CN1066959A

CN1066959A - 包埋微生物杀虫剂的改进制备工艺及由该工艺制备的杀虫剂

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Publication number: CN1066959A
Application number: CN92103777A
Authority: CN
Inventors: 卜成海; 李项雨; 孙光熙; 金成郁; 李知雨; 金度烨; 权容国
Original assignee: Korea Research Institute of Chemical Technology KRICT
Current assignee: Korea Research Institute of Chemical Technology KRICT
Priority date: 1991-05-23
Filing date: 1992-05-23
Publication date: 1992-12-16
Anticipated expiration: 2007-05-23
Also published as: EP0540713A1; DE69226495D1; KR0145740B1; RU2113794C1; DE69226495T2; KR920021025A; JPH05507734A; TW233242B; CN1033943C; WO1992020229A1; AU1758792A; JPH0832615B2; EP0540713B1; BR9205317A; AU642821B2; ATE169180T1; CA2087613C

Abstract

本发明提供一种制备包埋微生物杀虫剂的改进工艺和由此制备的杀虫剂。该杀虫剂由来自于自然环境的拮抗微生物和天然生物聚合物组成。

Description

本发明涉及一种制备包埋微生物杀虫剂的改进工艺及由该工艺制备的产品，更确切地说，本发明是关于将拮抗微生物包埋到予处理成凝胶或糊状物的天然聚合物中的工艺。

环境污染问题已日益成为人们关心的话题：过量使用各种化学品，如化学杀虫剂，引起的土壤和水污染，由于对健康和生态造成危害，已成为引发争论的问题。

因此，为了改善由于使用有毒化学品而造成的环境污染，人们进行了研究，以寻找利用天然存在的微生物对植物病害进行生物防治的可行办法。

人们已作了种种努力试图来开发出成本低，无污染的拮抗微生物杀虫剂，然而由于这些产品的低效能及其它缺点，杀虫效果不能令人满意。

例如，Chet等人在美国专利No.4，748，021中披露的一种抗真菌组合物，其中含有有效抵抗镰刀菌（Fusarium）的木霉（Trichoderma）。然而在其发明的优选实施例中，要先用溴代甲烷对土壤进行杀菌，然后才能使用一种生物防治组合物，该组合物中含有一种称为T-35的新的微生物。按照他们的发明，其生物组合物中含有仅用作养分的基质，另外为发挥其作用还含有某种化学胶粘剂。由于这些严格的限制，Chet的发明缺乏可行性或只有有限的用途。

Vesely等人美国专利No.4，259，317中描述了一种用于甜莱种子的粉状制剂，其活性成分是高浓度的Pythium oligandrum卵孢子，在Vesely的专利中，精细的粉状制剂吸附在种子表面。这种制剂含有磨碎的发酵底物干粉，在利于孢子形成的条件下，特别是在含有氯化钙的液体养分存在、并同时照射和发酵基质的条件下，Pythium oligandrum在该发酵底物上繁殖。此外，还需要采用照射工序和液体养分，这就使得Vesely的发明可行性很小，并且在这个发明中底物糊只用作营养物。

Levy（美国专利No.4，985，251）披露了一种杀虫剂组合物，该组合物含有至少一种超吸附的固体有机聚合物和一种液体载体，如水和油，所述的有机聚合物含有亲水性的聚丙烯酰胺或聚丙烯酸酯。这使得处理和保存这种组合物变得困难。不仅如此，该发明中还需要使用诸如聚丙烯酰胺或聚丙烯酸酯之类的有机聚合物，这实际上暗示着有必要开发一种可被生物降解的杀虫剂。

Jung等人（法国专利No.2，501，229）提出一种工艺，利用该工艺将微生物包埋到一种聚合物凝胶基质中，这种基质是通过使用金属盐，如铁盐，铝盐，或与另一种多糖协同处理而得到的一种交联多糖。Jung等人的发明也采用了诸如合成硅石，硅铝酸盐和纤维素之类的吸附剂。因此，Jung的工艺不仅麻烦而且不经济。

Shigemitsu（美国专利No.4，647，537）提出一种方法，该方法是用角叉菜胶制备含活性微生物的杀虫剂。Marois等人（美国专利No.4，724，147）描述了一种方法，该方法是用藻朊酸混合物制备含活性真菌的细小药丸。Lewis等人（美国专利No.4，668，512）提出一种制备含活性真菌、磨碎的麦麸和藻朊酸的细小药丸的方法。然而，这些现有的工艺过程制造的微生物杀虫剂对如植物叶子，草叶，茎和农作物等作用对象缺少足够的吸附力，因而它们仍是低效和不经济的。

综上所述表明，需要继续发展简单经济的工艺，以制备无污染的杀虫剂，并使其具有高效广谱的特点。

按照本发明，业已发现将拮抗微生物包埋到天然生物聚合物上制得的包埋微生物杀虫剂可达到无污染并可抗由不同害虫和微生物引起的各种植物病害的效果，并避免了以前的生物杀虫剂制造工艺中需要除去附随物质等各种缺陷。

值得指出的是，本发明制备的微生物杀虫剂能有效地将其生物活性物质释放到作用对象上，诸如害虫，植物致病真菌，杂草等等。而且，本发明的杀虫剂制造工艺经济可行。

本发明的包埋微生物杀虫剂的制备工艺包括：

从一组物质中选择一种或多种生物聚合物，在高温下加工成凝胶或糊状物，这一组物质包括：含可被微生物代谢利用的生物聚合物的天然物质和从这种天然物质中提取的可被微生物代谢的生物聚合物及其衍生物;

将所述的已加工好的生物聚合物冷却到较低温度;

将一种或多种拮抗微生物混合或包埋到所述凝胶或糊状物中;

将微生物包埋的生物聚合物成型并干燥。

本发明所述的“拮抗微生物”是指一类微生物，该类微生物能够产生和释放某种活性物质如抗生素，采用选择性毒害或破坏的方式根除所述的有害的靶生物，如害虫，植物致病真菌或杂草等，或者提供抑制或竞争机制将大部分所述的靶生物杀灭。

本发明所述的“生物活性物质”是指那些具有杀虫剂功能的物质。

本发明所述的“杀虫剂”包括除莠剂，杀虫剂，杀藻剂，杀菌剂，杀真菌剂和杀线虫剂等等。

本发明所述的“微生物”包括多种微生物，包括革兰氏阴性菌，革兰氏阳性菌，放线菌，真菌，酵母，原生动物，藻类及其孢子等等。本发明所指的典型的拮抗微生物包括：抑制植物致病真菌的微生物，如枯草芽胞杆菌Krictiensis亚种ATCC 55078和ATCC 55079（Bacillus subtilis subsp.Krictiensis ATCC 55078 and 55079），梨假单胞菌ATCC 15958（Pseudomonas pyrocinia ATCC 15958），荧火假单胞菌ATCC 27663（Pseudomonas fluorescence ATCC 27663），Virens胶枝菌ATCC 52045（Gliocladium virens ATCC 52045），木霉菌ATCC 28217（Trichoderma reesei ATCC 28217），Trichoderma harzianum ATCC 52445，Trichoderma hamatum ATCC 52198，Trichoderma viride ATCC 52440和可可链霉菌阿索亚种ATCC 19093（Streptomyces cacaoi subsp.asoensis ATCC 19093），;有杀虫作用的微生物，如苏云金杆菌ATCC 13367（Bacillus thuring censis ATCC 13367），Beauveria bassiana ATCC 26851，48585和48023，Hirsutella thomsonii ATCC 24874，Metarhizium flavoviride ATCC 32969和Verticillium lencanii ATCC 46578;和控制杂草生长的微生物，如Colletotrichum gloeosporioides f.sp.jussiaeas ATCC 52634。

本发明还进一步采用了一种由一种或多种“天然聚合物”构成的生物聚合物，所述的“天然聚合物”是从由含可被微生物代谢利用的生物聚合物的天然物质和从中提取到的可被微生物代谢的生物聚合物及其衍生物构成的一类物质中选出的。

所述的生物聚合物包括：水稻，小麦，玉米，大麦，豆类，意大利黍，印度黍，中国黍和荞麦之类的谷物;马铃薯之类的块茎作物;甘薯和甜瓜之类块根作物和从中提取到的淀粉及其衍生物;并且还包括：琼脂，明胶，聚半乳糖醛酸，聚氨基葡萄糖，羧甲基纤维素，Gelrite，天然蜡，天然胶，及其衍生物。

上述的生物聚合物，除了能满足作为有效杀虫剂释放系统这一常规需求之外，还有以下优点：

1.这种聚合物可作为拮抗微生物的代谢营养源，因而有益于所述微生物的生长和繁殖以及生物活性物质的产生。

2.杀虫组分的释放是一种自然过程，即：拮抗微生物将天然生物聚合物吸收并分解代谢，从而获得生物活性物质的持续释放系统。

3.天然生物聚合物，若被加工成凝胶或糊状物，可对作用对象有高度附着力，因此，所载送的微生物杀虫剂能够有效地释放到诸如土壤，水和植物之类的作用对象或环境中。

4.生物聚合物和微生物一样，来源于自然环境，因此，采用这种生物聚合物的微生物杀虫剂基本上是无污染的。

5.所采用的生物聚合物是廉价而广泛存在的天然产物。因此，本发明的微生物杀虫剂制备成本较低。

拮抗微生物至少应以可繁殖的量包埋到予先加工好的胶状生物聚合物中，而且不要过量，以免聚合物不能有效发挥作用。因此，根据所用的微生物和天然聚合物，拮抗微生物的量最好是每克微生物杀虫剂干粉含10⁴-10¹⁴个细胞，更适宜地是在10⁶-10⁹个细胞之间。

一些生物聚合物在80℃至121℃之间煮或蒸10分钟到60分钟，可变成胶状或糊状，捣碎后即成所需的凝胶或糊状物;有些物质与水混合后，在80℃至121℃之间加热即可制成凝胶或糊状物。

所述的煮、蒸或加热最好是在杀菌温度如121℃下进行。这样即可消除存在于天然聚合物中的污染菌生长的可能性，也可使拮抗微生物在其中优势生长。

加热处理过的天然聚合物应冷却到适于拮抗微生物的存活温度，最好是在室温和60℃之间。

之后，将冷却了的凝胶或糊状物与所述的一种或多种拮抗微生物混合。在此步骤中，可将含有拮抗微生物的培养基或从中分离的细菌体和/或孢子与予制的凝胶或糊状物混合，或者，将冷冻干燥的细菌体与所述的凝胶或糊状物直接混合。

利用常规制剂成型机，可将拮抗微生物和天然生物聚合物的混合物制成粉状，细小丸状或颗粒状，然后用空气、加热或冷冻方法干燥，以获得所需的微生物杀虫剂。

在连续生产过程中，拮抗微生物可以在液体培养基中培养，然而从中分离出细菌体和/或孢子。为了减少或避免任何污染或浪费问题，处理过的天然生物聚合物可与培养废液混合，并加热以获得胶状或糊状基质，该基质冷却之后，将拮抗微生物包埋其中，制成包埋基质并将其成型和干燥。

本发明的包埋微生物杀虫剂也可含有一种或多种添加物，如：营养补充物以增强微生物的生长和增殖或生物活性物质的产生，和/或微生物干燥保护剂以便在固定化和/或干燥过程中保护微生物。

代表性的微生物干燥保护剂包括：甘油，脱脂牛奶，牛奶，奶粉和动植物油。

营养补充物包括：各种碳源和氮源，如纤维素粉，大豆粉，棉籽粉，各种动植物蛋白胨，牛奶，脱脂牛奶，几丁质粉，堆肥粉，小麦麸，玉米浸汁，酵母膏，糖蜜，葡萄糖，蔗糖，糊精和玉米浆;微量元素，如铁，镁，锌和钴;泥土;土壤提取物和其它有利于增加微生物存活的物质。另外，在杀虫剂中也包含那些有改善天然生物聚合物性质的物质。

这些添加物可在微生物细胞与胶状基质混合之前或同时加入。但最好是先将微生物和添加物混合。

包埋微生物杀虫剂可直接用于土壤和植物，包埋微生物杀虫剂由于其极好的附着性，可用于生长中的植物，或储藏或运输中的植物产品，也可用在作物根部附近或收割下的作物切口中，以预防感染病害。

包埋微生物杀虫剂也可用于水基种植介质中。为了将微生物杀虫剂用于水生植物，可制备能漂浮的微生物杀虫剂。即将本发明的微生物杀虫剂包埋到可漂浮的物质上。本发明采用的各种天然可漂浮物包括：膨化谷粒，小麦杆，大麦杆，稻草，玉米杆，黍杆，树叶和草叶，及木屑等可漂浮的农副产品。在水基种植介质中，病害通常出现在水面，即在水下部分和水上部分的交接处。因为所得到的可漂浮杀虫剂是漂浮在水面并且吸附在植物的所谓的交界区，因此，对防治所谓的位置专一性病害是非常有效的。

本发明的微生物杀虫剂也可涂在种子上，如此覆盖一层被膜的种子可防止感染病害，从而可提高发芽率。

另外，本发明也可采用能促进种子发芽的其它微生物杀虫剂，将其涂在植物种子上，可促进种子的发芽，特别是，可用包埋有固氮微生物如根瘤菌的天然杀虫剂处理种子，这样处理过的种子可从固氮菌中获得营养。

在应用包埋微生物杀虫剂之后可发生良性连锁反应如：应用到土壤或植物→拮抗微生物生长和繁殖→生物活性物质产生→杀虫作用。而且天然聚合物也可作为拮抗微生物的保护剂和营养物。因此，可增强拮抗微生物的生长和繁殖以及生物活性物质的产生。

包埋微生物杀虫剂，由于其极好的吸附性，可直接用于土壤和植物。因此其拮抗作用可长期持续。另外，由于天然生物聚合物和微生物一样来自于自然环境，因此所生产的杀虫剂基本上是天然的和无污染的。而且，由于天然聚合物是由很廉价的物质制成的，并采取了简单的制备工艺，本发明具有较高经济效益。

下面的实施例将进一步阐述本发明，并且没有限制本发明的范围，很明显，对本领域的普通技术人员来说，可对本发明进行某种改变或修饰，但将不会背离本发明的实质和范围。

实施例1

1升三角瓶中装200ml无菌培养基（蛋白胨1%，酵母膏0.5%，氯化钠1%，葡萄糖1%，pH 7.0），接种5ml枯草芽胞杆菌Krictiensis亚种（ATCC 55079）种子液（OD₅₅₀＝0.4），然后37℃摇床培养大约12小时，之后，在无菌条件下，高速离心（8000转/分钟，10分钟，Sorvall，GC-3转头）收集细胞。

表1中所列的每个天然生物聚合物与水混合，在80℃至121℃之间加热10分钟到60分钟以形成凝胶或糊状物;然后冷却到室温。在此步骤中，羧甲基纤维素和聚半乳糖醛酸酯不必加热处理，因为它们不用加热就可形成凝胶。

按表1所示的细菌细胞数量，将微生物细胞丸与上述制好的凝胶或糊状物混合至均匀状态，将得到的混合物制成颗粒（直径0.1-5毫米）并空气干燥以获得所要的包埋微生物杀虫剂。

用蒸馏水溶解并稀释本杀虫剂，并涂布到马铃薯葡萄糖琼脂平板上，之后30℃培养24小时，通过计数琼脂平板上形成的菌落数来确定所得到的杀虫剂中含有的活细胞数。

按照下面的公式，从包埋和干燥之前和之后的细胞数可以确定微生物的存活率（%），结果见表1。

存活率（%）＝ (包埋和干燥之后的细胞数)/(初始接种的细胞数) ×100

如表1所示，按照本发明在包埋和干燥过程之后，仍然存在足够量的Bacillus sp.活细胞。

实施例2

按实施例1所述的同样方法，用荧光假单胞菌（ATCC 27663）作为拮抗微生物和表2中所列的物质作为天然生物聚合物，制备各种包埋微生物杀虫剂。

对包埋和干燥过程之后的活细胞数进行计数，并按上述公式确定包埋微生物杀虫剂中微生物的存活率（%），结果见表2。

如表2所示，在包埋和干燥之后，仍存在足够量的Pseudomenas sp.细胞。

实施例3

重复实施例1的同样程序，在无菌的YM培养基（酵母膏3克，蛋白胨5克，葡萄糖10克，蒸馏水1升，pH7.0）中接种5毫升可可链霉菌（ATCC 19093）菌液（OD₅₅₀＝0.4）。

活细胞数和存活率数据见表3。

实施例4

用枯草芽胞杆菌Krictiensis亚种（ATCC 55078）作为拮抗微生物和用马铃薯淀粉、黑麦粉和琼脂粉（6∶3∶1，W/W）的凝胶混合物作为天然生物聚合物，除此之外，用和例1的同样方式制备包埋微生物杀虫剂。

计数上述包埋微生物杀虫剂在包埋和干燥过程之后的活细胞数，确定细胞存活率（%），结果见表4。

除了只用马铃薯淀粉作为天然生物聚合物之外，用上述同样方式制备另一种包埋微生物杀虫剂;结果见表4。

由表4可见，用混合凝胶作为天然生物聚合物的细胞存活率要比只利用马铃薯淀粉作为天然生物聚合物的细胞存活率高得多。

实施例5

通过两组实验测定了微生物干燥保护剂对被包埋的微生物杀虫剂中微生物存活率的影响，采用枯草芽胞杆菌krictiensi亚种（ATCC 55078）作为拮抗微生物，按照与实施例1描述的同样程序进行，一组实验使用了脱脂牛奶，另一组实验没有使用脱脂牛奶。在所有实验中，采用马铃薯淀粉作为天然生物聚合物。

结果比较见表5。

如表5所示，使用微生物干燥保护剂时，细胞存活率大大提高。

实施例6

测定了营养补充物对包埋微生物杀虫剂中的微生物存活率的影响。

将枯草芽胞杆菌krictiensis亚种（ATCC 55079）接种于液体培养基（大豆粉1%，酵母膏0.5%，糖3%，磷酸氢二钾0.05%，硫酸镁0.05%，pH 7.0），30℃培养18小时，离心收集细胞。

为制备凝胶或糊状基质，将1000克煮过的马铃薯和500克煮过的黑麦完全捣碎和混合，在一组实验中，向其中加入200克大豆粉末，50克脱脂牛奶和15克糖作为营养源并进一步混匀;另一组实验则不加这些物质。

之后，将上述基质冷却至室温，与300克上述的湿细胞混合，并制成直径为0.1到5毫米的颗粒，在室温下空气干燥以获得所要的包埋微生物杀虫剂。

计数包埋微生物杀虫剂中的活细胞数。然后将杀虫剂在30℃，相对湿度大于90%的条件下放置24小时，之后计数活细胞数以评价营养物对包埋微生物繁殖的影响。

另外，可将包埋微生物杀虫剂在30℃，相对湿度大于90%的条件下培养24小时，并灭菌。然后通过测定马铃薯葡萄糖琼脂平板上抑菌圈的直径来评价营养补充物对生物活性物质如抗生素的产生的影响，该琼脂平板采用Pyricularia oryzae，Rhizoctonia solani和Botrytis cinerea分别作为相关的试验微生物。

结果见表6

实施例7

用包埋微生物杀虫剂处理种子后，种子发芽率的测定如下：

1升三颈瓶中装200毫升无菌培养基（蛋白胨1%，酵母膏0.5%，氯化钠1%，葡萄糖1%，pH7.0），按1×10⁹个细胞/毫升的量接种枯草芽胞杆菌Krictiensis亚种（ATCC 55078），之后30℃培养大约18小时。然后用Sorvall高速离心机（GS-3转头）以8000转/分钟的速度离心10分钟，收集细胞，并将细胞悬浮于10%（V/V）脱脂牛奶溶液中。

将马铃薯淀粉用水揉合，100℃加热30分钟成凝胶状，之后冷却到室温。

将如此制得的凝胶与含大约10⁸个细胞/克的脱脂牛奶溶液混合均匀，然后将此混合物制成直径0.1-5毫米的颗粒，室温下空气干燥以获得所需的包埋微生物杀虫剂。

用上述制备的包埋微生物杀虫剂处理100个稻种，然后和100个未处理的稻种一起播种到无菌的富含养分的土壤中，在25℃到28℃之间培育15天，由此计数发芽种子的数量，并按出芽种子占全部播种种子的百分数来计算种子的出芽率。结果见表7。

表7 处理和未处理过的种子两者之间出芽率的比较

包埋处理的种子的出芽率未处理过的种子的出芽率

91 73

实施例8

漂浮型包埋微生物杀虫剂对稻瘟病和稻壳枯萎病的预防作用，测定如下：

将8升液体培养基（大豆粉2%，葡萄糖1%，MnCl₂·4H₂O 0.005%，氯化钠0.05%，pH 7.0）装入15升发酵罐中，接种200毫升枯草芽胞杆菌krictiensis亚种（ATCC 55079）种子液（OD₅₅₀＝0.4），30℃培养48小时，之后，在无菌条件下离心收集细胞，再悬浮于500毫升10%（V/V）的无菌脱脂牛奶溶液中。

向上述离心后得到的7.5升上清液中加入800克马铃薯淀粉，200克印度黍粉，200克棉籽粉末和15克葡萄糖;100℃搅拌加热成凝胶状，并冷却到室温。

将凝胶和500毫升含细胞的溶液混合均匀，之后将此混合物制成直径0.1-5毫米的颗粒，在室温下用磨碎的干草叶包埋，以获得漂浮型包埋微生物杀虫剂。

上述包埋微生物杀虫剂中活细胞数为8×10¹¹个/克。

用上述杀虫剂进行如下实验，测定其预防病害仍效果。

水稻培育在有足量水的供水罐中;为了造成稻瘟病，在水稻生长到150厘米高时，将Pyricularia oryzae孢子移植到水稻叶子上。将漂浮型包埋微生物杀虫剂以每罐2克的量喷洒到水面上;然后将罐置于饱和湿度，温度25℃至27℃之间的条件下，未处理过的水稻也置于同样的条件下。两个星期之后，利用表8中规定的标准确定处理和未处理组中稻叶的染病面积。利用下述公式可得到预防率（%），结果见表9。

预防率（%）＝（1- (处理组的染病面积（%）)/(未处理组的染病面积（%）) ）×100

实施例9

包埋微生物杀虫剂的杀虫活性与市场上销售的的化学杀虫剂如Procymidone的杀虫活性的比较。

按照实施例8中的同样程序制备包埋微生物杀虫剂（每克杀虫剂中含8×10¹¹个Bacillus subtilis活细胞）。

为了评价所述杀虫剂对草莓中存在的灰色霉菌的控制效果，在种有草莓的一块地（500厘米×60厘米）上喷洒50克所述的杀虫剂，7天中喷两次，之后，在喷洒杀虫剂之后的1个和两个星期，测定病害侵袭率，用腐烂草莓数占总草莓数的百分比计算侵袭率，结果见表10。

为了比较，以同样的方式，喷洒了2.5克Procymidone，然后测定了它的病害侵袭率，结果见表10。

表10，施用包埋微生物杀虫剂和procymidone之后病害侵袭率的比较

喷洒一周后侵袭率（%）喷洒二周后侵袭率（%）

包埋微生物

杀虫剂处理组 10 24

Procymidone

处理组 13 32

控制组

（未处理组） 20 61

表1.利用Bacillus sp.的包埋微生物杀虫剂的存活率

豆类 2×10¹⁰1×10⁹5

谷子 2×10¹⁰8×10⁶0.04

中国黍 2×10¹⁰2×10⁹10

玉米淀粉 1×10¹⁰1×10⁶0.01

小麦 1×10¹⁰5×10⁷0.5

大麦 2×10¹⁰1×10⁷0.05

稻 2×10¹⁰1×10⁷0.05

马铃薯淀粉 1×10¹⁰4×10⁶0.04

甘薯淀粉 2×10¹⁰1.5×10⁸0.80

羧甲基纤维素 2×10¹⁰7×10⁷0.4

聚半乳糖醛酸 2×10¹⁰1×10⁵0.0005

明胶 2×10¹⁰1×10⁵0.0005

琼脂 1×10¹⁰1.3×10⁶0.01

阿拉伯胶 2×10¹⁰7×10⁸3.5

Gelrite 2×10¹⁰2×10⁷0.10

聚氨基葡萄糖+ 2×10¹⁰5×10⁸2.5

羧甲基纤素

(1:1,w/w)

荞麦 2×10¹⁰9×10⁸4.5

甜瓜 2×10¹⁰9×10⁸4.5

表2.利用Pseudomonus sp.的包埋微生物杀虫剂的存活率

天然生物聚合物	初始细胞数(个/克)	包埋/干燥之后的细胞数(个/g)	存活率(%)
				中国黍马铃薯淀粉甘薯淀粉甜瓜	1×10⁹1×10⁹1×10⁹1×10⁹	8×10⁶9×10⁶2×10⁶6×10⁶	0.80.92060

表3.利用Streptomyces sp.的包埋微生物杀虫剂的存活率

天然生物聚合物	初始细胞数(个/克)	包埋/干燥之后的细胞数(个/g)	存活率(%)
				豆类玉米淀粉稻Gelrite土壤聚氨基葡萄糖+羧甲基纤维素(1:1,w/w)甜瓜	6×10⁹5×10⁹6×10⁹6×10⁹6×10⁹6×10⁹6×10⁹	2.2×10⁷1.2×10⁷5.8×10⁶1×10⁵1.4×10⁸3×10⁸1.8×10⁵	0.40.20.10.0022.05.03.0

表4.利用混合的天然生物聚合物(马铃薯淀粉+黑麦粉+琼脂粉)和单一天然生物聚合物的包埋微生物杀虫剂的存活率

天然生物聚合物	初始细胞数(个/克)	包埋/干燥之后的细胞数(个/克)	存活率
				马铃薯淀粉+黑麦粉+琼脂粉(6:3:1,w/w)单一马铃薯淀粉	2.0×10¹²1.1×10¹⁰	3.3×10⁹4×10⁶	0.20.04

表5.微生物干燥保护剂对微生物存活率的影响

表6.营养物对细菌细胞繁殖和生物活性物质产生的影响

营养物	细胞繁殖		抗生素产生情况(培养24小时后)
						零时	培养24小时后	抑菌圈直径(毫米)
	P^a	R^b	B^c
				未加加	4×10⁸9×10⁷			5×10⁵4×10⁸	1017	1320	019

注：P^a-Pyricularia oryzae

R^b-Rhizoctonia solani

B^c-Botrytis cinerea

表8.发病率的标准

染病面积的百分比	染病状态
		0.0%0.2%0.5%1.0%2.0%5.0%11.0%25.0%55.0%100.0%	未观察到染病区在老叶子上很少看到小片的染病区在老叶子和新叶上,很少观察到小片的染病区平均每两片或三片叶子,观察到一处染病区平均每一片叶子,观察到一处染病区每片叶子观察到两或三处染病区,或完全染病新叶子严重卷缩植物体卷缩植物体严重卷缩或桔萎,或上部叶子严重损害植物体完全桔萎或死亡

表9.包埋微生物杀虫剂对稻瘟病和稻壳桔萎病的影响

病害	处理	叶或壳的染病面积(%)	预防率(%)
				稻瘟病稻壳枯萎病	处理组对照组(未处理组)处理组对照组(未处理组)	4.030.01.79.0	870810

Claims

1、一种制备包埋微生物杀虫剂的工艺，包括：

(a)在高温条件下，从一组物质中选出生物聚合物并加工成凝胶或糊状物；这组物质包括：含可被微生物代谢利用的聚合物的天然物质和从中提取的可被微生物代谢的聚合物及其衍生物；

(b)将加工好的生物聚合物冷却到较低温度；

(c)将一种或多种拮抗微生物与已冷却的生物聚合物混合或包埋；然后

(d)将包埋微生物的生物聚合物成型和干燥。

2、按权利要求1中的工艺，其中所述的拮抗微生物是从一类微生物中选择的，组成这类微生物的有：枯草芽胞杆菌Krictiensis亚种ATCC 55078和55079（Bacillus subtilis subsp.Krictiensis ATCC 55078 and 55079），梨假单胞菌ATCC 15958（Pseudomonas procinia ATCC 15958），荧光假单胞菌ATCC 27663（Pseudomonas fluorescence ATCC 27663），Virens胶枝菌ATCC 52045（Gliocladium virens ATCC 52045），木霉菌ATCC 28217（Trichoderma reesei ATCC 28217），Trichoderma harzianum ATCC 52445，Trichoderma hamatum ATCC 52198，Trichoderma viride ATCC 52440，可可链霉菌阿索亚种ATCC19093（Streptomyces cacaoi subsp.asoensis ATCC 19093），苏云金杆菌ATCC 13667（Bacillus thuringiensis ATCC 13367），Beauveria bassiana ATCC 26851，48585和48023，Hirsutella thomsonii ATCC 24874，Metarhizium flavoviride ATCC 32969，Verticillium lencanii ATCC 46578和Collectotrichum gloeosporioides f.sp.jussiaeas ATCC 52634。

3、按权利要求2的工艺，其中所述的拮抗微生物的含量大约为每克杀虫剂有10⁴-10¹⁴个细胞。

4、按权利要求1的工艺，其中所述的生物聚合物是从一组物质中选出的一种或多种物质，这组物质包括：谷物，块茎作物，块根作物和从中提取的淀粉;琼脂;明胶;聚半乳糖醛酸;聚氨基葡萄糖;羧甲基纤维素;Gelrite;天然蜡;天然胶;及其衍生物。

5、按权利要求1的工艺，其中所述高温是指80℃至121℃。

6、按权利要求1的工艺，其中所述的较低温度是指室温至60℃。

7、按权利要求1的工艺，进一步包括：既可在权利要求1的步骤（b）和步骤（c）之间，也可在权利1的步骤（C）的过程中，加入一种或多种微生物干燥保护剂和/或一种或多种营养补充物。

8、权利要求7的工艺，其中所述的干燥保护剂包括：甘油，脱脂牛奶，牛奶，奶粉，植物和动物油。

9、一种按照权利要求1至8之一的工艺制备的包埋微生物杀虫剂。

10、一种制备漂浮型包埋微生物杀虫剂的工艺，包括将一可漂浮的物质用权利要求9的杀虫剂进行进一步的处理。

11、按权利要求10的工艺，其中所述的可漂浮物选自下列物质：膨化谷粒，米糠，坚果壳，大麦麸，谷壳，小麦杆，大麦杆，稻草，玉米杆，黍杆，树叶，草叶和木屑。