CN114438210B - 一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法 - Google Patents
一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114438210B CN114438210B CN202210128468.3A CN202210128468A CN114438210B CN 114438210 B CN114438210 B CN 114438210B CN 202210128468 A CN202210128468 A CN 202210128468A CN 114438210 B CN114438210 B CN 114438210B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dna
- product
- synthesis
- seq
- endometrial cancer
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6869—Methods for sequencing
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
- C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
- C40B50/00—Methods of creating libraries, e.g. combinatorial synthesis
- C40B50/06—Biochemical methods, e.g. using enzymes or whole viable microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/118—Prognosis of disease development
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A90/00—Technologies having an indirect contribution to adaptation to climate change
- Y02A90/10—Information and communication technologies [ICT] supporting adaptation to climate change, e.g. for weather forecasting or climate simulation
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Oncology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法，属于生物技术领域。本发明基于多重PCR的扩增子靶向高通量测序，同时对11个基因突变和10个微卫星位点检测微卫星不稳定状态进行检测，根据检测结果评估内膜癌患者分子特征。本发明最低能稳定检出5ng/μL样本中2％突变比例和肿瘤含量为5％的微卫星不稳定状态，分型结果准确性更高；本发明检测的基因数目更多，可获得更多的肿瘤突变信息；本发明文库构建过程仅需3～5小时，操作简便、成本低廉；本发明仅通过一次检测即可完成子宫内膜癌的分子分型。本发明更适合临床应用，能更好地辅助医生评估患者预后、调整临床治疗方案，还能满足遗传性子宫内膜癌的筛查等。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法。
背景技术
子宫内膜癌在中国居女性生殖系统恶性肿瘤的第二位，在发达国家居首位。据2019年国家癌症中心统计，中国子宫内膜癌发病率为10.28/10万，死亡率为 1.9/10万。子宫内膜癌传统分型包括基于病理组织学的WHO分型和基于激素依赖性的Bokhman分型。传统分型对治疗有一定的指导作用，但是仍存在对亚型之间的分类不准确，相同亚型的子宫内膜癌患者会出现预后不同的情况。近年来，随着肿瘤分子机制的深入研究，研究人员开始关注子宫内膜癌不同组织学亚型的分子改变特征，癌症基因组图谱(The CancerGenomeAtlas，TCGA)通过全基因组和转录组的分析，并结合二代测序技术、DNA甲基化分析技术、反相蛋白质阵列技术和微卫星不稳定性(Microsatellite instability，MSI)分析技术等新型技术在分子学水平上对子宫内膜癌进行重新分类，将其分成四个亚型： POLE超突变型、MSI高突变型、低拷贝数型(CN-L型)和高拷贝数型(CN-H 型)。其中POLE突变型预后最好，CN-H型预后最差。
TCGA分子为协助临床医生评估患者的预后提供了新的方向。然而其涉及的新型技术费用高昂及操作复杂，不易在临床工作中开展。所以在此基础上，研究人员们又致力于开发类似TCGA的改良分型方式。如ProMisE分型和 TransPORTEC分型。因为分子检测在分子层面上会提示更多精准的信息，对于子宫内膜癌患者有重要的临床意义，《2020NCCN子宫肿瘤临床实践指南(第 1版)》、《第五版WHO女性生殖器官肿瘤分类》和《子宫内膜癌诊断与治疗指南(2021年版)》等临床指标均推荐对子宫内膜癌患者进行分子分型。
目前，临床上采用的子宫内膜癌改良分子分型方案，主要是通过使用一组免疫组化染色(包括MSH2、MSH6、MLH1、PMS2及p53)和Sanger测序法检测POLE基因突变的方法，也有使用MSI-PCR方法检测MSI，然后按照NCCN 或WHO的分型流程分型。虽然这些技术的临床应用已经相对成熟，但是也存在一定的局限性。比如：(1)需要组合Sanger测序法，免疫组化和毛细管电泳多种技术平台；(2)使用Sanger测序检测POLE基因突变需要多个测序反应，而且突变检测的灵敏度低；(3)免疫组化检测MMR的结果判定，对医生判读经验要求较高，结果判读带有主观差异；(4)TP53基因某些剪切位点的突变、或截短突变可导致p53免疫组化呈正常野生型表达，仅使用p53免疫组化代替TP53 突变检测，可能会遗漏一部分比例TP53突变；(5)检测的基因数目较少。
综合上述所述，临床急需一个专注于子宫内膜癌分子分型的文库构建方法，用于完善、优化子宫内膜癌分子分型。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法。
本发明用于定性检测子宫内膜癌患者石蜡包埋组织样本中11个基因 MSH2、PMS2、MLH1、MSH6、EPCAM和POLE、TP53、PTEN、PIK3CA、 KRAS、CTNNB1突变和10个微卫星不稳定状态。经自主开发的自动化生物学信息学分析软件，根据检测结果评估内膜癌患者分子特征。实现一次检测完成子宫内膜癌的分子分型。提供了一种子宫内膜癌分子分型的检测手段，弥补了临床现行文库构建方法的局限。
为达上述目的，本发明采用如下的技术方案：
本文库构建方法的原理是基于多重PCR的扩增子靶向测序，整个扩增反应体系包括：1)针对目标区域的特异修饰性扩增引物(GSP)；2)一对带有测序接头序列的接头扩增引物。特异修饰引物用于对靶序列进行精准PCR扩增富集，接头扩增引物用于对富集产物进行扩增并加上测序接头。本发明结合优化的 PCR反应程序和高特异RingCap-Taq酶的使用，在普通PCR平台上实现对样品核酸中目标序列进行用于高通量测序使用的文库构建，以实现对多基因多靶点突变进行准确、快速检测。
本发明提供了一种基于高通量测序的子宫内膜癌分子分型的引物，包括特异修饰性扩增引物和接头扩增引物，所述特异修饰性扩增引物的序列如SEQ ID NO.1～SEQ IDNO.788所示，所述接头扩增引物的序列如SEQ ID NO.789～SEQ ID NO.790所示。
本发明还提供了一种基于高通量测序的子宫内膜癌分子分型的试剂盒，包含所述引物。
本发明还提供了一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法，包括以下步骤：
1.待测样品的处理和模板的提取
样品适用范围包括手术切除的新鲜病理组织，甲醛固定石蜡包埋病例组织，石蜡切片等标本。蜡块样品切成5～8μm切片，取5片，或已经制成的5～8μ m切片取5片，经过二甲苯脱蜡后，使用美基公司石蜡包埋DNA提取试剂盒提取基因组DNA，具体步骤按试剂盒操作说明。新鲜病理组织使用Qiagen公司组织DNA提取试剂盒提取基因组DNA，具体步骤按试剂盒操作说明。所提DNA 溶于Tris-HCl(10mmol/L,pH 8.0)，经紫外分光光度计检测提取质量，并确定浓度，用Tris-HCl溶液(10mmol/L,pH 8.0)调整DNA浓度到5ng/μl作为PCR扩增的模板。
2.使用所述引物对待测样本进行超多重PCR富集反应
(1)引物设计
根据子宫内膜癌相关的11个基因MSH2、PMS2、MLH1、MSH6、EPCAM、 POLE、TP53、PTEN、PIK3CA、KRAS和CTNNB1和10个微卫星位点的基因序列，设计多对特异修饰性引物。特异引物的Tm值为55～60℃，一对特异引物的目标扩增片段大小控制在175bp以内。特异引物的设计是保证扩增特异性和均一性的关键，设计时应避免单条引物存在严重的二级结构，引物间的3'端尽可能避免碱基配对。特异修饰性扩增引物5’端区域带上特异性与接头扩增引物相结合的序列。本发明设计的子宫内膜癌分子分型文库构建方法所用引物序列如表1所示。
表1本文库构建方法所用引物序列SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.790
其中，Ill-iXX-P5和Ill-iXX-P7序列中的“NNNNNNN”为index，可根据所用index序列进行替换，并将引物名称修改为相应编号，如ll-i01-P5和 Ill-i01-P7。
(2)多重PCR富集反应
使用设计合成的引物SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.790，配制超多重PCR扩增反应体系，对体系组分的用量进行调整，包括引物的筛选和重新设计，以保证不会有验证的引物二聚体和非特异扩增。本反应体系不仅要考虑到扩增反应的扩增效率，同时要考虑每对引物的扩增的效率和特异性扩增，这样常规的多重 PCR相比难度更大。
其中每人份PCR富集反应条配方如下表2和表3，避免临近引物的相互干扰，所有富集反应分为两个PCR反应管进行。DNA富集反应引物液EC-1包含了表1所列引物清单SEQ IDNO.1～SEQ ID NO.788中序列号为奇数的引物，共计394条。每引物的浓度200μM，每条引物用量0.01μL，单人份所有引物的总体积为2.5μL。DNA富集反应引物液EC-2包含了表1所列引物清单SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.788中序列号为偶数的引物，共计394条。每引物的浓度200 μM，每条引物用量0.01μL，单人份所有引物的总体积为2.5μL。
表2PCR富集反应液EC-1配置
表3PCR富集反应液EC-2配置
然后按照表4设置扩增程序，执行PCR扩增，得到富集产物。
表4富集反应扩增程序
3.富集产物的纯化
(1)将EC-1和EC-2反应管的PCR产物，全部转移至一个新的1.5ml的 EP管中，在往EP管中加入25μL(0.5x样本体积)的AgencourtAMPure XP 试剂，上下吸取吹打5次，完全混匀重悬DNA；
(2)室温孵育5分钟；
(3)放置在磁力架上面，孵育5分钟，一直到溶液澄清；
(4)小心地吸走并弃掉上清，不要扰动磁珠；
(5)加入150μl新鲜配制的70％乙醇，没过磁珠样品即可，离心管正反方向移动5次，然后磁力架上孵育2分钟，去除上清液；
(6)重复上述步骤5，进行第二次洗涤；
(7)确保乙醇液滴已全部从孔中吸走，将板放置于磁力架上，室温空气干燥5分钟，注意不要过度干燥。
(8)将样品管从磁力架上拿开，在每孔中加入25μL TE(PH8.0)缓冲液充分浸润磁珠。充分振荡混匀，快速离心将液体收集到管底。(也可以选择用枪吸取一半以上的液体上下吹打至少5次来混匀)；注意上清液含有富集产物不要丢弃。
(9)将样品管置于磁力架上2分钟。上清液中含有富集产物。取出20μL 上清。
4.接头连接PCR反应获得文库
每人份测序接头连接反应条配方如表5所示。
表5富集反应扩增程序
| 序号 | 物料 | 物料浓度 | 用量(μL) |
| 1 | RingCapbuffer | 10× | 2.5 |
| 2 | MgCl2 | 25mM | 4 |
| 3 | dNTPs | 10μM | 1 |
| 4 | Ill-iXX-P7(SEQ ID NO.790) | 50μM | 0.2 |
| 5 | Ill-iXX-P5(SEQ ID NO.789) | 50μM | 0.2 |
| 6 | H2O | 纯化水 | 11.85 |
| 7 | RingCap-Taq酶 | 5U/ul | 0.25 |
| 8 | 富集PCR纯化产物 | - | 5 |
| 总体积 | 25 |
接头连接反应的扩增程序如表6所示，扩增得到文库。
表6接头连接反应的扩增程序
5.文库的纯化
(1)向每个样品反应管25μL PCR产物中分别加入25μL(1x样本体积)的AgencourtAMPure XP试剂，上下吸取吹打5次，完全混匀重悬DNA；
(2)室温孵育5分钟；
(3)放置在磁力架上面，孵育5分钟，一直到溶液澄清；
(4)小心地吸走并弃掉上清，不要扰动磁珠；
(5)加入150μl新鲜配制的70％乙醇，没过磁珠样品即可，离心管正反方向移动5次，然后磁力架上孵育2分钟，去除上清液；
(6)重复上述步骤5，进行第二次洗涤；
(7)确保乙醇液滴已全部从孔中吸走，将板放置于磁力架上，室温空气干燥 5分钟，注意不要过度干燥。
(8)将样品管从磁力架上拿开，在每孔中加入25μLTE(PH8.0)缓冲液充分浸润磁珠。充分振荡混匀，快速离心将液体收集到管底。(也可以选择用枪吸取一半以上的液体上下吹打至少5次来混匀)；注意：上清液含有扩增文库不要丢弃。
(9)将样品管置于磁力架上2分钟。上清液中含有扩增文库。取出20μL 上清。
(10)将上述通过磁珠纯化的扩增产物，跑毛细管电泳，获得扩增片段主要产物大小300bp左右即可。
文库构建好以后就可以进行检测、分型，具体方法如下：
首先将上述获得的文库结合仪器配套试剂耗材，通过采用Miseq测序仪(illumina公司)操作说明上进行上机测序，选用V2芯片，采用测序读长PE150，一次可以检测20份样品(包括阴阳性对照)，得到目标序列信息，即fastq文件。然后将上述获得的fastq文件经生信分析处理，通过与野生型序列信息进行比对得到基因突变信息，通过计算肿瘤样本在各个微卫星位点的长度分布，同划定的基线比较判断位点的不稳定状态。同时，本文库构建方法通过绘制微卫星位点的长度分布图，可以模拟毛细管电泳检测MSI的结果，用于判读结果的验证。最后根据得到患者的突变信息和微卫星不稳定状态，按照图3所示分型分析流程确定患者的分子分型结果。
所述一种检测基于高通量测序平台检测人类子宫内膜癌相关11个基因 MSH2、PMS2、MLH1、MSH6、EPCAM、POLE、TP53、PTEN、PIK3CA、KRAS 和CTNNB1突变的检测，以及检10个微卫星位点的检测文库构建方法。该方法不包括对待测样品处理和模板提取步骤，但对于来自甲醛固定石蜡包埋的样品的短片段DNA依然具有与新鲜组织样品同样的扩增和检测能力。
本发明的有益效果是：本发明在精心设计和优化的多重特异修饰性引物的基础上，建立了多重扩增PCR文库构建技术同时检测子宫内膜癌相关11个基因和10个微卫星位点。此方法具有以下优势：
(1)实现了一个试剂盒单次检测结果就能完成子宫内膜癌患者的分子分型。相比于目前临床上使用Sanger测序法检测POLE突变，免疫组织化学染色检测MMR、p53蛋白异常的分子分型方法更为简便，且具有更高的检测灵敏度。试剂盒能够同时检测患者的基因突变和微卫星不稳定状态，极大提高了分子诊断效率，具有较高的成本-效益比，而且能够节省有限的样本材料。
(2)对于微卫星不稳定的检测，本试剂盒不仅涵盖了传统PCR-MSI常用的微卫星位点NR-27、NR-24、NR-21、BAT-25、MONO-27和BAT-26等)，还增加了经过筛选验证的可靠微卫星位点。相较于PCR-MSI方法，不仅提高了检测的灵敏度和准确性，还可实现单样本检测。
(3)基于多重PCR扩增子捕获法测序文库构建技术，整个文库构建过程仅需3～5小时。相较于探针杂交捕获法的文库构建技术，实验过程操作简便、成本低廉，更适合于临床应用。
(4)本发明检测基因多，可获得更多的肿瘤突变信息，深入了解子宫内膜癌发病的分子通路，有利于分子靶向药物的应用，更好地预测预后和决定术后补充治疗。还可以满足遗传性子宫内膜癌(Lynch综合征)的筛查。
附图说明
图1为实施例4中超多重PCR优化前后核酸文库片段大小数据图；
图2为实施例4中NR-21微卫星不稳定位点检测模拟毛细管电泳可视化结果；
图3为实施例4中NR-24微卫星不稳定检测模拟毛细管电泳可视化结果；
图4为实施例4中NR-27微卫星不稳定检测模拟毛细管电泳可视化结果；
图5为实施例4中的子宫内膜癌分型流程；
图6为实施例4中采用本发明文库构建方法的子宫内膜癌分子分型检测结果报告；
图7为实施例4中采用本发明试剂盒检测分型结果的统计图。
具体实施方式
以下实施例中使用的MgCl2，dNTP购自中国大连宝生物公司。RingCap buffer和RingCap-Taq酶由厦门飞朔生物技术有限公司自行生产。
实施例1
本实施例选取4例(经数字PCR定量)检测范围内阳性临床样本(POLE 和TP53基因变异阳性，含有点突变和插入缺失突变)，用基因变异阴性的临床样本配制4级突变频率梯度共16份样本，每个样本用TE(pH8.0)稀释成10ng/ μL、5ng/μL和2ng/μL。在使用本文库构建方法对每个样本进行5次重复检测，以评估对突变的检测下限和所需样本的最低浓度。
对这16份样本进行检测，分析统计突变位点的检出情况，结果如表7所示。
表7本文库构建方法突变检测能力分析
结果显示，本文库构建方法最低能稳定检出5ng/μL样本中2％突变比例。说明本文库构建方法，所需对于样本的DNA浓度要求较低，同时能够稳定检测 2％的低频突变。这对于分子分型关键基因POLE突变的检测具有重要意义。
实施例2
本实施例使用2份MSI-H阳性子宫内膜癌细胞系(IGROV-1和MFE-296) DNA，用TE(pH8.0)稀释至5ng/μL，再使用MSS细胞系293T的DNA连续稀释配制得到4级梯度共8份样本(MSI-H阳性细胞系DNA含量为20％、10％、 5％和2％)。在使用本文库构建方法对每个样本进行5次重复检测，以评估微卫星不稳定所需最低的肿瘤DNA含量。
对这8份样本进行检测，分析统计微卫星不稳定的检出情况，结果如表8 所示。
表8本文库构建方法对微卫星不稳定灵敏度分析
结果显示，当MSI-H阳性细胞系DNA含量为20％、10％和5％时均能正确检出相应的微卫星不稳定性(MSI)状态；当肿瘤含量为2％存在漏检现象。说明本文库构建方法对于微卫星不稳定有较高的检测灵敏度，最低能够检出限为5 ng/μL样本中肿瘤含量为5％的微卫星不稳定状态。
实施例3
本实施例通过检测96例临床样本进行考察本发明专利子宫内膜癌分子分析文库构建方法与传统改良分子分型结果的一致性。收集临床样本96例，所有样本均有POLE基因核酸外切酶结构域Sanger测序法结果，以及4个MMR蛋白 (MLH1，MSH2，MSH6，PMS2)和p53的免疫组化结果。根据POLE突变检测结果和免疫组化结果，按照NCCN指南推荐的分型流程，分为POLE突变型 (POLE)，高度微卫星不稳定型(MSI-H)，低拷贝型(CN-L)及高拷贝型(CN-H)四种分子亚型，结果如表9所示。
表9 96例子宫内膜癌临床样本信息
实施例4利用本发明的文库构建方法对96例临床样本进行检测和数据分型并统计结果
1.待测样品的处理和模板的提取
将蜡块样品切成5～8μm切片，取5片，经过二甲苯脱蜡后，使用美基公司石蜡包埋DNA提取试剂盒提取基因组DNA，具体步骤按试剂盒操作说明。所提DNA溶于Tris-HCl(10mmol/L,pH 8.0)，经紫外分光光度计检测提取质量，并确定浓度，用Tris-HCl溶液(10mmol/L,pH 8.0)调整DNA浓度到5ng/μl作为PCR扩增的模板。
2.使用所述引物对待测样本进行超多重PCR富集反应
(1)引物设计：根据子宫内膜癌相关的11个基因MSH2、PMS2、MLH1、 MSH6、EPCAM、POLE、TP53、PTEN、PIK3CA、KRAS和CTNNB1和10个微卫星位点的基因序列设计引物，引物序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.788所示。并设计了多对接头扩增引物，用于多重PCR富集产物二次扩增和连接测序接头序列，引物序列如SEQ ID NO.789～SEQ ID NO.790所示。
(2)多重PCR富集反应：使用设计合成的引物配制超多重PCR扩增连接基因序列的反应体系，对体系组分的用量进行调整。
其中每人份PCR富集反应条配方如表2和表3，避免临近引物的相互干扰，所有富集反应分为两个PCR反应管进行。DNA富集反应引物液EC-1包含了表 1所列引物清单中所有序列号为奇数的引物，共计394条。每引物的浓度200μ M，每条引物用量为0.01μL，单人份所有引物的总体积为3.94μL。DNA富集反应引物液EC-2包含了表1所列引物清单中所有序列号为偶数的引物，共计394 条。每引物的浓度200μM，每条引物用量为0.01μL，单人份所有引物的总体积为3.94μL。然后按照表4设置扩增程序，执行PCR扩增，得到富集产物。
3.富集产物的纯化
(1)将EC-1和EC-2反应管的PCR产物，全部转移至一个新的1.5ml的 EP管中，在往EP管中加入25μL(0.5x样本体积)的AgencourtAMPure XP 试剂，上下吸取吹打5次，完全混匀重悬DNA；
(2)室温孵育5分钟；
(3)放置在磁力架上面，孵育5分钟，一直到溶液澄清；
(4)小心地吸走并弃掉上清，不要扰动磁珠；
(5)加入150μl新鲜配制的70％乙醇，没过磁珠样品即可，离心管正反方向移动5次，然后磁力架上孵育2分钟，去除上清液；
(6)重复上述步骤5，进行第二次洗涤；
(7)确保乙醇液滴已全部从孔中吸走，将板放置于磁力架上，室温空气干燥5分钟，注意不要过度干燥。
(8)将样品管从磁力架上拿开，在每孔中加入25μL TE(PH8.0)缓冲液充分浸润磁珠。充分振荡混匀，快速离心将液体收集到管底。(也可以选择用枪吸取一半以上的液体上下吹打至少5次来混匀)；注意上清液含有富集产物不要丢弃。
(9)将样品管置于磁力架上2分钟。上清液中含有富集产物。取出20μL 上清。
4.接头连接PCR反应获得文库
每人份测序接头连接反应条配方如表5所示。接头连接反应的扩增程序如表6所示，扩增得到文库。
5.文库的纯化
(1)向每个样品反应管25μLPCR产物中分别加入25μL(1x样本体积)的AgencourtAMPure XP试剂，上下吸取吹打5次，完全混匀重悬DNA；
(2)室温孵育5分钟；
(3)放置在磁力架上面，孵育5分钟，一直到溶液澄清；
(4)小心地吸走并弃掉上清，不要扰动磁珠；
(5)加入150μl新鲜配制的70％乙醇，没过磁珠样品即可，离心管正反方向移动5次，然后磁力架上孵育2分钟，去除上清液；
(6)重复上述步骤5，进行第二次洗涤；
(7)确保乙醇液滴已全部从孔中吸走，将板放置于磁力架上，室温空气干燥 5分钟，注意不要过度干燥。
(8)将样品管从磁力架上拿开，在每孔中加入25μLTE(PH8.0)缓冲液充分浸润磁珠。充分振荡混匀，快速离心将液体收集到管底。(也可以选择用枪吸取一半以上的液体上下吹打至少5次来混匀)；注意：上清液含有扩增文库不要丢弃。
(9)将样品管置于磁力架上2分钟。上清液中含有扩增文库。取出20μL 上清。
(10)将上述通过磁珠纯化的扩增产物，跑毛细管电泳，获得扩增片段主要产物大小300bp左右即可。其中超多重PCR优化前后核酸文库片段大小数据如图1所示，微卫星不稳定检测模拟毛细管电泳可视化结果如图2～图4所示。
然后将上述构建好的文库进行检测，按照图5所示分型分析流程确定患者的分子分型结果，检测结果如图6所示。
由图1可以看出：不采用本发明的方法PCR反应体系存在明显的引物二聚体峰(约160bp片段)，而采用本发明方法之后的PCR反应体系，不存在引物二聚体峰，而是明显的目的峰(约300bp片段)。
由图2～图4可以看出：本发明方法检测NR-21、NR-24和NR-27位点微卫星不稳定的结果图可以很好地模拟毛细管电泳结果，能明显看出发生偏移的五指峰型。
由图6可以看出：本检测方案结果输出样例，输出结果包含：测序数据QC，突变检测结果和MSI检测结果三个模块。
利用本发明的文库构建方法对96例临床样本进行检测和数据分型并统计结果如图7和表10所示。
图7显示：四种亚型的占比分布既往文献报道的比例一致。CN-L和MSI-H 占比较高，而CN-H和POLE占比较低。其中，CN-L的占比为50％，在四种亚型中占比最高。
表10本发明文库构建方法检测96例样本结果
实施例5
POLE突变检测一致性分析
对表10中利用本文库构建方法检测的POLE突变一致性进行统计，检测不一致的样本采用基于探针杂交捕获靶向测序法的基因panel进行验证，结果如表 11所示。
表11 POLE基因突变检测一致性统计
结果显示：Sanger测序的检测结果与本发明的测序结果相比，有两例POLE 的低频突变没有检出。同时采用基于探针杂交捕获靶向测序法的基因panel对该两例POLE的低频突变进行验证，验证结果与本方法检测结果一致。即本发明的文库构建方法相较于Sanger测序法多检出两例POLE突变，本发明文库的构建方法对于突变检测具有更高的灵敏度。基于POLE突变是分子分型的关键基因，是各分型流程首要的判断要素，所以本发明对POLE基因突变更灵敏的检测结果可以提高子宫内膜癌分子分型的准确性。
实施例6
TP53突变检测一致性分析
对表10中利用本文库构建方法检测的TP53突变和p53免疫组化情况进行统计，统计结果如表12所示。检测不一致的样本采用基于探针杂交捕获靶向测序法的基因panel进行验证，验证结果如表13所示。
表12 TP53突变和p53免疫组化结果一致性评价表
表13 TP53突变检测结果不一致结果汇总
表12的结果显示：两种方法检测的符合率为90.63％。同时，相较于p53 免疫组化，采用本发明高通量测序的TP53突变检测多检出9份阳性突变。表13 的验证结果显示：验证结果与本方法检测结果一致。也就是说，在实际中，一些TP53点突变可导致p53免疫组化呈正常野生型表达、但该蛋白却并无功能，如果仅使用p53免疫组化代替TP53突变检测，可能会遗漏一部分比例TP53突变，漏检高拷贝型，而本发明的检测方法检测的TP53突变更多，结果更准确。
实施例7
微卫星不稳定检测的一致性分析
对表10中利用本文库构建方法检测的96例样本的微卫星不稳定检测结果进行统计分析，结果如表14所示。不一致样本采用“金标准”毛细管电泳进行验证，验证结果如表15所示。
表14微卫星不稳定检测一致性分析
表15微卫星不稳定检测结果不一致结果汇总
| 样本号 | 本方法MSI检测结果 | MMR免疫组化检测结果 | 验证试剂检测结果 |
| EC-2007 | MSI-H | pMMR | MSI-H |
| EC-2419 | MSI-H | pMMR | MSI-H |
| EC-2106 | MSS | dMMR | MSS |
| EC-2123 | MSS | dMMR | MSS |
| EC-2301 | MSS | dMMR | MSS |
| EC-2322 | MSS | dMMR | MSS |
表14的结果显示：本发明试剂盒微卫星不稳定检测的结果和MMR免疫组化的结果一致性为93.75％，与文献报道的比例一致，侧面验证了本试剂盒检测微卫星不稳定的准确性，也说明了微卫星不稳定检测和MMR免疫组化检测的互补作用。同时表15对不一样样本的验证结果显示：验证结果与本发明检测结果一致。说明本发明试剂盒检测微卫星不稳定的准确性更高。
实施例8
统计表9和表10中96例临床样本基于传统的改良分子分型和基于本试剂盒高通量测序分子分型的结果，结果如表16所示。
表16分型不一致样本分析
结果显示：88例样本的分型结果一致，9例样本的分型结果不一致，两种方法分型的一致率达90.6％。
实施例9
对表16中9例样本分型不一致的原因进行分析，并根据分析结果推荐最终的分型。
分析：9例不一致样本中，EC-2304和EC-2513该样本为POLE基因低频突变，Sanger测序法检测灵敏度问题未检出，推荐分型结果为POLE型；EC-2322 和EC-2419两种分型方法由于MSI和MMR组化结果本身存在一定比例的不一致，导致分型结果有差异，按照NCCN指南推荐流程，推荐分型结果为MSI-H 型；其余5例样本由于免疫组化未检测到p53突变，且未检测到POLE基因突变和MSI-H，根据90％以上高拷贝亚型存在TP53突变这一特征，推荐分型结果为CN-H型。根据先分别对POLE突变，TP53突变和微卫星不稳定检测不一致结果分析，再综合分析分型结果不一致原因可以看出，与传统的改良分子分型相比，本试剂盒检测的分型结果准确性更高。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
序列表
<110> 复旦大学附属妇产科医院
厦门飞朔生物技术有限公司
<120> 一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法
<130> 2021.12.13
<141> 2022-02-11
<160> 790
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 1
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaagggt gaaatattct ccatcca 57
<210> 2
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 2
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcattttg agtgttagac tggaaact 58
<210> 3
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 3
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcgacgag tttatcagga agtaaca 57
<210> 4
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 4
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggctaag ctatgatgtt ccttagatta 60
<210> 5
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 5
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcctgggc atccttgagt tc 52
<210> 6
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 6
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaaggca ggatgagaat ggaa 54
<210> 7
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 7
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacccttt ttggacttca ggtg 54
<210> 8
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 8
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgggaaca agaagtggag aatgtc 56
<210> 9
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 9
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctgccct tccaatggat cc 52
<210> 10
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 10
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccaacc cttgtcctta cca 53
<210> 11
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 11
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacagcat caaatcatcc attgct 56
<210> 12
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 12
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggccgcc ggtgtaggag 50
<210> 13
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 13
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgtccca gaatgcaaga agc 53
<210> 14
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 14
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcaagcaa gggttcaaag acc 53
<210> 15
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 15
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaagagg aatcccaaag ttcca 55
<210> 16
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 16
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcagttgg caaaacatct tgttga 56
<210> 17
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 17
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcacaacc tccgtcatgt gc 52
<210> 18
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 18
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcagacct aagagcaatc agtgag 56
<210> 19
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 19
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgtttct gtcatccaaa tactccac 58
<210> 20
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 20
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacaacca cccttaaccc ct 52
<210> 21
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 21
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctcctga cctggagtct tcc 53
<210> 22
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 22
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgagaggt ggatgggtag tagtat 56
<210> 23
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 23
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttttcttg cggagattct cttcc 55
<210> 24
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 24
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaggcat aactgcaccc ttg 53
<210> 25
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 25
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaaatgtt agctcatttt tgttaatggt 60
g 61
<210> 26
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 26
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctactcaga tatttatcca aacattattg 60
ctat 64
<210> 27
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 27
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttagttt gattgctgca tatttcagat 60
<210> 28
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 28
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcatctct ctcctccttt ttcttca 57
<210> 29
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 29
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttacccgg ctgcggtcca g 51
<210> 30
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 30
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcagccg ttcggaggat 50
<210> 31
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 31
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggcggct ggcacatcca 50
<210> 32
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 32
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagggggt ctgagtcgcc 50
<210> 33
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 33
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgatattc tgacaccact gactctg 57
<210> 34
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 34
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgagtca tatttgtggg ttttcatttt 60
aa 62
<210> 35
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 35
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttaaatag tttaagatga gtcatatttg 60
tggg 64
<210> 36
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 36
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcgtgca gataatgaca aggaa 55
<210> 37
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 37
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttacattc ttcataccag gaccaga 57
<210> 38
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 38
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaatgttt aacataggtg acagattttc 60
tt 62
<210> 39
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 39
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttacctgt gtgtggtgat atcaaag 57
<210> 40
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 40
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggaagcc gtgggctcgg 50
<210> 41
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 41
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgccagc taaaggtgaa gatatatt 58
<210> 42
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 42
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgacagt ttgacagtta aaggca 56
<210> 43
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 43
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggaactt gcagtaagtg cttga 55
<210> 44
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 44
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtcagag gcgctatgtg tattattat 59
<210> 45
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 45
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcgaccca gttaccatag caatt 55
<210> 46
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 46
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagggacg aactggtgta atgat 55
<210> 47
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 47
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccaccac agctagaact tatca 55
<210> 48
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 48
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcaacat ttctaaagtt acctacttgt 60
taa 63
<210> 49
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 49
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttttagt tgtgctgaaa gacattatga 60
<210> 50
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 50
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgtgtca cattataaag attcaggca 59
<210> 51
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 51
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaaggaa gagtctttac acaggtc 57
<210> 52
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 52
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgcaatt ctgatctgac ggaat 55
<210> 53
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 53
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgttactc atagagaaga cacagactc 59
<210> 54
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 54
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgccacct cctaagtcga cat 53
<210> 55
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 55
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctacctg aggcagtcca tgt 53
<210> 56
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 56
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcctccc atgagatgtg gtg 53
<210> 57
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 57
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctgctcc gtggccatcc 50
<210> 58
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 58
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggatgtg gctcacatgc c 51
<210> 59
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 59
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttggtgca cagagcaaag atg 53
<210> 60
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 60
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttcagct ccagtgcatt tgg 53
<210> 61
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 61
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgggaaga tgatgttggc gtg 53
<210> 62
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 62
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagaagcc ctcaagacac cg 52
<210> 63
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 63
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgacgtag gtctcagagt ccag 54
<210> 64
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 64
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcctacca cagcacaaga gtg 53
<210> 65
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 65
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtcaaag gcggcaggat t 51
<210> 66
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 66
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccctgat ggttacctct tcaaag 56
<210> 67
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 67
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcacaata aacgtgctgc tgaaa 55
<210> 68
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 68
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgatgagt ggacactcga tgc 53
<210> 69
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 69
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctactctga cacgggaagt aaagt 55
<210> 70
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 70
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcagtttg ctccaggctt attg 54
<210> 71
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 71
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcactcac ccacccgttt c 51
<210> 72
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 72
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttcctcg cgggacagtt 50
<210> 73
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 73
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcgatgg cagaggagtc g 51
<210> 74
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 74
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcaggag ccacatcttt acag 54
<210> 75
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 75
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccttggt gatgtggatc ttcttg 56
<210> 76
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 76
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggagccc tttgaactcg taac 54
<210> 77
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 77
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccacttc atgagccgac tga 53
<210> 78
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 78
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcataca gcacctccat gttct 55
<210> 79
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 79
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttacccct tgcgcatgac at 52
<210> 80
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 80
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccctcca acattccttg aatca 55
<210> 81
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 81
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacggctc cccttctgca 50
<210> 82
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 82
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttcctg cccatgcttg c 51
<210> 83
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 83
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcctgggt aggagatggt ca 52
<210> 84
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 84
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcacgact caccaggtcc t 51
<210> 85
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 85
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtgacat cagggcactg ac 52
<210> 86
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 86
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggctgga agaatcatgg ca 52
<210> 87
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 87
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcctcctt tctgggctaa atttaatc 58
<210> 88
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 88
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccgcgg cgtttgacct 50
<210> 89
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 89
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccataca cctcttccag cg 52
<210> 90
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 90
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcatcctt catccctcag agca 54
<210> 91
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 91
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgttggct gcctagagaa agac 54
<210> 92
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 92
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttagactt ctgctccccg taatc 55
<210> 93
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 93
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgatgtag cggcaactca gc 52
<210> 94
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 94
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgagccct cacctgtccg 50
<210> 95
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 95
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagggcat ggactggtct g 51
<210> 96
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 96
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcactca ctgctcgaat atcaa 55
<210> 97
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 97
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttctgctc tgtctagctt tcctt 55
<210> 98
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 98
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgggatgg tgatgatctt ctgga 55
<210> 99
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 99
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcatcaga gagagaccct tgtctaa 57
<210> 100
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 100
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtgaaga gctcactgat cttctt 56
<210> 101
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 101
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaacagaa gcttcactac agcac 55
<210> 102
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 102
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgctctcc caaagaactc gct 53
<210> 103
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 103
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgcagac ccctcagaga c 51
<210> 104
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 104
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttctgccg actccagacg 50
<210> 105
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 105
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccacgga aggtccagga 50
<210> 106
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 106
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtgaggg cgaagtctcc c 51
<210> 107
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 107
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctcccat cccagacctc ag 52
<210> 108
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 108
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgctggtc tcgctgatct ga 52
<210> 109
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 109
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcaccct cctccgcttt ag 52
<210> 110
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 110
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctagatc atgggaaagc cacc 54
<210> 111
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 111
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagctcag cgttgatctc gt 52
<210> 112
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 112
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcgggtt tctttcctcc at 52
<210> 113
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 113
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttccca gcctgaaagg tg 52
<210> 114
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 114
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttccaggt agctgaactg gg 52
<210> 115
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 115
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcgtggt ggtacaggta gatat 55
<210> 116
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 116
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgtccag cacaaagacg ga 52
<210> 117
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 117
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaccccag tccactcaga ga 52
<210> 118
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 118
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccttga ggacaagacc tg 52
<210> 119
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 119
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcgtgctc tgctgagtac ag 52
<210> 120
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 120
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggcgagc aggaatcgct 50
<210> 121
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 121
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaaaatgg aagaaaagac ctgggt 56
<210> 122
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 122
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcaccag tgggaattcc tc 52
<210> 123
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 123
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggttgag gtagtgacgg atca 54
<210> 124
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 124
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcacaacg acagtactgt gctc 54
<210> 125
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 125
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagatgtc ctctggtagg ttcc 54
<210> 126
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 126
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtcatca gcctcctttc cac 53
<210> 127
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 127
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgatctca acagtggctt ggt 53
<210> 128
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 128
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcagggtc tccaggaggt ac 52
<210> 129
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 129
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggcacta ttgccttgag aaga 54
<210> 130
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 130
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcatgtcg ttgacatggt gaga 54
<210> 131
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 131
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcctgacc acccgtgatc a 51
<210> 132
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 132
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggcaaag gataagaccc ttct 54
<210> 133
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 133
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttgtctg catagatgtt gtggt 55
<210> 134
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 134
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgagcttc ttcatcatgt tgtgga 56
<210> 135
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 135
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttacacta cttatcccag aggcac 56
<210> 136
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 136
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgtacag aggatgatgc ggt 53
<210> 137
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 137
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcatttta gcatccctct caaagc 56
<210> 138
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 138
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcctttga ttccgccata gttagat 57
<210> 139
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 139
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttggtctg gtcactggaa gc 52
<210> 140
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 140
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctgcagg aatgaacgcg a 51
<210> 141
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 141
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctatcctcc acgttggatt cct 53
<210> 142
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 142
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcctgtg gcaaaaactg c 51
<210> 143
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 143
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccttct tgcgatacca tgg 53
<210> 144
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 144
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagcccgt ccttcatgca 50
<210> 145
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 145
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgttaggt cactggcaca tgg 53
<210> 146
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 146
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgagtgag ctcatttgcg aca 53
<210> 147
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 147
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttattgag cagcaagtgg gaac 54
<210> 148
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 148
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccatggc accctccgga 50
<210> 149
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 149
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttacacat gtacgttagt gtcctct 57
<210> 150
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 150
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaccaaac cgcaaatcca tcttat 56
<210> 151
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 151
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaaggac ctagtgctta cagga 55
<210> 152
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 152
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttcaca tctcccacct gattc 55
<210> 153
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 153
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccataa aagtgggttt tagcttg 57
<210> 154
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 154
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcagagct acatgaacac ccat 54
<210> 155
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 155
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcagaatg acacacaggt cgtc 54
<210> 156
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 156
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaagatga aacttctcgc tcacaa 56
<210> 157
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 157
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttagactc tggcctcatt taccc 55
<210> 158
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 158
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggaagga cagcctgatg taattt 56
<210> 159
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 159
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacaagac caaagtttac ctggaaa 57
<210> 160
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 160
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgagaact cgccgacatc c 51
<210> 161
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 161
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtgttcc tgtctcctat ccatc 55
<210> 162
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 162
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaacatcg tactcgcgca tg 52
<210> 163
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 163
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctcctgg ctgttaggaa attca 55
<210> 164
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 164
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcaagcaa aacttacagg tcgttc 56
<210> 165
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 165
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcactga agaatattct ctccagaaa 59
<210> 166
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 166
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagtttgg tcgtctcaat gtcaaat 57
<210> 167
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 167
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggccatc gatcatgtag gaaa 54
<210> 168
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 168
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttggacta actcattatt cactcaacaa 60
<210> 169
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 169
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctgaaac aatctccctg ttggt 55
<210> 170
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 170
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcccaag tgatacctcc ttacc 55
<210> 171
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 171
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggagctg gccgcatact 50
<210> 172
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 172
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagttggc tgaggcaaaa ctc 53
<210> 173
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 173
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcatcaac ctgagaggct gac 53
<210> 174
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 174
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccttca ctttgctgtg ctt 53
<210> 175
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 175
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttatct cttttcttag ttcatcttcg 60
g 61
<210> 176
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 176
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctataaatc ccaggttaaa ctgaccaa 58
<210> 177
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 177
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctatacaag gtcttgctgt gttgt 55
<210> 178
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 178
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgccgtg ggtctcaaag a 51
<210> 179
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 179
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgcttag actcagtacc acctg 55
<210> 180
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 180
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctatttcaa taacaaatgt ttcttaacta 60
caaca 65
<210> 181
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 181
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctattagaa aaagtcaact tacttaagcc 60
tt 62
<210> 182
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 182
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgcattt cccaagacag tgtt 54
<210> 183
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 183
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttgagag tctgaggtct gaaaaac 57
<210> 184
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 184
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacctcag tgcacaaagt gag 53
<210> 185
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 185
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttgagat gttgagatag aaaactgaaa 60
ataa 64
<210> 186
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 186
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgttttct ggataatttt cccattgtg 59
<210> 187
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 187
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttccttat ggcgcacagg t 51
<210> 188
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 188
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcggatgc ctgctgaaat ga 52
<210> 189
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 189
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcacagag ccgatatttt cctttatg 58
<210> 190
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 190
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaatggaa acccgctata atcactag 58
<210> 191
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 191
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcttgcc agcaatctac ttactaaa 58
<210> 192
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 192
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcgaaact attagcctta gaatcactat 60
c 61
<210> 193
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 193
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctactgtct gtctgttgaa ctcct 55
<210> 194
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 194
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttttaa atgggtgtga tgtgtatttt 60
tt 62
<210> 195
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 195
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcaaagg cataaagaac aaactaacac 60
<210> 196
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 196
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcacaaaa taagataatg ttaaagccat 60
gttt 64
<210> 197
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 197
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctggtgt cgattataca tgtggt 56
<210> 198
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 198
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgttatct cattccagtc atagcaga 58
<210> 199
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 199
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcctcttg tagcaaaatt tgccttt 57
<210> 200
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 200
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcttgtt gacatcacta tcaaacat 58
<210> 201
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 201
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacacatt agctaaaagc tttagaagc 59
<210> 202
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 202
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaaggcct ctcgcagtct g 51
<210> 203
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 203
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccccttt tctgtcctag aggg 54
<210> 204
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 204
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtagggt cactgggtcc g 51
<210> 205
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 205
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccggcc cttattgttt ataaatac 58
<210> 206
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 206
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggcatat atatatttta agatagagat 60
ggggt 65
<210> 207
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 207
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaaaggga aatcagtccg tgttc 55
<210> 208
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 208
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggagatt tggtttgggc caag 54
<210> 209
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 209
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgccttt aaggaaactt gaccaaa 57
<210> 210
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 210
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgctagtg aaaggtcaac tgtagat 57
<210> 211
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 211
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggaaggg atgatgcact atgaaa 56
<210> 212
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 212
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgctaatc tcccagagga agttattc 58
<210> 213
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 213
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctgctgc ccccaccagg 50
<210> 214
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 214
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaggcatg catggtagaa aatgaa 56
<210> 215
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 215
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcgccta ggacatatgg tatgt 55
<210> 216
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 216
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcgtacat tattttcaac tcactaccat 60
t 61
<210> 217
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 217
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctttaac aggaagaggt actgcaa 57
<210> 218
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 218
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgttgctt ttctgtccta gcattt 56
<210> 219
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 219
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagcatac tcatgcatgc aaca 54
<210> 220
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 220
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtgtagc tcatgatagc tatataacct 60
<210> 221
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 221
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccagat gggttgttac gtc 53
<210> 222
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 222
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccagat gggttgttac gtc 53
<210> 223
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 223
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaaaatg gcaaagccta ttgtgt 56
<210> 224
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 224
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggatgcg gcctggagcg 50
<210> 225
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 225
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccatcct tgcattacga agactt 56
<210> 226
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 226
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgcctgg ctaactatag tcga 54
<210> 227
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 227
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacttagg ctgataaaac cccca 55
<210> 228
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 228
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctataaatg ctgaagaacg gaggg 55
<210> 229
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 229
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgagaatt tcaccactcg caattt 56
<210> 230
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 230
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcttgct gacataagag aaaatgaac 59
<210> 231
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 231
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtcgttt tcctgatttg actgtag 57
<210> 232
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 232
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgctctgg aaggattcaa agtaatgt 58
<210> 233
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 233
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctcagta aaattcataa tgttgggtct 60
<210> 234
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 234
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctagatg ccatagaaga cctcatg 57
<210> 235
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 235
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccccaag tctccggcgc 50
<210> 236
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 236
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaggaacc ctactagaga gggt 54
<210> 237
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 237
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgatctgg tgctatcttc accaa 55
<210> 238
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 238
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgctctag gtggttgtgt cttcta 56
<210> 239
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 239
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccaggt gcttaaaggt atga 54
<210> 240
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 240
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttctcttc aggaaggtct gatacc 56
<210> 241
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 241
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcactatc ccccagtaca agttttatt 59
<210> 242
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 242
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtgtgct ttgttgatac ttcactg 57
<210> 243
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 243
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgatccc tctgagaact acagtaag 58
<210> 244
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 244
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcaagtat gatagagtgg tgaggag 57
<210> 245
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 245
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttattca gattccctgg tgcag 55
<210> 246
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 246
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagccgcg cggtagatgc 50
<210> 247
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 247
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgggaaat tttatgagct gtaccaca 58
<210> 248
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 248
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcctgag gatttcctca attct 55
<210> 249
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 249
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctactttag aatggcttaa ggaggaaaa 59
<210> 250
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 250
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccctca aaattctgaa tccca 55
<210> 251
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 251
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctctctt aaaaggaaaa gctctaggaa 60
<210> 252
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 252
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctatgaaat aagcagtgga gtggg 55
<210> 253
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 253
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaagggt catatcagat tctgagag 58
<210> 254
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 254
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttggcagg taggcacaac t 51
<210> 255
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 255
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcacgggt accattataa agtcaaaaa 59
<210> 256
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 256
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcctgaaa tactgagagc aatgcaa 57
<210> 257
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 257
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaataaaa gttactacgt gaaaaatccc 60
a 61
<210> 258
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 258
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctttact gaaatgtcag aagaaaacat 60
c 61
<210> 259
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 259
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggacatt cacatgtgtt tcagc 55
<210> 260
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 260
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttggaaat gaaacaattt gtcactgt 58
<210> 261
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 261
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttggaact tgaggagttt cagtatattg 60
<210> 262
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 262
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttcccc aaatttctta taggtgtct 59
<210> 263
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 263
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttttacat aaattgctgt ctcttctcat 60
g 61
<210> 264
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 264
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttggcc aatcagatac caact 55
<210> 265
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 265
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctatgggct atatcagaat acattgca 58
<210> 266
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 266
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaattatg tgcttcaggt ctgca 55
<210> 267
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 267
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcatatcc ttcccaatgt attgtcttaa 60
<210> 268
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 268
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcatctt agcccgagta ggg 53
<210> 269
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 269
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccccaat atgggaggta aatca 55
<210> 270
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 270
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacctacg cgattaatca tcagtg 56
<210> 271
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 271
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgcattt attcctaatg acgtatactt 60
tg 62
<210> 272
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 272
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttggagca cctgttccat atgta 55
<210> 273
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 273
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttatacag gctatgtaga accaatgc 58
<210> 274
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 274
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggaaatg ggttttgaat tcccaaa 57
<210> 275
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 275
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcagcaaa ttgacttctt taaatgaaga 60
<210> 276
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 276
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttactttg gatatgtttc acgtagtaca 60
<210> 277
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 277
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcagtttg gatattactt tcgtgtaacc 60
<210> 278
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 278
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaattaca ttgaaaaatg gtagtaggta 60
tttatg 66
<210> 279
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 279
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagtcaac attaataagt gcagcca 57
<210> 280
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 280
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgattttg tcactttgtt ctgtttgc 58
<210> 281
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 281
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaaaaca gtaaaattta agtgggagga 60
a 61
<210> 282
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 282
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaaattat tgttggcagt ttttgtgac 59
<210> 283
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 283
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccttttg gatcaaatga tgcttgtt 58
<210> 284
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 284
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttgcca agaagtttca aagacaa 57
<210> 285
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 285
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagattga atttagtgga agcttttgta 60
g 61
<210> 286
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 286
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaagcttt ttaaatggaa ttttgagctg 60
<210> 287
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 287
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgctgcct tgctgaataa gtgta 55
<210> 288
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 288
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttcacta atgagcttgc cattct 56
<210> 289
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 289
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttaggttg cagtttcatc actgtc 56
<210> 290
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 290
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctggatc cagtggtata gaaatctt 58
<210> 291
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 291
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggagagc agatgaatag tgctg 55
<210> 292
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 292
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcaaaga ggaggaattc tgatcac 57
<210> 293
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 293
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcattttt gcttttctta ttccttttct 60
cata 64
<210> 294
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 294
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctatcagtt ctccaatctt gaggc 55
<210> 295
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 295
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgggtgtt aaaatgtccg cagtt 55
<210> 296
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 296
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaggcttc tcctggcaat ct 52
<210> 297
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 297
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttttggat ttttcctttt tgcttataaa 60
atttta 66
<210> 298
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 298
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgagctgg aaataaggca tcca 54
<210> 299
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 299
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttttttaa ggagcaaaga atctgcag 58
<210> 300
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 300
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtgcttg aacatgtaat atctcaaatc 60
t 61
<210> 301
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 301
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccgggag gtgttcaaga c 51
<210> 302
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 302
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgccgagg tcggcttcgt 50
<210> 303
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 303
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagcttag tgggtgtggg g 51
<210> 304
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 304
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttctcttt tccccttggg attagtat 58
<210> 305
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 305
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtctatt ttcttttctt ccttaggctt 60
t 61
<210> 306
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 306
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgataacc tttccctttg gtgagg 56
<210> 307
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 307
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggttcac tactagtaaa ctgcagt 57
<210> 308
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 308
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaaaatgg gaattcaaag agatttggaa 60
<210> 309
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 309
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttttgatt tgccagttta gatgcaa 57
<210> 310
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 310
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggaaata tcctgcagct tgctaa 56
<210> 311
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 311
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcatctaa tgtgttttcc agagtgaag 59
<210> 312
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 312
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagcccta gataacacca agtctt 56
<210> 313
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 313
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcgttaat gaggcactat tgtttgtat 59
<210> 314
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 314
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaggtgaa ttgggacgaa gaaaag 56
<210> 315
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 315
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttctgtga tctccgttta gaatgag 57
<210> 316
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 316
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggaacct gattggatta cccc 54
<210> 317
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 317
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcactgg agaaatggga tttgtt 56
<210> 318
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 318
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcccaaag aaggacttgc tgaa 54
<210> 319
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 319
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgctccgt taaagcttgc tcc 53
<210> 320
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 320
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcaagcat gaattcagct tttcctta 58
<210> 321
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 321
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttttgcag ttctccggga ga 52
<210> 322
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 322
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggttggt aggattctat tacttacctg 60
<210> 323
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 323
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagatgat tcccgaaagg aaatgac 57
<210> 324
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 324
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcgccaaa atgtcgttcg tg 52
<210> 325
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 325
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcacttc cttttcttca ttgca 55
<210> 326
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 326
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcattcac agctctgtag aaccag 56
<210> 327
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 327
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacttcag aaatgtcaga gaagagag 58
<210> 328
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 328
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcaagat gaggagatgc ttgaa 55
<210> 329
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 329
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaggccat tgtcacagag gata 54
<210> 330
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 330
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttacttct ggaagtagtg ataaggtcta 60
t 61
<210> 331
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 331
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttacagac tttgctacca ggact 55
<210> 332
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 332
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcctcca ggatgtactt cacc 54
<210> 333
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 333
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagtcccc agaatgtgga tgtt 54
<210> 334
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 334
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcatacac catatgtggg ctttttc 57
<210> 335
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 335
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcacttcc gttgagcatc tagac 55
<210> 336
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 336
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtctggt agaatcaact tccttgag 58
<210> 337
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 337
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtctttc ctgaggtgat ttcatga 57
<210> 338
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 338
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggatgtg aggataaaac cctagc 56
<210> 339
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 339
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggaagga accttgtgtt tttaaattct 60
<210> 340
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 340
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcaaccgt ggacaatatt cgct 54
<210> 341
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 341
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgatgttt cagtctcagc catga 55
<210> 342
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 342
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttagtgtg tgtttttggc aactct 56
<210> 343
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 343
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcttctg ttcaggtgga ggac 54
<210> 344
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 344
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttagaa ctgtgctgtt ggtaaat 57
<210> 345
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 345
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaaaccat gtgctggcaa tca 53
<210> 346
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 346
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaaaata gtatggaaga ctgagttata 60
gtc 63
<210> 347
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 347
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaacaga caaggacact gaaataac 58
<210> 348
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 348
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctccaga acaatgatgg gcttta 56
<210> 349
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 349
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcagttt ggcattaagg tttcttttt 59
<210> 350
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 350
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgttacaa agtaagtgtg ggaacac 57
<210> 351
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 351
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgccgtaa actgctttgt gaataataat 60
<210> 352
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 352
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggacatg agagttaata gatccacat 59
<210> 353
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 353
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgcaggtc ctcgcgttcg 50
<210> 354
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 354
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctcgtgt cccactcccg 50
<210> 355
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 355
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctgtgct ttttcctgtt tcagataaa 59
<210> 356
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 356
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgttgtct ttcttccact caggttat 58
<210> 357
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 357
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctatgtcca ttaaaagcat atatgtctgt 60
tt 62
<210> 358
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 358
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgttgat gaaaaagcac ctgaattc 58
<210> 359
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 359
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttttttaa ttccttttct ccttttcaat 60
acag 64
<210> 360
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 360
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcttggc agcggttctt ttg 53
<210> 361
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 361
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccccagt atgagaataa tgttatcact 60
att 63
<210> 362
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 362
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttagaaaa tcaaacactg aatattctga 60
ttct 64
<210> 363
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 363
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttctta ctgttgtgtg gtacaaa 57
<210> 364
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 364
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctaaccctg gctatcattc tgct 54
<210> 365
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 365
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctccaatct actaatgcta atactgtttc 60
gt 62
<210> 366
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 366
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagaaaag cggctgttag tcact 55
<210> 367
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 367
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttctct gagtggtaaa ggcaatc 57
<210> 368
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 368
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaatggt cctgcaccag taatatg 57
<210> 369
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 369
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttagctgt atcgtcaagg cactc 55
<210> 370
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 370
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcagaaaa cagatctgta tttatttcag 60
tgtta 65
<210> 371
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 371
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcctgag cctgttttgt gtcta 55
<210> 372
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 372
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcatggca ttagcaaaga ctcaaaaa 58
<210> 373
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 373
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttcaattt aaacccacct ataatggtga 60
a 61
<210> 374
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 374
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctctggtcc ctcattgcac tgt 53
<210> 375
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 375
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttttcgt aagtgttact caagaagca 59
<210> 376
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 376
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcacagct acaccatata tgaatgga 58
<210> 377
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 377
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctatctatg ttcgaacagg tatctacca 59
<210> 378
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 378
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgtaggag tcatttatat actttgatga 60
agact 65
<210> 379
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 379
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgggaaga aaagtgtttt gaaatgtgtt 60
<210> 380
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 380
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctattacac agacactcta gtatctggaa 60
<210> 381
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 381
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttttatt ttacagagta acagactagc 60
tagag 65
<210> 382
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 382
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctggtttgg cctgcttttg ga 52
<210> 383
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 383
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacagcat gccaatctct tcataaat 58
<210> 384
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 384
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgccttag ataaaactga gcaagagg 58
<210> 385
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 385
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttctatat ttgcaatgtt tgctgtaaaa 60
tga 63
<210> 386
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 386
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttgaaaag cccaacgtct gtga 54
<210> 387
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 387
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcttaacg tgatccccat tgctg 55
<210> 388
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 388
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctagctctg atatgcttcg cact 54
<210> 389
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 389
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctcgcattc acactttctg gtcac 55
<210> 390
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 390
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgttctgt ctcctttctt aagggtg 57
<210> 391
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 391
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctacctaga aacctttatc cctgcttat 59
<210> 392
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 392
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctgaaattg gatattgcag cagtcaga 58
<210> 393
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 393
acactctttc cctacacgac gctcttccga tcttccaaga atgtaagtgg gagtga 56
<210> 394
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 394
acactctttc cctacacgac gctcttccga tctttcttaa ggagtaggaa gaatccaca 59
<210> 395
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 395
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagcact aagcgaggta agca 54
<210> 396
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 396
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctcaga ttcactttta tcacctttcc 60
<210> 397
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 397
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtagct aactaacttc agaacacca 59
<210> 398
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 398
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctatgaaa atggttctat gactttgcc 59
<210> 399
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 399
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgctttt gtaccgtcat aaagtcaa 58
<210> 400
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 400
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcgaga tgttccgaga gctg 54
<210> 401
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 401
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttggcca ccatcttgat ttgaatt 57
<210> 402
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 402
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctctca ctcatgtgat gtcatctc 58
<210> 403
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 403
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagggt tggaagtgtc tcatg 55
<210> 404
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 404
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttttcag acctatggaa actgtgag 58
<210> 405
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 405
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgacttc ctgaaaacaa cgttctg 57
<210> 406
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 406
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcttttc acccatctac agtccc 56
<210> 407
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 407
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagatg aagctcccag aatgc 55
<210> 408
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 408
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctacc tcccgccata aaaaac 56
<210> 409
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 409
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcctacc agggcagcta cg 52
<210> 410
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 410
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctctag ctcgctagtg ggt 53
<210> 411
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 411
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtctcc ttcctcttcc tacagta 57
<210> 412
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 412
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccatgg ccatctacaa gca 53
<210> 413
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 413
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgagcgc tgctcagata gc 52
<210> 414
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 414
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctcagc atcttatccg agtgg 55
<210> 415
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 415
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaggtc tccccaaggc g 51
<210> 416
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 416
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcatggg cggcatgaac c 51
<210> 417
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 417
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgggaca ggtaggacct gatt 54
<210> 418
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 418
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaacagc tttgaggtgc gtg 53
<210> 419
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 419
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaagca gataactttc acttaatagt 60
tgt 63
<210> 420
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 420
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaatctt ttctaaatga aaacacaaca 60
tgaat 65
<210> 421
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 421
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcaaag cattcttacc ttactacatc 60
at 62
<210> 422
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 422
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcacgtt ctaagagagt gacagaaa 58
<210> 423
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 423
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctctt tgatgatggc tgtcatg 57
<210> 424
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 424
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgatgcc cctcgctctg c 51
<210> 425
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 425
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcttctc ctcagcagcc ag 52
<210> 426
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 426
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggttta aaaccggccc gg 52
<210> 427
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 427
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctgac acaatgtcct attgcc 56
<210> 428
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 428
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcagag tcagtggtgt cagaatat 58
<210> 429
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 429
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgtcag aatatctata atgatcaggt 60
tcat 64
<210> 430
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 430
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctacacac atcacataca tacaagtca 59
<210> 431
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 431
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctttat ttgctttgtc aagatcattt 60
tttg 64
<210> 432
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 432
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctact ttttctgagg tttcctctg 59
<210> 433
<211> 68
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 433
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagatc taatagaaaa caaattatag 60
ttccttac 68
<210> 434
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 434
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaactc tccggcgttc c 51
<210> 435
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 435
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccaatg aaagtaaagt acaaaccttt 60
tt 62
<210> 436
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 436
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgaactc aaagtacatg aacttgtctt 60
c 61
<210> 437
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 437
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcttca gaaatatagt ctcctgcata 60
aa 62
<210> 438
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 438
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaagaaa actgttccaa tacatggaag 60
<210> 439
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 439
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgccact ggtctataat ccagatg 57
<210> 440
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 440
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttttcca ataaattctc agatccagga 60
<210> 441
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 441
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttagggc ctcttgtgcc ttt 53
<210> 442
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 442
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcttca cttagccatt ggtcaag 57
<210> 443
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 443
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgtatc tcactcgata atctggatga 60
<210> 444
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 444
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagtaca ttcataccta cctctgca 58
<210> 445
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 445
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaaacc aggtgaataa gctgaac 57
<210> 446
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 446
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgagtt cacccccaag cc 52
<210> 447
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 447
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttggaa tagcttgaag aagagaaaga 60
<210> 448
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 448
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgatcca aaggtggttt gaacac 56
<210> 449
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 449
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcattag agcctgacct gcc 53
<210> 450
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 450
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagatag gcttccagaa ggacag 56
<210> 451
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 451
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgcatg ttagaatcat cctggc 56
<210> 452
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 452
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccaagg ccaagctagg cta 53
<210> 453
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 453
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccctgg gctcttgatt tttga 55
<210> 454
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 454
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagatgc tgtcgccact tacta 55
<210> 455
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 455
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttccttt cacactgaag ttcagc 56
<210> 456
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 456
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcgctcc tacgtgcttc ct 52
<210> 457
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 457
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgaagcc ttggtttctc ttgca 55
<210> 458
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 458
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaggagt tcaataagct gacgga 56
<210> 459
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 459
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctttct cgggcacaac ct 52
<210> 460
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 460
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgaccc cgtcgtctca c 51
<210> 461
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 461
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccttga ggaagaggag aaagtg 56
<210> 462
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 462
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcttttt cctctcctga atgtctaaaa 60
<210> 463
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 463
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctgca ggtgtgtgat gagat 55
<210> 464
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 464
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcatgta ccccaacatc atcctg 56
<210> 465
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 465
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctctgc catggtggac ga 52
<210> 466
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 466
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtgtgt ctgtgcctcc tttt 54
<210> 467
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 467
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaggcg cttctcacag c 51
<210> 468
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 468
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcgaata ccatcggatc cagca 55
<210> 469
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 469
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtgtat ctgagctgtt gctcc 55
<210> 470
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 470
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgctta gattactgcc ggaaag 56
<210> 471
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 471
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctactcct tctacgtgga cacc 54
<210> 472
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 472
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttactaa aaacctgggc tattgacttt 60
<210> 473
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 473
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcatgtt catgtgcttc tcaggt 56
<210> 474
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 474
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcatcc tgaactcctt ctatgg 56
<210> 475
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 475
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttacccc ctggaggagc c 51
<210> 476
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 476
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcctct cagggctcgc t 51
<210> 477
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 477
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctacactg ggtgaaaagg aaagg 55
<210> 478
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 478
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgctggg ctggtgacct c 51
<210> 479
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 479
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagctt cccagaaaat tttgtct 57
<210> 480
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 480
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtttgg gccatcatga gtgaa 55
<210> 481
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 481
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaggttg atgggcccta cc 52
<210> 482
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 482
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgacagg tggagggttg gaa 53
<210> 483
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 483
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgctgtg ttcaatgaag acggtt 56
<210> 484
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 484
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcagct gattaagatc ttccaatc 58
<210> 485
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 485
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttgcca cacaggcata ttagag 56
<210> 486
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 486
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgattt ctgcagtgtt ttacccat 58
<210> 487
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 487
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcctgac tctgagctat tcgag 55
<210> 488
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 488
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttcctg ggagaccaga tgg 53
<210> 489
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 489
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctgatg gccttcaccc tg 52
<210> 490
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 490
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttaggat cagattttgg gtgattttca 60
<210> 491
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 491
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcactt tctccggaaa tggc 54
<210> 492
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 492
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgagagg attaaataag acacagtggt 60
<210> 493
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 493
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctgga ttgggactac tacattga 58
<210> 494
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 494
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgggcta aaaactgtgc agttag 56
<210> 495
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 495
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaaaaaa ctgctggaga agaatgatg 59
<210> 496
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 496
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcagcc cgagatcctg ag 52
<210> 497
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 497
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcccct gtcactgtga aga 53
<210> 498
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 498
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcgggca ttcccatctc ac 52
<210> 499
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 499
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgaagaa gtggcagctg cag 53
<210> 500
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 500
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcacgaa tgtgtctcgc ga 52
<210> 501
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 501
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgggagc ttcttgcgaa gaa 53
<210> 502
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 502
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttcctg cccatcgtag gg 52
<210> 503
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 503
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttccagt gtgtcctgtg atgt 54
<210> 504
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 504
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcgtgtg ttctacgtga accag 55
<210> 505
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 505
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgtgtg tgtaccacag acattac 57
<210> 506
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 506
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagtatt cagtgccaga ggacat 56
<210> 507
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 507
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcacatc ccgggcagaa gt 52
<210> 508
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 508
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgattct tccaggttcc gttactg 57
<210> 509
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 509
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcagag acctttgctc ttgag 55
<210> 510
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 510
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgggtga cggtcttgtt tcc 53
<210> 511
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 511
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctccct ttcaggtctg cct 53
<210> 512
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 512
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctacaaag cgctcttcgg ga 52
<210> 513
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 513
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgagtg cttgtcgtga ttgaatt 57
<210> 514
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 514
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttaggtg cgcagcaacc ag 52
<210> 515
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 515
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaccttc gaagttcggg ca 52
<210> 516
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 516
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtgtga gccccatctt cttt 54
<210> 517
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 517
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctactcat cgctgttcag tcca 54
<210> 518
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 518
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcctatc tgtgtggctg acaa 54
<210> 519
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 519
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccttcg agatgagcag gtg 53
<210> 520
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 520
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcaggt actttcacat tccca 55
<210> 521
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 521
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaccaga ggacatctcc acatt 55
<210> 522
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 522
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctatctgc ctcggctcag c 51
<210> 523
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 523
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgacaac tgtcttgtca tggagt 56
<210> 524
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 524
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggtctg ttgctggttc tgg 53
<210> 525
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 525
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcatggc gtcttcctgt gc 52
<210> 526
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 526
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgatcag cttcgacgtg atcc 54
<210> 527
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 527
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggaaaa cctgtgccca tttca 55
<210> 528
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 528
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaggatc ctgaagagca tggt 54
<210> 529
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 529
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccatcc tctctgcttc atgac 55
<210> 530
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 530
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagctc ttttccctct tggatt 56
<210> 531
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 531
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcatcag tcatctacgc caactt 56
<210> 532
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 532
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggaaat aaaggaaagt tgagaacaag 60
g 61
<210> 533
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 533
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcggaac attgcccagc a 51
<210> 534
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 534
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctttct ctcgatgctg ggaatt 56
<210> 535
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 535
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcccctc taccaggccg c 51
<210> 536
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 536
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgtgtt acagcaagac tccca 55
<210> 537
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 537
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttttact ggaaaacaac tggaacattt 60
<210> 538
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 538
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgacat tttagcctca tctgtgag 58
<210> 539
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 539
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcgtgg ccgtgtacca c 51
<210> 540
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 540
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctacctaa ctcctctgtg tgcc 54
<210> 541
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 541
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttatac ttccaggaat gatcaccttc 60
<210> 542
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 542
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtggga gcgcgccaaa t 51
<210> 543
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 543
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgattca gaagaaagtc acaggct 57
<210> 544
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 544
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagcag gtggcattac aaatt 55
<210> 545
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 545
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcactc agggatgatg gcg 53
<210> 546
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 546
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagaaga caggctggct catt 54
<210> 547
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 547
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgtaga ggatggtctt gtgtct 56
<210> 548
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 548
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttgtgt ctgtgttgac tgattct 57
<210> 549
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 549
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagcaat gtgttttcac ttttctctc 59
<210> 550
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 550
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccagaa aggtgagtgt gtttcata 58
<210> 551
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 551
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgaaagc cttttcattc tgatcctg 58
<210> 552
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 552
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaagtcg ccaactcttt gactt 55
<210> 553
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 553
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcttggt gggtttgaag cga 53
<210> 554
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 554
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctgtag cctaaggtcc agagg 55
<210> 555
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 555
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgtgga ggatcttgtc aaagtg 56
<210> 556
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 556
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgagtt ggaactctgg tctca 55
<210> 557
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 557
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgatgaa gaggaaacct ctaagaagat 60
ag 62
<210> 558
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 558
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagatga tcattatggg tgaatccac 59
<210> 559
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 559
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctagt tagcacactg tgtgtttt 58
<210> 560
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 560
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagctct agagcctttt gactctt 57
<210> 561
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 561
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagttta gagcttggct ttatgct 57
<210> 562
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 562
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgatgc tgagacagac cagatt 56
<210> 563
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 563
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagctta aagcactttc acattgc 57
<210> 564
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 564
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctgac ttgtgctgat tgctaat 57
<210> 565
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 565
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcgtcc tgagacctca gaa 53
<210> 566
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 566
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgggcag tcactgcagc a 51
<210> 567
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 567
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagatg tggactgcca ttcaaa 56
<210> 568
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 568
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctttcc agttctgaca tttgtcaaa 59
<210> 569
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 569
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttaataa gaaagttgtg cccctgg 57
<210> 570
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 570
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgatggc tagggacttt attttgttt 59
<210> 571
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 571
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcagca caccgtgctc c 51
<210> 572
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 572
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcctgga gggaactttc cca 53
<210> 573
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 573
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttacagt gttgagtcat ttcccac 57
<210> 574
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 574
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccatca gatttgctct gggc 54
<210> 575
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 575
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctgata gcatgggtcc gtttt 55
<210> 576
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 576
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcttaa ggactatgga gtggatct 58
<210> 577
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 577
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggaagt tttgtgacac ttagctg 57
<210> 578
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 578
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctatgtat attttgttgt tatagcactt 60
gagat 65
<210> 579
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 579
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgagttt gccgacctaa ctcag 55
<210> 580
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 580
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcccaa catcatgggt ctc 53
<210> 581
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 581
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcatcg gcgaaggttg g 51
<210> 582
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 582
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcttgat ttgtgcgatg atgtga 56
<210> 583
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 583
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggagta tgccaaaatg gtcca 55
<210> 584
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 584
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgttgca ccaatcagct tgga 54
<210> 585
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 585
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcactct gtctttatta ggaagtaact 60
g 61
<210> 586
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 586
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagtgac tccgtgtgtg aaga 54
<210> 587
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 587
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctggtg ttttgttttc atttcacttt 60
a 61
<210> 588
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 588
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcatgag acacatcgcc aacc 54
<210> 589
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 589
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgccctt accatattaa tgttgaatag 60
c 61
<210> 590
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 590
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctttat caaccggcgg cc 52
<210> 591
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 591
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagaaca tgctggttgg ttagaatag 59
<210> 592
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 592
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtctgc agactcgtga atgag 55
<210> 593
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 593
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtgaga cgctgtctga aaataataat 60
<210> 594
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 594
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccttag aatgcgttga tatcaatgtt 60
ac 62
<210> 595
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 595
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggaaaa gcttttgttg gcagt 55
<210> 596
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 596
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccattt caggatagtc cctgac 56
<210> 597
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 597
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcccatg gtagaaaagc aggat 55
<210> 598
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 598
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagcctc acagcccaaa ga 52
<210> 599
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 599
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctatcaca aactgccaat tcaagc 56
<210> 600
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 600
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctatgacc tcccttctgg gc 52
<210> 601
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 601
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctgcc tgtctgtctg tttct 55
<210> 602
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 602
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggcttt aaaagccttt tgctaacc 58
<210> 603
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 603
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttccctt tctcgcggat gaa 53
<210> 604
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 604
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctgaa tttaccacct ttgtcagaa 59
<210> 605
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 605
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaactc aaagcttcca atgtagtc 58
<210> 606
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 606
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcatccc ttcccctttt actgtt 56
<210> 607
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 607
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgacccc tgcactcatt caag 54
<210> 608
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 608
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctattctc ttgcttttct atgtccctt 59
<210> 609
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 609
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggaacg taatagtctc ctggc 55
<210> 610
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 610
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagaaaa atattagcga tacatgtgct 60
ag 62
<210> 611
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 611
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcacag caacattttg agaataatct 60
t 61
<210> 612
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 612
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttacgac attttatagt ctcagcaagt 60
t 61
<210> 613
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 613
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcgtgct ctaaaaacat tcatattgtt 60
ta 62
<210> 614
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 614
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctatccac aagcaccaga gaatg 55
<210> 615
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 615
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaggctc atatacaaga agcaaatatc 60
t 61
<210> 616
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 616
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaattg gtgtgagcct gca 53
<210> 617
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 617
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgctgac ttttatgtaa ctgtgtttgg 60
<210> 618
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 618
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgctatg cccccgcctt c 51
<210> 619
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 619
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctttaa gaatcagtta cctgtctcat 60
aag 63
<210> 620
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 620
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcacagc ctattagaat gtcattagga 60
<210> 621
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 621
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttggcgt gatcctttaa gctct 55
<210> 622
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 622
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcaaac agcactactt atcaaagc 58
<210> 623
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 623
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgaacag tcgccgcatg c 51
<210> 624
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 624
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttttcaa ctcgtattct tctggca 57
<210> 625
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 625
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaggtat tccaggaggc tctg 54
<210> 626
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 626
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttggtca aaggctgtat cccat 55
<210> 627
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 627
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaactt cttccatgat ccctataatt 60
t 61
<210> 628
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 628
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgtagt ttcttcatac attatagccc 60
tg 62
<210> 629
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 629
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcttcgc cttgggcggt g 51
<210> 630
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 630
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctaca acttcggaga ttttgtca 58
<210> 631
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 631
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctttag gagccgctta ccaaa 55
<210> 632
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 632
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtcact gcatctagca ccatt 55
<210> 633
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 633
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaaatta gccattgata aaagctcctg 60
<210> 634
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 634
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtcaac ccaatggaat cagact 56
<210> 635
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 635
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcctcaa ggagagttct caaagttt 58
<210> 636
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 636
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaggac aatgaactct ttagaattgt 60
t 61
<210> 637
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 637
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccacta gagtcctaaa tctcgaac 58
<210> 638
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 638
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctacacac catatgcacg agtatg 56
<210> 639
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 639
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcactgt aagtctgtgt acccttg 57
<210> 640
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 640
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcgcctt cgcgtgaggc c 51
<210> 641
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 641
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagtctg ttccactcgt gcta 54
<210> 642
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 642
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcatga ataccagccc cagt 54
<210> 643
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 643
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaagat caaagttctg agacttaatc 60
tg 62
<210> 644
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 644
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagtgta gatgcatcaa aatcggg 57
<210> 645
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 645
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaaacag tagggcgact actgt 55
<210> 646
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 646
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgaaatg ctagttgctt gtttggt 57
<210> 647
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 647
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcttcc gctttcgagc aac 53
<210> 648
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 648
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaaattc cacatcagag ccacc 55
<210> 649
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 649
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctgtac ttcctcttca ctctcaattt 60
<210> 650
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 650
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttcccc catcacccta acat 54
<210> 651
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 651
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgggcac tgacagttaa cact 54
<210> 652
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 652
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagaca atagcttatc aatattacct 60
tcatt 65
<210> 653
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 653
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctttgc tattacttca gcttttagct 60
<210> 654
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 654
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaaaggg catttgtttc accttg 56
<210> 655
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 655
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccttca tcttagtgtc ctgtttatgt 60
aa 62
<210> 656
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 656
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgctgg ttccatgata tcatatcc 58
<210> 657
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 657
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttccag ggctttctgt ttagc 55
<210> 658
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 658
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctataagg caattactga tgatttcaag 60
g 61
<210> 659
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 659
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaccttt cttcacctga taaagcat 58
<210> 660
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 660
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcagta agttcatgaa aatgggt 57
<210> 661
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 661
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccaaat ccatcgtagg tagaagtt 58
<210> 662
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 662
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcaaat atacttttcc ttctcacagg 60
a 61
<210> 663
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 663
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttggaga ctcctttcaa ttgactg 57
<210> 664
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 664
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccaatt tgggccatga gtact 55
<210> 665
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 665
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctactggg aattttctcc atcaatttta 60
aa 62
<210> 666
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 666
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttaccag taatgatgtg gaacatctg 59
<210> 667
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 667
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcatgcc tggatgcttt taatataatt 60
c 61
<210> 668
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 668
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaacag catctagctg agctaa 56
<210> 669
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 669
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttaccaa aagccaggtg acattc 56
<210> 670
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 670
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcatcc tgggcttctt catatt 56
<210> 671
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 671
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcacat catgttagag catttaggg 59
<210> 672
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 672
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgttacg aaggactttt tcttccttac 60
<210> 673
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 673
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctgttg ggcgatttct gtttg 55
<210> 674
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 674
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaacct ccaatgaccc attctt 56
<210> 675
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 675
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcactg agattaggat caaatgaagg 60
<210> 676
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 676
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctttct taaagtggcc tttgcttt 58
<210> 677
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 677
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgagaag tcagaacgaa gatcagta 58
<210> 678
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 678
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgacagc acattgccaa gtatatatt 59
<210> 679
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 679
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggtagt tgatttatac cctgatagag 60
tc 62
<210> 680
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 680
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcttct tgtaaagtct gcctcaatt 59
<210> 681
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 681
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggtata atcatgtggg taactgca 58
<210> 682
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 682
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgttctt atccatgaga ggctgc 56
<210> 683
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 683
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctacctga aaaaggttaa gggctc 56
<210> 684
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 684
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggctga agtcaaaagt agtcagtt 58
<210> 685
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 685
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcacagt ttaggttttg agataaatat 60
gaca 64
<210> 686
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 686
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcattta taatccatgt acctgattct 60
cc 62
<210> 687
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 687
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcctttc aacaaccggt tgagg 55
<210> 688
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 688
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcatgt caattaaaga gcctttccta 60
<210> 689
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 689
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtctct cctccgggta aaaca 55
<210> 690
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 690
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagggaa ttcacacagt cctagtt 57
<210> 691
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 691
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctacaaca ccaatggaag ctgac 55
<210> 692
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 692
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcaaac cattctacta tcacaatcta 60
ct 62
<210> 693
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 693
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaaaagg aagataatta ccttatatgc 60
caaata 66
<210> 694
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 694
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaactc tatactgacg aaccagaa 58
<210> 695
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 695
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcactct ctgaggcggg aaa 53
<210> 696
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 696
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcacctg ccggccccat g 51
<210> 697
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 697
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcgaaaa ggcgcactgt gg 52
<210> 698
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 698
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaacaa tttactctcc catgtacca 59
<210> 699
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 699
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctacagga ttactctgag acctagg 57
<210> 700
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 700
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaaagaa gtcagcacta tacctgtatg 60
<210> 701
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 701
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagacaa tgtcatcaca ggaggata 58
<210> 702
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 702
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctcgaa agccataggt agaaatact 59
<210> 703
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 703
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgaaagg tcctgactct tccatg 56
<210> 704
<211> 63
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 704
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttggtac actttgtata tcacactttg 60
ata 63
<210> 705
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 705
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctcaaa gactttgtat agatcaggca 60
<210> 706
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 706
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgttcc acagtccact tcca 54
<210> 707
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 707
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggcctc cctctttaac aatcac 56
<210> 708
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 708
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgaggt cctgtcctag tcct 54
<210> 709
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 709
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgggtcg actcctcaga tatgta 56
<210> 710
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 710
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagatc aaagggtggt catttg 56
<210> 711
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 711
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctcagt ggctagtcga agaatg 56
<210> 712
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 712
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccggct ggaaatttta tttgaagaa 59
<210> 713
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 713
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccttct tcttcagaaa ctcaacaa 58
<210> 714
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 714
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgctact attttcagaa acgatcagtt 60
<210> 715
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 715
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttccctg gaccattgtt gtagta 56
<210> 716
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 716
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctatttac ctaagcttgg tggtgtt 57
<210> 717
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 717
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccttgg cagttgaggc c 51
<210> 718
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 718
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcgttaa gtcgtagccc ttaagtg 57
<210> 719
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 719
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcctgct cattaatttc ttcctgga 58
<210> 720
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 720
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcatct tccaccattt ccacatc 57
<210> 721
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 721
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagaga gaagatgcaa gtgattc 57
<210> 722
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 722
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgaggta ggctgtactt ttccc 55
<210> 723
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 723
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttctga agtccccttt gttgtatc 58
<210> 724
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 724
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccctgc cactagaaat atctgt 56
<210> 725
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 725
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagaaa tgcatcaagc ttctgtt 57
<210> 726
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 726
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaggta atacttgcaa agaaagttcc 60
<210> 727
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 727
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgagaag tagctggatg agaagc 56
<210> 728
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 728
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcagga agtgaacttc atgctt 56
<210> 729
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 729
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaccagt tctcaatcat ctctttgat 59
<210> 730
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 730
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctttca aagaggagag cctgatag 58
<210> 731
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 731
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggcaaa taggctgcat acact 55
<210> 732
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 732
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctatggtc ccataaaatt ccctgtg 57
<210> 733
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 733
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctactgag tagtttgcat tggatatgta 60
a 61
<210> 734
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 734
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgtgta tttgactaaa gcaaactctt 60
aa 62
<210> 735
<211> 64
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 735
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttttat ataggttatc gacataccga 60
ctaa 64
<210> 736
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 736
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaccag caaactatta aaaatcccc 59
<210> 737
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 737
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgagcac tagaacacat tactttgatg 60
<210> 738
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 738
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgctttt ctcctcgtgg ctatg 55
<210> 739
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 739
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgggacc tccattaact agtgc 55
<210> 740
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 740
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagccac caactgtgca ag 52
<210> 741
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 741
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcttttc actggacact catatcttc 59
<210> 742
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 742
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctactagg ttctcactcg ctcag 55
<210> 743
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 743
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagcccg ctctcatcgc a 51
<210> 744
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 744
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttctgc cttcatcacc aaacat 56
<210> 745
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 745
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgccaat aaaactcttt ccaactca 58
<210> 746
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 746
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcacgc tttgagcaaa tgaca 55
<210> 747
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 747
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcctctt ggtcccctcc ct 52
<210> 748
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 748
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaatccg cgcctcacct t 51
<210> 749
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 749
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaaactc atgaccttca aagatgtct 59
<210> 750
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 750
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtataa agggactcca gtataactga 60
aa 62
<210> 751
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 751
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctttcaac agggcctttc tatttagg 58
<210> 752
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 752
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcccagc cactattact ttttcttga 59
<210> 753
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 753
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcagctt ttagaccctg cattga 56
<210> 754
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 754
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctatccag ttgttcccca tttactg 57
<210> 755
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 755
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctattgag gcatgataga ctacattcc 59
<210> 756
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 756
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctatgt ccacatcatt ctgagttttt 60
t 61
<210> 757
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 757
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgtctc accaactgtc tgct 54
<210> 758
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 758
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgtcca actccatcaa atcagcta 58
<210> 759
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 759
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctatggat tccagagtcc aggtaag 57
<210> 760
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 760
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgaagg actgagaaaa tccctgtt 58
<210> 761
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 761
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttctcaa aactgcattc tgactttca 59
<210> 762
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 762
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaggcct gctgaaaatg actga 55
<210> 763
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 763
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggtact ggtggagtat ttgatagtgt 60
<210> 764
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 764
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctctctga agatgtacct atggtcct 58
<210> 765
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 765
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttggaca ggttttgaaa gatatttgtg 60
t 61
<210> 766
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 766
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctagggac cagtacatga ggact 55
<210> 767
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 767
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgtctc ttggatattc tcgacacag 59
<210> 768
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 768
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgaagt aaaaggtgca ctgtaataat 60
cc 62
<210> 769
<211> 62
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 769
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgtatca taccaatttc tcgattgagg 60
at 62
<210> 770
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 770
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcatca gcatttgact ttaccttatc 60
<210> 771
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 771
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttactac ttttatggat catactgcta 60
aacac 65
<210> 772
<211> 54
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 772
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgcaccc tttcggcctt taac 54
<210> 773
<211> 55
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 773
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctccatga ggtactggcc aaaga 55
<210> 774
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 774
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgagaga aggtttgact gccataaa 58
<210> 775
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 775
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaagaaa cagagaatct ccattttagc 60
a 61
<210> 776
<211> 61
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 776
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaaagag tctcaaacac aaactagagt 60
c 61
<210> 777
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 777
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcaccat gatgtgcatc attcattt 58
<210> 778
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 778
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggaatc cagagtgagc tttcatttt 59
<210> 779
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 779
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttgaaac ccacagtaaa aacccag 57
<210> 780
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 780
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctgaggtt ctgagtcgat aatactagca 60
<210> 781
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 781
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcggaga ttgtgccatt gcattc 56
<210> 782
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 782
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcttcca gacaattctg atgccat 57
<210> 783
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 783
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atcttcgctg gcacagttct atttttatat 60
<210> 784
<211> 53
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 784
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctaaatgg tgggaaccca ggg 53
<210> 785
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 785
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcgtgaa cccgggagtt gg 52
<210> 786
<211> 66
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 786
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctcttctt cagtatatgt caatgaaaac 60
attttt 66
<210> 787
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 787
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggttac cacacttcaa aatgacattc 60
<210> 788
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工合成()
<400> 788
gtgactggag ttcagacgtg tgctcttccg atctggacgc tattgataac ggaatgg 57
<210> 789
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工合成()
<220>
<221> misc_feature
<222> (30)..(36)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 789
aatgatacgg cgaccaccga gatctacacn nnnnnnacac tctttcccta cacgacgctc 60
ttccgatct 69
<210> 790
<211> 65
<212> DNA
<213> 人工合成()
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(31)
<223> n is a, c, g, or t
<400> 790
caagcagaag acggcatacg agatnnnnnn ngtgactgga gttcagacgt gtgctcttcc 60
gatct 65
Claims (10)
1.一种基于高通量测序的子宫内膜癌分子分型的引物，其特征在于，包括特异修饰性扩增引物和接头扩增引物，所述特异修饰性扩增引物的序列如SEQ ID NO.1～SEQ IDNO.788所示，所述接头扩增引物的序列如SEQ ID NO.789～SEQ ID NO.790所示。
2.一种基于高通量测序的子宫内膜癌分子分型的试剂盒，其特征在于，包含如权利要求1所述的引物。
3.一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)使用权利要求1所述特异修饰性扩增引物对待测样本进行超多重PCR富集反应；
(2)富集产物纯化；
(3)接头连接权利要求1所述接头扩增引物进行PCR反应获得文库；
(4)文库的纯化；
所述特异修饰性扩增引物的序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.788所示，所述接头扩增引物的序列如SEQ ID NO.789～SEQ ID NO.790所示。
4.根据权利要求3所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中的待测样本为手术切除的新鲜病理组织，甲醛固定石蜡包埋病例组织，石蜡切片，全血，血浆，血清，胸腔积液中的一种。
5.根据权利要求3所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中的PCR扩增程序如下表所示：
6.根据权利要求3所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中的PCR扩增反应体系包括EC-1体系和EC-2体系；
所述EC-1体系如下表所示：
所述EC-2体系如下表所示：
7.根据权利要求3所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR扩增程序如下表所示：
8.根据权利要求3所述的文库构建方法，其特征在于，所述步骤(3)中PCR扩增反应体系如下表所示：
。
9.根据权利要求3-8中任一项所述的文库构建方法，其特征在于，所述文库构建方法实现的是对11个基因MSH2、PMS2、MLH1、MSH6、EPCAM、POLE、TP53、PTEN、PIK3CA、KRAS和CTNNB1突变和对10个微卫星位点检测微卫星不稳定状态的检测。
10.根据权利要求3-9中任一项所述的文库构建方法所构建的测序文库。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210128468.3A CN114438210B (zh) | 2022-03-29 | 2022-03-29 | 一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210128468.3A CN114438210B (zh) | 2022-03-29 | 2022-03-29 | 一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114438210A CN114438210A (zh) | 2022-05-06 |
| CN114438210B true CN114438210B (zh) | 2023-05-23 |
Family
ID=81371893
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210128468.3A Active CN114438210B (zh) | 2022-03-29 | 2022-03-29 | 一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114438210B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116516012B (zh) * | 2023-05-24 | 2023-10-13 | 北京阅微基因技术股份有限公司 | Pole基因分型检测的复合扩增体系及试剂盒 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106939337A (zh) * | 2017-03-21 | 2017-07-11 | 重庆市肿瘤研究所 | 激素受体阳性乳腺癌复发监测基因突变文库的构建方法 |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1978106A1 (en) * | 2007-04-07 | 2008-10-08 | Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf | Detection of ESR1 amplification in endometrium cancer and ovary cancer |
| WO2017008165A1 (en) * | 2015-07-14 | 2017-01-19 | British Columbia Cancer Agency Branch | Classification method and treatment for endometrial cancers |
| CN109680038A (zh) * | 2018-12-07 | 2019-04-26 | 北京安智因生物技术有限公司 | 一种遗传性妇科肿瘤的基因文库构建方法和试剂盒 |
| CN112064122B (zh) * | 2020-09-30 | 2021-06-04 | 厦门飞朔生物技术有限公司 | 一种基于高通量测序检测子宫内膜癌相关基因突变的文库构建方法 |
-
2022
- 2022-03-29 CN CN202210128468.3A patent/CN114438210B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106939337A (zh) * | 2017-03-21 | 2017-07-11 | 重庆市肿瘤研究所 | 激素受体阳性乳腺癌复发监测基因突变文库的构建方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114438210A (zh) | 2022-05-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109402257B (zh) | 一种用于人类brca1和brca2基因全编码序列突变位点检测的引物、方法和试剂盒 | |
| CN110878343B (zh) | 一种用于遗传性耳聋致病基因SLC26A4突变快速检测的Cpf1试剂盒及其检测方法 | |
| CN110719957B (zh) | 用于核酸靶向富集的方法和试剂盒 | |
| CN114277135B (zh) | 胃癌淋巴结转移相关的甲基化生物标记物及其组合和检测试剂盒 | |
| CN110129436A (zh) | Dna甲基化的数字序列分析 | |
| CN110541033B (zh) | Egfr基因突变检测用组合物及检测方法 | |
| CN110079594B (zh) | 基于dna和rna基因突变检测的高通量方法 | |
| CN106399546B (zh) | 高通量测序检测人循环肿瘤dna egfr基因的捕获探针及试剂盒 | |
| CN111073961A (zh) | 一种基因稀有突变的高通量检测方法 | |
| CN110468211B (zh) | 膀胱癌肿瘤突变基因特异性引物、试剂盒和文库构建方法 | |
| CN114438210B (zh) | 一种基于高通量测序子宫内膜癌分子分型的文库构建方法 | |
| CN110846409A (zh) | 用于检测tnni3k基因突变的引物组合及其应用 | |
| CN110846408A (zh) | 用于检测ttn基因突变的引物组合及其应用 | |
| CN110564861A (zh) | 人类Y染色体STR基因座和InDel位点的荧光标记复合扩增试剂盒及其应用 | |
| CN110218772A (zh) | 一种检测微卫星不稳定性的引物组合物、试剂盒、检测方法及其应用 | |
| CN116445608B (zh) | 检测耳聋相关基因突变的组合物、试剂盒、及用途 | |
| CN110241212B (zh) | 一种用于brca1和brca2基因扩增子测序检测的引物组及其应用 | |
| CN114667355A (zh) | 检测结直肠癌的方法 | |
| CN112064122B (zh) | 一种基于高通量测序检测子宫内膜癌相关基因突变的文库构建方法 | |
| CN112143815B (zh) | 一种用于检测人fgfr2基因融合突变的核酸组合物、试剂盒及检测方法 | |
| EP3625370A1 (en) | Composite epigenetic biomarkers for accurate screening, diagnosis and prognosis of colorectal cancer | |
| WO2019084998A1 (zh) | 一种kras、nras、braf基因突变检测试剂盒 | |
| CN103789436B (zh) | 一种基于人工修饰引物的定量突变检测系统 | |
| CN111471755B (zh) | 用于微卫星不稳定性检测的生物标志物组合、试剂盒及其用途 | |
| KR20150017525A (ko) | 차세대 염기서열 분석법을 이용한 체성돌연변이 검출방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |