CN106967819A - 检测高IgE综合征STAT3基因突变的试剂盒和方法 - Google Patents

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王淑
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Abstract

本发明公开了一种检测高IgE综合征STAT3基因突变的试剂盒和方法，其包括(i)血液DNA抽提试剂；(ii)检测体系PCR扩增反应液；(iii)测序体系试剂；其中扩增STAT3基因全外显子序列的扩增引物和测序引物。并采用Sanger测序技术。本发明可快速地将高IgE综合征病患者体内STAT3基因全外显子的突变检测出来。利用本发明完成的检测结果准确，可以辅助诊断高IgE综合征，对早期干预及早期治疗有重要的参考意义。

Description

检测高IgE综合征STAT3基因突变的试剂盒和方法
背景技术
本发明属于医疗检测的生物技术领域，特别是针对高IgE综合征STAT3基因突变的检测试剂盒和检测方法。
背景技术
高IgE综合征(HIES)是一种罕见而复杂的原发性免疫缺陷病，临床以顽固湿疹样皮疹、反复细菌感染引起的皮肤及肺部脓肿，并伴有血清IgE水平显著升高为特征。可分为2型，Ⅰ型为常染色体显性遗传(AD-HIES)，为STAT3基因突变所致；Ⅱ型为常染色体隐性遗传(AR-HIES)，为TYK-2或Dock8基因突变所致。STAT3是一种信号转录因子，可被多种细胞因子和生长因子激活，包括IL-6、IL-10、IL-22、IL-23及巨噬细胞集落刺激因子。AD-HIES中STAT3突变干扰以上细胞因子激活的信号转导途径，从而导致免疫反应的改变。研究发现STAT3突变的AD-HIES患者Th17分化发育障碍，不能分泌IL-17来抵御胞外菌和真菌。急性炎症因子IL-6信号通路受损或许可以解释HIES“冷脓肿”，有学者指出HIES是炎症反应过强和过弱的矛盾体，肺大泡是炎症过剩的表现，而冷脓肿是炎症反应不足的表现。目前尚无根治HIES的手段，治疗的重点是积极预防感染和加强皮肤护理。HIES发病率＜10-6，发病无性别和种族差异，多为散发，表现为AD-HIES，而AR-HIES少见。
STAT3基因位于染色体17q21，含24个外显子，编码770个氨基酸的STAT3蛋白，包括N端保守序列、卷曲螺旋区、DNA结合域(DBD)、连接区、SH2区和转录活性区域，是Th17细胞发育必须的转录因子和多种细胞因子信号途径的中心因子。热点突变位于STAT3蛋白的DBD和SH2结构域，DBD是STAT3与靶基因DNA结合部位，DBD区的突变使STAT3的DNA结合活性降低75％，SH2区与受体招募和STAT磷酸化二聚体的形成有关。最常见的错义突变是R328W/Q和V637M，也有剪接位点突变，缺失突变，没有无义突变。
研究表明，病人体内STAT3等位基因中的一条发生了突变，从而引起突变STAT3蛋白对野生STAT3蛋白的显性负效应，导致病人细胞内JAK-STAT3信号通路的受阻，最终引起病人体内抵抗外界细菌和病毒入侵的Th17细胞分化受阻以及分泌免疫球蛋白E(IgE)的B淋巴细胞分泌失调。提示STAT3基因的突变情况的检测对高IgE综合征的诊断和预后观察有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测STAT3基因多态突变热点的引物，采用PCR技术，可用于快速检测高IgE综合征患者体内STAT3基因多态位点的突变情况。所述检测STAT3基因多态热点突变情况的引物，包括：
扩增STAT3基因的引物，其碱基序列为：
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ST-E24-4-R：AACAGCTATGACCATG GCCTCCACCAGCCAAACA
进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：
检测STAT3基因的测序引物碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG
进一步地，引物序列ST-E1-F和ST-E1-R是扩增STAT3基因第1外显子序列的引物，引物序列ST-E2-F和ST-E2-R是扩增STAT3基因第2外显子序列的引物，引物序列ST-E3-F和ST-E3-R是扩增STAT3基因第3外显子序列的引物，引物序列ST-E4-F和ST-E4-R是扩增STAT3基因第4外显子序列的引物，引物序列ST-E5/6-F和ST-E5/6-R是扩增STAT3基因第5、6外显子序列的引物，引物序列ST-E7/8-F和ST-E7/8-R是扩增STAT3基因第7、8外显子序列的引物，引物序列ST-E9/10-F和ST-E9/10-R是扩增STAT3基因第9、10外显子序列的引物，引物序列ST-E11-F和ST-E11-R是扩增STAT3基因第11外显子序列的引物，引物序列ST-E12/13/14-F和ST-E12/13/14-R是扩增STAT3基因第12、13、14外显子序列的引物，引物序列ST-E15/16-F和ST-E15/16-R是扩增STAT3基因第15、16外显子序列的引物，引物序列ST-E17/18-F和ST-E17/18-R是扩增STAT3基因第17、18外显子序列的引物，引物序列ST-E19/20-F和ST-E19/20-R是扩增STAT3基因第19、20外显子序列的引物，引物序列ST-E21-F和ST-E21-R是扩增STAT3基因第21外显子序列的引物，引物序列ST-E22/23-F和ST-E22/23-R是扩增STAT3基因第22、23外显子序列的引物，引物序列ST-E24-1-F和ST-E24-1-R、ST-E24-2-F和ST-E24-2-R、ST-E24-3-F和ST-E24-3-R、ST-E24-4-F和ST-E24-4-R是扩增STAT3基因第24外显子序列的引物。
本发明还提供了检测STAT3基因全外显子突变情况的方法，包括以下步骤：
1.抽提血液/中的DNA；
2.用PCR扩增步骤1中提取的DNA；
3.对步骤2中的扩增产物进行测序；
4.对测序结果进行判断，确定STAT3基因是否发生突变；
其中PCR扩增引物为：
扩增STAT3基因的引物，其碱基序列为：
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ST-E24-3-R：AACAGCTATGACCATG CAGAGAAGCCCTGAACCCTC
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ST-E24-4-R：AACAGCTATGACCATG GCCTCCACCAGCCAAACA
进一步地，测序引物碱基序列为：
检测STAT3基因的测序引物碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG
本发明还提供了一种检测STAT3基因多态突变位点的试剂盒，包括：
(i)血液DNA抽提试剂；
(ii)检测体系PCR扩增反应液；
(iii)测序体系试剂；
其中PCR扩增反应液引物为：
(ⅰ)扩增STAT3基因的引物，其碱基序列为：
ST-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGT CTCCGCCCTTTCTCCTAGC
ST-E1-R：AACAGCTATGACCATG GCGTCCATCACAACATCCC
ST-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGT AGCTGTGATTATCCCAAGGTGG
ST-E2-R：AACAGCTATGACCATG TGCCCAAGTAAATGAGGTCCA
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进一步地，测序引物碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG
有益效果：本发明设计了扩增STAT3全部24个外显子序列的引物。通过加接头，使所有18对引物的PCR产物均可以用一种测序引物进行测序。采用PCR技术，构建了稳定的扩增体系。通过调整引物浓度、退火温度等反应条件，可使扩增效率达到最佳。STAT3基因的突变类型种类繁多且遍布整个基因，因此本发明所述引物既能将所述STAT3全外显子序列都扩增出来，也保证无论这些外显子的何处位置发生突变，都不会出现漏检的情况。相比较荧光定量PCR法降低了检测的成本和难度。荧光定量PCR法要针对不同的突变类型设计多个探针，成本高，检测难度大。
附图说明
图1为STAT3基因在染色体上定位图
图2-4为18对引物扩增24个外显子PCR产物电泳图，M为Marker DL 2000，1-3为送检的血液样本1-3号，如图2-4所示，引物扩增有效，且条带单一。
图5-19分别为样本1的STAT3第1-24号外显子野生型测序截图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。应当注意的是，实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采用方法：譬如，奥斯柏和金斯顿主编的《精编分子生物学实验指南》第四版，或者按照制造厂商所建议的步骤和条件。
实施例1
一种检测STAT3基因多态突变位点的引物，该引物的设计是针对STAT3全外显子设计的扩增引物，包括：
扩增STAT3基因全外显子序列的引物，其碱基序列为：
ST-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGT CTCCGCCCTTTCTCCTAGC
ST-E1-R：AACAGCTATGACCATG GCGTCCATCACAACATCCC
ST-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGT AGCTGTGATTATCCCAAGGTGG
ST-E2-R：AACAGCTATGACCATG TGCCCAAGTAAATGAGGTCCA
ST-E3-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GTGTATGCGTCGGCTTCA
ST-E3-R：AACAGCTATGACCATG GACTCTGCGGGTCCTGTT
ST-E4-F：TGTAAAACGACGGCCAGT AGTAACGACCTCCCCTTCGC
ST-E4-R：AACAGCTATGACCATG TTGGGTCTGTTGGATTCTTTTGGTG
ST-E5/6-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GACCTGTGTAGTGTCACCTGT
ST-E5/6-R：AACAGCTATGACCATG GGACCCGTACCTCCCTTGC
ST-E7/8-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TCCCTCAGGTCAAGGAGT
ST-E7/8-R：AACAGCTATGACCATG CTGGCCGAAATAAAGTAAAA
ST-E9/10-F：TGTAAAACGACGGCCAGT CATCCACCCAACATGGTGAAAAAT
ST-E9/10-R：AACAGCTATGACCATG CCACAGGGAAGAGTAGCCTC
ST-E11-F：TGTAAAACGACGGCCAGT ATAGACAGCTTGGCCTATTTACC
ST-E11-R：AACAGCTATGACCATG GGGACTGGTTGTCACAATAGC
ST-E12/13/14-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GAGGTGTTATGTTGCGCTGA
ST-E12/13/14-R：AACAGCTATGACCATG CCTCAAGGAAAACACCCCAGT
ST-E15/16-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TTGCTGTGCTGCTTAGAC
ST-E15/16-R：AACAGCTATGACCATG TTATTGCCAGATGGGATG
ST-E17/18-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GACTCACTCACACTCCTCGC
ST-E17/18-R：AACAGCTATGACCATG GCCTTTAGTGCCACCTTCCA
ST-E19/20-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TGGGAATGGGAATGCTCACC
ST-E19/20-R：AACAGCTATGACCATG GCCACCCTAGTGTTGAGACC
ST-E21-F：TGTAAAACGACGGCCAGT AGGGTGTTCAGGGTCTCA
ST-E21-R：AACAGCTATGACCATG TGCCTATCTATCCTCCAAG
ST-E22/23-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TTAGGCTGGACACCATGCAAA
ST-E22/23-R：AACAGCTATGACCATG AAGGG GACCAACTTCCCTTA
ST-E24-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GGGGCAGGAGATTGGATAGC
ST-E24-1-R：AACAGCTATGACCATG AAGGCTATGCTGATACAGTGTT
ST-E24-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GCTACATACTCCTGGCATTG
ST-E24-2-R：AACAGCTATGACCATG AGGCACCCACAGAAACAA
ST-E24-3-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GTGAGTAAGGCTGGGCAGAG
ST-E24-3-R：AACAGCTATGACCATG CAGAGAAGCCCTGAACCCTC
ST-E24-4-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TACTTCTCCAGCAACACTCT
ST-E24-4-R：AACAGCTATGACCATG GCCTCCACCAGCCAAACA
一种检测STAT3基因多态突变位点的试剂盒，包括
(i)血液DNA抽提试剂；
(ii)检测体系PCR反应液；
(iii)测序体系试剂；
其中，组织DNA抽提试剂可购自天根DNA抽提试剂盒等商品化试剂。
检测体系PCR扩增反应液包括：2×PCR Buffer；2mM dNTPs；KOD FX DNAPolymerase(1U/μl)；STAT3基因6个外显子序列的上、下游引物ST-E1-F/R、ST-E2-F/R、ST-E3-F/R、ST-E4-F/R、ST-E5/6-F/R、ST-E7/8-F/R、ST-E9/10-F/R、ST-E11-F/R、ST-E12/13/14-F/R、ST-E15/16-F/R、ST-E17/18-F/R、ST-E19/20-F/R、ST-E21-F/R、ST-E22/23-F/R、ST-E24-F/R引物浓度均为10μM。
测序体系试剂包括：测序纯化液(ExoI:0.6U，CIP:1.2U)、EDTA(125mmol)、无水乙醇、75％乙醇、HIDI(高度去离子甲酰胺)、测序引物：检测STAT3基因全外显子序列的上、下游引物分别为M13-F(3.2μm)、M13-R(3.2μm),以及Bigdye Terminator V3.1(购买自美国Applied Biosystems公司)。
实施例2
血液/细胞/组织基因组DNA抽提试剂盒(天根生物)的操作流程：
(1)抽提血液中的组织DNA：1)抽取300μl血液加入900μl红细胞裂解液，颠倒混匀，室温放置5分钟，期间再颠倒混匀几次。12,000rpm离心1min，吸去上清，留下白细胞沉淀，加200μl缓冲液GA，振荡至彻底混匀。2)加入20μl蛋白酶K溶液，混匀。3)加入200μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。4)加入200μl无水乙醇，充分振荡混匀15秒，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。5)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中)，12，000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。6)向吸附柱CB3中加入500μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12，000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。7)向吸附柱CB3中加入700μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12，000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。8)向吸附柱CB3中加入500μl漂洗液PW，12，000rpm离心30秒，倒掉废液。9)将吸附柱CB3放回收集管中，12，000rpm离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。10)将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5分钟，12，000rpm离心2分钟，将溶液收集到离心管中。
(2)试剂配置：按检测人份数配置检测体系PCR反应液各Xμl，每人份19μl分装：
X＝19μl反应液×(n份标本+1份空白对照)
n为检测标本数。
(3)加样：加入检测体系PCR反应液中1μl DNA；空白对照加1μl生理盐水或不加任何物质。
(4)扩增：检测在常规PCR仪上进行，可用仪器包括ABI veriti(美国AppliedBiosystems公司)等。反应条件如下：
PCR扩增体系试剂配制方法如下：
其中，引物序列为：
(5)电泳：1.5％琼脂糖凝胶电泳，110V，25min，凝胶成像系统观察。
如图2-4所示，即为3例血液样本以ST-E1-F/R、ST-E2-F/R、ST-E3-F/R、ST-E4-F/R、ST-E5/6-F/R、ST-E7/8-F/R、ST-E9/10-F/R、ST-E11-F/R、ST-E12/13/14-F/R、ST-E15/16-F/R、ST-E17/18-F/R、ST-E19/20-F/R、ST-E21-F/R、ST-E22/23-F/R、ST-E24-1-F/R、ST-E24-2-F/R、ST-E24-3-F/R、ST-E24-4-F/R引物扩增后所得产物的电泳图谱。本发明扩增的片段长度分别为498bp、773bp、241bp、516bp、985bp、617bp、923bp、405bp、572bp、386bp、811bp、954bp、424bp、922bp、742bp、785bp、931bp、541bp，通过电泳图的分析表明本发明所述ST-E1-F/R、ST-E2-F/R、ST-E3-F/R、ST-E4-F/R、ST-E5/6-F/R、ST-E7/8-F/R、ST-E9/10-F/R、ST-E11-F/R、ST-E12/13/14-F/R、ST-E15/16-F/R、ST-E17/18-F/R、ST-E19/20-F/R、ST-E21-F/R、ST-E22/23-F/R、ST-E24-1-F/R、ST-E24-2-F/R、ST-E24-3-F/R、ST-E24-4-F/R扩增有效，且条带单一。
(6)Sanger测序：
取9μl PCR产物与2μl纯化体系。按照以下程序进行纯化：
将1μl纯化产物分别与上、下测序引物按照如下体系进行混合：
测序反应程序：
沉淀环节：
向完成测序反应的产物中加入2μl 125mmol的EDTA，静置5min；加入15μl无水乙醇，漩涡混匀；3700rpm离心30min；倒置离心15sec，加入50μl70％乙醇，漩涡混匀；3700rpm离心15min；倒置离心15sec，置于95℃金属浴上；加入10μl Hi-Di后进行变性试验。变性程序：
变性程序结束后，上测序仪(ABI3730)测序。
(7)结果判断：分别将测序结果与STAT3野生型参考序列(Genbank：NC_000017.11)进行比对，根据实际突变情况对结果进行报告。
实施例3
取3例的临床样本(样本编号为1-3)按实施例1和2的试剂和方法提取基因组、配制试剂、扩增和测序。每份样本加入检测体系PCR反应液中1μl。电泳结果如图2-4所示，表明本发明所述引物ST-E1-F/R、ST-E2-F/R、ST-E3-F/R、ST-E4-F/R、ST-E5/6-F/R、ST-E7/8-F/R、ST-E9/10-F/R、ST-E11-F/R、ST-E12/13/14-F/R、ST-E15/16-F/R、ST-E17/18-F/R、ST-E19/20-F/R、ST-E21-F/R、ST-E22/23-F/R、ST-E24-1-F/R、ST-E24-2-F/R、ST-E24-3-F/R、ST-E24-4-F/R对血液样本能有效扩增，且条带单一。
样本1的部分检测结果如图5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19所示：
图5显示是样本1的STAT3 1号外显子野生型测序截图，
图6显示是样本1的STAT3 2号外显子野生型测序截图，
图7显示是样本1的STAT3 3号外显子野生型测序截图，
图8显示是样本1的STAT3 4号外显子野生型测序截图，
图9显示是样本1的STAT3 5、6号外显子野生型测序截图，
图10显示是样本1的STAT3 7、8号外显子野生型测序截图，
图11显示是样本1的STAT3 9、10号外显子野生型测序截图，
图12显示是样本1的STAT3 11号外显子野生型测序截图，
图13显示是样本1的STAT3 12、13、14号外显子野生型测序截图，
图14显示是样本1的STAT3 15、16号外显子野生型测序截图，
图15显示是样本1的STAT3 17、18号外显子野生型测序截图，
图16显示是样本1的STAT3 19、20号外显子野生型测序截图，
图17显示是样本1的STAT3 21号外显子野生型测序截图，
图18显示是样本1的STAT3 22、23号外显子野生型测序截图，
图19显示是样本1的STAT3 24号外显子野生型测序截图。
从检测结果可以看出，本发明所述引物已经把外显子序列包括在内了，能够扩展出STAT3基因全部24个外显子，并且测序结果完全准确。本发明所述引物可以准确的扩展出STAT3基因全外显子，无论是野生型还是突变型。
SEQUENCE LISTING
<110> 济南艾迪康医学检验中心有限公司
<120> 检测高IgE综合征STAT3基因突变的试剂盒和方法
<130>
<160> 38
<170> PatentIn version 3.5
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
tgtaaaacga cggccagtct ccgccctttc tcctagc 37
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<212> DNA
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aacagctatg accatggcgt ccatcacaac atccc 35
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<212> DNA
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aacagctatg accatgtgcc caagtaaatg aggtcca 37
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tgtaaaacga cggccagtgt gtatgcgtcg gcttca 36
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aacagctatg accatggact ctgcgggtcc tgtt 34
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tgtaaaacga cggccagtag taacgacctc cccttcgc 38
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aacagctatg accatgttgg gtctgttgga ttcttttggt g 41
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tgtaaaacga cggccagttc cctcaggtca aggagt 36
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aacagctatg accatgctgg ccgaaataaa gtaaaa 36
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tgtaaaacga cggccagtca tccacccaac atggtgaaaa at 42
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aacagctatg accatgccac agggaagagt agcctc 36
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tgtaaaacga cggccagtat agacagcttg gcctatttac c 41
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tgtaaaacga cggccagtga ggtgttatgt tgcgctga 38
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aacagctatg accatgcctc aaggaaaaca ccccagt 37
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tgtaaaacga cggccagttt gctgtgctgc ttagac 36
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<213> 人工序列
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aacagctatg accatgttat tgccagatgg gatg 34
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tgtaaaacga cggccagtga ctcactcaca ctcctcgc 38
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aacagctatg accatggcct ttagtgccac cttcca 36
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tgtaaaacga cggccagttg ggaatgggaa tgctcacc 38
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aacagctatg accatggcca ccctagtgtt gagacc 36
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tgtaaaacga cggccagtag ggtgttcagg gtctca 36
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aacagctatg accatgtgcc tatctatcct ccaag 35
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tgtaaaacga cggccagttt aggctggaca ccatgcaaa 39
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aacagctatg accatgaagg ggaccaactt ccctta 36
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aacagctatg accatgaagg ctatgctgat acagtgtt 38
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tgtaaaacga cggccagtgc tacatactcc tggcattg 38
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aacagctatg accatgaggc acccacagaa acaa 34
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tgtaaaacga cggccagtgt gagtaaggct gggcagag 38
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aacagctatg accatgcaga gaagccctga accctc 36
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tgtaaaacga cggccagtta cttctccagc aacactct 38
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<212> DNA
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aacagctatg accatggcct ccaccagcca aaca 34
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<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 38
aacagctatg accatg 16

Claims (6)

1.检测STAT3基因突变情况的试剂盒，包括：
(i)血液DNA抽提试剂；
(ii)检测体系PCR扩增反应液；
(iii)测序体系试剂；
其中PCR扩增反应液引物为其特征在于，包括：扩增STAT3基因的引物，其碱基序列为：
ST-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGT CTCCGCCCTTTCTCCTAGC
ST-E1-R：AACAGCTATGACCATG GCGTCCATCACAACATCCC
ST-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGT AGCTGTGATTATCCCAAGGTGG
ST-E2-R：AACAGCTATGACCATG TGCCCAAGTAAATGAGGTCCA
ST-E3-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GTGTATGCGTCGGCTTCA
ST-E3-R：AACAGCTATGACCATG GACTCTGCGGGTCCTGTT
ST-E4-F：TGTAAAACGACGGCCAGT AGTAACGACCTCCCCTTCGC
ST-E4-R：AACAGCTATGACCATG TTGGGTCTGTTGGATTCTTTTGGTG
ST-E5/6-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GACCTGTGTAGTGTCACCTGT
ST-E5/6-R：AACAGCTATGACCATG GGACCCGTACCTCCCTTGC
ST-E7/8-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TCCCTCAGGTCAAGGAGT
ST-E7/8-R：AACAGCTATGACCATG CTGGCCGAAATAAAGTAAAA
ST-E9/10-F：TGTAAAACGACGGCCAGT CATCCACCCAACATGGTGAAAAAT
ST-E9/10-R：AACAGCTATGACCATG CCACAGGGAAGAGTAGCCTC
ST-E11-F：TGTAAAACGACGGCCAGT ATAGACAGCTTGGCCTATTTACC
ST-E11-R：AACAGCTATGACCATG GGGACTGGTTGTCACAATAGC
ST-E12/13/14-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GAGGTGTTATGTTGCGCTGA
ST-E12/13/14-R：AACAGCTATGACCATG CCTCAAGGAAAACACCCCAGT
ST-E15/16-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TTGCTGTGCTGCTTAGAC
ST-E15/16-R：AACAGCTATGACCATG TTATTGCCAGATGGGATG
ST-E17/18-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GACTCACTCACACTCCTCGC
ST-E17/18-R：AACAGCTATGACCATG GCCTTTAGTGCCACCTTCCA
ST-E19/20-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TGGGAATGGGAATGCTCACC
ST-E19/20-R：AACAGCTATGACCATG GCCACCCTAGTGTTGAGACC
ST-E21-F：TGTAAAACGACGGCCAGT AGGGTGTTCAGGGTCTCA
ST-E21-R：AACAGCTATGACCATG TGCCTATCTATCCTCCAAG
ST-E22/23-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TTAGGCTGGACACCATGCAAA
ST-E22/23-R：AACAGCTATGACCATG AAGGG GACCAACTTCCCTTA
ST-E24-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GGGGCAGGAGATTGGATAGC
ST-E24-1-R：AACAGCTATGACCATG AAGGCTATGCTGATACAGTGTT
ST-E24-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GCTACATACTCCTGGCATTG
ST-E24-2-R：AACAGCTATGACCATG AGGCACCCACAGAAACAA
ST-E24-3-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GTGAGTAAGGCTGGGCAGAG
ST-E24-3-R：AACAGCTATGACCATG CAGAGAAGCCCTGAACCCTC
ST-E24-4-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TACTTCTCCAGCAACACTCT
ST-E24-4-R：AACAGCTATGACCATG GCCTCCACCAGCCAAACA。
2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，还包括测序引物，其碱基序列为：
检测STAT3基因的测序引物碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，引物序列ST-E1-F和ST-E1-R是扩增STAT3基因第1外显子序列的引物，引物序列ST-E2-F和ST-E2-R是扩增STAT3基因第2外显子序列的引物，引物序列ST-E3-F和ST-E3-R是扩增STAT3基因第3外显子序列的引物，引物序列ST-E4-F和ST-E4-R是扩增STAT3基因第4外显子序列的引物，引物序列ST-E5/6-F和ST-E5/6-R是扩增STAT3基因第5、6外显子序列的引物，引物序列ST-E7/8-F和ST-E7/8-R是扩增STAT3基因第7、8外显子序列的引物，引物序列ST-E9/10-F和ST-E9/10-R是扩增STAT3基因第9、10外显子序列的引物，引物序列ST-E11-F和ST-E11-R是扩增STAT3基因第11外显子序列的引物，引物序列ST-E12/13/14-F和ST-E12/13/14-R是扩增STAT3基因第12、13、14外显子序列的引物，引物序列ST-E15/16-F和ST-E15/16-R是扩增STAT3基因第15、16外显子序列的引物，引物序列ST-E17/18-F和ST-E17/18-R是扩增STAT3基因第17、18外显子序列的引物，引物序列ST-E19/20-F和ST-E19/20-R是扩增STAT3基因第19、20外显子序列的引物，引物序列ST-E21-F和ST-E21-R是扩增STAT3基因第21外显子序列的引物，引物序列ST-E22/23-F和ST-E22/23-R是扩增STAT3基因第22、23外显子序列的引物，引物序列ST-E24-1-F和ST-E24-1-R、ST-E24-2-F和ST-E24-2-R、ST-E24-3-F和ST-E24-3-R、ST-E24-4-F和ST-E24-4-R是扩增STAT3基因第24外显子序列的引物。
4.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，引物序列M13-F和M13-R是测序STAT3基因扩增产物全外显子序列的引物。
5.检测STAT3基因多态热点突变情况的方法，包括以下步骤：
(1)抽提血液中的组织DNA；
(2)用PCR扩增步骤1中提取的DNA；
(3)对步骤2中的扩增产物进行测序；
(4)对测序结果进行判断，确定STAT3基因是否发生突变；
其中PCR扩增引物为：
ST-E1-F：TGTAAAACGACGGCCAGT CTCCGCCCTTTCTCCTAGC
ST-E1-R：AACAGCTATGACCATG GCGTCCATCACAACATCCC
ST-E2-F：TGTAAAACGACGGCCAGT AGCTGTGATTATCCCAAGGTGG
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ST-E3-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GTGTATGCGTCGGCTTCA
ST-E3-R：AACAGCTATGACCATG GACTCTGCGGGTCCTGTT
ST-E4-F：TGTAAAACGACGGCCAGT AGTAACGACCTCCCCTTCGC
ST-E4-R：AACAGCTATGACCATG TTGGGTCTGTTGGATTCTTTTGGTG
ST-E5/6-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GACCTGTGTAGTGTCACCTGT
ST-E5/6-R：AACAGCTATGACCATG GGACCCGTACCTCCCTTGC
ST-E7/8-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TCCCTCAGGTCAAGGAGT
ST-E7/8-R：AACAGCTATGACCATG CTGGCCGAAATAAAGTAAAA
ST-E9/10-F：TGTAAAACGACGGCCAGT CATCCACCCAACATGGTGAAAAAT
ST-E9/10-R：AACAGCTATGACCATG CCACAGGGAAGAGTAGCCTC
ST-E11-F：TGTAAAACGACGGCCAGT ATAGACAGCTTGGCCTATTTACC
ST-E11-R：AACAGCTATGACCATG GGGACTGGTTGTCACAATAGC
ST-E12/13/14-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GAGGTGTTATGTTGCGCTGA
ST-E12/13/14-R：AACAGCTATGACCATG CCTCAAGGAAAACACCCCAGT
ST-E15/16-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TTGCTGTGCTGCTTAGAC
ST-E15/16-R：AACAGCTATGACCATG TTATTGCCAGATGGGATG
ST-E17/18-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GACTCACTCACACTCCTCGC
ST-E17/18-R：AACAGCTATGACCATG GCCTTTAGTGCCACCTTCCA
ST-E19/20-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TGGGAATGGGAATGCTCACC
ST-E19/20-R：AACAGCTATGACCATG GCCACCCTAGTGTTGAGACC
ST-E21-F：TGTAAAACGACGGCCAGT AGGGTGTTCAGGGTCTCA
ST-E21-R：AACAGCTATGACCATG TGCCTATCTATCCTCCAAG
ST-E22/23-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TTAGGCTGGACACCATGCAAA
ST-E22/23-R：AACAGCTATGACCATG AAGGG GACCAACTTCCCTTA
ST-E24-1-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GGGGCAGGAGATTGGATAGC
ST-E24-1-R：AACAGCTATGACCATG AAGGCTATGCTGATACAGTGTT
ST-E24-2-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GCTACATACTCCTGGCATTG
ST-E24-2-R：AACAGCTATGACCATG AGGCACCCACAGAAACAA
ST-E24-3-F：TGTAAAACGACGGCCAGT GTGAGTAAGGCTGGGCAGAG
ST-E24-3-R：AACAGCTATGACCATG CAGAGAAGCCCTGAACCCTC
ST-E24-4-F：TGTAAAACGACGGCCAGT TACTTCTCCAGCAACACTCT
ST-E24-4-R：AACAGCTATGACCATG GCCTCCACCAGCCAAACA。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，测序引物碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107893117A (zh) * 2017-12-25 2018-04-10 北京艾迪康医学检验实验室有限公司 检测il7r基因全外显子的方法和引物
CN112553324A (zh) * 2020-12-28 2021-03-26 济南艾迪康医学检验中心有限公司 检测trex1基因突变的引物、试剂盒和方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120034226A1 (en) * 2009-09-16 2012-02-09 Riken Diagnostic method of skin inflammatory disease
CN106399567A (zh) * 2016-11-25 2017-02-15 杭州华硕医学检验所有限公司 检测wrap53基因突变的引物及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20120034226A1 (en) * 2009-09-16 2012-02-09 Riken Diagnostic method of skin inflammatory disease
CN106399567A (zh) * 2016-11-25 2017-02-15 杭州华硕医学检验所有限公司 检测wrap53基因突变的引物及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WOELLNER CRISTINA等: "Mutations in STAT3 and diagnostic guidelines for hyper-IgE syndrome", 《JOURNAL OF ALLERGY AND CLINICAL IMMUNOLOGY》 *
舒岚等: "4例高IgE综合征的临床分析和基因诊断", 《第三军医大学学报》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107893117A (zh) * 2017-12-25 2018-04-10 北京艾迪康医学检验实验室有限公司 检测il7r基因全外显子的方法和引物
CN112553324A (zh) * 2020-12-28 2021-03-26 济南艾迪康医学检验中心有限公司 检测trex1基因突变的引物、试剂盒和方法

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