CN106701660A - 一种宫内膜干细胞无血清培养基 - Google Patents

一种宫内膜干细胞无血清培养基 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种宫内膜干细胞无血清培养基，按占总体积百分比计，包括以下含量组分：低糖DMEM培养基70‑85％、血清替代物5‑10％、维生素C 2‑10%、L‑谷氨酰胺1‑5％、葡萄糖1.25‑15%、2‑巯基乙醇1‑10%、青链霉素双抗溶液0.8‑1.5％、硫酸庆大霉素0.8‑1.5％。采用本发明的一种宫内膜干细胞无血清培养基进行细胞培养，具有培养基成分少，宫内膜干细胞生长稳定，增殖能力强，纯度高的特点。

Description

一种宫内膜干细胞无血清培养基
技术领域
本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种宫内膜干细胞无血清培养基。
背景技术
干细胞是一类具有自我更新能力且在适合微环境下具有多系分化潜能的原始细胞。宫内膜干细胞是多能干细胞，具有增殖能力强 、不导致染色体变异、不导致肿瘤发生等特征，宫内膜干细胞相对于其他干细胞，有较明显的特点：此类干细胞数量多，它是骨髓干细胞的30倍。宫内膜干细胞最早是从刮宫组织中提取，随着研究深入，人们发现从女性月经血中同样能分离得到具有再生能力的干细胞，并且其获取方式无侵害性，无伦理问题，方法更简单、安全。然而，现有培养技术条件下，宫内膜干细胞使用培养基成分较多，纯度不高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种宫内膜干细胞无血清培养基，采用本发明的一种宫内膜干细胞无血清培养基进行细胞培养，具有培养基成分少，宫内膜干细胞生长稳定，纯度高的特点。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种宫内膜干细胞无血清培养基，按占总体积百分比计，包括以下含量组分：
低糖DMEM培养基70-85％
血清替代物5-10％
维生素C 2-10%
L-谷氨酰胺1-5％
葡萄糖 1.25-15%
2- 巯基乙醇1-10%
青链霉素双抗溶液0.8-1.5％
硫酸庆大霉素0.8-1.5％。
维生素C是大部分生物的必需营养，是一种抗氧化剂，保护细胞组织免于自由基的威胁。
L-谷氨酰胺在细胞培养时起到很重要的作用。脱掉氨基后，L- 谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢；在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。
葡萄糖是活细胞的能量来源和新陈代谢中间产物，即生物的主要供能物质。
2- 巯基乙醇是一种有机化合物，其化学式为HOCH2CH2SH，它兼具乙二醇（HOCH2CH2OH）和乙二硫醇（HSCH2CH2SH）的官能团，通常用于二硫键的还原，保护二硫键，从而使蛋白质不被氧化掉而失活。
青链霉素双抗溶液用于抑制细菌增长，为宫内膜干细胞提供无菌的生长环境。
硫酸庆大霉素为氨基糖甙类广谱抗生素，对多种革兰阴性菌及阳性菌都具有抑菌和杀菌作用，为宫内膜干细胞提供无菌的生长环境。
本发明的有益效果在于：月经血样品自带较多细菌，青链霉素双抗溶液与硫酸庆大霉素的双重杀菌，为宫内膜干细胞提供无菌的生长环境，避免细菌消耗培养液中的营养成品，造成生长能量不足，导致宫内膜干细胞无法正常生长，增殖低的问题；维生素C和2-巯基乙醇构建了一个较好的宫内膜干细胞分裂环境，防止宫内膜干细胞在生长的过程中干细胞的组分被氧化而失掉活性；维生素C、L-谷氨酰胺及葡萄糖为宫内膜干细胞的生长提供足够的能量，使新生的细胞具有活性，由于宫内膜干细胞的自我更新能力强，无需额外加入生长因子，只需要提供足够的能量，便能获得良好的分裂生长；本发明的一种宫内膜干细胞无血清培养基成分温和、简单，成本低廉，采用本发明的一种宫内膜干细胞无血清培养基进行宫内膜干细胞培养，宫内膜干细胞生长稳定，杂细胞少，纯度高。
优选的，一种宫内膜干细胞无血清培养基按占总体积百分比计，包括以下含量组分：
低糖DMEM培养基70-85％
血清替代物5-10％
维生素C 2-10%
L-谷氨酰胺1-5％
葡萄糖 1.25-15%
2- 巯基乙醇1-10%
青链霉素双抗溶液0.8-1.5％
硫酸庆大霉素0.8-1.5％。
优选的，一种宫内膜干细胞无血清培养基按占总体积百分比计，包括以下含量组分：
低糖DMEM培养基70％
血清替代物5％
维生素C 2%
L-谷氨酰胺1％
葡萄糖 1.25%
2- 巯基乙醇1%
青链霉素双抗溶液0.8％
硫酸庆大霉素0.8％。
优选的，一种宫内膜干细胞无血清培养基按占总体积百分比计，包括以下含量组分：
低糖DMEM培养基80％
血清替代物7％
维生素C 6%
L-谷氨酰胺3％
葡萄糖 5%
2- 巯基乙醇6%
青链霉素双抗溶液1％
硫酸庆大霉素1％。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。
实施例1
本实施例的一种宫内膜干细胞无血清培养基，按占总体积百分比计，包括以下含量组分：
低糖DMEM培养基70-85％
血清替代物5-10％
维生素C 2-10%
L-谷氨酰胺1-5％
葡萄糖 1.25-15%
2- 巯基乙醇1-10%
青链霉素双抗溶液0.8-1.5％
硫酸庆大霉素0.8-1.5％。
实施例2
本实施例的一种宫内膜干细胞无血清培养基，按占总体积百分比计，包括以下含量组分：
低糖DMEM培养基70％
血清替代物5％
维生素C 2%
L-谷氨酰胺1％
葡萄糖 1.25%
2- 巯基乙醇1%
青链霉素双抗溶液0.8％
硫酸庆大霉素0.8％。
实施例3
本实施例的一种宫内膜干细胞无血清培养基，按占总体积百分比计，包括以下含量组分：
低糖DMEM培养基80％
血清替代物7％
维生素C 6%
L-谷氨酰胺3％
葡萄糖 5%
2- 巯基乙醇6%
青链霉素双抗溶液1％
硫酸庆大霉素1％。
对照试验
采集经血及子宫内膜组织，洗涤，去除肉眼可见的血管和纤维部分，清洗若干次至洗出液清亮，加入胶原酶消化，获得宫内膜干细胞群，将宫内膜干细胞群重悬浮，将宫内膜干细胞群重悬液置于培养瓶，加入实施例1至3的一种宫内膜干细胞无血清培养基，以后每24小时更换培养液一次，更换五次，使宫内膜干细胞群获得足够养分充分生长，传代第5代，在培养瓶中加0.25％胰酶-EDTA进行消化获得培养后的宫内膜干细胞。
以普通一种宫内膜干细胞无血清培养基采用上述方法培养宫内膜干细胞，并与采用实施例1至3宫内膜干细胞培养基培养的宫内膜干细胞进行对照，分别于培养的第24小时及第120小时对细胞进行记数，结果如表1。
表1普通宫内膜干细胞无血清培养基与实施例1至3宫内膜干细胞培养基培养的宫内膜干细胞进行对照
形态特征观察：分别将实施例1至3的细胞培养瓶放置于倒置显微镜下，显微镜连接摄像装置，调整细胞视野并拍照，细胞呈长梭型，成簇排列。
由上述对照试验可知，实施例1至3的宫内膜干细胞无血清培养基比普通无血清培养基得到的宫内膜干细胞生长纯度高，且生长形态良好，增殖能力强。
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (4)

1.一种宫内膜干细胞无血清培养基，其特征在于：按占总体积百分比计，包括以下含量组分：
低糖DMEM培养基70-85％
血清替代物5-10％
维生素C 2-10%
L-谷氨酰胺1-5％
葡萄糖 1.25-15%
2- 巯基乙醇1-10%
青链霉素双抗溶液0.8-1.5％
硫酸庆大霉素0.8-1.5％。
2.根据权利要求1所述的一种宫内膜干细胞无血清培养基，其特征在于：按占总体积百分比计，包括以下含量组分：
低糖DMEM培养基70-85％
血清替代物5-10％
维生素C 2-10%
L-谷氨酰胺1-5％
葡萄糖 1.25-15%
2- 巯基乙醇1-10%
青链霉素双抗溶液0.8-1.5％
硫酸庆大霉素0.8-1.5％。
3.根据权利要求1所述的一种宫内膜干细胞无血清培养基，其特征在于：按占总体积百分比计，包括以下含量组分：
低糖DMEM培养基70％
血清替代物5％
维生素C 2%
L-谷氨酰胺1％
葡萄糖 1.25%
2- 巯基乙醇1%
青链霉素双抗溶液0.8％
硫酸庆大霉素0.8％。
4.根据权利要求1所述的一种宫内膜干细胞无血清培养基，其特征在于：按占总体积百分比计，包括以下含量组分：
低糖DMEM培养基80％
血清替代物7％
维生素C 6%
L-谷氨酰胺3％
葡萄糖 5%
2- 巯基乙醇6%
青链霉素双抗溶液1％
硫酸庆大霉素1％。
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