CN107333659B - 一种日中性草莓组培快繁培养基及组培快繁方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种日中性草莓组培快繁培养基及组培快繁方法属于草莓组培快繁技术领域。本发明提供的繁殖方法，包括以下步骤：1)外植体的选择；2)外植体的灭菌；3)芽诱导培养；4)芽伸长培养；5)增殖培养；6)生根培养；7)炼苗和移栽。本发明提供的繁殖方法选取日中性草莓叶片或冠径的隐芽作为外植体，用生长激素浓度不断降低的培养基配方，半年内即可获得大规模日中性草莓草莓苗。

Description

一种日中性草莓组培快繁培养基及组培快繁方法

技术领域

本发明涉及草莓组培快繁技术领域，具体涉及一种日中性草莓组培快繁培养基及组培快繁方法。

背景技术

草莓是高效农业的首选，其生产周期短、见效快、收益高。目前，生产上主栽的草莓是一季性草莓，秋季定植，冬春季产果，采用大棚保温促成栽培或露地越冬栽培模式，使草莓结果期从11月中旬至翌年5月，但6～10月仍无草莓鲜果可食；日中性草莓是四季性草莓，它的选育和种植成功地解决了夏秋季节无草莓鲜果供应的问题，对实现草莓周年生产具有重要意义。

草莓常用的繁殖方法为匍匐茎繁殖和分株繁殖，它们繁殖繁殖速度慢、易感染病毒、导致子苗病虫害加剧、产量降低。为了提高繁殖速度、培养无病毒苗，一季性草莓使用匍匐茎茎尖组织培养进行快速繁殖，但日中性草莓很难发生匍匐茎，只能采用分株繁殖，同时由于草莓特性不同，快速繁殖的培养基配方及其方法、程序也不同，尚未有日中性草莓的快速繁殖方法的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种日中性草莓组培快繁培养基及组培快繁方法。本发明提供的培养基繁殖率高、繁殖速率快，无病虫害等优点，可为生产上提供大规模遗传上一致的种苗。

本发明提供了一种日中性草莓组培快繁培养基，包括：

1)芽诱导培养基，所述芽诱导培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖、2.8～3.5mg/L的BA和0.2～0.4mg/L的IBA；

2)芽伸长培养基，所述芽伸长培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖、1.6～1.8mg/L的BA和0.1～0.2mg/L的IBA；

3)增殖培养基，所述增殖培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖和0.65～0.85mg/L的BA；

4)生根培养基，所述生根培养基以1/2MS固体培养基为基准，包括质量浓度为0.5～3％的葡萄糖和0.002～0.005mg/L的IBA。

本发明还提供了一种基于上述技术方案所述培养基的日中性草莓快速繁殖方法，包括以下步骤：

1)选择日中性草莓叶片或冠茎基部的隐芽作为外植体；

2)将步骤1)得到的外植体依次进行乙醇灭菌和次氯酸钠灭菌，得到灭菌外植体；

3)将所述步骤2)得到的灭菌外植体置于芽诱导培养基中进行芽诱导培养，得到草莓幼芽；

4)当所述草莓幼芽长至0.3～0.5cm时，将步骤3)得到的草莓幼芽置于芽伸长培养基中进行幼苗培养，得到伸长的幼苗；

5)当幼苗长至为1～3cm时，将步骤4)得到的伸长的幼苗芽置于增殖培养基中进行增殖培养，得到草莓扩繁幼苗；

6)步骤5)得到的草莓扩繁幼苗长至3～5cm时，将所述草莓扩繁幼苗在生根培养基中进行生根培养，得到扩繁生根的草莓幼苗；

7)待不定根长至2.0cm以上时，将步骤6)得到的扩繁生根的草莓幼苗进行炼苗和移栽。

优选的是，所述步骤3)～6)的培养条件独立地为无菌环境，培养温度为24±2℃，光照强度为1500～2000Lx，每日光照时间14h。

优选的是，步骤2)灭菌前还包括：将外植体进行预处理，所述预处理包括以下步骤：将外植体在碱性洗涤剂中浸泡20～40min，用水冲洗5～6次。

优选的是，所述步骤2)灭菌包括以下步骤：用体积浓度为70～75％乙醇浸泡10～20s，再用质量浓度为0.8％～3％次氯酸钠进行表面消毒10～15min。

优选的是，选取叶片作为外植体时，芽诱导培养前还包括：将灭菌叶片进行愈伤诱导培养，所述愈伤诱导培养为暗培养。

优选的是，所述愈伤诱导培养用愈伤诱导培养基包括B5固体培养基、2.8～3.5mg/L的BA和0.2～0.4mg/L的IBA和质量浓度为2～3.5％的蔗糖，所述愈伤诱导培养基的pH值为5.8～6.0。

优选的是，选取叶片作为外植体时，将叶片沿叶脉处纵向倾斜30～60°角斜切成块，块10～20mm长,7～10mm宽。

优选的是，所述步骤5)增殖培养中，继代的间隔时间为20～25d。

优选的是，所述移栽用基质包括质量比为(2～4):1:1的泥炭、珍珠岩和蛭石，基质的湿度为85～95％。

本发明提供了一种日中性草莓组培快繁培养基。本发明提供的培养基用生长激素浓度不断降低的培养基配方，半年内即可获得大规模日中性草莓草莓苗，繁殖率高、繁殖速率快，无病虫害等优点，可为生产上提供大规模遗传上一致的种苗。

附图说明

图1为本发明提供的日中性草莓快速繁殖过程示意图。

具体实施方式

本发明提供了一种日中性草莓组培快繁培养基，包括：

1)芽诱导培养基，所述芽诱导培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖、2.8～3.5mg/L的BA和0.2～0.4mg/L的IBA；

2)芽伸长培养基，所述芽伸长培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖、1.6～1.8mg/L的BA和0.1～0.2mg/L的IBA；

3)增殖培养基，所述增殖培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖和0.65～0.85mg/L的BA；

4)生根培养基，所述生根培养基以1/2MS固体培养基为基准，包括质量浓度为0.5～3％的葡萄糖和0.002～0.005mg/L的IBA

本发明所述日中性草莓组培快繁培养基包括：芽诱导培养基，所述芽诱导培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖、2.8～3.5mg/L的BA和0.2～0.4mg/L的IBA；优选包括质量浓度为3％的蔗糖、3.4mg/L的BA和0.3mg/L的IBA。在本发明中，所述芽诱导培养基的pH值优选为5.8～6.0。蔗糖为植物提供炭源和能源物质，而低浓度2～3.5％的蔗糖可以扩散至植物体内。在本发明中，所述芽诱导培养基中BA能促进丛生芽形态建成和诱导愈伤组织的发生，促进芽分化，防止老化，IBA可以促进生根，两者高浓度比例搭配可以促进芽的形成。

本发明所述日中性草莓组培快繁培养基包括：芽伸长培养基，所述芽伸长培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖、1.6～1.8mg/L的BA和0.1～0.2mg/L的IBA；优选包括质量浓度为3％的蔗糖、1.7mg/L的BA和0.15mg/L的IBA。蔗糖为植物提供炭源和能源物质，而低浓度2～3.5％的蔗糖可以扩散至植物体内。在本发明中，所述芽诱导培养基中BA能促进丛生芽形态建成和诱导愈伤组织的发生，促进芽分化，防止老化和IBA可以促进生根，两者浓度比例搭配可以促进芽的粗壮、分化、防止老化。

本发明所述日中性草莓组培快繁培养基包括：增殖培养基，所述增殖培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖和0.65～0.85mg/L的BA；优选包括质量浓度为3％的蔗糖和0.75mg/L的BA。蔗糖为植物提供炭源和能源物质，而低浓度2～3.5％的蔗糖可以扩散至植物体内。在本发明中，所述芽诱导培养基中BA能促进芽的形成和诱导愈伤组织的发生，促进芽分化，防止老化，BA的浓度搭配可以促进芽的分化、增殖。

本发明所述日中性草莓组培快繁培养基包括：生根培养基，所述生根培养基以1/2MS固体培养基为基准，包括质量浓度为0.5～3％的葡萄糖和0.002～0.005mg/L的IBA；优选包括质量浓度为1％的葡萄糖和0.003mg/L的IBA。葡萄糖为植物提供炭源和能源物质，而低浓度0.5～3％的葡萄糖可以扩散至植物体内，与蔗糖相比，葡萄糖更有利于日中性草莓壮苗生长。在本发明中，所述IBA可以促进生根，低浓度IBA可以达到最佳生根效果。

本发明还提供了一种基于上述技术方案所述培养基的日中性草莓快速繁殖方法，包括以下步骤：

1)选择日中性草莓叶片或冠茎基部的隐芽作为外植体；

2)将步骤1)得到的外植体依次进行乙醇灭菌和次氯酸钠灭菌，得到灭菌外植体；

3)将所述步骤2)得到的灭菌外植体置于芽诱导培养基中进行芽诱导培养，得到草莓幼芽；

4)当所述草莓幼芽长至0.3～0.5cm时，将步骤3)得到的草莓幼芽置于芽伸长培养基中进行幼苗培养，得到伸长的幼苗；

5)当幼苗长至为1～3cm时，将步骤4)得到的伸长的幼苗芽置于增殖培养基中进行增殖培养，得到草莓扩繁幼苗；

6)步骤5)得到的草莓扩繁幼苗长至3～5cm时，将所述草莓扩繁幼苗在生根培养基中进行生根培养，得到扩繁生根的草莓幼苗；

7)待不定根长至2.0cm以上时，将步骤6)得到的扩繁生根的草莓幼苗进行炼苗和移栽。

图1为日中性草莓快速繁殖过程示意图，其中图1-1为日中性草莓外植体培养示意图(叶片或冠茎基部的隐芽)；图1-2为愈伤诱导培养示意图；图1-3为芽诱导培养示意图；图1-4为幼芽长至0.3～0.5cm，放至芽伸长培养基培养示意图；图1-5为幼芽长至1～3cm，放至增殖培养基中培养示意图；图1-6为幼芽长至3～5cm，放至生根培养基中培养示意图；图1-7为根长至1-2cm示意图；图1-8为扩繁生根的草莓幼苗移栽示意图。

本发明选择日中性草莓叶片或冠茎基部的隐芽作为外植体。在本发明中，优选选取生长健壮、颜色鲜绿、无病虫害的日中性草莓作为原材料。本发明以日中性草莓的叶片或冠茎基部的隐芽作为外植体，本发明采摘得到外植体后，优选对外植体进行预处理，所述预处理包括以下步骤：将外植体在碱性洗涤剂中浸泡20～40min，用水冲洗5～6次，更优选为在碱性洗涤剂中浸泡30min。本发明对所述碱性洗涤剂的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的碱性洗涤剂的常规市售产品即可，如洗衣粉。在本发明中，优选选取蒸馏水对外植体进行冲洗。本发明外植体的处理优选在无菌环境下进行。本发明对日中性草莓材料的来源没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的常规市售日中性草莓材料即可。

得到外植体后，本发明将外植体依次进行乙醇灭菌和次氯酸钠灭菌，得到灭菌外植体。在本发明中，所述乙醇的体积浓度优选为70％～75％；所述次氯酸钠的质量浓度优选为0.8％～3％。在本发明中，所述灭菌优选包括以下步骤：将外植体在所述乙醇中浸泡后采用次氯酸钠溶液进行表面消毒；所述浸泡的时间优选为10～20s；所述表面消毒的时间优选为10～15min。在本发明的实施例中，所述消毒可具体为：用70％乙醇浸泡10～20s，再用0.8％～3％次氯酸钠进行表面消毒10～15min。在本发明中，乙醇浸泡后优选用水清洗4～6次，次氯酸钠处理后优选用水清洗4～6次。

得到灭菌后的外植体后，本发明将灭菌外植体置于芽诱导培养基中进行芽诱导培养，得到草莓幼芽。

在本发明中，当选取冠茎基部的隐芽作为外植体时，本发明优选选取长为0.1～0.3cm的隐芽直接进行芽诱导培养，培养条件优选为无菌环境，培养温度为24±2℃，光照强度为1500～2000Lx，每日光照时间14h。

当选取叶片作为外植体时，芽诱导培养前优选包括愈伤诱导培养过程，所述愈伤诱导培养为暗培养。在本发明中，所述愈伤诱导培养用愈伤诱导培养基包括B5固体培养基、2.8～3.5mg/L的BA和0.2～0.4mg/L的IBA和质量浓度为2～3.5％的蔗糖，更优选包括3.4mg/L的BA、0.3mg/L的IBA和质量浓度为3％的蔗糖，pH 5.8～6.0。在本发明中，选取叶片作为外植体时，将叶片沿叶脉处纵向倾斜30～60°，更优选为45°角斜切成块，块10～20mm长,7～10mm宽。本发明优选将叶片进行2周的暗培养后再进行芽诱导培养。在本发明中，所述芽诱导培养条件为无菌环境，培养温度为24±2℃，光照强度为1500～2000Lx，每日光照时间14h。

当由所述隐芽或叶片生长出的草莓幼芽长至0.3～0.5cm时，将草莓幼芽置于芽伸长培养基中进行幼苗培养，得到伸长的幼苗。在本发明中，芽伸长培养的条件为无菌环境，培养温度为24±2℃，光照强度为1500～2000Lx，每日光照时间14h。

当幼苗长至为1～3cm时，将步伸长的幼苗芽置于增殖培养基中进行增殖培养，得到草莓扩繁幼苗。在本发明中，所述增殖培养的条件为无菌环境，培养温度为24±2℃，光照强度为1500～2000Lx，每日光照时间14h。本发明所述增殖过程中，优选每隔20～25d将增殖的幼苗重新转接到新鲜相同培养基上继代一次，进行植株的扩繁。

得到的草莓扩繁幼苗长至3～5cm时，将所述草莓扩繁幼苗在生根培养基中进行生根培养，得到扩繁生根的草莓幼苗。在本发明中，所述生根的培养条件为无菌环境，培养温度为24±2℃，光照强度为1500～2000Lx，每日光照时间14h。

待不定根长至2.0cm以上时，将扩繁生根的草莓幼苗进行炼苗和移栽。在本发明中，所述炼苗的时间为3～10天，更优选为4～7天。在本发明中，具体的，将生根的组培苗在室温下中经过1～3天的半开培养瓶盖炼苗和2～7天的全开培养瓶盖炼苗。

炼苗完成后，本发明优选将炼苗根部清水洗净后移栽到基质中。所述移栽用基质包括质量比为(2～4):1:1的泥炭、珍珠岩和蛭石，基质的湿度为85～95％。在本发明中，所述基质保水性强、透气性好，利于根系的发生。在本发明中，所述基质的湿度优选为90％。在本发明中，移栽初期的10～15天，优选覆盖薄膜，保持空气相对湿度保持在90％以上。

下面结合具体实施例对本发明所述的一种日中性草莓快速繁殖方法做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。

实施例1

1)选择生长健壮、颜色鲜绿、无病虫害的日中性草莓叶片，用碱性洗涤剂浸泡30min，再在自来水下流水冲洗1h，用蒸馏水反复冲洗4～5次，置于无菌操作台；

2)在无菌操作台上首先用75％乙醇浸泡10～20s，用无菌水冲洗4～6次，再用0.8％～3％次氯酸钠进行表面消毒10～15min，无菌水冲洗4～6次，放入无菌培养皿中切割，取叶片沿叶脉处纵向倾斜45℃角斜切下去，切块10～20mm长,7～10mm宽，在无菌滤纸上将水吸干，待用；

3)将切割后的叶片在愈伤诱导培养基B5固体培养基+BA3.4mg/L+IBA 0.3mg/L+蔗糖浓度为3％，pH 5.8～6.0上进行暗培养，2周后接入芽诱导培养基，于光照培养室内静置培养，待幼芽长至0.3～0.5cm进行增殖培养；所述的芽诱导培养基以MS固体培养基为基准，包括BA3.4mg/L、IBA 0.3mg/L和质量浓度为3％的蔗糖，pH 5.8～6.0；

4)将长0.3～0.5cm的幼芽接入伸长培养基中，置于光照培养箱中静置，进行芽伸长培养，伸长培养基以MS固体培养基为基准，包括BA 1.7mg/L、IBA0.15mg/L和质量浓度为3％的蔗糖，pH 5.8～6.0；

5)幼芽长至1.0～3cm时，进行增殖培养：将长1.0～3cm的幼芽接入增殖培养基中，置于光照培养箱中静置，进行增殖培养；所述的增殖培养基以MS固体培养基为基准，包括BA0.75mg/L和质量浓度为3.0％的蔗糖，每隔20～25d继代一次，形成的幼芽，转入增殖培养基，在与此段步骤相同培养条件下继续进行增殖培养，扩繁植株；

6)幼芽长至3～5cm将幼芽接入生根培养基中进行生根，置于光照培养箱中静置培养；所述的生根培养基以1/2MS固体培养基为基准，包括IBA0.003mg/L和质量浓度为的1.0％葡萄糖；

7)待不定根长至2.0cm以上时，打开瓶盖，室温下炼苗1～2周后，取出试管苗，洗净其根部培养基，移栽到配制好的基质里(泥炭：珍珠岩：蛭石＝4:1:1)，保持好湿度90％左右，适当遮阴，保持通风，增加光照；所述的炼苗为先半开培养瓶盖再全开培养瓶盖炼苗，静置在室温下即可；

步骤3)～6)的培养条件均为无菌环境，培养温度为24±2℃，光照强度为1500～2000Lx，每日光照14h。

实施例2

1)外植体选择与预处理：选择生长健壮、颜色鲜绿、无病虫害的日中性草莓冠茎基部的隐芽，用碱性洗涤剂浸泡30min，再在自来水下流水冲洗1h，用蒸馏水反复冲洗4～5次，置于无菌操作台；

2)在无菌操作台上首先用70％乙醇浸泡10～20s，用无菌水冲洗4～6次，再用0.8％～3％次氯酸钠进行表面消毒10～15min，无菌水冲洗4～6次；

3)剥取灭菌后冠径中的隐芽芽尖，约0.1～0.3cm，接入芽诱导培养基，于光照培养室内静置培养，待幼芽长至0.3～0.5cm进行增殖培养；所述的芽诱导培养基以MS固体培养基为基准，包括BA 3.4mg/L、IBA0.3mg/L和质量浓度为3％的蔗糖，pH 5.8～6.0；

4)将长0.3～0.5cm的幼芽接入伸长培养基中，置于光照培养箱中静置，进行芽伸长培养，伸长培养基以MS固体培养基为基准，包括BA 1.7mg/L、IBA0.15mg/L和质量浓度为3％的蔗糖，pH 5.8-6.0；

5)幼芽长至1.0～3cm时，增殖培养：将长1.0～3cm的幼芽接入增殖培养基中，置于光照培养箱中静置，进行增殖培养；所述的增殖培养基以MS固体培养基为基准，包括BA0.75mg/L和质量浓度为3.0％的蔗糖，每隔20～25d继代一次，形成的幼芽，转入增殖培养基，在此段步骤相同培养条件下继续进行增殖培养，扩繁植株；

6)幼芽长至3～5cm将幼芽接入生根培养基中进行生根，置于光照培养箱中静置培养；所述的生根培养基以1/2MS固体培养基为基准，包括IBA0.003mg/L和质量浓度为1.0％的葡萄糖；

7)待不定根长至2.0cm以上时，打开瓶盖，室温下炼苗1～2周后，取出试管苗，洗净其根部培养基，移栽到配制好的基质里(泥炭：珍珠岩：蛭石＝4:1:1)，保持好湿度90％左右，适当遮阴，保持通风，增加光照；所述的炼苗为先半开培养瓶盖再全开培养瓶盖炼苗，静置在室温下即可；

步骤3)～6)的培养条件均为无菌环境，培养温度为24±2℃，光照强度为1500～2000Lx，每日光照14h。

比较例1

(1)匍匐茎茎尖消毒：从植株上剪取新长出来一季性草莓的匍匐茎，取1.5cm左右的茎尖用流水冲洗1h左右，75％乙醇消毒40s，无菌水冲洗2遍，0.1％升汞消毒7～8分钟，消毒后用无菌水冲洗4～5遍，

(2)茎尖分化的最适培养基：剥取灭菌后生长正常的一季性草莓匍匐茎茎尖，切取茎尖生长点0.3-0.5mm，接入MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，pH6.0，1个月后转入继代增殖培养基中；

(3)草莓继代增殖培养基：将(2)中材料转入MS+6-BA0.5mg/L+NAA 0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L,pH6.0继代增殖培养，每25d继代1次；

(4)草莓生根培养基：选取长势一致的健壮一季性草莓组培苗，接入生根培养基中，接入1/2MS+NAA0.05mg/L生根培养基中；

(5)炼苗与移栽：打开瓶盖在室温下中经过1～3天的半开培养瓶盖炼苗和2～7天的全开培养瓶盖炼苗，取出洗净培养基，移栽到配制好的基质里(泥炭：珍珠岩：蛭石＝4:1:1)，保持好适度90％左右，适当遮阴，保持通风，增加光照，3周后就能看到苗的成活。

一季性草莓的组培快繁培养基与日中性草莓的组培快繁培养基差异如表1所示。

表1日中性与一季性草莓的组培快繁培养基比较

表2日中性与一季性草莓的组培快速繁殖方法比较

	日中性草莓	一季性草莓
			受季节限制	否	否
携带病害的可能性	小	小
			半年内发生数量	几千-几万/叶片(或隐芽)	几千-几万/匍匐茎尖

日中性与一季性草莓的组培快速繁殖方法比较结果如表2所示。结果表明：组培快繁法不受季节限制，一年四季均可进行，由于组培子苗携带病害机率小。对于日中性与一季性草莓的扩繁效果相当，一个叶片或隐芽半年内可获得几千至几万株子苗，而一个匍匐茎尖也可获得几千到几万株子苗。

比较例2

匍匐茎繁殖是一季性草莓普遍采用的繁殖方法，在长日照和适宜温度下抽生匍匐茎，栽培母株时，可用低浓度的赤霉素少量喷洒，增加匍匐茎的发生量；但日中性草莓较难发生匍匐茎，部分日中性草莓品种可在赤霉素作用下抽生一至二株匍匐茎，部分日中性草莓品种仍旧不能发生匍匐茎，此种繁殖方法易受母株及育苗田地病害影响，产生携带病害的子株可能性大；分株法繁殖是另一种繁殖方法，需要至少2年生的母株，发生分株只需要适宜温度，可全年生，但日中性草莓品种分株能力较弱，每个母株可分株出0～2株营养苗，此种繁殖方法易受母株及育苗田地病害影响，产生携带病害的子株外，子株多带有分离伤口，更易感病；本发明的组培快繁法不受季节限制，一年四季均可进行，一个叶片或隐芽半年内可获得几千至几万株苗，同时子苗由于组培携带病害机率小。常规日中性草莓繁殖方法与组培快速繁殖方法比较结果如表3所示。

表3常规日中性草莓繁殖方法与组培快速繁殖方法比较

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种日中性草莓组培快繁培养基，包括：

1)芽诱导培养基，所述芽诱导培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖、2.8～3.5mg/L的BA和0.2～0.4mg/L的IBA；

2)芽伸长培养基，所述芽伸长培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖、1.6～1.8mg/L的BA和0.1～0.2mg/L的IBA；

3)增殖培养基，所述增殖培养基以MS固体培养基为基准，包括质量浓度为2～3.5％的蔗糖和0.65～0.85mg/L的BA；

4)生根培养基，所述生根培养基以1/2MS固体培养基为基准，包括质量浓度为0.5～3％的葡萄糖和0.002～0.005mg/L的IBA。

2.基于权利要求1所述培养基的日中性草莓快速繁殖方法，包括以下步骤：

1)选择日中性草莓叶片或冠茎基部的隐芽作为外植体；

2)将步骤1)得到的外植体依次进行乙醇灭菌和次氯酸钠灭菌，得到灭菌外植体；

3)将所述步骤2)得到的灭菌外植体置于芽诱导培养基中进行芽诱导培养，得到草莓幼芽；

4)当所述草莓幼芽长至0.3～0.5cm时，将步骤3)得到的草莓幼芽置于芽伸长培养基中进行幼苗培养，得到伸长的幼苗；

5)当幼苗长至为1～3cm时，将步骤4)得到的伸长的幼苗芽置于增殖培养基中进行增殖培养，得到草莓扩繁幼苗；

6)步骤5)得到的草莓扩繁幼苗长至3～5cm时，将所述草莓扩繁幼苗在生根培养基中进行生根培养，得到扩繁生根的草莓幼苗；

7)待不定根长至2.0cm以上时，将步骤6)得到的扩繁生根的草莓幼苗进行炼苗和移栽；

所述步骤3)～6)的培养条件独立地为无菌环境，培养温度为24±2℃，光照强度为1500～2000Lx，每日光照时间14h；

所述选取叶片作为外植体时，芽诱导培养前还包括：将灭菌叶片进行愈伤诱导培养，所述愈伤诱导培养为暗培养；

所述愈伤诱导培养用愈伤诱导培养基包括B5固体培养基、2.8～3.5mg/L的BA和0.2～0.4mg/L的IBA和质量浓度为2～3.5％的蔗糖，所述愈伤诱导培养基的pH值为5.8～6.0。

3.根据权利要求2所述的繁殖方法，其特征在于，步骤2)灭菌前还包括：将外植体进行预处理，所述预处理包括以下步骤：将外植体在碱性洗涤剂中浸泡20～40min，用水冲洗5～6次。

4.根据权利要求2所述的繁殖方法，其特征在于，所述步骤2)灭菌包括以下步骤：用体积浓度为70～75％乙醇浸泡10～20s，再用质量浓度为0.8％～3％次氯酸钠进行表面消毒10～15min。

5.根据权利要求2所述的繁殖方法，其特征在于，选取叶片作为外植体时，将叶片沿叶脉处纵向倾斜30～60°角斜切成块，块10～20mm长,7～10mm宽。

6.根据权利要求2所述的繁殖方法，其特征在于，所述步骤5)增殖培养中，继代的间隔时间为20～25d。

7.根据权利要求2所述的繁殖方法，其特征在于，所述移栽用基质包括质量比为(2～4):1:1的泥炭、珍珠岩和蛭石，基质的湿度为85～95％。