CN106632548B - 一种高纯度曲克芦丁及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种高纯度曲克芦丁及其制备方法，涉及药物化学和有机合成化学技术领域。该制备方法包括前段醚化步骤、络合步骤、后段醚化步骤以及后处理步骤，本发明提供的高纯度曲克芦丁的制备方法成本较低，能够制得高纯度曲克芦丁，尤其适用于工业生产。

Description

一种高纯度曲克芦丁及其制备方法

技术领域

本发明涉及药物化学和有机合成化学技术领域，具体而言，涉及一种高纯度曲克芦丁及其制备方法。

背景技术

曲克芦丁(Troxerutin)又称维脑路通，三羟乙基芦丁。化学名为7,3’,4’-三羟乙基芦丁(简称三羟乙基芦丁)。分子式C₃₃H₄₂O₁₉；分子量；742.69；CAS NO:7085-55-4；化学结构式如下：

曲克芦丁是一种抗凝血及溶栓药，临床通常以口服或注射给药。国家新版药典(2015年版)规定曲克芦丁原料药含7,3’,4’-三羟乙基芦丁(C₃₃H₄₂O₁₉)不得低于80％(口服级)和88.0％(注射级)。作为注射级原料药，对其半合成过程中的同分异构体一、二和四羟乙基芦丁的峰面积之和、单个未知杂质峰面积、未知杂质总峰面积以及与总峰面积的百分比均有明确而严格的限定。

作为注射级原料药，毋庸置疑，其活性成分三羟乙基芦丁含量越高，疗效越高，且副作用越小。

曲克芦丁原料药的制备条件尽管有差异，但均是以芦丁和环氧乙烷为原料，以水和/或甲醇、乙醇为反应介质，在碱性催化剂存在下发生Willanson醚化亲核取代反应(简称醚化反应或羟乙基化反应)，生成以7,3’,4’-三羟乙基芦丁为主，同时伴有一定量的一、二和四羟乙基芦丁异构体及少量未知杂质组分的生成。事实上，至反应后期，三羟乙基和四羟乙基芦丁近乎同步增长。换言之，反应越彻底，四羟乙基芦丁的生成比例越高。反之，则有少量二羟乙基和一羟乙基芦丁异构体不能继续转化为目标产物。

虽然四羟乙基芦丁的水溶性最好，但其活性最低，而且在后续分离、纯化过程中难以除尽，同时在后续纯化过程中还会伴随三羟乙基芦丁产品的流失。一羟乙基和二羟乙基芦丁虽有活性，但水溶性不及三羟乙基芦丁，从而直接影响曲克芦丁注射液的澄清度，并由此产生可能的临床不良反应。

在已见报道的各种醚化反应及后续分离、纯化工艺条件下，终产品中7,3’,4’-三羟乙基芦丁的色谱纯度很难超过93.0％。

曲克芦丁的醚化反应依据反应溶剂、催化剂和反应条件的不同而形成了大同小异的多种工艺条件。如(1)以水、甲醇或甲醇-水混合溶剂作为反应溶剂的文献或专利为主流工艺：(1)加压反应条件：CN102924546A；(2)以不同催化剂完成的醚化反应，如：专利CN1331697A(US6855697B1)、专利CN1554353A；(3)用树脂代替盐酸控制反应液的PH值的控制方法，如CN1814613A；(4)采用相转移催化醚化反应方法，CN103601774A。而利用上述方法所得到的目标产品——7,3’,4’-三羟乙基芦丁的纯度均未超过91％。显而易见，目标产品中三羟乙基芦丁纯度越高，制备技术难度越大，产率损失也大。虽然使用色谱分离或大孔树脂吸附分离(如：CN 104177461A)的方法可以获得纯度为98％乃至99.0％的三羟乙基芦丁，但由于方法本身特性，所以只能用于制备标准品，而难以应用到工业生产上。

为了限制醚化反应过程中四羟乙基芦丁异构物的生成量，河北联合大学(CN103113437A)公开了一种曲克芦丁的制备方法，但从其实施例1～实施例3的终产品分析结果(三羟乙基芦丁纯度：91～92％；四羟乙基芦丁：6～7％；二羟乙基芦丁：2～3％)来看，该方法对四羟乙基芦丁的抑制效果仍然较差。出于相同目的，李思、梁旭彤等发明了一种有别于上述专利方法的新方法(三羟乙基芦丁的制备方法，CN104177461A)，但该中间转化的方法和后续操作(如离子交换树脂除盐、大孔树脂吸附等)工艺过于繁琐，周期长、成本高，缺乏经济实用性，故通过该方法制备98.0％以上的三羟乙基芦丁的原料成本高达每千克2000～5000元，而目前国内药用曲克芦丁的市场价却低于甚至远低于每千克2000元，从生产角度考虑，其显然缺乏生产价值，故而难以进行工业化生产。

发明内容

本发明的目的在于提供一种高纯度曲克芦丁的制备方法，此制备方法适用于工业生产，成本也较低，能够制得纯度非常高的曲克芦丁。

本发明的另一目的在于提供一种高纯度曲克芦丁。

本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的：

一种高纯度曲克芦丁的制备方法，包括：

前段醚化步骤：将芦丁与环氧乙烷在醇、水、碱性催化剂的条件下进行醚化反应，并保持反应液中四羟乙基芦丁的峰面积百分比在1.5％以下；其中，芦丁、前段醚化步骤中的环氧乙烷、醇、水、碱性催化剂的质量比为1:0.1～0.4:1.5～6.5:0.5～8.0:0.008～0.012，醚化反应的反应温度为60～80℃；

络合步骤：调节反应温度为70～90℃，然后在保护气体的保护下往反应液中加入饱和的醋酸盐的水溶液，并在加入期间控制反应液的pH为8.0～9.5，加毕，搅拌10～20min；其中，保护气体选自氮气、惰性气体中的一种或多种，醋酸盐为金属离子醋酸盐，芦丁与醋酸盐的摩尔比为1:1.0～1.3；

后段醚化步骤：调节反应温度为60～80℃、反应液的pH为8.0～9.0，继续通入环氧乙烷，反应至反应液中三羟乙基芦丁的峰面积百分比不再增长时，停止反应，得到反应产物；其中，芦丁与后续醚化步骤中的环氧乙烷的质量比为1：0.1～0.3；

后处理步骤：利用稀酸与反应产物发生水解反应，然后浓缩、精制。

另外，一种高纯度曲克芦丁，是通过上述的高纯度曲克芦丁的制备方法制得。

相对于现有技术，本发明包括以下有益效果：本发明在羟乙基化(醚化)反应的某一特定节点上穿插进行特定的络合反应，将芦丁分子中裸露的5-OH和4-＝O基团先行掩蔽，然后再作后段醚化反应。至反应完全后加酸水解，以脱除保护基团。水解反应液经浓缩并经精制后能够轻松得到纯度非常高的注射用曲克芦丁。

本发明提供的制备方法可使三羟乙基芦丁的转化率得以最大化，从而使原料芦丁得到最大程度的利用，而且后续分离过程简便、高效，尤适合注射级高纯曲克芦丁原料药的工业化生产。

另外，按照上述条件制备三羟乙基芦丁含量为95～98％的曲克芦丁的千克产品，原、辅料成本加和后为350～400元；若制备三羟乙基芦丁含量在98％以上的高纯曲克芦丁，则每千克产品原料成本为420～460元，原料成本都较低。而且其无需采用繁复的离子交换或大孔树脂脱盐纯化过程，生产周期也会大幅缩短。在本发明技术条件下，车间生产成本可以控制为每千克产品600～750元，若生产色谱纯度为90～95％的注射级曲克芦丁，则只需经过一次结晶即可充分满足质量要求，车间生产成本将低于每千克500元。

附图说明

为了更清楚的说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1是本发明提供的高纯度曲克芦丁的合成路线示意图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

下面对本发明实施例的高纯度曲克芦丁及其制备方法进行具体说明。

高纯度曲克芦丁的制备方法包括步骤S1——前段醚化步骤：将芦丁与环氧乙烷在醇和水的混合溶剂系统、碱性催化剂的条件下进行醚化反应，并保持反应液中四羟乙基芦丁的峰面积百分比在1.5％以下(利用高效液相色谱法检测)，停止前段醚化反应；其中，芦丁、前段醚化步骤中的所述环氧乙烷、醇、水、碱性催化剂的质量比为1:0.1～0.4:1.5～6.5:0.5～8.0:0.008～0.012，醚化反应的反应温度为60～80℃。

其中，反应液是指醚化反应过程中的反应液。醚化反应可以按照常规醚化反应操作进行，具体的，醚化反应为：将醇、水的混合溶剂与碱性催化剂混合，往其中通保护气体10～30min，然后加热至60～65℃，加入芦丁，再通入环氧乙烷于60～80℃条件下进行反应，并控制反应液的pH为8.0～9.0；保护气体选自氮气、惰性气体中的一种或多种，优选氮气。氮气成本低。一般来说，醚化反应时间为6～10h。

本发明中，芦丁优选液相纯度在96％以上的精制芦丁，用于制备高纯度曲克芦丁，其杂质含量较少，成本低，性价比高，尤其适用于工业生产。

实际操作时，可以在反应瓶中先加入配比量的水和碱性催化剂，搅拌溶解后再加入醇，通保护气体10～30min，去除水中的游离氧，避免其对后续反应的不良影响。接着水浴升温至60～65℃后，加入配比量的精制芦丁，同时缓缓通入环氧乙烷，于60～80℃、pH为8.0～9.0的条件下持续搅拌反应，至反应液完全透明后，每隔0.8～1.2h取样(利用高效液相色谱法)作三羟乙基芦丁和异构体的液相检测，至四羟乙基芦丁峰面积接近或达到1.5％时立即停止通环氧乙烷。

其中，醇选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或多种，优选甲醇；水选自纯化水、去离子水、超纯水中的一种或多种，优选纯化水，纯化水在医药行业中应用较广；碱性催化剂选自氢氧化钠、氢氧化钾中的一种或多种。

高纯度曲克芦丁的制备方法还包括步骤S2——络合步骤：调节反应温度为70～90℃(优选为75～85℃)，然后在保护气体的保护下往反应液中加入饱和的醋酸盐的水溶液，并在加入期间控制反应液的pH为8.0～9.5(优选滴加稀碱水来控制pH)，加毕，搅拌10～20min；使之与醚化产物中的三羟乙基芦丁(也包括少量的二羟乙基，乃至更少量的一羟乙基芦丁和四羟乙基芦丁)分子中的4-位羰基和5-位羟基充分发生络合反应；其中，保护气体选自氮气、惰性气体中的一种或多种，醋酸盐为金属离子醋酸盐或金属离子醋酸盐的水合物，芦丁与醋酸盐的摩尔比为1:1.0～1.3。

醋酸盐选自醋酸镁、醋酸锌、醋酸铜、醋酸锰、醋酸铬、醋酸镍、醋酸钴、醋酸镉、醋酸镧、醋酸钕、醋酸钐中的一种或多种，优选醋酸镁或醋酸锌或醋酸铬，也可以选用上述各种醋酸盐的水合物。

分散在芦丁分子A、B和C环的7，3′，4′和5-OH四个羟基的pKa值既有所不同，又相差不大。因此，当与环氧乙烷发生醚化反应时，其优先顺序是7-OH，3′-OH，4′-OH和5-OH。由于4′-OH和5-OH的pKa值最为接近，因此，当轮到4′-OH开始醚化时，5-OH的醚化反应紧随其后。换言之，当三羟乙基芦丁吸收峰面积接近最大值时，四羟乙基芦丁的吸收峰已经出现，然后二者几乎同步增长。因此，为使三羟乙基芦丁最大程度地生成，同时又能充分抑制四羟乙基芦丁的产生，便是本发明所要解决的最关键的技术。

芦丁的化学结构属于黄酮醇苷，其母核由3个环构成，大多数含有羟基或羰基。此结构具有超离域度，整个分子形成一个大π键共轭体系，具有强烈的螯合作用，其中的氧原子具有强配位能力，能与许多金属离子形成稳定的五元环或六元环配位化合物。这些金属离子包括但不限于Mg²⁺、Zn²⁺、Cu²⁺、Mn²⁺、Fe²⁺、Cr³⁺和Al³⁺。本发明的发明人通过对比试验后发现上述2价或3价金属离子与5-OH、4-＝O络合能力比B³⁺更强，更何况硼砂为有毒物，作为药物合成助剂，显然是不可取的。本发明优选醋酸镁、醋酸锌和醋酸铬作为螯合剂，芦丁镁、芦丁锌、芦丁铬的络合物结构式分别如下：

芦丁镁、芦丁锌和芦丁铬的配合物的化学计量比都是1:1，而且优先与5-OH，4-＝O基团络合，恰与目标一致。

本发明的另一设计理由是芦丁A环上5-OH与B环4-＝O与上述2价或三价金属盐溶液所形成的络合物在酸性条件下可以使金属离子解离出来，从而实现本发明制备高纯度的曲克芦丁的目的。

本发明的示例合成路线如图1所示。其中，M＝Mg²⁺、Zn²⁺、Cu²⁺、Mn²⁺、Cr³⁺、Al³⁺。为了如实反映中段络合反应及其前后段醚化反应化学过程，特将前段醚化反应的副产物、络合反应后的副产物以及水解后的副产物(少量)均在合成路线图中标示。

高纯度曲克芦丁的制备方法还包括步骤S3——后段醚化步骤：调节反应温度为60～80℃、反应液的pH为8.0～9.0，继续通入环氧乙烷进行反应，同时利用高效液相色谱法对反应液进行在线检测，至三羟乙基芦丁的峰面积不再增长(即达到最大值)时，终止醚化反应，得到反应产物；其中，芦丁与后续醚化步骤中的环氧乙烷的质量比为1：0.1～0.3。一般来说，后段醚化步骤中，反应时长为1～5h。

此步骤中写到的是“终止醚化反应”，是因为本发明中，实际上醚化反应是分成了两个阶段，一个是前段醚化，一个是后段醚化，前段醚化反应与后段醚化反应的反应温度相同、pH也相同。

由于反应体系中可能残存有过量环氧乙烷，所以在后段醚化步骤之后，在后处理步骤之前，还包括：将反应产物降至5～25℃，同时往反应产物中通入保护气体，排除未作用的环氧乙烷，保护气体选自氮气、惰性气体中的一种或多种，优选氮气。

高纯度曲克芦丁的制备方法还包括步骤S4——后处理步骤：利用稀酸与反应产物发生水解反应，然后浓缩、精制。

其中，稀酸选自质量浓度为5～15％的稀硫酸、摩尔浓度为2～6mol/L的稀盐酸中的一种或多种，水解反应是在保护气体条件下进行，具体操作为：利用稀酸将反应产物酸化至pH在1.5以下，搅拌10～20min后，在氮气流氛围下利用质量浓度为1～15％的稀碱溶液回调pH至2.5～3.5。其中，保护气体依然选自氮气、惰性气体中的一种或多种，优选氮气。综合考虑稀酸的酸性及水解后生成的金属盐在醇溶剂中的溶解性，在大多数情况下，此稀酸优选质量浓度5.0～15.0％的稀硫酸，少数情况下选择摩尔浓度为2.0～6.0mol/L的稀盐酸。利用稀酸水解脱除保护基团后，用于回调的稀碱溶液可以选用质量浓度为1.0～5.0％的氢氧化钠或氢氧化钾水溶液，质量浓度为1.0～10.0％的氨水，质量浓度为5.0～10.0％的碳酸钠水溶液，质量浓度为10.0～15.0％的碳酸氢钠或碳酸氢铵水溶液，优选碳酸钠溶液，回调pH值能够提高反应产物体系的稳定性，同时可降低酸根离子对未来金属反应设备的腐蚀性。

而后，浓缩、精制水解反应的产物包括：将水解产物在60～80℃水浴上真空(真空度≥650mmHg)浓缩至含水量在25％以下(优选在20％以下)，得到浓缩物，然后利用镁、锌、铬的硫酸盐不溶于醇的性质，用醇溶液对浓缩物精制2～3次，醇溶液选自甲醇、乙醇中的任意一种，浓缩物与醇溶液的质量比为1:3.5～8.5。若醇溶液为甲醇，则浓缩物与醇溶液的质量比为1:3.5～6.5(优选质量比为1：4.5～5.5)，若醇溶液为乙醇，因芦丁在乙醇中溶解性较小，所以醇溶液用量需相应增大。

利用醇溶液对浓缩物精制具体为：将醇溶液与浓缩物混合后加热溶解，并加入活性炭回流脱色，浓缩物与活性炭的质量比为1:0.01～0.05，再在5～15℃下结晶2～8h(优选3～6h)，过滤。

实际操作时，可以将醇溶液加入浓缩物中，然后水浴加热，加热温度即为醇溶液的沸点温度，全溶后加入活性炭回流脱色10～30min，而后过滤，使水解下来的金属盐和部分难溶于醇溶液的非芦丁成分以及炭渣被截留。将过滤后的滤液于5～15℃冷却结晶，再次过滤，得到三羟乙基芦丁液相纯度≥96.0％的曲克芦丁(一次精制品)。

精制还包括：一次精制品用含水甲醇回流溶解后再冷却结晶、过滤、真空干燥后得到三羟乙基芦丁液相纯度≥98％的曲克芦丁二次精制品。在二次结晶过程中，一次精制品与甲醇的质量比为1:4.0～8.0；含水甲醇的浓度为90.0～98.0％，冷却结晶温度为5.0-12.0℃。二次精制品经用甲醇热洗一次，再冷却沉淀、过滤、干燥后得到三羟乙基芦丁液相纯度≥99％的更高纯度曲克芦丁(也称作7,3’,4’-三羟乙基芦丁单体)。甲醇热洗过程中二次精制品与甲醇的质量比为1:5.0～10.0，洗涤温度为50℃回流温度，热洗时间不少于10min，沉降温度5～10.0℃，真空干燥温度：50～65℃。

本发明还提供了一种高纯度曲克芦丁，是通过上述的高纯度曲克芦丁的制备方法制得。该高纯度曲克芦丁中，7,3’,4’-三羟乙基芦丁含量在98％以上。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述：

实施例一

本实施例提供的高纯度曲克芦丁的制备方法，包括以下步骤：

S1：醚化反应为：将异丙醇、无盐水和氢氧化钾混合，往其中通氩气10min，然后加热至60～63℃，加入液相纯度为96.10％的精制芦丁，再通入环氧乙烷，并控制反应pH为8.0～8.3、反应温度60～65℃下持续进行醚化反应，直至通过高效液相色谱法检测出反应液中四羟乙基芦丁峰面积比为0.55％时停止通气反应；其中，芦丁、环氧乙烷、异丙醇、无盐水、氢氧化钾的质量比为1:0.32:1.5:2.0:0.008；

S2：调节物质(反应液)的pH为8.0～8.5、温度为70～75℃，往反应液中加入醋酸锰，搅拌13min，芦丁与醋酸锰的摩尔比为1:1.0；

S3：调节反应液的温度为60～65℃，往反应液中通入环氧乙烷维持反应液的pH为8.0～8.3，在该条件下继续反应，同时利用高效液相色谱法对三羟乙基芦丁进行在线液相检测，至物质中三羟乙基芦丁的峰面积(93.16％)不再增长时，停止反应，得到反应产物；

S4：在氮气通入的条件下，滴加质量浓度为10％的稀硫酸将反应产物酸化至pH为0.5～0.6，加酸完毕，继续搅拌水解12min后利用质量浓度为8％的碳酸钠回调pH至2.8，在真空条件下将水解产物浓缩至含水量为15.2％，得到浓缩物；

S5：一次结晶：将乙醇与浓缩物粗品混合并加热溶解，加入活性炭回流脱色15min，过滤除炭渣和不溶性金属盐和活性炭渣，滤液冷却至5～6℃搅拌结晶3h，经过滤、真空干燥后得到曲克芦丁一次精制品；其中，缩物(折干计)、乙醇、活性炭的质量比为1:4.5:0.01；

S6：二次结晶：将一次结晶物与浓度为90.0％的甲醇混合后加热至沸，并回流15min，然后冷却至5～7℃搅拌结晶3.5h，过滤后于50～60℃真空干燥；

S7：洗涤：将二次结晶品与配量的甲醇混合，并于55～60℃条件下搅拌洗涤15min,冷却至6～7℃，陈化3.0h，过滤、于55～60℃真空干燥至干，得到高纯曲克芦丁。

实施例二

本实施例提供的高纯度曲克芦丁的制备方法，包括以下步骤：

S1：将乙醇、超纯水和氢氧化钠混合，往其中通氮气12min，然后加热至65℃，加入液相纯度为97％的精制芦丁，再通入环氧乙烷，控制反应液的pH为8.7～9.0、反应温度为75～80℃，持续进行醚化反应，至反应液澄清后，前期每隔1.2h取样做PHLC检测，至反应液中四羟乙基芦丁峰面积为0.8％时停止通气反应；其中，芦丁、环氧乙烷、乙醇、超纯水、氢氧化钠的质量比为1:0.32：2.5:2.5:0.012；

S2：调节反应液的pH为9.2～9.5、温度为86～90℃，往反应液中滴加配比量的醋酸铬溶液，加毕，继续搅拌18min，芦丁与醋酸铬的摩尔比为1:1.3；

S3：调节反应液的温度为78～80℃，往反应液中通入环氧乙烷，并控制反应液的pH为8.7～9.0，继续进行醚化反应，同时利用HPLC法作在线液相检测，至反应液中三羟乙基芦丁的峰面积不再增长时，停止反应，得到反应产物；

将反应产物降至25℃，同时往反应产物中通入氦气，排除未作用的环氧乙烷；

S4：在氩气的环境条件下，利用质量浓度为15％的稀硫酸将反应产物酸化至pH为1.45，加酸完毕，继续搅拌水解17min后利用质量浓度为10％的碳酸钠溶液回调pH至2.5，在真空条件下将水解产物浓缩至含水量为24.5％，得到浓缩物；

S5：将甲醇与浓缩物混合后加热溶解，再加入活性炭回流脱色30min，真空过滤除去炭渣和不溶性金属盐，滤液冷却至13～15℃，静置结晶8h后过滤，滤饼于55～60℃真空干燥至干，得到曲克芦丁一次结晶品；其中，浓缩物、甲醇、活性炭的质量比为1:5.5:0.05；

S6：二次结晶：将一次结晶物与浓度为97.5％甲醇混合后加热至沸，并回流30min,冷却至11～12℃搅拌结晶6.5h，过滤后50～60℃真空干燥；

S7：洗涤：将二次结晶品与浓度为99.0％甲醇混合，于回流条件下搅拌洗涤25min,冷却至9～10℃，陈化6.0h，过滤、于55～60℃真空干燥至干，得到高纯曲克芦丁。

实施例三

本实施例提供的高纯度曲克芦丁的制备方法，包括以下步骤：

S1：于3000mL并配备梅特勒酸度-温度计、导气管、出气管、冷凝器和电动搅拌机的反应瓶中依次投入350mL纯化水和3.96g氢氧化钠，全溶后再加入350mL甲醇，通氮气15min后一次加入液相纯度为96.2％的精制芦丁317.5g(0.5mol)，水浴升温至65℃时停止通入氮气，通过导气管向反应瓶中缓缓通入环氧乙烷气体进行前段醚化反应。期间，维持内温65～75℃、pH为8.3～8.6的条件持续通气反应，直至反应液变清。然后定时取样做三羟乙基芦丁及其三个羟乙基异构体的液相纯度检测。当四羟乙基芦丁峰面积比达到1.15％时，立即终止醚化反应。同时用氮气驱赶反应瓶内剩余环氧乙烷气体。

S2：继续通氮气，并控制内温为75～85℃，间歇滴加5.0％氢氧化钠溶液调节反应液的PH为8.3～8.8，自滴液漏斗中向反应瓶中均匀滴加质量浓度为20％的四水醋酸镁(118g，0.55mol)水溶液，使与芦丁羟乙基化物发生螯合反应。加毕，维持反应液的pH为8.3～8.8，继续搅拌反应15min。

S3：螯合反应结束后，降温至70℃，并于70～75℃、反应液pH为8.3～8.8的条件下继续通入环氧乙烷进行后段醚化反应，并定时取样测定反应液中三羟乙基芦丁液相纯度。直至三羟乙基芦丁峰面积百分比达到93.3％，并且不再上升时立即停止后段醚化反应。同时用水浴降温，并通氮气充分驱赶残存的环氧乙烷余气。

S4：当反应液内温降至25℃时，于搅拌下滴加质量浓度为12.5％稀硫酸酸化至PH为1.05，加毕，继续搅拌反应15min。然后滴加质量浓度为10％的碳酸钠水溶液，将反应液PH值回调至3.0。

S5：将全部反应液转入浓缩瓶中，于水浴温度70-80℃条件下真空旋转浓缩至含水量为15.0％时加入2350mL甲醇并继续加热旋转使溶解。加入3.5g活性炭，回流脱色30min后趁热过滤。再将滤液放冷至40℃，静置2h后作真空过滤，并弃去不溶性过滤物。

S6：将上述滤液缓慢冷却至6℃，慢速搅拌结晶4h后真空吸滤，并用少量冷溶媒洗涤滤饼3次。滤饼于60℃真空干燥，得301g曲克芦丁一次精制品。经液相检测，三羟乙基芦丁液相纯度为96.26％，含量96.11％，其他指标检测结果列于表1。以三羟乙基芦丁计，醚化反应、一次精制过程总摩尔收率为80.73％。

S7：二次精制：取一次精制品250g于3000mL反应瓶中，加入体积浓度为95％的含水甲醇2100mL，搅拌下水浴升温至沸，回流20min后趁热过滤，弃除少量不容物后将滤液转入结晶瓶中，常温水搅拌降温至35℃时再依次换用凉水、冰水继续缓慢搅拌降温至7℃，再慢速搅拌结晶4h后吸滤，并用少量冷溶媒洗涤滤饼3次，滤饼于60℃真空干燥，得232.5g曲克芦丁二次精制品，液相检测三羟乙基芦丁液相纯度为：98.37％(曲克芦丁含量98.23％)，其他指标检测数据见表1。以三羟乙基芦丁计，二次精制总摩尔收率为92.73％。

S8：洗涤(三次精制)：取二次精制品200g于2000mL反应瓶中，加入1600mL的甲醇。搅拌下水浴升温至沸，搅拌回流洗涤15min。洗毕，先自然降温，再用冷水和冰水降温至9℃，静置4h后过滤。滤饼经用新鲜甲醇洗涤2次。滤饼于60～62℃真空干燥至干，得三次精制品190.3g。三羟乙基芦丁液相纯度99.41％，曲克芦丁含量：99.30％。其他分析数据见附表1。三次精制收率为94.5％。醚化反应、三次精制过程总摩尔收率为70.74％。

表1一～三次精制产品主要质量控制项目检测结果汇总

实施例四

本实施例是在实施例三的投料规模和工艺条件基础上，以二水醋酸锌代替四水醋酸镁作为螯合剂。精制芦丁与二水醋酸锌的摩尔比为1:1.1，二水醋酸锌水溶液的配置质量浓度为20.0％、加料方式、络合反应PH值、温度控制范围、后续酸化过程使用稀硫酸质量浓度、酸化PH值、回调PH过程使用碱水浓度、回调终点PH值以及其他条件均与实施例三相同。本实施例的醚化反应、水解、浓缩和一、二、三次精制过程工艺条件与实施例三相同。以三羟乙基芦丁计，醚化反应、一次精制过程总摩尔收率为81.57％，二次精制总摩尔收率为92.46％，三次精制收率为94.73％。醚化反应、三次精制过程总摩尔收率为71.45％。三次精制产品品各项检测数据列于表2。

表2一～三次精制产品主要质量控制检测结果汇总

对照例一

本实施例中醚化反应一气呵成，直至终点(中间阶段不设络合反应步骤)。其中，反应过程中原料精制芦丁、氢氧化钠、纯化水和甲醇投料量与实施例三相同。环氧乙烷通入流量以反应液PH值处于8.0～9.0范围内为准，用量以实际耗用量计。醚化反应至三羟乙基芦丁面积百分比达到77.74％，且不再上升时终止反应。依法冷却、通氮气驱赶剩余的环氧乙烷。然后用浓度为6mol/L的稀盐酸直接酸化至PH为3.0～3.5。酸化以后的真空浓缩和三次精制过程与物料配比与实施例三、实施例四完全一致。制备过程总摩尔收率61.52％。各精制阶段产品检测数据列于表3。

表3一～三次精制产品主要质量控制检测结果汇总

对照例二

本实施例提供的制备方法，是仿制CN103113437A的实施例一而做出的：53g药用芦丁(含量：94.05％)分散在150mL纯化水中，加入0.6g氢氧化钠，在搅拌均匀后加入环氧乙烷12g，73℃反应3.5h。取终点反应液做液相检测，一羟乙基芦丁2.86％，四羟乙基芦丁5.27％，二羟乙基芦丁16.56％，三羟乙基芦丁73.74％，二、三羟乙基芦的峰面积总和90.30％。然后加入硼砂31g，测定反应液PH为9.36，加入环氧乙烷4.1g，继续在70℃反应2.5h。再取终点反应液做液相监测，曲克芦丁峰面积85.29％，四羟乙基芦丁10.36％，二羟乙基芦丁1.92％。然后滴加浓盐酸中和PH至5.87。将中和后的液体减压浓缩至干，加入200mL体积浓度为90％的乙醇，然后继续用6mol/L的稀盐酸调节PH至3.06，加热至74～76℃持续搅拌25min，稍冷后真空过滤，除去不溶物后将滤液缓慢降至室温，静置4h后吸滤。滤饼经干燥后，得到黄色粉末35.6g。总摩尔收率：54.72％。产品分析结果见表4。

表4一次精制产品主要质量控制检测结果汇总

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种高纯度曲克芦丁的制备方法，其特征在于，包括：

前段醚化步骤：将芦丁与环氧乙烷在醇、水、碱性催化剂的条件下进行醚化反应，并保持反应液中四羟乙基芦丁的峰面积百分比在1.5％以下；其中，所述芦丁、前段醚化步骤中的所述环氧乙烷、所述醇、所述水、所述碱性催化剂的质量比为1:0.1～0.4:1.5～6.5:0.5～8.0:0.008～0.012，醚化反应的反应温度为60～80℃；

络合步骤：调节反应温度为70～90℃，然后在保护气体的保护下往所述反应液中加入饱和的醋酸盐的水溶液，并在加入期间控制所述反应液的pH为8.0～9.5，加毕，搅拌10～20min；其中，所述保护气体选自氮气、惰性气体中的一种或多种，所述醋酸盐为金属离子醋酸盐，所述芦丁与所述醋酸盐的摩尔比为1:1.0～1.3；所述醋酸盐为醋酸镁或醋酸锌或醋酸铬；

后段醚化步骤：调节反应温度为60～80℃、所述反应液的pH为8.0～9.0，继续通入环氧乙烷，反应至所述反应液中三羟乙基芦丁的峰面积百分比不再增长时，停止反应，得到反应产物；其中，所述芦丁与后续醚化步骤中的所述环氧乙烷的质量比为1：0.1～0.3；

后处理步骤：利用稀酸与所述反应产物发生水解反应，然后浓缩、精制。

2.根据权利要求1所述的高纯度曲克芦丁的制备方法，其特征在于，所述前段醚化步骤中，进行醚化反应包括：将所述醇、所述水和所述碱性催化剂混合，往其中通保护气体10～30min，然后加热至60～65℃，加入所述芦丁，再通入所述环氧乙烷于60～80℃条件下进行反应，并控制反应液的pH为8.0～9.0；所述保护气体选自氮气、惰性气体中的一种或多种。

3.根据权利要求1所述的高纯度曲克芦丁的制备方法，其特征在于，在前段醚化步骤中检测所述四羟乙基芦丁的峰面积百分比、在后段醚化步骤中检测所述物质中三羟乙基芦丁的峰面积百分比，均是利用高效液相色谱法检测得到。

4.根据权利要求1所述的高纯度曲克芦丁的制备方法，其特征在于，所述醇选自甲醇、乙醇、异丙醇中的一种或多种；所述水选自纯化水、去离子水、超纯水中的一种或多种；所述碱性催化剂选自氢氧化钠、氢氧化钾中的一种或多种。

5.根据权利要求4所述的高纯度曲克芦丁的制备方法，其特征在于，所述醇为甲醇。

6.根据权利要求4所述的高纯度曲克芦丁的制备方法，其特征在于，所述水为纯化水。

7.根据权利要求1所述的高纯度曲克芦丁的制备方法，其特征在于，在所述后段醚化步骤之后，在所述后处理步骤之前，还包括：将所述反应产物降至5～25℃，同时往所述反应产物中通入保护气体，所述保护气体选自氮气、惰性气体中的一种或多种。

8.根据权利要求1所述的高纯度曲克芦丁的制备方法，其特征在于，所述后处理步骤中，所述稀酸选自质量浓度为5～15％的稀硫酸、摩尔浓度为2～6mol/L的稀盐酸中的一种或多种，所述水解反应是在保护气体条件下进行，具体操作为：利用所述稀酸将所述反应产物酸化至pH在1.5以下，搅拌10～20min后利用质量浓度为1～15％的稀碱溶液回调pH至2.5～3.5。

9.根据权利要求1所述的高纯度曲克芦丁的制备方法，其特征在于，所述后处理步骤中，浓缩、精制所述水解反应的产物包括：在真空条件下将水解产物浓缩至含水量在25％以下，得到浓缩物，然后利用醇溶液对所述浓缩物精制，所述醇溶液选自甲醇、乙醇中的任意一种，所述浓缩物与所述醇溶液的质量比为1:3.5～6.5。

10.根据权利要求9所述的高纯度曲克芦丁的制备方法，其特征在于，利用所述醇溶液对所述浓缩物精制包括：将所述醇溶液与所述浓缩物混合后，利用活性炭回流脱色，所述浓缩物与所述活性炭的质量比为1:0.01～0.05，再在5～15℃下结晶2～8h，过滤。