CN107771672A - 一种获得海滨木槿无菌苗的方法 - Google Patents

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刘凉琴
王芝权
徐晓洋
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    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
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Abstract

本发明属于植物生物技术领域，公开了一种获得海滨木槿无菌苗的方法，其主要做法是利用海滨木槿成熟种子通过组织培养得到无菌苗。先对种子进行浓硫酸处理，浸泡15 min，然后进行灭菌处理，将灭菌后的种子接种至MS培养基中，在组培室中培养即可获得生长健壮的无菌苗。应用本发明获得海滨木槿无菌苗，可为开展海滨木槿组织培养、建立高频再生体系和遗传转化体系提供基础。

Description

一种获得海滨木槿无菌苗的方法
技术领域
本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种获得海滨木槿无菌苗的方法。
背景技术
海滨木槿（Hibiscus hamabo Sieb. et Zucc.）是锦葵科木槿属落叶灌木或小乔木，20世纪80年代初由浙江农业大学范文涛教授鉴定。海滨木槿极耐盐碱，耐海潮间歇性淹没和海浪溅泼，且根系发达，极耐干旱瘠薄，是沿海地区优良抗风护塘固堤的先锋树种和海岸基干林带、盐碱地绿化造林树种 [1]。海滨木槿的用途很多，是集药用、食用、保健、观赏、绿化、保护水土、纤维原料价值于一身的木本植物 [2]。
海滨木槿的研究，目前主要集中在耐盐生理特性方面，耐盐分子机制的研究尚无报道。解析海滨木槿盐胁迫下的分子响应机制对耐盐植物的分子选育具有重要意义。海滨木槿无菌外植体的获得是开展海滨木槿组织培养，建立高频再生体系和遗传转化体系的前提，对于耐盐基因鉴定和耐盐分子育种具有重要意义。
发明内容
技术问题
针对海滨木槿无菌苗获得这一生产问题，本发明的目的在于提供一种海滨木槿无菌苗获得的方法。
技术方案
本发明的目的可以通过以下技术方案实现：
1）种子采集：从生长健壮、无病虫害的海滨木槿母株上采集种子；
2）低温春化：将采集的种子通过玻璃干燥器干燥，然后放置4℃冰箱春化24 h；
3）浓硫酸处理：将春化过的种子浸没至浓硫酸15 min，然后速用流水冲洗2 h；
4）种子消毒：在超净工作台对种子进行酒精和升汞灭菌处理；
5）接种及培养：将消毒过的种子接种至固体MS培养基中，放至组培室进行培养。组培室的温度为(25±2)℃、光照强度为1200 lx左右，光暗周期为16 h/8 h。
在南京采集海滨木槿成熟种子的时间在10月中旬。
有益效果
1. 本发明是目前较为系统地利用种子获得海滨木槿无菌苗的方法，该方法操作简便易行。
2. 针对海滨木槿耐盐分子机制研究薄弱的现状，研究获得海滨木槿无菌苗的方法，为后续开展海滨木槿组织培养，建立高频再生体系和遗传转化体系提供基础。
3. 本发明方法，先对成熟种子进行浓硫酸处理，再进行酒精升汞灭菌处理，接种至固体MS培养基中7 d即可发芽，10 d出现子叶。
4. 将海滨木槿种子作为外植体，一次性获得的无菌苗量大，繁殖快且不受季节条件限制，大大缩短出苗时间，节约成本。
附图说明
图1 获得的海滨木槿无菌苗。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体的制备实施例，并参照数据进一步详细地描述本发明。应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
实施例1：
1. 种子采集：10月上旬从江苏省中国科学院植物研究所实验苗圃中选取5年生、生长健壮、无病虫害的海滨木槿（Hibiscus hamabo Sieb. et Zucc.）植株，采集健康、饱满、无病虫害、大小均一的种子。
2. 低温春化：将采集的种子带回实验室，放入玻璃干燥器中干燥48 h，干燥完毕后将海滨木槿种子放入加厚自封袋中，并放置于4℃冰箱春化24 h。
3. 浓硫酸处理：将春化过的种子浸没至浓硫酸15 min，然后速用流水冲洗2 h，冲洗后用吸水纸吸取种子表皮水分。
4. 种子消毒：在组培超净工作台中，将海滨木槿种子转移至高温高压灭菌过的50ml离心管中，用75%的酒精灭菌1 min，然后用无菌水冲洗2遍，之后用0.1%升汞灭菌20 min，然后用无菌水冲洗6遍。
5. 接种及培养：将消毒过的种子接种至固体MS培养基中，培养温度为（25±2）℃、光照强度为1200 lx左右，光暗周期为16 h/8 h。
实施例2：
1. 种子采集：10月上旬从江苏省中国科学院植物研究所实验苗圃中选取5年生、生长健壮、无病虫害的海滨木槿（Hibiscus hamabo Sieb. et Zucc.）植株，采集健康、饱满、无病虫害、大小均一的种子。
2. 低温春化：将采集的种子带回实验室，放入玻璃干燥器中干燥48 h，干燥完毕后将海滨木槿种子放入加厚自封袋中，并放置于4℃冰箱春化24 h。
3. 浓硫酸处理：将春化过的种子浸没至浓硫酸15 min，然后速用流水冲洗2 h，冲洗后用吸水纸吸取种子表皮水分。
4. 种子消毒：在组培超净工作台中，将海滨木槿种子转移至高温高压灭菌过的50ml离心管中，用70%的酒精灭菌1 min，然后用无菌水冲洗2遍，之后用0.1%升汞灭菌25 min，然后用无菌水冲洗8遍。
5. 接种及培养：将消毒过的种子接种至固体MS培养基中，半插入培养基，使得种子充分接触培养基，培养温度为（25±2）℃、光照强度为1200 lx左右，光暗周期为16 h/8h。
以上所述仅为本发明的较优实施方式，凡是在本发明原理之内作出修改、改进的均在本发明所保护的范围之内。
参考文献
[1] 於朝广，殷云龙，芦治国，熊豫武，周瑞明. 海滨木槿研究进展及应用前景 [J].现代农业科技，2016 (19): 140-145.
[2] 王奇志，陈雨，孙浩，管福琴，赵友谊，冯煦，王鸣. 木槿属植物海滨木槿的研究进展 [J]. 中国野生植物资源，2012 (3): 8-10。

Claims (1)

1.一种获得海滨木槿无菌苗的方法，该方法包括种子采集、低温春化、浓硫酸处理、种子消毒、接种及培养，其特征在于：
1）种子采集：采集健康、饱满、无病虫害、大小均一的海滨木槿种子；
2）低温春化：将海滨木槿种子干燥，干燥完毕后放置于4℃冰箱春化；
3）浓硫酸处理：对春化过的种子进行浓硫酸处理；
4）种子消毒：在组培超净工作台中，对种子进行酒精和升汞灭菌处理；
5）接种及培养：将酒精和升汞灭菌过的种子接种至固体MS培养基中，然后在组培室培养，培养温度为（25±2）℃、光照强度为1200 lx左右，光暗周期为16 h/8 h。
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