CN108088943A - 萃取剂-低共熔溶在中药有效成分测定中的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及萃取剂‑低共熔溶剂制备技术领域，涉及萃取剂‑低共熔溶剂在中药有效成分测定中的应用，尤其在黄芩中黄酮类成分测定中的应用，具体涉及萃取剂‑低共熔溶剂在黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、野黄芩苷有效成分测定中的应用。本发明以黄芩为原料，利用低共熔溶剂，尤其是胆碱类低共熔溶剂作为提取剂，以水为降低体系粘度的稀释剂，在超声的强化下提取黄酮类化合物。该提取方法对于黄酮类成分提取效率更高，提取条件温和，操作简便同时该类具有提取剂不燃爆、不挥发、损耗小、耗能低、等特点，本发明的方法还适用于黄芪、甘草、葛根、苦参等含有黄酮的中药的提取。

Description

萃取剂-低共熔溶在中药有效成分测定中的应用
【技术领域】
本发明涉及萃取剂-低共熔溶剂制备技术领域，涉及萃取剂-低共熔溶剂在中药有效成分测定中的应用，尤其在黄芩中黄酮类成分测定中的应用，具体涉及萃取剂-低共熔溶剂在黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、野黄芩苷有效成分测定中的应用。
【背景技术】
低共熔溶剂(DES)是一种快速兴起的替代传统溶剂和离子液体的新型绿色溶剂，它是由两种或多种成分通过氢键结合形成的一种均匀液体，具有低熔点、低成本、低毒性、易制备、能再生、可降解等优点，在分离、提取、合成等诸多领域中得到应用。
离子液体具有蒸汽压低、不可燃、溶解性和导电性优良、电化学稳定窗口宽等独特的物理化学性质，在分离技术、生物催化、有机合成和电化学等领域倍受关注。然而，离子液体存在合成过程复杂、提纯困难、成本较高等缺点，从而限制了其大规模工业化应用和发展。此外，有关毒理研究表明，吡啶和咪唑类离子液体并非完全“绿色”，其毒性与传统有机溶剂相当，甚至大于传统有机溶剂。因此，寻找合成简单、经济且更为绿色的替代溶剂具有十分重要的意义。
2003年，Abbott等首次发现了一种由季铵盐和酰胺化合物形成的物理化学性质优良的溶剂—低共熔溶剂(Deep Eutectic Solvents)。这种溶剂无毒性，可生物降解，且合成过程原子利用率达100％，是一种新型的绿色溶剂。与离子液体相比，低共熔溶剂的制备过程比较简单，只需将一定摩尔比的季铵盐和氢键给体混合并于一定温度下加热搅拌直至形成均一的无色液体，无需纯化就可以获得纯度较高的产品。此外，由于低共熔溶剂的合成原料均为很常见的化合物，来源丰富且价格低廉，因此，低共熔溶剂有望实现大规模工业化生产。
【发明内容】
本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种利用低共熔溶剂提取中药中有效成分，尤其是黄芩中黄酮类化合物的方法，采用本发明提取黄酮类化合物可有效提高黄酮类化合物的提取效率，并解决现有技术黄酮提取中使用易燃、易爆有机溶剂存在的问题。
本发明是通过如下技术方案实现的：
本发明提供了萃取剂-低共熔溶剂在中药有效成分测定中的应用，所述的中药可以为含有黄酮类成分中药，可以为黄芩、黄芪、甘草、葛根、苦参等。
以萃取剂-低共熔溶剂提取黄芩中有效成分为例，其方案如下：
以黄芩为原料，利用低共熔溶剂，尤其是胆碱类低共熔溶剂作为提取剂，以水为降低体系粘度的稀释剂，在超声的强化下提取黄酮类化合物。其包括如下步骤：
1)即将干燥黄芩粉碎，加入提取溶剂，所述的提取溶剂为低共熔溶剂的水溶液，在超声条件下提取，得到黄酮类化合物的提取液；
2)提取液加入水进行稀释，涡旋混合；过滤，除杂，得到黄酮类化合物的精制提取液。
步骤1)中所述低共熔溶剂为氢键受体溶剂与氢键供体溶剂形成的透明溶液，所述的溶剂选自1,2-丙二醇、甘油、乳酸、1,4-丁二醇、乙二醇、苹果酸、葡萄糖、果糖、脯氨酸、柠檬酸或氯化胆碱。所述的氢键受体为：氯化胆碱、脯氨酸、柠檬酸，氢键供体为：1,2-丙二醇、甘油、乳酸、1,4-丁二醇、乙二醇、苹果酸、葡萄糖、果糖。
所述的低共熔溶剂可以为氯化胆碱-1,2-丙二醇(1：3.5-4.5)，氯化胆碱-甘油(1：2.5-5.5)，氯化胆碱-1,4-丁二醇(1：3.5-4.5)，氯化胆碱-乳酸(1：3.5-4.5)，氯化胆碱-乙二醇(1：3.5-4.5)，氯化胆碱-苹果酸-水(1：1：2.5-3.5)，氯化胆碱-葡萄糖-水(1：1：1.5-2.5)，脯氨酸-甘油(1：2.5-5.5)，脯氨酸-葡萄糖-水(4.8-5.2：2.8-3.2：8)，脯氨酸-果糖-水(1：1：4.5-5.5)，柠檬酸-果糖-水(1：1：2.5-3.5)，柠檬酸-葡萄糖-水(1：1：4.5-5.5)，如上所述比例均为摩尔比。
所述的低共熔溶剂通过如下方法制备：
将所述的低共熔溶剂组成成分按比例在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
以氯化胆碱-1,2-丙二醇为例：
将所述的氯化胆碱和1,2-丙二醇在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱与1,2-丙二醇的摩尔比为：1：3.5-4.5，优选为：1：3.8-4.2。
以氯化胆碱-甘油为例：
将所述的氯化胆碱和甘油在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱与甘油的摩尔比为：1：2.5-5.5，优选为：1：3.8-4.2。
以氯化胆碱-1,4-丁二醇为例：
将所述的氯化胆碱和1,4-丁二醇在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱与1,4-丁二醇的摩尔比为：1：3.5-4.5，优选为：1：3.8-4.2。
以氯化胆碱-乳酸为例：
将所述的氯化胆碱和乳酸在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱与乳酸的摩尔比为：1：3.5-4.5，优选为：1：3.8-4.2。
以氯化胆碱-乙二醇为例：
将所述的氯化胆碱和乙二醇在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱与乙二醇的摩尔比为：1：3.5-4.5，优选为：1：3.8-4.2。
以氯化胆碱-苹果酸-水为例：
将所述的氯化胆碱、苹果酸、水在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱、苹果酸、水的摩尔比为：1：1：2.5-3.5，优选为：1：1：2.8-3.2。
以氯化胆碱-葡萄糖-水(1：1：1.5-2.5)为例：
将所述的氯化胆碱、葡萄糖、水在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，氯化胆碱、葡萄糖、水的摩尔比为：1：1：1.5-2.5，优选为：1：1.8-2.2。
以脯氨酸-甘油为例：
将所述的脯氨酸，甘油在无水条件下搅拌，50-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，脯氨酸与甘油的摩尔比为：1：3.5-4.5，优选为：1：3.8-4.2。
以脯氨酸-葡萄糖-水为例：
将所述的脯氨酸、葡萄糖、水在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，脯氨酸、葡萄糖、水的摩尔比为：4.5-5.5:2.5-3.5:8，优选为：4.8-5.2:2.8-3.2:8。
以脯氨酸-果糖-水为例：
将所述的脯氨酸、果糖、水在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，脯氨酸、果糖、水的摩尔比为：1：1：4.5-5.5，优选为：1：1：4.8-5.2。
以柠檬酸-果糖-水为例：
将所述的柠檬酸、果糖、水在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，柠檬酸、果糖、水的摩尔比为：1：1：2.5-3.5，优选为：1：1：2.8-3.2。
以柠檬酸-葡萄糖-水为例：
将所述的柠檬酸、葡萄糖、水在无水条件下搅拌，45-60℃加热直至形成均一稳定的透明溶液。
其中，柠檬酸、葡萄糖、水的摩尔比为：1：1：4.5-5.5，优选为：1：1：4.8-5.2。
提取溶剂中低共熔溶剂(DES)的含量(％，v:v)为：50-100％，优选为65-70％。
提取溶剂的用量(ml/100mg)为：0.6-3.4ml/100mg，优选为：2-2.8ml/100mg。
超声时间(min)为：5-55分钟，优选为35-50分钟。
步骤(2)中水与提取液的体积比为：4：1-15：1，优选为8：1-12：1。
试验结果表明，当低共熔溶剂为氯化胆碱-甘油(1：2.5-5.5)或者脯氨酸-甘油(1：2.5-5.5)时，黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、野黄芩苷的提取效率均较高。
具体地，本发明包括以下步骤：
1)将干燥黄芩粉碎，过100目筛，加入低共熔溶剂提取溶剂，提取剂为50-100％DES水溶液，低共熔溶剂提取剂的用量为0.6-3.4ml/100mg，涡旋3min，提取5-55分钟，离心25min，得到黄酮类化合物的提取液；
2)提取液加入水进行稀释，水和提取液的体积比为10:1，后涡旋混合30s；将稀释混合后的提取液经0.22μm过滤膜过滤，去除杂质，得到黄酮类化合物的精制提取液。
本发明的优点是：
该提取方法对于黄酮类成分提取效率更高，提取条件温和，操作简便同时该类具有提取剂不燃爆、不挥发、损耗小、耗能低、等特点，可用于黄酮类化合物高效绿色规模化生产和实现黄芩资源的综合利用。
【附图说明】
图1是实施例1黄酮类标准品混合溶液的高效液相色谱图。
色谱峰从左至右依次为野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素。
图2是实施例2黄芩中黄酮类物质的高效液相色谱图。
【具体实施方式】
本发明将低共熔溶剂用于黄芩的处理，并借助于高效液相色谱对黄酮苷类物质进行灵敏检测。具体步骤如下：
实施例1
1)称取一定量的野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素五种黄酮苷类物质的标准品，加入甲醇配成野黄芩苷、黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素五种黄酮类物质的混合溶液；
2)采用高效液相色谱仪紫外检测器检测5种黄酮类成分
液相条件：有机相为检测，水相为0.5％磷酸水溶液，采取梯度洗脱程序，梯度程序为见表1；流速为1mL·min-1，柱温为25℃，检测波长为278nm，进样10μL检测，色谱图见图1。
表1.梯度洗脱程序
实施例2
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为1:4的氯化胆碱和1,2-丙二醇，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷82.74mg/g，黄芩苷123.3mg/g，汉黄芩苷23.85mg/g，黄芩素0.47mg/g，汉黄芩素0.24mg/g。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
实施例3
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为1:4的氯化胆碱和乙二醇，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷103.61mg/g，黄芩苷119.21mg/g，汉黄芩苷20.08mg/g，黄芩素3.69mg/g，汉黄芩素0.94mg/g。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
实施例4
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为1:4的氯化胆碱和甘油，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷96.38mg/g，黄芩苷122.07mg/g，汉黄芩苷28.0mg/g，黄芩素2.55mg/g，汉黄芩素0.63mg/g。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
实施例5
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为1:4的氯化胆碱和1,4-丁二醇，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷68.84mg/g，黄芩苷138.62mg/g，汉黄芩苷23.9mg/g，黄芩素0.28mg/g，汉黄芩素0.10mg/g。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
实施例6
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为1:4的氯化胆碱和乳酸，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷36.57mg/g，黄芩苷42.54mg/g，汉黄芩苷11.25mg/g，黄芩素未检出，汉黄芩素未检出。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
实施例7
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为1:1:3的氯化胆碱、苹果酸、水，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷60.62mg/g，黄芩苷100.87mg/g，汉黄芩苷19.1mg/g，黄芩素0.45mg/g，汉黄芩素0.21mg/g。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
实施例8
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为1:1:2的氯化胆碱、葡萄糖、水，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷31.86mg/g，黄芩苷89.62mg/g，汉黄芩苷20.16mg/g，黄芩素0.56mg/g，汉黄芩素0.13mg/g。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
实施例9
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为1:4的脯氨酸和甘油，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷74.84mg/g，黄芩苷178.68mg/g，汉黄芩苷35.5mg/g，黄芩素1.69mg/g，汉黄芩素0.56mg/g。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
实施例10
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为5:3:8的脯氨酸、葡萄糖、水，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷60.76mg/g，黄芩苷157.92mg/g，汉黄芩苷29.83mg/g，黄芩素0.9mg/g，汉黄芩素0.27mg/g。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
实施例11
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为1:1:5的脯氨酸、果糖、水，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷47.91mg/g，黄芩苷137.72mg/g，汉黄芩苷26.37mg/g，黄芩素0.34mg/g，汉黄芩素0.12mg/g。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
实施例12
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为1:1:3的柠檬酸、果糖、水，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷101.25mg/g，黄芩苷53.96mg/g，汉黄芩苷18.98mg/g，黄芩素0.15mg/g，汉黄芩素0.13mg/g。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
实施例13
1)低共熔溶剂的制备：摩尔比为1:1:5的柠檬酸、葡萄糖、水，在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)取步骤(1)中得到的低共熔溶剂，分别加水制得75％低共熔溶剂提取剂，称取黄芩粉末100mg，精密称定，加入2.0mL的75％低共熔溶剂提取剂，涡旋3min，超声30min，3500rpm离心25min，精密移取上清液1.0mL于10mL量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，涡旋2min，0.22μm滤膜滤过，即得样品溶液。
3)将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。提取黄酮类化合物的含量结果为野黄芩苷40.58mg/g，黄芩苷25.59mg/g，汉黄芩苷5.56mg/g，黄芩素0.06mg/g，汉黄芩素0.13mg/g。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。
由实施例2-13结果分析，当低共熔溶剂为氯化胆碱-甘油(1：4)或者脯氨酸-甘油(1：4)时，黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、野黄芩苷的提取效率均较高。明显优于其它低共熔溶剂的提取效率。
实施例14
选择不同比例氯化胆碱-甘油作为低共熔溶剂提取黄芩中有效成分，其结果如下：
结果表明，氯化胆碱-甘油比例在1：2.5-5.5间，黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、野黄芩苷提取相关相当。
实施例15
选择不同比例脯氨酸-甘油作为低共熔溶剂提取黄芩中有效成分，其结果如下：
结果表明，脯氨酸-甘油比例在1：3.5-4.5间，黄芩中黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷、汉黄芩素、野黄芩苷提取相关最高。
实施例16
响应曲面法优化提取条件(以脯氨酸-甘油作为低共熔溶剂)
1)配制脯氨酸和甘油的低共熔溶剂：摩尔比为1:4的脯氨酸和甘油在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)干燥黄芩粉碎，过100目筛，取100毫克黄芩粉末加0.6-3.4ml的50-100％的1)制备所得低共熔溶剂水溶液，涡旋3min，超声提取5-55分钟，移取上清液，得黄酮类化合物提取液；
3)将步骤2)得到的黄酮类化合物提取液加水稀释10倍，涡旋2min，经过0.22μm过滤膜过滤，去除杂质，得到过滤后的提取液。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。选择最优提取条件为66.7％的DES水溶液，2.4mL/100mg提取剂用量，超声时间为42min。
实施例17
一种利用低共熔溶剂提取黄芩叶中黄酮类化合物的方法，包括以下步骤：
1)配制脯氨酸和甘油的低共熔溶剂：摩尔比为1:4的脯氨酸和甘油在无水条件下搅拌，50℃加热直至形成均一稳定的透明溶液，密封保存。
2)干燥黄芩粉碎，过100目筛，取50毫克黄芩粉末加1.2ml的66.7％的1)制备所得低共熔溶剂水溶液，涡旋3min，超声提取42分钟，移取上清液，得黄酮类化合物提取液；
3)将步骤2)得到的黄酮类化合物提取液加水稀释10倍，涡旋2min，经过0.22μm过滤膜过滤，去除杂质，得到过滤后的提取液。
将得到的提取液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。色谱图见图2。黄酮类化合物含量测定结果为：野黄芩苷74.05mg/g，黄芩苷176.27mg/g，汉黄芩苷35.96mg/g，黄芩素1.76mg/g，汉黄芩素0.6mg/g。
实施例18
1)按药典方法的含量测定项下黄芩苷供试品溶液的制备方法：取黄芩中粉0.3g，精密称定，
加70％乙醇40ml，加热回流3小时，防冷，滤过，滤液置100ml量瓶中，用少量70％乙醇
分次洗涤容器和残渣，洗涤滤入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2)取黄芩中粉0.3g，精密称定，加入66.7％的DES(脯氨酸-甘油，1：4)水溶液，涡旋3min，
超声42min，取上清液1.0ml于10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。
3)步骤1)和步骤2)中供试品溶液用高效液相色谱仪进样10μL检测，应用实例1项下检测条件进行检测。单纯以黄芩苷作为评价指标，结果表明，药典方法测定黄芩苷含量为143.78mg/g，本发明方法测定黄芩苷含量为175.88mg/g，故本发明较药典方法，具有提取效率高，溶剂使用量少，污染少，制备过程简便的优点。
以上所述，仅为本发明部分具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.萃取剂-低共熔溶剂在中药有效成分测定中的应用，其特征在于，所述的中药为含有黄酮类成分的中药。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的中药为黄芩。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述的低共熔溶剂选自氯化胆碱-1,2-丙二醇1：3.5-4.5，氯化胆碱-甘油1：2.5-5.5，氯化胆碱-1,4-丁二醇1：3.5-4.5，氯化胆碱-乳酸1：3.5-4.5，氯化胆碱-乙二醇1：3.5-4.5，氯化胆碱-苹果酸-水1：1：2.5-3.5，氯化胆碱-葡萄糖-水1：1：1.5-2.5，脯氨酸-甘油1：2.5-5.5，脯氨酸-葡萄糖-水4.8-5.2：2.8-3.2：8，脯氨酸-果糖-水1：1：4.5-5.5，柠檬酸-果糖-水1：1：2.5-3.5，柠檬酸-葡萄糖-水1：1：4.5-5.5。
4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，包括如下步骤：
1)将干燥黄芩粉碎，加入低共熔溶剂，在超声条件下，提取，得到黄酮类化合物的提取液；
2)提取液加入水进行稀释，涡旋混合；过滤，除杂，得到黄酮类化合物的精制提取液。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤1)中低共熔溶剂的体积浓度为50-100％，优选为65-70％。
6.如权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤1)中提取剂的用量为：0.6-3.4mL/100mg，优选为：2-2.8。
7.如权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤1)中超声的时间为：5-55分钟，优选为：35-50min。
8.如权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤2)中水与提取液的体积比为：4：1-15：1，优选为8：1-12：1。
9.如权利要求1-7任何一项所述的应用，其特征在于，所述的低共熔溶剂选自氯化胆碱-甘油1：2.5-5.5、脯氨酸-甘油1：2.5-5.5。
10.如权利要求2-9任何一项所述的应用，其特征在于，所述的黄芩可以用黄芪、甘草、葛根、苦参代替。
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