CN107119145A - 一种基于ddPCR定量检测ctDNA的方法 - Google Patents
一种基于ddPCR定量检测ctDNA的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107119145A CN107119145A CN201710570752.5A CN201710570752A CN107119145A CN 107119145 A CN107119145 A CN 107119145A CN 201710570752 A CN201710570752 A CN 201710570752A CN 107119145 A CN107119145 A CN 107119145A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pcr
- ctdna
- dna
- detected based
- digital pcr
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6851—Quantitative amplification
Abstract
本发明涉及生物技术领域,具体涉及一种基于数字PCR检测ctDNA的方法。本发明的一种基于数字PCR定量检测病毒的方法,包括(1)使用循环游离DNA提取试剂盒提取血浆循环游离DNA;(2)循环游离DNA的富集及分离;(3)以步骤(2)中分离出的ctDNA为模板的PCR扩增反应;(4)检测微滴。本发明针对ctDNA在外周血中的含量非常低的特点,采用PCR方法对ctDNA进行富集以及有效的捕获,以捕获的ctDNA为模板进行数字PCR扩增检测,大大提高了检测的灵敏度,从而提高了诊断的准确性,在癌症检测方面,为早期诊断提供了依据,同时本发明公开的基于数字PCR定量检测病毒的方法,操作简单,大大降低了检测成本。
Description
技术领域
本发明涉及血液循环DNA测定技术领域,具体涉及一种基于ddPCR定量检测ctDNA的方法。
背景技术
血液循环DNA(Circulating DNA,ctDNA),又称游离DNA或无细胞DNA(Cell-freeDNA),主要来源于细胞的凋亡和死亡。是肿瘤细胞体细胞DNA经脱落或者当细胞凋亡后释放进入循环系统,可以被定性、定量和追踪。对于这类ctDNA的成功捕获,携带信息的准确解读为癌症早期基因信息的获取,癌症的早期诊断、预后检测、耐药评估提供了一条准确的途径。
但是,这类技术目前仍未得到有效解决和广泛应用。原因之一在于:ctDNA在外周血中的含量非常低,尤其是与正常DNA(normal DNA,nDNA)相比,其相对含量极低,每10ml全血平均只能提取到50ng左右的游离DNA,目前的检测技术还难以达到直接检测外周血中ctDNA的水平。而且,目前的检测方法均需要先从血清或血浆中提取DNA,然后扩增基因组中某个基因的方式,计算ctDNA的浓度或基因组拷贝数。由于个体间、不同病理状态间ctDNA含量及片段完整程度存在较大差异,即便不考虑操作者的因素,所用提取方法和试剂的不同就会造成提取效率存在巨大差别。在此基础上的ctDNA测定结果误差会更大。但直接用血浆或血清扩增,血清或血浆中含有的蛋白质等会严重干扰PCR,使标本间的扩增效率不一致。
1999年Vogelstein首次提出了“数字PCR”的概念,“数字PCR”以其极高的敏感性、绝对计算能力和无需定标等特性疾病诊断工作中得到了广泛应用。数字PCR是通过对样本进行微小单元化处理,可确定低至单拷贝的待检靶分子的绝对数目,且数字PCR不依靠任何校准物或外标便可直接计数目标分子数,为绝对定量PCR技术。因此数字PCR(digital PCR)特别适用于依靠Ct值不能很好分辨的应用领域:拷贝数变异、突变检测、基因相对表达研究(如等位基因不平衡表达)、二代测序结果验证、miRNA表达分析、单细胞基因表达分析等。
发明内容
本发明为了克服现有技术的上述不足,提供了一种基于数字PCR检测ctDNA的方法,大大提高了检测的精确性和灵敏度。
为了实现上述目的,本发明是通过以下技术方案实现的:
一种基于数字PCR检测ctDNA的方法,所述方法包括如下步骤:
(1)使用循环游离DNA提取试剂盒提取血浆循环游离DNA;
(2)循环游离DNA的富集:将水相和油相混合、振荡配成PCR反应体系并进行乳液PCR扩增,分离水相和油相,得到水相的PCR扩增产物,使用特异性结合循环肿瘤DNA的探针序列捕获所述水相的PCR扩增产物中的循环肿瘤DNA;
(3)配置PCR数字PCR反应体系
配制PCR水相,PCR水相包括上游引物、下游引物、PCR模板、PCRmix以及双蒸水,上述配合的比例关系为0.5-0.7:0.5-0.7:0.5-0.7:0.1-0.2:13-16:41-45,所述PCR模板为步骤(2)中PCR扩增产物;
配制PCR油相,将65%-68%的甘油、5%-10.5%的Trition X-100、5%-10.5%的司盘60、5%-8%的壬基苯基醚IgelCO520依次均匀混合,获得的溶液作为反应油相备用;
取1体积水相加到3体积的油相中,涡旋搅拌并反应后,得到油包水微滴PCR反应体系;
(4)PCR扩增反应:将上述充分乳化的油水体系分装,手动转移到96孔PCR板上,孔板用锡箱热封后设定PCR反应条件进行PCR扩增,扩增后将96孔PCR板置于QX100A微滴分析仪中,有荧光信号的微滴为阳性,无荧光信号的微滴为阴性。
进一步地,所述步骤(2)中的水相中含有循环游离DNA模板、正反向引物、dNTPs、PCR缓冲液和DNA聚合酶。
进一步地,所述DNA聚合酶为高保真DNA聚合酶,所述高保真DNA聚合酶为高保真的Klenow Fragment、KAPA HiFi家族高保真DNA聚合酶、Phusion家族高保真DNA聚合酶、Q5家族高保真DNA聚合酶中的任一种。
进一步地,所述水相DNA模板总量1-10ng、正反向引物终浓度为0.1-1μM、dNTPs终浓度为0.5-2mM、PCR缓冲液终浓度为1倍、DNA聚合酶终浓度为0.1-1U。
进一步地,所述步骤(2)中所述探针序列与所述循环肿瘤DNA特异性结合以后,通过链霉亲和素磁珠特异性结合生物素而捕获所述循环肿瘤DNA。
进一步地,所述步骤(3)中还包括Illumina测序仪中使用的测序接头序列,所述测序接头序列对应的正反向引物序列分别为:
5’-TCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’和
5’-TGAACCTGAACCGCTCTTCCGATCT-3’。
进一步地,所述的步骤(3)中得到的油包水微滴的粒径为100nm~1μm。
本发明的有益效果:(1)本发明公开的一种基于数字PCR检测ctDNA的方法,针对ctDNA在外周血中的含量非常低的特点,采用PCR方法对ctDNA进行富集以及有效的捕获,以捕获的ctDNA为模板进行数字PCR检测,大大提高了检测的灵敏度,从而提高了诊断的准确性,在癌症检测方面,为早期诊断提供了依据。(2)本发明公开的基于数字PCR定量检测病毒的方法,操作简单,大大降低了检测成本。
具体实施方式
展示一下实例来具体说明本发明的某些实施例,且不应解释为限制本发明的范围。对本发明公开的内容可以同时从材料、方法和反应条件进行改进,所有这些改进,均应落入本发明的的精神和范围之内。
实施例1:血浆游离循环肿瘤DNA提取流程(DNA提取试剂盒,QIAamp CirculatingNucleicAcidKit)
1、用EDTA抗凝采血管收集患者血液,3000rpm,离心10分钟后,分离上清,将上清再离心,20000×g,离心10分钟后,将上清分离备用。
2、吸取100ul Proteinase K至50ml离心管中。
3、吸取1ml血浆加至50ml离心管中。
4、吸取0.8ml BufferACL(含有1.0ug carrier RNA)至50ml离心管后,将离心管帽扣紧,脉冲涡旋30秒。
5、60度孵育30分钟
6、打开离心管帽,加入1.8ml BufferACB,再将离心管帽扣紧,脉冲涡旋15-30秒。
7、将装有混合液体的50ml离心管冰浴5分钟。
8、将QIAamp Mini column安置于QIAvac 24Plus的Vacconnector上,在QIAampMini column上再安置一个20ml的拓展管。
9、将50ml离心管内的混合液体加入至带有拓展管的QIAamp Mini column内,利用真空泵将混合液体过滤,然后弃掉拓展管。
10、向QIAamp Mini column内加入600ul BufferACW1,利用真空泵将液体过滤。
11、向QIAamp Mini column内加入750ul BufferACW2,利用真空本将液体过滤。
12、向QIAamp Mini column内加入750ul的无水乙醇,利用真空泵将液体过滤。
13、将QIAamp Mini column的帽扣紧后,置于一个干净的2ml收集管内,高速离心(20000×g)3分钟。
14、将QIAamp Mini column置于另一新的收集管中,打开帽,56度孵育10分钟。
15、将QIAamp Mini column置于新的1.5ml离心管中,向QIAamp Mini column的膜上加入30ul BufferAVE,扣紧帽后,室温孵育3分钟。
16、将带有QIAamp Mini column的1.5ml离心管高速离心(20000×g)1分钟,洗脱血浆游离循环肿瘤DNA(ctDNA)。
实施例2:ctDNA富集、分离
1、PCR扩增富集ctDNA
利用油包水乳液体系中的微液滴作为反应器进行PCR扩增,从而富集ctDNA,PCR体系包括油相和水相的反应体系。油相作为载体,本发明中使用的油相可以不作限定;水相中反应体系中包括:ctDNA模板总量1-10ng、dNTPs(包括dATP、dTTP、dCTP、dGTP)终浓度为0.5-2mM、PCR缓冲液、DNA聚合酶终浓度为0.1-1U和双蒸水(ddH2O)。其中,DNA模板为血浆游离循环肿瘤DNA。在进行PCR之前,DNA双链进行两步修饰,第一步,对双链DNA末端进行修复;第二步将“A”加入到DNA片段的3’末端;设计PCR引物,包括两部分:基因互补配对部分和接头(adapter)部分,其中PCR引物无需末端修饰,基因互补配对部分位于3’端,PCR扩增时与单链ctDNA发生碱基配对;接头部分位于5’端,在后续的基因测序中发挥作用;所述DNA聚合酶为高保真DNA聚合酶,所述高保真DNA聚合酶为高保真的Klenow Fragment、KAPA HiFi家族高保真DNA聚合酶、Phusion家族高保真DNA聚合酶、Q5家族高保真DNA聚合酶中的任一种。
本实施例中探针序列与所述循环肿瘤DNA特异性结合以后,通过链霉亲和素磁珠特异性结合生物素而捕获所述循环肿瘤DNA。为提高捕获ctDNA效率,基因互补配对部分的长短可根据具体情况调整,一般25bp左右,不低于20bp;在接头部分设计时,结合具体的测序设备选择序列,长度一般不低于20bp。
PCR扩增富集ctDNA的具体操作方法为:水相和油相依次加入到1.5mL不沾壁(non-stick)的反应管中。两相混合后,将装有反应体系的反应管放在组织破碎仪(QiagenTissue Lyser II)中震荡90秒,参数设为13Hz。取下反应试管,将油水体系分装至PCR反应管,根据以下设置参数进行PCR反应:
反转录:温度50℃,10min,1个循环;
预变性:温度95℃,10min,1个循环;
变性:温度94℃,30s,退火;温度58℃,60s,共40个循环;
结束反应:温度98℃,10min,1个循环。
2、分离ctDNA
收集反应管中的水相和油相,9000g离心5min,去掉油相,此时水相仍然呈乳球状沉淀在反应管底部,加入400μL(两倍体积)的饱和乙醚,混合物充分涡旋,15000rpm离心2min,去掉上层的乙醚;乙醚重复洗涤一次,得到水相的PCR反应产物。
实施例3:数字PCR检测ctDNA
1.配置数字PCR反应体系
配制PCR水相,在超净台中往试管中加入5.22μl,102μm的上游引物和下游引物和PCRmix49.42μl,然后将试管转移到PCR模板加入区加1.66fmol的模板,在超净台中滴加双蒸水足至260μl,充分混匀;
配制PCR油相,一次性往试管中加入1.95ml甘油、0.3ml的Trition X-100、0.3ml的司盘60、0.45ml的辛癸酸甘油酯依次均匀混合,获得的溶液作为反应油相备用;
分别取水相PCR和油相PCR油相按流量比为1:3的比例在线混合,混合的同时在摇床上涡旋搅拌并反应,得到油包水微滴。
2.数字PCR扩增反应
将上述充分乳化的油水体系分装,手动转移到96孔PCR板上,孔板用锡箱热封后设定PCR反应条件进行PCR扩增;扩增条件为:(1)反转录:温度50℃,10min,1个循环;(2)预变性:温度95℃,10min,1个循环;(3)变性:温度94℃,30s,退火;温度58℃,60s,共40个循环;(4)结束反应:温度98℃,10min,1个循环。
3.检测微滴
PCR反应后,将96孔PCR板置于QX100液滴分析仪中,依次吸取每个样本中的微滴并逐一通过检测器,有荧光信号的微滴为阳性,无荧光信号的微滴为阳性;
以上所述,仅为本发明较佳的具体实施方式,但本发明的保护范围并不局限于此,任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内,根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变,都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种基于数字PCR检测ctDNA的方法,其特征在于,所述方法包括如下步骤:
(1)使用循环游离DNA提取试剂盒提取血浆循环游离DNA;
(2)循环游离DNA的富集:将水相和油相混合、振荡配成PCR反应体系并进行乳液PCR扩增,分离水相和油相,得到水相的PCR扩增产物,使用特异性结合循环肿瘤DNA的探针序列捕获所述水相的PCR扩增产物中的循环肿瘤DNA;
(3)配置数字PCR反应体系:
配制PCR水相,PCR水相包括上游引物、下游引物、PCR模板、PCRmix以及双蒸水,上述配合的比例关系为0.5-0.7:0.5-0.7:0.5-0.7:0.1-0.2:13-16:41-45,所述PCR模板为步骤(2)中PCR扩增产物;
配制PCR油相,将65%-68%的甘油、5%-10.5%的Trition X-100、5%-10.5%的司盘60、5%-8%的壬基苯基醚IgelCO520依次均匀混合,获得的溶液作为反应油相备用;
取1体积水相加到3体积的油相中,涡旋搅拌并反应后,得到油包水微滴PCR反应体系;
(4)PCR扩增反应:将上述充分乳化的油水体系分装,手动转移到96孔PCR板上,孔板用锡箱热封后设定PCR反应条件进行PCR扩增,扩增后将96孔PCR板置于QX100A微滴分析仪中,有荧光信号的微滴为阳性,无荧光信号的微滴为阴性。
2.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR检测ctDNA的方法,其特征在于,所述步骤(2)中的水相中含有循环游离DNA模板、正反向引物、dNTPs、PCR缓冲液和DNA聚合酶。
3.根据权利要求2所述的一种基于数字PCR检测ctDNA的方法,其特征在于,所述DNA聚合酶为高保真DNA聚合酶,所述高保真DNA聚合酶为高保真的Klenow Fragment、KAPA HiFi家族高保真DNA聚合酶、Phusion家族高保真DNA聚合酶、Q5家族高保真DNA聚合酶中的任一种。
4.根据权利要求2所述的一种基于数字PCR检测ctDNA的方法,其特征在于,所述水相DNA模板总量1-10ng、正反向引物终浓度为0.1-1μM、dNTPs终浓度为0.5-2mM、PCR缓冲液终浓度为1倍、DNA聚合酶终浓度为0.1-1U。
5.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR检测ctDNA的方法,其特征在于,所述步骤(2)中所述探针序列与所述循环肿瘤DNA特异性结合以后,通过链霉亲和素磁珠特异性结合生物素而捕获所述循环肿瘤DNA。
6.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR检测ctDNA的方法,其特征在于,所述步骤(3)中还包括Illumina测序仪中使用的测序接头序列,所述测序接头序列对应的正反向引物序列分别为
5’-TCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3
和5’-TGAACCTGAACCGCTCTTCCGATCT-3’。
7.根据权利要求1所述的一种基于数字PCR检测ctDNA的方法,其特征在于,所述的步骤(3)中得到的油包水微滴的粒径为100nm~1μm。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710570752.5A CN107119145A (zh) | 2017-07-13 | 2017-07-13 | 一种基于ddPCR定量检测ctDNA的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201710570752.5A CN107119145A (zh) | 2017-07-13 | 2017-07-13 | 一种基于ddPCR定量检测ctDNA的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN107119145A true CN107119145A (zh) | 2017-09-01 |
Family
ID=59731327
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201710570752.5A Pending CN107119145A (zh) | 2017-07-13 | 2017-07-13 | 一种基于ddPCR定量检测ctDNA的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN107119145A (zh) |
Cited By (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109234363A (zh) * | 2018-10-19 | 2019-01-18 | 华中科技大学 | 一种相隔离的油包水透明粗乳液及其应用 |
CN109932224A (zh) * | 2017-12-18 | 2019-06-25 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种富集提取循环肿瘤dna的方法 |
CN110240999A (zh) * | 2018-03-09 | 2019-09-17 | 林云富 | 一种提高循环肿瘤dna检出率的检测装置及方法 |
CN110777194A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-02-11 | 苏州索真生物技术有限公司 | 一种检测高度片段化样本的变性增强数字微滴pcr方法 |
CN113136421A (zh) * | 2021-05-24 | 2021-07-20 | 长春维石检测技术服务有限公司 | 一种基于微流控系统的w/o/w型pcr扩增后产物的微乳滴及其制备方法 |
Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104846100A (zh) * | 2015-05-24 | 2015-08-19 | 北京工业大学 | 一种可用于微滴数字pcr的微滴制备方法 |
CN105219862A (zh) * | 2015-10-16 | 2016-01-06 | 宋现让 | 一种快速准确的定量测定血液循环dna的方法 |
CN105722994A (zh) * | 2013-06-17 | 2016-06-29 | 维里纳塔健康公司 | 用于确定性染色体中的拷贝数变异的方法 |
WO2016168844A1 (en) * | 2015-04-17 | 2016-10-20 | The Translational Genomics Research Institute | Quality assessment of circulating cell-free dna using multiplexed droplet digital pcr |
CN106103742A (zh) * | 2015-01-06 | 2016-11-09 | 深圳市海普洛斯生物科技有限公司 | 一种富集循环肿瘤dna的方法和试剂 |
CN106399536A (zh) * | 2016-10-24 | 2017-02-15 | 南京麦科林生物医药科技有限公司 | 体液循环dna定量检测方法及试剂盒 |
CN106591472A (zh) * | 2017-01-11 | 2017-04-26 | 北京泛生子基因科技有限公司 | 检测人类egfr基因t790m突变的试剂盒、反应体系及方法 |
CN106755350A (zh) * | 2016-12-02 | 2017-05-31 | 苏州首度基因科技有限责任公司 | cfDNA文库qPCR定量标准品的制备方法 |
CN106834275A (zh) * | 2017-02-22 | 2017-06-13 | 天津诺禾医学检验所有限公司 | ctDNA超低频突变检测文库的构建方法、试剂盒及文库检测数据的分析方法 |
-
2017
- 2017-07-13 CN CN201710570752.5A patent/CN107119145A/zh active Pending
Patent Citations (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105722994A (zh) * | 2013-06-17 | 2016-06-29 | 维里纳塔健康公司 | 用于确定性染色体中的拷贝数变异的方法 |
CN106103742A (zh) * | 2015-01-06 | 2016-11-09 | 深圳市海普洛斯生物科技有限公司 | 一种富集循环肿瘤dna的方法和试剂 |
WO2016168844A1 (en) * | 2015-04-17 | 2016-10-20 | The Translational Genomics Research Institute | Quality assessment of circulating cell-free dna using multiplexed droplet digital pcr |
CN104846100A (zh) * | 2015-05-24 | 2015-08-19 | 北京工业大学 | 一种可用于微滴数字pcr的微滴制备方法 |
CN105219862A (zh) * | 2015-10-16 | 2016-01-06 | 宋现让 | 一种快速准确的定量测定血液循环dna的方法 |
CN106399536A (zh) * | 2016-10-24 | 2017-02-15 | 南京麦科林生物医药科技有限公司 | 体液循环dna定量检测方法及试剂盒 |
CN106755350A (zh) * | 2016-12-02 | 2017-05-31 | 苏州首度基因科技有限责任公司 | cfDNA文库qPCR定量标准品的制备方法 |
CN106591472A (zh) * | 2017-01-11 | 2017-04-26 | 北京泛生子基因科技有限公司 | 检测人类egfr基因t790m突变的试剂盒、反应体系及方法 |
CN106834275A (zh) * | 2017-02-22 | 2017-06-13 | 天津诺禾医学检验所有限公司 | ctDNA超低频突变检测文库的构建方法、试剂盒及文库检测数据的分析方法 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
HONGDO DO等: "Digital PCR of Genomic Rearrangements for Monitoring Circulating Tumour DNA", 《CIRCULATING NUCLEIC ACIDS IN SERUM AND PLASMA-CNAPS IX》 * |
徐婷等: "循环肿瘤DNA检测在恶性肿瘤诊治中的应用进展与问题思考", 《临床检验杂志》 * |
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109932224A (zh) * | 2017-12-18 | 2019-06-25 | 中国科学院大连化学物理研究所 | 一种富集提取循环肿瘤dna的方法 |
CN110240999A (zh) * | 2018-03-09 | 2019-09-17 | 林云富 | 一种提高循环肿瘤dna检出率的检测装置及方法 |
CN110240999B (zh) * | 2018-03-09 | 2022-09-06 | 浙江品级基因科技有限公司 | 一种提高循环肿瘤dna检出率的检测装置及方法 |
CN109234363A (zh) * | 2018-10-19 | 2019-01-18 | 华中科技大学 | 一种相隔离的油包水透明粗乳液及其应用 |
CN110777194A (zh) * | 2019-12-03 | 2020-02-11 | 苏州索真生物技术有限公司 | 一种检测高度片段化样本的变性增强数字微滴pcr方法 |
CN113136421A (zh) * | 2021-05-24 | 2021-07-20 | 长春维石检测技术服务有限公司 | 一种基于微流控系统的w/o/w型pcr扩增后产物的微乳滴及其制备方法 |
CN113136421B (zh) * | 2021-05-24 | 2022-06-03 | 长春维石检测技术服务有限公司 | 一种基于微流控系统的w/o/w型pcr扩增后产物的微乳滴及其制备方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN107119145A (zh) | 一种基于ddPCR定量检测ctDNA的方法 | |
CN106591428B (zh) | 一种胃癌新型分子标记物hsa_circ_0001017的检测及应用 | |
CN107955835A (zh) | 一种检测brca1/2基因突变的引物池及检测方法 | |
CN103866016B (zh) | 一种循环肿瘤细胞检测试剂盒及其应用 | |
CN107541791A (zh) | 血浆游离dna甲基化检测文库的构建方法、试剂盒及应用 | |
US20210308678A1 (en) | Co-detection and digital quantification of bioassay | |
CN106755350A (zh) | cfDNA文库qPCR定量标准品的制备方法 | |
CN102839169B (zh) | 肠道病毒rna提取试剂盒及相应提取纯化肠道病毒rna的方法 | |
CN104313698A (zh) | 一种检测胆汁淤积性黄疸致病基因的dna文库及其应用 | |
CN107567502A (zh) | 用于预测前列腺癌的基于全血的mrna标记物和检测该mrna标记物的方法 | |
CN106191311A (zh) | 一种快速检测豚鼠LCMV、SV、PVM、Reo‑3病毒的多重液相基因芯片方法及试剂 | |
CN109234394A (zh) | 一种肝癌诊断标志物及其筛选方法 | |
CN108949961A (zh) | 用于检测腺病毒肺炎的试剂盒及其筛选 | |
Mar-Aguilar et al. | Use of serum-circulating miRNA profiling for the identification of breast cancer biomarkers | |
CN107641649B (zh) | 检测微卫星nr27位点稳定性的引物对、试剂盒及方法 | |
CN105274100A (zh) | 人TWIST1/Vimentin基因甲基化检测标志物及试剂盒 | |
Winter et al. | Circulating tumour cell RNA characterisation from colorectal cancer patient blood after inertial microfluidic enrichment | |
CN105154533B (zh) | 诊断早期肝癌的miRNA组合及其试剂盒 | |
CN107090522A (zh) | 一种基于数字pcr定量检测病毒的方法 | |
CN110144386A (zh) | 用于检测pole基因突变的引物、探针及试剂盒 | |
CN104328209A (zh) | 白血病微小残留病wt1基因快速检测方法的引物和试剂盒 | |
CN105779606B (zh) | 诊断和预示局灶节段性肾小球硬化的标志物 | |
CN106755330A (zh) | 癌症相关基因表达差异检测试剂盒及其应用 | |
CN107586851A (zh) | 一种kras、nras、braf基因突变检测试剂盒 | |
CN102399899A (zh) | 一种检测cyp1a2基因多态性的液相芯片方法及其试剂盒 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170901 |