CN107083336B - 一种复合核苷功能曲的生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种复合核苷功能曲的生产方法,属于酿酒技术领域。本发明方法是首先分别培养拟青霉核苷菌固态菌种、细菌混合种子液、酵母菌混合种子液及霉菌固态混合菌种;然后按一定比例混合协同发酵,利用现代化数控发酵罐生产多微核苷功能菌复合菌液;再采用圆盘制曲技术得到复合核苷功能曲。本发明通过多菌株、多种类功能菌混合培养、协同发酵,实现多微核苷类发酵液复合制曲,达到了菌种培养、制曲等工艺的一体化;将其应用于窖池发酵酿酒,提高了原酒的品质,同时实现了微分子酒中特有健康因子,具有保肝护肝、抗氧化等作用的核苷类物质的形成;生产得到既具有洋河绵柔特色又富含核苷类特征成分等小分子生物活性的健康白酒。
Description
技术领域
本发明涉及一种复合核苷功能曲的生产方法,属于酿酒技术领域。
背景技术
大曲是白酒生产过程中产生风味物质和生物活性成分的重要因素,其富含微生物的种群直接影响白酒的香型、口感及风格。传统制曲工艺一般采用单菌株制曲再混合不同种群的曲块应用于酿酒,达到多种微生物的富集;但是菌株和菌种较单一,工艺繁琐、生产周期较长,且不同满足消费者对健康的享受和体验。本发明采用多菌株、多菌种混合协同发酵,再利用现代化数控发酵罐和圆盘制曲技术,实现多微核苷类发酵液复合制曲,达到了菌种培养、制曲等工艺的一体化,同时实现了微分子酒中特有健康因子,具有保肝护肝、抗氧化等作用的核苷类物质的形成。
发明内容
本发明的目的在于:提供一种复合核苷功能曲的生产方法,简化传统单菌株制曲再混合酿酒的繁琐工艺,缩短生产周期,提高生产效率;通过多株、多种类功能菌复合培养发酵和复合制曲获得复合核苷功能曲应用于微分子酒生产,提高原酒质量,生产得到既具有洋河绵柔特色又富含核苷类特征成分等小分子生物活性的健康白酒。
本发明方法,是先分别制备核苷菌固态菌种、细菌种子液、酵母菌种子液和霉菌固态菌种,然后按一定配比混合,得到多微核苷功能菌混合菌液,再利用多微核苷功能菌混合菌液制备复合核苷功能曲。
所述方法包括如下步骤:
(1)培养核苷菌固态菌种:将蝙蝠蛾拟青霉菌斜面活化后,接种到灭菌的复粮麸皮固体培养基中,于温度25~30℃下培养7~8d;
(2)培养细菌种子液:选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、环状芽孢杆菌,其按照4:1:1:2比例接入肉汤琼脂试管斜面培养基培养,培养温度35~37℃,培养2~3d;然后细菌混合菌按10%的接种量接入牛肉膏蛋白胨培养基中液体培养,培养温度35~37℃,pH7.0~7.5,培养2~3d;再采用相同的液体培养基及条件,转接入发酵罐中再次扩大培养1~2d即可;
(3)培养酵母菌种子液:选用酿酒酵母、汉逊酵母、毕赤酵母、假丝酵母,其按照5:2:1:1比例接入米曲汁琼脂试管斜面培养基,培养温度28~30℃,培养4~5d;然后酵母混合菌按10%的接种量接入米曲汁培养基中液体培养,培养温度28~30℃,pH4.5~5.0,培养2~3d;再采用相同的液体培养基及条件,转接入发酵罐中再次扩大培养2~3d;
(4)培养霉菌固态菌种:选用黄色毛霉、米根霉、米曲霉,其按照5:1:1比例接入PDA琼脂斜面或米曲汁斜面培养基,培养温度32~34℃,培养4~5d;然后霉菌混合菌按8%的接种量接入到灭菌后的质量比麸皮:水=4:5~1:1的固体培养基中扩大培养,培养温度32~34℃,培养2~3d;
(5)多微核苷功能菌混合菌液:取步骤(1)-(4)制备好的固态菌种或者种子液,按照核苷菌固态菌种:细菌种子液:酵母菌种子液:霉菌固态菌种=1:(4~6):(3~4):(2~3)的质量配比混合均匀,即得多微核苷功能菌混合菌液;
(6)制备复合核苷曲:按照麸皮:大米粉=3:1~4:1的质量比配料后置于制曲机中,加入1~1.2倍料量的营养水混合均匀,灭菌;然后将多微核苷功能菌混合菌液按8~10%的接种量接种,控制温度28~32℃,湿度55~70%,培养12~15d,并每天翻曲一次;然后经烘干,再储存数月并保持通风干燥,即得复合核苷功能曲。
其中,所述复粮麸皮固体培养基是将麸皮和大米粉按质量比3:1~4:1配料后,加入1.5倍料量的营养水混合均匀得到的。
所述营养水,每1000g中,含葡萄糖25~35g、蛋白胨4~6g、饴糖5~7g、酵母膏3~5g,硫酸镁0.7~1.0g、磷酸二氢钾0.7~1.0g,并控制pH值5.5~7.0。
所述多微核苷功能菌混合菌液中细菌的菌体浓度≥108个/mL,酵母的菌体浓度≥107个/mL。
所述米曲汁培养基为添加1.0~1.5%饴糖的米曲汁溶液。其米曲汁溶液制备方法为:取质检合格的备用糯米,按糯米:水=1:4配制后,加入1.0~1.5%饴糖,置55~60℃恒温水浴中糖化3~4h,将糖化完全的糖化液中加入鸡蛋清澄清(用一个鸡蛋清,加水20ml,调匀至生泡沫),搅拌煮沸,过滤;再将滤液用水稀释,使糖度调整为10~12°Bx。
在本发明的一种实施方式中,所述蝙蝠蛾拟青霉菌的斜面活化具体是:将蝙蝠蛾拟青霉菌接种到PDA琼脂斜面斜面培养基,控制培养温度25~30℃,培养4~6d。
在本发明的一种实施方式中,所述蝙蝠蛾拟青霉菌是CICC 14065或者ACCC50930;所述枯草芽孢杆菌是CCTCC AB130016或CCTCC AB130007、地衣芽孢杆菌是CCTCCAB91060、多粘类芽孢杆菌是CGMCC 1.2979、环状芽孢杆菌是CCTCC AB207850;所述酿酒酵母是CGMCC 5748或CCTCC AY20001、汉逊酵母是CGMCC 2.764或CCTCC AY92053、毕赤酵母是CGMCC 2.1473、假丝酵母是CGMCC 2.865或CCTCC AY91001;所述黄色毛霉是CGMCC 3.4885或CCTCC M 2012075、米根霉是CGMCC 3.5085或CGMCC 3.5075、米曲霉是CGMCC 3.800或CGMCC3.4383。
在本发明的一种实施方式中,所述培养细菌种子液步骤中,接种至斜面培养基时接种比例的控制,是将各菌制成浓度差不多的菌悬液,按照菌悬液体积比作为接种比例;斜面培养好的细菌混合菌接入液体培养基时接种比例的控制,是将混合菌制成菌体浓度数量级在107~108个/mL的菌悬液,然后再接种。酵母种子液、霉菌固态菌种制备过程中所涉及的比例控制方法,也类似。
本发明具有以下优点:
1、蝙蝠蛾拟青霉菌固态发酵培养所用原料易得,成本较低,并能自身发酵产生丰富的营养成分,且核苷类物质的含量较高,可实现机械化培养制曲。
2、复合多微功能曲中加入蝙蝠蛾拟青霉菌,经过固态发酵产生具有保肝护肝、抗氧化等生物活性的核苷类成分,不仅体现洋河绵柔风格特色又更加营养健康。
3、该生产方法生产的复合核苷功能曲,用于绵柔型白酒酿造,不仅能保证绵柔型白酒的正常发酵,还能协同发酵提高微量成分含量,增加有益微量成分、种类,提升了优质基酒的质量,基酒中多种微生物定向富集,特征风味成分含量明显提高并有效互补,充分发挥了酿酒微生物协同发酵的特性。
4、该生产工艺采用多菌株、多菌种复合培养、制曲一体化模式,再利用现代数字化发酵罐和圆盘制曲技术,工艺成熟,操作简单,缩短生产周期,自动化生产。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步说明本发明的技术解决方案,这些实施例不能理解为是对技术方案的限制。
实施例1:依以下步骤生产复合核苷功能曲
(1)培养核苷菌固态菌种:选用蝙蝠蛾拟青霉菌接种到PDA琼脂斜面斜面培养基,控制培养温度25℃,培养4d;然后取粉碎的大米粉,按照麸皮:大米粉=3:1的质量比配料后,加入1.5倍料量的营养水混合均匀,得到复粮麸皮培养基,再将拟青霉菌斜面菌种按5%的接种量接入到灭菌后的复粮麸皮固体培养基中扩大培养,控制培养温度25℃,培养7d即可。
(2)培养细菌种子液:选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、环状芽孢杆菌,其按照4:1:1:2比例接入肉汤琼脂试管斜面培养基培养,培养温度35℃,培养2d;然后细菌混合菌按10%的接种量接入牛肉膏蛋白胨培养基中液体培养,培养温度35℃,pH7.2,培养2d;再采用相同的液体培养基及条件,转接入发酵罐中再次扩大培养1d即可。
(3)培养酵母菌种子液:选用酿酒酵母、汉逊酵母、毕赤酵母、假丝酵母,其按照5:2:1:1比例接入米曲汁琼脂试管斜面培养基,培养温度28℃,培养4d;然后酵母混合菌按10%的接种量接入米曲汁培养基中液体培养,培养温度28℃,pH4.5,培养2d;再采用相同的液体培养基及条件,转接入发酵罐中再次扩大培养2d即可。
(4)培养霉菌固态菌种:选用黄色毛霉、米根霉、米曲霉,其按照5:1:1比例接入PDA琼脂斜面或米曲汁斜面培养基,培养温度32℃,培养4d;然后霉菌混合菌按8%的接种量接入到灭菌后的质量比麸皮:水=4:5的固体培养基中扩大培养,培养温度32℃,培养3d即可。
(5)制备复合核苷菌液:取培养成熟菌体浓度合格的菌种,按照核苷菌固态菌种:细菌种子液:酵母菌种子液:霉菌固态菌种=1:4:3:2的质量配比混合均匀,即得多微核苷功能菌混合菌液。
(6)制备复合核苷曲:
按照麸皮:大米粉=3:1的质量比配料后置于全封闭式圆盘制曲培养机中,加入1倍料量的营养水混合均匀,高温灭菌后冷却至室温;将多微核苷功能菌混合菌种按8%的接种量接入圆盘接种曲机,再转送入圆盘培养机中开启耕耙翻拌混匀并摊平,保持培养基厚度25cm,设定培养程序进行保湿保温培养,控制温度28℃,湿度55%,培养12d,并每天翻曲一次。培养成熟后转入圆盘烘干机进行烘干,再储存数月并保持通风干燥,即得复合核苷功能曲。
所述复合核苷菌种中细菌的菌体浓度≥108个/mL,酵母的菌体浓度≥107个/mL。
所述米曲汁培养基为添加1.0%饴糖的米曲汁溶液。
所述营养水为:以1000g水计,含葡萄糖28g、蛋白胨4g、饴糖5g、酵母膏3g,硫酸镁0.8g、磷酸二氢钾0.8g,并控制pH值5.7。
实施例2:依以下步骤生产复合核苷功能曲
(1)培养核苷菌固态菌种:选用蝙蝠蛾拟青霉菌接种到PDA琼脂斜面斜面培养基,控制培养温度28℃,培养5d;然后取粉碎的大米粉,按照麸皮:大米粉=4:1的质量比配料后,加入1.5倍料量的营养水混合均匀,得到复粮麸皮培养基,再将拟青霉菌斜面菌种按5%的接种量接入到灭菌后的复粮麸皮固体培养基中扩大培养,控制培养温度28℃,培养7d即可。
(2)培养细菌种子液:选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、环状芽孢杆菌,其按照4:1:1:2比例接入肉汤琼脂试管斜面培养基培养,培养温度36℃,培养2d;然后细菌混合菌按10%的接种量接入牛肉膏蛋白胨培养基中液体培养,培养温度36℃,pH7.3,培养2d;再采用相同的液体培养基及条件,转接入发酵罐中再次扩大培养2d即可。
(3)培养酵母菌种子液:选用酿酒酵母、汉逊酵母、毕赤酵母、假丝酵母,其按照5:2:1:1比例接入米曲汁琼脂试管斜面培养基,培养温度29℃,培养5d;然后酵母混合菌按10%的接种量接入米曲汁培养基中液体培养,培养温度29℃,pH4.8,培养3d;再采用相同的液体培养基及条件,转接入发酵罐中再次扩大培养3d即可。
(4)培养霉菌固态菌种:选用黄色毛霉、米根霉、米曲霉,其按照5:1:1比例接入PDA琼脂斜面或米曲汁斜面培养基,培养温度33℃,培养5d;然后霉菌混合菌按8%的接种量接入到灭菌后的质量比麸皮:水=1:1的固体培养基中扩大培养,培养温度33℃,培养3d即可。
(5)制备复合核苷菌液:取培养成熟菌体浓度合格的菌种,按照核苷菌固态菌种:细菌种子液:酵母菌种子液:霉菌固态菌种=1:5:3:3的质量配比混合均匀,即得多微核苷功能菌混合菌液。
(6)制备复合核苷曲:按照麸皮:大米粉=4:1的质量比配料后置于全封闭式圆盘制曲培养机中,加入1.2倍料量的营养水混合均匀,高温灭菌后冷却至室温;将多微核苷功能菌混合菌液按10%的接种量接入圆盘接种曲机,再转送入圆盘培养机中开启耕耙翻拌混匀并摊平,保持培养基厚度25cm,设定培养程序进行保湿保温培养,控制温度30℃,湿度65%,培养14d,并每天翻曲一次。培养成熟后转入圆盘烘干机进行烘干,再储存数月并保持通风干燥,即得复合核苷功能曲。
所述复合核苷菌种中细菌的菌体浓度≥108个/mL,酵母的菌体浓度≥107个/mL。
所述米曲汁培养基为添加1.2%饴糖的米曲汁溶液。
所述营养水为:以1000g水计,含葡萄糖30g、蛋白胨5g、饴糖6g、酵母膏4g,硫酸镁0.8g、磷酸二氢钾0.8g,并控制pH值6.0。
实施例3:依以下步骤生产复合核苷功能曲
(1)培养核苷菌固态菌种:选用蝙蝠蛾拟青霉菌接种到PDA琼脂斜面斜面培养基,控制培养温度30℃,培养6d;然后取粉碎的大米粉,按照麸皮:大米粉=4:1的质量比配料后,加入1.5倍料量的营养水混合均匀,得到复粮麸皮培养基,再将拟青霉菌斜面菌种按5%的接种量接入到灭菌后的复粮麸皮固体培养基中扩大培养,控制培养温度30℃,培养8d即可。
(2)培养细菌种子液:选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、环状芽孢杆菌,其按照4:1:1:2比例接入肉汤琼脂试管斜面培养基培养,培养温度37℃,培养3d;然后细菌混合菌按10%的接种量接入牛肉膏蛋白胨培养基中液体培养,培养温度37℃,pH7.5,培养3d;再采用相同的液体培养基及条件,转接入发酵罐中再次扩大培养2d即可。
(3)培养酵母菌种子液:选用酿酒酵母、汉逊酵母、毕赤酵母、假丝酵母,其按照5:2:1:1比例接入米曲汁琼脂试管斜面培养基,培养温度30℃,培养5d;然后酵母混合菌按10%的接种量接入米曲汁培养基中液体培养,培养温度30℃,pH5.0,培养3d;再采用相同的液体培养基及条件,转接入发酵罐中再次扩大培养3d即可。
(4)培养霉菌固态菌种:选用黄色毛霉、米根霉、米曲霉,其按照5:1:1比例接入PDA琼脂斜面或米曲汁斜面培养基,培养温度34℃,培养5d;然后霉菌混合菌按8%的接种量接入到灭菌后的质量比麸皮:水=1:1的固体培养基中扩大培养,培养温度34℃,培养3d即可。
(5)制备复合核苷菌液:取培养成熟菌体浓度合格的菌种,按照核苷菌固态菌种:细菌种子液:酵母菌种子液:霉菌固态菌种=1:6:4:3的质量配比混合均匀,即得多微核苷功能菌混合菌液。
(6)制备复合核苷曲:按照麸皮:大米粉=4:1的质量比配料后置于全封闭式圆盘制曲培养机中,加入1.2倍料量的营养水混合均匀,高温灭菌后冷却至室温;将多微核苷功能菌混合菌液按10%的接种量接入圆盘接种曲机,再转送入圆盘培养机中开启耕耙翻拌混匀并摊平,保持培养基厚度25cm,设定培养程序进行保湿保温培养,控制温度32℃,湿度70%,培养15d,并每天翻曲一次。培养成熟后转入圆盘烘干机进行烘干,再储存数月并保持通风干燥,即得复合核苷功能曲。
所述复合核苷菌种中细菌的菌体浓度≥108个/mL,酵母的菌体浓度≥107个/mL。
所述米曲汁培养基为添加1.5%饴糖的米曲汁溶液。
所述营养水为:以1000g水计,含葡萄糖35g、蛋白胨6g、饴糖7g、酵母膏5g,硫酸镁1.0g、磷酸二氢钾1.0g,并控制pH值7.0。
实施例4:复合核苷功能曲在酿酒方面的应用
对实施例1-3生产的复合核苷功能曲应用于酿酒生产,采用“六分法”工艺,首先配料、润料,以高粱和大米(糯米、籼米)为主原料,辅以小麦、玉米混合配料,与清蒸后的稻壳翻拌均匀,加浆水进行润料、拌料后,一起加入发酵好的中层酒醅制成粮醅;然后蒸粮蒸酒,将粮醅装入甑桶,上面覆盖发酵的下层酒醅进行蒸煮,同时馏酒;再泼洒打量水、摊晾撒曲、入窖发酵,将蒸熟粮醅出甑后摊匀,立即打入热浆水,在晾糟机上迅速摊晾、冷却后,加入复合核苷功能曲,翻拌均匀入窖池发酵。
分别对试验车间的6个小组进行了复合核苷功能曲入池发酵馏酒的生产试验,如表1所示,试验组窖池相对传统绵柔型生物大曲窖池出酒率平均提高1.93%,升级率平均提高5.07%,核苷类物质平均提高49.97mg/L;所产微分子酒的出酒率、升级率和核苷类物质含量显著提升,酒体绵柔风格突出,香气复合,口感舒适、绵甜柔和。
所述传统绵柔型生物大曲是细菌曲、酵母菌曲、霉菌曲分别单菌株纯种培养制曲,再将三种曲按质量比5:3:2混合制的(具体见文献:绵柔型复合多微功能曲生产方法)。
表1两种制曲方式产酒质比较
虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。
Claims (7)
1.一种复合核苷功能曲的生产方法,其特征在于,所述方法是先分别制备核苷菌固态菌种、细菌种子液、酵母菌种子液和霉菌固态菌种,然后按一定配比混合,得到多微核苷功能菌混合菌液,再利用多微核苷功能菌混合菌液制备复合核苷功能曲;
所述方法包括如下步骤:
(1)培养核苷菌固态菌种:将蝙蝠蛾拟青霉菌斜面活化后,接种到灭菌的复粮麸皮固体培养基中,于温度25~30℃下培养7~8d;
(2)培养细菌种子液:选用枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、多粘类芽孢杆菌、环状芽孢杆菌,其按照4:1:1:2比例接入肉汤琼脂试管斜面培养基培养,培养温度35~37℃,培养2~3d;然后细菌混合菌按10%的接种量接入牛肉膏蛋白胨培养基中液体培养,培养温度35~37℃,pH7.0~7.5,培养2~3d;再采用相同的液体培养基及条件,转接入发酵罐中再次扩大培养1~2d即可;
(3)培养酵母菌种子液:选用酿酒酵母、汉逊酵母、毕赤酵母、假丝酵母,其按照5:2:1:1比例接入米曲汁琼脂试管斜面培养基,培养温度28~30℃,培养4~5d;然后酵母混合菌按10%的接种量接入米曲汁培养基中液体培养,培养温度28~30℃,pH4.5~5.0,培养2~3d;再采用相同的液体培养基及条件,转接入发酵罐中再次扩大培养2~3d;
(4)培养霉菌固态菌种:选用黄色毛霉、米根霉、米曲霉,其按照5:1:1比例接入PDA琼脂斜面或米曲汁斜面培养基,培养温度32~34℃,培养4~5d;然后霉菌混合菌按8%的接种量接入到灭菌后的质量比麸皮:水=4:5~1:1的固体培养基中扩大培养,培养温度32~34℃,培养2~3d;
(5)多微核苷功能菌混合菌液:取步骤(1)-(4)制备好的固态菌种或者种子液,按照核苷菌固态菌种:细菌种子液:酵母菌种子液:霉菌固态菌种=1:(4~6):(3~4):(2~3)的质量配比混合均匀,即得多微核苷功能菌混合菌液;
(6)制备复合核苷曲:按照麸皮:大米粉=3:1~4:1的质量比配料后置于制曲机中,加入1~1.2倍料量的营养水混合均匀,灭菌;然后将多微核苷功能菌混合菌液按8~10%的接种量接种,控制温度28~32℃,湿度55~70%,培养12~15d,并每天翻曲一次;然后经烘干,再储存数月并保持通风干燥,即得复合核苷功能曲;
所述蝙蝠蛾拟青霉菌是CICC 14065或者ACCC 50930;所述枯草芽孢杆菌是CCTCCAB130016或CCTCC AB130007、地衣芽孢杆菌是CCTCC AB91060、多粘类芽孢杆菌是CGMCC1.2979、环状芽孢杆菌是CCTCC AB207850;所述酿酒酵母是CGMCC 5748或CCTCC AY20001、汉逊酵母是CGMCC 2.764或CCTCC AY92053、毕赤酵母是CGMCC 2.1473、假丝酵母是CGMCC2.865或CCTCC AY91001;所述黄色毛霉是CGMCC 3.4885或CCTCC M 2012075、米根霉是CGMCC 3.5085或CGMCC 3.5075、米曲霉是CGMCC 3.800或CGMCC3.4383;
所述营养水,每1000g中,含葡萄糖25~35g、蛋白胨4~6g、饴糖5~7g、酵母膏3~5g,硫酸镁0.7~1.0g、磷酸二氢钾0.7~1.0g,并控制pH值5.5~7.0;
所述米曲汁培养基为添加1.0~1.5%饴糖的米曲汁溶液。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述复粮麸皮固体培养基是将麸皮和大米粉按质量比3:1~4:1配料后,加入1.5倍料量的营养水混合均匀得到的。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述多微核苷功能菌混合菌液中细菌的菌体浓度≥108个/mL,酵母的菌体浓度≥107个/mL。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(1)中蝙蝠蛾拟青霉菌的斜面活化具体是:将蝙蝠蛾拟青霉菌接种到PDA琼脂斜面斜面培养基,控制培养温度25~30℃,培养4~6d。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤(6)具体是:按照麸皮:大米粉=3:1~4:1的质量比配料后置于全封闭式圆盘制曲培养机中,加入1~1.2倍料量的营养水混合均匀,高温灭菌后冷却至室温;将多微核苷功能菌混合菌液按8~10%的接种量接入圆盘接种曲机,再转送入圆盘培养机中开启耕耙翻拌混匀并摊平,保持培养基厚度25cm,设定培养程序进行保湿保温培养,控制温度28~32℃,湿度55~70%,培养12~15d,并每天翻曲一次;培养成熟后转入圆盘烘干机进行烘干,再储存数月并保持通风干燥,即得复合核苷功能曲。
6.根据权利要求1-5任一所述方法得到的复合核苷功能曲。
7.权利要求6所述复合核苷功能曲在酿酒方面的应用。
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