CN106222287A - 检测ela2基因的方法和引物 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种检测先天性中性粒细胞减少症患者ELA2基因突变的引物和方法，其包括扩增ELA2基因全外显子序列的引物；采用Sanger测序技术和测序引物。本发明可快速地将先天性中性粒细胞减少症患者体内ELA2基因全外显子的突变检测出来。利用本发明完成的检测结果准确，可以辅助诊断先天性中性粒细胞减少症，对早期干预、早期治疗和产前诊断有重要的参考意义。
Description
技术领域
本发明属生命科学和生物技术领域，特别涉及检测ELA2基因的引物和方法。
背景技术
先天性中性粒细胞减少症是一组异质性疾病，包括重型先天性中性粒细胞减少症(SCN)、周期性中性粒细胞减少症(CN)、网状组织发育不全等一系列疾病。近年来研究表明ELA2基因在中性粒细胞减少症中扮演重要角色。1999年Horwitz等确定CN的异常基因为19号染色体上的ELANE/ELA2基因，并且现在已确定几乎所有的CN患者均存在ELA2基因的突变。2000年Dale等发现，大多数常染色体显性遗传的SCN患者中存在中性粒细胞弹性蛋白酶基因(ELANE/ELA2)的突变。
ELA2基因位于19p13.3，由5个外显子组成，参与编码中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)。而NE是一种髓系细胞特异性丝氨酸蛋白酶，在中性粒细胞分化的早幼粒阶段产生，存在于成熟中性粒细胞的初级颗粒中，参与切割降解多种细菌蛋白，在先天防御中发挥重要作用，当NE发生突变时将引发“未折叠蛋白反应”(UPR)使粒细胞凋亡。有试验应用突变的ELA2基因转染U037细胞可诱导UPR发生，研究表明ELA2突变所导致的细胞ER应激反应会引发UPR，增加分子伴侣、ER相关的降解和促凋亡基因的转录，最终导致细胞凋亡。由于ELA2基因在中性粒细胞凋亡中扮演如此重要的角色，因此开展ELA2基因的突变检测项目显得十分必要。
发明内容
本发明的目的是提供一种检测ELA2基因多态突变热点的引物，采用PCR技术，可用于快速检测ELA2综合征患者体内ELA2基因多态位点的突变情况。所述检测ELA2基因多态热点突变情况的引物，包括：
扩增ELA2基因的引物，其碱基序列为：
ELA2-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTATCTGACATTTGAATGCGATTG
ELA2-1R：AACAGCTATGACCATGGCACAGACAGACCTGGACTTG
ELA2-2/3F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGTGCCTCAGTTTCCTCATC
ELA2-2/3R：AACAGCTATGACCATGCGTTTCACAGAGGTGCAGAC
ELA2-4/5F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGGAGGGTCATCATCACTG
ELA2-4/5R：AACAGCTATGACCATGCATTTTCAACACCCAATCACA
进一步地，还包括测序引物，其碱基序列为：
检测ELA2基因的测序引物碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG
进一步地，引物序列ELA2-1F和ELA2-1R是扩增ELA2基因第1外显子序列的引物，引物序列ELA2-2/3F和ELA2-2/3R是扩增ELA2基因第2、3外显子序列的引物，引物序列ELA2-4/5F和ELA2-4/5R是扩增ELA2基因第4、5外显子序列的引物。
本发明还提供了检测ELA2基因全外显子突变情况的方法，包括以下步骤：
1.抽提血液/中的DNA；
2.用PCR扩增步骤1中提取的DNA；
3.对步骤2中的扩增产物进行测序；
4.对测序结果进行判断，确定ELA2基因是否发生突变；
其中PCR扩增引物为：
扩增ELA2基因的引物，其碱基序列为：
ELA2-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTATCTGACATTTGAATGCGATTG
ELA2-1R：AACAGCTATGACCATGGCACAGACAGACCTGGACTTG
ELA2-2/3F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGTGCCTCAGTTTCCTCATC
ELA2-2/3R：AACAGCTATGACCATGCGTTTCACAGAGGTGCAGAC
ELA2-4/5F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGGAGGGTCATCATCACTG
ELA2-4/5R：AACAGCTATGACCATGCATTTTCAACACCCAATCACA
进一步地，测序引物碱基序列为：
检测ELA2基因的测序引物碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG
本发明还提供了一种检测ELA2基因多态突变位点的试剂盒，包括：
(i)血液DNA抽提试剂；
(ii)检测体系PCR扩增反应液；
(iii)测序体系试剂；
其中PCR扩增反应液引物为：
(ⅰ)扩增ELA2基因的引物，其碱基序列为：
ELA2-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTATCTGACATTTGAATGCGATTG
ELA2-1R：AACAGCTATGACCATGGCACAGACAGACCTGGACTTG
ELA2-2/3F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGTGCCTCAGTTTCCTCATC
ELA2-2/3R：AACAGCTATGACCATGCGTTTCACAGAGGTGCAGAC
ELA2-4/5F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGGAGGGTCATCATCACTG
ELA2-4/5R：AACAGCTATGACCATGCATTTTCAACACCCAATCACA
进一步地，测序引物碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG
有益效果：本发明设计了扩增ELA2全部5个外显子序列的引物。通过加接头，使所有3对引物的PCR产物均可以用一种测序引物进行测序。采用PCR技术，构建了稳定的扩增体系。通过调整引物浓度、退火温度等反应条件，可使扩增效率达到最佳。ELA2基因的突变类型种类多且遍布整个基因，因此本发明所述引物既能将所述ELA2全外显子序列都扩增出来，也保证无论这些外显子的何处位置发生突变，都不会出现漏检的情况。相比较荧光定量PCR法降低了检测的成本和难度。荧光定量PCR法要针对不同的突变类型设计多个探针，成本高，检测难度大。本发明设计的3对引物涵盖了ELA2基因全部5个外显子区域，在使用尽量少引物条件下确保了每对引物所扩增的产物长度低于1000bp，使得后续测序时的上下游引物均能测出目的片段，一定程度上保证了测序的准确性。
附图说明
图1为ELA2基因在染色体上定位图
图2为ELA2-1F/R、ELA2-2/3F/R、ELA2-4/5F/R的电泳图，M为Marker DL2000，1-3为送检的血液样本1-3号，如图2所示，引物ELA2-1F/R、ELA2-2/3F/R、ELA2-4/5F/R扩增有效，且条带单一。
图3、4、5分别为样本1的ELA2第1、2/3、4/5号外显子野生型测序截图。
具体实施方式
下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。应当注意的是，实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采用方法：譬如，奥斯柏和金斯顿主编的《精编分子生物学实验指南》第四版，或者按照制造厂商所建议的步骤和条件。
实施例1
一种检测ELA2基因多态突变位点的引物，该引物的设计是针对ELA2全外显子设计的扩增引物，包括：
扩增ELA2基因全外显子序列的引物，其碱基序列为：
ELA2-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTATCTGACATTTGAATGCGATTG
ELA2-1R：AACAGCTATGACCATGGCACAGACAGACCTGGACTTG
ELA2-2/3F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGTGCCTCAGTTTCCTCATC
ELA2-2/3R：AACAGCTATGACCATGCGTTTCACAGAGGTGCAGAC
ELA2-4/5F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGGAGGGTCATCATCACTG
ELA2-4/5R：AACAGCTATGACCATGCATTTTCAACACCCAATCACA
一种检测ELA2基因多态突变位点的试剂盒，包括
(i)血液DNA抽提试剂；
(ii)检测体系PCR反应液；
(iii)测序体系试剂；
其中，组织DNA抽提试剂可购自天根DNA抽提试剂盒等商品化试剂。
检测体系PCR扩增反应液包括：2×PCR Buffer；2mM dNTPs；KOD FX DNAPolymerase(1U/μl)；ELA2基因5个外显子序列的上、下游引物ELA2-1-F(10μM)、ELA2-1-R(10μM)、ELA2-2/3-F(10μM)、ELA2-2/3-R(10μM)、ELA2-4/5-F(10μM)、ELA2-4/5-R(10μM)。
测序体系试剂包括：测序纯化液(ExoI:0.6U，CIP:1.2U)、EDTA(125mmol)、无水乙醇、75％乙醇、HIDI(高度去离子甲酰胺)、测序引物：检测ELA2基因全外显子序列的上、下游引物分别为M13-F(3.2μm)、M13-R(3.2μm),以及Bigdye Terminator V3.1(购买自美国Applied Biosystems公司)。
实施例2
血液/细胞/组织基因组DNA抽提试剂盒(天根生物)的操作流程：
(1)抽提血液中的组织DNA：1)抽取300μl血液加入900μl红细胞裂解液，颠倒混匀，室温放置5分钟，期间再颠倒混匀几次。12，000rpm离心1min，吸去上清，留下白细胞沉淀，加200μl缓冲液GA，振荡至彻底混匀。2)加入20μl蛋白酶K溶液，混匀。3)加入200μl缓冲液GB，充分颠倒混匀，70℃放置10分钟，溶液应变清亮，简短离心以去除管盖内壁的水珠。4)加入200μl无水乙醇，充分振荡混匀15秒，此时可能会出现絮状沉淀，简短离心以去除管盖内壁的水珠。5)将上一步所得溶液和絮状沉淀都加入一个吸附柱CB3中(吸附柱放入收集管中)，12，000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放回收集管中。6)向吸附柱CB3中加入500μl缓冲液GD(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12，000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。7)向吸附柱CB3中加入700μl漂洗液PW(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12，000rpm离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CB3放入收集管中。8)向吸附柱CB3中加入500μl漂洗液PW，12，000rpm离心30秒，倒掉废液。9)将吸附柱CB3放回收集管中，12，000rpm离心2分钟，倒掉废液。将吸附柱CB3置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。10)将吸附柱CB3转入一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加100μl洗脱缓冲液TE，室温放置2-5分钟，12，000rpm离心2分钟，将溶液收集到离心管中。
(2)试剂配置：按检测人份数配置检测体系PCR反应液各Xμl，每人份19μl分装：
X＝19μl反应液×(n份标本+1份空白对照)
n为检测标本数。
(3)加样：加入检测体系PCR反应液中1μl DNA；空白对照加1μl生理盐水或不加任何物质。
(4)扩增：检测在常规PCR仪上进行，可用仪器包括ABI veriti(美国AppliedBiosystems公司)等。反应条件如下：
PCR扩增体系试剂配制方法如下：
其中，引物序列为：
(5)电泳：1.5％琼脂糖凝胶电泳，110V，25min，凝胶成像系统观察。
如图2所示，即为3例血液样本以ELA2-1F/R、ELA2-2/3F/R、ELA2-4/5F/R引物扩增后所得产物的电泳图谱。本发明扩增的片段长度分别为550bp、882bp、786bp，通过电泳图的分析表明本发明所述ELA2-1F/R、ELA2-2/3F/R、ELA2-4/5F/R扩增有效，且条带单一。
(6)Sanger测序：
取9μl PCR产物与2μl纯化体系。按照以下程序进行纯化：
将1μl纯化产物分别与上、下测序引物按照如下体系进行混合：
测序反应程序：
沉淀环节：
向完成测序反应的产物中加入2μl 125mmol的EDTA，静置5min；加入15 l无水乙醇，漩涡混匀；3700rpm离心30min；倒置离心15sec，加入50l70％乙醇，漩涡混匀；3700rpm离心15min；倒置离心15sec，置于95℃金属浴上；加入10μl Hi-Di后进行变性试验。变性程序：
变性程序结束后，上测序仪(ABI3730)测序。
(7)结果判断：分别将测序结果与ELA2野生型参考序列(Genbank accn：NC_000019.10)进行比对，根据实际突变情况对结果进行报告。
实施例3
取3例的临床样本(样本编号为1-3)按实施例1和2的试剂和方法提取基因组、配制试剂、扩增和测序。每份样本加入检测体系PCR反应液中1μl。电泳结果如图2所示，表明本发明所述引物ELA2-1F/R、ELA2-2/3F/R、ELA2-4/5F/R对血液样本能有效扩增，且条带单一。
样本1的检测结果如图3、4、5所示：
图3显示是样本1的ELA2 1号外显子野生型测序截图，说明样本1的1号外显子未发生突变。
图4显示是样本1的ELA2 2、3号外显子野生型测序截图，说明样本1的2、3号外显子未发生突变。
图5显示是样本1的ELA2 4、5号外显子野生型测序截图，说明样本1的4、5号外显子未发生突变。
从检测结果可以看出，本发明所述引物已经把外显子序列包括在内了，能够扩展出ELA2基因全部5个外显子，并且测序结果完全准确。本发明所述引物可以准确的扩展出ELA2基因全外显子，无论是野生型还是突变型。对阳性标本的检测表明本发明所述引物和方法及试剂盒能够检测出ELA2基因突变。
Claims (6)
1.检测ELA2基因突变情况的引物，其特征在于，包括：
扩增ELA2基因的引物，其碱基序列为：
ELA2-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTATCTGACATTTGAATGCGATTG
ELA2-1R：AACAGCTATGACCATGGCACAGACAGACCTGGACTTG
ELA2-2/3F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGTGCCTCAGTTTCCTCATC
ELA2-2/3R：AACAGCTATGACCATGCGTTTCACAGAGGTGCAGAC
ELA2-4/5F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGGAGGGTCATCATCACTG
ELA2-4/5R：AACAGCTATGACCATGCATTTTCAACACCCAATCACA。
2.如权利要求1所述的引物，其特征在于，还包括测序引物，所述测序碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
3.如权利要求1所述的引物，其特征在于，引物序列ELA2-1F和ELA2-1R是扩增ELA2基因第1外显子序列的引物，引物序列ELA2-2/3F和ELA2-2/3R是扩增ELA2基因第2、3外显子序列的引物，引物序列ELA2-4/5F和ELA2-4/5R是扩增ELA2基因第4、5外显子序列的引物。
4.如权利要求2所述的引物，其特征在于，引物序列M13-F和M13-R是测序ELA2基因扩增产物全外显子序列的引物。
5.检测ELA2基因多态热点突变情况的方法，包括以下步骤：
(1)抽提血液中的组织DNA；
(2)用PCR扩增步骤1中提取的DNA；
(3)对步骤2中的扩增产物进行测序；
(4)对测序结果进行判断，确定ELA2基因是否发生突变；
其中PCR扩增引物为：
ELA2-1F：TGTAAAACGACGGCCAGTATCTGACATTTGAATGCGATTG
ELA2-1R：AACAGCTATGACCATGGCACAGACAGACCTGGACTTG
ELA2-2/3F：TGTAAAACGACGGCCAGTCGTGCCTCAGTTTCCTCATC
ELA2-2/3R：AACAGCTATGACCATGCGTTTCACAGAGGTGCAGAC
ELA2-4/5F：TGTAAAACGACGGCCAGTGGGGAGGGTCATCATCACTG
ELA2-4/5R：AACAGCTATGACCATGCATTTTCAACACCCAATCACA。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，测序引物碱基序列为：
M13F：TGTAAAACGACGGCCAGT
M13R：AACAGCTATGACCATG。
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| CN (1) | CN106222287A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107236794A (zh) * | 2017-06-01 | 2017-10-10 | 武汉艾迪康医学检验所有限公司 | 检测fbxw7基因突变的方法、寡核苷酸及其应用 |
| CN113092757A (zh) * | 2021-02-23 | 2021-07-09 | 承德医学院 | 一种肺癌肝转移早期诊断试剂盒及制备使用方法 |
| CN113444784A (zh) * | 2021-06-22 | 2021-09-28 | 天津见康华美医学诊断技术有限公司 | 重症先天性中性粒细胞减少症检测引物组合物及应用 |
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2016
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Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| KATE T. MONTGOMERY等: ""Mutation Detection Using Automated Fluorescence-Based Sequencing"", 《CURRENT PROTOCOLS IN HUMAN GENETICS》 * |
| WEN-I LEE等: ""Identifying patients with neutrophil elastase (ELANE) mutations from patients with a presumptive diagnosis of autoimmune neutropenia"", 《IMMUNOBIOLOGY》 * |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107236794A (zh) * | 2017-06-01 | 2017-10-10 | 武汉艾迪康医学检验所有限公司 | 检测fbxw7基因突变的方法、寡核苷酸及其应用 |
| CN113092757A (zh) * | 2021-02-23 | 2021-07-09 | 承德医学院 | 一种肺癌肝转移早期诊断试剂盒及制备使用方法 |
| CN113092757B (zh) * | 2021-02-23 | 2024-02-06 | 承德医学院 | 一种肺癌肝转移早期诊断试剂盒及制备使用方法 |
| CN113444784A (zh) * | 2021-06-22 | 2021-09-28 | 天津见康华美医学诊断技术有限公司 | 重症先天性中性粒细胞减少症检测引物组合物及应用 |
| CN113444784B (zh) * | 2021-06-22 | 2022-03-18 | 天津见康华美医学诊断技术有限公司 | 重症先天性中性粒细胞减少症检测引物组合物及应用 |
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