CN111208295A - 一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，涉及医学领域，本发明中用量子点偶联加德纳菌抗体，实现了对加德纳菌的特异性检测，大大提高了加德纳菌检出率、准确率；示踪物量子点具有激发光谱宽、发射光谱窄的特点，可实现在荧光显微镜下直接观察，降低了对检测人员的操作技能及实验室检测仪器的要求；同时量子点荧光效率高，荧光强度强，稳定性好，抗漂白能力强，可经受多次，激发而不易发生荧光淬灭，即已染色的标本可以长期保存，可疑结果可以多次阅片。
Description
技术领域
本发明涉及医学技术领域，具体是一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法。
背景技术
加德纳菌性阴道炎又名嗜血杆菌性阴道炎，以前曾归于棒杆菌性阴道炎，是由加德纳杆菌引起的一种阴道粘膜炎症，可通过性交传染，故列为性传播疾病。大量研究表明：在性关系混乱的人群中，加德纳菌性阴道炎有高流行率。加德纳杆菌为革兰氏阴性细小杆菌，常呈球杆状，有时呈丝状和多形状，常见两极染色，宽0.4~0.6微米，长1~2微米大小，无活动力、无鞭毛、无芽孢，许多菌株有荚膜，在人工培养时必须给予新鲜血液才能生长繁殖，故有“嗜血”之称。
目前临床常用的加德纳菌检测方法有革兰氏染色法（找到线索细胞），吖啶橙荧光染色法（在上皮细胞中发现成堆桔黄色细小杆菌为阳性），加德纳菌分离培养法（进行生化鉴定），PCR法（是否出现扩增带判断）等。其中革兰氏染色法和吖啶橙荧光染色法中，寻找线索细胞比较费事费功夫，分离培养后进行生化鉴定，周期长，阳性率低；PCR法比较费事，对检测操作人员和设备性能要求极高，不适合多标本的临床应用，因此，现提供一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，可以对加德纳菌特异性检测，提高加德纳菌检出率、准确率。
发明内容
本发明的目的在于提供一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，包括量子点荧光探针的制备方法及其使用方法。
一种量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:5~1:10的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；
（2）加入过量的加德纳菌标记抗体，并调整整个溶液的反应pH，使得反应pH在6~8之间，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；
（3）对反应结束的液体进行超滤，在10000rpm条件下离心20分钟；
（4）吸出超滤后的标记抗体，用含20mM Tris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5~8.5的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
一种量子点荧光探针的使用方法，包括如下步骤：
（1）根据需求挑取若干样本放置在载玻片上并制成涂片，然后用无水乙醇进行固定；
（2）将含有样本的载玻片标本水平放置，加10ul制备好的量子点标记抗体在标本上，使之完全覆盖在标本上；
（3）将制备好的载玻片置于37℃的环境下孵育25~35分钟，然后使用蒸馏水缓缓全覆盖洗涤3遍；
（4）将洗涤后的载玻片放置在显微镜下，使用荧光显微镜在100倍油镜条件下进行观察。
作为本发明进一步的方案：一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，包括量子点荧光探针的制备方法及其使用方法。
一种量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:5的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；
（2）加入过量的加德纳菌标记抗体，并调整整个溶液的反应pH，使得反应pH值为6，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；
（3）对反应结束的液体进行超滤，在10000rpm条件下离心20分钟；
（4）吸出超滤后的标记抗体，用含20mM Tris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
一种量子点荧光探针的使用方法，包括如下步骤：
（1）根据需求挑取若干样本放置在载玻片上并制成涂片，然后用无水乙醇进行固定；
（2）将含有样本的载玻片标本水平放置，加10ul制备好的量子点标记抗体在标本上，使之完全覆盖在标本上；
（3）将制备好的载玻片置于37℃的环境下孵育30分钟，然后使用蒸馏水缓缓全覆盖洗涤3遍；
（4）将洗涤后的载玻片放置在显微镜下，使用荧光显微镜在100倍油镜条件下进行观察。
作为本发明再进一步的方案：一种量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:10的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；
（2）加入过量的加德纳菌标记抗体，并调整整个溶液的反应pH，使得反应pH值为8，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；
（3）对反应结束的液体进行超滤，在10000rpm条件下离心20分钟；
（4）吸出超滤后的标记抗体，用含20mM Tris、15%蔗糖、1%BSA，pH8.5的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
作为本发明再进一步的方案：一种量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:8的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；
（2）加入过量的加德纳菌标记抗体，并调整整个溶液的反应pH，使得反应pH值为7，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；
（3）对反应结束的液体进行超滤，在10000rpm条件下离心20分钟；
（4）吸出超滤后的标记抗体，用含20mM Tris、15%蔗糖、1%BSA，pH8.的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明中用量子点偶联加德纳菌抗体，实现了对加德纳菌的特异性检测，大大提高了加德纳菌检出率、准确率；示踪物量子点具有激发光谱宽、发射光谱窄的特点，可实现在荧光显微镜下直接观察，降低了对检测人员的操作技能及实验室检测仪器的要求；同时量子点荧光效率高，荧光强度强，稳定性好，抗漂白能力强，可经受多次，激发而不易发生荧光淬灭，即已染色的标本可以长期保存，可疑结果可以多次阅片。
具体实施方式
实施例1
本实施例提供了一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，包括量子点荧光探针的制备方法及其使用方法。
一种量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:5~1:10的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；
（2）加入过量的加德纳菌标记抗体，并调整整个溶液的反应pH，使得反应pH在6~8之间，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；
（3）对反应结束的液体进行超滤，在10000rpm条件下离心20分钟；
（4）吸出超滤后的标记抗体，用含20mM Tris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5~8.5的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
一种量子点荧光探针的使用方法，包括如下步骤：
（1）根据需求挑取若干样本放置在载玻片上并制成涂片，然后用无水乙醇进行固定；
（2）将含有样本的载玻片标本水平放置，加10ul制备好的量子点标记抗体在标本上，使之完全覆盖在标本上；
（3）将制备好的载玻片置于37℃的环境下孵育25~35分钟，然后使用蒸馏水缓缓全覆盖洗涤3遍；
（4）将洗涤后的载玻片放置在显微镜下，使用荧光显微镜在100倍油镜条件下进行观察。
实施例2
在实施例1的基础上，本实施例提供了一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，包括量子点荧光探针的制备方法及其使用方法。
一种量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:5的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；
（2）加入过量的加德纳菌标记抗体，并调整整个溶液的反应pH，使得反应pH值为6，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；
（3）对反应结束的液体进行超滤，在10000rpm条件下离心20分钟；
（4）吸出超滤后的标记抗体，用含20mM Tris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
一种量子点荧光探针的使用方法，包括如下步骤：
（1）根据需求挑取若干样本放置在载玻片上并制成涂片，然后用无水乙醇进行固定；
（2）将含有样本的载玻片标本水平放置，加10ul制备好的量子点标记抗体在标本上，使之完全覆盖在标本上；
（3）将制备好的载玻片置于37℃的环境下孵育30分钟，然后使用蒸馏水缓缓全覆盖洗涤3遍；
（4）将洗涤后的载玻片放置在显微镜下，使用荧光显微镜在100倍油镜条件下进行观察。
实施例3
在实施例1的基础上，本实施例提供了一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，包括量子点荧光探针的制备方法及其使用方法。
一种量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:10的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；
（2）加入过量的加德纳菌标记抗体，并调整整个溶液的反应pH，使得反应pH值为8，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；
（3）对反应结束的液体进行超滤，在10000rpm条件下离心20分钟；
（4）吸出超滤后的标记抗体，用含20mM Tris、15%蔗糖、1%BSA，pH8.5的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
实施例4
在实施例1的基础上，本实施例提供了一种量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:8的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；
（2）加入过量的加德纳菌标记抗体，并调整整个溶液的反应pH，使得反应pH值为7，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；
（3）对反应结束的液体进行超滤，在10000rpm条件下离心20分钟；
（4）吸出超滤后的标记抗体，用含20mM Tris、15%蔗糖、1%BSA，pH8.的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
本需要特别说明的是，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式，以上所述实施例仅表达了本技术方案的示例实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本技术方案专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变性、改进及替代，这些都属于本技术方案的保护范围。
Claims (4)
1.一种阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，其特征在于，包括量子点荧光探针的制备方法及其使用方法。
一种量子点荧光探针的制备方法，包括如下步骤：
（1）采用EDC偶联法标记抗体，将量子点溶液和EDC溶液按照按1:5~1:10的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；
（2）加入过量的加德纳菌标记抗体，并调整整个溶液的反应pH，使得反应pH在6~8之间，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；
（3）对反应结束的液体进行超滤，在10000rpm条件下离心20分钟；
（4）吸出超滤后的标记抗体，用含20mM Tris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5~8.5的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
一种量子点荧光探针的使用方法，包括如下步骤：
（1）根据需求挑取若干样本放置在载玻片上并制成涂片，然后用无水乙醇进行固定；
（2）将含有样本的载玻片标本水平放置，加10ul制备好的量子点标记抗体在标本上，使之完全覆盖在标本上；
（3）将制备好的载玻片置于37℃的环境下孵育25~35分钟，然后使用蒸馏水缓缓全覆盖洗涤3遍；
（1）将洗涤后的载玻片放置在显微镜下，使用荧光显微镜在100倍油镜条件下进行观察。
2.根据权利要求1所述阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，其特征在于，一种量子点荧光探针的制备方法，步骤（1）中，所述量子点溶液和EDC溶液按照按1:5的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；步骤（2）中，调整整个溶液的反应pH，使得反应pH值为6，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；步骤（4）中，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH7.5的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
3.根据权利要求2所述阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，其特征在于，一种量子点荧光探针的制备方法，步骤（1）中，所述量子点溶液和EDC溶液按照按1:10的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；步骤（2）中，调整整个溶液的反应pH，使得反应pH值为8，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；步骤（4）中，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH8.5的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
4.根据权利要求1所述阴道加德纳菌量子点免疫检测方法，其特征在于，一种量子点荧光探针的制备方法，步骤（1）中，所述量子点溶液和EDC溶液按照按1:8的比例混合，然后在常温、避光的条件下对混合溶液进行搅拌使之活化；步骤（2）中，调整整个溶液的反应pH，使得反应pH值为7，将调整完成的混合溶液置于避光环境下反应1小时；步骤（4）中，用含20mMTris、15%蔗糖、1%BSA，pH8.0的溶液复溶至原体积，如此，即得到制备好的量子点标记抗体。
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