CN108048454A - 一种磁珠法骨骼基因组dna提取试剂盒 - Google Patents

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鲁明
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    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
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Abstract

本发明提供一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，包括裂解结合液、磁珠、第一漂洗液、第二漂洗液、第三漂洗液和DNA洗脱液，本发明利用磁珠法对骨骼基因组DNA进行提取，其中裂解结合液能够快速的为磁珠结合DNA提供稳定的环境，大大增强了提取效率，另外采用96孔预分装深孔板模式，能够结合全自动核酸提取仪进行全自动DNA提取，与传统的DNA提取方法相比，极大的缩短了提取所需的时间和人力劳动，提高了整体的提取效率。

Description

一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒
技术领域
本发明属于DNA提取技术领域，尤其是涉及一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒。
背景技术
由于骨骼的特殊组织结构能够减缓DNA降解和污染，因此在其他检材条件不具备的情况下，骨骼DNA的分型检验则更多地被应用于案件鉴定中，但骨骼的结构特殊使其DNA的提取、纯度难度较大，一些传统的骨骼DNA提取方法，操作步骤复杂，且容易接触有毒有害试剂，硅珠法提取陈旧骨骼DNA，操作相对简单，但需要多次离心，难免造成样本的损失，因此，目前磁珠法提取骨骼DNA开始被应用，但是目前有些磁珠法提取纯化骨骼DNA的效果不好，严重影响后续PCR扩增及检测。
发明内容
本发明要解决的问题是提供一种能够满足检测纯度、提取速度快、提取效率高的磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：包括裂解结合液、异丙醇、磁珠、第一漂洗液、第二漂洗液、第三漂洗液和DNA洗脱液。
进一步地，所述裂解结合液的组份包括5mol/L的盐酸胍、50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液、20mmol/L的EDTA溶液和100mmol/L的氯化钠，其中，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。
进一步地，所述第一漂洗液的组份包括15mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和5mmol/L的EDTA溶液，其中所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。
进一步地，所述第二漂洗液的组份包括0.5mmolEDTA溶液、5mmol/L的Tris-HCl缓冲液和质量浓度为30％的无水乙醇，其中所述EDTA溶液和Tris-HCl缓冲液的pH值均为8.0。
进一步地，所述第三漂洗液的组份为质量浓度为70％的无水乙醇。
进一步地，所述DNA洗脱液的组份包括10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和1mmol的EDTA溶液，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。
进一步地，所述磁珠的直径在5nm-80nm之间，所述磁珠的表面分别键合硅羟基、环氧基、邻二醇基和羧基。
进一步地，所述试剂盒采用96孔预分装深孔板模式，第1列和第7列预分装的是裂解结合液和异丙醇，第2列和第8列预分装的是磁珠，第3列和第9列预分装的是第一漂洗液，第4列和第10列预分装的是第二漂洗液，第5列和第11列预分装的第三漂洗液，第6列和第12列预分装的是DNA洗脱液。
与现有技术相比，本发明具有的优点和有益效果是：
1、本发明利用磁珠法对骨骼基因组DNA进行提取，其中裂解结合液能够快速的为磁珠结合DNA提供稳定的环境，大大增强了提取效率；
2、本发明采用96孔预分装深孔板模式，能够结合全自动核酸提取仪进行全自动DNA提取，与传统的DNA提取方法相比，极大的缩短了提取所需的时间和人力劳动，提高了整体的提取效率。
附图说明
图1是本发明一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒提取DNA后纯度检测曲线图。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作详细说明。
一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：包括裂解结合液、异丙醇、磁珠、第一漂洗液、第二漂洗液、第三漂洗液和DNA洗脱液。
进一步地，所述裂解结合液的组份包括5mol/L的盐酸胍、50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液、20mmol/L的EDTA溶液和100mmol/L的氯化钠，其中，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0，在此酸碱度的环境下，能够快速为磁珠结合DNA提供稳定的环境，大大增强了提取效率。
进一步地，所述第一漂洗液的组份包括15mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和5mmol/L的EDTA溶液，其中所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。
进一步地，所述第二漂洗液的组份包括0.5mmolEDTA溶液、5mmol/L的Tris-HCl缓冲液和质量浓度为30％的无水乙醇，其中所述EDTA溶液和Tris-HCl缓冲液的pH值均为8.0。
进一步地，所述第三漂洗液的组份为质量浓度为70％的无水乙醇。
进一步地，所述DNA洗脱液的组份包括10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和1mmol的EDTA溶液，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。
进一步地，所述磁珠的直径在5nm-80nm之间，所述磁珠的表面分别键合硅羟基、环氧基、邻二醇基和羧基，DNA偶联量高，磁珠用量少，单分散可控粒径小，有利于对结合液中有限DNA的最大量吸附，提高了磁珠的灵敏性。
进一步地，所述试剂盒采用96孔预分装深孔板模式，第1列和第7列预分装的是裂解结合液和异丙醇，第2列和第8列预分装的是磁珠，第3列和第9列预分装的是第一漂洗液，第4列和第10列预分装的是第二漂洗液，第5列和第11列预分装的第三漂洗液，第6列和第12列预分装的是DNA洗脱液，此试剂盒可以配合市面上的全自动核酸提取仪smart32使用，具体板孔设置如表1所示：
表1板孔设置表
本试剂盒的使用方法为：
1、首先对未脱钙骨进行预处理：取0.1g骨粉，加入500ulTL裂解液和20ul蛋白酶K，55℃摇床过夜消化后，取400ul上清液进行后续实验。
2、将预分装深孔板颠倒混匀后瞬时离心10秒，随后撕开封膜，并在第1列和第7列加入400ul的上述上清液，并按照表2所示的运行程序表在全自动核酸提取仪上设置提取程序，然后进行全自动提取，其中设置洗脱温度为56℃。
表2运行程序
3、基因组DNA浓度及纯度实验结果：
采用超微量分光光度计ND2000检测基因组DNA的浓度和纯度，检测结果如表3所示：
表3 ND2000检测结果
如图1所示对表3中3种提取方法提取的DNA进行峰值的纯度检测，如图1所示在260nm处均有明显的吸收峰，采用此试剂盒提取出的DNA纯度均满足实验要求。
以上对本发明的一个实施例进行了详细说明，但所述内容仅为本发明的较佳实施例，不能被认为用于限定本发明的实施范围。凡依本发明申请范围所作的均等变化与改进等，均应仍归属于本发明的专利涵盖范围之内。

Claims (8)

1.一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：包括裂解结合液、磁珠、第一漂洗液、第二漂洗液、第三漂洗液和DNA洗脱液。
2.根据权利要求1所述的一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述裂解结合液的组份包括5mol/L的盐酸胍、50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液、20mmol/L的EDTA溶液和100mmol/L的氯化钠，其中，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。
3.根据权利要求1所述的一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述第一漂洗液的组份包括15mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和5mmol/L的EDTA溶液，其中所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。
4.根据权利要求1所述的一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述第二漂洗液的组份包括0.5mmolEDTA溶液、5mmol/L的Tris-HCl缓冲液和质量浓度为30％的无水乙醇，其中所述EDTA溶液和Tris-HCl缓冲液的pH值均为8.0。
5.根据权利要求1所述的一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述第三漂洗液的组份为质量浓度为70％的无水乙醇。
6.根据权利要求1所述的一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述DNA洗脱液的组份包括10mmol/L的三羟甲基氨基甲烷缓冲液和1mmol的EDTA溶液，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液和EDTA溶液的pH值均为8.0。
7.根据权利要求1所述的一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述磁珠的直径在5nm-80nm之间，所述磁珠的表面分别键合硅羟基、环氧基、邻二醇基和羧基。
8.根据权利要求1所述的一种磁珠法骨骼基因组DNA提取试剂盒，其特征在于：所述试剂盒采用96孔预分装深孔板模式，第1列和第7列预分装的是裂解结合液和异丙醇，第2列和第8列预分装的是磁珠，第3列和第9列预分装的是第一漂洗液，第4列和第10列预分装的是第二漂洗液，第5列和第11列预分装的第三漂洗液，第6列和第12列预分装的是DNA洗脱液。
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