CN107922955A - 用于产生腐胺或鸟氨酸的微生物和使用其产生腐胺或鸟氨酸的方法 - Google Patents

用于产生腐胺或鸟氨酸的微生物和使用其产生腐胺或鸟氨酸的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种产生腐胺或鸟氨酸的重组微生物，和通过使用该微生物产生腐胺或鸟氨酸的方法。

Description

用于产生腐胺或鸟氨酸的微生物和使用其产生腐胺或鸟氨酸 的方法
技术领域
本公开涉及产生腐胺或鸟氨酸的重组微生物，和使用该微生物产生腐胺或鸟氨酸的方法。
背景技术
生物胺(BA)是主要通过氨基酸脱羧或醛和酮的胺化和转氨而产生的氮化合物。这些生物胺具有低分子量且是在微生物、植物和动物中于代谢过程期间合成，因此被视为频繁发现于其细胞中的构成成分。
其中，腐胺是在革兰氏阴性细菌或真菌中发现且以高浓度存在于各种物种中，并因此预期腐胺在微生物的代谢中起重要作用。一般来说，腐胺是合成多胺尼龙-4,6(nylon-4,6)的重要原料且主要通过化学合成产生。所述化学合成是一种3步方法，包括催化氧化反应、使用氰化物化合物的反应和使用高压氢气的氢化反应。因此，需要开发涉及生物质利用的更环保且高能效的方法。
在这些情况下，公开了通过转化大肠杆菌(E.coli)和棒状杆菌属(Corynebacterium)的微生物，以高浓度产生腐胺的各种方法(国际专利公开第WO 06/005603号；国际专利公开第WO 09/125924号；钱ZD(Qian ZD)等人,生物技术与生物工程学(Biotechnol.Bioeng.)104(4):651-662,2009；施奈德(Schneider)等人,应用微生物学与生物技术(Appl.Microbiol.Biotechnol.)88(4):859-868,2010；施奈德等人,应用微生物学与生物技术95:169-178,2012)。
另一方面，鸟氨酸是广泛发现于植物、动物和微生物中的物质，且充当精氨酸、脯氨酸和多胺生物合成的前体。另外，鸟氨酸在高等生物体的体内代谢期间由氨基酸或氨产生尿素且通过鸟氨酸循环处理的途径中起重要作用。鸟氨酸在肌肉产生和减少体脂中有效，且因此其已经被用作营养补充物并且还用作改善肝硬化和肝功能障碍的药物。产生鸟氨酸的方法包括使用乳酪蛋白作为消化酶的方法和使用大肠杆菌或棒状杆菌属微生物的方法(韩国专利第10-1372635号；T.后藤(T.Gotoh)等人,生物过程和生物系统工程(Bioprocess Biosyst.Eng.),33:773-777,2010)。
大肠杆菌和棒状杆菌属微生物在用于产生腐胺或鸟氨酸的生物合成路径方面是类似的，但它们也展现如下差异。首先，棒状杆菌属微生物具有“环状途径”，其中通过argJ(双功能鸟氨酸乙酰转移酶/N-乙酰谷氨酸合酶，EC 2.3.1.35)，谷氨酸转化成N-乙酰基-L-谷氨酸且N-乙酰基-L-鸟氨酸转化成L-鸟氨酸。相比之下，大肠杆菌通过“线性途径”参与腐胺或鸟氨酸的生物合成，其中argA(N-乙酰谷氨酸合酶，EC 2.3.1.1)和argE(乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶，EC 3.5.1.16)代替了argJ在棒状杆菌属微生物中的作用。
在棒状杆菌属微生物中，已知乙酰基在ArgJ中的鸟氨酸与谷氨酸之间再循环。但是，在大肠杆菌中，ArgA将乙酰辅酶A的乙酰基连接到谷氨酸以产生N-乙酰基-谷氨酸，且ArgE N-乙酰基-鸟氨酸分解N-乙酰基-鸟氨酸以产生鸟氨酸和乙酸(施奈德等人,应用微生物学与生物技术91,17-30.,2011)。
具体来说，pta-ackA(pta，磷酸转乙酰酶；ackA，乙酸激酶)操纵子和乙酰辅酶A合成酶(acs)被视为使用乙酸合成乙酰辅酶A的基因。
发明内容
技术问题
本发明人已对于提高棒状杆菌属微生物产生鸟氨酸和腐胺的能力做出了许多努力，且因此他们已发现将大肠杆菌源性argA和argE引入至棒状杆菌属微生物中可提高其产生鸟氨酸和腐胺的能力，借此完成本发明。
技术方案
本发明的一个目标提供以高产量产生腐胺或鸟氨酸的重组微生物。
本发明的另一目标提供使用以上微生物产生腐胺或鸟氨酸的方法。
本发明的有利作用
确认产生腐胺或鸟氨酸的本发明的棒状杆菌属微生物可在向微生物中引入大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE时，以及在乙酸利用途径得以增强时提高腐胺或鸟氨酸的产生量。因此，本发明的微生物可广泛用于产生腐胺或鸟氨酸，并且还可广泛用作供应用于产生各种聚合物产物的原料的从经济和环境方面来说有效且合乎需要的方式，其中腐胺或鸟氨酸用作原料。
附图说明
图1为说明用于在棒状杆菌属微生物中产生腐胺和鸟氨酸的生物合成途径(环形途径)的示意图(A)和用于在大肠杆菌中产生腐胺和鸟氨酸的生物合成途径(线性途径)的示意图(B)。
图2为说明生物合成途径的示意图，所述生物合成途径通过将大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE引入至处于表达argJ的状态下的棒状杆菌属微生物中而提高产生腐胺和鸟氨酸的能力。
具体实施方式
最佳模式
本发明的一个方面提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中引入来自大肠杆菌的N-乙酰谷氨酸合酶和来自大肠杆菌的乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶。
本发明的示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中大肠杆菌源性N-乙酰谷氨酸合酶由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中大肠杆菌源性乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中棒状杆菌属微生物选自以下：谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)、产氨棒状杆菌(Corynebacterium ammoniagenes)、产热氨棒状杆菌(Corynebacteriumthermoaminogenes)、黄色短杆菌(Brevibacterium flavum)和乳酸发酵短杆菌(Brevibacterium lactofermentum)。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子(pta-ackA操纵子)的活性相比其内源活性进一步增强。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子由SEQ ID NO:5或7的氨基酸序列组成。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中进一步引入大肠杆菌源性乙酰辅酶A合成酶(acs)的活性。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中大肠杆菌源性乙酰辅酶A合成酶(acs)由SEQ ID NO:9的氨基酸序列组成。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中进一步引入鸟氨酸脱羧酶(ODC)的活性。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中i)鸟氨酸氨甲酰转移酶(ArgF)、ii)谷氨酸输出蛋白或ⅲ)鸟氨酸氨甲酰转移酶和谷氨酸的输出蛋白的活性相比其内源活性进一步减弱。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中选自以下的至少一个的活性相比其内源活性进一步增强：乙酰γ谷氨酰磷酸还原酶(ArgC)、乙酰谷氨酸合酶或鸟氨酸乙酰转移酶(ArgJ)、乙酰谷氨酸激酶(ArgB)和乙酰鸟氨酸转氨酶(ArgD)。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中乙酰转移酶的活性相比其内源活性进一步减弱。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中乙酰转移酶由SEQ ID NO:30或31的氨基酸序列组成。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中腐胺输出蛋白的活性相比其内源活性进一步增强。
本发明的另一示例性实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中腐胺输出蛋白由SEQ ID NO:26或28的氨基酸序列组成。
本发明的另一方面提供一种用于产生腐胺或鸟氨酸的方法，包括：
(i)在培养基中培养产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物；和
(ii)从培养的微生物或培养基回收腐胺或鸟氨酸。
在本发明的示例性实施例中，棒状杆菌属的经修饰微生物为谷氨酸棒状杆菌。
在下文中，将详细描述本发明。
本发明的一个实施例提供产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中引入大肠杆菌源性N-乙酰谷氨酸合酶和大肠杆菌源性乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的活性。
如本文所用，术语“N-乙酰谷氨酸合酶”是指介导从谷氨酸和乙酰辅酶A产生N-乙酰谷氨酸的反应的酶，且由此产生的N-乙酰谷氨酸可用作鸟氨酸和精氨酸的前体。
在本发明中，N-乙酰谷氨酸合酶可包括例如(但不限于)具有SEQ ID NO:1的氨基酸序列的蛋白质，和任何与以上氨基酸序列具有70％或更高、确切地说80％或更高、更确切地说90％或更高、更确切地说95％或更高、更确切地说98％或更高且最确切地说99％或更高的同源性的蛋白质，只要所述蛋白质具有N-乙酰谷氨酸合酶的大体活性。
另外，展现以上活性的蛋白质可根据微生物的物种和品系在氨基酸序列中显示差异。因此，本发明的N-乙酰谷氨酸合酶可以是例如来自大肠杆菌的N-乙酰谷氨酸合酶，但其不限于此。
由于序列与以上序列具有同源性，如果氨基酸序列为具有与SEQ ID NO:1的蛋白质基本上相同或对应的生物活性的氨基酸序列，那么显而易见的是在氨基酸序列的一部分中具有缺失、修饰、取代或添加的序列也应包含于本发明的范围内。
编码本发明的N-乙酰谷氨酸合酶的多核苷酸可包括(但不限于)编码具有SEQ IDNO:1的氨基酸序列的多核苷酸，和任何与以上氨基酸序列具有70％或更高、确切地说80％或更高、更确切地说90％或更高、更确切地说95％或更高、更确切地说98％或更高且最确切地说99％或更高的同源性的蛋白质，只要所述多核苷酸具有与N-乙酰谷氨酸合酶类似的活性，且举例来说，可包括SEQ ID NO:2的多核苷酸序列。
如本文所用，术语“乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶”是指通过介导乙酰鸟氨酸的水解而介导涉及产生乙酸和鸟氨酸的反应的酶。
在本发明中，乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶可包括(但不限于)具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的蛋白质，和任何与以上氨基酸序列具有70％或更高、确切地说80％或更高、更确切地说90％或更高、更确切地说95％或更高、更确切地说98％或更高且最确切地说99％或更高的同源性的蛋白质，只要所述蛋白质具有从乙酰鸟氨酸分离的乙酰基和鸟氨酸的大体活性。
另外，展现以上活性的蛋白质可根据微生物的物种和品系在氨基酸序列中显示差异。因此，本发明的乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶可以是来自大肠杆菌的脱乙酰基酶，但其不限于此。由于序列具有同源性，如果氨基酸序列为具有与SEQ ID NO:3的蛋白质基本上相同或对应的生物活性的氨基酸序列，那么显而易见的是在氨基酸序列的一部分中具有缺失、修饰、取代或添加的序列也应包含于本发明的范围内。
编码本发明的乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的多核苷酸可包括具有SEQ ID NO:3的氨基酸序列的多核苷酸，或编码蛋白质的多核苷酸，其与以上氨基酸序列具有70％或更高、确切地说80％或更高、更确切地说90％或更高、更确切地说95％或更高、更确切地说98％或更高且最确切地说99％或更高的同源性，例如SEQ ID NO:4的多核苷酸序列，只要所述多核苷酸具有与乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶蛋白质类似的活性。
另外，编码本发明的N-乙酰谷氨酸合酶或乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的多核苷酸可与SEQ ID NO:2或SEQ ID NO:4的多核苷酸序列或衍生自所述多核苷酸序列的探针在严格条件下杂交，且其可为正常起作用的经修饰类型的N-乙酰谷氨酸合酶或乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶。在上文中，术语“严格条件”是指实现多核苷酸之间的特异性杂交的条件。举例来说，严格条件确切地描述于参考文献(例如J.萨姆布鲁克(J.Sambrook)等人,见上文)中。
在上文中，术语“同源性”是指与给定氨基酸序列或多核苷酸序列的同一性程度，且可以百分比指示。如本文所用，可按照“同源性％”指示与给定多肽序列或多核苷酸序列具有相同或类似活性的同源序列。举例来说，可如下确认同源性％：使用标准软件，即BLAST2.0来计算如评分、同一性和相似性的参数，或通过经由蛋白质杂交实验比较序列，且待界定的适当杂交条件可通过所属领域的技术人员已知的方法确定(例如J.萨姆布鲁克等人,分子克隆实验指南(Molecular Cloning,A Laboratory Manual),第2版,冷泉港实验室出版社(Cold Spring Harbor Laboratory press),纽约冷泉港(Cold Spring Harbor,NewYork),1989；F.M.奥斯贝(F.M.Ausubel)等人,现代分子生物学实验技术(CurrentProtocols in Molecular Biology),纽约约翰·威利父子公司(John Wiley&Sons,Inc.,New York))。
另一方面，本发明的微生物可包括天然类型和经修饰类型，例如属于埃希氏杆菌属(Escherichia)、志贺杆菌属(Shigella)、柠檬酸杆菌属(Citrobacter)、沙门氏菌属(Salmonella)、肠杆菌属(Enterobacter)、耶尔森氏菌属(Yersinia)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、欧文菌属(Erwinia)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、短杆菌属(Brevibacterium)、乳杆菌属(Lactobacillus)、新月形单胞菌属(Selenomanas)、弧菌属(Vibrio)、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Streptomyces)、隐秘杆菌属(Arcanobacterium)、产碱杆菌属(Alcaligenes)等的微生物。确切地说，本发明的微生物可为属于棒状杆菌属的微生物，更确切地说，选自以下的微生物：谷氨酸棒状杆菌、产氨棒状杆菌、产热氨棒状杆菌、黄色短杆菌和乳酸发酵短杆菌，且更确切地说谷氨酸棒状杆菌，但其不限于此。
确切地说，如本文所用，术语“产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属微生物”是指呈天然状态的产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属微生物；或通过向其无法产生腐胺或鸟氨酸的亲本菌株提供产生腐胺或鸟氨酸的能力而制备的产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属微生物。
具有产生腐胺或鸟氨酸的能力或可产生腐胺或鸟氨酸的微生物可具有提高的产生鸟氨酸的能力，所述微生物用作腐胺生物合成的原料，通过将乙酰谷氨酸合酶(其将谷氨酸转化为N-乙酰谷氨酸)、鸟氨酸乙酰转移酶(ArgJ，其将乙酰鸟氨酸转化为鸟氨酸)、乙酰谷氨酸激酶(ArgB，其将乙酰谷氨酸转化为N-乙酰谷氨酰磷酸)、γ谷氨酰磷酸还原酶(ArgC，其将N-乙酰谷氨酰磷酸转化为N-乙酰谷氨酸半醛)和乙酰鸟氨酸转氨酶(ArgD，其将乙酰谷氨酸半醛转化为N-乙酰鸟氨酸)的活性修饰为相比其内源活性增加，以增加谷氨酸至鸟氨酸的生物合成途径，尽管不特定限制于此。
另外，微生物可经修饰以使鸟氨酸氨甲酰转移酶(ArgF，其参与从鸟氨酸合成精氨酸)的活性相比其内源活性减弱，鸟氨酸氨甲酰转移酶为一种或多种参与谷氨酸导出的蛋白质，和/或一种或多种使腐胺乙酰化的蛋白质；和/或引入鸟氨酸脱羧酶(ODC)的活性。
如本文所用，术语“引入活性”可指在对应微生物中新引入或增强蛋白质的活性，所述活性在微生物中不存在或较弱。确切地说，其可包括将不存在于微生物中的编码蛋白质的基因插入或递送至待表达的微生物中，或诱导蛋白质的修饰以增强不表达或几乎不表达于微生物中的蛋白质的表达，但不限于此。
另一方面，在本发明中，如引入活性、增强活性、减弱活性等的修饰可通过称作转化的过程进行。如本文所用，术语“转化”是指将包括编码具有强或弱活性的特定蛋白质或启动子序列等的多核苷酸的载体引入至宿主细胞中，借此实现由多核苷酸编码的蛋白质的表达或在宿主细胞中诱导染色体的修饰的过程。另外，多核苷酸包括编码靶蛋白的DNA和RNA。多核苷酸可在其可引入至宿主细胞中且在其中表达或诱导修饰的程度上以任何形式插入。举例来说，多核苷酸可以表达盒的形式引入至宿主细胞中，所述表达盒为包括自我表达所需的所有必需的元件的基因构建物。表达盒可常规地包括可操作地连接至多核苷酸的启动子、转录终止信号、核糖体结合域和翻译终止信号，且可呈能够自我复制的表达载体形式。另外，多核苷酸可按原样引入至宿主细胞中，且可操作地连接至对于其在宿主细胞中的表达来说必需的序列，但不限于此。
另外，如本文所用，术语“可操作地连接”是指启动子序列与基因序列之间的功能连接，所述启动子序列起始和介导编码本发明的特定蛋白质的多核苷酸的转录。
如本文所用，术语“载体”是指包括编码所关注蛋白质的多核苷酸的核苷酸序列的DNA构建物，其中所关注蛋白质可操作地连接于适合的调节序列以使得所关注蛋白质可表达于适当宿主中。调节序列包括能够起始转录的启动子、用于调节转录的任何操纵序列、编码适合的mRNA核糖体结合域的序列和用于调节转录与翻译的序列。在转化至适合的宿主细胞中之后，载体可无关于宿主基因组而复制或起作用，或可整合到宿主基因组自身中。
用于本发明的载体可不特定受限，只要载体在宿主细胞中可复制，且可使用所属领域中已知的任何载体。载体的实例可包括天然或重组质粒、粘粒、病毒和噬菌体。举例来说，pWE15、M13、MBL3、MBL4、IXII、ASHII、APII、t10、t11、Charon4A、Charon21A等可用作噬菌体载体或粘粒载体；且基于pBR、pUC、pBluescriptII、pGEM、pTZ、pCL、pET等的那些可用作质粒载体。待用于本发明中的载体可不特定受限且可使用所属领域中已知的任何载体。确切地说，可使用pDZTn、pACYC177、pACYC184、pCL、pECCG117、pUC19、pBR322、pMW118、pCC1BAC载体等。
因此，编码靶蛋白的多核苷酸可使用在细菌内插入染色体的载体被经修饰的多核苷酸取代。可使用所属领域中的已知方法进行将多核苷酸插入至染色体中，例如通过同源重组，但不限于此。由于本发明的载体可经由同源重组插入至染色体中，可另外包括用于确认插入至染色体中的选择标记物。选择标记物用于选择转化的细胞，即为了确认标靶多核苷酸是否已插入，且可使用提供如耐药性、养分需求、对细胞毒性剂的抗性和表面蛋白质的表达的可选表型的标记物。在处理选择性试剂的情况下，仅表达选择标记物的细胞可存活或表现其它表型特征，且因此可容易地选择转化的细胞。
本发明的棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子(pta-ackA操纵子)的活性相比其内源性酶进一步增强。
在本发明中，磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子(pta-ackA操纵子)为包括基因的操纵子，所述基因可逆地介导代谢途径，其中产生自葡萄糖或丙酮酸的乙酰辅酶A经由乙酰磷酸转化为乙酸，和沿相反方向的代谢途径。
在本发明中，磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子可包括(但不限于)包括SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7的氨基酸序列的蛋白质，或任何与以上氨基酸序列具有70％或更高、确切地说80％或更高、更确切地说90％或更高、确切地说，更确切地95％或更高、更确切地说98％或更高且最确切地说99％或更高的同源性的蛋白质，只要所述蛋白质基本上介导从乙酸产生乙酰辅酶A的反应。
另外，由于展现活性的蛋白质的氨基酸序列可根据给定微生物的物种或品系变化，本发明中的磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子可不限于其所衍生的那些来源。显而易见的是与以上序列具有同源性且具有与SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7的蛋白质基本上相同或对应的生物活性的任何氨基酸序列也可属于本发明的范围内，尽管所述氨基酸序列可在序列的一部分中具有缺失、修饰、取代或添加。
编码本发明的磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子的多核苷酸可包括编码SEQ IDNO:5或SEQ ID NO:7的氨基酸的多核苷酸，或编码与以上氨基酸序列具有70％或更高、确切地说80％或更高、更确切地说90％或更高、更确切地说95％或更高、更确切地说98％或更高且最确切地说99％或更高的同源性的蛋白质的多核苷酸，且最确切地说，可包括SEQ IDNO:6或SEQ ID NO:8的多核苷酸序列。
如本文所用，术语“活性增强”不仅包括由于新引入活性或蛋白质自身的活性的增加而发挥高于初始功能的作用，而且还包括通过增加内源性基因的活性、从内部或外部因子扩增内源性基因、用于抑制基因表达的调节因子的缺失、基因拷贝数的增加、从外部引入基因、表达调节序列的修饰而增加其活性，且确切地说，由于启动子的置换或修饰和基因内的突变等而增加酶活性。
确切地说，在本发明中，可如下进行活性的增加：
1)增加编码酶的多核苷酸的拷贝数，
2)修饰表达调节序列以增加多核苷酸的表达，
3)修饰染色体上的多核苷酸序列以增强酶的活性，或
4)通过其组合进行修饰，
但方法不限于此。
可以多核苷酸可操作地连接于载体的形式，或通过将多核苷酸插入至宿主细胞的染色体中而进行多核苷酸的拷贝数的增加(方法1)，但方法不特定限制于此。确切地说，宿主细胞的染色体内的多核苷酸的拷贝数可通过引入可不管宿主细胞而复制且起作用并且编码本发明的蛋白质的多核苷酸可操作地连接到的载体而增加；或可通过将载体引入至宿主细胞中而增加，所述载体可将多核苷酸插入至宿主细胞的染色体中且多核苷酸可操作地连接到到所述载体。
接着，可如下进行修饰表达调节序列以增加多核苷酸的表达(方法2)：通过经由多核苷酸序列的缺失、插入、非保守或保守取代或其组合对序列诱发修饰以进一步增强表达调节序列的活性，或通过用具有较强活性的多核苷酸序列置换所述多核苷酸序列，但方法不特定限制于此。表达调节序列包括启动子、操纵序列、编码核糖体结合位点的序列和调节转录与翻译的终止的序列，但不特定限制于此。
强外源启动子而不是原始启动子可连接至多核苷酸的表达单元的上游区域。强启动子的实例可为CJ7启动子、lysCP1启动子、EF-Tu启动子、groEL启动子、aceA或aceB启动子等，且更确切地说，表达速率可通过可操作地连接至棒状杆菌源性lysCP1启动子(WO 2009/096689)或CJ7启动子(韩国专利第10-0620092号和WO 2006/065095)而提高，但强启动子不限于此。
此外，可如下进行染色体上的多核苷酸序列的修饰(方法3)：通过经由多核苷酸序列的缺失、插入、非保守或保守取代或其组合对表达调节序列诱发修饰以进一步增强多核苷酸序列的活性，或通过用具有较强活性的改进的多核苷酸序列置换所述多核苷酸序列，但方法不特定限制于此。
确切地说，在本发明中，磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子(pta-ackA操纵子)的活性可通过选自以下的任何一种方法而相比其内源活性得到增强：增加细胞中的操纵子的拷贝数的方法、对操纵子的表达调节序列引入修饰的方法、用具有较强活性的序列置换操纵子上的基因的表达调节序列的方法、用染色体上的突变基因置换编码酶的基因以增加构成操纵子的酶的活性的方法和对染色体上的基因引入修饰以增加构成操纵子的酶的活性的方法。确切地说，用具有较强活性的序列置换操纵子上的基因的表达调节序列的方法可通过用CJ7启动子、lysCP1启动子、EF-Tu启动子、groEL启动子、aceA或aceB启动子等置换乙酰酶和乙酸激酶操纵子的内源性启动子实现，但所述置换不限于此。
如本文所用，术语“内源活性”是指处于微生物最初具有的未经修饰的状态下的酶的活性状态，且术语“相比其内源活性的增强”是指相比微生物在操纵之前具有的活性，微生物在操纵之后具有的酶活性的增加状态，所述操纵为例如引入展现活性或对应基因的拷贝数的增加的基因、基因表达的抑制调节因子的缺失或表达调节序列的修饰，例如使用改进的启动子。
在本发明中，产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属微生物，可进一步向其中引入大肠杆菌源性乙酰辅酶A合成酶(acs)的活性。
在本发明中，乙酰辅酶A合成酶(acs)为介导用于从ATP、乙酸和CoA产生乙酰辅酶A的反应的酶。
在本发明中，乙酰辅酶A合成酶可包括(但不限于)具有SEQ ID NO:9的氨基酸序列的蛋白质，或任何与以上氨基酸序列具有70％或更高、确切地说80％或更高、更确切地说90％或更高、更确切地说95％或更高、更确切地说98％或更高且最确切地说99％或更高的同源性的蛋白质，只要蛋白质具有介导乙酰辅酶A的合成的大体活性。
另外，由于展现活性的蛋白质的氨基酸序列可根据给定微生物的物种或品系变化，本发明中的乙酰辅酶A合成酶(acs)可不限于其所衍生的来源，且举例来说，其可来自大肠杆菌。显而易见的是与以上序列具有同源性且具有与SEQ ID NO:9的蛋白质基本上相同或对应的生物活性的任何氨基酸序列也可属于本发明的范围内，尽管所述氨基酸序列可在序列的一部分中具有缺失、修饰、取代或添加。
编码本发明的乙酰辅酶A合成酶(acs)的多核苷酸可包括编码包括SEQ ID NO:9的氨基酸序列的蛋白质，或与以上氨基酸序列具有70％或更高、确切地说80％或更高、更确切地说90％或更高、更确切地说95％或更高、更确切地说98％或更高且最确切地说99％或更高的同源性的任何蛋白质的多核苷酸，且最确切地说，其可包括SEQ ID NO:10的多核苷酸序列。
本发明的棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中进一步向其中引入鸟氨酸脱羧酶(ODC)的活性。
如本文所用，术语“鸟氨酸脱羧酶”是指通过介导鸟氨酸的脱羧而产生腐胺的酶。尽管棒状杆菌属微生物不含腐胺生物合成酶，但当从外部引入鸟氨酸脱羧酶(ODC)时，腐胺在合成腐胺时导出到细胞外部。可从外部引入的鸟氨酸脱羧酶可用于本发明中，只要其具有以上活性，与衍生出微生物的来源无关，且确切地说，可引入来自大肠杆菌的鸟氨酸脱羧酶。
本发明的棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中i)鸟氨酸氨甲酰转移酶(ArgF)、ii)谷氨酸输出蛋白或ⅲ)鸟氨酸氨甲酰转移酶和谷氨酸的输出蛋白的活性相比其内源活性进一步减弱。棒状杆菌属的谷氨酸输出蛋白可为NCgl1221。
本发明的棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中选自以下的至少一个的活性相比其内源活性进一步增强：乙酰γ谷氨酰磷酸还原酶(ArgC)、乙酰谷氨酸合酶或鸟氨酸乙酰基转移酶(ArgJ)、乙酰谷氨酸激酶(ArgB)和乙酰鸟氨酸转氨酶(ArgD)。
另外，棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中乙酰转移酶的活性，确切地说NCgl1469的活性相比其内源活性进一步减弱。
最后，棒状杆菌属微生物可为产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中腐胺输出蛋白的活性，确切地说NCgl2522的活性相比其内源活性进一步增强。
如本文所用，“活性减弱”不仅包括由于蛋白质自身的活性的减少或不活化而发挥低于初始功能的作用，而且还包括通过减少内源性基因的活性、用于抑制基因表达的调节因子的活化、拷贝数的减少、表达调节序列的修饰而减少其活性，且确切地说，由于启动子的置换或修饰和基因内的突变等而使酶活性不活化或减少。
确切地说，在本发明中，可如下进行活性的减弱：
1)使一部分或全部编码蛋白质的多核苷酸缺失，
2)修饰表达调节序列以减少多核苷酸的表达，
3)修饰染色体上的多核苷酸序列以减弱蛋白质的活性，和
4)来自其组合的选择方法，
但方法不限于此。
确切地说，使一部分或全部编码蛋白质的多核苷酸缺失的方法可如下进行：通过使用在细菌内插入染色体的载体，用在多核苷酸序列或标记基因中具有部分缺失的多核苷酸置换编码染色体上的内源性靶蛋白的多核苷酸。如本文所用，术语“一部分”可取决于多核苷酸的种类，但其可确切地指1到300个，更确切地说1到100个，且甚至更确切地说1到50个。
另外，修饰表达调节序列的方法可如下进行：通过经由多核苷酸序列的缺失、插入、非保守或保守取代或其组合诱发对表达调节序列的修饰以进一步减弱表达调节序列的活性，或通过用具有较弱活性的多核苷酸序列置换所述多核苷酸序列。表达调节序列包括启动子、操纵序列、编码核糖体结合位点的序列和调节转录与翻译的终止的序列。
另外，修饰染色体上的多核苷酸序列的方法可如下进行：通过经由多核苷酸序列的缺失、插入、非保守或保守取代或其组合诱发对序列的修饰以进一步减弱酶的活性，或通过用具有较强活性的改进的多核苷酸序列置换所述多核苷酸序列。
另外，使抑制酶的多核苷酸的表达的调节因子缺失的方法可通过用在多核苷酸序列中具有部分缺失的多核苷酸或标记基因置换用于表达抑制因子的多核苷酸来进行。如本文所用，术语“一部分”可取决于多核苷酸的种类，但其可确切地指1到300个，更确切地说1到100个，且甚至更确切地说1到50个。
具体来说，乙酰γ谷氨酰磷酸还原酶(ArgC)、乙酰谷氨酸合酶或鸟氨酸乙酰转移酶(ArgJ)、乙酰谷氨酸激酶(ArgB)、乙酰鸟氨酸转氨酶(ArgD)、鸟氨酸氨甲酰转移酶(ArgF)、参与谷氨酸和鸟氨酸脱羧酶(ODC)的导出的蛋白质可分别包括SEQ ID NO:32、33、34、35、36、37或38的氨基酸序列，或任何氨基酸序列，该任何氨基酸序列确切地与以上氨基酸序列具有70％或更高、更确切地说80％或更高且更确切地说90％或更高的同源性，但不特定限制于此。另外，使腐胺乙酰化的蛋白质可包括SEQ ID NO:30或31的氨基酸序列，或任何氨基酸序列，该任何氨基酸序列确切地与以上氨基酸序列具有70％或更高、更确切地说80％或更高且更确切地说90％或更高的同源性，但氨基酸序列不特定限制于此。
另外，在本发明中，腐胺输出蛋白可包括SEQ ID NO:26或28的氨基酸序列，或任何氨基酸序列，该任何氨基酸序列确切地与以上氨基酸序列具有70％或更高、更确切地说80％或更高且更确切地说90％或更高的同源性。
在上文所述的蛋白质中，乙酰γ谷氨酰磷酸还原酶(ArgC)、乙酰谷氨酸合酶或鸟氨酸乙酰转移酶(ArgJ)、乙酰谷氨酸激酶(ArgB)、乙酰鸟氨酸转氨酶(ArgD)、鸟氨酸脱羧酶(ODC)和腐胺输出蛋白的活性增强可例如通过选自以下的方法实现：增加编码蛋白质的多核苷酸的拷贝数、修饰表达调节序列以增加多核苷酸的表达、修饰染色体上的多核苷酸序列以增强上述酶的活性、抑制上述酶的多核苷酸的表达的调节因子的缺失，或其组合。
另外，鸟氨酸氨甲酰转移酶(ArgF)、参与谷氨酸导出的蛋白质和使腐胺乙酰化的蛋白质的减弱可通过选自以下的方法实现：使一部分或全部编码蛋白质的多核苷酸缺失、修饰表达调节序列以减少多核苷酸的表达、修饰染色体上的多核苷酸序列以减弱蛋白质的活性，和其组合。
本发明的另一方面提供一种用于产生腐胺或鸟氨酸的方法，包括：
(i)在培养基中培养产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属微生物；和
(ii)从培养的微生物或培养基回收腐胺或鸟氨酸。
在以上方法中，微生物可以所属领域中已知的分批培养、连续培养、分批进料培养等进行培养，但不特定限制于此。具体来说，关于培养条件，可使用碱性化合物(例如氢氧化钠、氢氧化钾或氨)或酸性化合物(例如磷酸或硫酸)维持恰当pH(即，5到9的最佳pH，确切地说pH 6到8，且最确切地说pH 6.8)，但不特定限制于此。另外，可通过向细胞培养物添加氧气或含氧气体混合物来维持好氧条件。培养温度可维持于20℃到45℃，且确切地说25℃到40℃，且微生物可培养约10小时到160小时。通过以上培养产生的腐胺或鸟氨酸可分泌到培养基中或保持于细胞中。
另外，在培养基中，可单独或组合地使用碳源，如糖和碳水化合物(例如葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、麦芽糖、糖蜜、淀粉和纤维素)、油和油脂(例如大豆油、葵花籽油、花生油和椰子油)、脂肪酸(例如棕榈酸、硬脂酸和亚油酸)、醇(例如甘油和乙醇)和有机酸(例如乙酸)，但不限于此；可单独或组合地使用氮源，如含氮有机化合物(例如蛋白胨、酵母提取物、肉汁、麦芽提取物、玉米浆、大豆粉和尿素)，或无机化合物(例如硫酸铵、氯化铵、磷酸铵、碳酸铵和硝酸铵)，但不限于此；且可单独或组合地使用钾源，如磷酸二氢钾、磷酸氢二钾，与其对应的含钠盐，但不限于此。另外，包括金属盐(例如硫酸镁或硫酸铁)、氨基酸和维生素的其它必需的生长刺激物质可另外包含于培养基中，但不限于此。
回收在本发明的培养期间产生的腐胺或鸟氨酸的方法可通过所属领域中已知的适当培养方法进行，例如分批培养、连续培养或分批进料培养，且借此可从培养物回收目标氨基酸。
本发明的模式
在下文中，将参考以下实例更详细地描述本发明。但是，这些实例仅出于说明性目的，且本发明不打算受这些实例限制。
实例1：将大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE引入至产生腐胺的菌株中且确 认菌株产生腐胺的能力
1-1.制备将大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE同时引入至基于ATCC13032的 产生腐胺的菌株的转座子基因中的菌株
为了确认将大肠杆菌源性argA基因和大肠杆菌源性argE基因引入至基于ATCC13032的产生腐胺的菌株中是否能够提高产生腐胺的能力，将argA和argE基因引入至菌株的转座子基因中。
作为使得能够在染色体内引入棒状杆菌属微生物的转座子基因区域的转化的载体，使用pDZTn(WO 2009/125992)，且lysCP1启动子(国际专利公开案第WO 2009/096689号，SEQ ID NO:39)用作启动子。
确切地说，基于编码N-乙酰谷氨酸合酶的大肠杆菌源性argA基因的多核苷酸序列(SEQ ID NO:2)制备用于在argA ORF区域中获得同源重组片段的SEQ ID NO:11和12的引物对。另外，基于编码乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的大肠杆菌源性argE基因的多核苷酸序列(SEQID NO:4)制备用于在argE ORF区域中获得同源重组片段的SEQ ID NO:15和16的引物对，且基于lysCP1的多核苷酸序列(SEQ ID NO:39)制备用于在lysCP1区域中获得同源重组片段的SEQ ID NO:13和14的引物对(表1)。
[表1]
首先，大小为约1.6kb的基因片段使用作为模板的大肠杆菌W3110菌株的染色体连同SEQ ID NO:11和12的引物对进行扩增，以获得argA基因。具体来说，通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸1分钟30秒的循环30次进行PCR。因此获得的片段在0.8％琼脂糖凝胶中经历电泳，且所需大小的带经洗脱和纯化。
另外，lysCP1启动子区是通过使用作为模板的KCCM10919P(国际专利公开案第WO2009/096689号)菌株的染色体连同SEQ ID NO:13和14的引物对进行PCR，其通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸30秒的循环30次进行。
pDZTn载体用XhoI处理且接着对由此获得的PCR产物中的每一个进行融合克隆。使用HD克隆试剂盒(克隆科技公司(Clontech))进行融合克隆且因此获得的质粒命名为pDZTn-lysCP1-argA。
接着，为了获得argE基因，通过使用作为模板的大肠杆菌W3110菌株的染色体连同SEQ ID NO:15和16的引物对，以与上文所述相同的方式扩增大小为约1.4kb的基因片段而获得PCR产物，且用lysCP1启动子区进行融合克隆。因此获得的质粒命名为pDZTn-lysCP1-argE。
接着，通过电穿孔将质粒pDZTn-lysCP1-argA引入至KCCM11240P(韩国专利申请公开案第10-2013-0082478号)菌株中以获得转化体，且将转化体涂铺于含有卡那霉素(kanamycin)(25μg/mL)和X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-D-半乳糖苷)的BHIS平板培养基(脑心浸液(37g/L)、山梨糖醇(91g/L)和琼脂(2％))上且培养以形成菌落。在菌落中，选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pDZTn-lysCP1-argA的转化菌株。
在CM培养基(葡萄糖(10g/L)、多聚蛋白胨(10g/L)、酵母提取物(5g/L)、牛肉提取物(5g/L)、NaCl(2.5g/L)、尿素(2g/L)，pH 6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃，8小时)且从10-4到10-10连续稀释，涂铺于含有X-gal的固体培养基上，且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中，选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择通过二次交换引入argA编码基因的菌株。使用SEQ ID NO:12和13的引物对对最后选择的菌株进行PCR且确认引入argA编码基因，且谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为KCCM11240P Tn:lysCP1-argA。
为了将引入有上文制备的argA的菌株引入，将上文制备的pDZTn-lysCP1-argE以与上文所述相同的方式转化至KCCM11240P Tn:lysCP1-argA中，且通过使用SEQ ID NO:13和16的引物对进行PCR而在最后选择的菌株中确认向转座子中引入argE。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE。
1-2.制备将大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE同时引入至基于ATCC13869的 产生腐胺的菌株的转座子基因中的菌株
DAB12-aΔNCgl1469(韩国专利申请公开案第10-2013-0082478号)为基于谷氨酸棒状杆菌ATCC13869的产生腐胺的菌株，命名为DAB12-b，且将argA和argE引入至转座子基因中以确认引入大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE基因是否能够与所得菌株产生腐胺的能力的提高相关。
首先，以与实例1-1相同的方式将预先制备的pDZTn-lysCP1-argA转化至谷氨酸棒状杆菌DAB12-b中，且确认argA被引入至转座子中。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为DAB12-b Tn:lysCP1-argA。
接着，为了将argE引入至已引入有argA的菌株中，以与实例1-1相同的方式将先前制备的pDZTn-lysCP1-argE转化至DAB12-b Tn:lysCP1-argA中，且确认argE被引入至转座子中。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为DAB12-b Tn:lysCP1-argE。
1-3.评估引入有大肠杆菌源性argA基因和大肠杆菌源性argE基因的产生腐胺的 棒状杆菌菌株的产生腐胺的能力
在实例1-1与1-2中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生腐胺的能力，以确认将大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE引入至产生腐胺的菌株中对腐胺产生的影响。
确切地说，实例1-1和1-2中制备的两种不同种类的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株，即(KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE；DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE)，和两种不同种类的亲本菌株(即KCCM11240P和DAB12-b)分别涂铺于含1mM精氨酸的CM平板培养基(1％葡萄糖、1％多聚蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.5％牛肉提取物、0.25％NaCl、0.2％尿素、100μL的50％NaOH、2％琼脂，pH 6.8，以1L计)上，且在30℃下培养24小时。
将约一个铂金接种环(platinum loop)的量的由此培养的菌株各接种至25mL效价培养基(titer media)(8％葡萄糖、0.25％大豆蛋白、0.50％固体玉米浆、4％(NH4)2SO4、0.1％KH2PO4、0.05％MgSO4·7H2O、0.15％尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5％CaCO3，以1L计)中，且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中，将1mM精氨酸添加至培养基。在完成培养后，测量每一培养液中产生的腐胺的浓度且结果展示于下表2中。
[表2]
菌株 腐胺(g/L)
KCCM 11240P 12.2
KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE 13.4
DAB12-b 13.3
DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE 14.6
如上表2中所示，同时引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE基因的两个谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株均显示9.8％或更高的腐胺产量的增加。
实例2：引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE的产生腐胺的菌株中的 pta-ackA的增强和确认菌株产生腐胺的能力
2-1.制备从基于ATCC13032的产生腐胺的棒状杆菌菌株取代pta-ackA启动子的菌 株
实例1中制备的引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE基因的产生腐胺的菌株的磷酸转乙酰酶和乙酸激酶(pta-ackA)的活性进一步增强且检查所述增强对菌株产生腐胺的能力的影响。
出于此目的，染色体内的pta-ackA操纵子的启动子经相比其内源性启动子具有更强活性的启动子取代，确切地说，将lysCP1启动子(国际专利公开案第WO 2009/096689号)引入至pta-ackA操纵子的起始密码子的上游。
首先，获得同源重组片段，其包括lysCP1启动子且启动子的两端均具有染色体上的原始pta-ackA序列。确切地说，通过使用谷氨酸棒状杆菌ATCC13032的基因组DNA连同SEQID NO:17和18的引物对进行PCR而获得lysCP1启动子的5'-端区。具体来说，通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸30秒的循环30次进行PCR。
另外，通过在相同条件下使用SEQ ID NO:14和19的引物对进行PCR而获得lysCP1启动子区，且通过使用作为模板的谷氨酸棒状杆菌ATCC13032的基因组DNA连同SEQ ID NO:20和21的引物对进行PCR而获得lysCP1启动子的3'-端区。用于获得lysCP1启动子的引物展示于上表1和下表3中。
[表3]
使用经XbaI处理的pDZ载体对上文获得的PCR产物中的每一个进行融合克隆。使用HD克隆试剂盒(克隆科技公司(Clontech))进行融合克隆且因此获得的质粒命名为pDZ-lysCP1-1'pta-ackA。
通过电穿孔将上文制备的质粒pDZ-lysCP1-1'pta-ackA分别引入至KCCM11240P和KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE菌株(其为实例1-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株)中以获得转化体，且将所述转化体涂铺于含有卡那霉素(25μg/mL)和X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-D-半乳糖苷)的BHIS平板培养基(脑心浸液(37g/L)、山梨糖醇(91g/L)和琼脂(2％))上且培养以形成菌落。在菌落中，选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pDZ-lysCP1-1'pta-ackA的转化菌株。
在CM培养基(葡萄糖(10g/L)、多聚蛋白胨(10g/L)、酵母提取物(5g/L)、牛肉提取物(5g/L)、NaCl(2.5g/L)、尿素(2g/L)，pH 6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃，8小时)且从10-4到10-10连续稀释，涂铺于含有X-gal的固体培养基上，且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中，选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择pta-ackA启动子通过二次交换经lysCP1启动子取代的菌株。
使用SEQ ID NO:19和21的引物对对最后选择的菌株进行PCR且确认lysCP1启动子被引入至染色体内的pta-ackA的起始密码子的上游。具体来说，通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸1分钟的循环30次进行PCR反应。
因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为KCCM11240P lysCP1-1'pta-ackA和KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE lysCP1-1'pta-ackA。
2-2.制备从基于ATCC13869的产生腐胺的棒状杆菌菌株取代pta-ackA启动子的菌 株
为了通过实例2-1中公开的方法确认编码来源于谷氨酸棒状杆菌ATCC13869的pta-ackA的基因和自其表达的蛋白质的序列，使用作为模板的谷氨酸棒状杆菌ATCC13869的基因组DNA连同SEQ ID NO:17和22的引物对进行PCR(表3和4)。具体来说，通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸3分钟的循环30次进行PCR反应。
通过电泳分离因此获得的PCR产物且分析序列。因此，确认编码来源于谷氨酸棒状杆菌ATCC13869的pta-ackA的基因包括由SEQ ID NO:8描述的多核苷酸序列且由所述基因编码的蛋白质包括由SEQ ID NO:7描述的氨基酸序列。
另一方面，由于来源于谷氨酸棒状杆菌ATCC13032的pta-ackA的氨基酸序列(SEQID NO:5)与来源于谷氨酸棒状杆菌ATCC13869的pta-ackA的氨基酸序列之间的比较，确认其具有99.4％的序列同源性。
[表4]
首先，获得同源重组片段，其包括lysCP1启动子且启动子的两端均具有染色体上的原始pta-ackA序列。确切地说，通过使用谷氨酸棒状杆菌ATCC13869的基因组DNA连同SEQID NO:17和23的引物对进行PCR而获得lysCP1启动子的5'-端区。具体来说，通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸30秒的循环30次进行PCR反应。另外，通过在相同条件下使用SEQ ID NO:14和19的引物对进行PCR而获得lysCP1启动子区，且通过使用作为模板的谷氨酸棒状杆菌ATCC13869的基因组DNA连同SEQ ID NO:20和21的引物对进行PCR而获得lysCP1启动子的3'-端区。用于启动子取代的引物展示于表1、3和4中。
使用经XhoI处理的pDZTn载体对由此获得的PCR产物中的每一个进行融合克隆。使用HD克隆试剂盒(克隆科技公司(Clontech))进行融合克隆且因此获得的质粒命名为pDZ-lysCP1-2'pta-ackA。
以与实例2-1相同的方式将上文制备的质粒pDZ-lysCP1-2'pta-ackA分别转化至DAB12-b和DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE(其为实例1-2中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株)中。因此，确认lysCP1启动子被引入至染色体内的pta-ackA的起始密码子的上游。谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为DAB12-b lysCP1-2'pta-ackA和DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE lysCP1-2'pta-ackA。
2-3.评估具有增强型pta-ackA的菌株产生腐胺的能力
为了确认引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE的产生腐胺的菌株中的pta-ackA的增强的影响，在实例2-1与2-2中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生腐胺的能力。
确切地说，四类谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(KCCM11240P lysCP1-1'pta-ackA；KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE lysCP1-1'pta-ackA；DAB12-blysCP1-2'pta-ackA；和DAB12-bTn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE lysCP1-2'pta-ackA)和四类亲本菌株(KCCM11240P；KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE；DAB12-b；和DAB12-bTn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE)分别涂铺于含1mM精氨酸的CM平板培养基(1％葡萄糖，1％多聚蛋白胨，0.5％酵母提取物，0.5％牛肉提取物，0.25％NaCl，0.2％尿素，100μL的50％NaOH，2％琼脂，pH 6.8，以1L计)上，且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环的量的由此培养的菌株各接种至25mL效价培养基(8％葡萄糖、0.25％大豆蛋白、0.50％固体玉米浆、4％(NH4)2SO4、0.1％KH2PO4、0.05％MgSO4·7H2O、0.15％尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5％CaCO3，以1L计)中，且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中，将1mM精氨酸添加至培养基。在完成培养后，测量每一培养液中产生的腐胺的浓度且结果展示于下表5中。
[表5]
如表5中所示，当pta-ackA分别在KCCM 11240P和DAB12-b中增强时，腐胺产生量处于相同水平。但是，当pta-ackA分别在两种不同种类的同时引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE基因的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE；DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE)中增强时，相比亲本菌株，腐胺产生量增加了14.3％或更高。另外，基于经修饰菌株，腐胺产生量增加了4％或更高。
因此，本发明人将具有改进的产生腐胺的能力的棒状杆菌属微生物(谷氨酸棒状杆菌KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE:lysCP1-1'pta-ackA，其通过向谷氨酸棒状杆菌KCCM 11240P菌株中引入大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE的活性且增强pta-ackA的活性而由产生腐胺的谷氨酸棒状杆菌KCCM 11240P菌株制备)命名为CC01-1145且在2014年11月21日根据布达佩斯条约(Budapest Treaty)以登录号KCCM11606P保藏于韩国微生物保藏中心(Korean Culture Center of Microorganisms；KCCM)。
实例3：将大肠杆菌源性acs引入至引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE 的产生腐胺的菌株中且确认所得菌株的产生腐胺的能力
3-1.制备将大肠杆菌源性acs引入至基于ATCC13032的产生腐胺的菌株的转座子 基因中的菌株
使用lysCP1启动子将acs引入至转座子基因中以确认将大肠杆菌源性乙酰辅酶A合成酶(acs)基因引入至已引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE的基于ATCC13032的产生腐胺的菌株中是否能够提高产生腐胺的能力。
确切地说，基于由编码acs的基因的SEQ ID NO:10描述的多核苷酸序列，如上表1和下表6中所示地制备用于在acs ORF区周围获得同源重组片段的SEQ ID NO:24和25的引物对和用于在lysCP1启动子区周围获得同源重组片段的SEQ ID NO:13和14的引物对。
[表6]
确切地说，为了获得acs基因，使用作为模板的大肠杆菌W3110菌株的染色体连同SEQ ID NO:24和25的引物对扩增大小为约2kb的基因片段。具体来说，通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸1分钟30秒的循环30次进行PCR反应。接着，因此获得的PCR产物在0.8％琼脂糖凝胶中经历电泳且所需大小的带经洗脱和纯化。
另外，通过使用作为模板的KCCM10919P(国际专利公开案第WO 2009/096689号)菌株的染色体连同SEQ ID NO:13和14的引物对进行PCR而获得lysCP1启动子区，所述PCR通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸30秒的循环30次进行。
pDZ载体用XhoI处理且对因此获得的PCR产物中的每一个进行融合克隆。使用HD克隆试剂盒(克隆科技公司)进行融合克隆。因此获得的质粒命名为pDZTn-lysCP1-acs。
接着，通过电穿孔将质粒pDZTn-lysCP1-acs引入至KCCM11240P和KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE(其分别为实例1-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株)中以获得转化体，且将所述转化体涂铺于含有卡那霉素(25μg/mL)和X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-D-半乳糖苷)的BHIS平板培养基(脑心浸液(37g/L)、山梨糖醇(91g/L)和琼脂(2％))上且培养以形成菌落。在菌落中，选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pDZTn-lysCP1-acs的转化菌株。
在CM培养基(葡萄糖(10g/L)、多聚蛋白胨(10g/L)、酵母提取物(5g/L)、牛肉提取物(5g/L)、NaCl(2.5g/L)、尿素(2g/L)，pH 6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃，8小时)且从10-4到10-10连续稀释，涂铺于含有X-gal的固体培养基上，且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中，选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择通过二次交换引入acs编码基因的菌株。使用SEQ ID NO:13和25的引物对对最后选择的菌株进行PCR且确认引入编码acs的基因，且谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为KCCM11240P Tn:lysCP1-acs和KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE Tn:lysCP1-acs。
3-2.制备将大肠杆菌源性acs引入至基于ATCC13869的产腐胺菌株的转座子基因 中的菌株
与实例3-1中相同，以与实例3-1相同的方式将上文制备的pDZTn-lysCP1-acs转化至DAB12-b和DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE中，其分别为实例1-2中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株，且确认acs被引入至转座子基因中。
由此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为DAB12-b Tn:lysCP1-acs和DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE Tn:lysCP1-acs。
3-3.评估引入有大肠杆菌源性acs的菌株产生腐胺的能力
为了确认在引入了大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE的产腐胺菌株中引入acs的影响，比较在实例3-1与3-2中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株的产生腐胺的能力。
确切地说，将谷氨酸棒状杆菌的四类经修饰菌株(KCCM11240P Tn:lysCP1-acs；KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE Tn:lysCP1-acs；DAB12-b Tn:lysCP1-acs；和DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE Tn:lysCP1-acs)和四类亲本菌株(KCCM11240P；KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE；DAB12-b；和DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE)分别涂铺于含1mM精氨酸的CM平板培养基(1％葡萄糖、1％多聚蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.5％牛肉提取物、0.25％NaCl、0.2％尿素、100μL的50％NaOH、2％琼脂，pH 6.8，以1L计)上，且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环量的由此培养的菌株各接种至25mL效价培养基(8％葡萄糖、0.25％大豆蛋白、0.50％固体玉米浆、4％(NH4)2SO4、0.1％KH2PO4、0.05％MgSO4·7H2O、0.15％尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5％CaCO3，以1L计)中，且在30℃下，在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中，将1mM精氨酸添加至培养基。在完成培养后，测量每一培养液中产生的腐胺的浓度且结果展示于下表7中。
[表7]
菌株 腐胺(g/L)
KCCM 11240P 12.2
KCCM 11240P Tn:lysCP1-acs 12.2
KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE 13.4
KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE Tn:lysCP1-acs 13.9
DAB12-b 13.3
DAB12-b Tn:lysCP1-acs 13.2
DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE 14.6
DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE Tn:lysCP1-acs 15.1
如表7中所示，当acs分别引入至KCCM 11240P和DAB12-b中时，腐胺产生量处于相同水平。但是，当acs分别引入两种不同种类的同时引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE基因的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(KCCM11240P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE；DAB12-b Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE)时，相比亲本菌株，腐胺产生量增加了13.5％或更高。另外，相比以上经修饰菌株，腐胺产生量增加了3.4％或更高。
实例4：从具有提高的腐胺导出能力的产生腐胺的菌株引入大肠杆菌源性argA、大 肠杆菌源性argE且取代pta-ackA启动子的菌株，和所述菌株产生腐胺的能力
4-1.制备从具有提高的腐胺导出能力的菌株引入大肠杆菌源性argA、大肠杆菌源 性argE且取代pta-ackA启动子的菌株
基于具有提高的腐胺导出能力的KCCM11401P(韩国专利申请公开案第10-2014-0115244号)菌株，制备菌株以检查引入大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE和增强棒状杆菌pta-ackA的活性是否能够提高产生腐胺的能力。
确切地说，以与实例1-1相同的方式将实例1-1中制备的pDZTn-lysCP1-argA转化至KCCM11401P中，且因此确认argA被引入至转座子基因中。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为KCCM11401P Tn:lysCP1-argA。
另外，为了将argE引入至已引入有如实例1-1中制备的argA的菌株中，以与实例1-1相同的方式将实例1-1中制备的pDZTn-lysCP1-argE转化至KCCM11401P Tn:lysCP1-argA中且确认argE被引入至转座子基因中。因此选择的经修饰菌株命名为KCCM11401P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE。
接着，以与实例2-1相同的方式将实例2-1中制备的pDZ-lysCP1-1'pta-ackA转化至KCCM11401P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE中，且确认lysCP1启动子被引入至染色体内的pta-ackA的起始密码子的上游。以上经修饰的谷氨酸棒状杆菌菌株命名为KCCM11401PTn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE lysCP1-1'pta-ackA。
4-2.评估从具有改进的腐胺导出能力的菌株引入大肠杆菌源性argA、大肠杆菌源 性argE且取代pta-ackA启动子的菌株
为了确认引入大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE和增强pta-ackA活性对具有提高的腐胺导出能力的产生腐胺的谷氨酸棒状杆菌菌株的影响，在实例4-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生腐胺的能力。
确切地说，谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(KCCM11401P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE、KCCM11401P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE lysCP1-1'pta-ackA)和亲本菌株(KCCM11401P)分别涂铺于含1mM精氨酸的CM平板培养基(1％葡萄糖、1％多聚蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.5％牛肉提取物、0.25％NaCl、0.2％尿素、100μL的50％NaOH、2％琼脂，pH 6.8，以1L计)上，且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环的量的由此培养的菌株各接种至25mL效价培养基(8％葡萄糖、0.25％大豆蛋白、0.50％固体玉米浆、4％(NH4)2SO4、0.1％KH2PO4、0.05％MgSO4·7H2O、0.15％尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5％CaCO3，以1L计)中，且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中，将1mM精氨酸添加至培养基。在完成培养后，测量每一培养液中产生的腐胺的浓度且结果展示于下表8中。
[表8]
如表8中所示，确认当具有增强的腐胺导出能力的KCCM11401P引入有大肠杆菌源性argA基因和大肠杆菌源性argE基因时，腐胺产生量相比亲本菌株增加了11.9％，且当菌株进一步经pta-ackA增强时，腐胺产生量相比亲本菌株增加了16.1％。
实例5：将大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE引入至产生鸟氨酸的菌株中且 确认菌株产生鸟氨酸的能力
5-1.制备将大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE同时引入至基于KCCM11137P 的产生鸟氨酸的菌株的转座子基因中的菌株
为了确认将大肠杆菌源性argA基因和大肠杆菌源性argE基因引入至KCCM11137P(韩国专利申请公开案第10-1372635号)菌株(其为基于谷氨酸棒状杆菌ATCC13032的产生鸟氨酸的菌株)中是否能够提高产生鸟氨酸的能力，使用实例1-1中制备的载体将argA基因和argE基因引入至菌株的转座子基因中。
首先，通过电穿孔将质粒pDZTn-lysCP1-argA引入至KCCM11137P菌株中以获得转化体，且将转化体涂铺于含有卡那霉素(25μg/mL)和X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-D-半乳糖苷)的BHIS平板培养基(脑心浸液(37g/L)、山梨糖醇(91g/L)和琼脂(2％))上且培养以形成菌落。在菌落中，选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pDZTn-lysCP1-argA的菌株。
在CM培养基(葡萄糖(10g/L)、多聚蛋白胨(10g/L)、酵母提取物(5g/L)、牛肉提取物(5g/L)、NaCl(2.5g/L)、尿素(2g/L)，pH 6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃，8小时)且从10-4到10-10连续稀释，涂铺于含有X-gal的固体培养基上，且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中，选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择通过二次交换引入argA编码基因的菌株。使用SEQ ID NO:12和13的引物对对最后选择的菌株进行PCR且确认引入argA编码基因，且谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为KCCM11137P Tn:lysCP1-argA。
另外，为了将argE引入至已引入有如上文制备的argA的菌株中，以与实例1-1相同的方式将实例1-1中制备的pDZTn-lysCP1-argE转化至KCCM11137P Tn:lysCP1-argA中，且借此确认argE被引入转座子基因内。
因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株命名为KCCM11137P Tn:lysCP1-argATn:lysCP1-argE。
5-2.评估引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE的产生鸟氨酸的棒状杆 菌菌株的产生鸟氨酸的能力
为了确认引入大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE对产生鸟氨酸的菌株中的鸟氨酸产生的影响，在实例5-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生鸟氨酸的能力。
确切地说，一类谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE)和一类亲本菌株(KCCM11137P)分别涂铺于含1mM精氨酸的CM平板培养基(1％葡萄糖、1％多聚蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.5％牛肉提取物、0.25％NaCl、0.2％尿素、100μL的50％NaOH、2％琼脂，pH 6.8，以1L计)上，且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环的量的由此培养的菌株各接种至25mL效价培养基(8％葡萄糖、0.25％大豆蛋白、0.50％固体玉米浆、4％(NH4)2SO4、0.1％KH2PO4、0.05％MgSO4·7H2O、0.15％尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5％CaCO3，以1L计)中，且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中，将1mM精氨酸添加至培养基。在完成培养后，测量每一培养液中产生的腐胺的浓度且结果展示于下表9中。
[表9]
菌株 鸟氨酸(g/L)
KCCM11137P 7.8
KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE 8.9
如表9中所示，确认相比亲本菌株，谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株在引入有大肠杆菌源性argA基因和大肠杆菌源性argE基因时显示14.1％的鸟氨酸产生量增加。
实例6：增强引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE的菌株中的pta-ackA 且确认菌株产生鸟氨酸的能力
6-1.制备从基于ATCC13032的产生鸟氨酸的菌株取代pta-ackA启动子的菌株
为了确认引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE的基于ATCC13032的产生鸟氨酸的菌株中的pta-ackA活性的增强是否能够提高产生鸟氨酸的能力，将lysCP1启动子(WO 2009/096689)引入至染色体内的pta-ackA操纵子的起始密码子的上游。
首先，通过电穿孔将实例2-1中制备的质粒pDZ-lysCP1-1'pta-ackA分别引入至KCCM11137P和KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE菌株中以获得转化体且将转化体涂铺于含有卡那霉素(25μg/mL)和X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-D-半乳糖苷)的BHIS平板培养基(脑心浸液(37g/L)、山梨糖醇(91g/L)和琼脂(2％))上且培养以形成菌落。在菌落中，选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pDZ-lysCP1-1'pta-ackA的转化菌株。
在CM培养基(葡萄糖(10g/L)、多聚蛋白胨(10g/L)、酵母提取物(5g/L)、牛肉提取物(5g/L)、NaCl(2.5g/L)、尿素(2g/L)，pH 6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃，8小时)且从10-4到10-10连续稀释，涂铺于含有X-gal的固体培养基上，且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中，选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择pta-ackA启动子通过二次交换经lysCP1启动子取代的菌株。使用SEQ ID NO:19和21的引物对对最后选择的菌株进行PCR且确认lysCP1启动子被引入至染色体内的pta-ackA操纵子的起始密码子的上游。具体来说，通过重复在95℃下变性30秒、在55℃下退火30秒和在72℃下延伸1分钟的循环30次进行PCR反应。
因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为KCCM11137P lysCP1-1'pta-ackA和KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE lysCP1-1'pta-ackA。
6-2.评估具有增强型pta-ackA活性的菌株产生鸟氨酸的能力
为了确认pta-ackA活性的增强对引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE的产生鸟氨酸的菌株的影响，在实例6-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生鸟氨酸的能力。
确切地说，两种不同种类的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(KCCM11137P lysCP1-1'pta-ackA；KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE lysCP1-1'pta-ackA)和两种不同种类的亲本菌株(KCCM11137P；KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE)分别涂铺于含1mM精氨酸的CM平板培养基(1％葡萄糖、1％多聚蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.5％牛肉提取物、0.25％NaCl、0.2％尿素、100μL的50％NaOH、2％琼脂，pH 6.8，以1L计)上，且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环的量的由此培养的菌株各接种至25mL效价培养基(8％葡萄糖、0.25％大豆蛋白、0.50％固体玉米浆、4％(NH4)2SO4、0.1％KH2PO4、0.05％MgSO4·7H2O、0.15％尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5％CaCO3，以1L计)中，且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中，将1mM精氨酸添加至培养基。在完成培养后，测量每一培养液中产生的鸟氨酸的浓度且结果展示于下表10中。
[表10]
如表10中所示，确认当KCCM11137P菌株的pta-ackA活性增强时，鸟氨酸产生量不增加，而在KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE菌株(其为同时引入有大肠杆菌源性argA基因和大肠杆菌源性argE基因的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株)时，鸟氨酸产生量相比KCCM11137P菌株增加了20.5％，并且还相比KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE菌株增加了5.6％。
实例7：在引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE的菌株中引入大肠杆菌 源性acs且确认菌株产生鸟氨酸的能力
7-1.制备将大肠杆菌源性acs引入至来自基于KCCM11137的产生鸟氨酸的菌株的 转座子基因中的菌株
使用lysCP1启动子将acs引入至转座子基因中以确认将大肠杆菌源性acs引入至KCCM11137P(韩国专利第10-1372635号)菌株(其为基于谷氨酸棒状杆菌ATCC13032的产生鸟氨酸的菌株)中是否能够提高产生鸟氨酸的能力。
首先，通过电穿孔将实例3-1中制备的质粒pDZTn-lysCP1-acs分别引入至KCCM11137P和KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE菌株中以获得转化体，且将转化体涂铺于含有卡那霉素(25μg/mL)和X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚啉-D-半乳糖苷)的BHIS平板培养基(脑心浸液(37g/L)、山梨糖醇(91g/L)和琼脂(2％))上且培养以形成菌落。在菌落中，选择蓝色菌落且进而选择引入有质粒pDZTn-lysCP1-acs的转化菌株。
在CM培养基(葡萄糖(10g/L)、多聚蛋白胨(10g/L)、酵母提取物(5g/L)、牛肉提取物(5g/L)、NaCl(2.5g/L)、尿素(2g/L)，pH 6.8)中在振荡下培养所选菌株(30℃，8小时)且从10-4到10-10连续稀释，涂铺于含有X-gal的固体培养基上，且培养以形成菌落。在因此形成的菌落中，选择以相对较低比率出现的白色菌落且最后选择通过二次交换引入acs编码基因的菌株。
使用SEQ ID NO:13和25的引物对对最后选择的菌株进行PCR且确认引入acs编码基因。因此选择的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株分别命名为KCCM11137P Tn:lysCP1-acs和KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE Tn:lysCP1-acs。
7-2.评估引入有大肠杆菌源性acs的菌株产生鸟氨酸的能力
为了确认引入acs对引入有大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE的产生鸟氨酸的菌株的影响，在实例7-1中制备的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株之间比较产生鸟氨酸的能力。
确切地说，两种不同种类的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株(KCCM11137P Tn:lysCP1-acs；KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE Tn:lysCP1-acs)和两种不同种类的亲本菌株(KCCM11137P；KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE)分别涂铺于含1mM精氨酸的CM平板培养基(1％葡萄糖、1％多聚蛋白胨、0.5％酵母提取物、0.5％牛肉提取物、0.25％NaCl、0.2％尿素、100μL的50％NaOH、2％琼脂，pH 6.8，以1L计)上，且在30℃下培养24小时。将约一个铂金接种环的量的由此培养的菌株各接种至25mL效价培养基(8％葡萄糖、0.25％大豆蛋白、0.50％固体玉米浆、4％(NH4)2SO4、0.1％KH2PO4、0.05％MgSO4·7H2O、0.15％尿素、生物素(100μg)、盐酸硫胺素(3mg)、泛酸钙(3mg)、烟碱酰胺(3mg)、5％CaCO3，以1L计)中，且在30℃下在以200rpm的速率振荡下培养98小时。在所有菌株培养物中，将1mM精氨酸添加至培养基。在完成培养后，测量每一培养液中产生的鸟氨酸的浓度且结果展示于下表11中。
[表11]
菌株 鸟氨酸(g/L)
KCCM11137P 7.8
KCCM11137P Tn:lysCP1-acs 7.8
KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE 8.9
KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE Tn:lysCP1-acs 9.2
如表11中所示，确认当KCCM11137P菌株引入有acs时，鸟氨酸产生量不增加，而在KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE菌株(其为同时引入有大肠杆菌源性argA基因和大肠杆菌源性argE基因的谷氨酸棒状杆菌的经修饰菌株)时，鸟氨酸产生量相比KCCM11137P菌株增加了17.9％，并且还相比KCCM11137P Tn:lysCP1-argA Tn:lysCP1-argE菌株增加了3.4％。
综上所述，确认将大肠杆菌源性argA和大肠杆菌源性argE引入至棒状杆菌菌株中可增加腐胺和鸟氨酸产生量，且另外确认增强棒状杆菌菌株内的pta-ackA基因的活性或引入大肠杆菌源性acs可进一步增加腐胺和鸟氨酸产生量。
由上可知，本发明涉及的领域的技术人员将能够理解本发明可在不修改本发明的技术构思或基本特征的情况下以其它特定形式实施。就此而言，本文公开的示例性实施例仅出于说明性目的且不应被理解为限制本发明的范围。相反，本发明不仅意图涵盖示例性实施例，而且还涵盖可包含于由所附权利要求书界定的本发明的精神和范围内的各种替代方案、修改、等效物和其它实施例。
序列表
<110> CJ第一制糖株式会社
<120> 用于产生腐胺或鸟氨酸的微生物和使用其产生腐胺或鸟氨酸的方法
<130> OPA16079
<150> KR10-2015-0102624
<151> 2015-07-20
<160> 39
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 443
<212> PRT
<213> 大肠杆菌N-乙酰谷氨酸合酶
<400> 1
Val Val Lys Glu Arg Lys Thr Glu Leu Val Glu Gly Phe Arg His Ser
1 5 10 15
Val Pro Tyr Ile Asn Thr His Arg Gly Lys Thr Phe Val Ile Met Leu
20 25 30
Gly Gly Glu Ala Ile Glu His Glu Asn Phe Ser Ser Ile Val Asn Asp
35 40 45
Ile Gly Leu Leu His Ser Leu Gly Ile Arg Leu Val Val Val Tyr Gly
50 55 60
Ala Arg Pro Gln Ile Asp Ala Asn Leu Ala Ala His His His Glu Pro
65 70 75 80
Leu Tyr His Lys Asn Ile Arg Val Thr Asp Ala Lys Thr Leu Glu Leu
85 90 95
Val Lys Gln Ala Ala Gly Thr Leu Gln Leu Asp Ile Thr Ala Arg Leu
100 105 110
Ser Met Ser Leu Asn Asn Thr Pro Leu Gln Gly Ala His Ile Asn Val
115 120 125
Val Ser Gly Asn Phe Ile Ile Ala Gln Pro Leu Gly Val Asp Asp Gly
130 135 140
Val Asp Tyr Cys His Ser Gly Arg Ile Arg Arg Ile Asp Glu Asp Ala
145 150 155 160
Ile His Arg Gln Leu Asp Ser Gly Ala Ile Val Leu Met Gly Pro Val
165 170 175
Ala Val Ser Val Thr Gly Glu Ser Phe Asn Leu Thr Ser Glu Glu Ile
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Ala Thr Gln Leu Ala Ile Lys Leu Lys Ala Glu Lys Met Ile Gly Phe
195 200 205
Cys Ser Ser Gln Gly Val Thr Asn Asp Asp Gly Asp Ile Val Ser Glu
210 215 220
Leu Phe Pro Asn Glu Ala Gln Ala Arg Val Glu Ala Gln Glu Glu Lys
225 230 235 240
Gly Asp Tyr Asn Ser Gly Thr Val Arg Phe Leu Arg Gly Ala Val Lys
245 250 255
Ala Cys Arg Ser Gly Val Arg Arg Cys His Leu Ile Ser Tyr Gln Glu
260 265 270
Asp Gly Ala Leu Leu Gln Glu Leu Phe Ser Arg Asp Gly Ile Gly Thr
275 280 285
Gln Ile Val Met Glu Ser Ala Glu Gln Ile Arg Arg Ala Thr Ile Asn
290 295 300
Asp Ile Gly Gly Ile Leu Glu Leu Ile Arg Pro Leu Glu Gln Gln Gly
305 310 315 320
Ile Leu Val Arg Arg Ser Arg Glu Gln Leu Glu Met Glu Ile Asp Lys
325 330 335
Phe Thr Ile Ile Gln Arg Asp Asn Thr Thr Ile Ala Cys Ala Ala Leu
340 345 350
Tyr Pro Phe Pro Glu Glu Lys Ile Gly Glu Met Ala Cys Val Ala Val
355 360 365
His Pro Asp Tyr Arg Ser Ser Ser Arg Gly Glu Val Leu Leu Glu Arg
370 375 380
Ile Ala Ala Gln Ala Lys Gln Ser Gly Leu Ser Lys Leu Phe Val Leu
385 390 395 400
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<210> 2
<211> 1332
<212> DNA
<213> 大肠杆菌N-乙酰谷氨酸合酶
<400> 2
gtggtaaagg aacgtaaaac cgagttggtc gagggattcc gccattcggt tccctatatc 60
aatacccacc ggggaaaaac gtttgtcatc atgctcggcg gtgaagccat tgagcatgag 120
aatttctcca gtatcgttaa tgatatcggg ttgttgcaca gcctcggcat ccgtctggtg 180
gtggtctatg gcgcacgtcc gcagatcgac gcaaatctgg ctgcgcatca ccacgaaccg 240
ctgtatcaca agaatatacg tgtgaccgac gccaaaacac tggaactggt gaagcaggct 300
gcgggaacat tgcaactgga tattactgct cgcctgtcga tgagtctcaa taacacgccg 360
ctgcagggcg cgcatatcaa cgtcgtcagt ggcaatttta ttattgccca gccgctgggc 420
gtcgatgacg gcgtggatta ctgccatagc gggcgtatcc ggcggattga tgaagacgcg 480
atccatcgtc aactggacag cggtgcaata gtgctaatgg ggccggtcgc tgtttcagtc 540
actggcgaga gctttaacct gacctcggaa gagattgcca ctcaactggc catcaaactg 600
aaagctgaaa agatgattgg tttttgctct tcccagggcg tcactaatga cgacggtgat 660
attgtctccg aacttttccc taacgaagcg caagcgcggg tagaagccca ggaagagaaa 720
ggcgattaca actccggtac ggtgcgcttt ttgcgtggcg cagtgaaagc ctgccgcagc 780
ggcgtgcgtc gctgtcattt aatcagttat caggaagatg gcgcgctgtt gcaagagttg 840
ttctcacgcg acggtatcgg tacgcagatt gtgatggaaa gcgccgagca gattcgtcgc 900
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gatttagggt aa 1332
<210> 3
<211> 408
<212> PRT
<213> 大肠杆菌乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶
<400> 3
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Gly Thr Ala Lys Gly Val Met Val Asn Ala Leu Ser Leu Ala Ala Arg
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Ala Arg Lys Arg Lys Met Met Glu Ile Ala Lys Lys Val Gly Lys Gly
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<213> 大肠杆菌乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶
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Ser Lys Ser Val Thr Ile Asp Glu Ala Arg Glu Ile Met Lys Asp Ile
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Ser Tyr Phe Gly Thr Met Met Val His Asn Gly Asp Ala Asp Gly Met
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Val Ser Gly Ala Ala Asn Thr Thr Ala His Thr Ile Lys Pro Ser Phe
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Leu Met Val Leu Arg Gly Arg Leu Trp Ala Phe Gly Asp Cys Ala Val
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attctctaca cctccggttc taccggtaag ccaaaaggtg tgctgcatac taccggcggt 840
tatctggtgt acgcggcgct gacctttaaa tatgtctttg attatcatcc gggtgatatc 900
tactggtgca ccgccgatgt gggctgggtg accggacaca gttacttgct gtacggcccg 960
ctggcctgcg gtgcgaccac gctgatgttt gaaggcgtac ccaactggcc gacgcctgcc 1020
cgtatggcgc aggtggtgga caagcatcag gtcaatattc tctataccgc acccacggcg 1080
atccgcgcgc tgatggcgga aggcgataaa gcgatcgaag gcaccgaccg ttcgtcgctg 1140
cgcattctcg gttccgtggg cgagccaatt aacccggaag cgtgggagtg gtactggaaa 1200
aaaatcggca acgagaaatg tccggtggtc gatacctggt ggcagaccga aaccggcggt 1260
ttcatgatca ccccgctgcc tggcgctacc gagctgaaag ccggttcggc aacacgtccg 1320
ttcttcggcg tgcaaccggc gctggtcgat aacgaaggta acccgctgga gggggccacc 1380
gaaggtagcc tggtaatcac cgactcctgg ccgggtcagg cgcgtacgct gtttggcgat 1440
cacgaacgtt ttgaacagac ctacttctcc accttcaaaa atatgtattt cagcggcgac 1500
ggcgcgcgtc gcgatgaaga tggctattac tggataaccg ggcgtgtgga cgacgtgctg 1560
aacgtctccg gtcaccgtct ggggacggca gagattgagt cggcgctggt ggcgcatccg 1620
aagattgccg aagccgccgt agtaggtatt ccgcacaata ttaaaggtca ggcgatctac 1680
gcctacgtca cgcttaatca cggggaggaa ccgtcaccag aactgtacgc agaagtccgc 1740
aactgggtgc gtaaagagat tggcccgctg gcgacgccag acgtgctgca ctggaccgac 1800
tccctgccta aaacccgctc cggcaaaatt atgcgccgta ttctgcgcaa aattgcggcg 1860
ggcgatacca gcaacctggg cgatacctcg acgcttgccg atcctggcgt agtcgagaag 1920
ctgcttgaag agaagcaggc tatcgcgatg ccatcgtaa 1959
<210> 11
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PlysC-argA-F
<400> 11
gaaaggtgca caaagatggt aaaggaacgt aaaaccg 37
<210> 12
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Tn-argA-RXh
<400> 12
gcccactagt ctcgagcatg cggcgttgat tttg 34
<210> 13
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Tn-PlysC-FXh
<400> 13
gaatgagttc ctcgagccga tgctagggcg aaaa 34
<210> 14
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PlysC-R
<400> 14
ctttgtgcac ctttcgatct acgtgctgac agttac 36
<210> 15
<211> 35
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PlysC-argE-F
<400> 15
gaaaggtgca caaagatgaa aaacaaatta ccgcc 35
<210> 16
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Tn-argE-RXh
<400> 16
gcccactagt ctcgaggttt gagtcactgt cggtcg 36
<210> 17
<211> 38
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Pro-pta-FX
<400> 17
ccggggatcc tctagagggg ttctaaaaaa tgtggagt 38
<210> 18
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pta-PlysC-R
<400> 18
gccgtgcttt tcgccctagc atcggacatc gcctttctaa ttt 43
<210> 19
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PlysC-F
<400> 19
ccgatgctag ggcgaaaagc acggc 25
<210> 20
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PlysC-pta-ackA-F
<400> 20
gaaaggtgca caaagatgtc tgacacaccg acctcagctc 40
<210> 21
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Pro-pta-RX
<400> 21
gcaggtcgac tctagattat ccggcattgg ctct 34
<210> 22
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Pta-ackA-R
<400> 22
tgcagtttca ccccttaa 18
<210> 23
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 13869_pta-PlysC-R
<400> 23
gccgtgcttt tcgccctagc atcggacatc gcctttctag ttt 43
<210> 24
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> PlysC-acs-F
<400> 24
gaaaggtgca caaagatgag ccaaattcac aaa 33
<210> 25
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> Tn-acs-RXh
<400> 25
gcccactagt ctcgagaagg cgtttacgcc gcatcc 36
<210> 26
<211> 494
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032腐胺输出蛋白
<400> 26
Met Thr Ser Glu Thr Leu Gln Ala Gln Ala Pro Thr Lys Thr Gln Arg
1 5 10 15
Trp Ala Phe Leu Ala Val Ile Ser Gly Gly Leu Phe Leu Ile Gly Val
20 25 30
Asp Asn Ser Ile Leu Tyr Thr Ala Leu Pro Leu Leu Arg Glu Gln Leu
35 40 45
Ala Ala Thr Glu Thr Gln Ala Leu Trp Ile Ile Asn Ala Tyr Pro Leu
50 55 60
Leu Met Ala Gly Leu Leu Leu Gly Thr Gly Thr Leu Gly Asp Lys Ile
65 70 75 80
Gly His Arg Arg Met Phe Leu Met Gly Leu Ser Ile Phe Gly Ile Ala
85 90 95
Ser Leu Gly Ala Ala Phe Ala Pro Thr Ala Trp Ala Leu Val Ala Ala
100 105 110
Arg Ala Phe Leu Gly Ile Gly Ala Ala Thr Met Met Pro Ala Thr Leu
115 120 125
Ala Leu Ile Arg Ile Thr Phe Glu Asp Glu Arg Glu Arg Asn Thr Ala
130 135 140
Ile Gly Ile Trp Gly Ser Val Ala Ile Leu Gly Ala Ala Ala Gly Pro
145 150 155 160
Ile Ile Gly Gly Ala Leu Leu Glu Phe Phe Trp Trp Gly Ser Val Phe
165 170 175
Leu Ile Asn Val Pro Val Ala Val Ile Ala Leu Ile Ala Thr Leu Phe
180 185 190
Val Ala Pro Ala Asn Ile Ala Asn Pro Ser Lys His Trp Asp Phe Leu
195 200 205
Ser Ser Phe Tyr Ala Leu Leu Thr Leu Ala Gly Leu Ile Ile Thr Ile
210 215 220
Lys Glu Ser Val Asn Thr Ala Arg His Met Pro Leu Leu Leu Gly Ala
225 230 235 240
Val Ile Met Leu Ile Ile Gly Ala Val Leu Phe Ser Ser Arg Gln Lys
245 250 255
Lys Ile Glu Glu Pro Leu Leu Asp Leu Ser Leu Phe Arg Asn Arg Leu
260 265 270
Phe Leu Gly Gly Val Val Ala Ala Gly Met Ala Met Phe Thr Val Ser
275 280 285
Gly Leu Glu Met Thr Thr Ser Gln Arg Phe Gln Leu Ser Val Gly Phe
290 295 300
Thr Pro Leu Glu Ala Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Ala Leu Gly Ser
305 310 315 320
Phe Pro Met Ser Ile Ile Gly Gly Ala Asn Leu His Arg Trp Gly Phe
325 330 335
Lys Pro Leu Ile Ser Gly Gly Phe Ala Ala Thr Ala Val Gly Ile Ala
340 345 350
Leu Cys Ile Trp Gly Ala Thr His Thr Asp Gly Leu Pro Phe Phe Ile
355 360 365
Ala Gly Leu Phe Phe Met Gly Ala Gly Ala Gly Ser Val Met Ser Val
370 375 380
Ser Ser Thr Ala Ile Ile Gly Ser Ala Pro Val Arg Lys Ala Gly Met
385 390 395 400
Ala Ser Ser Ile Glu Glu Val Ser Tyr Glu Phe Gly Thr Leu Leu Ser
405 410 415
Val Ala Ile Leu Gly Ser Leu Phe Pro Phe Phe Tyr Ser Leu His Ala
420 425 430
Pro Ala Glu Val Ala Asp Asn Phe Ser Ala Gly Val His His Ala Ile
435 440 445
Asp Gly Asp Ala Ala Arg Ala Ser Leu Asp Thr Ala Tyr Ile Asn Val
450 455 460
Leu Ile Ile Ala Leu Val Cys Ala Val Ala Ala Ala Leu Ile Ser Ser
465 470 475 480
Tyr Leu Phe Arg Gly Asn Pro Lys Gly Ala Asn Asn Ala His
485 490
<210> 27
<211> 1485
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032腐胺输出蛋白
<400> 27
atgacttcag aaaccttaca ggcgcaagcg cctacgaaaa cccaacgttg ggctttcctc 60
gccgttatca gcggtggtct ctttctgatc ggtgtagaca actcgattct ctacaccgca 120
ctccctctgc tgcgtgaaca gctcgcagcc accgaaaccc aagcgttgtg gatcatcaac 180
gcatatcccc tgctcatggc gggccttctt ttgggtaccg gcactttggg tgacaaaatc 240
ggccaccgcc ggatgttcct catgggcttg agcattttcg gaatcgcttc acttggtgct 300
gcgtttgctc caactgcgtg ggctcttgtt gctgcgagag ctttccttgg catcggtgcg 360
gcaacgatga tgcctgcaac cttggctctg atccgcatta cgtttgagga tgagcgtgag 420
cgcaacactg caattggtat ttggggttcc gtggcaattc ttggcgctgc ggcaggcccg 480
atcattggtg gtgcgctgtt ggaattcttc tggtggggtt cggttttcct cattaacgtt 540
ccggtggctg ttatcgcgtt gatcgctacg ctttttgtgg cgccggccaa tatcgcgaat 600
ccgtctaagc attgggattt cttgtcgtcg ttctatgcgc tgctcacact tgctgggttg 660
atcatcacga tcaaggaatc tgtgaatact gcacgccata tgcctcttct tttgggtgca 720
gtcatcatgt tgatcattgg tgcggtgttg tttagcagtc gtcagaagaa gatcgaggag 780
ccacttctag atctgtcgtt gttccgtaat cgccttttct taggcggtgt ggttgctgcg 840
ggcatggcga tgtttactgt gtccggtttg gaaatgacta cctcgcagcg tttccagttg 900
tctgtgggtt tcactccact tgaggctggt ttgctcatga tcccagctgc attgggtagc 960
ttcccgatgt ctattatcgg tggtgcaaac ctgcatcgtt ggggcttcaa accgctgatc 1020
agtggtggtt ttgctgccac tgccgttggc atcgccctgt gtatttgggg cgcgactcat 1080
actgatggtt tgccgttttt catcgcgggt ctattcttca tgggcgcggg tgctggttcg 1140
gtaatgtctg tgtcttccac tgcgattatc ggttccgcgc cggtgcgtaa ggctggcatg 1200
gcgtcgtcga tcgaagaggt ctcttatgag ttcggcacgc tgttgtctgt cgcgattttg 1260
ggtagcttgt tcccattctt ctactcgctg catgccccgg cagaggttgc ggataacttc 1320
tcggcgggtg ttcaccacgc gattgatggc gatgcggcgc gtgcatcttt ggacaccgca 1380
tacattaacg tgttgatcat tgccctagta tgcgcagtag cggctgctct gatcagcagt 1440
taccttttcc gcggaaatcc gaagggagcc aataatgcgc actag 1485
<210> 28
<211> 494
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869腐胺输出蛋白
<400> 28
Met Ile Ser Glu Thr Leu Gln Ala Gln Ala Pro Thr Lys Thr Gln Arg
1 5 10 15
Trp Ala Phe Leu Ala Val Ile Ser Gly Gly Leu Phe Leu Ile Gly Val
20 25 30
Asp Asn Ser Ile Leu Tyr Thr Ala Leu Pro Leu Leu Arg Glu Gln Leu
35 40 45
Ala Ala Thr Glu Thr Gln Ala Leu Trp Ile Ile Asn Ala Tyr Pro Leu
50 55 60
Leu Met Ala Gly Leu Leu Leu Gly Thr Gly Thr Leu Gly Asp Lys Ile
65 70 75 80
Gly His Arg Arg Met Phe Leu Met Gly Leu Ser Ile Phe Gly Ile Ala
85 90 95
Ser Leu Gly Ala Ala Phe Ala Pro Thr Ala Trp Ala Leu Val Ala Ala
100 105 110
Arg Ala Phe Leu Gly Ile Gly Ala Ala Thr Met Met Pro Ala Thr Leu
115 120 125
Ala Leu Ile Arg Ile Thr Phe Glu Asp Glu Arg Glu Arg Asn Thr Ala
130 135 140
Ile Gly Ile Trp Gly Ser Val Ala Ile Leu Gly Ala Ala Ala Gly Pro
145 150 155 160
Ile Ile Gly Gly Ala Leu Leu Glu Phe Phe Trp Trp Gly Ser Val Phe
165 170 175
Leu Ile Asn Val Pro Val Ala Val Ile Ala Leu Ile Ala Thr Leu Phe
180 185 190
Val Ala Pro Ala Asn Ile Ala Asn Pro Ser Lys His Trp Asp Phe Leu
195 200 205
Ser Ser Phe Tyr Ala Leu Leu Thr Leu Ala Gly Leu Ile Val Thr Ile
210 215 220
Lys Glu Ser Val Asn Thr Ala Arg His Leu Pro Leu Leu Val Gly Ala
225 230 235 240
Ile Ile Leu Leu Ile Ile Gly Ala Val Leu Phe Ser Ser Arg Gln Lys
245 250 255
Lys Ile Glu Glu Pro Leu Leu Asp Leu Ser Leu Phe Arg Asn Arg Leu
260 265 270
Phe Leu Gly Gly Val Val Ala Ala Gly Met Ala Met Phe Thr Val Ser
275 280 285
Gly Leu Glu Met Thr Thr Ser Gln Arg Phe Gln Leu Ser Val Gly Phe
290 295 300
Thr Pro Leu Glu Ala Gly Leu Leu Met Ile Pro Ala Ala Leu Gly Ser
305 310 315 320
Phe Pro Met Ser Ile Ile Gly Gly Ala Asn Leu His Arg Trp Gly Phe
325 330 335
Lys Pro Leu Ile Ser Gly Gly Phe Leu Ala Thr Ala Val Gly Ile Ala
340 345 350
Leu Cys Ile Trp Gly Ala Thr His Thr Asp Gly Leu Pro Phe Phe Ile
355 360 365
Ala Gly Leu Phe Phe Met Gly Ala Gly Ala Gly Ser Val Met Ser Val
370 375 380
Ser Ser Thr Ala Ile Ile Gly Ser Ala Pro Val Arg Lys Ala Gly Met
385 390 395 400
Ala Ser Ser Ile Glu Glu Val Ser Tyr Glu Phe Gly Thr Leu Leu Ser
405 410 415
Val Ala Ile Leu Gly Ser Leu Phe Pro Phe Phe Tyr Ser Leu His Ala
420 425 430
Pro Ala Glu Val Ala Asp Asn Phe Ser Ala Gly Val His His Ala Ile
435 440 445
Tyr Gly Asp Ala Ala Arg Ala Ser Leu Asp Thr Ala Tyr Ile Asn Val
450 455 460
Leu Ile Ile Ala Leu Val Cys Ala Val Ala Ala Ala Leu Ile Ser Ser
465 470 475 480
Tyr Leu Phe Arg Gly Asn Pro Lys Gly Ala Asn Asn Ala His
485 490
<210> 29
<211> 1485
<212> DNA
<213> 谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869腐胺输出蛋白
<400> 29
atgatttcag aaactttgca ggcgcaagcg cctacgaaaa cccaacgttg ggctttcctc 60
gctgttatca gcggtggtct ctttctgatc ggtgtagaca actcaatcct ctacaccgca 120
ctccccctgc tgcgtgaaca actcgcagcc actgaaaccc aagcgttgtg gatcatcaac 180
gcatatcccc tgctcatggc gggtcttctt ttgggtaccg gcactttggg tgacaaaatc 240
ggccaccgcc ggatgttcct catgggcttg agcattttcg gaatcgcttc acttggcgct 300
gcgtttgctc caactgcgtg ggctcttgtt gctgcgagag ctttccttgg catcggtgcg 360
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cggaacaccg cgattggcat ttggggttct gtggcaattc ttggcgcggc ggcaggtccg 480
atcattggtg gtgcgctgtt ggaattcttc tggtggggtt cggttttcct cattaacgtt 540
ccggtggctg ttatcgcgtt gatcgctacg ctttttgtgg cgccggccaa tatcgcgaat 600
ccgtccaagc actgggattt cttatcctcg ttctatgcat tgcttaccct tgcaggtttg 660
attgtcacca tcaaagaatc ggtaaacact gcacgtcatc tgccactgct tgtaggtgcc 720
atcatcttgc ttatcattgg tgcggtgttg tttagcagtc gtcagaagaa gatcgaggag 780
ccacttctag atctgtcgtt gttccgtaat cgccttttct taggcggtgt ggttgctgcg 840
ggcatggcga tgtttactgt gtccggtttg gaaatgacta cctcgcagcg tttccagttg 900
tctgtgggtt tcactccact tgaggctggt ttgctcatga tcccagctgc attgggtagc 960
ttcccgatgt ctattatcgg tggtgcaaac ttgcatcgtt ggggcttcaa accgctgatc 1020
agtggtggtt tccttgccac ggcagtcggc atcgccctgt gtatttgggg cgcgactcat 1080
actgatggtt tgccgttttt catcgcgggt ctgttcttca tgggcgcggg tgctggttcg 1140
gtaatgtctg tgtcttccac tgcgattatc ggttccgcgc cggtgcgtaa ggctggcatg 1200
gcgtcgtcga tcgaagaggt ctcttatgag ttcggcacgc tgttgtctgt cgcgattttg 1260
ggtagcttgt tcccattctt ctactcgctg catgccccgg cagaggttgc ggataacttc 1320
tcggcgggtg ttcaccacgc gatttatggc gatgcggcgc gtgcatcttt ggacaccgca 1380
tacattaacg tgttgatcat tgccctagta tgcgcagtag cggctgctct gatcagcagt 1440
taccttttcc gcggaaatcc gaagggagcc aataatgcgc actag 1485
<210> 30
<211> 203
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌ATCC 13032乙酰转移酶
<400> 30
Met Ser Pro Thr Val Leu Pro Ala Thr Gln Ala Asp Phe Pro Lys Ile
1 5 10 15
Val Asp Val Leu Val Glu Ala Phe Ala Asn Asp Pro Ala Phe Leu Arg
20 25 30
Trp Ile Pro Gln Pro Asp Pro Gly Ser Ala Lys Leu Arg Ala Leu Phe
35 40 45
Glu Leu Gln Ile Glu Lys Gln Tyr Ala Val Ala Gly Asn Ile Asp Val
50 55 60
Ala Arg Asp Ser Glu Gly Glu Ile Val Gly Val Ala Leu Trp Asp Arg
65 70 75 80
Pro Asp Gly Asn His Ser Ala Lys Asp Gln Ala Ala Met Leu Pro Arg
85 90 95
Leu Val Ser Ile Phe Gly Ile Lys Ala Ala Gln Val Ala Trp Thr Asp
100 105 110
Leu Ser Ser Ala Arg Phe His Pro Lys Phe Pro His Trp Tyr Leu Tyr
115 120 125
Thr Val Ala Thr Ser Ser Ser Ala Arg Gly Thr Gly Val Gly Ser Ala
130 135 140
Leu Leu Asn His Gly Ile Ala Arg Ala Gly Asp Glu Ala Ile Tyr Leu
145 150 155 160
Glu Ala Thr Ser Thr Arg Ala Ala Gln Leu Tyr Asn Arg Leu Gly Phe
165 170 175
Val Pro Leu Gly Tyr Ile Pro Ser Asp Asp Asp Gly Thr Pro Glu Leu
180 185 190
Ala Met Trp Lys Pro Pro Ala Met Pro Thr Val
195 200
<210> 31
<211> 203
<212> PRT
<213> 谷氨酸棒状杆菌ATCC 13869乙酰转移酶
<400> 31
Met Ser Pro Thr Val Leu Pro Ala Thr Gln Ala Asp Phe Pro Lys Ile
1 5 10 15
Val Asp Val Leu Val Glu Ala Phe Ala Asn Asp Pro Ala Phe Leu Arg
20 25 30
Trp Ile Pro Gln Pro Asp Pro Gly Ser Ala Lys Leu Arg Ala Leu Phe
35 40 45
Glu Leu Gln Ile Glu Lys Gln Tyr Ala Val Ala Gly Asn Ile Asp Val
50 55 60
Ala Arg Asp Ser Glu Gly Glu Ile Val Gly Val Ala Leu Trp Asp Arg
65 70 75 80
Pro Asp Gly Asn His Ser Ala Lys Asp Gln Ala Ala Ile Leu Pro Arg
85 90 95
Leu Val Ser Ile Phe Gly Ile Lys Ala Ala Gln Val Ala Trp Thr Asp
100 105 110
Leu Ser Ser Ala Arg Phe His Pro Lys Phe Pro His Trp Tyr Leu Tyr
115 120 125
Thr Val Ala Thr Ser Ser Ser Ala Arg Gly Thr Gly Val Gly Ser Ala
130 135 140
Leu Leu Asn His Gly Ile Ala Arg Ala Gly Asp Glu Ala Ile Tyr Leu
145 150 155 160
Glu Ala Thr Ser Thr Arg Ala Ala Gln Leu Tyr Asn Arg Leu Gly Phe
165 170 175
Val Pro Leu Gly Tyr Ile Pro Ser Asp Asp Asp Gly Thr Pro Glu Leu
180 185 190
Ala Met Trp Lys Pro Pro Ala Met Pro Thr Val
195 200
<210> 32
<211> 357
<212> PRT
<213> 乙酰γ谷氨酰磷酸还原酶（ArgC）
<400> 32
Met Ile Met His Asn Val Tyr Gly Val Thr Met Thr Ile Lys Val Ala
1 5 10 15
Ile Ala Gly Ala Ser Gly Tyr Ala Gly Gly Glu Ile Leu Arg Leu Leu
20 25 30
Leu Gly His Pro Ala Tyr Ala Ser Gly Glu Leu Glu Ile Gly Ala Leu
35 40 45
Thr Ala Ala Ser Thr Ala Gly Ser Thr Leu Gly Glu Leu Met Pro His
50 55 60
Ile Pro Gln Leu Ala Asp Arg Val Ile Gln Asp Thr Thr Ala Glu Thr
65 70 75 80
Leu Ala Gly His Asp Val Val Phe Leu Gly Leu Pro His Gly Phe Ser
85 90 95
Ala Glu Ile Ala Leu Gln Leu Gly Pro Asp Val Thr Val Ile Asp Cys
100 105 110
Ala Ala Asp Phe Arg Leu Gln Asn Ala Ala Asp Trp Glu Lys Phe Tyr
115 120 125
Gly Ser Glu His Gln Gly Thr Trp Pro Tyr Gly Ile Pro Glu Met Pro
130 135 140
Gly His Arg Glu Ala Leu Arg Gly Ala Lys Arg Val Ala Val Pro Gly
145 150 155 160
Cys Phe Pro Thr Gly Ala Thr Leu Ala Leu Leu Pro Ala Val Gln Ala
165 170 175
Gly Leu Ile Glu Pro Asp Val Ser Val Val Ser Ile Thr Gly Val Ser
180 185 190
Gly Ala Gly Lys Lys Ala Ser Val Ala Leu Leu Gly Ser Glu Thr Met
195 200 205
Gly Ser Leu Lys Ala Tyr Asn Thr Ser Gly Lys His Arg His Thr Pro
210 215 220
Glu Ile Ala Gln Asn Leu Gly Glu Val Ser Asp Lys Pro Val Lys Val
225 230 235 240
Ser Phe Thr Pro Val Leu Ala Pro Leu Pro Arg Gly Ile Leu Thr Thr
245 250 255
Ala Thr Ala Pro Leu Lys Glu Gly Val Thr Ala Glu Gln Ala Arg Ala
260 265 270
Val Tyr Glu Glu Phe Tyr Ala Gln Glu Thr Phe Val His Val Leu Pro
275 280 285
Glu Gly Ala Gln Pro Gln Thr Gln Ala Val Leu Gly Ser Asn Met Cys
290 295 300
His Val Gln Val Glu Ile Asp Glu Glu Ala Gly Lys Val Leu Val Thr
305 310 315 320
Ser Ala Ile Asp Asn Leu Thr Lys Gly Thr Ala Gly Ala Ala Val Gln
325 330 335
Cys Met Asn Leu Ser Val Gly Phe Asp Glu Ala Ala Gly Leu Pro Gln
340 345 350
Val Gly Val Ala Pro
355
<210> 33
<211> 388
<212> PRT
<213> 乙酰谷氨酸合酶或鸟氨酸乙酰转移酶（ArgJ）
<400> 33
Met Ala Glu Lys Gly Ile Thr Ala Pro Lys Gly Phe Val Ala Ser Ala
1 5 10 15
Thr Thr Ala Gly Ile Lys Ala Ser Gly Asn Pro Asp Met Ala Leu Val
20 25 30
Val Asn Gln Gly Pro Glu Phe Ser Ala Ala Ala Val Phe Thr Arg Asn
35 40 45
Arg Val Phe Ala Ala Pro Val Lys Val Ser Arg Glu Asn Val Ala Asp
50 55 60
Gly Gln Ile Arg Ala Val Leu Tyr Asn Ala Gly Asn Ala Asn Ala Cys
65 70 75 80
Asn Gly Leu Gln Gly Glu Lys Asp Ala Arg Glu Ser Val Ser His Leu
85 90 95
Ala Gln Asn Leu Gly Leu Glu Asp Ser Asp Ile Gly Val Cys Ser Thr
100 105 110
Gly Leu Ile Gly Glu Leu Leu Pro Met Asp Lys Leu Asn Ala Gly Ile
115 120 125
Asp Gln Leu Thr Ala Glu Gly Ala Leu Gly Asp Asn Gly Ala Ala Ala
130 135 140
Ala Lys Ala Ile Met Thr Thr Asp Thr Val Asp Lys Glu Thr Val Val
145 150 155 160
Phe Ala Asp Gly Trp Thr Val Gly Gly Met Gly Lys Gly Val Gly Met
165 170 175
Met Ala Pro Ser Leu Ala Thr Met Leu Val Cys Leu Thr Thr Asp Ala
180 185 190
Ser Val Thr Gln Glu Met Ala Gln Ile Ala Leu Ala Asn Ala Thr Ala
195 200 205
Val Thr Phe Asp Thr Leu Asp Ile Asp Gly Ser Thr Ser Thr Asn Asp
210 215 220
Thr Val Phe Leu Leu Ala Ser Gly Ala Ser Gly Ile Thr Pro Thr Gln
225 230 235 240
Asp Glu Leu Asn Asp Ala Val Tyr Ala Ala Cys Ser Asp Ile Ala Ala
245 250 255
Lys Leu Gln Ala Asp Ala Glu Gly Val Thr Lys Arg Val Ala Val Thr
260 265 270
Val Val Gly Thr Thr Asn Asn Glu Gln Ala Ile Asn Ala Ala Arg Thr
275 280 285
Val Ala Arg Asp Asn Leu Phe Lys Cys Ala Met Phe Gly Ser Asp Pro
290 295 300
Asn Trp Gly Arg Val Leu Ala Ala Val Gly Met Ala Asp Ala Asp Met
305 310 315 320
Glu Pro Glu Lys Ile Ser Val Phe Phe Asn Gly Gln Ala Val Cys Leu
325 330 335
Asp Ser Thr Gly Ala Pro Gly Ala Arg Glu Val Asp Leu Ser Gly Ala
340 345 350
Asp Ile Asp Val Arg Ile Asp Leu Gly Thr Ser Gly Glu Gly Gln Ala
355 360 365
Thr Val Arg Thr Thr Asp Leu Ser Phe Ser Tyr Val Glu Ile Asn Ser
370 375 380
Ala Tyr Ser Ser
385
<210> 34
<211> 317
<212> PRT
<213> 乙酰谷氨酸激酶（ArgB）
<400> 34
Met Asn Asp Leu Ile Lys Asp Leu Gly Ser Glu Val Arg Ala Asn Val
1 5 10 15
Leu Ala Glu Ala Leu Pro Trp Leu Gln His Phe Arg Asp Lys Ile Val
20 25 30
Val Val Lys Tyr Gly Gly Asn Ala Met Val Asp Asp Asp Leu Lys Ala
35 40 45
Ala Phe Ala Ala Asp Met Val Phe Leu Arg Thr Val Gly Ala Lys Pro
50 55 60
Val Val Val His Gly Gly Gly Pro Gln Ile Ser Glu Met Leu Asn Arg
65 70 75 80
Val Gly Leu Gln Gly Glu Phe Lys Gly Gly Phe Arg Val Thr Thr Pro
85 90 95
Glu Val Met Asp Ile Val Arg Met Val Leu Phe Gly Gln Val Gly Arg
100 105 110
Asp Leu Val Gly Leu Ile Asn Ser His Gly Pro Tyr Ala Val Gly Thr
115 120 125
Ser Gly Glu Asp Ala Gly Leu Phe Thr Ala Gln Lys Arg Met Val Asn
130 135 140
Ile Asp Gly Val Pro Thr Asp Ile Gly Leu Val Gly Asp Ile Ile Asn
145 150 155 160
Val Asp Ala Ser Ser Leu Met Asp Ile Ile Glu Ala Gly Arg Ile Pro
165 170 175
Val Val Ser Thr Ile Ala Pro Gly Glu Asp Gly Gln Ile Tyr Asn Ile
180 185 190
Asn Ala Asp Thr Ala Ala Gly Ala Leu Ala Ala Ala Ile Gly Ala Glu
195 200 205
Arg Leu Leu Val Leu Thr Asn Val Glu Gly Leu Tyr Thr Asp Trp Pro
210 215 220
Asp Lys Ser Ser Leu Val Ser Lys Ile Lys Ala Thr Glu Leu Glu Ala
225 230 235 240
Ile Leu Pro Gly Leu Asp Ser Gly Met Ile Pro Lys Met Glu Ser Cys
245 250 255
Leu Asn Ala Val Arg Gly Gly Val Ser Ala Ala His Val Ile Asp Gly
260 265 270
Arg Ile Ala His Ser Val Leu Leu Glu Leu Leu Thr Met Gly Gly Ile
275 280 285
Gly Thr Met Val Leu Pro Asp Val Phe Asp Arg Glu Asn Tyr Pro Glu
290 295 300
Gly Thr Val Phe Arg Lys Asp Asp Lys Asp Gly Glu Leu
305 310 315
<210> 35
<211> 391
<212> PRT
<213> 乙酰鸟氨酸转氨酶（ArgD）
<400> 35
Met Ser Thr Leu Glu Thr Trp Pro Gln Val Ile Ile Asn Thr Tyr Gly
1 5 10 15
Thr Pro Pro Val Glu Leu Val Ser Gly Lys Gly Ala Thr Val Thr Asp
20 25 30
Asp Gln Gly Asn Val Tyr Ile Asp Leu Leu Ala Gly Ile Ala Val Asn
35 40 45
Ala Leu Gly His Ala His Pro Ala Ile Ile Glu Ala Val Thr Asn Gln
50 55 60
Ile Gly Gln Leu Gly His Val Ser Asn Leu Phe Ala Ser Arg Pro Val
65 70 75 80
Val Glu Val Ala Glu Glu Leu Ile Lys Arg Phe Ser Leu Asp Asp Ala
85 90 95
Thr Leu Ala Ala Gln Thr Arg Val Phe Phe Cys Asn Ser Gly Ala Glu
100 105 110
Ala Asn Glu Ala Ala Phe Lys Ile Ala Arg Leu Thr Gly Arg Ser Arg
115 120 125
Ile Leu Ala Ala Val His Gly Phe His Gly Arg Thr Met Gly Ser Leu
130 135 140
Ala Leu Thr Gly Gln Pro Asp Lys Arg Glu Ala Phe Leu Pro Met Pro
145 150 155 160
Ser Gly Val Glu Phe Tyr Pro Tyr Gly Asp Thr Asp Tyr Leu Arg Lys
165 170 175
Met Val Glu Thr Asn Pro Thr Asp Val Ala Ala Ile Phe Leu Glu Pro
180 185 190
Ile Gln Gly Glu Thr Gly Val Val Pro Ala Pro Glu Gly Phe Leu Lys
195 200 205
Ala Val Arg Glu Leu Cys Asp Glu Tyr Gly Ile Leu Met Ile Thr Asp
210 215 220
Glu Val Gln Thr Gly Val Gly Arg Thr Gly Asp Phe Phe Ala His Gln
225 230 235 240
His Asp Gly Val Val Pro Asp Val Val Thr Met Ala Lys Gly Leu Gly
245 250 255
Gly Gly Leu Pro Ile Gly Ala Cys Leu Ala Thr Gly Arg Ala Ala Glu
260 265 270
Leu Met Thr Pro Gly Lys His Gly Thr Thr Phe Gly Gly Asn Pro Val
275 280 285
Ala Cys Ala Ala Ala Lys Ala Val Leu Ser Val Val Asp Asp Ala Phe
290 295 300
Cys Ala Glu Val Ala Arg Lys Gly Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Ala
305 310 315 320
Lys Val Asp Gly Val Val Asp Val Arg Gly Arg Gly Leu Met Leu Gly
325 330 335
Val Val Leu Glu Arg Asp Val Ala Lys Gln Ala Val Leu Asp Gly Phe
340 345 350
Lys His Gly Val Ile Leu Asn Ala Pro Ala Asp Asn Ile Ile Arg Leu
355 360 365
Thr Pro Pro Leu Val Ile Thr Asp Glu Glu Ile Ala Asp Ala Val Lys
370 375 380
Ala Ile Ala Glu Thr Ile Ala
385 390
<210> 36
<211> 319
<212> PRT
<213> 鸟氨酸氨甲酰转移酶（argF）
<400> 36
Met Thr Ser Gln Pro Gln Val Arg His Phe Leu Ala Asp Asp Asp Leu
1 5 10 15
Thr Pro Ala Glu Gln Ala Glu Val Leu Thr Leu Ala Ala Lys Leu Lys
20 25 30
Ala Ala Pro Phe Ser Glu Arg Pro Leu Glu Gly Pro Lys Ser Val Ala
35 40 45
Val Leu Phe Asp Lys Thr Ser Thr Arg Thr Arg Phe Ser Phe Asp Ala
50 55 60
Gly Ile Ala His Leu Gly Gly His Ala Ile Val Val Asp Ser Gly Ser
65 70 75 80
Ser Gln Met Gly Lys Gly Glu Ser Leu Gln Asp Thr Ala Ala Val Leu
85 90 95
Ser Arg Tyr Val Glu Ala Ile Val Trp Arg Thr Tyr Ala His Ser Asn
100 105 110
Phe His Ala Met Ala Glu Thr Ser Thr Val Pro Leu Val Asn Ser Leu
115 120 125
Ser Asp Asp Leu His Pro Cys Gln Ile Leu Ala Asp Leu Gln Thr Ile
130 135 140
Val Glu Asn Leu Ser Pro Glu Glu Gly Pro Ala Gly Leu Lys Gly Lys
145 150 155 160
Lys Ala Val Tyr Leu Gly Asp Gly Asp Asn Asn Met Ala Asn Ser Tyr
165 170 175
Met Ile Gly Phe Ala Thr Ala Gly Met Asp Ile Ser Ile Ile Ala Pro
180 185 190
Glu Gly Phe Gln Pro Arg Ala Glu Phe Val Glu Arg Ala Glu Lys Arg
195 200 205
Gly Gln Glu Thr Gly Ala Lys Val Val Val Thr Asp Ser Leu Asp Glu
210 215 220
Val Ala Gly Ala Asp Val Val Ile Thr Asp Thr Trp Val Ser Met Gly
225 230 235 240
Met Glu Asn Asp Gly Ile Asp Arg Thr Thr Pro Phe Val Pro Tyr Gln
245 250 255
Val Asn Asp Glu Val Met Ala Lys Ala Asn Asp Gly Ala Ile Phe Leu
260 265 270
His Cys Leu Pro Ala Tyr Arg Gly Lys Glu Val Ala Ala Ser Val Ile
275 280 285
Asp Gly Pro Ala Ser Lys Val Phe Asp Glu Ala Glu Asn Arg Leu His
290 295 300
Ala Gln Lys Ala Leu Leu Val Trp Leu Leu Ala Asn Gln Pro Arg
305 310 315
<210> 37
<211> 533
<212> PRT
<213> 谷氨酸输出蛋白（NCgl1221）
<400> 37
Met Ile Leu Gly Val Pro Ile Gln Tyr Leu Leu Tyr Ser Leu Trp Asn
1 5 10 15
Trp Ile Val Asp Thr Gly Phe Asp Val Ala Ile Ile Leu Val Leu Ala
20 25 30
Phe Leu Ile Pro Arg Ile Gly Arg Leu Ala Met Arg Ile Ile Lys Arg
35 40 45
Arg Val Glu Ser Ala Ala Asp Ala Asp Thr Thr Lys Asn Gln Leu Ala
50 55 60
Phe Ala Gly Val Gly Val Tyr Ile Ala Gln Ile Val Ala Phe Phe Met
65 70 75 80
Leu Ala Val Ser Ala Met Gln Ala Phe Gly Phe Ser Leu Ala Gly Ala
85 90 95
Ala Ile Pro Ala Thr Ile Ala Ser Ala Ala Ile Gly Leu Gly Ala Gln
100 105 110
Ser Ile Val Ala Asp Phe Leu Ala Gly Phe Phe Ile Leu Thr Glu Lys
115 120 125
Gln Phe Gly Val Gly Asp Trp Val Arg Phe Glu Gly Asn Gly Ile Val
130 135 140
Val Glu Gly Thr Val Ile Glu Ile Thr Met Arg Ala Thr Lys Ile Arg
145 150 155 160
Thr Ile Ala Gln Glu Thr Val Ile Ile Pro Asn Ser Thr Ala Lys Val
165 170 175
Cys Ile Asn Asn Ser Asn Asn Trp Ser Arg Ala Val Val Val Ile Pro
180 185 190
Ile Pro Met Leu Gly Ser Glu Asn Ile Thr Asp Val Ile Ala Arg Ser
195 200 205
Glu Ala Ala Thr Arg Arg Ala Leu Gly Gln Glu Lys Ile Ala Pro Glu
210 215 220
Ile Leu Gly Glu Leu Asp Val His Pro Ala Thr Glu Val Thr Pro Pro
225 230 235 240
Thr Val Val Gly Met Pro Trp Met Val Thr Met Arg Phe Leu Val Gln
245 250 255
Val Thr Ala Gly Asn Gln Trp Leu Val Glu Arg Ala Ile Arg Thr Glu
260 265 270
Ile Ile Ser Glu Phe Trp Glu Glu Tyr Gly Ser Ala Thr Thr Thr Ser
275 280 285
Gly Thr Leu Ile Asp Ser Leu His Val Glu His Glu Glu Pro Lys Thr
290 295 300
Ser Leu Ile Asp Ala Ser Pro Gln Ala Leu Lys Glu Pro Lys Pro Glu
305 310 315 320
Ala Ala Ala Thr Val Ala Ser Leu Ala Ala Ser Ser Asn Asp Asp Ala
325 330 335
Asp Asn Ala Asp Ala Ser Val Ile Asn Ala Gly Asn Pro Glu Lys Glu
340 345 350
Leu Asp Ser Asp Val Leu Glu Gln Glu Leu Ser Ser Glu Glu Pro Glu
355 360 365
Glu Thr Ala Lys Pro Asp His Ser Leu Arg Gly Phe Phe Arg Thr Asp
370 375 380
Tyr Tyr Pro Asn Arg Trp Gln Lys Ile Leu Ser Phe Gly Gly Arg Val
385 390 395 400
Arg Met Ser Thr Ser Leu Leu Leu Gly Ala Leu Leu Leu Leu Ser Leu
405 410 415
Phe Lys Val Met Thr Val Glu Pro Ser Glu Asn Trp Gln Asn Ser Ser
420 425 430
Gly Trp Leu Ser Pro Ser Thr Ala Thr Ser Thr Ala Val Thr Thr Ser
435 440 445
Glu Thr Ser Ala Pro Val Ser Thr Pro Ser Met Thr Val Pro Thr Thr
450 455 460
Val Glu Glu Thr Pro Thr Met Glu Ser Asn Val Glu Thr Gln Gln Glu
465 470 475 480
Thr Ser Thr Pro Ala Thr Ala Thr Pro Gln Arg Ala Asp Thr Ile Glu
485 490 495
Pro Thr Glu Glu Ala Thr Ser Gln Glu Glu Thr Thr Ala Ser Gln Thr
500 505 510
Gln Ser Pro Ala Val Glu Ala Pro Thr Ala Val Gln Glu Thr Val Ala
515 520 525
Pro Thr Ser Thr Pro
530
<210> 38
<211> 711
<212> PRT
<213> 鸟氨酸脱羧酶（ODC）
<400> 38
Met Lys Ser Met Asn Ile Ala Ala Ser Ser Glu Leu Val Ser Arg Leu
1 5 10 15
Ser Ser His Arg Arg Val Val Ala Leu Gly Asp Thr Asp Phe Thr Asp
20 25 30
Val Ala Ala Val Val Ile Thr Ala Ala Asp Ser Arg Ser Gly Ile Leu
35 40 45
Ala Leu Leu Lys Arg Thr Gly Phe His Leu Pro Val Phe Leu Tyr Ser
50 55 60
Glu His Ala Val Glu Leu Pro Ala Gly Val Thr Ala Val Ile Asn Gly
65 70 75 80
Asn Glu Gln Gln Trp Leu Glu Leu Glu Ser Ala Ala Cys Gln Tyr Glu
85 90 95
Glu Asn Leu Leu Pro Pro Phe Tyr Asp Thr Leu Thr Gln Tyr Val Glu
100 105 110
Met Gly Asn Ser Thr Phe Ala Cys Pro Gly His Gln His Gly Ala Phe
115 120 125
Phe Lys Lys His Pro Ala Gly Arg His Phe Tyr Asp Phe Phe Gly Glu
130 135 140
Asn Val Phe Arg Ala Asp Met Cys Asn Ala Asp Val Lys Leu Gly Asp
145 150 155 160
Leu Leu Ile His Glu Gly Ser Ala Lys Asp Ala Gln Lys Phe Ala Ala
165 170 175
Lys Val Phe His Ala Asp Lys Thr Tyr Phe Val Leu Asn Gly Thr Ser
180 185 190
Ala Ala Asn Lys Val Val Thr Asn Ala Leu Leu Thr Arg Gly Asp Leu
195 200 205
Val Leu Phe Asp Arg Asn Asn His Lys Ser Asn His His Gly Ala Leu
210 215 220
Ile Gln Ala Gly Ala Thr Pro Val Tyr Leu Glu Ala Ser Arg Asn Pro
225 230 235 240
Phe Gly Phe Ile Gly Gly Ile Asp Ala His Cys Phe Asn Glu Glu Tyr
245 250 255
Leu Arg Gln Gln Ile Arg Asp Val Ala Pro Glu Lys Ala Asp Leu Pro
260 265 270
Arg Pro Tyr Arg Leu Ala Ile Ile Gln Leu Gly Thr Tyr Asp Gly Thr
275 280 285
Val Tyr Asn Ala Arg Gln Val Ile Asp Thr Val Gly His Leu Cys Asp
290 295 300
Tyr Ile Leu Phe Asp Ser Ala Trp Val Gly Tyr Glu Gln Phe Ile Pro
305 310 315 320
Met Met Ala Asp Ser Ser Pro Leu Leu Leu Glu Leu Asn Glu Asn Asp
325 330 335
Pro Gly Ile Phe Val Thr Gln Ser Val His Lys Gln Gln Ala Gly Phe
340 345 350
Ser Gln Thr Ser Gln Ile His Lys Lys Asp Asn His Ile Arg Gly Gln
355 360 365
Ala Arg Phe Cys Pro His Lys Arg Leu Asn Asn Ala Phe Met Leu His
370 375 380
Ala Ser Thr Ser Pro Phe Tyr Pro Leu Phe Ala Ala Leu Asp Val Asn
385 390 395 400
Ala Lys Ile His Glu Gly Glu Ser Gly Arg Arg Leu Trp Ala Glu Cys
405 410 415
Val Glu Ile Gly Ile Glu Ala Arg Lys Ala Ile Leu Ala Arg Cys Lys
420 425 430
Leu Phe Arg Pro Phe Ile Pro Pro Val Val Asp Gly Lys Leu Trp Gln
435 440 445
Asp Tyr Pro Thr Ser Val Leu Ala Ser Asp Arg Arg Phe Phe Ser Phe
450 455 460
Glu Pro Gly Ala Lys Trp His Gly Phe Glu Gly Tyr Ala Ala Asp Gln
465 470 475 480
Tyr Phe Val Asp Pro Cys Lys Leu Leu Leu Thr Thr Pro Gly Ile Asp
485 490 495
Ala Glu Thr Gly Glu Tyr Ser Asp Phe Gly Val Pro Ala Thr Ile Leu
500 505 510
Ala His Tyr Leu Arg Glu Asn Gly Ile Val Pro Glu Lys Cys Asp Leu
515 520 525
Asn Ser Ile Leu Phe Leu Leu Thr Pro Ala Glu Ser His Glu Lys Leu
530 535 540
Ala Gln Leu Val Ala Met Leu Ala Gln Phe Glu Gln His Ile Glu Asp
545 550 555 560
Asp Ser Pro Leu Val Glu Val Leu Pro Ser Val Tyr Asn Lys Tyr Pro
565 570 575
Val Arg Tyr Arg Asp Tyr Thr Leu Arg Gln Leu Cys Gln Glu Met His
580 585 590
Asp Leu Tyr Val Ser Phe Asp Val Lys Asp Leu Gln Lys Ala Met Phe
595 600 605
Arg Gln Gln Ser Phe Pro Ser Val Val Met Asn Pro Gln Asp Ala His
610 615 620
Ser Ala Tyr Ile Arg Gly Asp Val Glu Leu Val Arg Ile Arg Asp Ala
625 630 635 640
Glu Gly Arg Ile Ala Ala Glu Gly Ala Leu Pro Tyr Pro Pro Gly Val
645 650 655
Leu Cys Val Val Pro Gly Glu Val Trp Gly Gly Ala Val Gln Arg Tyr
660 665 670
Phe Leu Ala Leu Glu Glu Gly Val Asn Leu Leu Pro Gly Phe Ser Pro
675 680 685
Glu Leu Gln Gly Val Tyr Ser Glu Thr Asp Ala Asp Gly Val Lys Arg
690 695 700
Leu Tyr Gly Tyr Val Leu Lys
705 710
<210> 39
<211> 289
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> lysCP1启动子
<400> 39
ccgatgctag ggcgaaaagc acggcgagca gattgctttg cacttgattc agggtagttg 60
actaaagagt tgctcgcgaa gtagcacctg tcacttttgt ctcaaatatt aaatcgaata 120
tcaatatatg gtctgtttat tggaacgcgt cccagtggct gagacgcatc cgctaaagcc 180
ccaggaaccc tgtgcagaaa gaaaacactc ctctggctag gtagacacag tttattgtgg 240
tagagttgag cgggtaactg tcagcacgta gatcgaaagg tgcacaaag 289

Claims (17)

1.一种产生腐胺或鸟氨酸的棒状杆菌属的经修饰微生物，其中引入来自大肠杆菌的N-乙酰谷氨酸合酶和来自大肠杆菌的乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶的活性。
2.根据权利要求1所述的经修饰微生物，其中所述来自大肠杆菌的N-乙酰谷氨酸合酶由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成。
3.根据权利要求1所述的经修饰微生物，其中所述来自大肠杆菌的乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶由SEQ ID NO:3的氨基酸序列组成。
4.根据权利要求1所述的经修饰微生物，其中所述棒状杆菌属微生物是谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicum)。
5.根据权利要求1所述的经修饰微生物，其中磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子(pta-ackA操纵子)的活性相比其内源活性进一步增强。
6.根据权利要求5所述的经修饰微生物，其中所述磷酸转乙酰酶和乙酸激酶操纵子由SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:7的氨基酸序列组成。
7.根据权利要求1所述的经修饰微生物，其中进一步引入来自大肠杆菌的乙酰辅酶A合成酶(acs)的活性。
8.根据权利要求7所述的经修饰微生物，其中所述乙酰辅酶A合成酶由SEQ ID NO:9的氨基酸序列组成。
9.根据权利要求1所述的经修饰微生物，其中进一步引入鸟氨酸脱羧酶(ODC)的活性。
10.根据权利要求1所述的经修饰微生物，其中i)鸟氨酸氨甲酰转移酶(ArgF)、ii)谷氨酸输出蛋白或ⅲ)鸟氨酸氨甲酰转移酶和谷氨酸输出蛋白的活性相比其内源活性进一步减弱。
11.根据权利要求1所述的经修饰微生物，其中选自以下的至少一个的活性相比其内源活性进一步增强：乙酰γ谷氨酰磷酸还原酶(ArgC)、乙酰谷氨酸合酶或鸟氨酸乙酰转移酶(ArgJ)、乙酰谷氨酸激酶(ArgB)和乙酰鸟氨酸转氨酶(ArgD)。
12.根据权利要求1所述的经修饰微生物，其中乙酰转移酶的活性相比其内源活性进一步减弱。
13.根据权利要求12所述的经修饰微生物，其中所述乙酰转移酶由SEQ ID NO:30或SEQID NO:31的氨基酸序列组成。
14.根据权利要求1所述的经修饰微生物，其中腐胺输出蛋白的活性相比其内源活性进一步增强。
15.根据权利要求14所述的经修饰微生物，其中所述腐胺输出蛋白由SEQ ID NO:26或SEQ ID NO:28的氨基酸序列组成。
16.一种用于产生腐胺或鸟氨酸的方法，包含：
(i)在培养基中培养根据权利要求1到15中任一项所述的棒状杆菌属的经修饰微生物；和
(ii)从所培养的微生物或所述培养基回收腐胺或鸟氨酸。
17.根据权利要求16所述的方法，其中所述棒状杆菌属微生物是谷氨酸棒状杆菌。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108642100A (zh) * 2018-05-16 2018-10-12 江南大学 一种在钝齿棒杆菌中合成l-鸟氨酸的方法

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101937569B1 (ko) * 2017-06-14 2019-01-11 씨제이제일제당 (주) 신규 폴리펩타이드 및 이를 이용한 오르니틴계 산물 생산방법
KR101941775B1 (ko) * 2017-06-14 2019-01-24 씨제이제일제당 (주) 신규 폴리펩타이드 및 이를 이용한 오르니틴계 산물 생산방법
KR102011394B1 (ko) 2017-07-19 2019-10-22 씨제이제일제당 주식회사 퓨트레신을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 퓨트레신 생산방법
BR112021024819A2 (pt) * 2019-07-02 2022-01-25 Codexis Inc Acetato quinase engenheirada, composição, sequência de polinucleotídeos, vetor de expressão, célula hospedeira, e, método de produção de uma acetato quinase engenheirada
KR102246288B1 (ko) * 2020-08-13 2021-04-29 씨제이제일제당 주식회사 퓨트레신 생산 미생물 및 이를 이용한 퓨트레신 생산방법
WO2022092018A1 (ja) * 2020-10-28 2022-05-05 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸の製造法
KR20230054183A (ko) * 2021-10-15 2023-04-24 씨제이제일제당 (주) L-아르기닌을 생산하는 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 l-아르기닌 생산방법

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1367244A (zh) * 2000-10-27 2002-09-04 味之素株式会社 通过发酵生产l－精氨酸的微生物和方法
US6790647B2 (en) * 2000-06-28 2004-09-14 Ajinomoto Co., Inc. Mutant N-acetylglutamate synthase and method for L-arginine production
WO2007099867A1 (ja) * 2006-02-24 2007-09-07 Mitsubishi Chemical Corporation 有機酸生産菌及び有機酸の製造法
CN101063099A (zh) * 2005-05-03 2007-10-31 底古萨股份公司 利用改良的肠杆菌科菌株制备l－氨基酸的方法
CN101374953A (zh) * 2006-01-27 2009-02-25 味之素株式会社 用于产生l-氨基酸的方法
CN101679964A (zh) * 2008-04-10 2010-03-24 韩国科学技术院 具有腐胺高产能力的突变微生物以及使用其生产腐胺的方法
WO2011087139A2 (en) * 2010-01-15 2011-07-21 Ajinomoto Co.,Inc. A BACTERIUM OF Enterobacteriaceae FAMILY PRODUCING L-ASPARTIC ACID OR L-ASPARTIC ACID-DERIVED METABOLITES AND A METHOD FOR PRODUCING L-ASPARTIC ACID OR L-ASPARTIC ACID-DERIVED METABOLITES
CN102498216A (zh) * 2009-08-25 2012-06-13 味之素株式会社 L-氨基酸的产生方法
CN102712910A (zh) * 2010-01-06 2012-10-03 Cj第一制糖株式会社 用于生产 l-鸟氨酸或l-精氨酸的突变株以及用于生产其的方法
KR20130082478A (ko) * 2012-01-11 2013-07-19 씨제이제일제당 (주) 퓨트레신 생산능이 향상된 재조합 미생물 및 이를 이용하여 퓨트레신을 생산하는 방법
WO2014027702A1 (en) * 2012-08-17 2014-02-20 Ajinomoto Co.,Inc. Method for producing l-arginine using bacterium of the family enterobacteriaceae having n-acetylornithine deacetylase with downregulated activity
WO2014148743A1 (ko) * 2013-03-20 2014-09-25 씨제이제일제당 (주) 퓨트레신 생산 재조합 미생물 및 이를 이용한 퓨트레신 생산방법
WO2017127567A1 (en) * 2016-01-19 2017-07-27 Genebiologics, Llc Production of arginine-rich proteins and use as a fertilizer and germination enhancer
CN108642100A (zh) * 2018-05-16 2018-10-12 江南大学 一种在钝齿棒杆菌中合成l-鸟氨酸的方法

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE1642678A1 (de) * 1966-02-19 1971-06-03 Ajinomoto Kk Verfahren zur Herstellung von L-Ornithin und gegebenenfalls L-Isoleucin auf biologischem Wege
JPS6066989A (ja) 1983-09-24 1985-04-17 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd Ｌ−アルギニンの製造法
JPH0755155B2 (ja) 1986-09-10 1995-06-14 協和醗酵工業株式会社 アミノ酸の製造法
EP1664318B1 (en) * 2004-01-30 2009-09-23 Ajinomoto Co., Inc. L-amino acid-producing microorganism and method for producing l-amino acid
NZ552631A (en) 2004-07-15 2009-09-25 Dsm Ip Assets Bv Biochemical synthesis of 1,4-butanediamine
KR100620092B1 (ko) 2004-12-16 2006-09-08 씨제이 주식회사 코리네박테리움 속 세포로부터 유래된 신규한 프로모터서열, 그를 포함하는 발현 카세트 및 벡터, 상기 벡터를포함하는 숙주 세포 및 그를 이용하여 유전자를 발현하는방법
JP2009060791A (ja) * 2006-03-30 2009-03-26 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
US8133714B2 (en) 2007-09-27 2012-03-13 Evonik Degussa Gmbh Process for the fermentative preparation of organic chemical compounds using coryneform bacteria in which the SugR gene is present in attenuated form
KR100930203B1 (ko) 2008-01-28 2009-12-07 씨제이제일제당 (주) 개량된 프로모터 및 이를 이용한 ｌ-라이신의 생산 방법
KR101126041B1 (ko) 2008-04-10 2012-03-19 씨제이제일제당 (주) 트랜스포존을 이용한 형질전환용 벡터, 상기 벡터로형질전환된 미생물 및 이를 이용한 ｌ-라이신 생산방법
KR101381048B1 (ko) 2010-10-20 2014-04-14 씨제이제일제당 (주) Ｏ-포스포세린 생산 균주 및 이로부터 생산된 ｏ-포스포세린으로부터 ｌ-시스테인 또는 이의 유도체의 생산방법
KR101372635B1 (ko) 2010-12-08 2014-03-13 씨제이제일제당 (주) 오르니틴 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용하여 오르니틴을 생산하는 방법
CN102191291B (zh) * 2011-04-25 2013-05-08 武汉远大弘元股份有限公司 一种利用基因工程菌生产l-鸟氨酸盐酸盐的方法

Patent Citations (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6790647B2 (en) * 2000-06-28 2004-09-14 Ajinomoto Co., Inc. Mutant N-acetylglutamate synthase and method for L-arginine production
CN1367244A (zh) * 2000-10-27 2002-09-04 味之素株式会社 通过发酵生产l－精氨酸的微生物和方法
CN101063099A (zh) * 2005-05-03 2007-10-31 底古萨股份公司 利用改良的肠杆菌科菌株制备l－氨基酸的方法
CN101374953A (zh) * 2006-01-27 2009-02-25 味之素株式会社 用于产生l-氨基酸的方法
WO2007099867A1 (ja) * 2006-02-24 2007-09-07 Mitsubishi Chemical Corporation 有機酸生産菌及び有機酸の製造法
CN101679964A (zh) * 2008-04-10 2010-03-24 韩国科学技术院 具有腐胺高产能力的突变微生物以及使用其生产腐胺的方法
CN102498216A (zh) * 2009-08-25 2012-06-13 味之素株式会社 L-氨基酸的产生方法
CN102712910A (zh) * 2010-01-06 2012-10-03 Cj第一制糖株式会社 用于生产 l-鸟氨酸或l-精氨酸的突变株以及用于生产其的方法
WO2011087139A2 (en) * 2010-01-15 2011-07-21 Ajinomoto Co.,Inc. A BACTERIUM OF Enterobacteriaceae FAMILY PRODUCING L-ASPARTIC ACID OR L-ASPARTIC ACID-DERIVED METABOLITES AND A METHOD FOR PRODUCING L-ASPARTIC ACID OR L-ASPARTIC ACID-DERIVED METABOLITES
KR20130082478A (ko) * 2012-01-11 2013-07-19 씨제이제일제당 (주) 퓨트레신 생산능이 향상된 재조합 미생물 및 이를 이용하여 퓨트레신을 생산하는 방법
WO2014027702A1 (en) * 2012-08-17 2014-02-20 Ajinomoto Co.,Inc. Method for producing l-arginine using bacterium of the family enterobacteriaceae having n-acetylornithine deacetylase with downregulated activity
WO2014148743A1 (ko) * 2013-03-20 2014-09-25 씨제이제일제당 (주) 퓨트레신 생산 재조합 미생물 및 이를 이용한 퓨트레신 생산방법
KR20140115244A (ko) * 2013-03-20 2014-09-30 씨제이제일제당 (주) 퓨트레신 생산 재조합 미생물 및 이를 이용한 퓨트레신 생산방법
WO2017127567A1 (en) * 2016-01-19 2017-07-27 Genebiologics, Llc Production of arginine-rich proteins and use as a fertilizer and germination enhancer
CN108642100A (zh) * 2018-05-16 2018-10-12 江南大学 一种在钝齿棒杆菌中合成l-鸟氨酸的方法

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NCBI: "MULTISPECIES: acetyl-CoA synthetase [Enterobacteriaceae]", 《GENBANK》 *
NCBI: "MULTISPECIES: peptidase T [Enterobacteriaceae]", 《GENBANK》 *
QUNFENG SHU等: "Improved l-ornithine production in Corynebacterium crenatum by introducing an artificial linear transacetylation pathway", 《JOURNAL OF INDUSTRIAL MICROBIOLOGY & BIOTECHNOLOGY》 *
WENFANG DOU等: "Improvement of L-Arginine Production by Overexpression of a Bifunctional Ornithine Acetyltransferase in Corynebacterium crenatum", 《APPL BIOCHEM BIOTECHNOL》 *
段钢主编: "《酶制剂在大宗生化品生产中的应用》", 31 January 2014 *
舒群峰等: "钝齿棒杆菌中异源表达N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶合成L-鸟氨酸的研究", 《中国生物工程杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108642100A (zh) * 2018-05-16 2018-10-12 江南大学 一种在钝齿棒杆菌中合成l-鸟氨酸的方法
CN108642100B (zh) * 2018-05-16 2020-12-29 江南大学 一种在钝齿棒杆菌中合成l-鸟氨酸的方法

Also Published As

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AU2016297226A1 (en) 2018-01-25
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