CN107787331A - 抗her2抗体和使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供抗HER2抗体，包括稳定性或亲和力改善的抗HER2抗体，及其使用方法。

Description

抗HER2抗体和使用方法
对相关申请的交叉引用
本申请要求2015年6月17日提交的美国专利申请No.62/181,106的优先权，通过援引将其公开内容完整收入本文。
序列表
本申请含有序列表，已经以ASCII格式电子提交且据此通过援引完整收录。2016年6月16日创建的所述ASCII拷贝命名为P32917WO_PCTSequenceListing.txt，而且大小为71,942个字节。
发明领域
本发明涉及抗HER2抗体及其使用方法。
发明背景
受体酪氨酸激酶的ErbB家族的成员是细胞生长，分化和存活的重要介导物。该受体家族包括四个独特成员，包括表皮生长因子受体(EGFR或ErbB1)，HER2(ErbB2或p185neu)，HER3(ErbB3)和HER4(ErbB4或tyro2)。
针对大鼠p185neu和人ErbB2蛋白质产物的抗体已有记载。参见例如Drebin etal.,Cell,41:695-706(1985)；Myers et al.,Meth.Enzym.198:277-290(1991)；WO94/22478；Tagliabue et al.,Int.J.Cancer 47:933-937(1991)；McKenzie et al.,Oncogene4:543-548(1989)；Maier et al.,Cancer Res.51:5361-5369(1991)；Bacus et al.,Molecular Carcinogenesis 3:350-362(1990)；Stancovski et al.,PNAS(USA)88:8691-8695(1991)；Bacus et al.,Cancer Research 52:2580-2589(1992)；Xu et al.,Int.J.Cancer 53:401-408(1993)；WO94/00136；Kasprzyk et al.,Cancer Research 52:2771-2776(1992)；Hancock et al.,Cancer Res.51:4575-4580(1991)；Shawver et al.,Cancer Res.54:1367-1373(1994)；Arteaga et al.,Cancer Res.54:3758-3765(1994)；Harwerth et al.,J.Biol.Chem.267:15160-15167(1992)；美国专利No.5,783,186；Klapper et al.,Oncogene 14:2099-2109(1997)；Lewis et al.,Cancer Research 56:1457-1465(1996)；及Schaefer et al.,Oncogene 15:1385-1394(1997)。
鼠单克隆抗HER2抗体4D5抑制过表达HER2的乳腺癌细胞系的生长(Lewis et al.,Cancer Immunol.Immunother.[1993])。基于这项观察结果，将抗体4D5人源化(Carter etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:4285-4289[1992])。人源化(4D5)单克隆抗体(hu4D5)在商业上称作药物(曲妥珠单抗(trastuzumab)，rhuMAb HER2，美国专利No 5,821,337)，其在1998年晚期获得FDA销售批准。然而，仍然需要改善的靶向表达HER2靶抗原的癌症的癌症治疗剂。
发明概述
本发明涉及人源化抗HER2抗体hu4D5的变体。在一些实施方案中，该变体具有与hu4D5相比改善的稳定性。在一些实施方案中，该变体具有与hu4D5相比升高的对Her2抗原的亲和力。
本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变域(VH)。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变域(VH)。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含轻链可变域(VL)且包含包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变域(VH)。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域(VL)且包含包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变域(VH)。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变域(VH)。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链可变域(VH)。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变域(VH)。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的重链可变域(VH)。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变域(VH)。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链可变域(VH)。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链可变域(VH)。本发明的一个方面提供一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQID NO:23的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
本发明的一个方面提供任何前述方面的分离的抗HER2抗体，其中该抗HER2抗体进一步包含抗CD3结合域。在一个实施方案中，该抗CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的HVR-H1(b)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ IDNO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗CD3结合域包含包含SEQID NO:77的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VL域。在一个实施方案中，该抗CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ IDNO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的HVR-L3。在一个实施方案中，该抗CD3结合域包含包含SEQ IDNO:79的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL域。
在上述方面的某些实施方案中，该抗HER2抗体为单克隆，人，人源化，或嵌合抗体。在上述方面的某些实施方案中，该抗HER2抗体为IgG抗体。。在上述方面的某些实施方案中，该抗HER2抗体为多特异性抗体。在上述方面的某些实施方案中，该抗HER2抗体为全长抗体。在上述方面的某些实施方案中，该抗HER2抗体包含无糖基化位点突变。在上述方面的某些实施方案中，该抗HER2抗体包含无糖基化位点突变，其为替代突变。在上述方面的某些实施方案中，该抗HER2抗体具有降低的效应器功能。在上述方面的某些实施方案中，该抗HER2抗体在依照EU编号方式的氨基酸残基N297，L234，L235，D265，和/或P329G处包含替代突变。在上述方面的某些实施方案中，该替代突变选自由依照EU编号方式的N297G，N297A，L234A，L235A，D265A，和P329G组成的组。在上述方面的某些实施方案中，该抗HER2抗体在依照EU编号方式的氨基酸残基297处包含N297G替代突变。
在上述方面的某些实施方案中，该抗HER2抗体为抗体片段，诸如Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和/或(Fab’)2片段。
本发明的一个方面提供一种分离的核酸，其编码任何上述方面的抗HER2抗体。本发明的一个方面提供一种载体，其包含该分离的核酸。本发明的一个方面提供一种宿主细胞，其包含该载体。
本发明的一个方面提供一种生成该抗HER2抗体的方法，该方法包括在培养基中培养该宿主细胞。
本发明的一个方面提供药物组合物，其包含任何上述方面的抗HER2抗体。本发明的一个方面提供任何上述方面的抗HER2抗体，其用作药物。该药物可用于在有所需要的受试者中治疗细胞增殖性病症或延迟细胞增殖性病症进展。本发明的一个方面提供任何上述方面的抗HER2抗体，其用于在具有细胞增殖性病症，诸如癌症的受试者中增强免疫功能。在某些实施方案中，该癌症为表达HER2的癌症。在一个实施方案中，该癌症为HER2阳性癌症。在一些实施方案中，该癌症为乳腺癌或胃癌。
本发明的一个方面提供任何上述方面的抗HER2抗体在制造用于治疗细胞增殖性病症，诸如癌症或延迟细胞增殖性病症，诸如癌症进展的药物中的用途。在某些实施方案中，该癌症为表达HER2的癌症。在一个实施方案中，该癌症为HER2阳性癌症。在一些实施方案中，该癌症为乳腺癌或胃癌。
本发明的一个方面提供一种在有所需要的受试者中治疗细胞增殖性病症或延迟细胞增殖性病症进展的方法，该方法包括对该受试者施用任何上述方面的抗HER2抗体。
本发明的一个方面提供一种在具有细胞增殖性病症的受试者中增强免疫功能的方法，该方法包括对该受试者施用有效量的任何上述方面的抗HER2抗体。在某些实施方案中，该细胞增殖性病症为癌症。在某些实施方案中，该癌症为表达HER2的癌症。在一个实施方案中，该癌症为HER2阳性癌症。在一些实施方案中，该癌症为乳腺癌或胃癌。在某些实施方案中，该方法进一步包括对该受试者施用PD-1轴结合拮抗剂(诸如抗PDL1抗体)。
附图简述
图1显示hu4D5替代氨基酸位置(X1-X6)以阴影标示的hu4D5，和变体4D5v3(以出现的次序分别为SEQ ID NO:1，3，10，2，4和11)的氨基酸序列比对。
图2是一张表，汇总Fab型式的抗HER2变体的单价结合亲和力，如通过表面等离振子共振测定的。
图3是一张表，汇总选定抗HER2抗体的结合亲和力，如通过表面等离振子共振测定的。
图4是一张表，汇总选定抗HER2/CD3双特异性抗体的结合亲和力，如通过表面等离振子共振测定的。
图5A-C描绘使用纯化的人CD8+细胞和表达HER2的靶细胞系实施的，用于评估抗HER2/CD3TDB的功能活性的细胞杀伤测定法。
图6A和B显示抗HER2/CD3TDB诱导T细胞活性的能力。
发明详述
I.定义
如本文中使用的，术语“约”指此技术领域中的技术人员容易知道的相应数值的常规误差范围。本文中提到“约”数值或参数包括(且描述)涉及该数值或参数本身的实施方案。
出于本文中的目的，“受体人框架”指包含自人免疫球蛋白框架或如下文定义的人共有框架衍生的轻链可变域(VL)框架或重链可变域(VH)框架的氨基酸序列的框架。自人免疫球蛋白框架或人共有框架“衍生”的受体人框架可以包含其相同的氨基酸序列，或者它可以含有氨基酸序列变化。在一些实施方案中，氨基酸变化的数目是10或更少，9或更少，8或更少，7或更少，6或更少，5或更少，4或更少，3或更少，或2或更少。在一些实施方案中，VL受体人框架与VL人免疫球蛋白框架序列或人共有框架序列在序列上相同。
“亲和力”指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有指示，如本文中使用的，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体和抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可以用解离常数(Kd)来表述。亲和力可以通过本领域知道的常用方法来测量，包括本文中所描述的方法。下文描述了用于测量结合亲和力的具体的说明性和例示性的实施方案。
“亲和力成熟的”抗体指在一个或多个高变区(HVR)中具有一处或多处改变的抗体，与不拥有此类改变的亲本抗体相比，此类改变导致该抗体对抗原的亲和力改善。
术语“抗CD3抗体”和“结合CD3的抗体”指能够以足够亲和力结合CD3，使得该抗体可作为诊断剂和/或治疗剂用于靶向CD3的抗体。在一个实施方案中，根据例如通过放射免疫测定法(RIA)的测量，抗CD3抗体结合无关的，非CD3的蛋白质的程度小于该抗体对CD3的结合的约10％。在某些实施方案中，结合CD3的抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM(例如10-8M或更少，例如10-8M到10-13M，例如10-9M到10-13M)的解离常数(Kd)。在某些实施方案中，抗CD3抗体结合在来自不同物种的CD3中保守的CD3表位。
本文中的术语“抗体”以最广义使用，并且涵盖各种抗体结构，包括但不限于单克隆抗体，多克隆抗体，多特异性抗体(例如双特异性抗体)，和抗体片段，只要它们展现出期望的抗原结合活性。
“抗体片段”指与完整抗体不同的分子，其包含完整抗体中结合完整抗体所结合抗原的部分。抗体片段的例子包括但不限于Fv，Fab，Fab’，Fab’-SH，F(ab’)2；双抗体；线性抗体；单链抗体分子(例如scFv)；和由抗体片段形成的多特异性抗体。
“结合域”表示特异性结合靶表位，抗原，配体，或受体的化合物或分子的一部分。结合域包括但不限于抗体(例如单克隆，多克隆，重组，人源化，和嵌合抗体)，抗体片段或其部分(例如Fab片段，Fab’2，scFv抗体，SMIP，域抗体，双抗体，微型抗体(minibody)，scFv-Fc，亲和体(affibody)，纳米抗体(nanobody)，和抗体的VH和/或VL域)，受体，配体，适体，和具有已鉴定的结合配偶的其它分子。
“化疗剂”是可用于治疗癌症的化学化合物。化疗剂的实例包括烷化剂类(alkylating agents)，诸如塞替派(thiotepa)和环磷酰胺(cyclophosphamide)磺酸烷基酯类(alkyl sulfonates)，诸如白消安(busulfan)，英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶类(aziridines)，诸如苯佐替派(benzodopa)，卡波醌(carboquone)，美妥替派(meturedopa)和乌瑞替派(uredopa)；乙撑亚胺类(ethylenimines)和甲基蜜胺类(methylamelamines)，包括六甲蜜胺(altretamine)，三乙撑蜜胺(triethylenemelamine)，三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)，三乙撑硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylomelamine)；番荔枝内酯类(acetogenin)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone))；δ-9-四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol)，β-拉帕醌(lapachone)；拉帕醇(lapachol)；秋水仙素类(colchicines)；白桦脂酸(betulinicacid)；喜树碱(camptothecin)(包括合成类似物托泊替康(topotecan)CPT-11(伊立替康(irinotecan)，乙酰喜树碱，东莨菪亭(scopolectin)和9-氨基喜树碱)；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065(包括其阿多来新(adozelesin)，卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成类似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin)；鬼臼酸(podophyllinic acid)；替尼泊苷(teniposide)；隐藻素类(cryptophycins)(特别是隐藻素1和隐藻素8)；多拉司他汀(dolastatin)；duocarmycin(包括合成类似物，KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；海绵抑素(spongistatin)；氮芥类(nitrogen mustards)，诸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)，萘氮芥(chlornaphazine)，胆磷酰胺(chlorophosphamide)，雌莫司汀(estramustine)，异环磷酰胺(ifosfamide)，双氯乙基甲胺(mechlorethamine)，盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)，美法仑(melphalan)，新氮芥(novembichin)，苯芥胆甾醇(phenesterine)，泼尼莫司汀(prednimustine)，曲磷胺(trofosfamide)，尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝脲类(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀(carmustine)，氯脲菌素(chlorozotocin)，福莫司汀(fotemustine)，洛莫司汀(lomustine)，尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素类，诸如烯二炔类抗生素(enediyne)(如加利车霉素(calicheamicin)，尤其是加利车霉素γ1I和加利车霉素ωI1(参见例如Nicolaou et al.,Angew.Chem Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994))；CDP323，一种口服α-4整联蛋白抑制剂；蒽环类抗生素(dynemicin)，包括dynemicin A；埃斯波霉素(esperamicin)；以及新制癌素(neocarzinostatin)发色团和相关色蛋白烯二炔类抗生素发色团)，阿克拉霉素(aclacinomysin)，放线菌素(actinomycin)，氨茴霉素(authramycin)，偶氮丝氨酸(azaserine)，博来霉素(bleomycin)，放线菌素C(cactinomycin)，carabicin，洋红霉素(caminomycin)，嗜癌霉素(carzinophilin)，色霉素(chromomycin)，放线菌素D(dactinomycin)，柔红霉素(daunorubicin)，地托比星(detorubicin)，6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸，多柔比星(doxorubicin)(包括吗啉代多柔比星，氰基吗啉代多柔比星，2-吡咯代多柔比星，盐酸多柔比星脂质体注射剂脂质体多柔比星TLC D-99PEG化脂质体多柔比星和脱氧多柔比星)，表柔比星(epirubicin)，依索比星(esorubicin)，伊达比星(idarubicin)，麻西罗霉素(marcellomycin)，丝裂霉素类(mitomycins)诸如丝裂霉素C，霉酚酸(mycophenolicacid)，诺拉霉素(nogalamycin)，橄榄霉素(olivomycin)，培洛霉素(peplomycin)，泊非霉素(porfiromycin)，嘌呤霉素(puromycin)，三铁阿霉素(quelamycin)，罗多比星(rodorubicin)，链黑菌素(streptonigrin)，链佐星(streptozocin)，杀结核菌素(tubercidin)，乌苯美司(ubenimex)，净司他丁(zinostatin)，佐柔比星(zorubicin)；抗代谢物类，诸如甲氨蝶呤，吉西他滨(gemcitabine)替加氟(tegafur)卡培他滨(capecitabine)埃坡霉素(epothilone)和5-氟尿嘧啶(5-FU)；考布他汀(combretastatin)；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)，甲氨蝶呤，蝶酰三谷氨酸(pteropterin)，三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)，6-巯基嘌呤(mercaptopurine)，硫咪嘌呤(thiamiprine)，硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)，阿扎胞苷(azacitidine)，6-氮尿苷，卡莫氟(carmofur)，阿糖胞苷(cytarabine)，双脱氧尿苷(dideoxyuridine)，去氧氟尿苷(doxifluridine)，依诺他滨(enocitabine)，氟尿苷(floxuridine)；雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)，丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)，表硫雄醇(epitiostanol)，美雄烷(mepitiostane)，睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)，米托坦(mitotane)，曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elformithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；epothilone；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟脲(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登木素生物碱类(maytansinoids)，诸如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌(mitoxantrone)；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；2-乙基酰肼(ethylhydrazide)；丙卡巴肼(procarbazine)；多糖复合物(JHS Natural Products，Eugene，Oreg.)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西索菲兰(sizofuran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2’,2”-三氯三乙胺；单端孢菌素类(trichothecenes)(尤其是T-2毒素，疣孢菌素(verracurin)A，杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidine))；乌拉坦(urethan)；长春地辛(vindesine) 达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露醇氮芥(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；塞替派(thiotepa)；类紫杉醇(taxoid)，例如帕利他塞(paclitaxel)(Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N.J.)，清蛋白改造的纳米颗粒剂型帕利他塞(ABRAXANETM)和多西他塞(docetaxel)(Rhome-Poulene Rorer,Antony,France)；苯丁酸氮芥(chloranbucil)；6-硫鸟嘌呤(thioguanine)；巯基嘌呤(mercaptopurine)；甲氨蝶呤(methotrexate)；铂剂，诸如顺铂(cisplatin)，奥沙利铂(oxaliplatin)(例如)和卡铂(carboplatin)；长春药类(vincas)，其阻止微管蛋白聚合形成微管，包括长春碱(vinblastine)长春新碱(vincristine)长春地辛(vindesine)和长春瑞滨(vinorelbine)依托泊苷(etoposide)(VP-16)；异环磷酰胺(ifosfamide)；米托蒽醌(mitoxantrone)；亚叶酸(leucovorin)；能灭瘤(novantrone)；依达曲沙(edatrexate)；道诺霉素(daunomycin)；氨基蝶呤(aminopterin)；伊本膦酸盐(ibandronate)；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；类维A酸(retinoids)，诸如维A酸(retinoic acid)，包括贝沙罗汀(bexarotene)二膦酸盐类(bisphosphonates)，诸如氯膦酸盐(clodronate)(例如或)，依替膦酸钠(etidronate)NE-58095，唑来膦酸/唑来膦酸盐(zoledronic acid/zoledronate)阿伦膦酸盐(alendronate)帕米膦酸盐(pamidronate)替鲁膦酸盐(tiludronate)或利塞膦酸盐(risedronate)以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-α，Raf，H-Ras和表皮生长因子受体(EGF-R)(例如厄洛替尼(erlotinib)(TarcevaTM)；和降低细胞增殖的VEGF-A；疫苗，诸如疫苗和基因疗法疫苗，例如疫苗，疫苗和疫苗；拓扑异构酶1抑制剂(例如)；rmRH(例如)；BAY439006(sorafenib；Bayer)；SU-11248(sunitinib，Pfizer)；哌立福辛(perifosine)，COX-2抑制剂(如塞来考昔(celecoxib)或艾托考昔(etoricoxib))，蛋白体抑制剂(例如PS341)；bortezomibCCI-779；tipifarnib(R11577)；orafenib，ABT510；Bcl-2抑制剂，诸如oblimersen sodiumpixantrone；EGFR抑制剂；酪氨酸激酶抑制剂；丝氨酸-苏氨酸激酶抑制剂，诸如雷帕霉素(rapamycin)(sirolimus，)；法尼基转移酶抑制剂，诸如lonafarnib(SCH6636，SARASARTM)；及任何上述各项的药学可接受盐，酸或衍生物；以及两种或更多种上述各项的组合，诸如CHOP(环磷酰胺，多柔比星，长春新碱和泼尼松龙联合疗法的缩写)和FOLFOX(奥沙利铂(ELOXATINTM)联合5-FU和亚叶酸的治疗方案的缩写)，及任何上述各项的药学可接受盐，酸或衍生物；以及两种或更多种上述各项的组合。
本文中所定义的化疗剂包括“抗激素剂”或“内分泌治疗剂”，其作用于调节，降低，阻断，或抑制能促进癌症生长的激素的效果。它们自身可以是激素，包括但不限于：抗雌激素类和选择性雌激素受体调控物类(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括他莫昔芬)，雷洛昔芬(raloxifene)，屈洛昔芬(droloxifene)，4-羟基他莫昔芬，曲沃昔芬(trioxifene)，那洛昔芬(keoxifene)，LY117018，奥那司酮(onapristone)和托瑞米芬(toremifene)；抑制在肾上腺中调节雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制剂，诸如例如4(5)-咪唑，氨鲁米特(aminoglutethimide)，醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)，依西美坦(exemestane)，福美坦(formestanie)，法倔唑(fadrozole)，伏罗唑(vorozole)，来曲唑(letrozole)和阿那曲唑(anastrozole)；抗雄激素类，诸如氟他米特(flutamide)，尼鲁米特(nilutamide)，比卡米特(bicalutamide)，亮丙瑞林(leuprolide)，和戈舍瑞林(goserelin)；以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；反义寡核苷酸，特别是抑制牵涉异常(abherant)细胞增殖的信号途经中的基因表达的反义寡核苷酸，诸如例如PKC-α，Raf和H-Ras；核酶，诸如VEGF表达抑制剂(例如核酶)和HER2表达抑制剂；疫苗，诸如基因疗法疫苗，例如疫苗，疫苗和疫苗；rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂；rmRH；长春瑞滨(Vinorelbine)和埃斯波霉素(Esperamicins)(见美国专利No.4,675,187)；及任何上述物质的药剂学可接受的盐，酸或衍生物；以及两种或多种上述物质的组合。
术语“嵌合”抗体指其中的重和/或轻链的一部分自特定的来源或物种衍生，而重和/或轻链的剩余部分自不同来源或物种衍生的抗体。
如本文中所使用的，术语“分化簇3”或“CD3”指来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物，诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠))的任何天然CD3，除非另有说明，包括例如CD3ε，CD3γ，CD3α，和CD3β链。该术语涵盖“全长”，未加工的CD3(例如未加工的或未修饰的CD3ε或CD3γ)以及自细胞中加工得到的任何形式的CD3。该术语还涵盖天然存在的CD3变体，包括例如剪接变体或等位变体。CD3包括例如长度为207个氨基酸的人CD3ε蛋白(NCBI RefSeq No.NP_000724)和长度为182个氨基酸的人CD3γ蛋白(NCBI RefSeq No.NP_000064)。
抗体的“类”指其重链拥有的恒定域或恒定区的类型。抗体有5大类：IgA，IgD，IgE，IgG，和IgM，并且这些中的几种可以进一步分成亚类(同种型)，例如，IgG1，IgG2，IgG3，IgG4，IgA1，和IgA2。与不同类免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α，δ，ε，γ，和μ。
应当理解，本文中描述的本发明的方面和实施方案包括“包含……”，“由……组成”，和“基本上由……组成”的方面和实施方案。
如本文中使用的，术语“细胞毒剂”指抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞死亡或破坏的物质。细胞毒剂包括但不限于：放射性同位素(例如At211，I131，I125，Y90，Re186，Re188，Sm153，Bi212，P32，Pb212和Lu的放射性同位素)；化学治疗剂或药物(例如甲氨蝶呤(methotrexate)，阿霉素(adriamicin)，长春花生物碱类(vinca alkaloids)(长春新碱(vincristine)，长春碱(vinblastine)，依托泊苷(etoposide))，多柔比星(doxorubicin)，美法仑(melphalan)，丝裂霉素(mitomycin)C，苯丁酸氮芥(chlorambucil)，柔红霉素(daunorubicin)或其它嵌入剂)；生长抑制剂；酶及其片段，诸如溶核酶；抗生素；毒素，诸如小分子毒素或者细菌，真菌，植物或动物起源的酶活性毒素，包括其片段和/或变体；及下文公开的各种抗肿瘤或抗癌剂。
“病症”为会受益于处理的任何状况，包括但不限于慢性和急性病症或疾病，包括那些使哺乳动物易患所讨论病症的病理状况。
术语“细胞增殖性病症”和“增殖性病症”指与一定程度的异常细胞增殖有关的病症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症指癌症。在一个实施方案中，细胞增殖性病症指肿瘤。
术语“癌症”和“癌性”指向或描述哺乳动物中特征通常为细胞生长/增殖不受调节的生理疾患。癌症的例子包括但不限于癌，淋巴瘤，母细胞瘤，肉瘤和白血病或淋巴样恶性肿瘤。此类癌症的更具体例子包括但不限于鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)，肺癌(包括小细胞肺癌，非小细胞肺癌，肺的腺癌，和肺的鳞癌)，腹膜癌，肝细胞癌，胃癌或胃的癌(包括胃肠癌和胃肠基质癌)，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，尿道癌，肝瘤，乳腺癌，结肠癌，直肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌或子宫癌，唾液腺癌，肾癌或肾的癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝的癌，肛门癌，阴茎癌，黑素瘤，浅表扩散性黑素瘤，恶性雀斑样痣黑素瘤，肢端黑素瘤，结节性黑素瘤，多发性骨髓瘤和B细胞淋巴瘤(包括低级/滤泡性非何杰金(Hodgkin)氏淋巴瘤(NHL)，小淋巴细胞性(SL)NHL，中级/滤泡性NHL，中级弥漫性NHL，高级成免疫细胞性NHL，高级成淋巴细胞性NHL，高级小无核裂细胞性NHL，贮积病(bulky disease)NHL，套细胞淋巴瘤，AIDS相关淋巴瘤，和瓦尔登斯特伦氏(Waldenstrom)巨球蛋白血症)，慢性淋巴细胞性白血病(CLL)，急性成淋巴细胞性白血病(ALL)，毛细胞性白血病，慢性成髓细胞性白血病，和移植后淋巴增殖性病症(PTLD)，以及与瘢痣病(phakomatoses)，水肿(诸如与脑瘤有关的)和梅格斯氏(Meigs)综合征有关的异常血管增殖，脑，以及头和颈癌，及相关转移。在某些实施方案中，适合于通过本发明的抗体来治疗的癌症包括乳腺癌，结肠直肠癌，直肠癌，非小细胞肺癌，成胶质细胞瘤，非何杰金氏淋巴瘤(NHL)，肾细胞癌，前列腺癌，肝癌，胰腺癌，软组织肉瘤，卡波西(Kaposi)氏肉瘤，类癌癌(carcinoid carcinoma)，头和颈癌，卵巢癌，间皮瘤，和多发性骨髓瘤。在一些实施方案中，癌症选自：小细胞肺癌，成胶质细胞瘤，成神经细胞瘤，黑素瘤，乳腺癌，胃癌，结肠直肠癌(CRC)，和肝细胞癌。还有，在一些实施方案中，癌症选自：非小细胞肺癌，结肠直肠癌，成胶质细胞瘤和乳腺癌，包括那些癌症的转移性形式。在其它实施方案中，癌症选自一类成熟B细胞癌症，排除何杰金氏淋巴瘤但包括生发中心B细胞样(GCB)DLBCL，活化的B细胞样(ABC)DLBCL，滤泡性淋巴瘤(FL)，套细胞性淋巴瘤(MCL)，急性髓样白血病(AML)，慢性淋巴样白血病(CLL)，边缘区淋巴瘤(MZL)，小淋巴细胞性白血病(SLL)，淋巴浆细胞性淋巴瘤(LL)，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM)，中枢神经系统淋巴瘤(CNSL)，伯基特氏淋巴瘤(BL)，B细胞前淋巴细胞性白血病，脾边缘区淋巴瘤，毛细胞性白血病，脾淋巴瘤/白血病，不可归类的，脾弥漫性红髓小B细胞性淋巴瘤，毛细胞性白血病变体，瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症，重链病，α重链病，γ重链病，μ重链病，浆细胞骨髓瘤，骨的孤立性浆细胞瘤，髓外浆细胞瘤，粘膜相关淋巴样组织的结外边缘区淋巴瘤(MALT淋巴瘤)，结边缘区淋巴瘤，儿科结边缘区淋巴瘤，儿科滤泡淋巴瘤，原发性皮肤滤泡中心性淋巴瘤，富于T细胞/组织细胞的大B细胞淋巴瘤，CNS的原发性DLBCL，原发性皮肤DLBCL，老年人的腿型，EBV阳性DLBCL，与慢性炎症有关的DLBCL，淋巴瘤样肉芽肿病，原发性纵隔(胸腺)大B细胞淋巴瘤，血管内大B细胞淋巴瘤，ALK阳性大B细胞淋巴瘤，成浆细胞性淋巴瘤，HHV8相关多中心卡斯特尔曼(Castleman)病引起的大B细胞淋巴瘤，原发性渗出性淋巴瘤：不可归类的，具有弥漫性大B细胞淋巴瘤和伯基特淋巴瘤之间的中间特征的B细胞淋巴瘤，和不可归类的，具有弥漫性大B细胞淋巴瘤和经典何杰金淋巴瘤之间的中间特征的B细胞淋巴瘤。
如本文中使用的，“肿瘤”指所有赘生性(neoplastic)细胞生长和增殖，无论是恶性的还是良性的，及所有癌前(pre-cancerous)和癌性细胞和组织。术语“癌症”，“癌性”，“细胞增殖性病症”，“增殖性病症”和“肿瘤”在本文中提到时并不互相排斥。
如本文中使用的，术语“肿瘤抗原”可理解为那些在肿瘤细胞上呈递的抗原。这些抗原可以以胞外部分在细胞表面上呈递，该胞外部分常常与该分子的跨膜和细胞质部分组合。这些抗原有时可以仅由肿瘤细胞呈递且决不由正常细胞呈递。肿瘤抗原可以在肿瘤细胞上排外地表达，或者可以代表与正常细胞相比的肿瘤特异性突变。在这种情况中，它们称作肿瘤特异性抗原。更常见的是由肿瘤细胞和正常细胞呈递的肿瘤抗原，而且它们称作肿瘤相关抗原。这些肿瘤相关抗原可以与正常细胞相比过表达，或者由于与正常组织相比肿瘤组织的较不紧实的结构而在肿瘤细胞中对于抗体结合是可及的。在一个方面，肿瘤抗原选自下文表1中列出的那些。
“效应器功能”指那些可归于抗体Fc区且随抗体同种型而变化的生物学活性。抗体效应器功能的例子包括：C1q结合和补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如B细胞受体)下调；和B细胞活化。
化合物(例如本发明的抗HER2抗体)或其组合物(例如药物组合物)的“有效量”是实现期望的治疗或预防结果(诸如特定病症(例如细胞增殖性病症，例如癌症)的可测量改善或预防)所需要的至少最小量。本文中的有效量可以随诸如患者的疾病状态，年龄，性别，和重量，和抗体引发个体中期望的应答的能力等因素而变化。有效量也是治疗有益效果超过治疗的任何毒性或不利效果的量。为了预防性使用，有益或期望的结果包括如下的结果，诸如消除或降低风险，减轻严重性，或者延迟疾病的发作，包括疾病的生物化学，组织学和/或行为症状，其并发症和疾病形成期间呈现的中间病理学表型。为了治疗性使用，有益或期望的结果包括临床结果，诸如减少源自疾病的一种或多种症状，提高那些患有疾病的对象的生命质量，降低治疗疾病需要的其它药物的剂量，增强另一种药物的效果(诸如经由靶向)，延迟疾病的进展，和/或延长存活。在癌症或肿瘤的情况中，药物的有效量在减少癌细胞的数目；降低肿瘤大小；抑制(即在一定程度上减缓或者期望地停止)癌细胞浸润入外周器官中；抑制(即在一定程度上减缓且期望地停止)肿瘤转移；在一定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上减轻一种或多种与病症有关的症状中可以具有效果。可以在一次或多次施用中施用有效量。出于本发明的目的，药物，化合物，或药物组合物的有效量是足以直接或间接实现预防或治疗性处理的量。如在临床背景中理解的，药物，化合物，或药物组合物的有效量可以与或不与另一种药物，化合物，或药物组合物一起实现。如此，可以在施用一种或多种治疗剂的背景中考虑“有效量”，并且若与一种或多种其它药剂一起，可以实现或者实现期望的结果，则可以认为单一药剂以有效量给予。
本文中的术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链中至少含有恒定区一部分的C端区。该术语包括天然序列Fc区和变体Fc区。在一个实施方案中，人IgG重链Fc区自Cys226，或自Pro230延伸至重链的羧基端。然而，Fc区的C端赖氨酸(Lys447)可以存在或不存在。除非本文中另有规定，Fc区或恒定区中的氨基酸残基的编号方式依照EU编号系统，又称作EU索引，如记载于Kabat等,Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第5版PublicHealth Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD,1991。
“框架”或“FR”指除高变区(HVR)残基外的可变域残基。一般地，可变域的FR由4个FR域组成：FR1，FR2，FR3，和FR4。因而，HVR和FR序列在VH(或VL)中一般以如下的顺序出现：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
术语“全长抗体”，“完整抗体”，和“全抗体”在本文中可互换使用，指与天然抗体结构具有基本上类似的结构或者具有含有如本文中所限定的Fc区的重链的抗体。
“生长抑制剂”在用于本文时指在体外或在体内抑制细胞生长的化合物或组合物。在一个实施方案中，生长抑制剂是阻止或降低表达抗体所结合的抗原的细胞增殖的生长抑制性抗体。在另一个实施方案中，生长抑制剂可以是显著降低处于S期的细胞百分比的药剂。生长抑制剂的例子包括阻断细胞周期行进(处于S期以外的位置)的药剂，诸如诱导G1停滞和M期停滞的药剂。经典的M期阻断剂包括长春药类(vincas)(长春新碱(vincristine)和长春碱(vinblastine))，紫杉烷类(taxanes)，和拓扑异构酶II抑制剂诸如多柔比星(doxorubicin)，表柔比星(epirubicin)，柔红霉素(daunorubicin)，依托泊苷(etoposide)和博来霉素(bleomycin)。那些阻滞G1的药剂也溢出进入S期停滞，例如DNA烷化剂类诸如他莫昔芬(tamoxifen)，泼尼松(prednisone)，达卡巴嗪(dacarbazine)，双氯乙基甲胺(mechlorethamine)，顺铂(cisplatin)，甲氨蝶呤(methotrexate)，5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil)和ara-C。更多信息可参见Mendelsohn和Israel编，《The Molecular Basisof Cancer》，第1章，题为“Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplasticdrugs”，Murakami等人，WB Saunders，Philadelphia，1995，例如第13页。紫杉烷类(帕利他赛(paclitaxel)和多西他赛(docetaxel))是衍生自紫杉树的抗癌药。衍生自欧洲紫杉的多西他赛(Rhone-Poulenc Rorer)是帕利他赛(Bristol-MyersSquibb)的半合成类似物。帕利他赛和多西他赛促进由微管蛋白二聚体装配成微管并通过防止解聚使微管稳定，导致对细胞中有丝分裂的抑制。
术语“HER2阳性”癌症包含具有高于正常的HER2水平的癌细胞。HER2阳性癌症的例子包括HER2阳性乳腺癌和HER2阳性胃癌。任选地，HER2阳性癌症具有2+或3+的免疫组织化学(IHC)得分和/或≥2.0的原位杂交(ISH)扩增比率。
术语“宿主细胞”，“宿主细胞系”，和“宿主细胞培养物”可互换使用，并且指已经导入外源核酸的细胞，包括此类细胞的后代。宿主细胞包括“转化体”和“经转化的细胞”，其包括原代的经转化的细胞及自其衍生的后代而不考虑传代的次数。后代在核酸内容物上可以与亲本细胞不完全相同，而是可以含有突变。本文中包括具有与在初始转化细胞中筛选或选择的相同功能或生物学活性的突变体后代。
“人抗体”指拥有与由人或人细胞生成的或利用人抗体全集或其它人抗体编码序列自非人来源衍生的抗体的氨基酸序列对应的氨基酸序列的抗体。人抗体的此定义明确排除包含非人抗原结合残基的人源化抗体。人抗体可使用本领域已知的多种技术来生成，包括噬菌体展示文库(Hoogenboom and Winter,J.Mol.Biol.227:381(1991)；Marks等,J.Mol.Biol.222:581(1991))。还可用于制备人单克隆抗体的是以下文献中记载的方法：Cole等,Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R.Liss,p.77(1985)；Boerner等,J.Immunol.147(1):86-95(1991)。还可参见van Dijk and van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.,5:368-74(2001)。可通过给已经修饰以应答抗原性攻击而生成人抗体但其内源基因座已经失去能力的转基因动物例如经过免疫的异种小鼠(xenomice)施用抗原来制备人抗体(参见例如美国专利No.6,075,181和6,150,584，关于XENOMOUSETM技术)。还可参见例如Li等,Proc.Natl.Ascad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)，关于经人B-细胞杂交瘤技术生成的人抗体。
“人共有框架”指代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列选集中最常存在的氨基酸残基的框架。通常，人免疫球蛋白VL或VH序列选集来自可变域序列亚组。通常，序列亚组是如Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第五版,NIHPublication 91-3242,Bethesda MD(1991),第1-3卷中的亚组。在一个实施方案中，对于VL，亚组是如Kabat等，见上文中的亚组κI。在一个实施方案中，对于VH，亚组是如Kabat等，见上文中的亚组III。
“人源化”抗体指包含来自非人HVR的氨基酸残基和来自人FR的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体会包含至少一个，通常两个基本上整个可变域，其中所有或基本上所有HVR(例如，CDR)对应于非人抗体的那些，且所有或基本上所有FR对应于人抗体的那些。任选地，人源化抗体可以至少包含自人抗体衍生的抗体恒定区的一部分。抗体，例如非人抗体的“人源化形式”指已经经历人源化的抗体。
如本文中使用的，术语“高变区”或“HVR”指抗体可变域中在序列上高变的(“互补决定区”或“CDR”)和/或形成结构上限定的环(“高变环”)和/或含有抗原接触残基(“抗原接触”)的每个区。一般地，抗体包含6个HVR：三个在VH中(H1，H2，H3)，且三个在VL中(L1，L2，L3)。本文中的例示性HVR包括：
(a)高变环，存在于氨基酸残基26-32(L1)，50-52(L2)，91-96(L3)，26-32(H1)，53-55(H2)，和96-101(H3)(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))；
(b)CDR，存在于氨基酸残基24-34(L1)，50-56(L2)，89-97(L3)，31-35b(H1)，50-65(H2)，和95-102(H3)(Kabat et al.,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))；
(c)抗原接触，存在于氨基酸残基27c-36(L1)，46-55(L2)，89-96(L3)，30-35b(H1)，47-58(H2)，和93-101(H3)(MacCallum et al.,J.Mol.Biol.262:732-745(1996))；和
(d)(a)，(b)，和/或(c)的组合，包括HVR氨基酸残基46-56(L2)，47-56(L2)，48-56(L2)，49-56(L2)，26-35(H1)，26-35b(H1)，49-65(H2)，93-102(H3)，和94-102(H3)。
除非另有说明，HVR残基及可变域中的其它残基(例如FR残基)在本文中是依照Kabat等，见上文编号的。
“免疫缀合物”指与一种或多种异源分子，包括但不限于细胞毒剂缀合的抗体。
“受试者”或“个体”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养的动物(例如，牛，绵羊，猫，犬，和马)，灵长类(例如，人和非人灵长类诸如猴)，家兔，和啮齿类(例如，小鼠和大鼠)。在某些实施方案中，个体或受试者是人。
“分离的”抗体指已经与其天然环境的组分分开的抗体。在一些实施方案中，抗体纯化至大于95％或99％的纯度，如通过例如电泳(例如，SDS-PAGE，等电聚焦(IEF)，毛细管电泳)或层析(例如，离子交换或反相HPLC)测定的。关于用于评估抗体纯度的方法的综述，见例如Flatman等,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
“分离的”核酸指已经与其天然环境的组分分开的核酸分子。分离的核酸包括通常含有核酸分子的细胞中含有的核酸分子，但是核酸分子在染色体外或在与其天然染色体位置不同的染色体位置处存在。
“编码抗HER2抗体的分离的核酸”指编码抗体重和轻链(或其片段)的一种或多种核酸分子，包括单一载体或不同载体中的此类核酸分子，和存在于宿主细胞中的一个或多个位置的此类核酸分子。
如本文中使用的，术语“单克隆抗体”指从一群基本上同质的抗体获得的抗体，即构成群体的各个抗体是相同的和/或结合相同表位，除了例如含有天然存在的突变或在单克隆抗体制备物的生成期间发生的可能的变体抗体外，此类变体一般以极小量存在。与通常包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物不同，单克隆抗体制备物的每种单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。如此，修饰语“单克隆”指示抗体自一群基本上同质的抗体获得的特性，而不应解释为要求通过任何特定方法来生成抗体。例如，可以通过多种技术来生成要依照本发明使用的单克隆抗体，包括但不限于杂交瘤方法，重组DNA方法，噬菌体展示方法，和利用含有所有或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文中描述了用于生成单克隆抗体的此类方法和其它例示性方法。
“裸抗体”指未与异源模块(例如细胞毒性模块)或放射性标记物缀合的抗体。裸抗体可以存在于药物配制剂中。
“天然抗体”指具有不同结构的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约150,000道尔顿的异四聚糖蛋白，由二硫化物键合的两条相同轻链和两条相同重链构成。从N至C端，每条重链具有一个可变区(VH)，又称作可变重域或重链可变域，接着是三个恒定域(CH1，CH2，和CH3)。类似地，从N至C端，每条轻链具有一个可变区(VL)，又称作可变轻域或轻链可变域，接着是一个恒定轻(CL)域。根据其恒定域氨基酸序列，抗体轻链可归入两种类型中的一种，称作卡帕(κ)和拉姆达(λ)。
术语“包装插页”用于指治疗产品的商业包装中通常包含的用法说明书，其含有关于涉及此类治疗产品应用的适应症，用法，剂量，施用，联合疗法，禁忌症和/或警告的信息。
术语“PD-1轴结合拮抗剂”指如下的分子，其抑制PD-1轴结合配偶与一种或多种它的结合配偶相互作用，从而去除源自PD-1信号传导轴上的信号传导的T细胞功能障碍–一项结果是恢复或增强T细胞功能(例如增殖，细胞因子生成，靶细胞杀伤)。如本文中使用的，PD-1轴结合拮抗剂包括PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂和PD-L2结合拮抗剂。
术语“PD-1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-L1，PD-L2)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抑制PD-1结合一种或多种它的结合配偶的分子。在一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂抑制PD-1结合PD-L1和/或PD-L2。例如，PD-1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-1与PD-L1和/或PD-L2相互作用的信号转导的抗PD-1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-1结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号，诸如经由PD-1介导的信号传导，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。在一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是MDX-1106(nivolumab)。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是MK-3475(pembrolizumab)。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是CT-011(pidilizumab)。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是AMP-224。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是MED1-0680。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是PDR001。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是REGN2810。在另一个特定实施方案中，PD-1结合拮抗剂是BGB-108。
术语“PD-L1结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1，B7-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抑制PD-L1结合它的结合配偶的分子。在一个特定实施方案中，PD-L1结合拮抗剂抑制PD-L1结合PD-1和/或B7-1。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L1与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1，B7-1)相互作用的信号转导的抗PD-L1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-L1结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号，诸如经由PD-L1介导的信号传导，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在仍有另一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体是MPDL3280A(阿特珠单抗)。在一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体是YW243.55.S70。在另一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体是MDX-1105。在另一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体是MSB0015718C。在仍有另一个具体实施方案中，抗PD-L1抗体是MEDI4736。
术语“PD-L2结合拮抗剂”指如下的分子，其降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1)相互作用的信号转导。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是抑制PD-L2结合一种或多种它的结合配偶的分子。在一个特定实施方案中，PD-L2结合拮抗剂抑制PD-L2结合PD-1。在一些实施方案中，PD-L2拮抗剂包括降低，阻断，抑制，消除或干扰源自PD-L2与一种或多种它的结合配偶(诸如PD-1)相互作用的信号转导的抗PD-L2抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽和其它分子。在一个实施方案中，PD-L2结合拮抗剂降低由或经由T淋巴细胞上表达的细胞表面蛋白质介导的负面共刺激信号，诸如经由PD-L2介导的信号传导，从而使得功能障碍性T细胞不太功能障碍性(例如增强对抗原识别的效应器应答)。在一些实施方案中，PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
如本文中所使用的，术语“蛋白质”指来自任何脊椎动物来源(包括哺乳动物，诸如灵长类(例如人)和啮齿类(例如小鼠和大鼠))的任何天然蛋白质，除非另有说明。该术语涵盖“全长”，未加工的蛋白质以及自细胞中加工得到的任何形式的蛋白质。该术语还涵盖天然存在的蛋白质变体，例如剪接变体或等位变体。依照本发明的蛋白质包括例如表1中列出的任何蛋白质。
关于参照多肽序列的“百分比(％)氨基酸序列同一性”定义为比对序列并在必要时引入缺口以获取最大百分比序列同一性后，且不将任何保守替代视为序列同一性的一部分时，候选序列中与参照多肽序列中的氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分率。为测定百分比氨基酸序列同一性目的的对比可以以本领域技术范围内的多种方式进行，例如使用公众可得到的计算机软件，诸如BLAST，BLAST-2，ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可以决定用于比对序列的合适参数，包括对所比较序列全长获得最大对比所需的任何算法。然而，为了本发明的目的，％氨基酸序列同一性值是使用序列比较计算机程序ALIGN-2产生的。ALIGN-2序列比较计算机程序由Genentech,Inc.编写，并且源代码已经连同用户文档一起提交给美国版权局(US Copyright Office,Washington D.C.,20559)，其中其以美国版权注册号TXU510087注册。公众自Genentech,Inc.,South San Francisco,California可获得ALIGN-2程序，或者可以从源代码编译。ALIGN2程序应当编译成在UNIX操作系统，包括数码UNIX V4.0D上使用。所有序列比较参数由ALIGN-2程序设定且不变。
在采用ALIGN-2来比较氨基酸序列的情况中，给定氨基酸序列A相对于(to)，与(with)，或针对(against)给定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可表述为具有或包含相对于，与，或针对给定氨基酸序列B的某一％氨基酸序列同一性的给定氨基酸序列A)如下计算：
分数X/Y乘100
其中X是由序列比对程序ALIGN-2在该程序的A和B比对中评分为相同匹配的氨基酸残基数，且其中Y是B中的氨基酸残基总数。应当领会，若氨基酸序列A的长度与氨基酸序列B的长度不相等，则A相对于B的％氨基酸序列同一性将不等于B相对于A的％氨基酸序列同一性。除非另有明确说明，本文中所使用的所有％氨基酸序列同一性值都是依照上一段所述，使用ALIGN-2计算机程序获得的。
术语“药物配制剂”指处于如下的形式，使得容许其中含有的活性成分的生物学活性是有效的，且不含对会接受配制剂施用的受试者具有不可接受的毒性的别的组分的制剂。
“药学可接受载剂”指药物配制剂中与活性成分不同的，且对受试者无毒的成分。药学可接受载剂包括但不限于缓冲剂，赋形剂，稳定剂，或防腐剂。
如本文中使用的，“治疗”(及其语法变化形式，诸如“处理”或“处置”)指试图改变所治疗个体的自然进程的临床干预，可以是为了预防或在临床病理学的进程中进行。治疗的期望效果包括但不限于预防疾病的发生或复发，缓解症状，削弱疾病的任何直接或间接病理学后果，预防转移，减缓疾病进展的速率，改善或减轻疾病状态，及免除或改善预后。在有些实施方案中，本发明的抗体用于延迟疾病的发生/发展，或用于减缓疾病的进展。
如本文中使用的，“延迟病症或疾病的进展”意指推迟，阻碍，减缓，延迟，稳定，和/或延缓疾病或病症(例如细胞增殖性病症，例如癌症)的形成。根据疾病史和/或治疗的个体，此延迟可以是不同时间长度的。如对于本领域技术人员明显的是，充分或显著的延迟实质上可以涵盖预防，因为个体不形成疾病。例如，可以延迟晚期阶段癌症，诸如转移的形成。
“降低”或“抑制”表示引起例如20％或更多，50％或更多，或75％，85％，90％，95％，或更多总体降低的能力。在某些实施方案中，降低或抑制可以指抗体的由抗体Fc区介导的效应器功能，此类效应器功能具体包括补体依赖性细胞毒性(CDC)，抗体依赖性细胞的细胞毒性(ADCC)，和抗体依赖性细胞的吞噬(ADCP)。
术语“可变区”或“可变域”指抗体重或轻链中牵涉抗体结合抗原的域。天然抗体的重链和轻链可变域(分别为VH和VL)一般具有类似的结构，其中每个域包含4个保守的框架区(FR)和3个高变区(HVR)。(见例如Kindt等,Kuby Immunology,第6版,W.H.Freeman andCo.,第91页(2007))。单个VH或VL域可以足以赋予抗原结合特异性。此外，可以分别使用来自结合抗原的抗体的VH或VL域筛选互补VL或VH域的文库来分离结合特定抗原的抗体。见例如，Portolano等,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等,Nature 352:624-628(1991)。
如本文中使用的，术语“载体”指能够增殖与其连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自身复制型核酸结构的载体及整合入接受其导入的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
如本文中使用的，“施用”指将一定剂量的化合物(例如本发明的抗HER2抗体或编码本发明的抗HER2抗体的核酸)或组合物(例如药物组合物，例如包含本发明的抗HER2抗体的药物组合物)给予受试者的方法。本文所述方法中利用的组合物可以例如肌肉内，静脉内，皮内，经皮，动脉内，腹膜内，病灶内，颅内，关节内，前列腺内，胸膜内，气管内，鼻内，玻璃体内，阴道内，直肠内，表面，肿瘤内，腹膜内，皮下，结膜下，膀胱内，经粘膜，心包内，脐内，眼内，口服，表面，局部，通过吸入，通过注射，通过输注，通过连续输注，通过直接浸浴靶细胞的局部灌注，通过导管，通过灌洗，以霜剂，或以脂质组合物来施用。施用的方法可以根据多种因素(例如所施用的化合物或组合物和所治疗的疾患，疾病，或病症的严重性)而变化。
II.组合物和方法
本发明涉及人源化抗HER2抗体hu4D5的变体。在某些实施方案中，该抗HER2抗体是包含HER2结合域和CD3结合域的双特异性抗体。此类双特异性抗体称作T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体(在本文中也称作HER2TDB)。
本发明的抗HER2抗体是有用的，例如对于诊断或治疗癌症，包括表达HER2的癌症和HER2阳性癌症。在一些实施方案中，该抗HER2抗体具有与hu4D5相比改善的稳定性。在一些情况中，该改善的稳定性与hu4D5的HVR区中存在的特定残基的脱酰胺或异构化降低有关。通过替代位置N30，T31，N54，G55，D98，和/或G99处的氨基酸生成的某些抗HER2抗体展现与降低的脱酰胺或异构化有关的升高的稳定性。这些抗HER2抗体中的某些还令人惊讶地展现升高的对HER2靶物的亲和力。
A.Hu4D5变体
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域(VH)，其中该轻链可变域和该重链可变域包含选自下组的一个或多个位置处的氨基酸替代：SEQ ID NO:1的N30(VL)和T31(VL)，和SEQ ID NO:2的N54(VH)，G55(VH)，D98(VH)和G99(VH)，编号依照Kabat编号系统。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域，其中该轻链可变域包含选自下组的两个位置之一或二者处的氨基酸替代：N30(VL)和T31(VL)，编号依照Kabat编号系统。
在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域，其中该轻链可变域包含选自下组的一处或多处氨基酸替代：N30(VL)S，N30(VL)D，N30(VL)E，N30(VL)T，N30(VL)Q，N30(VL)N，N30(VL)H，N30(VL)K，N30(VL)R，T31(VL)D，T31(VL)V和T31(VL)S。
在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域，其中该轻链可变域包含N30(VL)处的氨基酸替代。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域，其中该轻链可变域包含氨基酸替代N30(VL)S。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域，其中该轻链可变域包含氨基酸替代N30(VL)D。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域，其中该轻链可变域包含氨基酸替代N30(VL)E。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域，其中该轻链可变域包含氨基酸替代N30(VL)T。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域，其中该轻链可变域包含氨基酸替代N30(VL)Q。
在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域，其中该轻链可变域包含N31(VL)处的氨基酸替代。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域，其中该轻链可变域包含氨基酸替代T31(VL)D。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含选自下组的两个位置之一或二者处的氨基酸替代：N54(VH)和G55(VH)，编号依照Kabat编号系统。
在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含选自下组的一处或多处氨基酸替代：N54(VH)E，N54(VH)A，N54(VH)S，N54(VH)Q，N54(VH)H，N54(VH)D，N54(VH)K，N54(VH)R，和G55(VH)A。
在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含N54(VH)处的氨基酸替代。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含氨基酸替代N54(VH)E。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含氨基酸替代N54(VH)A。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含氨基酸替代N54(VH)S。
在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含G55(VH)处的氨基酸替代。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含氨基酸替代G55(VH)A。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含选自下组的两个位置之一或二者处的氨基酸替代：D98(VH)和G99(VH)，编号依照Kabat编号系统。
在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含选自下组的氨基酸替代：D98(VH)T，D98VH)E，D98(VH)N，D98(VH)S，G99(VH)S，G99(VH)A和G99(VH)T。
在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含D98(VH)处的氨基酸替代。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含氨基酸替代D98(VH)T。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含氨基酸替代D98(VH)E。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含氨基酸替代D98(VH)S。
在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含G99(VH)处的氨基酸替代。在一个实施方案中，该抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含氨基酸替代G99(VH)S。在一个实施方案中，抗HER2抗体包含包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域，其中该重链可变域包含氨基酸替代G99(VH)T。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVX1X2AVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK(SEQ ID NO:3)
其中X1为N，D，S，T，E，H，K，R，或Q且X2为T，V，S或D。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTX3X4YTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGX5X6FYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:4)
其中X3为N，E，A，Q，H，D，K，R，或S；X4为G或A；X5为D，E，S，N或T，且X6为G，S，A或T。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含轻链可变域(VL)和包含包含SEQ IDNO:5的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNX7YTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGDGFYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:5)
其中X7为除G以外的氨基酸。在一个实施方案中，X7为A。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3。
另一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。
另一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ IDNO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。
另一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VL HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，两种，三种，四种，五种，或六种选自下述的HVR：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含至少一种，至少两种，或所有三种选自下述的VH HVR序列：(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。在又一个实施方案中，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3。
一方面，本发明提供一种抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
在上述实施方案任一中，包含HER2结合域的抗HER2抗体是人源化的。在一个实施方案中，包含HER2结合域的抗HER2抗体包含上述实施方案任一中的HVR，且进一步包含人受体框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有框架。在某些实施方案中，该人受体框架是人VL卡帕I共有(VLKI)框架和/或该VH框架VH1。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
一方面，本发明涉及一种抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
另一方面，提供了一种包含HER2结合域的抗HER2抗体，其中该抗体包含上文提供的实施方案任一中的VH和上文提供的实施方案任一中的VL，包括那些序列的翻译后修饰。
在本发明的又一个方面，依照上述实施方案任一的包含HER2结合域的抗HER2抗体为单克隆抗体，包括人抗体。在一个实施方案中，包含HER2结合域的抗HER2抗体为抗体片段，例如Fv，Fab，Fab’，scFv，双抗体，或F(ab’)2片段。在另一个实施方案中，该抗体为基本上全长抗体，例如IgG1抗体，IgG2a抗体或本文中定义的其它抗体类或同种型。
本文中提供的是抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含轻链可变域，该轻链可变域包含与hu4D5相比具有氨基酸替代的HVR，如图1，3，和4中所示。
HER2TDB
在上述方面任一中，本文中提供的抗Her2抗体是T细胞依赖性双特异性(TDB)抗体，其中结合特异性之一针对HER2且另一针对CD3(例如CD3ε或CD3γ)。
在一些实施方案中，该抗HER2抗体的CD3结合域结合人CD3多肽或食蟹猴CD3多肽。在一些实施方案中，该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别为人CD3ε多肽或食蟹猴CD3ε多肽。在一些实施方案中，该人CD3多肽或该食蟹猴CD3多肽分别为人CD3γ多肽或食蟹猴CD3γ多肽。在某些实施方案中，提供了一种抗HER2抗体，其包含CD3结合域结合在由人CD3ε的氨基酸1-26或1-27组成的CD3(例如人CD3ε)片段内的表位。在一些实施方案中，该抗HER2抗体为双特异性抗体。在一些实施方案中，该抗HER2抗体为双特异性IgG抗体。
在一些实施方案中，CD3结合域以250nM或更低的Kd结合人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该CD3结合域以100nM或更低的Kd结合人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该CD3结合域以15nM或更低的Kd结合人CD3ε多肽。在一些实施方案中，CD3结合域以10nM或更低的Kd结合人CD3ε多肽。在一些实施方案中，CD3结合域以5nM或更低的Kd结合人CD3ε多肽。在一些实施方案中，该抗HER2抗体的CD3结合臂以小于50nM且大于1nM亲和力结合人CD3。在一些实施方案中，该抗HER2抗体的CD3结合臂以小于1nM且大于0.1nM亲和力结合人CD3。在一些实施方案中，该抗HER2抗体的CD3结合臂以小于0.1nM且大于0.01nM亲和力结合人CD3。在一些实施方案中，该CD3结合臂的亲和力是通过Biacore测定的。在一些实施方案中，该人CD3为hCD3εγ。在一些实施方案中，该人CD3为hCD3ε1-27Fc。
在一些实施方案中，该抗HER2抗体的CD3结合域以3.5埃，3.25埃，3.00埃，2.75埃，或更短的距离结合接触人CD3ε的氨基酸。在某些实施方案中，提供了CD3结合域，其以3.5埃，3.25埃，3.00埃，2.75埃或更短的距离结合由一个，两个，三个，四个，或五个人CD3ε氨基酸组成的表位。在一个实施方案中，该抗HER2抗体的CD3结合域以3.5埃或更短距离与人CD3ε的氨基酸构成独特接触。在某些实施方案中，提供了CD3结合域，其以3.5埃或更短的距离结合由一个，两个，三个，四个，或五个人CD3ε氨基酸组成的表位。例如，在某些实施方案中，提供了CD3结合域，其结合由选自Gln1，Asp2，Asn4，Glu6，和Met7的人CD3ε氨基酸组成的表位。在一个特定实施方案中，该CD3结合域结合具体包括Glu6的表位。在某些其它实施方案中，提供了CD3结合域，其不结合包括人CD3ε氨基酸Glu5的表位。在某些其它实施方案中，提供了CD3结合域，其不结合包括人CD3ε氨基酸Gly3和Glu5的表位。
CD3表位可以通过结合该表位的肽片段的CD3结合域来确定。或者，CD3表位可以通过丙氨酸扫描诱变来确定。在一个实施方案中，CD3结合域对突变型CD3的结合降低20％，30％，50％，80％或更多指示丙氨酸扫描诱变测定法中突变的CD3氨基酸残基是该CD3结合域的表位残基。或者，CD3表位可以通过质谱术来确定。在一些实施方案中，表位是通过结晶学(例如结晶学方法)确定的。
在一些实施方案中，通过结晶学确定的CD3表位是使用CD3的氨基酸Q1-M7确定的。在一些实施方案中，通过结晶学确定的CD3表位是使用CD3的氨基酸QDGNEEMGGITQTPYK(SEQID NO:89)确定的。
在一些实施方案中，通过结晶学确定的CD3表位可以如下实施，即组合以10mg/ml在0.15M NaCl，25mM tris，pH 7.5中溶解的抗CD3抗体Fab与2倍摩尔过量(1mg)的CD3ε肽并最初以坐滴蒸汽扩散型式筛选沉淀物的稀疏基质。可以自含有70％v/v甲基-戊二醇的储备溶液和0.1M HEPES缓冲液pH7.5的1:1混合物生长经过优化的晶体。储备液可用作防冻剂。可以通过突然浸入液氮中将晶体转移至低温温度。
可以使用MAR300CCD检测器以高级光子源束线22ID收集晶体的衍射数据。可以使用程序HKL2000对所记录的衍射进行整合和定标。
可以使用程序Phaser通过分子置换(MR)方法对结构进行定相。例如，MR搜索模型是自HGFA/Fab复合物的晶体结构(PDB代码：2R0L)衍生的Fab亚基。基于Fo-Fc图将CD3ε肽构建入该结构中。随后可以用程序REFMAC5和PHENIX使用最大似然靶功能，各向异性个别B因子精化方法，和TLS精化方法将该结构精化，以实现会聚。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB的CD3结合域包含高变区(HVR)(a)包含SEQ IDNO:84的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQID NO:86的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB的CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个实施方案中，该CD3结合域包含重链可变(VH)域和轻链可变(VL)域，该重链可变(VH)域包含与SEQ ID NO:77具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:77的序列，该轻链可变(VL)域包含与SEQ ID NO:78具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:78的序列。在一个实施方案中，该CD3结合域包含包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该CD3结合域可以是40G5c，或其衍生物或克隆亲属。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB的CD3结合域包含高变区(HVR)(a)包含SEQ IDNO:72的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQID NO:74的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个实施方案中，该CD3结合域包含重链可变(VH)域和轻链可变(VL)域，该重链可变(VH)域包含与SEQ ID NO:79具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:79的序列，该轻链可变(VL)域包含与SEQ ID NO:80具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:80的序列。在一个实施方案中，该CD3结合域包含包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该CD3结合域可以是38E4v1，或其衍生物或克隆亲属。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB的CD3结合域包含高变区(HVR)(a)包含SEQ IDNO:72的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQID NO:74的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个实施方案中，该CD3结合域包含重链可变(VH)域和轻链可变(VL)域，该重链可变(VH)域包含与SEQ ID NO:79具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:79的序列，该轻链可变(VL)域包含与SEQ ID NO:81具有至少90％序列同一性(例如至少91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％序列同一性)的氨基酸序列或SEQ ID NO:81的序列。在一个实施方案中，该CD3结合域包含包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL域。在一种特定情况中，该CD3结合域可以是38E4v11，或其衍生物或克隆亲属。
一方面，该抗HER2TDB包含(i)HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域(VH)，其中该轻链可变域和该重链可变域包含选自下组的一个或多个位置处的氨基酸替代：SEQ ID NO:1的N30(VL)和T31(VL)，和SEQ ID NO:2的N54(VH)，G55(VH)，D98(VH)和G99(VH)，编号依照Kabat编号系统，和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(c)包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(d)包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
一方面，该抗HER2TDB包含(i)HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(b)包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列的重链可变域(VH)，其中该轻链可变域和该重链可变域包含选自下组的一个或多个位置处的氨基酸替代：SEQ ID NO:1的N30(VL)和T31(VL)，和SEQ ID NO:2的N54(VH)，G55(VH)，D98(VH)和G99(VH)，编号依照Kabat编号系统，和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(c)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(d)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(i)HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(b)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变域(VH)，和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(c)包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(d)包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(i)HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(b)包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变域(VH)，和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(c)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(d)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(i)HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(b)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变域(VH)，和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(c)包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(d)包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(i)HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(b)包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变域(VH)，和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(c)包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和(d)包含SEQ ID NO:80的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(i)HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗HER2抗体包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:7的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:6的序列的轻链可变区。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(i)HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗HER2抗体包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:9的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:8的序列的轻链可变区。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(i)HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗HER2抗体包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:11的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:10的序列的轻链可变区。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(i)HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。在一些实施方案中，该抗HER2抗体包含HER2结合域，该HER2结合域包含包含SEQ ID NO:13的序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:12的序列的轻链可变区。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(i)HER2结合域，该HER2结合域包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。
在一个实施方案中，该抗HER2TDB包含(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；和(ii)CD3结合域，该CD3结合域包含(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3。
又一方面，依照上述实施方案任一的抗HER2抗体可单一地或组合地并入下文1-7节中描述的任何特征：
1.抗体亲和力
在某些实施方案中，本文中提供的抗体具有≤1μM，≤100nM，≤10nM，≤1nM，≤0.1nM，≤0.01nM，或≤0.001nM的解离常数(Kd)(例如10-8M或更少，例如10-8M至10-13M，例如，10-9M至10-13M)。
在一个实施方案中，Kd是通过放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的。在一个实施方案中，用Fab型式的感兴趣抗体及其抗原实施RIA。例如，通过在存在未标记抗原的滴定系列的情况中用最小浓度的(125I)标记抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗体包被板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(见例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。为了建立测定法的条件，将多孔板(Thermo Scientific)用50mM碳酸钠(pH 9.6)中的5μg/ml捕捉用抗Fab抗体(Cappel Labs)包被过夜，随后用PBS中的2％(w/v)牛血清清蛋白于室温(约23℃)封闭2-5小时。在非吸附板(Nunc#269620)中，将100pM或26pM[125I]-抗原与连续稀释的感兴趣Fab(例如与Presta等,Cancer Res.57:4593-4599(1997)中抗VEGF抗体，Fab-12的评估一致)混合。然后将感兴趣的Fab温育过夜；然而，温育可持续更长时间(例如约65小时)以确保达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板，于室温温育(例如1小时)。然后除去溶液，并用PBS中的0.1％聚山梨酯20洗板8次。平板干燥后，加入150μl/孔闪烁液(MICROSCINT-20TM；Packard)，然后在TOPCOUNTTM伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20％的浓度用于竞争性结合测定法。
依照另一个实施方案，Kd是使用表面等离振子共振测定法测量的。例如，于25℃使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)使用或(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)实施测定法。在一个实施方案中，依照供应商的用法说明书用盐酸N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)-碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。将抗原用10mM乙酸钠pH 4.8稀释至5μg/ml(约0.2μM)，然后以5μl/分钟的流速注射以获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入1M乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，于25℃以约25μl/分钟的流速注入在含0.05％聚山梨酯20(TWEEN-20TM)表面活性剂的PBS(PBST)中两倍连续稀释的Fab(0.78nM至500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(Evaluation Software version 3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。以比率kon/koff计算平衡解离常数(Kd)。见例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过106M-1S-1，那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(Aviv Instruments)或8000系列SLM-AMINCOTM分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量，在存在浓度渐增的抗原的情况中，测量PBSpH 7.2中20nM抗抗原抗体(Fab形式)于25℃的荧光发射强度(激发＝295nm；发射＝340nm，16nm带通)的升高或降低。
2.抗体片段
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是抗体片段。抗体片段包括但不限于Fab，Fab’，Fab’-SH，F(ab’)2，Fv，和scFv片段，及下文所描述的其它片段。关于某些抗体片段的综述，见Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)。关于scFv片段的综述，见例如Pluckthün,于The Pharmacology of Monoclonal Antibodies,第113卷,Rosenburg和Moore编,(Springer-Verlag,New York),第269-315页(1994)；还可见WO 93/16185；及美国专利No.5,571,894和5,587,458。关于包含补救受体结合表位残基，并且具有延长的体内半衰期的Fab和F(ab’)2片段的讨论，见美国专利No.5,869,046。
双抗体是具有两个抗原结合位点的抗体片段，其可以是二价的或双特异性的。见例如EP 404,097；WO 1993/01161；Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)；及Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:6444-6448(1993)。三抗体和四抗体也记载于Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)。
单域抗体是包含抗体的整个或部分重链可变域或整个或部分轻链可变域的抗体片段。在某些实施方案中，单域抗体是人单域抗体(Domantis,Inc.,Waltham,MA；见例如美国专利No.6,248,516B1)。
可以通过多种技术，包括但不限于对完整抗体的蛋白水解消化及重组宿主细胞(例如大肠杆菌或噬菌体)的生成来生成抗体片段，如本文中所描述的。
3.嵌合抗体和人源化抗体
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是嵌合抗体。某些嵌合抗体记载于例如美国专利No.4,816,567；及Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984))。在一个例子中，嵌合抗体包含非人可变区(例如，自小鼠，大鼠，仓鼠，家兔，或非人灵长类，诸如猴衍生的可变区)和人恒定区。在又一个例子中，嵌合抗体是“类转换的”抗体，其中类或亚类已经自亲本抗体的类或亚类改变。嵌合抗体包括其抗原结合片段。
在某些实施方案中，嵌合抗体是人源化抗体。通常，将非人抗体人源化以降低对人的免疫原性，同时保留亲本非人抗体的特异性和亲和力。一般地，人源化抗体包含一个或多个可变域，其中HVR，例如CDR(或其部分)自非人抗体衍生，而FR(或其部分)自人抗体序列衍生。任选地，人源化抗体还会至少包含人恒定区的一部分。在一些实施方案中，将人源化抗体中的一些FR残基用来自非人抗体(例如衍生HVR残基的抗体)的相应残基替代，例如以恢复或改善抗体特异性或亲和力。
人源化抗体及其生成方法综述于例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)，并且进一步记载于例如Riechmann等,Nature 332:323-329(1988)；Queen等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 86:10029-10033(1989)；美国专利No.5,821,337,7,527,791,6,982,321和7,087,409；Kashmiri等,Methods 36:25-34(2005)(描述了特异性决定区(SDR)嫁接)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述了“重修表面”)；Dall’Acqua等,Methods 36:43-60(2005)(描述了“FR改组”)；及Osbourn等,Methods 36:61-68(2005)和Klimka等,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述了FR改组的“引导选择”方法)。
可以用于人源化的人框架区包括但不限于：使用“最佳拟合(best-fit)”方法选择的框架区(见例如Sims等,J.Immunol.151:2296(1993))；自轻或重链可变区的特定亚组的人抗体的共有序列衍生的框架区(见例如Carter等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；及Presta等,J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟的(体细胞突变的)框架区或人种系框架区(见例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；和通过筛选FR文库衍生的框架区(见例如Baca等,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)及Rosok等,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。
4.人抗体
在某些实施方案中，本文中提供的抗体是人抗体。可以使用本领域中已知的多种技术来生成人抗体。一般地，人抗体记载于van Dijk和van de Winkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)。
可以通过对转基因动物施用免疫原来制备人抗体，所述转基因动物已经修饰为响应抗原性攻击而生成完整人抗体或具有人可变区的完整抗体。此类动物通常含有所有或部分人免疫球蛋白基因座，其替换内源免疫球蛋白基因座，或者其在染色体外存在或随机整合入动物的染色体中。在此类转基因小鼠中，一般已经将内源免疫球蛋白基因座灭活。关于自转基因动物获得人抗体的方法的综述，见Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。还可见例如美国专利No.6,075,181和6,150,584，其描述了XENOMOUSETM技术；美国专利No.5,770,429，其描述了技术；美国专利No.7,041,870，其描述了K-M技术，和美国专利申请公开文本No.US 2007/0061900，其描述了技术)。可以例如通过与不同人恒定区组合进一步修饰来自由此类动物生成的完整抗体的人可变区。
也可以通过基于杂交瘤的方法生成人抗体。已经描述了用于生成人单克隆抗体的人骨髓瘤和小鼠-人异骨髓瘤细胞系(见例如Kozbor J.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等,Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,第51-63页(Marcel Dekker,Inc.,New York,1987)；及Boerner等,J.Immunol.,147:86(1991))。经由人B细胞杂交瘤技术生成的人抗体也记载于Li等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)。其它方法包括那些例如记载于美国专利No.7,189,826(其描述了自杂交瘤细胞系生成单克隆人IgM抗体)和Ni,Xiandai Mianyixue,26(4):265-268(2006)(其描述了人-人杂交瘤)的。人杂交瘤技术(Trioma技术)也记载于Vollmers和Brandlein,Histologyand Histopathology,20(3):927-937(2005)及Vollmers和Brandlein,Methods andFindings in Experimental and Clinical Pharmacology,27(3):185-91(2005)。
也可以通过分离自人衍生的噬菌体展示文库选择的Fv克隆可变域序列生成人抗体。然后，可以将此类可变域序列与期望的人恒定域组合。下文描述了自抗体文库选择人抗体的技术。
5.文库衍生的抗体
可以通过对组合文库筛选具有期望的一种或多种活性的抗体来分离本发明的抗体。例如，用于生成噬菌体展示文库并对此类文库筛选拥有期望结合特征的抗体的多种方法是本领域中已知的。此类方法综述于例如Hoogenboom等,于Methods in MolecularBiology 178:1-37(O’Brien等编,Human Press,Totowa,NJ,2001)，并且进一步记载于例如McCafferty等,Nature 348:552-554；Clackson等,Nature 352:624-628(1991)；Marks等,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks和Bradbury,于Methods in Molecular Biology248:161-175(Lo编,Human Press,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(34):12467-12472(2004)；及Lee等,J.Immunol.Methods284(1-2):119-132(2004)。
在某些噬菌体展示方法中，将VH和VL基因的全集分别通过聚合酶链式反应(PCR)克隆，并在噬菌体文库中随机重组，然后可以对所述噬菌体文库筛选抗原结合噬菌体，如记载于Winter等,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)的。噬菌体通常以单链Fv(scFv)片段或以Fab片段展示抗体片段。来自经免疫的来源的文库提供针对免疫原的高亲和力抗体，而不需要构建杂交瘤。或者，可以(例如自人)克隆天然全集以在没有任何免疫的情况中提供针对一大批非自身和还有自身抗原的抗体的单一来源，如由Griffiths等,EMBO J,12:725-734(1993)描述的。最后，也可以通过自干细胞克隆未重排的V基因区段，并使用含有随机序列的PCR引物编码高度可变的CDR3区并在体外实现重排来合成生成未免疫文库，如由Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)所描述的。描述人抗体噬菌体文库的专利公开文本包括例如：美国专利No.5,750,373，和美国专利公开文本No.2005/0079574,2005/0119455,2005/0266000,2007/0117126,2007/0160598,2007/0237764,2007/0292936和2009/0002360。
认为自人抗体文库分离的抗体或抗体片段是本文中的人抗体或人抗体片段。
6.多特异性抗体
在某些实施方案中，本文中提供的抗HER2抗体是多特异性抗体，例如双特异性抗体。多特异性抗体是对至少两个不同位点具有结合特异性的单克隆抗体。在某些实施方案中，结合特异性之一针对HER2，而另一种针对任何其它抗原。在某些实施方案中，双特异性抗体可以结合HER2的两个不同表位。也可以使用双特异性抗体来将细胞毒剂定位于表达HER2的细胞。双特异性抗体可以以全长抗体或抗体片段制备。在某些实施方案中，多特异性抗体是上文描述的TDB。
用于生成多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两对免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(见Milstein和Cuello,Nature 305:537(1983))，WO 93/08829，和Traunecker等,EMBO J.10:3655(1991))，和“节-入-穴”工程化(见例如美国专利No.5,731,168)。可以利用多特异性抗体的“节-入-穴”工程化改造来生成含有节的第一臂和含有穴的第二臂，第一臂的节可以结合入第二臂的穴。在一个实施方案中，本发明的多特异性抗体的节可以是抗CD3臂。或者，本发明的多特异性抗体的节可以是抗靶物/抗原臂，在一个实施方案中，诸如抗HER2臂。在一个实施方案中，本发明的多特异性抗体的穴可以是抗CD3臂。或者，本发明的多特异性抗体的穴可以是抗靶物/抗原臂，在一个实施方案中，诸如抗HER2臂。也可以使用免疫球蛋白交叉/交换(也称作Fab域交换或CrossMab型式)技术来工程化改造多特异性抗体(参见例如WO2009/080253；Schaefer et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,108:11187-11192(2011))。也可以通过用于生成抗体Fc-异二聚体分子的工程化静电操纵效应(WO 2009/089004A1)；交联两个或更多个抗体或片段(见例如美国专利No.4,676,980,及Brennan等,Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉链来生成双特异性抗体(见例如Kostelny等,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992))；使用用于生成双特异性抗体片段的“双抗体”技术(见例如Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；及使用单链Fv(sFv)二聚体(见例如Gruber等,J.Immunol.,152:5368(1994))；及如例如Tutt等,J.Immunol.147:60(1991)中所描述的，制备三特异性抗体来生成多特异性抗体。多特异性抗体可以使用bis Fab型式来生成(参见例如WO2011069104)。
本文中还包括具有三个或更多个功能性抗原结合位点的工程化改造抗体，包括“章鱼抗体”(见例如US 2006/0025576A1)。
抗体或其抗体片段还可以包括包含结合CD3及另一种不同抗原(例如第二生物学分子)的抗原结合位点的“双重作用FAb”或“DAF”(见例如US2008/0069820)。
7.抗体变体
在某些实施方案中，涵盖本发明的抗HER2抗体的氨基酸序列变体。例如，可以期望改善抗体的结合亲和力和/或其它生物学特性。可以通过将合适的修饰引入编码抗体的核苷酸序列中，或者通过肽合成来制备抗体的氨基酸序列变体。此类修饰包括例如对抗体的氨基酸序列内的残基的删除，和/或插入和/或替代。可以进行删除，插入，和替代的任何组合以得到最终的构建体，只要最终的构建体拥有期望的特征，例如，抗原结合。
a)替代，插入，和删除变体
在某些实施方案中，提供了具有一处或多处氨基酸替代的抗体变体。替代诱变感兴趣的位点包括HVR和FR。保守替代在表2中在“优选的替代”的标题下显示。更实质的变化在表2中在“例示性替代”的标题下提供，并且如下文参照氨基酸侧链类别进一步描述的。可以将氨基酸替代引入感兴趣的抗体中，并且对产物筛选期望的活性，例如保留/改善的抗原结合，降低的免疫原性，或改善的ADCC或CDC。
表2：例示性和优选的氨基酸替代
初始残基 例示性替代 优选的替代
Ala(A) Val；Leu；Ile Val
Arg(R) Lys；Gln；Asn Lys
Asn(N) Gln；His；Asp,Lys；Arg Gln
Asp(D) Glu；Asn Glu
Cys(C) Ser；Ala Ser
Gln(Q) Asn；Glu Asn
Glu(E) Asp；Gln Asp
Gly(G) Ala Ala
His(H) Asn；Gln；Lys；Arg Arg
Ile(I) Leu；Val；Met；Ala；Phe；正亮氨酸 Leu
Leu(L) 正亮氨酸；Ile；Val；Met；Ala；Phe Ile
Lys(K) Arg；Gln；Asn Arg
Met(M) Leu；Phe；Ile Leu
Phe(F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr Tyr
Pro(P) Ala Ala
Ser(S) Thr Thr
Thr(T) Val；Ser Ser
Trp(W) Tyr；Phe Tyr
Tyr(Y) Trp；Phe；Thr；Ser Phe
Val(V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala；正亮氨酸 Leu
依照共同的侧链特性，氨基酸可以如下分组：
(1)疏水性的：正亮氨酸,Met,Ala,Val,Leu,Ile；
(2)中性，亲水性的：Cys,Ser,Thr,Asn,Gln；
(3)酸性的：Asp,Glu；
(4)碱性的：His,Lys,Arg；
(5)影响链取向的残基：Gly,Pro；
(6)芳香族的：Trp,Tyr,Phe。
非保守替代会需要用这些类别之一的成员替换另一个类别的。
一类替代变体牵涉替代亲本抗体(例如人源化或人抗体)的一个或多个高变区残基。一般地，为进一步研究选择的所得变体相对于亲本抗体会具有某些生物学特性的改变(例如改善)(例如升高的亲和力，降低的免疫原性)和/或会基本上保留亲本抗体的某些生物学特性。例示性的替代变体是亲和力成熟的抗体，其可以例如使用基于噬菌体展示的亲和力成熟技术诸如本文中所描述的那些技术来方便地生成。简言之，将一个或多个HVR残基突变，并将变体抗体在噬菌体上展示，并对其筛选特定的生物学活性(例如结合亲和力)。
可以对HVR做出变化(例如，替代)，例如以改善抗体亲和力。可以对HVR“热点”，即由在体细胞成熟过程期间以高频率经历突变的密码子编码的残基(见例如Chowdhury,Methods Mol.Biol.207:179-196(2008))，和/或接触抗原的残基做出此类变化，其中对所得的变体VH或VL测试结合亲和力。通过次级文库的构建和再选择进行的亲和力成熟已经记载于例如Hoogenboom等,于Methods in Molecular Biology 178:1-37(O’Brien等编,Human Press,Totowa,NJ,(2001))。在亲和力成熟的一些实施方案中，通过多种方法(例如，易错PCR，链改组，或寡核苷酸指导的诱变)任一将多样性引入为成熟选择的可变基因。然后，创建次级文库。然后，筛选文库以鉴定具有期望的亲和力的任何抗体变体。另一种引入多样性的方法牵涉HVR指导的方法，其中将几个HVR残基(例如，一次4-6个残基)随机化。可以例如使用丙氨酸扫描诱变或建模来特异性鉴定牵涉抗原结合的HVR残基。特别地，经常靶向CDR-H3和CDR-L3。
在某些实施方案中，可以在一个或多个HVR内发生替代，插入，或删除，只要此类变化不实质性降低抗体结合抗原的能力。例如，可以对HVR做出保守变化(例如，保守替代，如本文中提供的)，其不实质性降低结合亲和力。例如，此类变化可以在HVR中的抗原接触残基以外。在上文提供的变体VH和VL序列的某些实施方案中，每个HVR是未改变的，或者含有不超过1，2或3处氨基酸替代。
一种可用于鉴定抗体中可以作为诱变靶位的残基或区域的方法称作“丙氨酸扫描诱变”，如由Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所描述的。在此方法中，将残基或靶残基的组(例如，带电荷的残基诸如arg，asp，his，lys，和glu)鉴定，并用中性或带负电荷的氨基酸(例如，丙氨酸或多丙氨酸)替换以测定抗体与抗原的相互作用是否受到影响。可以在对初始替代表明功能敏感性的氨基酸位置引入进一步的替代。或者/另外，利用抗原-抗体复合物的晶体结构来鉴定抗体与抗原间的接触点。作为替代的候选，可以靶向或消除此类接触残基和邻近残基。可以筛选变体以确定它们是否含有期望的特性。
氨基酸序列插入包括长度范围为1个残基至含有100或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基端融合，及单个或多个氨基酸残基的序列内插入。末端插入的例子包括具有N端甲硫氨酰基残基的抗体。抗体分子的其它插入变体包括抗体的N或C端与酶(例如对于ADEPT)或延长抗体的血清半衰期的多肽的融合物。
b)糖基化变体
在某些实施方案中，可以改变本发明的抗HER2抗体以提高或降低抗体糖基化的程度。可以通过改变氨基酸序列，使得创建或消除一个或多个糖基化位点来方便地实现对本发明的抗HER2抗体的糖基化位点的添加或删除。
在抗体包含Fc区的情况中，可以改变其附着的碳水化合物。由哺乳动物细胞生成的天然抗体通常包含分支的，双触角寡糖，其一般通过N连接附着于Fc区的CH2域的Asn297。见例如Wright等,TIBTECH 15:26-32(1997)。寡糖可以包括各种碳水化合物，例如，甘露糖，N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)，半乳糖，和唾液酸，以及附着于双触角寡糖结构“主干”中的GlcNAc的岩藻糖。在一些实施方案中，可以对本发明抗体中的寡糖进行修饰以创建具有某些改善的特性的抗体变体。
在一个实施方案中，提供了抗HER2抗体变体，其具有缺乏附着(直接或间接)于Fc区的岩藻糖的碳水化合物结构。例如，此类抗体中的岩藻糖量可以是1％至80％，1％至65％，5％至65％或20％至40％。通过相对于附着于Asn297的所有糖结构(例如，复合的，杂合的和高甘露糖的结构)的总和，计算Asn297处糖链内岩藻糖的平均量来测定岩藻糖量，如通过MALDI-TOF质谱术测量的，例如如记载于WO 2008/077546的。Asn297指位于Fc区中的约第297位(Fc区残基的EU编号方式)的天冬酰胺残基；然而，Asn297也可以由于抗体中的微小序列变异而位于第297位上游或下游约±3个氨基酸，即在第294位和第300位之间。此类岩藻糖基化变体可以具有改善的ADCC功能。见例如美国专利公开文本No.US 2003/0157108(Presta,L.)；US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co.,Ltd)。涉及“脱岩藻糖基化的”或“岩藻糖缺乏的”抗体变体的出版物的例子包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO2005/035586；WO 2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等,J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等,Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能够生成脱岩藻糖基化抗体的细胞系的例子包括蛋白质岩藻糖基化缺陷的Lec13CHO细胞(Ripka等,Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美国专利申请No US 2003/0157108A1,Presta,L；及WO 2004/056312A1,Adams等，尤其在实施例11)，和敲除细胞系，诸如α-1,6-岩藻糖基转移酶基因FUT8敲除CHO细胞(见例如Yamane-Ohnuki等,Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；及WO2003/085107)。
进一步提供了具有两分型寡糖的抗HER2抗体变体，例如其中附着于抗体Fc区的双触角寡糖是通过GlcNAc两分的。此类抗体变体可以具有降低的岩藻糖基化和/或改善的ADCC功能。此类抗体变体的例子记载于例如WO 2003/011878(Jean-Mairet等)；美国专利No.6,602,684(Umana等)；及US 2005/0123546(Umana等)。还提供了在附着于Fc区的寡糖中具有至少一个半乳糖残基的抗体变体。此类抗体变体可以具有改善的CDC功能。此类抗体变体记载于例如WO 1997/30087(Patel等)；WO 1998/58964(Raju,S.)；及WO 1999/22764(Raju,S.)。
c)Fc区变体
在某些实施方案中，可以将一处或多处氨基酸修饰引入本发明的抗HER2抗体的Fc区中，由此生成Fc区变体(见例如US 2012/0251531)。Fc区变体可以包含在一个或多个氨基酸位置包含氨基酸修饰(例如替代)的人Fc区序列(例如，人IgG1，IgG2，IgG3或IgG4Fc区)。
在某些实施方案中，本发明涵盖拥有一些但不是所有效应器功能的抗HER2抗体变体，所述效应器功能使其成为如下应用的期望候选物，其中抗体的体内半衰期是重要的，而某些效应器功能(诸如补体和ADCC)是不必要的或有害的。可以进行体外和/或体内细胞毒性测定法以确认CDC和/或ADCC活性的降低/消减。例如，可以进行Fc受体(FcR)结合测定法以确保抗体缺乏FcγR结合(因此有可能缺乏ADCC活性)，但是保留FcRn结合能力。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI，FcγRII和FcγRIII。在Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页上的表3中汇总了造血细胞上的FcR表达。评估感兴趣分子的ADCC活性的体外测定法的非限制性例子记载于美国专利No.5,500,362(见例如Hellstrom,I.等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；5,821,337(见Bruggemann,M.等,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))。或者，可以采用非放射性测定方法(见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性测定法(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA；和CytoTox非放射性细胞毒性测定法(Promega,Madison,WI))。对于此类测定法有用的效应细胞包括外周血单个核细胞(PBMC)和天然杀伤(NK)细胞。或者/另外，可以在体内评估感兴趣分子的ADCC活性，例如在动物模型中，诸如披露于Clynes等,Proc.Nat’l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)的。也可以实施C1q结合测定法以确认抗体不能结合C1q，并且因此缺乏CDC活性。见例如WO 2006/029879和WO 2005/100402中的C1q和C3c结合ELISA。为了评估补体激活，可以实施CDC测定法(见例如Gazzano-Santoro等,J.Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg,M.S.等,Blood 101:1045-1052(2003)；及Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood 103:2738-2743(2004))。也可以使用本领域中已知的方法来实施FcRn结合和体内清除/半衰期测定(见例如Petkova,S.B.等,Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。
具有降低的效应器功能的抗体包括那些具有Fc区残基238,265,269,270,297,327和329中的一个或多个的替代的(美国专利No.6,737,056和8,219,149)。此类Fc突变体包括在氨基酸位置265，269，270，297和327中的两处或更多处具有替代的Fc突变体，包括残基265和297替代成丙氨酸的所谓的“DANA”Fc突变体(美国专利No.7,332,581和8,219,149)。
在某些实施方案中，该抗体中的野生型人Fc区的位置329处的脯氨酸用甘氨酸或精氨酸或大得足以破坏Fc/Fcγ受体界面内在Fc的脯氨酸329和FcγRIII的色氨酸残基Trp87和Trp 110之间形成的脯氨酸三明治的氨基酸残基替代(Sondermann et al.,Nature406,267-273(20Jul.2000))。在某些实施方案中，该抗体包含至少一处别的氨基酸替代。在一个实施方案中，该别的氨基酸替代是S228P，E233P，L234A，L235A，L235E，N297A，N297D，或P331S，且仍然在另一个实施方案中，该至少一处别的氨基酸替代是人IgG1Fc区的L234A和L235A或人IgG4Fc区的S228P和L235E(参见例如US 2012/0251531)，且仍然在另一个实施方案中，该至少一处别的氨基酸替代是人IgG1Fc区的L234A和L235A和P329G。
描述了具有改善的或降低的对FcR的结合的某些抗体变体(见例如美国专利No.6,737,056；WO 2004/056312，及Shields等,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。
在某些实施方案中，抗体变体包含具有改善ADCC的一处或多处氨基酸替代，例如Fc区的位置298，333，和/或334(残基的EU编号方式)的替代的Fc区。
在一些实施方案中，对Fc区做出改变，其导致改变的(即，改善的或降低的)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，例如，如记载于美国专利No.6,194,551，WO 99/51642，及Idusogie等,J.Immunol.164:4178-4184(2000)的。
具有延长的半衰期和改善的对新生儿Fc受体(FcRn)的结合的抗体记载于US2005/0014934A1(Hinton等)，新生儿Fc受体(FcRn)负责将母体IgG转移至胎儿(Guyer等,J.Immunol.117:587(1976)及Kim等,J.Immunol.24:249(1994))。那些抗体包含其中具有改善Fc区对FcRn结合的一处或多处替代的Fc区。此类Fc变体包括那些在Fc区残基238,256,265,272,286,303,305,307,311,312,317,340,356,360,362,376,378,380,382,413,424或434中的一处或多处具有替代，例如，Fc区残基434的替代的(美国专利No.7,371,826)。
还可见Duncan和Winter,Nature 322:738-40(1988)；美国专利No.5,648,260；美国专利No.5,624,821；及WO 94/29351，其关注Fc区变体的其它例子。
在一些方面，该抗HER2抗体包含包含N297G突变的Fc区。
在一些实施方案中，该包含N297G突变的抗HER2抗体包含一个或多个重链恒定域，其中该一个或多个重链恒定域选自第一CH1(CH11)域，第一CH2(CH21)域，第一CH3(CH31)域，第二CH1(CH12)域，第二CH2(CH22)域，和第二CH3(CH32)域。在一些情况中，该一个或多个重链恒定域中至少一个与另一个重链恒定域配对。在一些情况中，该CH31和CH32域各自包含隆起或空腔，且其中该CH31域中的隆起或空腔分别可位于该CH32域中的空腔或隆起中。在一些情况中，该CH31和CH32域在所述隆起和空腔之间的界面处相遇。在一些情况中，该CH21和CH22域各自包含隆起或空腔，且其中该CH21域中的隆起或空腔分别可位于该CH22域中的空腔或隆起中。在其它情况中，该CH21和CH22域在所述隆起和空腔之间的界面处相遇。在一些情况中，该抗HER2抗体为IgG1抗体。
d)经半胱氨酸工程化改造的抗体变体
在某些实施方案中，可以期望创建经半胱氨酸工程化改造的抗体，例如，“thioMAb”，其中抗体的一个或多个残基用半胱氨酸残基替代。在具体的实施方案中，替代的残基存在于抗体的可接近位点。通过用半胱氨酸替代那些残基，反应性硫醇基团由此定位于抗体的可接近位点，并且可以用于将抗体与其它模块，诸如药物模块或接头-药物模块缀合，以创建免疫缀合物，如本文中进一步描述的。在某些实施方案中，可以用半胱氨酸替代下列残基之任一个或多个：轻链的V205(Kabat编号方式)；重链的A118(EU编号方式)；和重链Fc区的S400(EU编号方式)。可以如例如美国专利No.7,521,541所述生成经半胱氨酸工程化改造的抗体。
e)抗体衍生物
在某些实施方案中，可以进一步修饰本文中提供的发明的抗HER2抗体以含有本领域知道的且易于获得的额外非蛋白质性质模块。适合于抗体衍生化的模块包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物的非限制性例子包括但不限于聚乙二醇(PEG)，乙二醇/丙二醇共聚物，羧甲基纤维素，右旋糖苷，聚乙烯醇，聚乙烯吡咯烷酮，聚-1,3-二氧戊环，聚-1,3,6-三恶烷，乙烯/马来酸酐共聚物，聚氨基酸(均聚物或随机共聚物)，和右旋糖苷或聚(n-乙烯吡咯烷酮)聚乙二醇，丙二醇均聚物，环氧丙烷/环氧乙烷共聚物，聚氧乙烯化多元醇(例如甘油)，聚乙烯醇及其混合物。由于其在水中的稳定性，聚乙二醇丙醛在生产中可能具有优势。聚合物可以是任何分子量，而且可以是分支的或不分支的。附着到抗体上的聚合物数目可以变化，而且如果附着了超过一个聚合物，那么它们可以是相同或不同的分子。一般而言，可根据下列考虑来确定用于衍生化的聚合物的数目和/或类型，包括但不限于抗体要改进的具体特性或功能，抗体衍生物是否将用于指定条件下的治疗等。
在另一个实施方案中，提供了抗体和可以通过暴露于辐射选择性加热的非蛋白质性质模块的缀合物。在一个实施方案中，非蛋白质性质模块是碳纳米管(Kam等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102:11600-11605(2005))。辐射可以是任何波长的，并且包括但不限于对普通细胞没有损害，但是将非蛋白质性质模块加热至抗体-非蛋白质性质模块附近的细胞被杀死的温度的波长。
B.重组方法和组合物
可以使用重组方法和组合物来生成本发明的抗HER2抗体，例如，如记载于美国专利No.4,816,567的。在一个实施方案中，提供了编码本文中所描述的抗HER2抗体的分离的核酸。此类核酸可以编码包含抗体VL的氨基酸序列和/或包含抗体VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻和/或重链)。在又一个实施方案中，提供了包含此类核酸的一种或多种载体(例如，表达载体)。在又一个实施方案中，提供了包含此类核酸的宿主细胞。在一个此类实施方案中，宿主细胞包含(例如，已经用下列载体转化)：(1)包含核酸的载体，所述核酸编码包含抗体的VL的氨基酸序列和包含抗体的VH的氨基酸序列，或(2)第一载体和第二载体，所述第一载体包含编码包含抗体的VL的氨基酸序列的核酸，所述第二载体包含编码包含抗体的VH的氨基酸序列的核酸。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0，NS0，Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供了生成抗HER2抗体的方法，其中该方法包括在适合于表达抗体的条件下培养包含编码抗体的核酸的宿主细胞，如上文提供的，并且任选地，自宿主细胞(或宿主细胞培养液)回收抗体。
对于抗HER2抗体的重组生成，将编码抗体的核酸(例如如上文所描述的)分离，并插入一种或多种载体中，以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规规程将此类核酸容易地分离并测序(例如，通过使用寡核苷酸探针来进行，所述寡核苷酸探针能够特异性结合编码抗体的重和轻链的基因)。
适合于克隆或表达抗体编码载体的宿主细胞包括本文中所描述的原核或真核细胞。例如，可以在细菌中生成抗体，特别是在不需要糖基化和Fc效应器功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，见例如美国专利No.5,648,237,5,789,199和5,840,523(还可见Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,NJ,2003),第245-254页，其描述了抗体片段在大肠杆菌(E.coli.)中的表达)。表达后，可以将抗体在可溶性级分中自细菌细胞团糊分离，并可以进一步纯化。
在原核生物外，真核微生物诸如丝状真菌或酵母是适合于抗体编码载体的克隆或表达宿主，包括其糖基化途径已经“人源化”，导致生成具有部分或完全人的糖基化样式的抗体的真菌和酵母菌株。见Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004),及Li等,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。
适合于表达糖基化抗体的宿主细胞也自多细胞生物体(无脊椎动物和脊椎动物)衍生。无脊椎动物细胞的例子包括植物和昆虫细胞。已经鉴定出许多杆状病毒株，其可以与昆虫细胞一起使用，特别是用于转染草地夜蛾(Spodoptera frugiperda)细胞。
也可以利用植物细胞培养物作为宿主。见例如美国专利No.5,959,177,6,040,498,6,420,548,7,125,978和6,417,429(其描述了用于在转基因植物中生成抗体的PLANTIBODIESTM技术)。
也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。例如，适合于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可以是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它例子是经SV40转化的猴肾CV1系(COS-7)；人胚肾系(293或293细胞，如记载于例如Graham等,J.Gen Virol.36:59(1977)的)；幼年仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠塞托利(sertoli)细胞(TM4细胞，如记载于例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)的)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK；牛鼠(buffalo rat)肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳房肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，如记载于例如Mather等,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)的；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系诸如Y0，NS0和Sp2/0。关于适合于抗体生成的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,NJ),第255-268页(2003)。
C.测定法
可以通过本领域中已知的多种测定法对本文中提供的发明的抗HER2抗体鉴定，筛选，或表征其物理/化学特性和/或生物学活性。
1.结合测定法和其它测定法
一方面，对本发明的抗HER2抗体测试其抗原结合活性，例如通过已知的方法诸如ELISA，Western印迹，等来进行。
另一方面，可使用竞争测定法来鉴定与本发明的抗HER2抗体竞争对HER2的结合的抗体。
在一种例示性竞争测定法中，在包含第一经标记抗体(其结合HER2)和第二未标记抗体(其要测试与第一抗体竞争对HER2的结合的能力)的溶液中温育固定化HER2。第二抗体可存在于杂交瘤上清液中。作为对照，在包含第一经标记抗体但不包含第二未标记抗体的溶液中温育固定化HER2。在允许第一抗体结合HER2的条件下温育后，除去过量的未结合抗体，并测量与固定化HER2联合的标记物的量。如果测试样品中与固定化HER2联合的标记物的量与对照样品相比实质性降低，那么这指示第二抗体与第一抗体竞争对HER2的结合。参见例如Harlow and Lane(1988)Antibodies:A Laboratory Manual Ch.14(Cold SpringHarbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY)。
2.活性测定法
一方面，提供用于鉴定具有生物学活性的抗HER2抗体的测定法。生物学活性可以包括例如在体内，在体外，或离体结合HER2，或其肽片段。在本发明的多特异性(例如双特异性)抗HER2抗体(例如TDB抗体具有一个抗CD3臂和一个识别HER2的臂)的情况中，生物学活性还可以包括例如效应细胞激活(例如T细胞(例如CD8+和/或CD4+T细胞)激活)，效应细胞群体扩充(即T细胞计数增多)，靶细胞群体减少(即在其细胞表面上表达第二生物学分子的细胞的群体减少)，和/或靶细胞杀伤。提供了在体内和/或在体外具有此类生物学活性的抗体。在某些实施方案中，对本发明的抗体测试此类生物学活性，如本文中下文实施例中详细描述的。
D.免疫缀合物
本发明还提供了包含与一种或多种细胞毒剂，诸如化疗剂或药物，生长抑制剂，毒素(例如蛋白质毒素，细菌，真菌，植物或动物起源的酶活性毒素，或其片段)，或放射性同位素缀合的本文中的抗HER2抗体的免疫缀合物。
在一个实施方案中，免疫缀合物是抗体-药物缀合物(ADC)，其中抗体与一种或多种药物缀合，包括但不限于美登木素生物碱(见美国专利No.5,208,020，5,416,064和欧洲专利EP 0 425 235B1)；auristatin诸如单甲基auristatin药物模块DE和DF(MMAE和MMAF)(见美国专利No.5,635,483和5,780,588及7,498,298)；多拉司他汀(dolastatin)；加利车霉素(calicheamicin)或其衍生物(见美国专利No.5,712,374,5,714,586,5,739,116,5,767,285,5,770,701,5,770,710,5,773,001和5,877,296；Hinman等,Cancer Res.53:3336-3342(1993)；及Lode等,Cancer Res.58:2925-2928(1998))；蒽环类抗生素诸如道诺霉素(daunomycin)或多柔比星(doxorubicin)(见Kratz等,Current Med.Chem.13:477-523(2006)；Jeffrey等,Bioorganic&Med.Chem.Letters 16:358-362(2006)；Torgov等,Bioconj.Chem.16:717-721(2005)；Nagy等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97:829-834(2000)；Dubowchik等,Bioorg.&Med.Chem.Letters 12:1529-1532(2002)；King等,J.Med.Chem.45:4336-4343(2002)；及美国专利No.6,630,579)；甲氨蝶呤；长春地辛(vindesine)；紫杉烷(taxane)诸如多西他赛(docetaxel)，帕利他赛，larotaxel，tesetaxel，和ortataxel；单端孢霉素(trichothecene)；和CC1065。
在另一个实施方案中，免疫缀合物包含与酶活性毒素或其片段缀合的如本文中所描述的抗HER2抗体，所述酶活性毒素包括但不限于白喉A链，白喉毒素的非结合活性片段，外毒素A链(来自铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa))，蓖麻毒蛋白(ricin)A链，相思豆毒蛋白(abrin)A链，蒴莲根毒蛋白(modeccin)A链，α-帚曲霉素(sarcin)，油桐(Aleurites fordii)毒蛋白，香石竹(dianthin)毒蛋白，美洲商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI，PAPII和PAP-S)，苦瓜(Momordica charantia)抑制物，麻疯树毒蛋白(curcin)，巴豆毒蛋白(crotin)，肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂，白树毒蛋白(gelonin)，丝林霉素(mitogellin)，局限曲菌素(restrictocin)，酚霉素(phenomycin)，依诺霉素(enomycin)和单端孢菌素(tricothecenes)。
在另一个实施方案中，免疫缀合物包含与放射性原子缀合以形成放射性缀合物的如本文中所描述的抗HER2抗体。多种放射性同位素可用于生成放射性缀合物。例子包括At211，I131，I125，Y90，Re186，Re188，Sm153，Bi212，P32，Pb212和Lu的放射性同位素。在使用放射性缀合物进行检测时，它可以包含供闪烁法研究用的放射性原子，例如tc99m或I123，或供核磁共振(NMR)成像(又称为磁共振成像，mri)用的自旋标记物，诸如再一次的碘-123，碘-131，铟-111，氟-19，碳-13，氮-15，氧-17，钆，锰或铁。
可以使用多种双功能蛋白质偶联剂来生成抗体和细胞毒剂的缀合物，诸如N-琥珀酰亚氨基3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)，琥珀酰亚氨基-4-(N-马来酰亚氨基甲基)环己烷-1-羧酸酯(SMCC)，亚氨基硫烷(IT)，亚氨酸酯(诸如盐酸己二酰亚氨酸二甲酯)，活性酯类(诸如辛二酸二琥珀酰亚氨基酯)，醛类(诸如戊二醛)，双叠氮化合物(诸如双(对-叠氮苯甲酰基)己二胺)，双重氮衍生物(诸如双(对-重氮苯甲酰基)-乙二胺)，二异硫氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)，和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)的双功能衍生物。例如，可以如Vitetta等,Science 238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒蛋白免疫毒素。碳-14标记的1-异硫氰酸苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体缀合的例示性螯合剂。参见WO94/11026。接头可以是便于在细胞中释放细胞毒性药物的“可切割接头”。例如，可使用酸不稳定接头，肽酶敏感性接头，光不稳定接头，二甲基接头或含二硫化物接头(Chari等,Cancer Res 52:127-131(1992)；美国专利No.5,208,020)。
本文中的免疫缀合物或ADC明确涵盖，但不限于用交联试剂制备的此类缀合物，所述交联试剂包括但不限于BMPS，EMCS，GMBS，HBVS，LC-SMCC，MBS，MPBH，SBAP，SIA，SIAB，SMCC，SMPB，SMPH，sulfo-EMCS，sulfo-GMBS，sulfo-KMUS，sulfo-MBS，sulfo-SIAB，sulfo-SMCC，和sulfo-SMPB，及SVSB(琥珀酰亚氨基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)，它们是商品化的(例如，来自Pierce Biotechnology,Inc.,Rockford,IL.,U.S.A)。
E.用于诊断和检测的方法和组合物
在某些实施方案中，本发明的任何抗HER2抗体可用于检测生物学样品中HER2的存在。如本文中使用的，术语“检测”涵盖定量或定性检测。在某些实施方案中，生物学样品包括细胞或组织。
在一个实施方案中，提供了在诊断或检测方法中使用的抗HER2抗体。在又一方面，提供了检测生物学样品中HER2的存在的方法。在某些实施方案中，该方法包括在容许抗HER2抗体结合HER2的条件下使生物学样品与抗HER2抗体接触，如本文中所描述的，并检测是否在抗HER2抗体与HER2间形成复合物。此类方法可以是体外或体内方法。
在某些实施方案中，提供了经标记的抗HER2抗体。标记物包括但不限于直接检测的标记物或模块(诸如荧光，发色，电子致密，化学发光，和放射性标记物)，及例如经由酶反应或分子相互作用间接检测的模块，诸如酶或配体。例示性的标记物包括但不限于放射性同位素32P，14C，125I，3H，和131I，荧光团诸如稀土螯合物或荧光素及其衍生物，罗丹明(rhodamine)及其衍生物，丹酰，伞形酮，萤光素酶，例如，萤火虫萤光素酶和细菌萤光素酶(美国专利No.4,737,456)，萤光素，2,3-二氢酞嗪二酮，辣根过氧化物酶(HRP)，碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，葡糖淀粉酶，溶菌酶，糖类氧化酶，例如，葡萄糖氧化酶，半乳糖氧化酶，和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶，杂环氧化酶诸如尿酸酶和黄嘌呤氧化酶(其与采用过氧化氢氧化染料前体的酶诸如HRP偶联)，乳过氧化物酶，或微过氧化物酶，生物素/亲合素，自旋标记物，噬菌体标记物，稳定的自由基，等等。
F.药物配制剂
通过混合具有期望纯度的此类抗体与一种或多种任选的药学可接受载剂(Remington’s Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980))以冻干配制剂或水性溶液形式制备本发明的抗HER2抗体的药物配制剂。一般地，药学可接受载剂在所采用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括但不限于缓冲剂，诸如磷酸盐，柠檬酸盐，和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化己烷双胺；苯扎氯铵，苄索氯铵；酚，丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烃基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清清蛋白，明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸，谷氨酰胺，天冬酰胺，组氨酸，精氨酸或赖氨酸；单糖，二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖类，诸如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨醇；成盐相反离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。本文中的例示性的药学可接受载剂进一步包含间质药物分散剂诸如可溶性中性活性透明质酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明质酸酶糖蛋白，诸如rHuPH20(Baxter International,Inc.)。某些例示性的sHASEGP和使用方法，包括rHuPH20记载于美国专利公开文本No.2005/0260186和2006/0104968。在一方面，将sHASEGP与一种或多种别的糖胺聚糖酶诸如软骨素酶组合。
例示性的冻干抗体配制剂记载于美国专利No.6,267,958。水性抗体配制剂包括那些记载于美国专利No.6,171,586和WO2006/044908的，后一种配制剂包含组氨酸-乙酸盐缓冲液。
本文中的配制剂还可含有超过一种所治疗具体适应症所必需的活性组分，优选活性互补且彼此没有不利影响的。例如，可能期望进一步提供另外的治疗剂(例如化疗剂，细胞毒剂，生长抑制剂，和/或抗激素剂，诸如本文中上文描述的那些)。合适的是，此类活性组分以对于预定目的有效的量组合存在。
活性组分可包载于例如通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中(例如分别是羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)，在胶状药物投递系统中(例如脂质体，清蛋白微球体，微乳剂，纳米颗粒和纳米胶囊)，或在粗滴乳状液中。此类技术披露于Remington's Pharmaceutical Sciences,第16版,Osol,A.编(1980)。
可以制备持续释放制剂。持续释放制剂的合适的例子包括含有抗体的固体疏水性聚合物的半透性基质，该基质为成形商品形式，例如膜，或微胶囊。
用于体内施用的配制剂一般是无菌的。无菌性可容易地实现，例如通过穿过无菌滤膜过滤。
G.治疗方法和组合物
可以在治疗方法中使用本发明的任何抗HER2抗体(包括抗HER2TDB)。
一方面，提供了抗HER2抗体，其用于作为药物使用。在又一些方面，提供了抗HER2抗体，其用于在治疗细胞增殖性病症(例如癌症，诸如HER阳性癌症)或延迟其进展中使用。在某些实施方案中，提供了抗HER2抗体，其用于在治疗方法中使用。在某些实施方案中，本发明提供抗HER2抗体，其用于在治疗具有细胞增殖性病症的个体的方法中使用，包括对该个体施用有效量的该抗HER2抗体。在一个实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂，例如如下文描述的。在又一个实施方案中，本发明提供抗HER2抗体(诸如抗HER2TDB)，其用于在在具有细胞增殖性病症的个体中增强免疫功能中使用。在某些实施方案中，本发明提供抗HER2抗体，其用于在在具有细胞增殖性病症的个体中增强免疫功能的方法中使用，包括对该个体施用有效量的该抗HER2抗体以激活效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)，扩充(增加)效应细胞群体，减少靶细胞(例如表达受到本发明的抗HER2抗体，诸如本发明的双特异性TDB抗体识别的第二生物学分子的细胞)群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶肿瘤细胞)。依照上述实施方案任一的“个体”可以为人。
又一方面，本发明提供抗HER2抗体在制造或制备药物中的用途。在一个实施方案中，该药物用于治疗细胞增殖性病症(例如癌症)。在又一个实施方案中，该药物用于治疗细胞增殖性病症的方法，包括对具有细胞增殖性病症的个体施用有效量的该药物。在一个此类实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂，例如如下文描述的。在又一个实施方案中，该药物用于在该个体中激活效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)，扩充(增加)效应细胞群体，减少靶细胞(例如表达受到本发明的抗HER2抗体，诸如本发明的双特异性TDB抗体识别的第二生物学分子的细胞)群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶肿瘤细胞)。在又一个实施方案中，该药物用于在具有细胞增殖性病症的个体中增强免疫功能的方法，包括对该个体施用有效量的该药物以激活效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)，扩充(增加)效应细胞群体，减少靶细胞(例如表达受到本发明的抗HER2抗体，诸如本发明的双特异性TDB抗体识别的第二生物学分子的细胞)群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶肿瘤细胞)。依照上述实施方案任一的“个体”可以为人。
又一方面，本发明提供一种用于治疗细胞增殖性病症(例如癌症)的方法。在一个实施方案中，该方法包括对具有此类细胞增殖性病症的个体施用有效量的抗HER2抗体。在一个此类实施方案中，该方法进一步包括对该个体施用有效量的至少一种另外的治疗剂，例如如下文描述的。依照上述实施方案任一的“个体”可以为人。
又一方面，本发明提供一种用于在具有细胞增殖性病症的个体中增强免疫功能的方法。在一个实施方案中，该方法包括对该个体施用有效量的抗HER2抗体以激活效应细胞(例如T细胞，例如CD8+和/或CD4+T细胞)，扩充(增加)效应细胞群体，减少靶细胞(例如表达受到本发明的抗HER2抗体，诸如本发明的双特异性TDB抗体识别的第二生物学分子的细胞)群体，和/或杀伤靶细胞(例如靶肿瘤细胞)。在一个实施方案中，“个体”为人。
又一方面，本发明提供一种用于治疗表达HER2的癌症，包括HER2阳性癌症的方法。在一个实施方案中，该方法包括对具有此类癌症的个体施用有效量的本发明的抗HER2抗体。在一个实施方案中，该抗HER2抗体是单特异性二价抗体。在另一个实施方案中，该抗HER2抗体是具有抗HER2靶向臂和抗CD3靶向臂的双特异性TDB抗体。在一个优选实施方案中，该HER2-TDB拥有当在患者中以有效剂量施用时可接受的毒性概况。在一个实施方案中，该具有可接受毒性概况的HER2-TDB的CD3臂是低亲和力CD3臂。在一个实施方案中，该具有可接受毒性概况的HER2-TDB的CD3臂是40G5c。
可以在疗法中单独或与其它药剂组合使用本发明的抗体。例如，可以与至少一种另外的治疗剂共施用本发明的抗体。在某些实施方案中，另外的治疗剂为化疗剂，生长抑制剂，细胞毒剂，放射疗法中使用的药剂，抗血管发生剂，凋亡剂，抗微管蛋白剂，或其它药剂，诸如表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂(例如酪氨酸激酶抑制剂)，HER1/EGFR抑制剂(例如厄洛替尼(TarcevaTM)，血小板衍生生长因子抑制剂(例如GleevecTM(Imatinib Mesylate))，COX-2抑制剂(例如塞来考昔)，干扰素，细胞因子，除本发明的抗HER2抗体以外的抗体，诸如结合ErbB2，ErbB3，ErbB4，PDGFR-β，BlyS，APRIL，BCMA VEGF，或VEGF受体中的一种或多种靶物的抗体，TRAIL/Apo2，PD-1，PD-L1，PD-L2，或其它生物活性和有机化学剂。
在一些实施方案中，该抗HER2抗体与PD-1轴结合拮抗剂或另外的治疗剂组合施用于该受试者。在一些实施方案中，该另外的治疗剂在施用该抗HER2抗体之前或之后施用。在一些实施方案中，该另外的治疗剂与该抗HER2抗体并行施用。在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂选自下组：PD-1结合拮抗剂，PD-L1结合拮抗剂，和PD-L2结合拮抗剂。
在一些实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽，或其它降低，阻断，抑制，消除，或干扰源自PD-1与PD-L1和/或PD-L2相互作用的信号转导的分子。在一些实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是抗PD-1抗体。在一个具体实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是MDX-1106(nivolumab)。在另一个具体实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是MK-3475(pembrolizumab)。在另一个具体实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是CT-011(pidilizumab)。在另一个具体实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是AMP-224。在另一个具体实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是MED1-0680。在另一个具体实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是PDR001。在另一个具体实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是REGN2810。在另一个具体实施方案中，该PD-1结合拮抗剂是BGB-108。
在其它实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L1结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽，或其它降低，阻断，抑制，消除，或干扰源自PD-L1与一种或多种它的结合配偶，诸如PD-1，B7-1相互作用的信号转导的分子。在一些实施方案中，该PD-L1结合拮抗剂是抗PD-L1抗体。在仍有另一个具体实施方案中，该抗PD-L1抗体是MPDL3280A(阿特珠单抗)。在具体实施方案中，该抗PD-L1抗体是YW243.55.S70。在另一个具体实施方案中，该抗PD-L1抗体是MDX-1105。在另一个具体实施方案中，该抗PD-L1抗体是MSB0015718C。在仍有另一个具体实施方案中，该抗PD-L1抗体是MEDI4736。
在其它实施方案中，该PD-1轴结合拮抗剂是PD-L2结合拮抗剂。在一些实施方案中，该PD-L2结合拮抗剂是抗PD-L2抗体，其抗原结合片段，免疫粘附素，融合蛋白，寡肽，或其它降低，阻断，抑制，消除，或干扰源自PD-L2与一种或多种它的结合配偶，诸如PD-1相互作用的信号转导的分子。在一些实施方案中，该PD-L2结合拮抗剂是抗PD-L2抗体。在一些实施方案中，该PD-L2结合拮抗剂是免疫粘附素。
在一个优选的实施方案中，该HER2阳性癌症是HER2阳性乳腺癌或HER2阳性胃癌。在一个实施方案中，抗HER2抗体与一种或多种靶向HER途径的另外的治疗剂共施用。在一个实施方案中，该靶向HER途径的治疗剂选自EGFR抑制剂，HER2抑制剂，HER3抑制剂，和/或HER4抑制剂。在一个实施方案中，抗HER2抗体与一种或多种选自曲妥珠单抗T-DM1和帕托珠单抗的另外的治疗剂共施用。在一个实施方案中，抗HER2抗体与曲妥珠单抗共施用。在一个实施方案中，HER2TDB与T-DM1共施用。在一个实施方案中，抗HER2抗体与帕托珠单抗共施用。在一个实施方案中，抗HER2抗体与曲妥珠单抗和帕托珠单抗共施用。在一个实施方案中，抗HER2抗体与T-DM1和帕托珠单抗共施用。
在一些实施方案中，本发明提供一种方法，其中该另外的治疗剂为糖皮质激素。在一个实施方案中，该糖皮质激素为地塞米松。
上文记录的此类组合疗法涵盖组合施用(其中两种或更多种治疗剂包含在同一配制剂或分开的配制剂中)，和分开施用，在该情况中，可以在施用一种或多种另外的治疗剂之前，同时，和/或之后发生本发明的抗体的施用。在一个实施方案中，抗HER2抗体的施用和另外的治疗剂的施用彼此在约1个月内，或在约1，2或3周内，或在约1，2，3，4，5，或6天内发生。本发明的抗HER2抗体也可以与放射疗法组合使用。
可以通过任何合适的手段(包括胃肠外，肺内，和鼻内，及若期望用于局部治疗的话，损伤内施用)来施用本发明抗体(和/或任何另外的治疗剂)。胃肠外输注包括肌肉内，静脉内，动脉内，腹膜内，或皮下施用。在一些实施方案中，通过皮下施用来施用该抗体。在一些实施方案中，通过皮下注射施用的抗HER2抗体在患者中展现比通过静脉内注射施用的相同抗HER2抗体要少的毒性反应。部分根据施用是短暂的还是长期的，剂量给药可以通过任何合适的路径(例如通过注射，诸如静脉内或皮下注射)来进行。本文中涵盖各种剂量给药日程表，包括但不限于单次施用或在多个时间点里的多次施用，推注施用，和脉冲输注。
本发明抗体会以一种符合优秀的医学实践的方式配制，定剂量和施用。在此背景中考虑的因素包括所治疗的特定病症，所治疗的特定哺乳动物，患者个体的临床状况，病症的起因，药剂投递部位，施用方法，施用日程表及医学从业人员知道的其它因素。抗体无需但任选与一种或多种目前用于预防或治疗所讨论病症的药剂一起配制。此类其它药物的有效量取决于配制剂中存在的抗体的量，病症或治疗的类型，及上文所述其它因素。这些通常以本文所述相同的剂量和施用途径使用，或以约1-99％的本文所述剂量使用，或以凭经验/临床上确定为适宜的任何剂量和任何途径使用。
为了预防或治疗疾病，本发明抗体(当单独或与一种或多种其它别的治疗剂组合使用时)的适宜剂量会取决于要治疗的疾病的类型，抗体的类型，疾病的严重性和病程，施用抗体是预防还是治疗目的，之前的疗法，患者的临床史和对抗体的响应，及主治医师的斟酌。抗体适合于在一次或一系列的治疗中施用于患者。
作为一般建议，施用于人的抗HER2抗体的治疗有效量会在约0.01至约100mg/kg患者体重的范围中，无论是通过一次或多次施用。在一些实施方案中，所使用的抗体为例如每天施用约0.01至约45mg/kg，约0.01至约40mg/kg，约0.01至约35mg/kg，约0.01至约30mg/kg，约0.01至约25mg/kg，约0.01至约20mg/kg，约0.01至约15mg/kg，约0.01至约10mg/kg，约0.01至约5mg/kg，或约0.01至约1mg/kg。在一个实施方案中，在21天周期的第1天以约100mg，约200mg，约300mg，约400mg，约500mg，约600mg，约700mg，约800mg，约900mg，约1000mg，约1100mg，约1200mg，约1300mg或约1400mg的剂量将本文中描述的抗HER2抗体施用于人。该剂量可以作为单剂或作为多剂(例如2或3剂)施用，诸如输注。对于几天或更长时间上的重复施用，根据状况，治疗通常会持续直至疾病症状发生期望的阻抑。抗体的一种例示性剂量会在约0.05mg/kg至约10mg/kg的范围中。如此，可以将一剂或多剂约0.5mg/kg，2.0mg/kg，4.0mg/kg，或10mg/kg(或其任意组合)施用于患者。此类剂量可间歇施用，例如每周或每三周(例如使得患者接受约2至约20剂，或例如约6剂抗HER2抗体)。可以施用较高的初始加载剂，接着是较低的一或多剂。此疗法的进展易于通过常规技术和测定法来监测。
在一些实施方案中，所述方法可以进一步包括另外的疗法。所述另外的疗法可以为放射疗法，手术，化学疗法，基因疗法，DNA疗法，病毒疗法，RNA疗法，免疫疗法，骨髓移植，纳米疗法(nanotherapy)，单克隆抗体疗法，或前述疗法的组合。所述另外的疗法可以为辅助或新辅助疗法的形式。在一些实施方案中，所述另外的疗法为施用小分子酶抑制剂或抗转移剂。在一些实施方案中，所述另外的疗法为施用副作用限制剂(例如意图减轻治疗副作用的发生和/或严重性的药剂，诸如抗恶心剂等)。在一些实施方案中，所述另外的疗法为放射疗法。在一些实施方案中，所述另外的疗法为手术。在一些实施方案中，所述另外的疗法为放射疗法和手术的组合。在一些实施方案中，所述另外的疗法为γ照射。在一些实施方案中，所述另外的疗法可以为分开施用一种或多种上文所述治疗剂。
H.制品
在本发明的另一个方面，提供了一种制品，其含有可用于治疗，预防和/或诊断上文描述的病症的材料。制品包含容器和容器上或与容器联合的标签或包装插页。合适的容器包括例如瓶，管形瓶，注射器，IV溶液袋，等。容器可以自多种材料诸如玻璃或塑料形成。容器容纳单独或与另一种组合物组合有效治疗，预防和/或诊断状况的组合物，并且可以具有无菌存取口(例如，容器可以是具有由皮下注射针可刺穿的塞子的管形瓶或静脉内溶液袋)。组合物中的至少一种活性剂是本发明的抗体。标签或包装插页指示使用组合物来治疗选择的状况。此外，制品可以包含(a)其中装有组合物的第一容器，其中组合物包含本发明的抗体；和(b)其中装有组合物的第二容器，其中组合物包含别的细胞毒性或其它方面治疗性的药剂。本发明的此实施方案中的制品可以进一步包含包装插页，其指示可以使用组合物来治疗特定的状况。或者/另外，制品可以进一步包含第二(或第三)容器，其包含药学可接受缓冲液，诸如抑菌性注射用水(BWFI)，磷酸盐缓冲盐水，Ringer氏溶液和右旋糖溶液。它可以进一步包含从商业和用户观点看期望的其它材料，包括其它缓冲剂，稀释剂，滤器，针，和注射器。
III.实施例
下面是本发明的方法和组合物的实施例。理解的是，鉴于上文提供的一般性描述，可以实施各种其它实施方案。
实施例1：抗HER2抗体的生成和表征
选择hu4D5的六个氨基酸残基(hu4D5的轻链可变区中的两个和重链可变区中的四个)进行诱变：
LC-Asn30＝位置X1
LC-Thr30＝位置X2
HC-Asn54＝位置X3
HC-Gly55＝位置X4
HC-Asp98＝位置X5
HC-Gly99＝位置X6
该残基显示于图1的序列比对中。
改变残基X1-X6，并通过Kunkel定点诱变引入突变(Kunkel TA.(1985)."Rapidand efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection."(PDF).Proceedings of the National Academy of Sciences U S A.82(2):488-92)。
突变轻链CDR L1序列“N30，T31”以包括下述变异：QT，TT，ST，ET，DT，和ND。
将重链CDR H2“N54，G55”突变成：AG，EG，SG，NA。
将重链CDR H3“D98，G99”突变成：EG，TG，SG，DS和DT。
所示残基标号依照Kabat(Kabat et al.,Sequences of proteins ofimmunological interest,5th Ed.,Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,MD(1991)。
将点突变的组合引入到纯化的具有野生型hu4D5序列的单链重和轻链DNA上。在HEK293细胞中作为Fab表达选定突变体组合，并通过蛋白G亲和层析来纯化。分离23种Fab构建物(包括野生型4D5Fab)中的每一种，并筛选对重组人Her2ECD(人Her2/ErbB2蛋白质，产品目录号10004-HCCH，Sino Biological Inc.)的结合。
使用Biacore T200仪器通过表面等离振子共振测定单价结合亲和力。将冻干的重组HER2蛋白质在乙酸盐缓冲液pH 5.0中稀释至2μg/ml。使用来自GE Healthcare(BR-1000-50)的胺偶联试剂盒和制造商的方案在S系列CM5传感器芯片上以3种不同密度固定化该蛋白质。
以1.56nM至50nM的浓度系列在0.5％P20，HBS-EP运行缓冲液中稀释纯化的抗HER2Fab，并在所有流动室上以30μl/min的流速注射，使用流动室1作为空白参照。每一份样品容许3分钟结合和解离，并通过在每一个循环之后注射50mM HCl 60秒来实现每一个循环之后的再生。
通过使用1:1Langmuir结合模型同时拟合ka和kd来表征动力学相互作用。见图2。
实施例2：抗HER2抗体的生成和表征
将野生型huMAb4D5重和轻链的可变域的氨基酸序列亚克隆入含有WT huIgG Fc的质粒，或含有具有突变的Fc区的质粒以生成节或穴变体构建物(Trill et al.,Curr OpinBiotechnol 1995:553-560)。残基编号依照Kabat(Kabat et al.,5th Ed.,Public HealthService,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991))。为了生成单特异性，二价抗体，通过用分开的含有WT-Fc重或轻链DNA的质粒转染哺乳动物CHO细胞来生成具有两个抗原结合域的完整全长IgG1。通过标准方法表达并纯化单克隆抗体(Liu et al.,MAbs.2010Sep-Oct；2(5):480-499)。如上生成4D5v3二价抗体，通过kunkel诱变在规定位置处引入突变。4D5v3抗体的氨基酸序列显示于1：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFNIKDTYIHWVRQAPGKGLEWVARIYPTNAYTRYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCSRWGGTGFYAMDYWGQGTLVTVSS
VH：SEQ ID NO:11
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSRSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQHYTTPPTFGQGTKVEIK
VL：SEQ ID NO:10
由于降低的抗体脱酰胺或异构化，位置N30，G55，和D98处的氨基酸的替代产生具有与野生型4D5相比升高的稳定性的4D5v3。
抗HER2变体的亲和力
使用上文所述条件通过Biacore分析测定抗HER2 4D5v3二价抗体对HER2靶物的结合亲和力。图3显示Biacore分析的结果。4D5v3展现比野生型4D5的结合亲和力要大约10倍的结合亲和力。如此，在具有升高的稳定性以外，4D5v3还令人惊讶地展现升高的对HER2靶物的亲和力。
实施例3：抗HER2/CD3双特异性抗体的生成和表征
对某些抗HER抗体的效用测试它们在T细胞靶向性治疗性抗体，也称作“T细胞依赖性双特异性”(TDB)抗体的背景中的效用。TDB抗体能够同时结合T细胞(例如CD3)上的细胞表面抗原和肿瘤细胞上的细胞表面抗原，由此使得所结合的T细胞能够对消灭肿瘤细胞做出贡献。
抗HER2TDB抗体具有一个针对CD3的臂(40G5C)和一个针对细胞表面抗原HER2的臂。作为人IgG1以节-入-穴形式作为全长抗体生成HER2TDB抗体(Atwell et al.,J.Mol.Biol.270:26-35,1997)。在大肠杆菌或中国仓鼠卵巢(CHO)细胞任一中表达半抗体，通过蛋白A亲和层析纯化，并如先前描述的(Spiess et al.,Nat.Biotechnol.2013)在体外将正确的半抗体对退火。如果在CHO细胞中进行TDB抗体生成的话，抗体包括无糖基化突变，例如在残基N297处(例如N297G)，使得TDB抗体为效应器降低性变体且不能启动抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)。退火后，通过疏水相互作用层析(HIC)纯化HER2TDB，并通过分析性凝胶过滤，质谱术，和聚丙烯酰胺凝胶电泳表征。通过这些方法，生成了具有40G5C作为抗CD3臂的多种HER2TDB。
抗HER2TDB对HER2的亲和力
使用上文所述条件经由Biacore分析对抗HER2/CD3双特异性抗体的亲和力测试它们对它们的HER2靶物的亲和力。图4显示Biacore分析的结果。TDB显示一定范围的对HER2抗原的结合亲和力。4D5v3，4D5v21和4D5v22抗体展现比野生型4D5TDB的结合亲和力要大约10倍的结合亲和力。
HER2TDB的体外测试
人PBMC分离和CD8+细胞纯化
使用淋巴细胞分离介质Lymphoprep自健康志愿者的血液分出人PBMC(StemCellTechnologies,#07811)。通过负选择使用CD8+分离试剂盒自PBMC提取CD8+细胞(Miltenyi,#130-094-156)。
体外细胞杀伤测定法
在第1天以10x103个细胞每孔的密度在黑色，透明底96孔盘(Corning,#3904)中分配SK-BR-3细胞。在第2天以5:1的E:T比添加纯化的CD8+细胞。在第2天以1000，100，10，1，0.1，0.001，0.0001，0.00001ng/mL用HER2TDB变体处理细胞或不处理。在第4天自板中取出CD8+细胞并将孔用PBS清洗2次。依照制造商的说明书实施Cell Titer Glo测定法(Promega,#G7572)并对板读数。
T细胞激活的分析
在各种HER2TDB存在或缺失下混合靶细胞和纯化的CD8+T细胞。通过流式细胞术分析T细胞激活。在温育结束时，将细胞用CD8-FITC(BD Bioscience,#555634)和CD69-PE(BDBioscience,#555531)和CD25-APC(BD Bioscience,#555434)染色。
结果
使用纯化的人CD8+细胞和表达HER2的靶细胞系实施细胞杀伤测定法以评估4D5-40G5变体的功能活性。变体20-24展现与WT 4D5-40G5和4D5v3-40G5变体二者相似的杀伤活性。在变体中，4D5v23效力最低。用3个分开的供体重复杀伤测定法。在每一种情况中结果是相似的。见图5A-5C。
还对变体测试它们诱导T细胞活性的能力。所有测试的变体均在使用s自两名患者分离的细胞的测定法中展示细胞活性。T细胞活性结果显示与杀伤测定法的一致性，其中4D5v 23具有最低的CD8+细胞激活和体外杀伤效力。在杀伤和T细胞激活二者中，4D5v3，4D5v 20和4D5v 24显示最大的效应器活性和更高的针对靶物的功效。见图6
其它实施方案
尽管为了清楚理解的目的已经通过举例说明的方式较为详细地描述了上述发明，说明书和实施例不应解释为限制发明范围。通过述及明确收录本文中引用的所有专利和科学文献的完整公开内容。
序列表
<110> 基因泰克公司（GENENTECH, INC.）等
<120> 抗HER2抗体和使用方法
<130> P32917-WO
<140>
<141>
<150> 62/181,106
<151> 2015-06-17
<160> 89
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 1
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 2
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 3
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<220>
<221> 变体
<222> (30)..(30)
<223> /替换="Asp" 或 "Ser" 或 "Thr" 或 "Glu" 或 "His" 或 "Lys" 或 "Arg"或 "Gln"
<220>
<221> 变体
<222> (31)..(31)
<223> /替换="Val" 或 "Ser" 或 "Asp"
<220>
<221> 混杂特征
<222> (1)..(107)
<223> /注释="序列中给出的变异残基就注解中对于变异位置给出的那些而言没有偏好"
<400> 3
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 4
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<220>
<221> 变体
<222> (55)..(55)
<223> /替换="Glu" 或 "Ala" 或 "Gln" 或 "His" 或 "Asp" 或 "Lys" 或 "Arg"或 "Ser"
<220>
<221> 变体
<222> (56)..(56)
<223> /替换="Ala"
<220>
<221> 变体
<222> (102)..(102)
<223> /替换="Glu" 或 "Ser" 或 "Asn" 或 "Thr"
<220>
<221> 变体
<222> (103)..(103)
<223> /替换="Ser" 或 "Ala" 或 "Thr"
<220>
<221> 混杂特征
<222> (1)..(120)
<223> /注释="序列中给出的变异残基就注解中对于变异位置给出的那些而言没有偏好"
<400> 4
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 5
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<220>
<221> 修饰的残基
<222> (56)..(56)
<223> 除Gly以外的任何氨基酸
<400> 5
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Xaa Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 6
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Glu Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Ser Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 8
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Glu Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Thr Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 10
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 11
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Ala Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Thr Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 13
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Ser Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 14
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 14
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 15
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Ala Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Thr Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 16
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 17
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 17
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Thr Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 18
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 18
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 19
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 19
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Glu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 20
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 21
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Ala Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Thr Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 22
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 23
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 23
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Thr Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 24
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 24
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 25
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Ala Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Ser Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 26
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 26
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Ala Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 27
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 27
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Ala Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Thr Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 28
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 28
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Glu Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Ser Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 29
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Ala Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Ser Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 30
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 30
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Glu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 31
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 31
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 32
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 32
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Glu Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Asp Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Ala Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Glu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 35
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<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 35
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Glu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Asp Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 37
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 37
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Glu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
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<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Gln Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Ser Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Ser Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 40
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 40
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Ala Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 41
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 41
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 42
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 43
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 43
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Ser Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 44
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Glu Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
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Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 45
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 45
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Ser Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
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Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 46
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 46
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Ala Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Thr Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
115
<210> 47
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 47
Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 48
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 48
Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
1 5
<210> 49
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 49
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr
1 5
<210> 50
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 50
Asp Thr Tyr Ile His
1 5
<210> 51
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 51
Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 52
Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 53
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 53
Arg Ala Ser Gln Asp Val Asp Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 54
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 54
Arg Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 55
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 55
Arg Ala Ser Gln Asp Val Thr Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 56
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 56
Arg Ala Ser Gln Asp Val Gln Thr Ala Val Ala
1 5 10
<210> 57
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 57
Arg Ile Tyr Pro Thr Glu Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 58
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 58
Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Ala Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 59
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 59
Arg Ile Tyr Pro Thr Glu Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 60
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 60
Arg Ile Tyr Pro Thr Ala Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 61
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 61
Arg Ile Tyr Pro Thr Ser Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 62
Trp Gly Gly Asp Ser Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 63
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 63
Trp Gly Gly Thr Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 64
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 64
Trp Gly Gly Ser Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 65
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 65
Arg Trp Gly Gly Glu Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 66
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 66
Asn Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 67
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 67
Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 68
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 68
Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 69
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 69
Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu
1 5 10 15
Ala
<210> 70
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 70
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 71
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 71
Thr Gln Ser Phe Ile Leu Arg Thr
1 5
<210> 72
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 72
Ser Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 73
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 73
Trp Ile Tyr Pro Glu Asn Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 74
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 74
Asp Gly Tyr Ser Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 75
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 75
Trp Thr Ser Thr Arg Lys Ser
1 5
<210> 76
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 76
Lys Gln Ser Phe Ile Leu Arg Thr
1 5
<210> 77
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 77
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 78
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 78
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln
85 90 95
Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 79
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 79
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Trp Ile Tyr Pro Glu Asn Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Tyr Ser Arg Tyr Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 80
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 80
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Lys Gln
85 90 95
Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 81
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的多肽"
<400> 81
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser
20 25 30
Arg Thr Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Thr Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Thr Gln
85 90 95
Ser Phe Ile Leu Arg Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 82
<211> 27
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 82
Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys
1 5 10 15
Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr
20 25
<210> 83
<211> 28
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<400> 83
Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys
1 5 10 15
Val Ser Ile Ser Gly Thr Thr Val Ile Leu Thr Cys
20 25
<210> 84
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<220>
<221> 变体
<222> (1)..(1)
<223> /替换="Ser"
<220>
<221> 混杂特征
<222> (1)..(5)
<223> /注释="序列中给出的变异残基就注解中对于变异位置给出的那些而言没有偏好"
<400> 84
Asn Tyr Tyr Ile His
1 5
<210> 85
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<220>
<221> 变体
<222> (5)..(5)
<223> /替换="Glu"
<220>
<221> 变体
<222> (6)..(6)
<223> /替换="Asn"
<220>
<221> 变体
<222> (7)..(7)
<223> /替换="Gly"
<220>
<221> 变体
<222> (17)..(17)
<223> /替换="Gly"
<220>
<221> 混杂特征
<222> (1)..(17)
<223> /注释="序列中给出的变异残基就注解中对于变异位置给出的那个而言没有偏好"
<400> 85
Trp Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 86
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<220>
<221> 变体
<222> (2)..(2)
<223> /替换="Gly"
<220>
<221> 变体
<222> (5)..(5)
<223> /替换="Arg"
<220>
<221> 混杂特征
<222> (1)..(10)
<223> /注释="序列中给出的变异残基就注解中对于变异位置给出的那个而言没有偏好"
<400> 86
Asp Ser Tyr Ser Asn Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 87
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<220>
<221> 变体
<222> (2)..(2)
<223> /替换="Thr"
<220>
<221> 变体
<222> (6)..(6)
<223> /替换="Lys"
<220>
<221> 混杂特征
<222> (1)..(7)
<223> /注释="序列中给出的变异残基就注解中对于变异位置给出的那个而言没有偏好"
<400> 87
Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser
1 5
<210> 88
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<221> 来源
<223> /注释="人工序列的描述: 合成的肽"
<220>
<221> 变体
<222> (1)..(1)
<223> /替换="Thr"
<220>
<221> 混杂特征
<222> (1)..(8)
<223> /注释="序列中给出的变异残基就注解中对于变异位置给出的那个而言没有偏好"
<400> 88
Lys Gln Ser Phe Ile Leu Arg Thr
1 5
<210> 89
<211> 16
<212> PRT
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 89
Gln Asp Gly Asn Glu Glu Met Gly Gly Ile Thr Gln Thr Pro Tyr Lys
1 5 10 15

Claims (41)

1.一种分离的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含
i.(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；或
ii.(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:57的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；或
iii.(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；或
iv.(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:62的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；或
v.(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；或
vi.(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；或
vii.(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:65的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:54的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；或
viii.(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:58的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:53的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3；或
ix.(a)包含SEQ ID NO:50的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:51的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:63的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:55的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:48的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:49的氨基酸序列的HVR-L3。
2.一种分离的抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:4的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
3.一种分离的抗HER2抗体，其包含包含SEQ ID NO:3的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:5的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
4.前述权利要求任一项的抗HER2抗体，其包含HER2结合域，该HER2结合域包含：
i.包含SEQ ID NO:6的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:7的氨基酸序列的重链可变域(VH)；或
ii.包含SEQ ID NO:8的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:9的氨基酸序列的重链可变域(VH)；或
iii.包含SEQ ID NO:10的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:11的氨基酸序列的重链可变域(VH)；或
iv.包含SEQ ID NO:12的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:13的氨基酸序列的重链可变域(VH)；或
v.包含SEQ ID NO:14的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:15的氨基酸序列的重链可变域(VH)；或
vi.包含SEQ ID NO:16的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:17的氨基酸序列的重链可变域(VH)；或
vii.包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:19的氨基酸序列的重链可变域(VH)；或
viii.包含SEQ ID NO:20的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:21的氨基酸序列的重链可变域(VH)；或
ix.包含SEQ ID NO:22的氨基酸序列的轻链可变域(VL)和包含SEQ ID NO:23的氨基酸序列的重链可变域(VH)。
5.前述权利要求任一项的抗HER2抗体，其中该抗HER2抗体进一步包含抗CD3结合域。
6.权利要求5的抗HER2抗体，其中该抗CD3结合域包含：
i.(a)包含SEQ ID NO:84的氨基酸序列的HVR-H1(b)包含SEQ ID NO:85的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:86的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:87的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO:88的氨基酸序列的HVR-L3；或
ii.(a)包含SEQ ID NO:66的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:67的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:68的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:70的氨基酸序列的HVR-L2，和(f)包含SEQ ID NO:71的氨基酸序列的HVR-L3；或
iii.包含SEQ ID NO:77的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:78的氨基酸序列的VL域；或
iv.(a)包含SEQ ID NO:72的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQ ID NO:73的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQ ID NO:74的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQ ID NO:69的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQ ID NO:75的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQ ID NO:76的氨基酸序列的HVR-L3；或
v.包含SEQ ID NO:79的氨基酸序列的VH域和包含SEQ ID NO:81的氨基酸序列的VL域。
7.前述权利要求任一项的抗HER2抗体，其中该抗HER2抗体为单克隆，人，人源化，或嵌合抗体。
8.前述权利要求任一项的抗HER2抗体，其中该抗HER2抗体为IgG抗体。
9.前述权利要求任一项的抗HER2抗体，其中该抗HER2抗体为多特异性抗体。
10.前述权利要求任一项的抗HER2抗体，其中该抗HER2抗体为全长抗体。
11.前述权利要求任一项的抗HER2抗体，其中该抗HER2抗体包含无糖基化位点突变。
12.前述权利要求任一项的抗HER2抗体，其中该无糖基化位点突变为替代突变。
13.前述权利要求任一项的抗HER2抗体，其中该抗HER2抗体具有降低的效应器功能。
14.前述权利要求任一项的抗HER2抗体，其中该抗HER2抗体在依照EU编号方式的氨基酸残基N297，L234，L235，D265，和/或P329G处包含替代突变。
15.权利要求14的抗HER2抗体，其中该替代突变选自由依照EU编号方式的N297G，N297A，L234A，L235A，D265A，和P329G组成的组。
16.权利要求15的抗HER2抗体，其中该抗HER2抗体在依照EU编号方式的氨基酸残基297处包含N297G替代突变。
17.权利要求1-9任一项的抗HER2抗体，其中该抗HER2抗体为抗体片段，诸如Fab，Fab’-SH，Fv，scFv，和/或(Fab’)2片段。
18.一种核酸，其编码权利要求1-17任一项的抗HER2抗体。
19.一种载体，其包含权利要求18的分离的核酸。
20.一种宿主细胞，其包含权利要求19的载体。
21.一种生成权利要求1-17任一项的抗HER2抗体的方法，该方法包括在培养基中培养权利要求20的宿主细胞。
22.一种药物组合物，其包含权利要求1-17任一项的抗HER2抗体。
23.权利要求1-17任一项的抗HER2抗体，其用作药物。
24.权利要求1-17任一项的抗HER2抗体，其用于在有所需要的受试者中治疗细胞增殖性病症或延迟细胞增殖性病症进展。
25.权利要求5-17任一项的抗HER2抗体，其用于在具有细胞增殖性病症的受试者中增强免疫功能。
26.权利要求24或25的抗HER2抗体，其中该细胞增殖性病症为癌症。
27.权利要求26的抗HER2抗体，其中该癌症表达HER2。
28.权利要求26的抗HER2抗体，其中该癌症为HER2阳性癌症。
29.权利要求26-28任一项的抗HER2抗体，其中该癌症为乳腺癌或胃癌。
30.权利要求1-17任一项的抗HER2抗体在制造用于治疗细胞增殖性病症或延迟细胞增殖性病症进展的药物中的用途。
31.权利要求24或25的抗HER2抗体的用途，其中该细胞增殖性病症为癌症。
32.权利要求31的用途，其中该癌症表达HER2。
33.权利要求31的用途，其中该癌症为HER2阳性癌症。
34.权利要求31-33任一项的用途，其中该癌症为乳腺癌或胃癌。
35.一种在有所需要的受试者中治疗细胞增殖性病症或延迟细胞增殖性病症进展的方法，该方法包括对该受试者施用权利要求1-17任一项的抗HER2抗体。
36.一种在具有细胞增殖性病症的受试者中增强免疫功能的方法，该方法包括对该受试者施用有效量的权利要求5-17任一项的抗HER2抗体。
37.权利要求35或36的方法，其中该细胞增殖性病症为癌症。
38.权利要求37的方法，其中该癌症表达HER2。
39.权利要求37的方法，其中该癌症为HER2阳性癌症。
40.权利要求37-39任一项的方法，其中该癌症为乳腺癌或胃癌。
41.权利要求35-40任一项的方法，其进一步包括对该受试者施用PD-1轴结合拮抗剂(诸如抗PDL1抗体)。
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