CN107312726A - 一株植物乳杆菌zn‑3及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一株植物乳杆菌ZN‑3及应用，本发明提供的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ZN‑3，保藏在中国典型培养物保藏中心（CCTCC），保藏编号为：CCTCC NO：M 2017286。本发明提供的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ZN‑3具有耐酸、耐胆盐特性，能够通过胃定植于肠道，对动物源致病菌有抑菌作用，既包括革兰氏阴性菌：大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴士杆菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪传染性胸膜肺炎，也包括革兰氏阳性菌：猪链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌。与抗生素相比较，对耐药性较强的病原菌有很好的抑菌效果。

Description

一株植物乳杆菌ZN-3及应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一株分离自中草药发酵饲料中的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3，还涉及所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3对致病性动物源病原菌的抑制作用，以及作为预防和治疗动物肠道疾病的益生菌在畜禽养殖中的应用。
背景技术
饲用抗生素是一种保障动物健康、提高畜禽生产性能的抗生素类药物，抗生素作为饲料添加剂在畜禽颜值业中得到了广泛应用，但随着饲用抗生素耐药性、药物残留及其对人类健康影响等问题的出现，许多国家已对畜牧业饲料添加剂用抗生素的使用作出限制，力图避免饲用抗生素的危害，尤其是近十年来，限制尤为严格。我国饲料添加剂管理条例也对抗生素添加剂的使用及其添加量做出了新的规定和限制。我国在2015年底在食品动物中停用洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4中喹诺酮类兽药，2016年11月停止硫酸粘杆菌素的饲料添加剂用途等规定出台，在饲料中限抗、无抗已成为一种趋势。
益生菌微生态制剂是近年发展起来的新型添加剂，不但能防治病害，提高饲料转化率和养殖动物生产性能，还能降低养殖环境及粪便中氨气、硫化氢等有害物质的含量，减少畜禽养殖业对周边环境的污染，而且由于其具有无毒副作用、无耐药性、无残留、绿色安全、生产效果显著等特点逐渐受到重视，是一种绿色饲料添加剂，是国际公认的减少或替代抗生素的良好选择。
乳酸菌作为益生菌的重要种类之一，在微生物饲料添加剂和微生物发酵饲料方面有着广阔的应用空间，具有无污染、无残留、不产生耐药性等特点，同时还可以改善饲料风味，促进畜禽生长，提高免疫力，增加动物对疾病的抵抗力，在目前畜牧业生产中有深入研究、发展的趋势。植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)是乳酸菌的一种，大部分分离自发酵类食品中，具有可食用植物源性，充分保证了其在食品和动物饲料中应用的安全性。植物乳杆菌可以通过胃定植于肠道，能大量的产生酸性物质，而且产生的酸性物质能够降低肠道pH值，激活蛋白酶等消化酶活性，促进胃肠蠕动，帮助食物消化吸收。植物乳杆菌在繁殖过程中还能产出特有的乳酸杆菌素，乳酸杆菌素能够抑制病原菌的生长繁殖，植物乳杆菌也可以通过与病原菌对限制性营养素能力竞争，来抑制病原菌的生长，调节肠道微生态组成，形成生物学屏障。同时其发酵产物对动物机体的生理功能和应激反应等也起到积极的促进作用，刺激免疫系统，提高机体免疫力，增强肠组织对细菌侵袭的抵抗能力。中国农业大学张日俊老师研究证明植物乳杆菌对大肠杆菌和沙门氏菌有抑菌作用。Suo等研究发现，植物乳杆菌ZJ316能显著抑制大肠杆菌和沙门氏菌生长，减少腹泻发生。Guerra-Ordaz等报道，断奶仔猪饲喂7天植物乳杆菌后，肠道乳酸杆菌数上升，腹泻减少。Pipper等研究报道，植物乳杆菌通过调节肠道微生物菌群的结构和种类，促进断奶仔猪健康。但也有研究发现，不同菌种特性不尽相同，相同菌种不同菌株其作用也不尽相同，对于植物乳杆菌的抑菌作用，目前主要研究是针对大肠杆菌和沙门氏菌，对猪链球菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪传染性胸膜肺炎和巴士杆菌的抑菌作用还未增报道。本发明筛选获得的植物乳杆菌对多种病原菌均有明显抑菌作用，包括大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌、多杀性巴士杆菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪传染性胸膜肺炎、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌，本发明旨在通过研究以期获得能够替代饲料中抗生素预防动物疾病的高效功能益生菌，为畜禽微生态制剂提供高效微生物菌株。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种植物乳杆菌，命名为植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3，所述植物乳杆菌分离自中草药发酵饲料，该菌株已于2017年5月25日保藏与中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，分类命名：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3，保藏编号为CCTCC NO：M 2017286，地址：中国武汉武汉大学。
本发明的另一个目的在于提供了一种植物乳杆菌的发酵方法，方法简单，易行。
本发明的最后一个目的在于提供了植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3的应用，所述的应用包括用于动物饲料添加剂，或者用于制备致病性动物源病原菌抑菌剂。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3，通过以下步骤筛选得到：
从广西某生态养殖猪场采取中草药发酵饲料，适当稀释涂布于乳酸菌选择性培养基MRS培养基，35℃厌氧培养48-72h,挑取平板上单菌落，在MRS培养基平板上多次划线纯化，35℃有氧培养，得到纯的菌落。经过大量分选，生理生化及16S鉴定，分离筛选获得一株植物乳杆菌，申请人将其命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3，该菌株已于2017年5月25日保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，分类命名：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3，保藏编号为CCTCC NO：M 2017286，地址：中国武汉武汉大学。
分离获得的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3具有如下生物学特性：
该菌株为革兰氏阳性，圆端直杆状、单个、成对或短链状，不产生芽孢、不运动。在MRS培养基上菌落直径1-2mm,乳白色，凸起，呈圆形，表面光滑，兼性厌氧。接触酶阴性，无致病性。最适生长温度30-37℃，最适生长pH6-7。将其16S rRNA基因测序，结果在NCBI进行blastn比对，发现其16SrRNA与植物乳杆菌(KC422318.1)的序列同源性最高，相似性为99％。
本发明菌株耐受性强，在酸性和高胆盐环境中具有较高的存活率，在pH2.0条件下，37℃孵育2h，活菌数高达7.23×108CFU/mL；在0.3％胆盐浓度条件下，37℃孵育2h，活菌数高达1.33×109CFU/mL。本发明菌株对多种肠道致病菌有明显抑菌作用，包括大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌、多杀性巴士杆菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌。在大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对部分抗生素表现出耐药性的同时，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3对这两种菌具有明显的抑菌作用。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3的发酵方法，包括：MRS液体培养基中，35℃100rpm培养12-24h。
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3的应用，包括用于制备动物饲料添加剂，用于制备调节畜禽肠道疾病的调节剂、用于制备动物抗生素替代品、或者用于制备致病性动物源病原菌抑菌剂；
所述的致病性动物源病原菌包括但不限于：大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌、多杀性巴士杆菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌。
本发明的保护内容还包括：
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3在制备耐药性金黄色葡萄球菌抑制剂中的应用；
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3在制备耐药性大肠杆菌抑制剂中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1.本发明所提供的菌株分离自中草药发酵饲料中，具有可食用植物源性，充分保证了其在畜牧养殖和动物饲料中应用的安全性。
2.本发明所述植物乳杆菌耐受性强，能够耐受胃肠道低pH和高胆盐浓度，可以在肠道定植、生长繁殖，调节肠道菌群平衡，发挥益生作用。
3.本发明所述植物乳杆菌对革兰氏阴性、革兰氏阳性菌均有明显的抑菌作用，革兰氏阴性菌包括：大肠杆菌、沙门氏菌、多杀性巴士杆菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪传染性胸膜肺炎，革兰氏阳性菌包括：猪链球菌、金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌。
4.在病原菌对部分抗生素表现出耐药性时，本发明所述抗生素对病原菌表现出明显的的抑菌作用，为植物乳杆菌替代或部分替代饲用抗生素提供了科学依据。
5.本发明所述植物乳杆菌:可以作为动物口服益生菌制剂长期使用，绿色安全、无残留、无毒副作用。在畜禽养殖饲喂中有很好的预防和治疗腹泻的作用，并且可以提高动物机体的免疫力，增加动物对疾病的抵抗力。同时植物乳杆菌菌在生长过程中产生的酸性物质，可以促进肠道蠕动，提高营养物质吸收，促进畜禽生长。
6.本发明所述的植物乳杆菌可替代或部分替代抗生素的植物乳杆菌，以期减少抗生素作为预防动物疾病作用在饲料中的长期亚治疗剂量添加，力图避免饲用抗生素滥用导致的细菌耐药性、抗生素药物残留和食品安全等方面的危害。
附图说明
图1为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3生长曲线示意图。
图2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3光学显微照片示意图。
图3为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3对病原菌抑菌作用示意图；
其中：A为大肠杆菌62#、B为金黄色葡萄球菌J9、C为猪链球菌2型SC19、D为副猪嗜血杆菌SH0165、E为猪丹毒丝菌CY0160、F为胸膜肺炎放线杆菌血清7型GZ9903、G为多杀性巴氏杆菌HN06、H为猪霍乱沙门氏菌CVCC2140、I为表皮葡萄球菌CAU0244。
具体实施方式
本发明实施例中试验方法和条件如无特别说明，均为常规方法。这些实施例仅用于说明本发明，本发明的保护范围不受这些实施例的限制。本发明所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案；所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。
实施例1：
植物乳杆菌ZN-3的分离、鉴定：
1、植物乳杆菌菌株分离
从广西某生态养殖猪场采取中草药发酵饲料，称取10g发酵饲料，加入至90ml无菌单蒸水中，25℃，200rpm摇床震荡培养30min,10倍系列稀释至10-7，选取适当稀释度涂布于乳酸菌选择性培养基MRS培养基上，35℃厌氧培养48-72h,挑取平板上单菌落，在MRS培养基平板上多次划线纯化，35℃有氧培养，得到纯的菌落。对纯化菌株进行菌落形态观察和革兰氏染色，挑选革兰氏阳性杆菌。本发明菌株在MRS培养基上菌落直径1-2mm,乳白色，凸起，呈圆形，表面光滑，兼性厌氧。该菌株为革兰氏阳性，圆端直杆状、单个、成对或短链状，不产生芽孢、不运动。该发明菌株在MRS液体培养基中生长曲线见图1，菌体革兰氏染色特性见图2。
2.菌株筛选、鉴定
采用牛津杯平板抑菌法对分离纯化获得的革兰氏阳性杆菌进行抑菌性能测定，经过大量分选，获得1株对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等致病菌表现出良好抑制作用的菌株，命名为ZN-3。
对获得的菌株ZN-3进行生理生化鉴定和16S rDNA鉴定。依据《伯杰细菌鉴定手册》进行生理生化实验，微量生化反应管购买于杭州微生物试剂有限公司。生理生化鉴定结果见表1。利用已发表的16S通用引物(27F和1492R，引物序列为27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’)对菌株ZN-3的16SrDNA基因序列进行扩增和测序，PCR扩增产物送生工生物工程(上海)股份有限公司测序，菌株ZN-3的16S rDNA的核苷酸序列为序列表中的序列1。测序序列在NCBI进行blastn比对，并利用MEGA软件中的clusterW构建系统进化发育树，同源性比对结果显示其16SrRNA与植物乳杆菌(KC422318.1)的序列同源性最高，相似性为99％。结合生理生化特征和16SrRNA比对结果，确认分离菌株ZN-3为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，该菌株已于2017年5月25日保藏与中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，分类命名：植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3，保藏编号为CCTCC NO：M 2017286，地址：中国武汉武汉大学。
表1植物乳杆菌ZN-3生化鉴定结果
注：“+”代表阳性反应；“－”代表阴性反应。
实施例2：
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3抑菌性能
以临床分离致病性菌株作为指示菌，分别为：
猪链球菌2型SC19，副猪嗜血杆菌SH0165，胸膜肺炎放线杆菌血清7型GZ9903，大肠杆菌62#(满晓莹,吴斌等.猪源肠出血性大肠杆菌的分离、鉴定及特性研究.中国人兽共患病学报,2009,25(10):984-987.)，多杀性巴士杆菌HN06(Liu W etc,Complete genomesequence of Pasteruella multocida HN06,a toxigenic strain of serogroupD.journal of Bacteriology,2012Jun,194(12):3292-3293)，猪丹毒丝菌CY0160(Wang yaetc.iTRAQ-based quantitative proteomic analysis reveals potential virulencefactors of Erysipelothrix rhuriopathiae.Journal of Proteomics 160(2017):28-37.)，金黄色葡萄球菌J9(Xu haiyang etc.Evaluation of a novel chimeric B cellepitope-based vaccine against mastitis induced by either Streptococcusagalactiae or Staphylococcus aureus in mice.Clinical and vaccine immunology,2011June 18(6):893-900.)猪霍乱沙门氏菌CVCC2140、、表皮葡萄球菌CAU0244，以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3发酵液为抑菌剂，测定植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)ZN-3的抑菌性能。
1.植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3发酵液的制备：
在培养好的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3平板上挑取单菌落接种于MRS液体培养基中，35℃100rpm培养24h，活菌含量为1.45×109CFU/mL，用于测定其抑菌活性。
2.抑菌实验用平板：以TSA培养基为抑菌实验培养基倒平板，室温下放置1d备用。培养猪链球菌、猪丹毒丝菌指示菌的TSA培养基中加入10％牛血清，培养副猪嗜血杆菌、猪传染性胸膜肺炎指示菌的TSA培养基中加入10％牛血清和万分之一NAD辅酶。
3.指示菌的制备：
将冻干保存的指示菌接种到TSA平板上，划线培养，37℃培养24h，获得单菌落，挑取单菌落在次划线于TSA平板，37℃培养24h，挑取单菌落接种于TSB液体培养基，37℃，200rpm培养18h备用。
将培养好的指示菌菌液用无菌水稀释到107CFU/ml，取稀释好的菌悬液0.1ml均匀涂布于TSA平板上。
4.抑菌试验
待涂布有指示菌的平板表面无明水后，用止血钳将灭菌的牛津杯放入培养基上，取200ul植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3发酵液加入牛津杯中，将培养皿放置37℃培养箱中，24h后观察实验结果并测定抑菌圈大小。
实验结果表明(表2，图3)，本发明菌株植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3对上述临床致病性指示菌均有较好的抑菌效果。
表2植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3对临床致病菌的抑菌效果
注：牛津杯直径为6mm
实施例3：
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3和抗生素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑菌效果比较
分别以金黄色葡萄球菌J9(革兰氏阳性菌)和大肠杆菌62#(革兰氏阴性菌)为指示菌，比较植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3和抗生素的对革兰氏阳性和阴性菌抑菌作用的差异性。所使用的抗生素分别为青霉素、氨苄青霉素、头孢曲松(菌必治)、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、多西环素、氧氟沙星、环丙沙星、多粘菌素B。药敏纸片购买于杭州微生物试剂有限公司。使用NA为抑菌实验平板培养基。
挑取植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3单菌落接种于MRS液体培养基，35℃100rpm培养24h，作为ZN-3抑菌实验用发酵培养液，活菌含量为1.45×109CFU/mL。将培养好的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌指示菌菌液用无菌水稀释到107CFU/ml，取稀释好的菌悬液0.1ml均匀涂布于NA平板上。用记号笔将培养皿均分为6个扇面，分别标记上ZN-3和所用抗生素编号。待涂布有指示菌的平板表面无明水后，用止血钳将无菌牛津杯放入培养基上标注益生菌ZN-3的扇面内，取200ul植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3发酵液加入牛津杯中，同时将抗生素药敏纸片放置于相应编号的扇面中心，将培养皿放置37℃培养箱中，24后观察实验结果并测定抑菌圈大小。
实验结果表明(表3)，在大肠杆菌和金黄色葡萄球菌对部分抗生素表现出耐药性的同时，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3对这两种菌均具有明显的抑菌作用，对大肠杆菌抑菌圈大小为26.45mm，抑菌效果好于11种抗生素中的9种，对金黄色葡萄球菌的抑菌圈大小为31.55，抑菌效果好于11种抗生素中的10种。植物乳杆菌ZN-3对病原菌的高效抑菌作用，说明ZN-3在预防和治疗细菌性疾病中可以部分替代抗生素的使用，减缓抗生素耐药性的产生。
表3植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3和抗生素对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌抑菌效果比较
注：6mm为药敏纸片和牛津杯直径，抑菌圈大小为6mm表明菌株完全耐药。
实施例4：
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3耐酸性能
用盐酸调节MRS液体培养基的pH，使其pH值分别达到2、3、4、5，取1mL活化培养好的植物乳杆菌ZN-3种子液，接种于9mL上述pH值的培养基中，35℃处理2h后，用MRS固体平板计活菌数。
表4植物乳杆菌ZN-3对不同pH的耐受性
pH pH2 pH3 pH4 pH5 原液
菌数(CFU/mL) 7.23×108 9.97×108 1.12×109 1.48×109 1.43×109
实施例5：
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3耐胆盐性能：
配制含胆盐浓度分别为0％、0.1％、0.2％、0.3％(W/V)的NB培养基，取1mL活化培养好的植物乳杆菌ZN-3种子液，接种于9mL上述含不同浓度胆盐的培养基中，35℃处理2h后，用MRS固体平板计活菌数。
表5植物乳杆菌ZN-3对胆盐耐受性
胆盐浓度 0％ 0.10％ 0.20％ 0.30％
菌数(CFU/ml) 1.51×109 1.47×109 1.36×109 1.33×109
实施例6：
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3对仔猪腹泻预防和治疗作用：
选取2栋保育舍中平均日龄相差3天的仔猪各500头，一栋保育舍中500仔猪为对照组，另一栋保育舍中500仔猪为试验组，对照组中每头仔猪每天灌服ZN-3发酵液(活菌数5×108CFU/ml)，每天2次，每次2ml，试验周期为15天，每天记录对照组和试验组腹泻发病和死亡仔猪数目，统计腹泻发病率和死亡率。
表6添加ZN-3发酵液对仔猪腹泻发生率和死亡率的影响
参数 空白对照组 试验组
腹泻发病数/总数 13/500 5/500
腹泻发生率(％) 2.6 1.0
腹泻死亡数/总数 11/500 4/500
腹泻死亡率(％) 2.2 0.8
实施例7：
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3对僵猪、弱猪的作用
在生猪饲养生产中，由于营养(母猪年龄过大、奶水不足；仔猪消化不良等)和疾病(沙门氏菌引起的伤寒；副猪嗜血杆菌引起的厌食、消瘦及抗生素治疗留下的后遗症；猪传染性胸膜肺炎等原发细菌性病原导致的呼吸道疾病及猪链球菌、多杀性巴士杆菌、副猪嗜血杆菌等继发性细菌病原导致的呼吸道疾病)的原因，会产生一些生长迟缓、被毛粗乱、体质消瘦和体重小的僵猪和弱猪。本实施例中选取断奶仔猪中僵猪、弱猪460头，分为2组，空白对照组230头，正常饲喂；试验组230头，正常饲喂条件下每天灌服3次ZN-3发酵液(活菌数5×108CFU/ml)，每次2ml，试验周期为30天。记录采食量、初始均重、末均重、发病数和死亡数。
表7植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)ZN-3对僵猪、弱猪生长性能的影响。
参数 对照组 试验组
平均日采食量(g) 412.5 416.2
初始均重(kg) 5.2 5.1
末均重(kg) 10.5 11.9
平均日增重(g) 176.7 226.7
料肉比 2.33 1.84
发病数(头) 32 27
发病率(％) 12.3 11.7
死亡数(头) 24 16
死亡率(％) 10.4 6.9
由表7可知，添加植物乳杆菌可以显著提高弱仔猪的日增重，平均日增重从176.7g增加到226.7g,增加28％；料肉比从2.33下降至1.84,；死亡率从10.4％下降为6.9％。

Claims (8)

1.一种分离的植物乳杆菌，其特征在于，所述的植物乳杆菌为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）ZN-3，保藏编号为CCTCC NO：M 2017286。
2.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备动物饲料添加剂中的应用。
3.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备调节畜禽肠道疾病的调节剂中的应用。
4.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备动物抗生素替代剂中的应用。
5.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备致病性动物源病原菌抑菌剂中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，所述的致病性动物源病原菌为：大肠杆菌、沙门氏菌、猪链球菌、多杀性巴士杆菌、猪丹毒丝菌、副猪嗜血杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、金黄色葡萄球菌或表皮葡萄球菌。
7.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备耐药性金黄色葡萄球菌抑制剂中的应用。
8.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备耐药性大肠杆菌抑制剂中的应用。
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