 183
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 183
cagctagaaa ttgccttgtt tc 22
<210> 184
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 184
ggagtttgtc tgctgaatga 20
<210> 185
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 185
ccttgtagac ctgtgtgtag a 21
<210> 186
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 186
gtgtctactt ggaacggatg 20
<210> 187
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 187
cagggatctg gcagcta 17
<210> 188
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 188
ccttggttga ccttgtagac 20
<210> 189
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 189
aggctgtgtc tacttgga 18
<210> 190
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 190
gcatttcatt cacagggatc t 21
<210> 191
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 191
gaacggatgc atttcattca c 21
<210> 192
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 192
ggatctggca gctagaaatt g 21
<210> 193
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 193
gtgaaagact ataccagtcc ac 22
<210> 194
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 194
gggaggagac cttcttactt 20
<210> 195
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 195
tgtttccgtg aaagactata cc 22
<210> 196
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 196
ggagaagtgt atgaaggaac ag 22
<210> 197
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 197
ttacaatccc actgaccttt g 21
<210> 198
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 198
ggagttggaa gtggagaaat c 21
<210> 199
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 199
aaagtgccaa ggaaggg 17
<210> 200
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 200
gactttgaag aagggttcca 20
<210> 201
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 201
tggaagtgga gaaatcaaag tag 23
<210> 202
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 202
tagcagtgaa gactttgaag aa 22
<210> 203
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 203
gaaatcaaag tagcagtgaa gac 23
<210> 204
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 204
gagcctttgg agaagtgtat g 21
<210> 205
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 205
agtggagcct ttggagaa 18
<210> 206
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 206
cagtggacat cttaggagtt g 21
<210> 207
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 207
gaacagcagt ggacatctt 19
<210> 208
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 208
catcttagga gttggaagtg g 21
<210> 209
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 209
ctggctaatg cctgctatg 19
<210> 210
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 210
gtgggagaaa gctgaagata a 21
<210> 211
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 211
ggatcctgca gtagtgtttg 20
<210> 212
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 212
accaggcatt cccaaattac 20
<210> 213
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 213
aagctgaaga taatggatgt agaa 24
<210> 214
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 214
ttcagagtag tagctgcaaa taa 23
<210> 215
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 215
agtagctgca aataatctag gg 22
<210> 216
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 216
aaccagaatt taaggtggaa ga 22
<210> 217
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 217
gggtttggtg aatatagtgg aa 22
<210> 218
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 218
cccaaattac tagaagggag taaa 24
<210> 219
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 219
ttcaatacag tgggagaaag c 21
<210> 220
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 220
gtgaatatag tggaatcagt gaga 24
<210> 221
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 221
gcaaataatc tagggtttgg tg 22
<210> 222
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 222
tcccaaataa accaggcatt c 21
<210> 223
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 223
cagtagtgtt tgcacatgga 20
<210> 224
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 224
gagataagaa agagcacttc aaataa 26
<210> 225
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 225
ggataccaga aacaagtttc atac 24
<210> 226
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 226
gaaaggaata tttcagttca gagtag 26
<210> 227
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 227
gaatttaagg tggaagatga cattta 26
<210> 228
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 228
gcattcccaa attactagaa gg 22
<210> 229
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 229
tccttgagat aagaaagagc ac 22
<210> 230
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 230
tgcacatgga agtccaaa 18
<210> 231
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 231
atagttggaa tatttctggt tgt 23
<210> 232
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 232
gcacttcaaa taatttacag aacca 25
<210> 233
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 233
agatgacatt taatggatcc tg 22
<210> 234
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 234
agtcataaat gaaagctttg aagaccatg 29
<210> 235
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 235
ttgaagacca tggctccctg 20
<210> 236
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 236
aaagctttga agaccatggc tc 22
<210> 237
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 237
cacatctgat gagaccatgg ctc 23
<210> 238
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 238
ctgatgagac catggctcc 19
<210> 239
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 239
atgagaccat ggctccctg 19
<210> 240
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 240
ttccaaccca agaggagatt g 21
<210> 241
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 241
cagtgggaga aagctgaaga taa 23
<210> 242
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 242
tgtatgaagg aacagcagtg g 21
<210> 243
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 243
gtgaagattg gagactttgg ac 22
<210> 244
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 244
catactcttc caacccaaga gg 22
<210> 245
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 245
cttatccagc tcattccaac ct 22
<210> 246
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 246
ctttactcac cttggttgac ct 22
<210> 247
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 247
tgtatgaagg aacagcagtg g 21
<210> 248
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 248
gagatgaagc aaacaacagt gg 22
<210> 249
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 249
gtatgaagga acagcagtgg a 21
<210> 250
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 250
agagagagac accaaaggga 20
<210> 251
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 251
caatcccact gacctttgtc t 21
<210> 252
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 252
cacagaccag gagaagattg aa 22
<210> 253
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 253
gatattctta gtagcgcctt cca 23
<210> 254
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 254
atggtcttca aagctttcat ttatg 25
<210> 255
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 255
tggtcttcaa agctttcatt tatga 25
<210> 256
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 256
ggtcttcaaa gctttcattt atgac 25
<210> 257
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 257
gtcttcaaag ctttcattta tgact 25
<210> 258
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 258
catggtcttc aaagctttca tttat 25
<210> 259
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 259
ccatggtctt caaagctttc attta 25
<210> 260
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 260
gccatggtct tcaaagcttt cattt 25
<210> 261
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 261
agccatggtc ttcaaagctt tcatt 25
<210> 262
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 262
gagccatggt cttcaaagct ttcat 25
<210> 263
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 263
ggagccatgg tcttcaaagc tttca 25
<210> 264
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 264
gggagccatg gtcttcaaag ctttc 25
<210> 265
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 265
agggagccat ggtcttcaaa gcttt 25
<210> 266
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 266
cagggagcca tggtcttcaa agctt 25
<210> 267
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 267
ccagggagcc atggtcttca aagct 25
<210> 268
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 268
gccagggagc catggtcttc aaagc 25
<210> 269
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 269
ggccagggag ccatggtctt caaag 25
<210> 270
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 270
aggccaggga gccatggtct tcaaa 25
<210> 271
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 271
caggccaggg agccatggtc ttcaa 25
<210> 272
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 272
tcaggccagg gagccatggt cttca 25
<210> 273
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 273
attcaggcca gggagccatg gtctt 25
<210> 274
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 274
ttcaggccag ggagccatgg tcttc 25
<210> 275
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 275
aattcaggcc agggagccat ggtct 25
<210> 276
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 276
gtctcatcag atgtgcctcc ttcag 25
<210> 277
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 277
ggtctcatca gatgtgcctc cttca 25
<210> 278
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 278
tggtctcatc agatgtgcct ccttc 25
<210> 279
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 279
atggtctcat cagatgtgcc tcctt 25
<210> 280
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 280
catggtctca tcagatgtgc ctcct 25
<210> 281
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 281
ccatggtctc atcagatgtg cctcc 25
<210> 282
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 282
gccatggtct catcagatgt gcctc 25
<210> 283
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 283
agccatggtc tcatcagatg tgcct 25
<210> 284
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 284
gagccatggt ctcatcagat gtgcc 25
<210> 285
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 285
ggagccatgg tctcatcaga tgtgc 25
<210> 286
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 286
gggagccatg gtctcatcag atgtg 25
<210> 287
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 287
agggagccat ggtctcatca gatgt 25
<210> 288
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 288
cagggagcca tggtctcatc agatg 25
<210> 289
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 289
ccagggagcc atggtctcat cagat 25
<210> 290
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 290
gccagggagc catggtctca tcaga 25
<210> 291
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 291
ggccagggag ccatggtctc atcag 25
<210> 292
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 292
aggccaggga gccatggtct catca 25
<210> 293
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 293
caggccaggg agccatggtc tcatc 25
<210> 294
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 294
tcaggccagg gagccatggt ctcat 25
<210> 295
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 295
ttcaggccag ggagccatgg tctca 25
<210> 296
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 296
attcaggcca gggagccatg gtctc 25
<210> 297
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 297
caattcaggc cagggagcca tggtct 26
<210> 298
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 298
cctcagtggg ctcatctat 19
<210> 299
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 299
tcccttggaa gaaacagaga at 22
<210> 300
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 300
cccaattcag gccaggga 18
<210> 301
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 301
caggtgcctc agtgttatct 20
<210> 302
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 302
tggtcttcaa agctttcatt tat 23
<210> 303
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 303
ggggtcatcc acctcagt 18
<210> 304
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 304
cccttcgagg tacttatcgg 20
<210> 305
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 305
gctttcattt atgactccac tg 22
<210> 306
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 306
tcttggttac aggtgcctca 20
<210> 307
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 307
aagagtgggt aggttccagg 20
<210> 308
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 308
tgggctcatc tatcagtgta 20
<210> 309
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 309
ggagccatgg tcttcaaa 18
<210> 310
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 310
ctgggcatct cccaattc 18
<210> 311
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 311
acagagaatc ttccctttgg tg 22
<210> 312
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 312
gagtaggacg gcagaagtt 19
<210> 313
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 313
cagtgtagcc gtggagtag 19
<210> 314
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 314
ggaaggcgct actaagaata tc 22
<210> 315
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 315
acctcagtgg gctcatctat 20
<210> 316
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 316
cttccctttg gtgtctctct 20
<210> 317
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 317
tcccaatccc ttggaagaaa c 21
<210> 318
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 318
tgtctctctc tgaccacttg a 21
<210> 319
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 319
ccccttcgag gtacttatcg g 21
<210> 320
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 320
atcccttgga agaaacagag aat 23
<210> 321
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 321
aggggtcatc cacctcagt 19
<210> 322
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 322
atcttggtta caggtgcctc a 21
<210> 323
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 323
aagagtgggt aggttccagg g 21
<210> 324
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 324
gtgggctcat ctatcagtgt a 21
<210> 325
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 325
ctgggcatct cccaattca 19
<210> 326
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 326
acaggtgcct cagtgttatc t 21
<210> 327
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 327
ggagtaggac ggcagaagtt 20
<210> 328
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 328
ccaatccctt ggaagaaaca 20
<210> 329
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 329
gtgtctctct ctgaccactt ga 22
<210> 330
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 330
cctcagtggg ctcatctatc a 21
<210> 331
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 331
ggctcatcta tcagtgtagc c 21
<210> 332
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 332
ttggttacag gtgcctca 18
<210> 333
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 333
aagagtgggt aggttccagg gg 22
<210> 334
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 334
ggcagaagtt caatcttggt tac 23
<210> 335
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 335
ctgggcatct cccaattcag 20
<210> 336
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 336
tacaggtgcc tcagtgttat ct 22
<210> 337
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 337
aacagagaat cttccctttg gtg 23
<210> 338
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 338
tggagtagga cggcagaagt t 21
<210> 339
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 339
gagtcctgaa gagtgggtag 20
<210> 340
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 340
tcagtgtagc cgtggagtag 20
<210> 341
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 341
tggaaggcgc tactaagaat atc 23
<210> 342
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 342
tggaaggcgc tactaaga 18
<210> 343
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 343
aggtgcctca gtgttatct 19
<210> 344
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 344
ctcagtgggc tcatctatca 20
<210> 345
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 345
gtctctctct gaccacttga 20
<210> 346
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 346
agtgtagccg tggagtag 18
<210> 347
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 347
agtcctgaag agtgggtag 19
<210> 348
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 348
cccttggaag aaacagagaa t 21
<210> 349
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 349
ttccctttgg tgtctctct 19
<210> 350
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 350
agtaggacgg cagaagtt 18
<210> 351
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 351
cccaatccct tggaagaaac 20
<210> 352
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 352
aagtagagaa atccgagaag taaa 24
<210> 353
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 353
gcagaagttc aatcttggtt ac 22
<210> 354
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 354
tgggcatctc ccaattca 18
<210> 355
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 355
cagagaatct tccctttggt g 21
<210> 356
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 356
ggcgctacta agaatatcca g 21
<210> 357
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 357
aaatcaatct cccaatccct t 21
<210> 358
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 358
agaatatcca gggagcaca 19
<210> 359
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 359
aagagtgggt aggttccag 19
<210> 360
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 360
gctcatctat cagtgtagcc 20
<210> 361
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 361
tggttacagg tgcctca 17
<210> 362
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 362
gggtcatcca cctcagt 17
<210> 363
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 363
cccttcgagg tacttatcg 19
<210> 364
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 364
ccaattcagg ccaggga 17
<210> 365
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 365
tttgttggtc tctttgcttt 20
<210> 366
<211> 29
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 366
catggtcttc aaagctttca tttatgact 29
<210> 367
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 367
cagggagcca tggtcttcaa 20
<210> 368
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 368
gagccatggt cttcaaagct tt 22
<210> 369
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 369
gagccatggt ctcatcagat gtg 23
<210> 370
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 370
ggagccatgg tctcatcag 19
<210> 371
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 371
cagggagcca tggtctcat 19

Claims (10)

1.一种肿瘤的生物标志物，其特征在于，其为环状RNA，所述环状RNA的碱基序列如SEQID NO.1-6中任意一种所示的序列。
2.用于检测如权利要求1所述的生物标志物的引物或探针在制备肿瘤检测试剂盒中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为肺癌。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述肺癌为非小细胞肺癌。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述非小细胞肺癌与棘皮动物微管结合蛋白4基因和间变性淋巴瘤激酶基因的融合(EML4-ALK)相关，或者所述非小细胞肺癌与溶质转运蛋白家族34磷酸钠协同转运蛋白2和c-ros1肉瘤致癌因子-受体酪氨酸激酶基因的融合(SLC34A2-ROS1)相关。
6.根据权利要求2-3任一项所述的应用，其特征在于，所述引物的碱基序列如SEQ IDNO.7-371所示。
7.一种肿瘤检测试剂盒，其特征在于，其包括用于检测样品中环状RNA的试剂，所述环状RNA选自碱基序列如SEQ ID NO.1-6中任意一种所示的序列。
8.根据权利要求7所述的肿瘤检测试剂盒，其特征在于，所述试剂为引物，所述引物选自SEQ ID NO.7-58中的任意一种和SEQ ID NO.59-100中的一种，或者所述引物选自SEQ IDNO.111-239中的任意一种和SEQ ID NO.240-371中的任意一种。
9.根据权利要求7所述的肿瘤检测试剂盒，其特征在于，所述试剂为探针。
10.根据权利要求7-8任一项所述的肿瘤检测试剂盒，其特征在于，所述样品为血液和由其制备的血液产品如血浆。
CN201810190175.1A 2018-03-08 2018-03-08 肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒 Active CN108148912B (zh)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810190175.1A CN108148912B (zh) 2018-03-08 2018-03-08 肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒
PCT/CN2018/086201 WO2019169730A1 (zh) 2018-03-08 2018-05-09 肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒
US17/013,947 US11608534B2 (en) 2018-03-08 2020-09-08 Methods of detecting an EML4-ALK fusion tumor biomarker

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810190175.1A CN108148912B (zh) 2018-03-08 2018-03-08 肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108148912A true CN108148912A (zh) 2018-06-12
CN108148912B CN108148912B (zh) 2021-10-08

Family

ID=62456173

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810190175.1A Active CN108148912B (zh) 2018-03-08 2018-03-08 肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒

Country Status (3)

Country Link
US (1) US11608534B2 (zh)
CN (1) CN108148912B (zh)
WO (1) WO2019169730A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111733240A (zh) * 2020-06-19 2020-10-02 四川大学华西医院 一种肿瘤生物标志物及其应用

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111349705A (zh) * 2020-03-18 2020-06-30 昆明医科大学 circASXL1作为肺癌诊断标志物及其运用
KR20230044429A (ko) * 2020-07-08 2023-04-04 메르시 바이오애널리틱스, 인코포레이티드 폐암의 검출을 위한 조성물 및 방법

Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101528921A (zh) * 2006-01-20 2009-09-09 细胞信号技术有限公司 人非小细胞肺癌中的易位和突变的ros激酶
CN102719525A (zh) * 2012-04-12 2012-10-10 厦门艾德生物医药科技有限公司 用于检测eml4-alk融合基因突变的引物、探针及检测试剂盒
CN103468813A (zh) * 2013-09-17 2013-12-25 广州达健生物科技有限公司 Eml4-alk融合基因荧光定量pcr检测试剂盒
CN103805684A (zh) * 2012-11-09 2014-05-21 益善生物技术股份有限公司 Eml4-alk融合基因检测的pcr引物、试剂盒和液相芯片
CN104911251A (zh) * 2014-12-25 2015-09-16 邵棠 焦磷酸测序法检测eml4-alk融合基因的引物对及试剂盒
CN105229175A (zh) * 2013-03-15 2016-01-06 雅培分子公司 用于扩增和测定rna融合基因变体的方法、区分它们的方法以及有关的引物、探针和试剂盒
CN106978497A (zh) * 2017-04-26 2017-07-25 武汉友芝友医疗科技股份有限公司 Eml4‑alk融合基因突变的检测引物、探针及检测试剂盒
CN107058305A (zh) * 2017-03-15 2017-08-18 中国人民解放军总医院 一组核苷酸序列及在eml4‑alk融合基因快速检测中的应用
US20170298347A1 (en) * 2016-02-03 2017-10-19 Beth Israel Deaconess Medical Center NOVEL FUSION-CIRCULAR RNAs AND USES THEREOF
CN107365866A (zh) * 2017-09-04 2017-11-21 厦门飞朔生物技术有限公司 一种用于检测人类alk‑eml4基因融合的多重荧光pcr检测试剂盒
CN108998523A (zh) * 2018-07-24 2018-12-14 为康（苏州）基因科技有限公司 一种eml4-alk融合基因的检测方法及检测试剂盒
CN109022581A (zh) * 2018-08-13 2018-12-18 上海佰臻生物科技有限公司 Eml4-alk融合基因荧光定量pcr检测的试剂盒

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US10597725B2 (en) * 2014-09-01 2020-03-24 Arkray, Inc. Primer reagent for amplifying ALK fusion gene, ALK fusion gene amplification reagent kit including the same, and ALK fusion gene amplification method and ALK fusion gene analysis method using the same

Patent Citations (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101528921A (zh) * 2006-01-20 2009-09-09 细胞信号技术有限公司 人非小细胞肺癌中的易位和突变的ros激酶
CN102719525A (zh) * 2012-04-12 2012-10-10 厦门艾德生物医药科技有限公司 用于检测eml4-alk融合基因突变的引物、探针及检测试剂盒
CN103805684A (zh) * 2012-11-09 2014-05-21 益善生物技术股份有限公司 Eml4-alk融合基因检测的pcr引物、试剂盒和液相芯片
CN105229175A (zh) * 2013-03-15 2016-01-06 雅培分子公司 用于扩增和测定rna融合基因变体的方法、区分它们的方法以及有关的引物、探针和试剂盒
CN103468813A (zh) * 2013-09-17 2013-12-25 广州达健生物科技有限公司 Eml4-alk融合基因荧光定量pcr检测试剂盒
CN104911251A (zh) * 2014-12-25 2015-09-16 邵棠 焦磷酸测序法检测eml4-alk融合基因的引物对及试剂盒
US20170298347A1 (en) * 2016-02-03 2017-10-19 Beth Israel Deaconess Medical Center NOVEL FUSION-CIRCULAR RNAs AND USES THEREOF
CN107058305A (zh) * 2017-03-15 2017-08-18 中国人民解放军总医院 一组核苷酸序列及在eml4‑alk融合基因快速检测中的应用
CN106978497A (zh) * 2017-04-26 2017-07-25 武汉友芝友医疗科技股份有限公司 Eml4‑alk融合基因突变的检测引物、探针及检测试剂盒
CN107365866A (zh) * 2017-09-04 2017-11-21 厦门飞朔生物技术有限公司 一种用于检测人类alk‑eml4基因融合的多重荧光pcr检测试剂盒
CN108998523A (zh) * 2018-07-24 2018-12-14 为康（苏州）基因科技有限公司 一种eml4-alk融合基因的检测方法及检测试剂盒
CN109022581A (zh) * 2018-08-13 2018-12-18 上海佰臻生物科技有限公司 Eml4-alk融合基因荧光定量pcr检测的试剂盒

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YOUNG LIM CHOI等: "Identification of Novel Isoforms of the EML4-ALK Transforming Gene in Non-Small Cell Lung Cancer", 《CANCER RES》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111733240A (zh) * 2020-06-19 2020-10-02 四川大学华西医院 一种肿瘤生物标志物及其应用
CN111733240B (zh) * 2020-06-19 2021-05-07 四川大学华西医院 一种肿瘤生物标志物及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20210071263A1 (en) 2021-03-11
CN108148912B (zh) 2021-10-08
US11608534B2 (en) 2023-03-21
WO2019169730A1 (zh) 2019-09-12

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2488845T5 (es) Predicción de la probabilidad de recidiva de cáncer
Tun et al. Pathway analysis of primary central nervous system lymphoma
CN110878343B (zh) 一种用于遗传性耳聋致病基因SLC26A4突变快速检测的Cpf1试剂盒及其检测方法
ES2346967T3 (es) Marcadores de expresion genica para la prognosis del cancer de mama.
CN104619840A (zh) Fgfr2融合基因
CA2531967A1 (en) Expression profile algorithm and test for cancer prognosis
CN106434870A (zh) ncRNA及其用途
CN110079594B (zh) 基于dna和rna基因突变检测的高通量方法
CN106636430B (zh) 用于预测乳腺癌的生物标记物组合、试剂盒及使用方法
CN108148912A (zh) 肿瘤的生物标志物、应用和肿瘤检测试剂盒
CN104531854A (zh) 检测西妥昔单抗治疗转移性结直肠癌耐药的试剂盒
CN113889187B (zh) 单样本等位基因拷贝数变异检测方法、探针组和试剂盒
CN111662983A (zh) 一种用于检测淋巴瘤基因变异的试剂盒及其应用
CN114438210B (zh) 一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法
CN109439747A (zh) 一组用于肺癌诊断的circRNA标志物及其应用
CN109971832A (zh) 一种检测基因突变的试剂盒、方法及其用途
CN109628573A (zh) 一种用于无创产前检测12种染色体微缺失微重复综合征的试剂盒及其专用探针组
CN106460047B (zh) 用于鉴定癌前结肠直肠息肉和结肠直肠癌的方法及试剂盒
CN109609617A (zh) 用于检测肝豆状核变性病apt7b基因突变的引物组和试剂盒
JP5688497B2 (ja) 肺腺癌患者の術後予後を予測するための方法及び組成物
CN108841958A (zh) 一种检测EGFR基因外显子21L858突变的crRNA及其检测方法
CN110343750B (zh) 用于检测外泌体中核酸表达水平的内参基因及其应用
CN111690744B (zh) 一种用于评估乳腺肿瘤进展的生物标志物及其应用
CN112029833A (zh) 一种用于肿瘤类器官培养条件选择的ctnnb1基因突变的快速鉴定方法
CN108165621A (zh) 良性甲状腺结节特异基因

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant