CN104398557A - 一种络合法制备总黄酮的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从中药材或植物中提取总黄酮的方法。该方法包括：将烘干粉碎的原料用少量的氢氧化钠水溶液润湿，拌匀放置1~3小时，装入渗漉筒，再加入络合剂水溶液进行渗漉提取，接收渗漉液，加入EDTA，并用酸将PH调为2~3，离心，沉淀另放，上清液加入正丁醇分配萃取3~5次，经薄层层析鉴别已无明显黄酮斑点后，合并正丁醇相，用蒸馏水洗至中性，减压回收正丁醇相，得到黄色提取物，与沉淀物一起干燥，即得总黄酮。络合法提取制备总黄酮，操作简便，节省溶剂，具有广泛的适用性。

Description

一种络合法制备总黄酮的方法
技术领域
本发明涉及一种络合法提取总黄酮的方法，具有广泛的适用性。
背景技术
黄酮类化合物是植物成分中分布最广的一类酚性化合物，这类化合物在自然界中以糖苷型和游离型存在，具有抗氧化、抗脑缺血、抗心肌缺血、抗心律失常、保肝、镇痛、降血脂、抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多种生物学活性，引起了国内外学者的广泛关注，对黄酮的利用已经深入到医药、日用化学、食品等各个领域。目前总黄酮的提取方法主要以乙醇为溶媒提取而来，大量的溶剂为生产带来安全隐患及能源的浪费，导致成本很高，寻找一种安全有效的提取方法尤为重要。由于黄酮化合物一般含有邻二酚羟基、3-羟基-4-酮基、5-羟基-4酮基的结构单元，故可与铝、镁、铜、锌、铁盐等发生络合反应，利用这一原理进行络合提取制备总黄酮，操作简便，节省溶剂，具有广泛的适用性。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术中不足，提供一种操作简单、成本低、生产安全、适用性广泛、有效成分含量高、得率高的总黄酮提取方法。
本发明采用的技术方案是：
以中药材或植物为原料，70℃烘干后粉碎为粗粉，加入少量的氢氧化钠水溶液润湿，拌匀放置1~3小时，装入渗漉筒，再加入含络合剂的水溶液渗漉提取，接收渗漉液，加入EDTA，并用酸将渗漏液PH调为2~3，离心，沉淀另放，上清液加入正丁醇分配萃取3~5次，经薄层层析鉴别已无明显黄酮斑点后，合并正丁醇相，用蒸馏水洗至PH为5~7，减压回收正丁醇，得到黄色提取物，与沉淀物一起干燥，即得总黄酮固体。
所述的润湿原料所用的氢氧化钠水溶液的PH为9~10，浓度为0.2％~5％，用量为原料的1~5倍。
所述的渗漏用络合剂水溶液的PH为8~9，用量为原料的3~8倍，浓度为1％~8％
所述的接收到的渗漏液PH为8~9。
所述的渗漏速度开始为30~25ml/min，2小时后调为15~10ml/min，8小时候后调为5~8ml/min。
所述的正丁醇每次用量为酸水相体积的1/3。
所述的酸为硫酸或盐酸。
所述的渗漏筒可以自制或购买。
本发明提取方法操作简单、成本低、生产周期短且安全、有效成分含量高，具有广泛适用性。
附图说明
图1 槲皮素标准品HPLC图。
图2 木犀草素标准品HPLC图。
图3 忍冬叶中的主要黄酮苷水解物HPLC图。
图4 混合标准品HPLC图（1-槲皮素；2-山奈酚；3-异鼠李素）。
图5银杏叶中的主要黄酮苷水解物HPLC图（1-槲皮素；2-山奈酚；3-异鼠李素）。
具体实施方式                  
以下结合本发明实施例对本发明进行详细说明。
实施例1
（1）络合法提取忍冬叶总黄酮
新鲜晾干的忍冬叶经70℃烘干后，粉碎为粗粉称重为1.75Kg，加入1.5倍3％的氢氧化钠水溶液润湿，拌匀放置2小时，装入渗漉筒，并加入6倍3％的三氯化铝水溶液渗漉，渗漏速度开始为30mL/min，2小时后调为15mL/min，8小时候后调为5mL/min。接收到渗漉液的PH为8~9，用20％硫酸将PH调为2~3，加入正丁醇分配萃取4次，经薄层层析鉴别已无明显黄酮斑点后，合并正丁醇相，用蒸馏水洗至PH为5~6，减压回收正丁醇，得黄棕色总黄酮，得率为6％，提取物中总黄酮含量为23%。
（2）HPLC法测定络合法提取忍冬叶总黄酮中的木犀草素、槲皮素含量
忍冬总黄酮主要为木犀草素、槲皮素苷等，参照2005版药典一部银杏叶下黄酮的测定方法，利用高效液相法测定络合法忍冬叶总黄酮中木犀草素及槲皮素含量。
仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪，四元泵，DAD检测器;分析天平（上海天平仪器厂）；超声波清洗器（美国必能信公司）
试剂：木犀草素、槲皮素购于中国药品生物制品检定所，络合法提取忍冬叶总黄酮（自制），甲醇（色谱纯，美国天地公司），盐酸、硫酸、氢氧化钠（分析纯，南京化学试剂厂）
色谱柱： Eclipse XDB-C18分离柱，4.6×150 mm，5μm；流动相：甲醇-0.4％磷酸水溶液（体积比50:50）；流速 0.8mL/min；检测波长为355nm，进样量为10μL。
标准品溶液的制备： 精密称取在60℃减压干燥2小时的槲皮素14mg、木犀草素7mg，分别至50mL、25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液，浓度均为0.28mg/mL，见图1、2（1-槲皮素，2-木犀草素）。
忍冬叶“络合法”总黄酮经盐酸水解样品溶液的制备： 精密称取忍冬“络合法”总黄酮样品200mg，分别加入甲醇-25％盐酸（体积比4：1）20mL，回流30min，放冷，转移至50mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，摇匀，测定结果见图3。
实施例2
（1）络合法提取银杏总黄酮
新鲜晾干的银杏叶经70℃烘干后，粉碎为粗粉称重为1.05Kg，加入2倍1.5％的氢氧化钠水溶液润湿，拌匀放置2小时，装入渗漉筒，并加入7倍2.6％的硫酸镁水溶液渗漉，渗漏速度开始为25mL/min，2小时后调为10mL/min，8小时候后调为5mL/min。接收到渗漉液的PH为8~9，用20％硫酸将PH调为2~3，加入正丁醇分配萃取5次，经薄层层析鉴别已无明显黄酮斑点后，合并正丁醇相，用蒸馏水洗至PH为5~6，减压回收正丁醇，得黄棕色总黄酮，得率为7.2％，提取物中总黄酮醇苷含量为12%。
（2）HPLC法测定”络合法”银杏总黄酮醇苷含量
“络合法”银杏总黄酮提取物中主要含有槲皮素、山奈素、异鼠李素的苷及其苷元，参照2005版药典一部银杏叶下黄酮的测定方法，利用高效液相法测定络合法银杏叶总黄酮中醇苷的含量。
色谱柱：Eclipse XDB-C18 150×4.6mm,柱温：30℃，流动相为甲醇-0.4%磷酸水溶液（体积比45:55），流速为0.8mL/min，进样量20μL ，检测波长为360nm 。
标准品溶液的制备：精密称取槲皮素、山奈素、异鼠李素对照品，用甲醇溶解定容，3种对照品浓度分别为32μg/mL、31μg/mL、21μg/mL，见图4（1-槲皮素；2-山奈酚；3-异鼠李素）。
“络合法”银杏叶总黄酮醇样品溶液的制备：取待测品约35mg，精密称定（精确到0.001g），加甲醇-25%盐酸溶液（体积比4:1）的混合溶液25mL，80℃水浴热回流30min，置于冷水中迅速冷却至室温，转移至50mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度定容，摇匀。用0.45μm微孔滤膜过滤，取续滤液，供高效液相色谱测定用，结果见图5。

Claims (7)

1.一种总黄酮的提取方法，其特征在于：以中药材或植物为原料，70℃烘干后粉碎为粗粉，加入少量的氢氧化钠水溶液润湿，拌匀放置1~3小时，装入渗漉筒，再加入10~80mg/mL的络合剂水溶液渗漉，接收渗漉液，加入EDTA，并用酸将渗漏液PH调为2~3，离心，沉淀另放，上清液加入正丁醇分配萃取3~5次，经薄层层析鉴别已无明显黄酮斑点后，合并正丁醇相，用蒸馏水洗至PH为5~7，减压回收正丁醇，与沉淀物一起干燥，即得总黄酮。
2.根据权利要求1所述的总黄酮提取方法，其特征是，所述的润湿原料所用的氢氧化钠水溶液PH为9~10，浓度为0.2~5%，用量为原料的1~5倍；络合剂水溶液的PH为8~9，浓度为1％~8％。
3.根据权利要求1所述的总黄酮提取方法，其特征是，所述的渗漏用络合剂包括铝、镁、铜、锌、铁的硫酸盐或盐酸盐，络合剂水溶液的量为原料的3~8倍。
4.根据权利要求1所述的总黄酮提取方法，其特征是，所述的接收到的渗漏液PH为8~9。
5.根据权利要求1所述的总黄酮提取方法，其特征是，所述的渗漏速度开始为30~25ml/min，2小时后调为15~10ml/min，8小时候后调为5~8ml/min。
6.根据权利要求1所述的总黄酮提取方法，其特征是，所述的正丁醇每次用量为酸水相体积的1/3。
7.根据权利要求1所述的总黄酮提取方法，其特征是，所述的酸为硫酸、盐酸。
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