CN1270610C - 一种青霉在植物土传病害防治上的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种青霉在植物土传病害防治上的应用。将青霉penicilliumstriatisporum以固体菌剂形式、固体菌剂与固体有机肥配伍形式及该青霉的液体培养代谢产物的形式防治植物土传病害。该青霉penicilliumstriatisporum可以固体菌剂的形式单独施用于植物根际，或与固体有机肥配伍使用施于农作物根部，该青霉的液体培养代谢产物还可以用于根部浇灌或植株移栽时蘸根防治植物土传病害。本发明的优点在于：青霉penicillium striatisporum核心菌株具有生长速度较快，易于培养，根际定植力强，对疫病、菌核病、立枯病、纹枯病、猝倒病等病的原真菌具有强烈拮抗作用；比其他青霉菌株有明显优势；该青霉固体菌剂的生产成本低，生产方法简单，使用方法灵活多样，使用效果稳定，为生防微生物家族提供了一种新的生物资源。
Description
技术领域
本发明涉及一种青霉在植物土传病害防治中的应用，具体是一种对疫霉属等病原真菌有强烈拮抗作用的青霉penicillium striatisporum在植物土传病害防治中的应用。属于利用微生物对农作物病害进行生物防治领域。
背景技术
在植物的多种病害中，土传病害的防治难度最大。因为空气中的病原菌受到空气湿度、温度、紫外线的影响较多，在数量及致病性上容易受到环境的影响而被削弱，特别在设施栽培中，能通过控温、控湿人为调节这些因素而防止或减轻病害的发生；而土壤是一个相对稳定的生态环境，所以土壤中的病原菌受到外界的副面影响也相对较少，人为控制的方法及途径也很有限，因而土中的病残体可存活长达十几年之久，使得土传病害成为植物病害的顽疾。在土传病害中，病原菌从植株的种子或根系侵染，地上部的防效甚微或根本无效，所以一旦作物感病，便无可挽救，这一点比植株地上部分感病的防治难度明显加大。
单独用生防微生物进行土传病害的防治遇到的主要难题是效果不稳定，其原因很多，但主要原因就在于外源施入的生防菌株不能很快在根系定殖、增殖从而在营养和空间上占据优势并且较长时间的保持这种优势。有机肥由于具有改善根际土壤环境、为植物提供均衡的养分、改善植物的营养状况、促进植株根系的定植、生长的功能，在农业生产上一直作为基肥被长期使用，然而，即使是大量普施的有机肥具体到植株根际的微域内，其量也还是有限的，满足不了根部施入的生防菌短时间内复苏需要的营养条件；特别是设施栽培条件下，长期的高温、高湿、高肥、连作、重茬造成土壤质量严重下降、营养不均衡甚至匮乏，生防菌株单独施入后不但很难得到适宜的生境快速生长、繁殖，而且很可能由于不适应根部土壤的恶劣环境而在短时间内死亡。
在植物病害的生物防治中研究和使用较多的微生物主要有：细菌类，如无致病力土壤杆菌、欧氏杆菌、芽孢杆菌、假单胞菌等；放线菌主要有吸水链霉菌等；真菌类有木霉属的哈茨木霉、康宁木霉等，腐生性的、腐霉菌、厚孢轮枝菌以及无致病力的镰刀菌、丝核菌等。与其他微生物在植物病害防治上的应用相比，关于青霉菌在植物病害特别是土传病害生物防治的研究、应用报道相对较少，国外的研究报道主要有以下几种：(1)penicillium purpurogenum，Melgarejo&M-Sagasta.I(Melgarejo，1984)从桃树枝条分离到的penicillium purpurogenum能产生降解酶破坏病原菌的菌丝细胞而对镰刀菌Fusarium oxysporum引起的枯萎病起到防病效果；(2)penicillium frequentans，M-Sagasta.I(1986)研究报道青霉penicilliumfrequentans产生的拮抗物质可以防治由Geotrichum candidum引起的水果的酸腐病；Antonieta De Cal(Antonieta De Cal，1988)报道青霉penicillium frequentans液态静置培养10天后有两种拮抗物质产生，20天后产生量最高，30天后抗生活性下降，摇床培养无拮抗物质，产生的拮抗物质对Monilinia laxa.、木霉、青霉、镰刀菌、灰霉等十四种真菌有抗生作用，可防治由该Monilinia laxa.引起的核果类作物的褐腐病，并对产生的拮抗物质进行分离纯化，但对疫霉无抗生现象；Susan pascual(Susan pascual，2000)研究了该青霉penicillium frequentans的生长条件对其代谢产生拮抗物质以及对Monilinia laxa防效的影响；(3)penicillium funiculosum，Fang JG(Fang JG，1995)研究报道了青霉penicillium funiculosum对寄生疫霉、柑橘褐腐疫霉、樟疫霉引起的杜鹃花和柑橘的根腐病的生防机理主要有穿透、降解菌丝，产生拮抗物质抑制疫霉病原菌丝的生长；也对腐霉、立枯、镰刀、大丽轮枝菌等病原菌有拮抗作用，研究还发现基质盆栽试验中，加入麸皮固体培养生成的固体菌剂的防病效果比单独用孢子悬液灌根效果好，原因是固体菌剂中的麸皮为生防菌的生长提供了营养，研究因此指出在生物防治中应考虑将生防微生物与适当营养物质配伍使用。(4)草酸青霉penicillium oxalicum，Gintis.B.O.(Gintis.B.O.1987)报道它通过产生拮抗物质防治疫霉引起的杜鹃花根腐病；Walter J.(Walter J.，1984)报道草酸青霉可防治终极腐霉引起的雏豆猝倒病；I.Larena等报道草酸青霉主要的生防机制不是通过产生降解酶如果胶酶而是通过诱导植株产生抗性而防治镰刀菌引起的枯萎病(Antonieta De Cal，1995，1997，1999；Susanpascual，1997；I.Larena，2002)，而且在这方面开展了深入、系统的研究：豌豆、番茄等蔬菜上作种子胞衣、苗期根部接入分生孢子等室内和田间实验，并对草酸青霉的生长特性、在植株根际的生态竞争力、与克菌丹或甲霜灵配伍使用情况、最佳的产孢培养条件及孢子菌剂的保藏特性及工业化生产的条件等进行了深入的研究。国内，吴礼栋报道用青霉素可防治衫木苗期病害(吴礼栋，1994)；曾金风报道青霉Z-88菌株对水稻纹枯病菌有抗生作用而且对水稻种子发芽促进作用(曾金凤，1995)。彭霞薇通过实验室内的研究报道草酸青霉产生的果胶酶可以诱导黄瓜对黑星病Cladosporium cucumerinum的抗性。
由于青霉菌是广泛存在的一大类真菌微生物，种类繁多，多数为腐生菌。青霉菌的少数种可侵染果实引起褐腐病或青霉病；有的种是工业和医药的重要经济价值真菌，如产黄青霉Penicillium chrysogenum Thom产生青霉素，为拯救人类生命和社会发展作出了巨大贡献，现在仍然是医疗、饲料等行业主要使用的安全、有效的抗生素之一；有的种可产生植酸酶、木聚糖酶、脂肪酶、淀粉酶、胡萝卜素、微生物絮凝剂等，在工业发酵行业有广泛的用途，产生巨大的经济效益。另外，与细菌相比，青霉菌培养条件多样，固态、液态培养方式都能使用，易于培养；而且对营养要求简单，农副产品或工业生产中的下脚料，如麸皮、米糠、废糖蜜都是培养青霉菌的良好培养基，来源广泛，价格低廉；生长、繁殖速度快，产孢能力强，有较好的环境适应性，这些特点对于将来的工业化生产和应用十分有利。
江苏省农业科学院从植物根际筛选得到一种青霉，经中国农业微生物菌种保藏中心鉴定为penicillium striatisporum。菌株特征为：PDA培养基上菌落白色、垫状，菌丝无色，0.8-1.4μm宽；分生孢子梗短，柱状，有时有分支，一般长5-15μm，不超过30μm，宽1.0-1.5μm，瓶梗多3-5个生于分生孢子梗顶端，偶有单生于菌丝或分生孢子梗侧面，3.1-7.1×1.6-2.8μm，烧瓶状，近基部最宽，顶部宽0.5-1.2μm；分生孢子椭圆形到近圆形、圆形，串生于瓶梗上，孢子之间有明显的连接体；成熟孢子表面粗糙，可见明显的3-数条从纹，2.5-2.9×2.1-2.5μm。
青霉penicillium striatisporum最初在1969年由Stolk AC从土耳其土壤中分离获得，Index Fungorm数据库将该种列为Penicillium restrictum的异名，但对本发明中涉及的青霉penicillium striatisporum由中国农业微生物菌种保藏中心进行菌种鉴定时发现，该青霉penicillium striatisporum菌株与数据库中的Penicillium restrictum之间核糖体-DNA ITS区序列相似性不高。
国内对于青霉在生物防治领域的研究应用开展较少，尤其目前国内外还未见到有关青霉penicillium striatisporum菌株在防治植物病害特别是土传病害上应用的报道。
发明内容
本发明的目的在于：针对植物的土传病害防治中难度较大，目前使用较多的细菌类、放线菌等微生物施入后不但很难得到适宜的生境快速生长、繁殖，且很可能由于不适应根部土壤的恶劣环境而在短时间内死亡，直接影响到这些微生物对土传病害的防治效果。提出将一种抗菌谱较广，生长速度较快，易于培养，根际定植力强的青霉penicillium striatisporum应用于植物的土传病害防治中。
本发明的目的是这样实现的：一种青霉在植物土传病害防治上的应用，其特征在于：将青霉penicillium striatisporum以固体菌剂形式、固体菌剂与固体有机肥配伍形式及该青霉的液体培养代谢产物的形式防治植物土传病害。
所述青霉penicillium striatisporum固体菌剂是这样获得的：将青霉penicillium striatisporum的保藏菌种置入试管斜面培养基中进行试管斜面活化后，再置入装有液体培养基的容量为250ml的三角瓶，装液量为80ml/250ml；将三角瓶置于摇床培养3-4天，摇床的转速160r/min，培养期的环境温度为28±2℃；结束后以5％接种量(V/W)接入固体培养基在28±2℃环境中继续培养6-8天，每隔2-3天翻拌一次，至产孢；最后自然风干或30℃烘干后粉碎过10-20目筛，获得固体菌剂，固体菌剂中的含菌量为1010-11cfu/g。
在获得青霉penicillium striatisporum固体菌剂的过程中，所述的试管斜面培养基为：葡萄糖10克，蛋白胨5克，KH2PO4 1克，MgSO4·7H2O0.5克，琼脂15-20克，pH自然，水1000毫升；所述的液体培养基为：葡萄糖10克，蛋白胨5克，KH2PO4 1克，MgSO4·7H2O 0.5克，pH自然，水1000毫升；所述的固体培养基为：麸皮、草炭、蛭石，它们的质量配比为1∶3∶1。
所述的液体培养代谢产物是这样获得的：将青霉penicilliumstriatisporum的保藏菌种置入试管斜面培养基中进行试管斜面活化后，再置入装有液体发酵培养基的容量为250ml的三角瓶，装液量为80ml/250ml；摇床的转速160r/min，培养期的环境温度为28±2℃；将三角瓶置于摇床培养6-8天后，两层纱布过滤出去菌丝，收集滤液经直径0.45微米的微孔滤膜制备的无菌滤液即为液体培养代谢产物。
在获得青霉penicillium striatisporum液体培养代谢产物的过程中，所述的液体发酵培养基是这样配制的：称取马铃薯200克，去皮，切成块煮沸半小时，然后用两层纱布过滤，再加葡萄糖20克，溶化后补足水至1000毫升，121℃高压灭菌20分钟，获得液体发酵培养基。
以固体菌剂形式防治植物土传病害是将固体菌剂用5-8倍菜园土拌匀后穴施于农作物根部，每穴含固体菌剂0.1-0.3克，或将固体菌剂与育苗土重量配比为1∶200-500混合后装钵育苗；固体菌剂与固体有机肥配伍形式防治植物土传病害是将固体菌剂与固体有机肥配伍重量配比为1∶50-100混合后穴施于植株根部，每穴施15-20克；所述的液体培养代谢产物形式防治植物土传病害是将液体培养代谢产物用0.05-0.1％的吐温-20稀释100-200倍后用于根部浇灌或喷洒于植株，其中根部浇灌时每株浇灌量为20-50毫升稀释液。
所述的固体有机肥是农业固体废弃物经生物发酵、脱臭、除水、经过腐熟后形成的有机肥。农业固体废弃物包括：畜禽粪便、农作物秸秆、初级农产品的深度开发带来的各种下脚料和废产品。
所述的土传病害指通过土壤传播的疫霉属、核盘菌属、丝核菌属、腐霉属病原真菌引起的疫病、菌核病、立枯病、纹枯病、猝倒病等。其中，疫霉属病原真菌包括：辣椒疫霉Phytophthora capsici Leonian、致病疫霉Phytophthora infestans de Bary、大豆疫霉Phytophthora megaspermaDrecgsler、烟草疫霉Phytophthora nicotianae Breda Hann、掘氏疫霉Phytophthora drechsleri Tucker等疫霉；所述的核盘菌属病原真菌包括：油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotonium；所述的丝核菌属病原真菌包括：立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kuhn，禾谷丝核菌Rhizoctonia Van der Hoeven等；所述的腐霉属病原真菌包括：瓜果腐霉Pythium aphanidermatum，终极腐霉Pythium ultimum等。
本发明的优点在于：由于采用青霉penicillium striatisporum为核心菌株，不仅生长速度较快，易于培养，根际定植力强，而且对疫病、菌核病、立枯病、纹枯病、猝倒病等病原真菌具有强烈拮抗作用；该菌株比国内外已经报道的其他青霉菌株有明显优势，而且拮抗物质提取方法简便，初步分离、纯化的结果表明该青霉菌株产生的拮抗物质为2-3种非蛋白类小分子抗生素，有较好的耐高温、耐酸碱、耐紫外线性能，80℃处理30分钟，活性仍保留80％，而且单独每个组分都有活性，彼此之间没有依赖性，即可能有多种活性形式，且能溶解于多种有机溶剂中，有利于抗生素的产品开发；该青霉固体菌剂的生产采用常规的固体浅盘培养，成本低，生产方法简单，可操作性强；使用方法灵活多样，既可以将固体菌剂直接穴施，又可以固体菌剂与有机肥的配伍使用，使用效果均很稳定；本发明为生防微生物家族注入新生力量，提供一种新的生物资源。
具体实施方式
实施例1：a)培植青霉penicillium striatisporum固体菌剂的培养基的配制
试管斜面培养基的配制：称取：葡萄糖10克，蛋白胨5克，KH2PO4 1克，MgSO4·7H2O 0.5克，溶解在1000毫升水中，加入琼脂15-20克，加热煮沸至琼脂溶化，补足体积至1000毫升，适当冷却后分装到试管中，装量为试管高度的1/5-1/6，用试管塞塞好试管口，121℃高压灭菌25min，趁热取出后摆斜面至冷却备用，斜面高度不超过试管高度的1/3。
液体种子培养基的配制：称取葡萄糖10克，蛋白胨5克，KH2PO4 1克，MgSO4·7H2O 0.5克，溶解在1000毫升水中，然后分装，装液量为80-100ml/250ml三角瓶，用棉塞塞好瓶口，121℃高压灭菌25min，冷却后备用。
固体培养基的配制：取：麸皮、草炭、蛭石，它们的质量配比为1∶3∶1。在本实施例中，取麸皮1kg，草炭3kg、蛭石1kg均匀搅拌，加水调整培养基水分含量为60-65％，121℃高压灭菌40min，第二天在同样条件重新灭菌一次，冷却后备用。
b)培植青霉penicillium striatisporum的液体培养代谢产物的液体发酵培养基的配制
液体发酵培养基的配制：称马铃薯200克，去皮，切成块煮沸半小时，然后用两层纱布过滤，再加葡萄糖20克，溶化后补足水至1000毫升，121℃高压灭菌20分钟备用。
实施例2：青霉penicillium striatisporum固体菌剂的制备
本发明涉及的青霉penicillium striatisporum是由江苏省农业科学院从植物根际筛选得到，并采用斜面保藏菌种或安瓿管冷冻干燥保藏菌种。
a)菌种的活化
采用斜面保藏菌种的活化方法：将斜面保藏的菌种中挑取一块直径8mm左右的菌种接种到试管斜面培养基中活化，在28±2℃的环境中培养3-5天后备用。
采用安瓿管冷冻干燥保藏菌种的活化方法：在超净工作台中用70％酒精棉球擦洗安瓿，然后用砂轮在安瓿中挫一道沟，用无菌纱布垫或无菌毛巾包好安瓿，然后用手掰开安瓿，向其中加入0.5-1.0ml液体培养基，慢慢旋转安瓿，使冻干菌种复水，然后再将此转接到试管斜面培养基中活化，在28±2℃的环境中培养3-5天后备用。
b)液体培养
将试管活化好的青霉挑取三块直径8mm左右的菌块分别接种在三个容积为250ml的装有83.3ml液体培养基三角瓶中，置于摇床，摇床的转速160r/min，在28±2℃的环境中继续培养，培养3-4天后备用。
c)固体培养
将液体培养的250ml菌种接入5kg固体培养基中，将固体培养物平铺在浅盘中，厚度5-8cm，上面盖上双层经高压灭菌处理的纱布，在28±2℃环境中继续培养6-8天，每隔2-3天翻拌一次，同时适当补加无菌水，培养至产孢；最后自然风干或30℃烘干(水分含量小于10％)即为固体菌剂，菌剂含菌量为1010-11cfu/g。
以上所有接种操作必须在无菌条件下，即在超净工作台的酒精灯旁或经紫外线灭菌处理1-2小时的房间，固体培养的房间也需事先用紫外线灭菌处理1-2小时。
实施例3：青霉penicillium striatisporum固体菌剂的使用
含有青霉penicillium striatisporum固体菌剂，可以在苗床上使用：将本发明涉及的固体菌剂与育苗土以重量比为1∶200-500混合后装钵育苗，对苗床土传病害的防效可达40-70％。
含有青霉penicillium striatisporum的固体菌剂还可以在移栽时使用：栽苗前，使用时用5-8倍菜园土拌匀后穴施，每穴含固体菌剂0.1-0.3克。
实施例4：青霉penicillium striatisporum固体菌剂与有机肥配伍的菌肥使用时，有机肥对青霉菌株在根际定殖的增效作用
以青霉penicillium striatisporum的固体菌剂与固体有机肥的配伍重量配比为1∶80混合的菌肥，进行盆栽的穴施试验，盆栽用土为菜园土自然风干后使用。辣椒移栽时，每株15-20克，穴施菌肥比单独施用等量菌剂明显有利于青霉在根际的定植(见表1)。移栽20天后，施菌肥的处理，辣椒根际青霉菌的数量是单独施用等量菌剂的14.3倍，且前者青霉菌在根际真菌中所占的比例也远远高于后者，成为真菌中的优势菌群。移栽后40天，青霉菌在根际的数量仍有2.5×105cfu/g干土，占根际真菌总数的73％，有很强的根际定殖及保持优势种群的能力。
表1 有机肥对青霉菌株在根际定殖的增效作用(单位：(×105cfu/g干土))
| 处理 | 空白对照 | 有机肥 | 青霉菌 | 菌肥 | ||||
| 时间 | 青霉菌数 | 占真菌总数比例(％) | 青霉菌数 | 占真菌总数比例(％) | 青霉菌数 | 占真菌总数比例(％) | 青霉菌数 | 占真菌总数比例(％) |
| 20天40天 | 00 | 00 | 00 | 00 | 0.7520.655 | 13.626 | 10.72.5 | 9673 |
实施例5：青霉penicillium striatisporum固体菌剂与固体有机肥配伍的菌肥使用对辣椒疫霉病防效(生产大棚试验)
以青霉penicillium striatisporum的固体菌剂与固体有机肥的配伍混合的菌肥，进行生产大棚试验，试验前，选择小区1、小区2、小区3和小区4作为实验用地，实验用辣椒品种均为：苏椒2号。在上述小区中：小区1、小区2作为对照组，采用常规栽培，移栽时穴施多菌灵，施用量为：0.2-0.5克/穴+等量有机肥；小区3、小区4作为菌肥的实验组，采用菌肥处理，移栽时，穴施15-20克的菌肥，所述的菌肥中青霉penicilliumstriatisporum固体菌剂与固体有机肥重量配比为1∶70。
在辣椒移栽时穴施该菌肥能明显促进辣椒的生长，在移栽后20天、40天，辣椒的株高、茎粗、叶数、叶宽、果实数及开展度等指标上明显好于对照(见表3)，单棵产量增加37.3％；在移栽40天，小区1和小区2共有38株因辣椒疫霉Phytophthora capsici Leonian而发病，即对照组发病率约为18.36％，经穴施菌肥处理的，同期仅有1株发病，即实验组发病率仅为0.47％(见表2)；另外，在盆栽及大棚试验中均观察到穴施菌肥的处理，辣椒缓苗期比单独施等量菌剂或有机肥的对照明显缩短4-5天，说明该菌肥能促进根系的生长发育。
表2 发病情况调查
| 项目处理 | 10天 | 20天 | 40天 | 60天 | 株数 | 产量(斤) | 产量(斤/棵) | |
| 对照对照菌肥菌肥 | 小区1小区2小区3小区4 | 0000 | 0000 | 221601 | 0000 | 10310499112 | 75.670.5102103.5 | 0.730.681.030.92 |
表3 移栽后20、40天长势调查
| 项目处理 | 株高(厘米) | 茎粗 | (厘米) | 叶数(片) | 叶宽(厘米) | 40天 | |||||
| 20天 | 40天 | 20天 | 40天 | 20天 | 40天 | 20天 | 40天 | 结果数(个) | 开展度(cm) | ||
| 对照对照药肥药肥 | 小区1小区2小区3小区4 | 41.941.653.650.5 | 51.64558.651.4 | 0.961.181.161.26 | 1.021.31.31.32 | 36.432.16154.8 | 50.644.169.859.2 | 3.13.63.743.66 | 3.93.923.883.78 | 16202925 | 45.241.253.647.4 |
实施例6：青霉penicillium striatisporum对油菜菌核病菌的抗生作用
a)青霉penicillium striatisporum菌株对油菜菌核病菌的平板拮抗作用
青霉penicillium striatisporum菌株在平板上强烈地抑制油菜菌核病原菌的菌丝生长：青霉菌与油菜菌核病原菌同步接种培养4-5d后，在青霉菌落周围病原菌菌丝不能生长，有一条宽度为约13-15mm的拮抗带，而平板其它地方病原菌菌丝能正常生长，表明青霉菌代谢产物对油菜菌核病原菌有明显的拮抗作用。
b)青霉penicillium striatisporum菌株液体培养代谢产物对油菜菌核病菌菌丝细胞结构的影响
显微观察经青霉菌株液体培养代谢产物处理的菌核病菌菌丝块显示：菌丝细胞壁仍保持完整，但细胞内原生质不再均匀透明，而是浓缩成许多颗粒状物质，细胞内部结构已被破坏；将处理过的病原菌菌丝块接种在PDA平板上培养，未见菌丝生长；将处理过的病原菌菌丝块接种在油菜倒1-2叶上保湿培养，以接种正常病原菌菌丝块为对照，6天后，处理未出现病斑，对照出现了明显的病斑；8天后，对照病斑继续增大，而处理仍未出现病斑。可能培养滤液中的拮抗物质通过破坏细胞结构而杀死油菜菌核病菌的菌丝细胞，使其完全丧失致病性。
实施例7：液体培养代谢产物的培植
称马铃薯200克，去皮，切成块煮沸半小时，然后用两层纱布过滤，再加葡萄糖20克，溶化后补足水至1000毫升，121℃高压灭菌20分钟，获得液体发酵培养基。
将青霉penicillium striatisporum的保藏菌种置入试管斜面培养基中进行试管斜面活化后，再置入装有液体发酵培养基的容量为250ml的三角瓶，装液量为80ml/250ml；摇床的转速160r/min，培养期的环境温度为28±2℃；将三角瓶置于摇床培养6-8天后，两层纱布过滤出去菌丝，收集滤液经直径0.45微米的微孔滤膜制备的无菌滤液即为液体培养代谢产物。
实施例8：青霉penicillium striatisporum的液体培养代谢产物的应用
以黄瓜的盆栽试验为例：将液体培养代谢产物用0.05-0.1％的吐温-20稀释200倍，将2片真叶的黄瓜苗在稀释液浸根30分钟后栽种，黄瓜苗栽好后再用20-50毫升稀释液在根部浇灌，可预防掘氏疫霉Phytophthoradrechsleri Tucker侵染引起的黄瓜疫病，防效达30-60％。
实施例9：青霉penicillium striatisporum的液体培养代谢产物的应用
以番茄植株施用为例：将液体培养代谢产物用0.05-0.1％的吐温-20稀释150倍，将稀释液喷洒在番茄植株上，可以预防由致病疫霉Phytophthorainfestans de Bary侵染引起的番茄晚疫病，明显减少叶、茎及果实上的病斑数，烂果率降低20-45％。
此外，在土豆、番茄、瓜类等其他农作物育苗或移栽时进行相同的实验，可以发现青霉penicillium striatisporum固体菌剂或含有青霉penicilliumstriatisporum固体菌剂的菌肥以及该青霉penicillium striatisporum的液体培养代谢产物对疫霉属病原真菌中的辣椒疫霉Phytophthora capsici Leonian、致病疫霉Phytophthora infestans de Bary、大豆疫霉Phytophthoramegasperma Drecgsler、烟草疫霉Phytophthora nicotianae Breda Hann、掘氏疫霉Phytophthora drechsleri Tucker，核盘菌属的油菜菌核病菌Sclerotiniasclerotonium，丝核菌属的立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kuhn、禾谷丝核菌Rhizoctonia Van der Hoeven，腐霉属的瓜果腐霉Pythium aphanidermatum，终极腐霉Pythium ultimum等病菌引起的疫病、菌核病、立枯病、纹枯病、猝倒病等都具有较好的防治效果，能有效地预防这些土传病害危及农作物。
Claims (10)
1、一种青霉在植物土传病害防治上的应用，其特征在于：将青霉penicillium striatisporum以固体菌剂形式、固体菌剂与固体有机肥配伍形式及该青霉的液体培养代谢产物的形式防治植物土传病害。
2.根据权利要求1所述的一种青霉在植物土传病害防治上的应用，其特征在于：所述青霉penicillium striatisporum固体菌剂是这样获得的：将青霉penicillium striatisporum的保藏菌种置入试管斜面培养基中进行试管斜面活化后，再置入装有液体培养基的容量为250ml的三角瓶，装液量为80ml/250ml；将三角瓶置于摇床培养3-4天，摇床的转速160r/min，培养期的环境温度为28±2℃；结束后以5％接种量(V/W)接入固体培养基在28±2℃环境中继续培养6-8天，每隔2-3天翻拌一次，至产孢；最后自然风干或30℃烘干后粉碎过10-20目筛，获得固体菌剂，固体菌剂中的含菌量为1010-11cfu/g。
3、根据权利要求2所述的一种青霉在植物土传病害防治上的应用，其特征在于：所述的试管斜面培养基为：葡萄糖10克，蛋白胨5克，KH2PO41克，MgSO4·7H2O 0.5克，琼脂15-20克，pH自然，水1000毫升；所述的液体培养基为：葡萄糖10克，蛋白胨5克，KH2PO4 1克，MgSO4·7H2O0.5克，pH自然，水1000毫升；所述的固体培养基为：麸皮、草炭、蛭石，它们的质量配比为1∶3∶1。
4、根据权利要求1所述的一种青霉在植物土传病害防治上的应用，其特征在于：所述的液体培养代谢产物是这样获得的：将青霉penicilliumstriatisporum的保藏菌种置入试管斜面培养基中进行试管斜面活化后，再置入装有液体发酵培养基的容量为250ml的三角瓶，装液量为80ml/250ml；摇床的转速160r/min，培养期的环境温度为28±2℃；将三角瓶置于摇床培养6-8天后，两层纱布过滤除去菌丝，收集滤液经直径0.45微米的微孔滤膜制备的无菌滤液即为液体培养代谢产物。
5根据权利要求4所述的一种青霉在植物土传病害防治上的应用，其特征在于：所述的液体发酵培养基是这样配制的：称取马铃薯200克，去皮，切成块煮沸半小时，然后用两层纱布过滤，再加葡萄糖20克，溶化后补足水至1000毫升，121℃高压灭菌20分钟，获得液体发酵培养基。
6、根据权利要求1所述的一种青霉在植物土传病害防治上的应用，其特征在于：所述的固体菌剂形式防治植物土传病害是将固体菌剂用5-8倍菜园土拌匀后穴施于农作物根部，每穴含固体菌剂0.1-0.3克，或将固体菌剂与育苗土重量配比为1∶200-500混合后装钵育苗；固体菌剂与固体有机肥配伍形式防治植物土传病害是将固体菌剂与固体有机肥配伍，重量配比为1∶50-100混合后穴施于植株根部，每穴施15-20克；所述的液体培养代谢产物形式防治植物土传病害是将液体培养代谢产物用0.05％-0.1％的吐温-20稀释100-200倍后用于根部浇灌或喷洒于植株，其中根部浇灌时每株浇灌量为20-50毫升稀释液。
7、根据权利要求6所述的一种青霉在植物土传病害防治上的应用，其特征在于：所述的固体有机肥是农业固体废弃物经生物发酵、脱臭、除水、经过腐熟后形成的有机肥。
8、根据权利要求7所述的一种青霉在植物土传病害防治上的应用，其特征在于：所述的农业固体废弃物包括：畜禽粪便、农作物秸秆、初级农产品的深度开发带来的各种下脚料和废产品。
9、根据权利要求1或6所述的一种青霉在植物土传病害防治上的应用，其特征在于：所述的土传病害指通过土壤传播的疫霉属、核盘菌属、丝核菌属、腐霉属病原真菌。
10、根据权利要求9所述的一种青霉在植物土传病害防治上的应用，其特征在于：所述的疫霉属病原真菌包括：辣椒疫霉Phytophthora capsiciLeonian、致病疫霉Phytophthora infestans de Bary、大豆疫霉Phytophthoramegasperma Drecgsler、烟草疫霉Phytophthora nicotianae Breda Hann、掘氏疫霉Phytophthora drechsleri Tucker；所述的核盘菌属病原真菌包括：油菜菌核病菌Sclerotinia sclerotonium；所述的丝核菌属病原真菌包括：立枯丝核菌Rhizoctonia solani Kuhn，禾谷丝核菌Rhizoctonia Van der Hoeven；所述的腐霉属病原真菌包括：瓜果腐霉Pythium aphanidermatum，终极腐霉Pythium ultimum。
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