CN114324861A - 念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒及其制备方法，涉及检测试剂盒领域；包括检测卡，所述检测卡包括底板、加样板、乳胶结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述加样板、乳胶结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾连接并固定于所述底板上，所述乳胶结合垫固定有第一乳胶微球标记的念珠菌/毛滴虫/加德纳菌特异性抗体和第二乳胶微球标记的链霉亲和素，所述硝酸纤维素膜设有包被念珠菌/毛滴虫/加德纳菌抗体的检测线和包被生物素‑BSA的质控线。本发明的检测试剂盒，仅需一次取样及样本处理过程的条件下，同时完成念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌的抗原联合检测，效率高，且特异性强，灵敏度高。
Description
技术领域
本发明属于检测试剂盒领域，具体涉及念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
念珠菌性阴道炎是最常见的女性阴道炎之一，主要由念珠菌(Candida albicans,CA)感染引起，念珠菌(Candida albicans，C.albicans)也称白色假丝酵母菌，隶属于念珠菌属。由念珠菌感染引起的外阴阴道炎症，即妇女外阴最常见的炎症之一。它与抗生素滥用、免疫缺陷、妊娠、激素治疗以及难治性糖尿病密切相关。
阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis，T.vagnialis)是寄生在人体泌尿生殖道的一种常见病原体，可引起阴道毛滴虫病。滴虫是最常见的非病毒的性病，它与许多围产期并发症，男性和女性生殖道感染和传播艾滋病毒的发病率增加有关。
加德纳菌(Gardnerella vaginal，G.vagnialis)是一类革兰染色阴性或阳性的短杆菌，是女性细菌性阴道病(bacterial vaginosis，BV)的主要病原菌之一。它与不良妊娠结局、妇科炎症和艾滋病毒的传播复制有关。
现有技术中念珠菌、阴道毛滴虫和阴道加德纳菌存在以下缺点：
1、念珠菌检测方法
念珠菌的实验室检测主要检测念珠菌病原体、代谢产物、抗原、抗体以及核酸等。其检查方法包括：白带外观和pH检测、显微镜镜检、培养法、生化酶学法、免疫学方法及分子生物学方法等。
(1)白带外观及pH检测：念珠菌阴道炎患者白带为白色豆腐渣样分泌物，呈凝乳状。而正常白带的颜色像鸡蛋清一样，清亮无色或白色、不均匀、絮状。如果是单纯的念珠菌感染，对于有经验的医师白带外观检查的方法可以确诊，但是如果是混合感染则不能达到诊断目的。正常白带的pH值在3.8～4.4，这样的环境有利于乳酸杆菌生长，而乳酸杆菌代谢阴道壁脱落的鳞状上皮细胞糖原成分产酸，又有利于阴道内环境的稳定。而念珠菌阴道炎患者白带pH值变化不明显，一般保持在4.0～4.5。这样的pH值变化仅有助于初步排除滴虫或BV感染，而无助于念珠菌阴道炎的直接诊断。
(2)显微镜镜检：通过显微镜镜检白带涂片也是临床上比较常见的念珠菌实验室检测方法，以见到假菌丝和(或)孢子为阳性，具体有以下几种：
1)生理盐水湿片法：是目前临床上常用的念珠菌阴道炎检测方法，该法不染色，操作简便快速。但由于阴道分泌物涂片有大量的上皮细胞和正常菌群的微生物，合并感染时还有大量的脓细胞，在杂乱的背景下，无经验者难以辨认，容易造成假阴性，因此灵敏度比较低。国内资料报道从14.9％到54.0％不等。
2)染色法：包括革兰氏染色、刚果红染色和PAS染色。通过染色念珠菌形态典型、突出，加之使用油镜，放大倍数高，易于与干扰物质区别，因此染色法虽与生理盐水湿片法的特异性无明显差别，但灵敏度得到提高。国外报道对有症状的患者检出率为65％～68％，而国内报道偏低，从23.14％到64.0％不等。
3)10％KOH悬滴法：由于KOH降解分泌物中的一些糖蛋白，使假菌丝和孢子更容易观察，因此提高了检测的灵敏度。但是会漏检90％无症状的念珠菌患者。
显微镜镜检检测念珠菌阴道炎虽然操作简单，不费时，但是灵敏度存在一定的问题。
(3)培养法：无论白带检查还是显微镜镜检都不能对念珠菌进行鉴定，培养法结合生化鉴定则可以做到。但是传统的培养结合形态学以及代谢性质的方法操作比较烦琐，也比较耗时，常常需要3d甚至1周才能得到准确结果。念珠菌显色培养基的最大优点可直接使用标本，只需24～48h的培养即可诊断念珠菌，并鉴别引起念珠菌阴道炎的常见的念珠菌。它的出现是念珠菌检测鉴别技术的一个重大进展，这项技术把人们从烦琐的实验操作中解脱出来，实现简单检测、准确鉴别。
(4)生化酶学法：其原理与显色培养基基本类似，也是利用念珠菌特异性酶解底物发生颜色变化，不同的是生化酶学法还可以利用外加试剂与念珠菌代谢产物反应而发生颜色变化。该方法还有一个明显的优点就是检测时间非常短，一般不超过30min。但它目前有一个致命的缺点，就是只能使用分离出的菌株，而不能直接使用阴道分泌物标本，而且为了保证有足够的酶量或酶活力，一般对菌体数量还有要求。
(5)免疫学方法：人们试图通过采用免疫学方法来检测念珠菌抗体或抗原，以提高念珠菌早期诊断水平，但成效甚微。乳胶凝集试验是目前临床上使用最广泛的念珠菌抗原检测方法，是采用多克隆抗体检测念珠菌细胞壁上的甘露聚糖。与镜检比较结果是灵敏度80％，特异性100％。
(6)其他方法：血清学检测念珠菌抗原抗体的方法虽然目前研究比较活跃，但基本上都是针对侵入性念珠菌感染，对于念珠菌阴道炎的检测实用价值不大。其它像分子生物学方法、微生物鉴定系统以及光谱学方法虽然能对念珠菌准确鉴定，但存在诸多缺点，如设备昂贵、检测费用高、操作复杂、技术要求高、检测周期长、不能直接检测阴道分泌物标本，所以仅具有科研和流行病学调查意义，并不代表念珠菌阴道炎实验室检测技术的发展方向。
2、阴道毛滴虫检测方法
阴道毛滴虫实验室检测主要有：涂片法、细胞培养、免疫学技术、核酸分子杂交以及聚合酶链反应(PCR)等。
病原学诊断：生理盐水直接涂片法(湿片法)：取阴道后弯窿分泌物、尿液沉淀物或前列腺液，用生理盐水直接涂片，湿片镜检。此法是诊断滴虫病的传统方法，操作简便、快速，为临床常用的方法。但该法只能检测活虫，虫体易与白细胞相混淆，检测结果与操作人员技术熟练程度有关，该法敏感度为35％-80％。
(1)涂片染色法：包括PAP、吉氏液、瑞氏液及吖啶橙染色法等，但是敏感度都偏低。
(2)培养法：培养法的敏感性高，被认为是检测滴虫病的最敏感的方法；其现有敏感度能够达到97％。虽然培养法敏感性较高，但因费时7d，每天都要检查，临床较少应用。
(3)免疫学诊断技术：
1)ELISA法：国内报道用抗滴虫单克隆抗体包被聚苯乙烯塑料板，检测阴道分泌物的滴虫抗原，加人兔抗滴虫多克隆抗体，再加人羊抗兔辣根过氧化物酶结合物，然后用酶标仪检测，可诊断滴虫可溶性抗原，敏感性好，特异性高。斑点-ELISA可检测全虫抗原。
2)荧光抗体检测法：国外报道应用异硫氰酸荧光黄结合的抗体检测临床本，用荧光显微镜检查，其敏感度为86％。并且比较了荧光抗体检测法、吖啶橙染色、湿片、培养等4种方法，其敏感度分别为83％、66％,66％和95％。表明荧光抗体检测法敏感性好，特异性高。
(4)核酸分子杂交技术以及荧光定量PCR技术，为分子生物学诊断。滴虫的核酸分子杂交技术有传统原位杂交和自动化微生物检测系统，其灵敏度达到90％，特异性达99.8％。而运用滴虫的特异性引物和探针，对其序列进行实时荧光定量PCR，其最终检测限达到1CFU/20ul；其整个流程只需2h左右。
3、加德纳菌检测方法
加德纳菌实验室检测主要有：病原学诊断方法、生化诊断法、免疫学技术、分子生物学技术等。
(1)所述病原学诊断方法包括AMSEL诊断法、湿片法、染色法、细胞培养法，具体为：
1)AMSEL法：是目前检测细菌性阴道病的“金标准”，有四项指标：①阴道分泌物增多变稀如奶状；②阴道pH值>4.5；③阴道分泌物加入10％氢氧化钾出现胺味(即胺试验阳性)；④阴道分泌物镜检可见线索细胞。凡同时具备第④项及前3项中任意两项，即可诊断细菌性阴道病感染。此标准较复杂，临床上一般不严格遵循此标准，而是根据经验和当地实际条件选1项进行，比较普遍的是选第④项和第③项。但此法操作烦琐，取材较多，难度大，费用高。
2)湿片法：可见大量脱落上皮细胞内粘附许多细小杆菌或球杆菌，使上皮细胞呈锯齿状而不清晰，这种细胞称线索细胞或克鲁细胞(clue cell)。该方法简单易行，为临床工作人员所普遍接受；但是诊断结果受主观因素影响。
3)染色法：革兰染色后可见粘附于上皮细胞上的大量细菌为革兰阴性小杆菌或染色不定的球杆菌，阴道正常菌群的革兰阳性大杆菌即乳酸杆菌减少或不见。该方法诊断结果差异性大。
4)细胞培养法：将标本接种分离培养液置35℃、5％CO2环境中孵育48h，用生物梅里埃生产的奈瑟菌属———嗜血杆菌属鉴定卡，将生化值输入“Vitek”仪后，可准确给出加德纳菌的鉴定。
(2)生化诊断
1)胺试验法：临床上一般是取阴道分泌物置于载玻片上，滴加10％氢氧化钾，若有“鱼腥”味，即为阳性。其判断结果嗅味因人而异，主观性强，灵敏度较低(取材少时，极易造成假阴性)，一定程度上限制了该法应用。但由于检测成本低廉，特异性好，在基层单位仍广泛使用。
2)微生物酶法：利用微生物独具的酶催化机理，结合发色底物形成的酶快速检测技术已成为微生物快速鉴定发展的主导方向。如阴道分泌物中唾液酸苷酶活性与细菌性阴道病感染存在一定相关性，感染细菌性阴道病该酶活性增高。此法已被制成BV快速检测试剂管，具有操作简单，结果直观，特异性强，出结果快，可室温保存等优点。
(3)免疫学诊断
主要为荧光抗体染色法：即利用加德纳菌的已知抗体来检测未知涂片中的加德纳菌。据报道BV患者中运用此法，加菌检出阳性率为59％，对照组加菌检出率为25％。此法操作简单，但需价格昂贵的荧光显微镜且带有放射性物质，故使用受到限制。
(4)分子生物学技术
分子生物学诊断主要包括：核酸分子杂交技术以及PCR技术。据国外报道，使用探针法即The Affirm VP Microbial Identification Test(Becton，DickinsonandCompany，Sparks，MD)的敏感性为95-97％，特异性为71-98％；是一种比其它方法更客观，简单易行，可靠性和重复性好的方法。而运用PCR技术其特异且敏感地检测加德纳菌致病菌株且不受抗生素药物治疗的影响。
综上所述，念珠菌、阴道毛滴虫及加德纳菌的现有检测方法大致相同。涂片法虽简便快捷，但敏感性差；培养法具有高敏感性但耗时多；分子生物学技术虽然敏感度和特异性都俱佳，并且耗时短，但是需要昂贵的仪器配套以及专业的技术人员，对其在临床上推行有较大的限制作用。鉴于念珠菌、阴道毛滴虫和加德纳菌感染泌尿生殖道的部位相同，症状相似，且常合并感染，有必要研究一种可完成三种病原体的检测，以方便患者及临床检验人员，提高检测效率。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，仅需一次取样及样本处理过程的条件下，同时完成念珠菌、阴道毛滴虫和阴道加德纳菌的抗原检测，效率高，且特异性强，灵敏度高。
本发明的目的之二在于提供上述念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒的制备方法。
本发明的目的之一采用如下技术方案实现：
一种念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，包括分别测定念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌的检测卡，所述检测卡包括底板、加样板、乳胶结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述加样板、乳胶结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾连接并固定于所述底板上，所述乳胶结合垫固定有第一乳胶微球标记的念珠菌/毛滴虫/加德纳菌特异性抗体和第二乳胶微球标记的链霉亲和素，所述硝酸纤维素膜设有包被念珠菌/毛滴虫/加德纳菌抗体的检测线和包被生物素-BSA的质控线。
进一步地，所述第一乳胶微球呈红色，粒径为200-400nm；所述第二乳胶微球呈蓝色，粒径为200-400nm。
进一步地，所述加样板设有三个平行的加样孔，每个所述加样孔分别对应用于念珠菌、阴道毛滴虫和阴道加德纳菌的加样处理。
进一步地，还包括样本稀释液，所述样本稀释液为磷酸盐缓冲液。
进一步地，其使用方法包括以下步骤：
S1，将取样拭子置于样本稀释液中，搅拌后静置，移除取样拭子，得到样本液；
S2，将样本液滴加到检测卡的加样板中，10-20min内观察并判断结果。
进一步地，其使用方法的步骤S1中，所述样本稀释液用量为适量，静置时间为1.5-5min。
进一步地，其使用方法的步骤S1中，所述取样拭子从阴道后穹窿处中对阴道分泌物进行取样。
进一步地，其使用方法的步骤S2中，判断结果的具体步骤为：若样本液中含有念珠菌/阴道毛滴虫/加德纳菌，则在检测线对应位置上呈现相应的色条带色条带；若待测样本中不含念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌，则在检测线上不显色；同时无论样本液中有无念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌，质控线都应呈现色条带，否则，检测无效。
本发明的目的之二采用如下技术方案实现：
一种念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
1)采用第一乳胶微球标记念珠菌/毛滴虫/加德纳菌特异性抗体，得到抗体-乳胶体复合物；采用第二乳胶微球标记链霉亲和素，得到亲和素-乳胶体复合物；将所述抗体-乳胶体复合物和亲和素-乳胶体复合物混合后喷涂到到吸附膜上，形成乳胶结合垫；
2)将念珠菌/毛滴虫/加德纳菌抗体喷涂在硝酸纤维素膜上，形成检测线；将生物素-BSA喷涂在位于检测线另一侧的硝酸纤维素膜上，形成质控线，干燥，制得设有检测线和质控线的硝酸纤维素膜；
3)在底板上顺次搭接的加样板、乳胶结合垫、硝酸纤维素膜和吸水板，即得检测卡。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
本申请的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，采用乳胶层析法对念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原进行联合检测，其中，采用彩色乳胶微球标记念珠菌/毛滴虫/加德纳菌特异性抗体和链霉亲和制备素乳胶结合垫，分别在硝酸纤维素膜包被念珠菌/毛滴虫/加德纳菌抗体和生物素-BSA，形成检测线和质控线，得到的检测试剂盒仅需一次取样及样本处理过程的条件下，同时完成念珠菌、阴道毛滴虫和阴道加德纳菌抗原联合检测，且效率高，特异性强，灵敏度高，可重复性强。并可快速对待测样本进行念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合定性检测判断，效率高，特异性强，灵敏度高。进一步地，本发明的联合检测试剂盒可检测的念珠菌包括：白色念珠菌、光滑念珠菌、近平滑念珠菌和热带念珠菌。
本发明的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒的制备方法，可快速制备上述检测试剂盒，工艺简单，制备成本低。
附图说明
图1是本发明实施例1中检测卡的结构示意图。
图2是本发明实施例1中检测卡的检测示意图。
图中：1、加样板；2、乳胶结合垫；3、硝酸纤维素膜；4、吸水纸；5、底板。
具体实施方式
下面，结合附图与具体实施方式，对本发明做进一步描述，需要说明的是，在不相冲突的前提下，以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
实施例1
一种念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德的抗原联合检测试剂盒，参照图1-2，包括分别测定念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测卡，所述检测卡包括底板5、加样板1、乳胶结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水纸4，所述加样板1、乳胶结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水纸4依次首尾连接并固定于所述底板5上。
所述乳胶结合垫2固定有第一乳胶微球标记的念珠菌/毛滴虫/加德纳菌特异性抗体和第二乳胶微球标记的链霉亲和素，所述第一乳胶微球呈红色，粒径为300nm；所述第二乳胶微球呈蓝色，粒径为300nm。
所述硝酸纤维素膜3设有包被念珠菌/毛滴虫/加德纳菌抗体的检测线(T线)和包被生物素-BSA的质控线(C线)。
所述加样板1设有三个平行的加样孔，每个所述加样孔分别对应用于念珠菌、阴道毛滴虫、阴道加德纳菌的加样处理。
上述念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
1)采用第一乳胶微球标记念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌的特异性抗体，得到抗体-乳胶体复合物；采用第二乳胶微球标记链霉亲和素，得到亲和素-乳胶体复合物；将所述抗体-乳胶体复合物和亲和素-乳胶体复合物喷涂到吸附膜上，形成乳胶结合垫2；
2)将念珠菌/毛滴虫/加德纳菌抗体喷涂在硝酸纤维素膜上，形成检测线；将生物素-BSA喷涂在位于检测线另一侧的硝酸纤维素膜上，干燥，形成质控线，烘干，制得设有检测线(T线)和质控线(C线)的硝酸纤维素膜3；
3)在底板5上顺次搭接的加样板1、乳胶结合垫2、硝酸纤维素膜3和吸水纸4，即得检测卡。
性能分析
本实施例通过对念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌的抗原检出限进行测试分析；结果表明，本实施例的检测试剂盒中，念珠菌阳性判断值为≥104CFU mL，阴道毛滴虫判断值为≥104个/mL，阴道加德纳菌判断值为≥105CFU/mL。即本实施例的检测试剂盒的检出限较低，且检测效率高，操作简单，特异性强，灵敏度高，检测结果可供临床参考。
实施例2
一种念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒的使用方法，应用实施例1所述的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，包括以下步骤：
S1，取样：用灭菌拭子从阴道后穹窿处取阴道分泌物，将棉签插入阴道中，旋转20秒(或在阴道壁上滚动2-3周)，确保采样拭子整个外周都接触过阴道壁；小心地把棉签取出来。在无窥器的条件下，也可以用长拭子伸入阴道内取材；另应保证拭子中含有足够量的待检测微生物；
S2，对取样的拭子样本进行处理，然后将取样拭子置于适量的样本稀释液中，转动拭子15次后静置2min，沿管壁挤压取样拭子后取出取样拭子弃之，所述样本稀释液为磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液主要成分为十二水合磷酸氢二钠和二水合磷酸二氢钠。
S3，将样本液滴加到检测卡的加样板中，10-20min内观察并判断结果；
判断结果：在检测线上呈现红色条带，质控线都应呈现蓝色条带，结果为：阳性。阳性结果表明：检测线表示样本中含有念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌。
检验结果的解释：
阳性(+)：
同时出现两条条带；其中，一条红色条带位于检测线(T线)内，另一条蓝色条带位于质控线(C线)。阳性结果表明：检测的样本中含有念珠菌抗原/阴道毛滴虫抗原/阴道加德纳菌抗原。
阴性(-)：
仅质控线(C线)出现一条蓝色条带。在检测线(T线)内无红色条带出现。阴性结果表明：样本中不含有念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原，或是含量低于可检测范围。
无效：
质控线(C线)未出现蓝色条带，表明操作过程不正确或检测卡已变质损坏。
实施例3
一种念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒的使用方法，应用实施例1所述的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，包括以下步骤：
S1，取样：用灭菌拭子从阴道后穹窿处取阴道分泌物，将棉签插入阴道中，旋转20秒(或在阴道壁上滚动2-3周)，确保采样拭子整个外周都接触过阴道壁；小心地把棉签取出来。在无窥器的条件下，也可以用长拭子伸入阴道内取材；另应保证拭子中含有足够量的待检测微生物；
S2，对取样的拭子样本进行处理，然后将取样拭子置于适量的磷酸盐缓冲液中，转动拭子15次后静置3min，沿管壁挤压取样拭子后取出取样拭子弃之，得到样本液；
S3，将样本液滴加到检测卡的加样板中，10-20min内观察并判断结果；
判断结果：仅质控线(C线)出现一条蓝色条带，在检测线(T线)内无红色条带出现，结果为：阴性。阴性结果表明：样本中不含有念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌，或是含量低于可检测范围。
实施例4
念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒的使用方法，应用实施例1所述的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，包括以下步骤：
S1，取样：用灭菌拭子从阴道后穹窿处取阴道分泌物，将棉签插入阴道中，旋转20秒(或在阴道壁上滚动2-3周)，确保采样拭子整个外周都接触过阴道壁；小心地把棉签取出来。在无窥器的条件下，也可以用长拭子伸入阴道内取材；另应保证拭子中含有足够量的待检测微生物；
S2，对取样的拭子样本进行处理，然后将取样拭子置于适量的磷酸盐缓冲液中，转动拭子15次后静置2min，沿管壁挤压取样拭子后取出取样拭子弃之，得到样本液；
S3，将样本液滴加到检测卡的加样板中，10-20min内观察并判断结果；
判断结果：质控线(C线)未出现蓝色条带，结果为：检测无效。表明操作过程不正确或检测卡已变质损坏。
上述实施方式仅为本发明的优选实施方式，不能以此来限定本发明保护的范围，本领域的技术人员在本发明的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明所要求保护的范围。
Claims (9)
1.念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，包括分别测定念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌的检测卡，所述检测卡包括底板、加样板、乳胶结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述加样板、乳胶结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾连接并固定于所述底板上，其特征在于：所述乳胶结合垫固定有第一乳胶微球标记的念珠菌/毛滴虫/加德纳菌特异性抗体和第二乳胶微球标记的链霉亲和素，所述硝酸纤维素膜设有包被念珠菌/毛滴虫/加德纳菌抗体的检测线和包被生物素-BSA的质控线。
2.如权利要求1所述的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，其特征在于：所述第一乳胶微球呈红色，粒径为200-400nm；所述第二乳胶微球呈蓝色，粒径为200-400nm。
3.如权利要求1所述的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，其特征在于：所述加样板设有三个平行的加样孔，每个所述加样孔分别对应用于念珠菌、阴道毛滴虫和阴道加德纳菌的加样处理。
4.如权利要求1所述的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，其特征在于：还包括样本稀释液，所述样本稀释液为磷酸盐缓冲液。
5.如权利要求1-4任一项所述的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，其特征在于：其使用方法包括以下步骤：
S1，将取样拭子置于样本稀释液中，搅拌后静置，移除取样拭子，得到样本液；
S2，将样本液滴加到检测卡的加样板中，10-20min内观察并判断结果。
6.如权利要求5所述的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，其特征在于：其使用方法的步骤S1中，所述样本稀释液用量为适量，静置时间为1.5-5min。
7.如权利要求5所述的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，其特征在于：其使用方法的步骤S1中，所述取样拭子从阴道后穹窿处中对阴道分泌物进行取样。
8.如权利要求5所述的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒，其特征在于：其使用方法的步骤S2中，判断结果的具体步骤为：若样本液中含有念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌，则在检测线对应位置上呈现相应的色条带；若待测样本中不含念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌，则在检测线上不显色；同时无论样本液中有无念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌，质控线都应呈现色条带，否则，检测无效。
9.一种权利要求1-4任一项所述的念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)采用第一乳胶微球标记念珠菌/毛滴虫/加德纳菌特异性抗体，得到抗体-乳胶体复合物；采用第二乳胶微球标记链霉亲和素，得到亲和素-乳胶体复合物；将所述抗体-乳胶体复合物和亲和素-乳胶体复合物混合后喷涂到到吸附膜上，形成乳胶结合垫；
2)将念珠菌/毛滴虫/加德纳菌抗体喷涂在硝酸纤维素膜上，形成检测线；将生物素-BSA喷涂在位于检测线另一侧的硝酸纤维素膜上，形成质控线，干燥，制得设有检测线和质控线的硝酸纤维素膜；
3)在底板上顺次搭接的加样板、乳胶结合垫、硝酸纤维素膜和吸水板，即得检测卡。
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