CN100363318C - 一种五味子醇甲的提取工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种五味子醇甲的提取工艺，该工艺为：五味子在经过溶剂法提取后，将含有五味子醇甲的提取液进行萃取，其特征在于将含有五味子醇甲的萃取物经过柱层析分离后，将含有五味子醇甲的洗脱液中的洗脱溶剂回收，所得浓缩物即为五味子醇甲。本发明具有五味子醇甲纯度高、收率高、品质稳定、提取工艺简单经济的等特点。

Description

一种五味子醇甲的提取工艺

技术领域：

本发明所要保护的技术方案属于提取五味子醇甲工艺的技术领域。

背景技术：

五味子中包括五味子甲素、五味子乙素、五味子醇甲、五味子醇乙等多种成分。五味子为中医常用的收敛固涩，益气生津，补肾宁心、止咳镇静的药物。五味子中主要含有挥发油，木脂素等成分，五味子醇甲(schisandrin)是一种藏于五味子中的全天然成分，属于木脂素类固体粉末物质，《中国药典》(2000年版中药一部)规定药用五味子中五味子醇甲的重量含量不低于0.4％。随着纯度的增高，颜色由深变浅，直至白色粉末。通过研究发现并经实验证明：五味子醇甲可以用作保健食品的功能添加剂以及药品开发的原料，因此对五味子醇甲提取工艺的研究也越来越迫切，而目前国内外对五味子醇甲的提取方法报道极少。现已知五味子醇甲的提取有以下二种方法：一种为化学溶剂提取法，将五味子粉碎，加乙醇浸泡并在恒温水浴上回流数小时，溶液过滤，回收溶剂，即可获得五味子醇甲。以五味子醇甲重量含量在0.4％的五味子原药为例，(以下同)此种方法从五味子原药中提取五味子醇甲的提取率一般在0.2％左右，但是纯度仅在2％左右，颜色为淡褐色。另一种为超临界流体萃取方法，将五味子粉碎后用CO₂超临界设备直接进行萃取，即可获得五味子醇甲，其原药中五味子醇甲的提取率接近0.4％，但是纯度也仅在10％左右，颜色为深绿色。同时萃取设备复杂，投资大，操作要求严格，运行成本高。综合以上两种方法，它们共同存在的缺陷在于所得五味子醇甲的纯度都不高。

发明内容：

本发明所要解决的技术问题是：提供一种具有较高提取率、同时能提高品质纯度、工艺简单经济的五味子醇甲提取方法。

解决上述技术问题的方案是：一种五味子醇甲的提取工艺，五味子在经过溶剂法提取后，将含有五味子醇甲的提取液进行萃取，再将含有五味子醇甲的萃取物经过柱层析分离后，将含有五味子醇甲的洗脱液中的洗脱溶剂回收，所得浓缩物即为五味子醇甲。对于原药中五味子醇甲重量含量达到0.4％五味子而言采用上述方法获得五味子醇甲的纯度可达到50％或50％以上，为淡绿色粉末，而且收率不低于0.2％。

上述层析过程中，使用的吸附剂为硅胶粉末，在层析柱中，吸附剂与上样量重量比不小于0.5，较佳的重量比为吸附剂∶上样量＝0.8-1.2∶1；洗脱液为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂，二者混合的体积比为石油醚∶乙酸乙酯＝10-5∶1，较佳的体积比为8.5-7.5∶1，洗脱收集至无醇甲时，停止洗脱，五味子醇甲包含在洗脱液中。

上述层析过程还可以设定成两道层析过程，即首先将含有五味子醇甲的萃取物，按照萃取物：硅胶不大于1.5的重量比添加硅胶混合均匀后，将混合物上层析柱用石油醚进行洗脱，洗脱至石油醚无颜色时，停止洗脱，取出含五味子醇甲的吸附剂部分，将该部分上第二道层析柱，第二道层析柱使用的洗脱液为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂，二者混合的体积比为石油醚∶乙酸乙酯＝10-5∶1，洗脱收集至无醇甲时，停止洗脱，五味子醇甲包含在洗脱液中里。两道层析柱中的吸附剂为硅胶粉末，在层析柱中，吸附剂与上样量的重量比不小于0.5。这一过程的优化方案是：五味子醇甲的萃取物按照萃取物∶硅胶＝0.8-1.2∶1的重量比添加硅胶混合均匀，两次层析按照吸附剂∶上样量＝0.8-1.2∶1的重量比装柱，第二道层析洗脱液为石油醚∶乙酸乙酯＝8.5-7.5∶1的体积比混合而成。

第一道层析洗脱时，由于石油醚的极性低，因此五味子醇甲不易被洗脱而包含在硅胶中，使一些极性低的杂质被洗脱，第二道层析洗脱时，由于洗脱剂中增加了乙酸乙酯，改善了洗脱剂的极性，从而将五味子醇甲洗脱下来。

五味子醇甲的溶剂法提取过程为：将五味子粉碎加入乙醇(40％-95％V/V)后进行不少于两次的回流、冷却、过滤；首次回流加入3-4倍五味子重量的乙醇，将冷却、过滤所得药渣再加入2-3倍量的乙醇进行一次或一次以上的回流、冷却、过滤；合并所得的乙醇提取液，回收乙醇，得到浸膏状的五味子醇甲提取物。

将含有五味子醇甲的提取液进行萃取的过程为：将五味子提取液与不小于其0.8倍体积的水混合，再加入石油醚，所用石油醚的体积不小于五味子提取液和水混合后的总体积的0.8倍，最好为0.8-1.2倍体积萃取后取其分离水层，将分离出的水层按照初次萃取的方法同样再至少萃取2次合并所得的石油醚提取液，回收石油醚，即可得到五味子醇甲萃取物。

将含有五味子醇甲的洗脱液中的洗脱溶剂回收过程是指：将含有五味子醇甲的洗脱液中用水浴等设备通过常压蒸馏法回收，根据石油醚与乙酸乙酯的沸点与醇甲不一样而分别进行蒸馏回收。

经过实验发现：硅胶对五味子醇甲的吸附专属性特别强，吸附层的分界尤为明显清晰。此外层析滤出液的其它有用成分损失少，可以作为提取五味子甲素、五味子乙素的原料。

本发明的积极效果体现在：1、以原药中五味子醇甲重量含量达到0.4％五味子为例，本发明采用吸附层析法来提取五味子醇甲，具有很高的提取率和纯度，五味子醇甲的提取率最高可接近0.4％，纯度可达到50％以上。2、本发明同时还具有工艺简单经济、五味子醇甲性质稳定优点。3、本发明特别之处是采用硅胶作为吸附剂，它对五味子醇甲的吸附专属性特别强，因此提取的纯度也高，提取后的五味子可作为提取五味子甲素、五味子乙素的原料，经济效益更具显著。

具体实施方式：

具体实施方式1是一种优选的五味子醇甲的提取工艺，其工艺过程如下：

1、将甘肃产北五味子5000克粉碎到10-30目之间，加入15升的95％V/V的食用乙醇(以下同)，用回流提取罐中回流120分钟，冷却至室温，抽滤，滤液另置。

2、将抽滤所得药渣再加入10升乙醇，回流120分钟，冷却至室温，进行第二次抽滤，滤液另置。

3、将第二次抽滤所得药渣再加入10升乙醇，回流120分钟，冷却至室温，进行第三次抽滤。合并三次所得的无水乙醇滤液，蒸馏回收乙醇，使滤液浓缩得到浸膏状五味子醇甲提取物。

4、将上述浸膏用同重量的蒸馏水混合，混合物中加入与混合物重量相同的沸程为60-90℃上海恒源牌(以下同)石油醚，剧烈振摇30分钟，分离水层。

5、将上述过程4所得的水层加入与过程4重量相同沸程为60-90℃石油醚，剧烈振摇30分钟，分离水层。

6、重复试验步骤5二次，并与实验步骤4和5四次所得的石油醚提取液合并，回收石油醚，即可得到五味子醇甲萃取物150克。

7、首先将含有五味子醇甲的萃取物，按照萃取物∶硅胶＝1∶1的重量比添加硅胶混合均匀后待用。混合物重量为300克。

8、设置2个层析柱，柱高均为30cm，柱径为10cm，吸附剂为青岛海洋牌目数为100目硅胶，硅胶装填量为15cm，重量约合为300克。

9、将步骤7所制得的300克混合物上第1个层析柱，用60-90℃石油醚进行洗脱，洗脱液流速为3ml/分钟洗脱至石油醚无色时，停止洗脱，取出含五味子醇甲的吸附剂部分。该部分吸附剂位于层析柱的上层。

10、将步骤9所制得的五味子醇甲的吸附剂部分上第2个层析柱，洗脱液为石油醚和上海荣润牌乙酸乙酯(的混合溶剂，二者混合的体积比为石油醚∶乙酸乙酯＝8∶1，洗脱液流速为3ml/分钟洗脱至醇甲出现时开始收集，收集至无醇甲时，收集至无醇甲时(TLC薄层层析鉴别法判定)停止洗脱。取洗脱液，该洗脱液中含有五味子醇甲。

11、将含有五味子醇甲的洗脱液用水浴加热，通过常压蒸馏回收石油醚和乙酸乙酯，到石油醚、乙酸乙酯收集完毕后停止(TLC薄层层析鉴别法判定)，得到五味子醇甲，其性状为淡绿色粉末的结晶粉末。天平称重得重量17.5克。

12、对五味子醇甲进行检验：

五味子原药中五味子醇甲的重量含量为0.8％，检验方法是利用高效液相色谱法测得五味子。

得到其收率为：0.35％。取中国药品生物制品鉴定所提供的五味子醇甲纯品对照品(用于含量测定用)，精密称取五味子醇甲对照品10mg，置50ml容量瓶中，用甲醇稀释到刻度，摇匀。精密取五味子醇甲对照液3ml置10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得作为对照品溶液。

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水(13∶7)为流动相；检测波长为250nm。理论板数按五味子醇甲峰计算应不低于2000。

对照品溶液的制造备：取五味子醇甲对照品15mg，精密称定，置50ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得(每1ml含五味子醇甲0.3mg)。

供试品溶液的制备：取本法所得提取物约30mg，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇约18ml，超声处理20分钟，取出，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，即得。

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定纯度为55.6％。

具体实施方式2：

本实施方式与具体实施方式1的不同处在于：合并具体实施方式1中的步骤8、9、10，其它相同，不同处具体为：

设置1个层析柱，将步骤7所制得的300克混合物上直接上这一个层析柱，洗脱液为石油醚和乙酸乙酯，洗脱至醇甲出现时开始收集，收集至无醇甲时，收集至无醇甲时(TLC薄层层析鉴别法判定)停止洗脱。取洗脱液，该洗脱液中含有五味子醇甲。

按同样方法测得：重量：19.1g，收率：0.38％，纯度：48.7％。

Claims (5)

1.一种五味子醇甲的提取工艺，五味子在经过溶剂法提取后，将含有五味子醇甲的提取液进行萃取，将含有五味子醇甲的萃取物经过柱层析分离后，将含有五味子醇甲的洗脱液中的洗脱溶剂回收，其特征在于：层析过程设定成两道层析过程，首先将含有五味子醇甲的萃取物，按照萃取物：硅胶不大于1.5的重量比添加硅胶混合均匀后，将混合物上层析柱用石油醚进行洗脱，洗脱至石油醚无颜色时，停止洗脱，取出含五味子醇甲的吸附剂部分，将该部分上第二道层析柱，第二道层析柱使用的洗脱液为石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂，二者混合的体积比为石油醚∶乙酸乙酯＝10-5∶1，两道层析柱中的吸附剂为硅胶粉末，在层析柱中，吸附剂与上样量的重量比不小于0.5。

2.根据权利要求1所述一种五味子醇甲的提取工艺，其特征在于：五味子醇甲的萃取物按照萃取物∶硅胶＝0.8-1.2的重量比添加硅胶混合均匀，两次层析按照吸附剂∶上样量＝0.8-1.2∶1的重量比装柱，第二道层析洗脱液为石油醚∶乙酸乙酯＝8.5-7.5∶1的体积比混合而成。

3.根据权利要求1至2任一所述一种五味子醇甲的提取工艺，其特征在于：五味子醇甲的溶剂法提取过程为：将五味子粉碎加入40％-95％V/V乙醇后进行不少于两次的回流、冷却、过滤；首次回流加入3-4倍五味子重量的乙醇，将冷却、过滤所得药渣再加入2-3倍量的乙醇进行一次或一次以上的回流、冷却、过滤；合并所得的乙醇提取液，回收乙醇，得到浸膏状的五味子醇甲提取物。

4.根据权利要求1至2任一所述一种五味子醇甲的提取工艺，其特征在于：将含有五味子醇甲的提取液进行萃取的过程为：将五味子提取液与不小于其0.8倍体积的水混合，再加入石油醚，所用石油醚的体积不小于五味子提取液和水混合后的总体积的0.8倍，萃取后取其分离水层，将分离出的水层按照初次萃取的方法同样再至少萃取2次合并所得的石油醚提取液。

5.根据权利要求1至2任一所述一种五味子醇甲的提取工艺，其特征在于：将含有五味子醇甲的洗脱液的洗脱溶剂回收过程是指：将含有五味子醇甲的洗脱液用水浴设备通过常压蒸馏法回收。