CN106908536A - 一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法 - Google Patents

一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，该方法以维生素B1、维生素B2、维生素B6为对照品，精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，即得对照品与供试品的图谱，将得到的图谱进行处理，对供试品溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6进行定性和定量，进而计算得普庆溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量。本发明检测方法各色谱峰分离较好，基线平稳，峰型好，重复性较好，该方法具有良好的线性关系、精密度、稳定性、回收率，能够准确检测普庆溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的成分含量，达到对普庆溶液进行质量控制的目的。

Description

一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法
技术领域
本发明属于分析技术领域，具体涉及一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法。
背景技术
普庆溶液本院制剂室根据本院临床需要经批准而配制、自用的固定处方制剂，主要用于消炎止痛，治疗咽喉炎及消化系统炎症，疼痛等，尤其适用于放疗后食管炎症。
普庆溶液的制备方法为：取10克盐酸普鲁卡因、800万单位硫酸庆大霉素加入水中，搅拌溶解，滤过，滤液加五维他口服溶液16.66ml和羟苯乙酯乙醇液（3%）10ml，加水定容至1000ml，混匀，灭菌，灌装，即得。其中五维他口服溶液主要包含维生素B1、维生素B2、维生素B6三种维生素，因此，对普庆溶液中维生素的含量进行控制，实现多种维生素的分离检测，对其质量控制具有重要的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，以测定普庆溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量，进而对普庆溶液进行质量控制。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，包括如下步骤：
对照品溶液的制备：称取维生素B1对照品、维生素B2对照品、维生素B6对照品，加水溶解，制成每1mL含维生素B1 5.0μg、维生素B2 1.0μg、维生素B6 1.8μg的混合对照品溶液；
供试品溶液的制备：量取普庆溶液，过滤即得供试品溶液；
色谱条件如下：
色谱柱：waters 氨基键合硅胶色谱柱 5μm 4.6×250 mm；
流动相：乙腈:30mmol/L磷酸二氢钾=75:25；
流速：0.9mL/min ~1.1mL/min；
检测波长：264nm～268nm 、438nm～442nm 、324nm～328nm；
柱温：35℃~45℃；
进样量：8μL ~12μL；
理论塔板数：以维生素B2峰计算大于等于2000；
检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，即得对照品与供试品的图谱，对照维生素B1、维生素B2、维生素B6线性回归方程，对供试品溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6进行定性和定量，进而计算得普庆溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量。
所述维生素B1线性回归方程y = 14921.23 x +28787.36，r=0.9994，线性良好。
所述维生素B2线性回归方程y=10773.55x+5204.82 ，r=0.9999，线性良好。
所述维生素B6线性回归方程y=2861.70x+2348.57 ， r=0.9993，线性良好。
本发明进一步改进方案为：
所述流动相为乙腈：30mmol/L磷酸二氢钾=75:25，柱温为40℃，检测波长为266nm 、440nm 、326nm。
本发明的更进一步改进方案为：
所述流动相为乙腈：30mmol/L磷酸二氢钾=75:25，柱温为35℃，检测波长为264nm 、438nm 、324nm。
本发明的再进一步改进方案为：
所述流动相为乙腈：30mmol/L磷酸二氢钾=75:25，柱温为45℃，检测波长为268nm 、442nm 、328nm。
本发明的有益效果为：
本发明检测方法各色谱峰分离较好，基线平稳，峰型好，重复性较好，该方法具有良好的线性关系、精密度、稳定性、回收率，能够准确检测普庆溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的成分含量，达到对普庆溶液进行质量控制的目的。
附图说明
图1为实施例1色谱条件下所得的标准品谱图和供试品谱图；
图2为实施例2色谱条件下所得的标准品谱图和供试品谱图；
图3为实施例3色谱条件下所得的标准品谱图和供试品谱图；
图4为实施例4所得色谱图；
图5为维生素B1峰面积值和浓度的线性关系图；
图6为维生素B2峰面积值和浓度的线性关系图；
图7为维生素B6峰面积值和浓度的线性关系图。
具体实施方式
1、仪器
高效液相：岛津公司LC-20AD型号高效液相。
2、试剂：
对照品维生素B1、维生素B2、维生素B6购于中国食品药品检定研究院。
普庆溶液：淮安市第一人民医院自制。
实施例1
对照品溶液的制备：称取维生素B1对照品、维生素B2对照品、维生素B6对照品，加水溶解，制成每1mL含维生素B1 5.0μg、维生素B2 1.0μg、维生素B6 1.8μg的混合对照品溶液；
供试品溶液的制备：量取编号为160619的普庆溶液，过滤即得供试品溶液；
色谱条件如下：
色谱柱：waters 氨基键合硅胶色谱柱 5μm 4.6×250 mm；
流动相：乙腈:30mmol/L磷酸二氢钾=75:25；
流速： 1.0mL/min；
检测波长：266nm 、440nm 、326nm；
柱温： 40℃；
进样量：10μL；
理论塔板数：以维生素B2峰计算大于等于2000；
检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，如图1所示。
根据检测结果，普庆溶液中维生素B1应不得少于4µg/ml，维生素B2应不得少于0.8µg/ml，维生素B,6应不得少于1.5µg/ml。
实施例2
对照品溶液和供试品溶液的制备同实施例1。
色谱条件如下：
色谱柱：waters 氨基键合硅胶色谱柱 5μm 4.6×250 mm；
流动相：乙腈:30mmol/L磷酸二氢钾=75:25；
流速： 1.0mL/min；
检测波长：264nm 、438nm 、324nm；
柱温： 35℃；
进样量：10μL；
理论塔板数：以维生素B2峰计算大于等于2000；
检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，如图2所示。
根据检测结果，普庆溶液中维生素B1应不得少于4µg/ml，维生素B2应不得少于0.8µg/ml，维生素B,6应不得少于1.5µg/ml。
实施例3
对照品溶液和供试品溶液的制备同实施例1。
色谱条件如下：
色谱柱：waters 氨基键合硅胶色谱柱 5μm 4.6×250 mm；
流动相：乙腈:30mmol/L磷酸二氢钾=75:25；
流速： 1.0mL/min；
检测波长：268nm 、442nm 、328nm；
柱温： 45℃；
进样量：10μL；
理论塔板数：以维生素B2峰计算大于等于2000；
检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，如图3所示。
根据检测结果，普庆溶液中维生素B1应不得少于4µg/ml，维生素B2应不得少于0.8µg/ml，维生素B,6应不得少于1.5µg/ml。
实施例4
干扰试验
对照品溶液和供试品溶液的制备同实施例1。
全辅料溶液的制备：取1克盐酸普鲁卡因、80万单位硫酸庆大霉素，加水定容至100ml，摇匀，过滤即得；
色谱条件同实施例1。
检测方法：精密吸取对照品溶液、全辅料溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，记录图谱，如图4所示。
根据测量结果，辅料在主峰位置均无吸收峰，对含量测定无干扰。
实施例5
维生素B1线性回归方程
将对照品维生素B1分别配制成1.17μg/ml~7.00μg/ml的10个不同浓度的标准溶液，按照实施例1的色谱条件，各精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值（S）对浓度（C）进行线性回归，求得维生素B1的线性回归方程：y = 14921.23 x +28787.36，r=0.9994，线性良好。并以峰面积值S对浓度C作图,得一直线图，见图5。
实施例6
维生素B2线性回归方程
将对照品维生素B2分别配制成0.24μg/ml~1.43μg/ml的10个不同浓度的标准溶液，按照实施例1的色谱条件，各精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值（S）对浓度（C）进行线性回归，求得维生素B2的线性回归方程：y=10773.55x+5204.82 ，r=0.9999，线性良好。并以峰面积值S对浓度C作图,得一直线图，见图6。
实施例7
维生素B6线性回归方程
将对照品维生素B6分别配制成0.77μg/ml~2.70μg/ml的10个不同浓度的标准溶液，按照实施例1的色谱条件，各精密量取10μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值（S）对浓度（C）进行线性回归，求得维生素B1的线性回归方程：y=2861.70x+2348.57，r=0.9993，线性良好。并以峰面积值S对浓度C作图,得一直线图，见图7。
实施例8
进样精密度试验
对照品溶液制备方法和色谱条件同实施例1，取对照品溶液，连续进样5次，记录色谱图，测定结果见表1。
表1 进样精密度试验结果
进样次数 1 2 3 4 5 平均 RSD%
91298 91014 91385 91369 91375 91288.2 0.2%
15467 15456 15590 15793 15624 15586 0.9%
7968 7962 7776 7926 7894 7905.2 1.0%
结论：由表1可见，试验结果维生素B1 RSD%为0.2%（n=5）、维生素B2 RSD%为0.9%（n=5）、维生素B6RSD%为1.0 %（n=5），表明进样精密度较好。
实施例9，
回收率试验
分别取维生素B1、维生素B2、维生素B6配成标准溶液，各样品按照实施例1的色谱条件和检测方法测定，计算回收率，测定结果见表2，表3，表4。
表2 维生素B1回收率试验结果
表3 维生素B2回收率试验结果
表4 维生素B6回收率试验结果
结论：由表2，表3，表4可见，维生素B1平均回收率为100.4%，RSD为1.3%，维生素B2平均回收率为99.2%，RSD为1.45%，维生素B6平均回收率为82.7%，RSD为1.68%，表明回收率较好。
实施例10
重复性试验
按照实施例1的色谱条件，取批号为160619的样品6份，分别过滤精密称定，测定结果见表5。
表5 重复性测定结果（n=6）
溶液序号
重复性1 5.17 1.07 1.48
重复性2 4.97 1.07 1.42
重复性3 5.25 1.06 1.48
重复性4 5.23 1.01 1.45
重复性5 5.19 1.03 1.40
平均含量 5.16 1.04 1.45
RSD 2.2% 2.6% 2.5%
结论：由表5可见，试验结果维生素B2RSD为 2.2%，维生素B6 RSD为2.6%，维生素B1 RSD为2.5%表明重复性较好。
实施例11
色谱条件耐用性流速变化
按照实施例1的实验方法，将流速变为：0.9ml/min、1.1ml/min，考察多种维生素之间的峰分离度，结果见表6
表6 流速变化测试结果表
结论：本色谱条件下测定，可见将流速在0.9ml/min ~1.1ml/min条件允许范围内变化对分离度检测没有明显影响。
实施例12
色谱条件耐用性进样量变化
按照实施例1的实验方法，将进样量变为：8μl、12μl考察多种维生素之间的峰分离度，结果见表7。
表7进样量变化测试结果表
结论：本色谱条件下测定，可见将流速在8μl ~12μl条件允许范围内变化对分离度检测没有明显影响。

Claims (4)

1.一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，其特征在于，包括如下步骤：
对照品溶液的制备：称取维生素B1对照品、维生素B2对照品、维生素B6对照品，加水溶解，制成每1mL含维生素B1 5.0μg、维生素B2 1.0μg、维生素B6 1.8μg的混合对照品溶液；
供试品溶液的制备：量取普庆溶液，过滤即得供试品溶液；
色谱条件如下：
色谱柱：waters 氨基键合硅胶色谱柱5μm 4.6×250 mm；
流动相：乙腈:30mmol/L磷酸二氢钾=75:25；
流速：0.9mL/min ~1.1mL/min；
检测波长：264nm～268nm 、438nm～442nm 、324nm～328nm；
柱温：35℃~45℃；
进样量：8μL ~12μL；
理论塔板数：以维生素B2峰计算大于等于2000；
检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，即得对照品与供试品的图谱，对照维生素B1、维生素B2、维生素B6线性回归方程，对供试品溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6进行定性和定量，进而计算得普庆溶液中维生素B1、维生素B2、维生素B6的含量。
2.根据权利要求1所述的一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，其特征在于：所述流动相为乙腈：30mmol/L磷酸二氢钾=75:25，柱温为40℃，检测波长为266nm 、440nm 、326nm。
3.根据权利要求1所述的一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，其特征在于：所述流动相为乙腈：30mmol/L磷酸二氢钾=75:25，柱温为35℃，检测波长为264nm 、438nm 、324nm。
4.根据权利要求1所述的一种测定普庆溶液中多种水溶性维生素的方法，其特征在于：所述流动相为乙腈：30mmol/L磷酸二氢钾=75:25，柱温为45℃，检测波长为268nm 、442nm 、328nm。
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