CN107201345B - 一种鲫鱼冠状病毒hb93及rt‑pcr检测引物及应用 - Google Patents

一种鲫鱼冠状病毒hb93及rt‑pcr检测引物及应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于病毒检测领域，具体公开了一种鲫鱼冠状病毒HB93及RT‑PCR检测引物及应用，发明人首次从鲫鱼中分离出了一种鲫鱼冠状病毒，该病毒为鲫鱼冠状病毒（Crucian Carp Bafinivirus）HB93，针对该病毒序列设计引物，F1：5'‑CAAAGTAAACCCTGGAGA‑3'，R1：5'‑ATCAATGATGGTGCAGTT‑3'；F2：5'‑TGAAACAATCCAAGAAGA‑3'，R2：5'‑ACAAGTTATAGCCGGTGT‑3'，可对鲫鱼冠状病毒进行检测，该引物的特异性好，灵敏度高。

Description

一种鲫鱼冠状病毒HB93及RT-PCR检测引物及应用
技术领域
本发明属于病毒分子检测技术领域，具体涉及一种鲫鱼冠状病毒HB93及RT-PCR检测引物及应用。
技术背景
国际病毒分类委员会(International Committee on Taxonomy of Viruses,ICTV)于2012年发表了最新的病毒分类第九次报告，将套式病毒目(Nidovirales)中的冠状病毒科(Coronavi ridea)中新设冠状病毒亚科(Coronavirinea)和环曲病毒亚科(Torovirinae)。
冠状病毒科是一类线形单股正链RNA病毒，最早于1937年从鸡身上分离出来，Almeida等对这些病毒进行了形态学研究，电子显微镜观察发现这些病毒的包膜上有形似日冕的棘突，故提出命名这类病毒为冠状病毒[1]。1975年，国际病毒命名和分类委员会正式命名了冠状病毒科。2002-2003年期间，自我国局部地区发生的非典型肺炎，即由冠状病毒属的严重急性呼吸综合征病毒(SARS-CoV)引起，世界上有30多个国家和地区相继报道出现病例，病死率超过10％。2012年，中东地区开始出现新型冠状病毒，病死率超过50％，引起了世界范围的广泛关注，造成社会对冠状病毒的恐慌。因此，对冠状病毒进行深入研究具有重要意义。
目前对冠状病毒科的研究主要集中在冠状病毒亚科，而对环曲病毒亚科研究甚少。其中，2006年鳊鱼病毒属(Bafinivirus)的中的鳊鱼病毒(White bream virus)由Schütze H等科学家在鳊鱼体内发现，这也是目前ICTV分类中确定的唯一以水生动物为宿主的冠状病毒。
目前鲫鱼冠状病毒(Crucian Carp Bafinivirus,CCBV)尚无公开报道，更也无有效的检测方法。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种鲫鱼冠状病毒HB93，所述的病毒分离自鲫鱼病变细胞，该病毒已于2017年5月11日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：鲫鱼冠状病毒(Crucian Carp Bafinivirus)HB93，保藏编号：CCTCC NO：V201722，地址：中国武汉武汉大学。
本发明的另一个目的在于提供了基于鲫鱼冠状病毒HB93的全序列(SEQ ID NO.1所示)与其他病毒的全序列的差异设计的引物，利用该引物可用于检测鲫鱼冠状病毒HB93。
本发明的还有一个目的在于提供一种鲫鱼冠状病毒HB93RT-PCR检测引物，所述的引物为F1：5'-CAAAGTAAACCCTGGAGA-3'，R1：5'-ATCAATGATGGTGCAGTT-3'；F2：5'-TGAAACAATCCAAGAAGA-3'，R2：5'-ACAAGTTATAGCCGGTGT-3'。
本发明还有一个目的在于提供了鲫鱼冠状病毒HB93的应用，所述的应用包括利用该病毒制备成鲫鱼冠状病毒病疫苗，或是制备成鲫鱼冠状病毒的实验室对照品。
本发明的最后一个目的在于提供一种鲫鱼冠状病毒HB93RT-PCR检测引物的应用，包括利用所述的应用制备成鲫鱼冠状病毒检测试剂盒。
为了达到上述目的，本发明采取以下技术措施：
一种鲫鱼冠状病毒HB93，所述的病毒分离自鲫鱼病变细胞，该病毒已于2017年5月11日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：鲫鱼冠状病毒(Crucian CarpBafi nivirus)HB93，保藏编号：CCTCC NO：V201722，地址：中国武汉武汉大学。
将鲫鱼冠状病毒HB93(本发明或称为CCBV-HB93)接种到草鱼性腺细胞(Grass carp ovary cell line,GCO)单层，25℃培养7天，产生细胞病变效应(CPE)，可见GCO细胞收缩变圆、折光度增加，部分细胞开始脱落，细胞单层开始破裂。
培养基：M199，10％胎牛血清，pH 7.0～7.2。
鲫鱼冠状病毒HB93的形态特征：病毒呈棒状，四周有明显的日冕状棘突结构，与典型的冠状病毒形态相符。
鲫鱼冠状病毒HB93的应用，所述的应用包括利用该病毒制备成鲫鱼冠状病毒病疫苗，或是制备成鲫鱼冠状病毒的实验室对照品。
本发明的保护内容还包括基于鲫鱼冠状病毒HB93的全序列(SEQ ID NO.1所示)与其他病毒的全序列的差异设计的引物，所述的引物包括基于该差异序列，利用现有技术设计的诸如荧光定量引物，LAMP引物，数字PCR引物等，利用该引物可用于检测鲫鱼冠状病毒HB93。
一种鲫鱼冠状病毒HB93RT-PCR检测引物，包括F1：5'-CAAAGTAAACCCTGGAGA-3'，R1：5'-ATCAATGATGGTGCAGTT-3'；F2：5'-TGAAACAATCCAAGAAGA-3'，R2：5'-ACAAGTTATAGCCGGTGT-3'。
一种鲫鱼冠状病毒HB93RT-PCR检测引物的应用，包括利用上述引物制备成用于检测鲫鱼冠状病毒检测试剂盒，或直接用于鲫鱼冠状病毒的检测。
优选的，当制备成试剂盒时，该试剂盒的非诊断性检测方法包括：
一种鲫鱼冠状病毒的RT-PCR检测方法，步骤包括：
1)提取待测样品的RNA并逆转录为cDNA；
2)PCR体系
采用25μl反应体系：浓度为40μM的两对引物F1、R1或F2、R2分别各取0.5μL加入两只PCR反应管，两个PCR反应管中再分别加入2.5mM dNTPs 2μL，25mM MgCl2 1.5μL，5U Taq聚合酶0.5μL，模板cDNA 1μl，10×ThermoPol Reaction Buffer 2.5μl，用灭菌双蒸水将两管反应体系均补齐至25μL。反应条件，95℃预变性5min；95℃30s、48℃30s、72℃30s，30个循环；72℃延伸10min，4℃保存。
3)检测结果判定
聚合酶链式反应扩增的最终反应产物取4μL，加入至含有0.5μg/mL溴化乙锭(EB)染料的2％的琼脂糖凝胶中，于100V电压下电泳30min，在凝胶成相系统上成像观察扩增产物的图谱。电泳图片显示343bp和389bp特征性条带，则结果为阳性；如无任何条带，则结果为阴性。
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1.本发明首次自鲫鱼中分离出了冠状病毒，对于鲫鱼冠状病毒的研究具备开拓性的意义。
1.本发明的方法快速简便：本发明所建的RT-PCR方法只需数小时，相比较传统病毒分离方法数天时间，极大的提高了检测效率。
2.本发明的方法特异性强：两对引物对靶序列的特异序列区的识别，保证了PCR方法扩增的高度特异性。
附图说明
图1为本发明提供的引物的灵敏度的实验结果示意图；
其中，泳道1：原始模板、泳道2：10倍稀释、泳道3：100倍稀释、泳道4：1000倍稀释、泳道5：10000倍稀释、泳道6：100000倍稀释、泳道7：1000000倍稀释。
图2为利用本发明提供的引物对感染鲫鱼冠状病毒HB93的鲫鱼组织进行检测的结果示意图；其中泳道P：阳性对照；M：marker
泳道1：待测样品1；
泳道2：待测样品2；
泳道3：待测样品3；
泳道4：待测样品4。
具体实施方式
本发明所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案，所用试剂或原料，如未特别说明，均购自商业渠道或是已公开。
实施例1：
一种鲫鱼冠状病毒HB93，其分离过程如下：
1)将携带病毒的鲫鱼肝、脑、脾、肾等组织取出并碾磨后，培养基稀释100倍，2000rpm离心后取上清过滤，接种到草鱼性腺细胞(Grass carp ovary cell line,GCO)单层，25℃培养7天，产生细胞病变效应(CPE)，可见GCO细胞收缩变圆、折光度增加，部分细胞开始脱落，细胞单层开始破裂。
培养基：M199，10％胎牛血清，pH 7.0～7.2
2)收集病变细胞，利用透射电镜进行形态学鉴定。
3)收集病毒，对其进行全基因组测序，序列为SEQ ID NO.1所示。
鲫鱼冠状病毒的形态特征：病毒呈棒状，四周有明显的日冕状棘突结构，与典型的冠状病毒形态相符，该病毒已于2017年5月11日送至中国典型培养物保藏中心进行保藏，分类命名：鲫鱼冠状病毒(Crucian Carp Bafinivirus)HB93，保藏编号：CCTCC NO：V201722，地址：中国武汉武汉大学。
实施例2：
基于鲫鱼冠状病毒HB93的全序列(SEQ ID NO.1所示)与其他病毒的全序列的差异设计的引物：
本发明以普通PCR为例进行说明，基于该差异序列设计的其他引物，荧光定量引物，LAMP引物，数字PCR引物等，也能完成鲫鱼冠状病毒HB93的检测。
一种鲫鱼冠状病毒HB93RT-PCR检测引物，包括F1：5'-CAAAGTAAACCCTGGAGA-3'，R1：5'-ATCAATGATGGTGCAGTT-3'；F2：5'-TGAAACAATCCAAGAAGA-3'，R2：5'-ACAAGTTATAGCCGGTGT-3'。
实施例3：
利用鲫鱼冠状病毒HB93RT-PCR检测引物对鲫鱼冠状病毒HB93的检测，方法包括：
1.鲫鱼组织或感染细胞总RNA的提取及cDNA的合成：采用提取待测样品的总RNA。配置逆转录反应体系：3μL总RNA，Oligo(dT)18primer 1μL，灭菌双蒸水8μL，混匀65℃5min后立刻冰浴；将5×Reaction Buffer 4μl，RNase抑制剂1μl，5mM dN TPs 2μL，M-MLV逆转录酶1μL加入冰浴的反应液中，混匀后，42℃1h，95℃5min，将获得cDNA模板-20℃保存备用。
2.聚合酶链式反应扩增：
采用25μl反应体系：浓度为40μM的两对引物F1、R1或F2、R2分别各取0.5μL加入两只PCR反应管，再分别加入2.5mM dNTPs 2μL，25mM MgCl2 1.5μL，5U Taq聚合酶0.5μL，模板cDNA 1μl，10×ThermoPol Reaction Buffer 2.5μl，用灭菌双蒸水将两管反应体系均补齐至25μL。反应条件，95℃预变性5min；95℃30s、48℃30s、72℃30s，30个循环；72℃延伸10min，4℃保存。
F1：5'-CAAAGTAAACCCTGGAGA-3'，R1：5'-ATCAATGATGGTGCAGTT-3'；
F2：5'-TGAAACAATCCAAGAAGA-3'，R2：5'-ACAAGTTATAGCCGGTGT-3'。
3.聚合酶链式反应扩增产物分析：
取聚合酶链式反应扩增扩增的最终反应产物4μL，加入至含有0.5μg/mL溴化乙锭(E B)染料的2％的琼脂糖凝胶中，于100V电压下电泳30min，在凝胶成相系统上成像观察扩增产物的图谱。若F1和R1能扩增出343bp且F2和R2能扩增出389bp特征性条带，则该样品为阳性；如无任何条带，则为阴性。
实施例4：
鲫鱼冠状病毒RT-PCR检测引物特异性试验
利用实施例3所述的方法，对表1中的待检病毒样品进行检测，同时设置阴性对照组(双蒸水)和阳性对照组(CCBV-HB93)，待检病毒样品具体为：鲤春病毒血症病毒(SVCV)，草鱼呼肠孤病毒873(GCRV-873)，草鱼呼肠孤病毒9014(GCRV-9014)，传染性造血器官坏死病毒(IHNV)。
表1鲫鱼冠状病毒RT-PCR检测试剂盒特异性试验
试验编号 名称 扩增结果
1 CCBV-HB93 +
2 SVCV －
3 GCRV-873 －
4 GCRV-9014 －
5 IHNV －
结果如表1所示，仅阳性对照组(CCBV-HB93)可检测到343bp和389bp特征性条带，其余组均无特征条带，说明鲫鱼冠状病毒HB93RT-PCR检测引物具备很强的特异性。
实施例5：
鲫鱼冠状病毒RT-PCR检测引物的灵敏度
将浓度为1785ng/μL的CCBV-HB93cDNA模板10倍梯度稀释，利用实施例3的方法，检测利用本发明提供的引物PCR的检测限，结果如图1所示，可见105倍稀释还可检测到目的条带，也就是最低可检测17.85pg/μL的cDNA模板。
实施例6：
鲫鱼冠状病毒HB93RT-PCR检测引物在制备鲫鱼冠状病毒检测试剂盒中的应用：
1.鲫鱼组织总RNA的提取及cDNA的合成：采用提取感染鲫鱼冠状病毒HB93的鲫鱼的肝脾肾等内脏组织的总RNA。配置逆转录反应体系：3μL总RNA，Oligo(dT)18primer1μL，灭菌双蒸水8μL，混匀65℃5min后立刻冰浴；将5×Reaction Buffer 4μl，RNase抑制剂1μl，5mM dNTPs 2μL，M-MLV逆转录酶1μL加入冰浴的反应液中，混匀后，42℃1h，95℃5min，将获得cDNA模板-20℃保存备用。
2.聚合酶链式反应扩增：
采用25μl反应体系：浓度为40μM的两对引物F1、R1或F2、R2分别各取0.5μL加入两只PCR反应管，再分别加入2.5mM dNTPs 2μL，25mM MgCl2 1.5μL，5U Taq聚合酶0.5μL，模板cDNA 1μl，10×ThermoPol Reaction Buffer 2.5μl，用灭菌双蒸水将两管反应体系均补齐至25μL。反应条件，95℃预变性5min；95℃30s、48℃30s、72℃30s，30个循环；72℃延伸10min，4℃保存。
F1：5'-CAAAGTAAACCCTGGAGA-3'，R1：5'-ATCAATGATGGTGCAGTT-3'；
F2：5'-TGAAACAATCCAAGAAGA-3'，R2：5'-ACAAGTTATAGCCGGTGT-3'。
3.聚合酶链式反应扩增产物分析：
取聚合酶链式反应扩增的最终反应产物4μL，加入至含有0.5μg/mL溴化乙锭(EB)染料的2％的琼脂糖凝胶中，于100V电压下电泳30min，在凝胶成相系统上成像观察扩增产物的图谱。电泳图片显示343bp和389bp特征性条带，则结果为阳性；如无任何条带，则结果为阴性。
结果如图2所示，阳性对照(鲫鱼冠状病毒HB93)显示389bp和343bp特征性条带，阴性(水)对照无明显条带，1-4号感染了鲫鱼冠状病毒HB93的鲫鱼组织样品显示343bp和389bp特征性条带，说明样品1-4为鲫鱼冠状病毒阳性，与实际情况相符。
实施例7：
鲫鱼冠状病毒HB93在制备鲫鱼冠状病毒的实验室对照品中的应用：
即将本发明提供的鲫鱼冠状病毒HB93作为对照品，将待确认的其他鲫鱼冠状病毒与本发明的病毒进行生理生化上的比较，并且将待测样品跟SEQ ID NO.1所示序列进行比较。
SEQUENCE LISTING
<110> 湖北出入境检验检疫局检验检疫技术中心
<120> 一种鲫鱼冠状病毒HB93及RT-PCR检测引物及应用
<130> 一种鲫鱼冠状病毒HB93及RT-PCR检测引物及应用
<160> 5
<170> PatentIn version 3.1
<210> 1
<211> 26000
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
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aactttcagt acaactacga agacttcccc tatcttcatt tcgccccaac aataacatct17640
ctccgcgtat gcttccgatg cccaacccaa atctttaacg tatggagtca ctactacacc17700
aaacatgaca tcccactcaa tgcctttaaa gacggcggct catttgaaat cattaaacac17760
cactcatgcg ccagagtttc agaaacagct caccctctgg tcacaagact ctcagaagaa17820
aatccagact ccatgatcct ttgtaactac aaagctccag tctcctgcct cgaaaacgct17880
ctaacaattg actcaagtca aggcagaacc taccgagacg tcatagtcgt gttgctcgga17940
aacacaaatt tcacccgtgt acccaaccga tttattgtcg ctgcttcaag agctacacat18000
tctctcaaag tttacctttc tgaagagatg tacgaccact actccacact attcaattgg18060
ccacacttag aaacaccaca aatccagcca caaaacgcct tcacaacacc taacaactta18120
gaagaaacaa atctcacaat ggccgctaat aacatcagct ctctcgtcat ctgtgatata18180
gaattcttcc atcaagttcg cagccttgaa cccaaagttt gcacacttga agtcggtgac18240
attaccatcc atacatcaac aagcgccaaa cagatcatcg ttccacgcgt ttcatcaaca18300
tctagtgaaa tttttccaaa atactttgct cataacatgc caaccctcac tctccccaaa18360
ccaacaccaa aaggagattg ggactacatg aaacctcacc gtggaatttc tcgccgcatc18420
aacatcgaca gaactcacaa actcttctcc catatggctt gcacaacaac tggaactccc18480
atctatgttc tctacggtgc ccgcaacgat atcctagccc tttctaaatt aaatatcgtt18540
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aacatcaaat actactgcac ccaacacgcc aaaccagcag cacctctcgc tggaaccatc18660
aatgctaaat acattgacat ccaaacagaa aagatcactc ttgccaaacg ccatgctgaa18720
atttgtgatc accaccatgg tgcagcacac acatctgatg tcgacaccat tatgaccgga18780
tgcatcttag gcaatgaatt gacactagca actcaacatc tcagccagct tctcttcacg18840
gaacccttca gccactactc aagtgtaatt tctccagata tgcaccttac agtttcaacc18900
cgcccttgca ggacactcgg acaacttatc ataactaaca tcaatggtaa gaactacaga18960
ttctcaatcc aaccacacct ggatcttaaa acacactttt ttaacatcgt tgctaaacaa19020
ggccactcct ctgttttagt caacgttcca gaaacagttc cgacctgtac taaaattcgc19080
ggtgaaacct gcgctacatg ctacaacacc tggcttatcc tccaagaact tcatgctgaa19140
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acacaaattt taaccaaggt aatgtctgtc actccaacat ctacaggcaa aatcatggtc19260
catctcgaca acacactctc cttccccttc ctactcgatt taccaacaag tatccaaaca19320
tactgtaaca agatcgataa accaatccct aaccctgcaa ttttcacttc ccttaaaatt19380
acacacactt acggattcgg aacaccattt gtccctatga caaacaaccc actcattcca19440
tctatcctca gtaaccaaaa acttgctgac aacccagact actactacat cacacatcaa19500
ccatcaaaca gtgaacttcc tttcatgact tcttcaccaa ctgctggctt ctattgctat19560
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cgaattgtcc gtggccaact acaaaaacct gatattggcc tcttctccac taatagactt19680
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catgtctcac ttggcgaaac aacatcaaca tcctggacaa tcggtggcat gcatctactc19800
ccagccttcc aaaccacaac caattggcag atcacatcag aacatacacc aattctctca19860
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gaccaactac ttgaattaat cgactataaa aacatcacag tctcaaaagt aatagctatt19980
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gcctacccag tacaacaagc aaagatgcac gatgtgacaa aacaccacgt cactcctgac20100
tacataatct ggcctaaaat tttcagcgac tcacctgtcg ataaatggga tcttcctaat20160
tacaaccaac cacctaaagg tctcacatcc aacgtcaaca tccataaata cgatcaaatg20220
tgtgcattct ttgacaaaca cctaaccatt ccaacaaatg gccacgtaca ccatcttggt20280
catgccggac aagtttacag ccctggtgat atagttttaa aaagctattt cacaaaagct20340
cgtttaacat catacgactt gcgtgattgc atatcaacca gcgaaacagc tcaccctgat20400
gacaactggc gtgcacactt catcctgtca gatgcatact gtcccaacac cgactttaca20460
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tacagacaaa acctattgta cgtcccctat gctagtgagt ataccggtac cagagtttat20760
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cttttttcac acatgacaca aactatgctt tccttcttgc tcttaagtat aatggtactt21060
tcattcctgc cactatggct atgcctgcta acaacctttc gcaaacatat acactcaact21120
ataaaaatgt ctttgtcaac gtacctgatt ctcaactccc tcctcctcaa agaagtaata21180
ctcagttggc tgttgttgca accacagatt cctgtcttac tgcaacgtat caagcgattc21240
ctggtactat tcctggcctt tcaactaatc acatgtattg tgtgaaattt actcagtcgt21300
ccaactttgt gtacttgtac gataccactg tgaaaacccc tgttggcgta cttttaaaaa21360
acccaactgc cccagtagtt acaactatcc tatccactat catggttaac cgccctacaa21420
cagtttcaac ctcacagctg ctagctaata tctactccct tatgagaacg agaagcaacg21480
tgattcaaca acaattcact tgcacatctt gcctctttgc catcgacgca tctacaggaa21540
gagcagctac ctcaccaact acttacctcc taaacaactg gtccccatcc ttctttgaaa21600
ctaaaacagc tatgttggac cacgtctcta tgaacaccat ctaccaaaca gcacgtggtg21660
ttactcgtga aaccttcact ggttacatcc ttaacgcagc taaaaccgct gcctacgctc21720
gtggttctcc cgcctattac atcttttcat tcgcagccat tgcacgctac catcaagcaa21780
tggttactcc ttataactat aacatcggaa aactttgtga agcaacagct gcttgctgct21840
tatcaaatgg cattgaacat tttgacatct atacctggct atttcactac tacggcttta21900
tgaaatccaa agtctacagt gaaactttta caacaaaccc agtactaaca tcagttatta21960
acttagccac atcaattaaa ggtaaacatt ccgtgtactg tgacctaaca ccttacagtt22020
catttactgc ctataatttg atcatgcttc aagacgttgt cgaacaatac caagggacac22080
gtacaacatc cacatacgct aacaattttc tcaacctcac tgatattaac ggatacctac22140
cctattccac cgataccccc ctcccacaaa actaccaaaa ctacatgcct tttgcaacct22200
acctacttgc aacattttac tcttctttca ctttacaaca gaaatttgac ttccacagat22260
tcctccaatc tgtctgttat tatgactctg gtttcatttc tcgtaaccaa gcctaccatt22320
ctatctgtca cataatcact ctgaaaacat catcttcagt accttacccc gcagaactcc22380
aatggccctt tactgctctc ccttcctctg gttatgactc ttatccagtt tctacagatt22440
taggcacagt agctgttggc aacacaaatc cacttgatta ccctggaatt tgttaccaat22500
cagtttgctt gactcatcct actattaact tcagactttt gttatcagaa ttaccaatta22560
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atttcaaaac atcacagttg ggaacagttt tcattacact ctacgattct accactacat22680
gcacaattca acagactact tactctcgct ctgctgtcct gcgccaagtc aacacgttta22740
caccaaatgc tactgattta gtcgtgccct acggcaaaac accaatatac aatggagcct22800
ataatattaa ttccactgca tctggtgctg tctctctctc taccaacaca cactacattc22860
cacgtctcct cacttcagtt ttaacaccgc aaagtgacta caagattaca cctacaacca22920
ctaatcttga accattcgtg gaaattaatg gcacaacctt ttactacgat gctaatcaag22980
cctacgttaa tacatcggac gtttatcaag ctaacgttga ttttggactc ccccaaacat23040
tttctcttga taccagcttc cttaattgca cagctttcct ctgcgcttct gactacaaat23100
gtatcgccga cttttcacca atctgctcag ctacacaacc actaatcgac gccctactcc23160
aaacctacac actgtacaat caacaactta cactgtacaa ttcttccctg ctcacaattc23220
aagccgctgc aaactacctc tacgacacaa gaacacgtac tagacgatca ctcctatcta23280
ctgtcaacct tggctacggt gacgtttttc aacaaccagc ctgggtctac gaaataggtg23340
caacagctgc aattcctatg atcggccctg cagtctcagt cggtttgtta gccagtagag23400
tagcatctat tgaatcaacc ctctatcaaa ttacccaagg agtgaaggag tctattatgg23460
ctatgaacac caagcttgat aagattgcca acattttaca ctcagacatc gaaagattag23520
gattaacagt taacacatta gcctcttcat tcaacacatt cactaaacaa gtaacagata23580
aatttgcctc tgttgatgtt gcatttaacg acttatcaac atcactgaac acactcacca23640
caacaacaac tgttggtgcc tcttatgcag ctcaaattaa cttcgcaaca accacgctaa23700
ccaatttaga agttcaaatc tctcaaacaa cagatcacgc tctatcttgc atcgctgcgc23760
ttaatgaaca tgttctttct ccacactgca tttccgtttc acaacttagc gcttacacac23820
ctaatgctct ctctaacatt ggtgaaaaac tagtactaac tcactacatc aacggatcac23880
tcatcacatt ctaccatctc attgctagca agggagttta cagacccctg ccaaaaatgt23940
ataattctac acaccattta gttgcaacaa ctggcttcta tgacggccat tgtatcttct24000
gtggtgaaca ttattgtgat atcagcgttt ctgtaccatg tgattatgcg tacgaaccac24060
ttaaatccac tgtactagca gcttacccac taacaactgg tgtagccctt ctcactcttg24120
actctacagc tactaacttc gttattaact ataataatgc ccctctcatt tcatcaagcg24180
ttccaaaacc acctatcatc aataacaccg atggtacagt tattacgctc caacaacaag24240
taatccagct ccaaactcaa ttcgatcact ttaacatctc gtcgaatttt cacgtgtcag24300
aaatccaacc agtcatagac tactacaatg cacaaatcaa ctcatctcta aaccagatag24360
ttgatttcgg aaatggctca acatctaatg taggaacaat catcctcatt gtaactatag24420
ttgcccttgc tcttgcatca gctatcgcca tcatctgtgg attaaagcac taaagaccaa24480
caagttgcaa tggcttccac cggtaaaaac accaccgcag gagatcccaa ccttgggttt24540
cacttacaac ttaatgatgt ccttaacacc ctggacatct ccggcttcag catctcaaat24600
tctcatttga tgagtgcgat gctgaccctt aaccttctct ggagcgctat ctttctagtc24660
tccttctatc taatcttgga catggttatg tactacgttc ccctgctcaa taagattcca24720
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gcttttctcg gcatggtgaa gactttctat atgctcattg caatggcgct gtcctactac24900
cgacaccgta acatcgcagt ggcattgaac ggccctaatg tcgttatggt taacggcaca24960
gcagtccact ctgatttcat ccccacgtct gtgacactgg tgaagaaaga tggtgaactc25020
tattttcaag gaacaaaggt ccccggaaac aacttgattg atgcaaccgt gaagatcttc25080
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tacgctagat ttgagctcaa gtcgaccaac acccactatg aactccaaac tttctatcct25200
tcgcaaacag aaactaaatc tgtttgaaac actagcgaaa acaaattaca atggcattct25260
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acctcctaga tgctcgaggg cgtcttacac aatcagagat caaccagctg tatttccaaa25560
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aactgaagaa agtatatata atcacatctc tcacactatc ctttataaac tatatattgg25860
ggtggcatta ggccattcca aagaattctc taagatcaca ctcctcgata cctgactagt25920
catcacgttt cctggggtct gctctttaac attctactat cctataagat ctaaaactat25980
ccaaaaaaaa aaaaaaaaaa 26000
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
caaagtaaac cctggaga 18
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
atcaatgatg gtgcagtt 18
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
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<210> 5
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
acaagttata gccggtgt 18

Claims (5)

1.一种鲫鱼冠状病毒，所述的鲫鱼冠状病毒为鲫鱼冠状病毒(Crucian CarpBafinivirus)HB93，保藏编号为：CCTCC NO：V201722。
2.权利要求1所述的鲫鱼冠状病毒HB93的RT-PCR检测引物，所述的引物为F1：5'-CAAAGTAAACCCTGGAGA-3'，R1：5'-ATCAATGATGGTGCAGTT-3'；F2：5'-TGAAACAATCCAAGAAGA-3'，R2：5'-ACAAGTTATAGCCGGTGT-3'。
3.权利要求1所述的鲫鱼冠状病毒HB93在制备鲫鱼冠状病毒病疫苗中的应用。
4.权利要求1所述的鲫鱼冠状病毒HB93在制备鲫鱼冠状病毒对照品中的应用。
5.权利要求2所述的引物在制备鲫鱼冠状病毒检测试剂盒中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109182277B (zh) * 2018-09-07 2021-05-07 中国水产科学研究院长江水产研究所 一种黄鳝弹状病毒CrERV及RT-PCR检测引物及应用
CN110982941B (zh) * 2020-01-02 2021-02-23 武汉海关技术中心 一种鲤冠状病毒hl39的rt-rpa检测引物及应用
CN111270009B (zh) * 2020-01-02 2023-03-28 中国水产科学研究院黑龙江水产研究所 一种鲤冠状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR检测引物及应用
CN111057684B (zh) * 2020-01-02 2020-12-25 武汉海关技术中心 一种鲤冠状病毒hl39及rt-pcr检测引物及应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104846124A (zh) * 2015-05-21 2015-08-19 广州利洋水产科技股份有限公司 鲫鱼鲤疱疹病毒2型特异性pcr检测试剂盒及检测方法
WO2017060662A1 (en) * 2015-10-07 2017-04-13 The Secretary Of State For Health Method for providing a control for use in a screen for pathogenic virus

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104846124A (zh) * 2015-05-21 2015-08-19 广州利洋水产科技股份有限公司 鲫鱼鲤疱疹病毒2型特异性pcr检测试剂盒及检测方法
WO2017060662A1 (en) * 2015-10-07 2017-04-13 The Secretary Of State For Health Method for providing a control for use in a screen for pathogenic virus

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
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