CN104987354A

CN104987354A - 制备莫诺苷的方法

Info

Publication number: CN104987354A
Application number: CN201510438773.2A
Authority: CN
Inventors: 陈有根; 常增荣; 傅欣彤; 郭洪祝
Original assignee: BEIJING DRUG CONTROL INST
Current assignee: BEIJING DRUG CONTROL INST
Priority date: 2015-07-23
Filing date: 2015-07-23
Publication date: 2015-10-21
Anticipated expiration: 2035-07-23
Also published as: CN104987354B

Abstract

本发明公开一种制备莫诺苷的方法。该方法，包括如下步骤：1)将山茱萸进行渗漉提取，得到山茱萸提取液；2)浓缩所述步骤1)得到的山茱萸提取液浓缩，得到山茱萸浸膏；3)得到所述山茱萸浸膏，与硅胶混匀、干燥、研细后，装填于色谱柱中；所述色谱柱中已装有柱层析用空白硅胶；4)用洗脱液对所述色谱柱进行洗脱并收集流分，再除去所述收集到的流分中的洗脱液，用甲醇溶解残留物，重结晶，得到所述莫诺苷。该方法所得产物纯度大于70％，可用于进一步纯化、生产高纯度莫诺苷，也可以直接用于生产各种目标产品。本方法既适用于实验室小规模制备，也适用于大规模工业生产。

Description

制备莫诺苷的方法

技术领域

本发明属于原料药品制备领域，涉及一种制备莫诺苷的方法。

背景技术

莫诺苷(morroniside)为中药山茱萸的主要成分，其中莫诺苷具有神经保护、抗凝血及血小板聚集、保护心肌细胞、抑制黑素形成、促进骨折愈合等方面等药效作用，尤其，对缺血性脑损伤具良好的有保护和修复作用。目前，莫诺苷主要用于中药山茱萸及含山茱萸的中成药含量测定。但由于莫诺苷稳定性较差，遇热、遇酸碱均易发生分解，导致其生产、制备成本高，使用推广受阻。

已有诸多关于莫诺苷制备方法的报道(李小娜等.山茱萸中马钱苷和莫诺苷对照品的制备,中草药,2006,37(8):1168-1170)，该文报道了水提—醇沉—AB-8大孔吸附树脂富集—硅胶粗分—高效液相色谱分离的方法，从山茱萸药材中制备莫诺苷。

CN101385735A(200710113824.X)中也公开了莫诺苷的制备方法及其新用途。CN1569867A(200410014771.2)公开了山茱萸提取物莫诺苷的制备方法和用途，其制备方法包括山茱萸药材用乙醇提取，提取液减压浓缩，浓缩液加水沉淀，上清液用大孔吸附树脂或活性炭进行柱层析，除去杂质，乙醇梯度洗脱，洗脱液减压浓缩并干燥，经反相硅胶分离得到山茱萸提取物莫诺苷，其医药新用途为在制备防治糖尿病血管病变药物中的应用。

CN102477053A(201010557777.X)公开了一种从山茱萸中提取莫诺苷和马钱苷的方法。工艺步骤包括70％乙醇超声提取，正丁醇萃取，萃取液浓缩回收正丁醇至干，得到粗苷，以正丁醇-乙醇-水为两相溶剂系统，将上述粗苷用下相溶解，高速逆流色谱分离，流出物分别减压蒸干，分别将干燥物用正丁醇和乙酸乙酯结晶2-3次，滤出结晶分别干燥即得产品。据信采用该发明生产莫诺苷和马钱苷，工艺简单、成本低、产品含量高。

CN101974048A(201010210730.6)公开了一种从山茱萸中提取莫诺苷的方法。工艺步骤包括原料加乙醇超声提取，提取液回收乙醇，过极性大孔树脂吸附，水→醇梯度洗脱，生物膜纯化浓缩，水饱和正丁醇萃取，再经乙酸乙酯二氯甲烷混合溶液结晶，减压干燥得产品。据信该发明生产过程简单、可操作性强，所得产品含量高、成本低。该方法具体包括以下几个步骤：1)超声醇提：将山茱萸原料粉碎加4～15倍量乙醇，常温超声提取1～3小时提取2～3次；2)大孔树脂吸附：将提取液回收乙醇，过滤，加入大孔树脂柱吸附，水→醇梯度洗脱，收集莫诺苷流分；3)膜过滤：上述莫诺苷流分加入超滤膜超滤，再加入纳滤膜纳滤，收集浓缩液；4)萃取；将上述浓缩液加水饱和正丁醇萃取3～5次，合并萃取液，减压浓缩，得浓缩浸膏；5)结晶：将浸膏溶于乙酸乙酯，除去不溶物和水层，加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯至小体积，滤过加入二氯甲烷，有白色沉淀析出，放置结晶，重复结晶2～3次，减压干燥即得莫诺苷产品。

CN102329353A(201110280760.9)公开了一种莫诺苷的制备方法，采用:山茱萸药材粉碎后水洗醇沉；醇沉液浓缩，调节pH值至1～3上非极性～弱极性的大孔树脂，水洗至无色，再用10％～30％的乙醇溶液洗脱3～5倍柱体积，收集洗脱液，浓缩；浓缩液上非极性～弱极性的大孔树脂，水洗，再用10％～30％的乙醇溶液洗脱3～5倍柱体积，收集洗脱液，低温减压干燥，结晶即得。

然而，本领域仍然需要有新的制备莫诺苷的方法，特别是需要具有优异效能的方法来制备莫诺苷。

发明内容

本发明的目的是提供一种制备莫诺苷的方法，并且期待该方法具有优异的工艺效能。

为此，本发明一个方面提供了制备莫诺苷的方法，包括如下步骤：

1)将山茱萸原料，用含水甲醇进行渗漉，得到山茱萸提取液；

2)将所述步骤1)得到的山茱萸提取液进行浓缩，得到山茱萸提取液的浸膏；

3)将所述步骤2)得到的山茱萸浸膏与硅胶混匀、干燥、研细后，装填于色谱柱中；所述色谱柱中已装有柱层析用空白硅胶；

4)用洗脱液对所述色谱柱进行洗脱，以相当于所述色谱柱中空白硅胶柱体积的流出液为1个流分，按照下述洗脱法a～洗脱法c中的任意一种进行洗脱并收集流分，用薄层色谱法合并相似流分，再除去所述收集到的流分中的洗脱液，用甲醇溶解残留物，得甲醇溶解液；

其中，

所述洗脱法a为：弃去最先洗脱出的第1～第3个流分，收集第4～第7个流分；

所述洗脱法b为：弃去最先洗脱出的第1～第5个流分，收集第6～第9个流分；

所述洗脱法c为：弃去最先洗脱的第1～第7个流分，收集第8～第12个流分。

5)将步骤4)所得甲醇溶解液进行重结晶，得到产物。

根据本发明的方法，其中步骤1)中，所述山茱萸可以为原药材，也可以为粉末，如为粉末，其目数为10-60目，优选10-20目。

根据本发明的方法，其中步骤1)中，所用溶剂为含水甲醇，水与甲醇的体积比为70：30～5：95；或者是30～95％甲醇溶液；例如是50～90％甲醇溶液；例如是60～90％甲醇溶液。

根据本发明的方法，其中步骤1)中，的渗漉法是在室温状态下，温度为室温(5℃～35℃，优选20℃～25℃。

根据本发明的方法，其中步骤2)中，每毫升山茱萸提浸膏中，相当于含有所述山茱萸原料的干重为2g～10g，优选4～5g。

根据本发明的方法，其中步骤3)中，所述硅胶的目数为粒径规格为200目～300目；所述用于与山茱萸浸膏混匀的硅胶的用量，为所述山茱萸原料干重的5％～15％，优选7～10％；所述色谱柱中，已装填有柱层析用空白硅胶，所述柱层析用空白硅胶的用量为所述山茱萸原料干重的10％～40％，优选14-20％；所述色谱柱的径高比为1：0.5～1：5，优选1：1～1：3，优选1：1～1：1.5。

根据本发明的方法，其中所述步骤4)中，洗脱液由二氯甲烷与甲醇组成，依次是体积比为100：0、100：10、100：30混合的混合液；每种比例的混合液使用2～4个柱体积(即相当于所述色谱柱中空白硅胶柱体积)。

根据本发明的方法，其中所述步骤5)中，重结晶溶剂为甲醇或乙醇。

此外，上述方法的步骤1)中，所述渗漉法可按照包括如下步骤的方法进行：将所述山茱萸浸润于溶剂后，装入底部装有脱脂棉的渗漉器中，并像所述渗漉器中加入溶剂，使所述渗漉器中的溶剂液面高出所述山茱萸面5厘米～15厘米，放置12小时～48小时后，收集渗漉液，得到所述山茱萸提取液；所述溶剂为含水甲醇，温度为5℃～35℃，特别是室温。

本发明通过缩小硅胶柱的径高比，使用径高比小于等于1：5的硅胶柱，减少洗脱时间和洗脱液的用量，以达到降低生产成本的目的，且该方法所用空白硅胶用量小(为药材干重的10％～40％)，经过1次上柱后，再进行重结晶，即可得到纯度大于70％的莫诺苷，该产品可以用于进一步精制、纯化，生产高纯度莫诺苷，也可直接用于生产各种目标产品。该方法具有生产周期短，溶剂用量小，产品成本低等优点，既适用于实验室小规模制备，也适用于大规模工业生产。

经测定，本发明方法的莫诺苷转移率达80％以上，例如实施例1的转移率达82.7％。术语“转移率”是中药领域技术人员公知的，其表示药材中的目标物总量转移到方法最终提取物中的目标物总量的转移百分率，即方法最终提取物中目标物含量相对于药材中目标物总量的百分数。

本发明具有以下优点：(1)采用体积比为30％以上的含水甲醇提取，莫诺苷提取转移率得到了提高，从而有利于莫诺苷产率的提高；(2)由于本方法采用的是体积比为30％以上的含水甲醇提取，减少了醇沉(目的是除去部分多糖)过程，缩短了生产周期；(3)本发明采用渗漉法，可以大幅度提高提取液浓度，缩短了提取液浓缩受热时间，减少了莫诺苷在提取液浓缩过程中受热时间长而发生分解；(4)由于本发明采用渗漉法，大幅度提高提取液中莫诺苷的含量，避免了进一步大孔树脂法精制过程，一方面减少了工艺过程，降低了生产成本，另一方面，也减少了上大孔树脂后的浓缩过程，避免莫诺苷浓缩过程中受热分解；本发明采用的渗漉法是在室温状态下进行，温度为室温，同样可以加热回流提取法过程中，莫诺苷浓缩过程中受热分解；(6)本发明采用的柱层析硅胶为200～300目，使色谱柱单位体积的吸附面积大幅度提高，因此显著提高了分离效率；(7)本发明采用的层析硅胶柱的径-高比为1：0.5～1：5，比常规径-高比大于1：10的硅胶柱缩短了分离时间，不仅缩短了生产周期，也克服了莫诺苷在色谱柱上由于吸附时间长而导致的分解比例增大的缺点。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不限于以下实施例。

实施例

1)取山茱萸2kg，粉碎成粗份(20目)，以70％甲醇(水与醇的体积比为30：70)为溶剂，用渗漉法提取，具体方法为：将所述山茱萸置于密封容器中，加入溶剂甲醇，浸润2小时，使山茱萸充分膨胀，分次均匀地装入底部垫有多层纱布的渗漉器中，每次装好后用木棒压紧，装完后在山茱萸上面覆盖纱布并压上重物，打开渗滤器下口开关，再慢慢地从渗漉器上部加入70％甲醇，当液体刚开始自下口流出时，关闭开关，并保持上层液面高出药面5厘米为止，然后加盖放置24小时后，打开下口开关，使渗漉液缓缓流出，收集6L渗漉液，得到山茱萸提取液；

2)将所述步骤1)得到的山茱萸提取液浓缩至400ml，得到山茱萸浸膏；

3)将所述步骤2)得到的山茱萸浸膏与粒径规格为200目～300目的柱层析硅胶220g混匀，干燥，研细后，装填于已填有440g柱层析用空白硅胶(粒径规格为200目～300目)的色谱柱中，该硅胶色谱柱的径高比为1：1；

4)用由二氯甲烷与甲醇组成，依次以体积比为100：0、100：10、100：30混合的混合液为洗脱液，进行洗脱，每种比例的混合液使用2个柱体积，流速为200ml/小时，以200ml为1个流分，弃去最先洗脱出的第1～第3个流分，收集第4～第7个流分，合并所收集的流分，浓缩，用甲醇溶解残留物；

5)将步骤5)所得甲醇溶解液用甲醇重结晶，得到白色粉末，经检测确认，该白色粉末为纯度为82％的莫诺苷；分别测定步骤1)投料药材和该白色粉末中莫诺苷的含量并以此计算转移率。莫诺苷的结构式如以下式I所示。

Claims

1.制备莫诺苷的方法，包括如下步骤：

其中，

5)将步骤4)所得甲醇溶解液进行重结晶，得到产物。

2.根据权利要求1的方法，其中步骤1)中，所述山茱萸可以为原药材，也可以为粉末，如为粉末，其目数为10-60目，优选10-20目。

3.根据权利要求1的方法，其中步骤1)中，所用溶剂为含水甲醇，水与甲醇的体积比为70：30～5：95；或者是30～95％甲醇溶液；例如是50～90％甲醇溶液；例如是60～90％甲醇溶液。

4.根据权利要求1的方法，其中步骤1)中，的渗漉法是在室温状态下，温度为室温(5℃～35℃，优选20℃～25℃。

5.根据权利要求1的方法，其中步骤2)中，每毫升山茱萸提浸膏中，相当于含有所述山茱萸原料的干重为2g～10g，优选4～5g。

6.根据权利要求1的方法，其中步骤3)中，所述硅胶的目数为粒径规格为200目～300目；所述用于与山茱萸浸膏混匀的硅胶的用量，为所述山茱萸原料干重的5％～15％，优选7～10％；所述色谱柱中，已装填有柱层析用空白硅胶，所述柱层析用空白硅胶的用量为所述山茱萸原料干重的10％～40％，优选14-20％；所述色谱柱的径高比为1：0.5～1：5，优选1：1～1：3，优选1：1～1：1.5。

7.根据权利要求1的方法，其中所述步骤4)中，洗脱液由二氯甲烷与甲醇组成，依次是体积比为100：0、100：10、100：30混合的混合液；每种比例的混合液使用2～4个柱体积(即相当于所述色谱柱中空白硅胶柱体积)。

8.根据权利要求1的方法，其中所述步骤5)中，重结晶溶剂为甲醇或乙醇。

9.根据权利要求1的方法，其中步骤1)中，所述渗漉法可按照包括如下步骤的方法进行：将所述山茱萸浸润于溶剂后，装入底部装有脱脂棉的渗漉器中，并像所述渗漉器中加入溶剂，使所述渗漉器中的溶剂液面高出所述山茱萸面5厘米～15厘米，放置12小时～48小时后，收集渗漉液，得到所述山茱萸提取液；所述溶剂为含水甲醇，温度为5℃～35℃，特别是室温。

10.根据权利要求1的方法，其包括以下步骤：

1)取山茱萸2kg，粉碎成粗份(20目)，以70％甲醇为溶剂，用渗漉法提取，具体方法为：将所述山茱萸置于密封容器中，加入溶剂甲醇，浸润2小时，使山茱萸充分膨胀，分次均匀地装入底部垫有多层纱布的渗漉器中，每次装好后用木棒压紧，装完后在山茱萸上面覆盖纱布并压上重物，打开渗滤器下口开关，再慢慢地从渗漉器上部加入70％甲醇，当液体刚开始自下口流出时，关闭开关，并保持上层液面高出药面5厘米为止，然后加盖放置24小时后，打开下口开关，使渗漉液缓缓流出，收集6L渗漉液，得到山茱萸提取液；

5)将步骤5)所得甲醇溶解液用甲醇重结晶，得到白色粉末。