CN107389940A - 一种阴道炎多联检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种阴道炎多联检测试剂盒，包括盒体和盒盖，盒体内设有检测卡和样本处理液瓶，检测卡包括卡盖和卡体，卡体内设有阴道加德纳菌检测试纸条、白色念珠菌检测试纸条和阴道毛滴虫检测试纸条，阴道加德纳菌检测试纸条、白色念珠菌检测试纸条及阴道毛滴虫检测试纸条均设有第一样品垫层和经过样品垫处理液处理的第二样品垫层。利用本发明中的试剂盒可分解、过滤阴道分泌物中的干扰物质，提高试剂盒灵敏度。

Description

一种阴道炎多联检测试剂盒及其制备方法
技术领域
本发明涉及体外诊断技术领域，具体涉及一种阴道炎多联检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
阴道感染是临床最常见的妇科感染性疾病，而阴道炎为阴道感染的典型临床症候群之一，且发病率居高不下，通常阴道炎的临床表现和征兆比较相似，如异常阴道分泌物，异味、瘙痒、疼痛以及其他的一些不适。其中，细菌性阴道炎、白色念珠菌性阴道炎及滴虫性阴道炎均为常见阴道感染。
细菌性阴道炎主要是由于阴道正常菌群的生态平衡发生紊乱，优势菌乳酸杆菌减少或消失，阴道加德纳菌、厌氧菌等微生物过度生长而引起的一种常见疾病；白色念珠菌为条件致病菌，在维持阴道菌群的生态平衡及阴道自净过程中起了一定的作用。只有在一定条件下，当阴道内环境发生变化，适宜该菌生长时，白色念珠菌可迅速繁殖引起白色念珠菌性阴道炎；阴道毛滴虫是一种常见于性传递的厌氧性寄生物，当滴虫侵入阴道后，消耗阴道上皮细胞的糖原，阻碍乳糖形成，使阴道pH值在5.0～6.6之间，此时极易合并细菌感染，使分泌物呈脓性。
国内实验室检测阴道炎的主要方法包括:(1)显微镜镜检:简便，但灵敏度低；(2)分离培养:准确度高，但操作复杂，时间过长；(3)免疫学检测:如免疫荧光试验、酶联免疫法；(4)核酸检测法:成本过高。目前，显微镜镜检为临床常用的方法，必要时可做培养和菌种鉴定。免疫荧光试验、酶免疫试验及核酸检测法因需相应仪器设备及操作人员的技术要求而很少使用。此外阴道分泌物成分复杂多样，分泌物中的干扰物质会影响检测，因此针对现有技术存在的问题，提供一种用于检测阴道炎的多联检测试剂盒，同时还建立了该检测试剂盒的制备方法。
发明内容
本发明的目的是：提供一种能同时检测阴道加德纳菌、白色念珠菌和阴道毛滴虫的阴道炎多联检测试剂盒，该试剂盒检测时可分解、过滤阴道分泌物中的干扰物质，大大提高了试剂盒的灵敏度。
为了实现上述发明的目的，本发明的技术方案是：
一种阴道炎多联检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有检测卡和样本处理液瓶；所述检测卡包括卡盖和卡体，所述卡体内设有阴道加德纳菌检测试纸条、白色念珠菌检测试纸条和阴道毛滴虫检测试纸条，所述阴道加德纳菌检测试纸条、所述白色念珠菌检测试纸条及所述阴道毛滴虫检测试纸条均设有第一样品垫层和经过样品垫预处理液处理的第二样品垫层。
作为一种优选的技术方案，所述样本处理液瓶内的处理溶液为牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸、叠氮钠和15-25mM的磷酸盐缓冲液配制而成的pH7.2-7.5处理溶液，且每100mL处理溶液中包含0.5～1％w/v的牛血清白蛋白10～15mL、1.0～2.0％w/v的乙二胺四乙酸3～5mL和0.03～0.05％w/v的叠氮钠1～3mL。
作为一种优选的技术方案，所述样品垫预处理液为聚乙烯吡咯烷酮、酪蛋白、海藻糖、曲拉通X-100和15-25mM的Tris缓冲液配制的pH8-8.2的预处理液，且每1000mL预处理液中包含10～20g的聚乙烯吡咯烷酮、0.5～1％w/v的酪蛋白40～50mL、5～8％w/v的海藻糖10～15mL和0.3～0.5％w/v的曲拉通X-1001～2mL。
作为一种改进的技术方案，所述阴道加德纳菌检测试纸条、所述白色念珠菌检测试纸条及所述阴道毛滴虫检测试纸条的胶体金层分别涂布有抗阴道加德纳菌单克隆抗体层、抗白色念珠菌单克隆抗体层及抗阴道毛滴虫单克隆抗体层。
作为一种改进的技术方案，所述阴道加德纳菌检测试纸条、所述白色念珠菌检测试纸条及所述阴道毛滴虫检测试纸条的硝酸纤维素膜上均设有检测线和质控线，相应检测试纸条的硝酸纤维素膜上的检测线分别为涂布有抗阴道加德纳菌单克隆抗体层、抗白色念珠菌单克隆抗体层及抗阴道毛滴虫单克隆抗体的检测线，相应检测试纸条的硝酸纤维素膜上的质控线为分别涂布有羊抗鼠IgG抗体层的质控线。
作为一种改进的技术方案，所述卡体的内部设有阴道加德纳菌检测试纸条限位板、白色念珠菌检测试纸条限位板和阴道毛滴虫检测试纸条限位板，所述限位板上设有试纸条放置标识，所述限位板的两端分别设有固定挡板，所述固定挡板分别位于所述限位板两侧。
作为一种改进的技术方案，所述卡盖与所述阴道加德纳菌检测试纸条、所述白色念珠菌检测试纸条及所述阴道毛滴虫检测试纸条相对应的区域分别设有样本加样孔、观测孔和安装标识孔。
本发明的另一个目的是：提供一种阴道炎多联检测试剂盒的制备方法。
为了实现上述发明的目的，本发明的技术方案是：
一种阴道炎多联检测试剂盒的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：
(1)样本处理液的配制
将0.5～1％w/v的牛血清白蛋白10～15mL、1.0～2.0％w/v的乙二胺四乙酸3～5mL和0.03～0.05％w/v的叠氮钠1～3mL，用15-25mM磷酸盐缓冲液定容至100mL，调pH值为7.2～7.5，分别装入试剂瓶内，得到样品处理液；
(2)样品垫预处理液的配制
将10～20g的聚乙烯吡咯烷酮，0.5～1％w/v的酪蛋白40～50mL，5～8％w/v的海藻糖10～15mL和0.3～0.5％w/v的曲拉通X-1001～2mL用15-25mMTris定容至1L，调pH值为8.0～8.2；
(3)样品垫预处理
将裁切好的玻璃纤维至浸泡于所述步骤(2)的样品垫预处理液中，静置5～8分钟取出，经过干燥处理后封存备用；
(4)胶体金垫的制备
4.1抗阴道加德纳菌单克隆抗体胶体金垫的制备
将100mL制得的胶体金，调节pH至8.0～8.5，加入抗阴道加德纳菌单克隆抗体，搅拌10～15min后，加入5～8％w/v的BSA 5～8mL，离心复溶后固相于玻璃纤维，干燥备用；
4.2抗白色念珠菌单克隆抗体胶体金垫的制备
将100mL制得的胶体金，调节pH至8.0～8.5，加入抗白色念珠菌单克隆抗体，搅拌10～15min后，加入5～8％w/v的BSA 5～8mL，离心复溶后固相于玻璃纤维，干燥备用；
4.3抗阴道毛滴虫单克隆抗体胶体金垫的制备
将100mL制得的胶体金，调节pH至8.0～8.5，加入抗阴道毛滴虫单克隆抗体，搅拌10～15min后，加入5～8％w/v的BSA 5～8mL，离心复溶后固相于玻璃纤维，干燥备用；
(5)包被硝酸纤维素膜
5.1分别包被抗阴道加德纳菌单克隆抗体、抗白色念珠菌单克隆抗体和抗阴道毛滴虫单克隆抗体
用pH8.0～8.2的PBS缓冲液分别将抗阴道加德纳菌单克隆抗体稀释至0.2～0.3mg/mL，抗白色念珠菌单克隆抗体稀释至0.4～0.5mg/mL，抗阴道毛滴虫单克隆抗体稀释至0.3～0.4mg/mL，并分别喷于相应的硝酸纤维素膜上，形成抗阴道加德纳菌单克隆抗体检测线、抗白色念珠菌单克隆抗体检测线和抗阴道毛滴虫单克隆抗体检测线；
5.4包被羊抗鼠IgG抗体
用pH8.0～8.2的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.4～1.6mg/mL，并分别喷于所述步骤5.1相应的硝酸纤维素膜上，形成羊抗鼠IgG抗体质控线；
5.5将上述步骤5.4制得的硝酸纤维素膜置37℃烘箱中干燥1.5～2小时；
(6)检测卡安装好后与步骤(1)得到的样本处理液和步骤(6)得到的检测卡分别置于盒体内，得到阴道炎多联检测试剂盒。
本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有以下优点：
1、本发明提供的样本处理液，在由15-25mM PBS提供缓冲pH的基础上，加入EDTA和BSA，前者可破坏细胞间的粘连，后者可保护目的蛋白活性，从而更快地分离出目标微生物；
2、本发明提供的样品垫预处理液，在Tris体系基础上加入表面活性剂TritonX-100和大分子物质PVP，前者能溶解脂质，有效过滤阴道分泌物的干扰成分，后者可增加样品垫亲水性，同时其水溶液有悬浮分散作用，可用于保护样品中的微生物抗原；
3、本发明提供的一种阴道炎多联检测试剂盒，其检测试纸条均设有第一样品垫层和第二样品垫层，在实际应用中一方面利用第一样品垫层可降低样本迁移速度，使检测样本经过第二样品垫时能充分过滤阴道分泌物中的干扰物质，同时样本处理液可分离目标微生物，相互配合使用，大大提高了试剂灵敏度，本试剂与金标准“分离培养鉴定”的符合率可达90％；
4、本发明所采用的技术方案，减少了许多繁琐的程序，方便、快捷、直观，不需特殊仪器也不需专业培训，按说明书即可完成操作，全过程只需30分钟，降低了使用成本，适合医院等基层单位。
附图说明
图1为本发明中试剂盒的结构示意图；
图2为本发明中检测卡的结构示意图；
图3为图2中卡体的俯视结构示意图；
图4为图3中装有检测试纸条的结构示意图；
图5为图2中阴道加德纳菌检测试纸条的俯视结构示意图；
图6为图2中阴道加德纳菌检测试纸条的侧视结构示意图；
其中，1-盒体，2-盒盖，3-检测卡，30-卡盖，301-样本加样孔，302-观测孔，303-安装标识孔，31-卡体，310-限位板，3100-试纸条放置标识，311-固定挡板，312-卡槽，4-样本处理液瓶，5-阴道加德纳菌检测试纸条，50-第一样品垫层，51-第二样品垫层，52-胶体金层，53-硝酸纤维素膜，531-检测线，532-质控线，54-吸水层，540-安装标识，6-白色念珠菌检测试纸条，7-阴道毛滴虫检测试纸条。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
一种阴道炎多联检测试剂盒，如图1-图6所示，包括盒体1和盒盖2，盒体1内设有检测卡3和样本处理液瓶4，检测卡3包括卡盖30和卡体31，卡体31内设有放置阴道加德纳菌检测试纸条5、白色念珠菌检测试纸条6和阴道毛滴虫检测试纸条7的限位板310，限位板310上设有试纸条放置标识(靠近限位板中间的一侧设有的方形孔)，限位板310的两端分别设有固定挡板311，三种检测试纸条分别设有相互搭接连接的第一样品垫层50和经过样品垫预处理液处理的第二样品垫层51、胶体金层52、硝酸纤维素膜53和吸水层54，吸水层54的上方设有安装标识540，三种检测试纸条的胶体金层52分别与检测试纸条相对应涂布有抗阴道加德纳菌单克隆抗体层、抗白色念珠菌单克隆抗体层及抗阴道毛滴虫单克隆抗体层。
如图5和图6所示，其中三种检测试纸条的硝酸纤维素膜53上均设有检测线531和质控线532，阴道加德纳菌检测试纸条5的硝酸纤维素膜上的检测线531为涂布有抗阴道加德纳菌单克隆抗体层的检测线，白色念珠菌检测试纸条6的硝酸纤维素膜上的检测线为涂布有抗白色念珠菌单克隆抗体层的检测线，阴道毛滴虫检测试纸条7的硝酸纤维素膜上的检测线为涂布有抗阴道毛滴虫单克隆抗体的检测线，相应检测试纸条的硝酸纤维素膜上的质控线532分别为涂布有羊抗鼠IgG抗体层的质控线。
其中卡盖30与阴道加德纳菌检测试纸条5、白色念珠菌检测试纸条6和阴道毛滴虫检测试纸条7相对应的区域均设有样本加样孔301、观测孔302和安装标示孔303，检测试纸条上的第一样品垫层50和第二样品垫51与卡盖30上的样本加样孔301相对应；检测试纸条上的硝酸纤维素膜53与卡盖30上的观测孔302相对应；检测试纸条上的安装标识540与卡盖30上的标识孔303相对应。
其中样本处理液瓶内的处理溶液为牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸、叠氮钠和15-25mM的磷酸盐缓冲液配制而成的pH7.2-7.5处理溶液，且每100mL处理溶液中包含0.5～1％w/v的牛血清白蛋白10～15mL、1.0～2.0％w/v的乙二胺四乙酸3～5mL和0.03～0.05％w/v的叠氮钠1～3mL。
其中样品垫预处理液为聚乙烯吡咯烷酮、酪蛋白、海藻糖、曲拉通X-100和15-25mM的Tris缓冲液配制的pH8-8.2的预处理液，且每1000mL预处理液中包含10～20g的聚乙烯吡咯烷酮、0.5～1％w/v的酪蛋白40～50mL、5～8％w/v的海藻糖10～15mL和0.3～0.5％w/v的曲拉通X-1001～2mL。
检测卡的使用方法：
(1)检测
a、根据以下方法处理样本：
向样本处理管中竖直滴入样本处理液20滴，立即放入已取样拭子，挤压样本处理管，并转动拭子15次，然后将拭子在样本处理管中静置2分钟后，沿管壁挤压拭子后取出拭子弃之。盖上样本处理管的滴头。
b、从铝箔袋中取出检测卡，置于水平桌面。
c、向检测卡样本加样孔中依次滴入3滴处理过的样本液。
d、在15分钟至30分钟内判读结果。
(2)结果判断
a、阴性：仅质控区(C)出现一条红色条带，在测试区(T)内无红色条带出现。阴性结果表明：标本中不含待测微生物，或是含量低于可检测范围；
b、阳性：两条条带出现。一条红色条带位于测试区(T)内，另一条红色条带位于质控区(C)。阳性结果表明：标本中含有待测微生物；
c、无效：质控区(C)未出现红色条带，表明操作过程不正确或检测卡已损坏。
实施例2
一种阴道炎多联检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
(1)样本处理液的配制
将0.5～1％w/v的BSA 10～15mL、1.0～2.0％w/v的EDTA 3～5mL和0.03～0.05％w/v的叠氮钠1～3mL，用20mM磷酸盐缓冲液定容至100mL，调pH值为7.2～7.5，分别装入试剂瓶内，得到样品处理液；
(2)样品垫预处理液的配制
将10～20g的PVP，0.5～1％w/v的酪蛋白40～50mL，5～8％w/v的海藻糖10～15mL和0.3～0.5％w/v的Triton X-1001～2mL用20mMTris定容至1L，调节pH值为8.0～8.2；
(3)样品垫预处理
将玻璃纤维裁切至25cm×30cm，浸泡于所述步骤(2)的样品垫预处理液中，完全浸入后静置5～8分钟取出，置于干燥间干燥6小时，放入干燥剂封存备用；
(4)胶体金垫的制备
4.1抗阴道加德纳菌单克隆抗体胶体金垫的制备
将100mL制得的胶体金，调节pH至8.0～8.5，加入抗阴道加德纳菌单克隆抗体，搅拌10～15min后，加入5～8％w/v的BSA 5-8mL，离心复溶后固相于玻璃纤维，干燥备用；
4.2抗白色念珠菌单克隆抗体胶体金垫的制备
将100mL制得的胶体金，调节pH至8.0～8.5，加入抗白色念珠菌单克隆抗体，搅拌10～15min后，加入5～8％w/v的BSA 5～8mL，离心复溶后固相于玻璃纤维，干燥备用；
4.3抗阴道毛滴虫单克隆抗体胶体金垫的制备
将100mL制得的胶体金，调节pH至8.0～8.5，加入抗阴道毛滴虫单克隆抗体，搅拌10～15min后，加入5～8％w/v的BSA 5～8mL，离心复溶后固相于玻璃纤维，干燥备用；
(5)包被硝酸纤维素膜
5.1包被抗阴道加德纳菌单克隆抗体
用pH8.0～8.2的PBS缓冲液将抗阴道加德纳菌单克隆抗体稀释至0.2～0.3mg/mL，喷于硝酸纤维素膜上，形成抗阴道加德纳菌单克隆抗体检测线；
5.2包被抗白色念珠菌单克隆抗体
用pH8.0～8.2的PBS缓冲液将抗白色念珠菌单克隆抗体稀释至0.4～0.5mg/mL，喷于硝酸纤维素膜上，形成抗白色念珠菌单克隆抗体检测线；
5.3包被抗阴道毛滴虫单克隆抗体
用pH8.0～8.2的PBS缓冲液将抗阴道毛滴虫单克隆抗体稀释至0.3～0.4mg/mL，喷于硝酸纤维素膜上，形成抗阴道毛滴虫单克隆抗体检测线；
5.4包被羊抗鼠IgG抗体
用pH8.0～8.2的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.4～1.6mg/mL，分别喷于上述步骤5.1、5.2、5.3制得的硝酸纤维素膜上，形成羊抗鼠IgG抗体质控线；
5.5将上述步骤5.4制得的硝酸纤维素膜置37℃烘箱中干燥1.5～2小时；
(6)检测卡的安装
6.1在PVC板中间位置粘贴硝酸纤维素膜，在硝酸纤维素膜的一侧粘贴吸水纸，另一侧依次粘贴胶体金垫、第二样品垫、第一样品垫；
6.2将上述步骤6.1得到的产品压平整后，切成4.0mm宽的试纸条；
6.3取卡盖和卡体，将上述制备的试纸条置于卡体的限位板上，将卡盖和卡体扣合，得到阴道炎多联检测卡；
(7)将步骤(1)得到的样本处理液和步骤(6)得到的检测卡分别置于盒体内，得到阴道炎多联检测试剂盒。
实施例3
通过与金标准“分离培养法”对比，评价阴道炎多联检测试剂盒的临床有效性。
表1阴道加德纳菌的临床性能指标
灵敏度＝100/(100+9)×100％＝91.7％
特异性＝295/(16+295)×100％＝94.9％
功效率＝(100+295)/(100+9+16+295)×100％＝94.0％
表2白色念珠菌的临床性能指标
灵敏度＝63/(63+5)×100％＝92.6％
特异性＝237/(12+237)×100％＝95.2％
功效率＝(63+237)/(63+5+12+237)×100％＝94.6％
表3阴道毛滴虫的临床性能指标
灵敏度＝34/(34+3)×100％＝91.9％
特异性＝158/(10+158)×100％＝94.0％
功效率＝(34+158)/(34+3+10+158)×100％＝93.7％
本专利不局限于上述具体的实施方式，本领域的普通技术人员从上述构思出发，不经过创造性的劳动，所作出的种种变换，均落在本专利的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种阴道炎多联检测试剂盒，包括盒体，所述盒体内设有检测卡和样本处理液瓶；所述检测卡包括卡盖和卡体，其特征在于：所述卡体内设有阴道加德纳菌检测试纸条、白色念珠菌检测试纸条和阴道毛滴虫检测试纸条，所述阴道加德纳菌检测试纸条、所述白色念珠菌检测试纸条及所述阴道毛滴虫检测试纸条均设有第一样品垫层和经过样品垫预处理液处理的第二样品垫层。
2.根据权利要求1所述的一种阴道炎多联检测试剂盒，其特征在于:所述样本处理液瓶内的处理溶液为牛血清白蛋白、乙二胺四乙酸、叠氮钠和15-25mM的磷酸盐缓冲液配制而成的pH7.2-7.5处理溶液，且每100mL处理溶液中包含0.5～1％w/v的牛血清白蛋白10～15mL、1.0～2.0％w/v的乙二胺四乙酸3～5mL和0.03～0.05％w/v的叠氮钠1～3mL。
3.根据权利要求1所述的一种阴道炎多联检测试剂盒，其特征在于:所述样品垫预处理液为聚乙烯吡咯烷酮、酪蛋白、海藻糖、曲拉通X-100和15-25mM的Tris缓冲液配制的pH8-8.2的预处理液，且每1000mL预处理液中包含10～20g的聚乙烯吡咯烷酮、0.5～1％w/v的酪蛋白40～50mL、5～8％w/v的海藻糖10～15mL和0.3～0.5％w/v的曲拉通X-1001～2mL。
4.根据权利要求1所述的一种阴道炎多联检测试剂盒，其特征在于:所述阴道加德纳菌检测试纸条、所述白色念珠菌检测试纸条及所述阴道毛滴虫检测试纸条的胶体金层分别涂布有抗阴道加德纳菌单克隆抗体层、抗白色念珠菌单克隆抗体层及抗阴道毛滴虫单克隆抗体层。
5.根据权利要求1所述的一种阴道炎多联检测试剂盒，其特征在于:所述阴道加德纳菌检测试纸条、所述白色念珠菌检测试纸条及所述阴道毛滴虫检测试纸条的硝酸纤维素膜上均设有检测线和质控线，相应检测试纸条的硝酸纤维素膜上的检测线分别为涂布有抗阴道加德纳菌单克隆抗体层、抗白色念珠菌单克隆抗体层及抗阴道毛滴虫单克隆抗体的检测线，相应检测试纸条的硝酸纤维素膜上的质控线为分别涂布有羊抗鼠IgG抗体层的质控线。
6.根据权利要求1所述的一种阴道炎多联检测试剂盒，其特征在于:所述卡体的内部设有阴道加德纳菌检测试纸条限位板、白色念珠菌检测试纸条限位板和阴道毛滴虫检测试纸条限位板，所述限位板上设有试纸条放置标识，所述限位板的两端分别设有固定挡板，所述固定挡板分别位于所述限位板两侧。
7.根据权利要求1所述的一种阴道炎多联检测试剂盒，其特征在于:所述卡盖与所述阴道加德纳菌检测试纸条、所述白色念珠菌检测试纸条及所述阴道毛滴虫检测试纸条相对应的区域分别设有样本加样孔、观测孔和安装标识孔。
8.一种阴道炎多联检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述制备方法包括以下步骤：
(1)样本处理液的配制
将0.5～1％w/v的牛血清白蛋白10～15mL、1.0～2.0％w/v的乙二胺四乙酸3～5mL和0.03～0.05％w/v的叠氮钠1～3mL，用15-25mM磷酸盐缓冲液定容至100mL，调pH值为7.2～7.5，分别装入试剂瓶内，得到样品处理液；
(2)样品垫预处理液的配制
将10～20g的聚乙烯吡咯烷酮，0.5～1％w/v的酪蛋白40～50mL，5～8％w/v的海藻糖10～15mL和0.3～0.5％w/v的曲拉通X-1001～2mL用15-25mMTris定容至1L，调pH值为8.0～8.2；
(3)样品垫预处理
将裁切好的玻璃纤维浸泡于所述步骤(2)的样品垫预处理液中，静置5～8分钟取出，经过干燥处理后封存备用；
(4)胶体金垫的制备
4.1抗阴道加德纳菌单克隆抗体胶体金垫的制备
将100mL制得的胶体金，调节pH至8.0～8.5，加入抗阴道加德纳菌单克隆抗体，搅拌10～15min后，加入5～8％w/v的BSA 5～8mL，离心复溶后固相于玻璃纤维，干燥备用；
4.2抗白色念珠菌单克隆抗体胶体金垫的制备
将100mL制得的胶体金，调节pH至8.0～8.5，加入抗白色念珠菌单克隆抗体，搅拌10～15min后，加入5～8％w/v的BSA 5～8mL，离心复溶后固相于玻璃纤维，干燥备用；
4.3抗阴道毛滴虫单克隆抗体胶体金垫的制备
将100mL制得的胶体金，调节pH至8.0～8.5，加入抗阴道毛滴虫单克隆抗体，搅拌10～15min后，加入5～8％w/v的BSA 5～8mL，离心复溶后固相于玻璃纤维，干燥备用；
(5)包被硝酸纤维素膜
5.1分别包被抗阴道加德纳菌单克隆抗体、抗白色念珠菌单克隆抗体和抗阴道毛滴虫单克隆抗体
用pH8.0～8.2的PBS缓冲液分别将抗阴道加德纳菌单克隆抗体稀释至0.2～0.3mg/mL，抗白色念珠菌单克隆抗体稀释至0.4～0.5mg/mL，抗阴道毛滴虫单克隆抗体稀释至0.3～0.4mg/mL，并分别喷于相应的硝酸纤维素膜上，形成抗阴道加德纳菌单克隆抗体检测线、抗白色念珠菌单克隆抗体检测线和抗阴道毛滴虫单克隆抗体检测线；
5.4包被羊抗鼠IgG抗体
用pH8.0～8.2的PBS缓冲液将羊抗鼠IgG抗体稀释至1.4～1.6mg/mL，分别喷于所述步骤5.1相应的硝酸纤维素膜上，形成羊抗鼠IgG抗体质控线；
5.5将上述步骤5.4制得的硝酸纤维素膜置37℃烘箱中干燥1.5～2小时；
(6)检测卡安装好，将所述步骤(1)中样本处理液和安装好的检测卡分别置于盒体内，得到阴道炎多联检测试剂盒。
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109085353A (zh) * 2018-06-13 2018-12-25 比杭生物科技（杭州）有限公司 一种白色念珠菌胶体金检测卡及其应用
CN110244049A (zh) * 2019-07-31 2019-09-17 河南美凯生物科技有限公司 致病性念珠菌检测和鉴定方法
CN110687288A (zh) * 2019-04-28 2020-01-14 中山大学肿瘤防治中心 一种快速检测肝病的多联检试剂盒及制备方法
CN111208295A (zh) * 2020-02-29 2020-05-29 济南德亨医学科技有限公司 一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法
CN111220805A (zh) * 2020-02-13 2020-06-02 中南大学湘雅三医院 一种细菌性阴道炎多指标快速检测复合试纸及其制作方法
CN113514637A (zh) * 2021-04-20 2021-10-19 江苏美克医学技术有限公司 用于检测阴道加德纳菌荧光免疫层析试纸条、试剂盒及应用
CN113607943A (zh) * 2021-08-20 2021-11-05 浙江嘉孚生物科技有限公司 一种同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸及其制备方法
CN114324861A (zh) * 2021-12-08 2022-04-12 北京泰格科信生物科技有限公司 念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒及其制备方法

Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2326367A1 (en) * 2000-11-20 2002-05-20 Marisol Gonzalez Perez Rapid diagnosis of microorganisms associated to vaginal infections
CN1355320A (zh) * 2000-11-24 2002-06-26 国家动植物保健中心 与阴道感染有关的微生物的快速诊断
KR100783768B1 (ko) * 2007-03-21 2007-12-07 에이취디알 주식회사 질편모충 및 클라미디아 동시진단키트
CN102192983A (zh) * 2011-05-19 2011-09-21 博阳生物科技（上海）有限公司 时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条及其制备方法和应用
CN102253206A (zh) * 2011-06-23 2011-11-23 泰普生物科学（中国）有限公司 一种阴道炎联合检测试剂盒
CN102628868A (zh) * 2011-12-30 2012-08-08 北京九强生物技术股份有限公司 检测非对称二甲基精氨酸含量的胶乳增强免疫比浊法试剂盒
CN102778559A (zh) * 2012-08-14 2012-11-14 广州万孚生物技术股份有限公司 胶体金免疫层析检测试剂盒及其制备方法
CN104099300A (zh) * 2013-11-22 2014-10-15 沈阳农业大学 可分泌抗牛免疫球蛋白IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用
CN104122395A (zh) * 2013-04-28 2014-10-29 北京协和洛克生物技术有限责任公司 一种检测样本中髓过氧化物酶浓度的试剂盒及其制备方法
CN204714784U (zh) * 2015-05-04 2015-10-21 杭州协合医疗用品有限公司 一种阴道炎联合测定试剂盒
CN104991060A (zh) * 2015-06-01 2015-10-21 上海凯创生物技术有限公司 一种白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒
CN105548565A (zh) * 2015-12-30 2016-05-04 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒及其制备和应用
CN105785018A (zh) * 2016-05-16 2016-07-20 开封市疾病预防控制中心 一种手足口病病原胶体金诊断检测试纸盒的制备方法
CN106680508A (zh) * 2015-11-06 2017-05-17 北京中生金域诊断技术股份有限公司 定量联合检测pa与crp的方法、试剂盒及其制备方法和应用

Patent Citations (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2326367A1 (en) * 2000-11-20 2002-05-20 Marisol Gonzalez Perez Rapid diagnosis of microorganisms associated to vaginal infections
CN1355320A (zh) * 2000-11-24 2002-06-26 国家动植物保健中心 与阴道感染有关的微生物的快速诊断
KR100783768B1 (ko) * 2007-03-21 2007-12-07 에이취디알 주식회사 질편모충 및 클라미디아 동시진단키트
CN102192983A (zh) * 2011-05-19 2011-09-21 博阳生物科技（上海）有限公司 时间分辨荧光免疫层析定量检测试纸条及其制备方法和应用
CN102253206A (zh) * 2011-06-23 2011-11-23 泰普生物科学（中国）有限公司 一种阴道炎联合检测试剂盒
CN102628868A (zh) * 2011-12-30 2012-08-08 北京九强生物技术股份有限公司 检测非对称二甲基精氨酸含量的胶乳增强免疫比浊法试剂盒
CN102778559A (zh) * 2012-08-14 2012-11-14 广州万孚生物技术股份有限公司 胶体金免疫层析检测试剂盒及其制备方法
CN104122395A (zh) * 2013-04-28 2014-10-29 北京协和洛克生物技术有限责任公司 一种检测样本中髓过氧化物酶浓度的试剂盒及其制备方法
CN104099300A (zh) * 2013-11-22 2014-10-15 沈阳农业大学 可分泌抗牛免疫球蛋白IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用
CN204714784U (zh) * 2015-05-04 2015-10-21 杭州协合医疗用品有限公司 一种阴道炎联合测定试剂盒
CN104991060A (zh) * 2015-06-01 2015-10-21 上海凯创生物技术有限公司 一种白色念珠菌抗原胶体金检测试剂盒
CN106680508A (zh) * 2015-11-06 2017-05-17 北京中生金域诊断技术股份有限公司 定量联合检测pa与crp的方法、试剂盒及其制备方法和应用
CN105548565A (zh) * 2015-12-30 2016-05-04 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 一种用于检测克氏锥虫抗体的试剂盒及其制备和应用
CN105785018A (zh) * 2016-05-16 2016-07-20 开封市疾病预防控制中心 一种手足口病病原胶体金诊断检测试纸盒的制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
王雪玲;蔡敏;俞石芳;黄慧聪;潘长旺;: "快速诊断滴虫性阴道炎免疫层析试纸条的初步研制", 中国病原生物学杂志 *

Cited By (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109085353A (zh) * 2018-06-13 2018-12-25 比杭生物科技（杭州）有限公司 一种白色念珠菌胶体金检测卡及其应用
CN110687288A (zh) * 2019-04-28 2020-01-14 中山大学肿瘤防治中心 一种快速检测肝病的多联检试剂盒及制备方法
CN110244049A (zh) * 2019-07-31 2019-09-17 河南美凯生物科技有限公司 致病性念珠菌检测和鉴定方法
CN110244049B (zh) * 2019-07-31 2022-05-06 河南美凯生物科技有限公司 致病性念珠菌检测和鉴定方法
CN111220805A (zh) * 2020-02-13 2020-06-02 中南大学湘雅三医院 一种细菌性阴道炎多指标快速检测复合试纸及其制作方法
CN111208295A (zh) * 2020-02-29 2020-05-29 济南德亨医学科技有限公司 一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法
CN113514637A (zh) * 2021-04-20 2021-10-19 江苏美克医学技术有限公司 用于检测阴道加德纳菌荧光免疫层析试纸条、试剂盒及应用
CN113607943A (zh) * 2021-08-20 2021-11-05 浙江嘉孚生物科技有限公司 一种同时检测滴虫、加德纳菌、白色念珠菌的量子点荧光免疫层析试纸及其制备方法
CN114324861A (zh) * 2021-12-08 2022-04-12 北京泰格科信生物科技有限公司 念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒及其制备方法

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