CN106471124A - 液泡膜质子/糖逆向转运蛋白及其增加植物蔗糖贮存器官的蔗糖浓度的用途 - Google Patents

液泡膜质子/糖逆向转运蛋白及其增加植物蔗糖贮存器官的蔗糖浓度的用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及液泡膜质子/糖逆向转运蛋白，更特别地涉及液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白、编码其的核苷酸序列及其用于产生蔗糖浓度增加的转基因植物的用途。本发明还包括产生蔗糖浓度增加的转基因植物的方法，增加植物中蔗糖浓度的方法，及鉴别适于产生更高蔗糖浓度的植物的方法。

Description

液泡膜质子/糖逆向转运蛋白及其增加植物蔗糖贮存器官的 蔗糖浓度的用途
本发明涉及来自农作物的蔗糖工业化生产领域，及涉及在农业栽培农作物植物中增加蔗糖的领域。特别地，本发明涉及液泡膜质子/糖逆向转运蛋白，更特别涉及液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白及编码其的核酸，以及其增加农作物植物蔗糖贮存器官的蔗糖浓度的用途。
一方面，糖是所有甜味单糖和二糖的总称，另一方面，是二糖蔗糖的商业常用名。蔗糖(Saccharose)是普通的家庭用糖或者白砂糖，也称作蔗糖(sucrose)。蔗糖是α-D-葡萄糖和β-D-果糖的一种分子的二聚体，其通过α,β-1,2-糖苷键相互连接。
蔗糖是在植物中通过光合作用形成的。蔗糖的生物合成是在植物细胞的细胞质中发生。为此，两种磷酸-丙糖，甘油醛-3-磷酸和二羟丙酮磷酸，作为光合作用的碳同化(Calvin循环)的最终结果而出现，从叶绿体输出至细胞溶质。在植物细胞的细胞溶质中，单糖UDP-葡萄糖和果糖6-磷酸由磷酸丙糖形成。为此，第一个果糖-1,6-二磷酸通过甘油醛-3-磷酸与二羟丙酮磷酸之间的缩合反应形成。然后，果糖-1,6-二磷酸通过脱磷酸作用反应形成果糖-6-磷酸。果糖-6-磷酸通过异构化也可以形成葡萄糖-6-磷酸，在先前的异构化形成葡萄糖-1-磷酸之后，与尿苷三磷酸(UTP)反应形成尿苷二磷酸葡萄糖(UDP-葡萄糖)。随后UDP-葡萄糖与果糖-6-磷酸盐缩合形成蔗糖-6-磷酸的反应由酶蔗糖-磷酸盐合成酶催化。所需的能量由尿苷二磷酸(UDP)的消除而提供。最后，蔗糖-6-磷酸的磷酸盐残基在不可逆反应中由酶蔗糖-磷酸盐-磷酸酶裂解，由此产生蔗糖。
蔗糖是一种非还原二糖，因此在植物中是最重要的转运糖。蔗糖在植物的叶子中新合成并通过植物韧皮部转运至其贮存器官中，在此其积聚在植物细胞的液泡中作为营养素和能量来源。
对于蔗糖的工业化生产重要的尤其是甜菜(Beta vulgaris subsp.vulgaris)、甘蔗(Saccharum officinarum)和甜棕榈(Arenga pinnata,syn.:Arenga sacchariferaLabil.，主要在印度尼西亚)。蔗糖也得自糖枫汁液(Acer saccharum)，量较小。这些植物由于其特别高的蔗糖含量而用于蔗糖的生产。
在甘蔗中，糖-主要是蔗糖-的比例通常是植物髓体(marrow)(植物的蔗糖贮存器官)的10-20％。甘蔗的糖是通过榨汁获得的植物汁液的结晶和精炼而获得的。
甜菜是二年生植物，其在第一年在甜菜根中积累糖供应，第二年用作开花植物的食物。糖通常是在用水提取过程中从甜菜切片中产生的。提取物随后可以用氧化钙处理以沉淀植物酸如草酸或酒石酸及蛋白质。过量的石灰通过导入二氧化碳而分离。通过随后从糖溶液中真空蒸发水分，获得糖浆溶液。结晶的糖通过离心与剩余的褐色糖浆分离。残渣(糖蜜)用作牛饲料或者用于乙醇发酵。通过再结晶、过滤及通过真空蒸发进行糖的纯化(精炼)。
通过在栽培蔗糖-贮存植物领域几十年的努力，可以实现大幅度增加在蔗糖贮存器官产量和蔗糖浓度。例如，在目前为生产糖而栽培的甜菜品种中，甜菜根的蔗糖浓度基于根体的重量是大约15-20％。然而，获得的蔗糖浓度仍不满意。
本发明的目的因此是提供具有更高蔗糖浓度的植物及发现可以增加植物、特别是甘蔗和甜菜的蔗糖浓度的方法。
公开的国际申请WO 2010/072210 A1揭示了一种在甜菜的农业栽培中增加蔗糖产量的方法。在所述方法中，使用甜菜或甘蔗植物，其遗传组成旨在降低转化酶的酶活性。为此，适于在植物细胞中降低转化酶活性的核酸用于形成植物的蔗糖贮存器官，其中在相应发育阶段其蔗糖浓度与相同基因型的未修饰的对照蔗糖贮存器官相比增加。
植物液泡在糖的长期或短期贮存中起关键作用，因为液泡作为细胞器在光合作用活性植物相比中占体积的大约90％(Martinola,E.et al.(2007)"Vacuolar transportersand their essential role in plant metabolism",J.Exp.Bot.58:83-102)。由于其尺寸，液泡因此对于贮存糖是尤为重要的(Neuhaus,H.E.(2007)"Transport of primarymetabolites across the plant vacuolar membrane",FEBS Lett 581:2223-2226)。贮存组织如甜菜(Beta vulgaris)的主根及甘蔗的(Saccharum officinarum)髓体在其贮存器官的细胞液泡中积聚大量的蔗糖，用其作为植物代谢的能量来源。
在各种单子叶植物和双子叶植物如Nedicago(识别号no.AC131026),葡萄(Vitisvinifera)(识别号no.AAX47312)和水稻(Oryza sativa；识别号no.Os02g13560.)中，发现这样的蛋白质，其使得糖从植物细胞的细胞质中转运至其液泡。在植物拟南芥(Arabidopsis)中，鉴别了一个基因，其蛋白质产物是糖转运蛋白，位于光合作用活性细胞的液泡膜中，可以将葡萄糖从细胞溶质输入液泡中(Wormit,A.et al.(2006)"Molecularidentification and physiological characterization of a novel monosaccharidetransporter from Arabidopsis involved in vacuolar sugar transport",Plant Cell18:3476-3490)。称作液泡膜单糖转运蛋白(TMT)的这种转运蛋白位于液泡的膜--液泡膜中。液泡膜单糖转运蛋白(TMT)在拟南芥(Arabidopsis thaliana)中包含三个亚型，称作AtTMT1、AtTMT2和AtTMT3。AtTMT1和AtTMT2的基因具有组织-和细胞类型特异性表达模式，而AtTMT3基因仅非常微弱地表达。通过TMT基因敲除，可以示出如此修饰的植物与野生型植物相比在其液泡中明显积聚较少的葡萄糖和果糖。然而，关于蔗糖的积聚，检测到野生型植物与TMT基因敲除植物之间无差异。
来自拟南芥的液泡膜单糖转运蛋白TMT1经电生理学鉴定为质子驱动的葡萄糖和蔗糖逆向转运蛋白，其将葡萄糖和蔗糖以大约相同的特异性转运通过液泡膜(Schulz,A.etal.(2011)"Proton-driven sucrose symport and antiport are provided by thevacuolar transporters SUC4 and TMT1/2",The Plant Journal 68:129-136)。在同一文章中，拟南芥的蔗糖转运蛋白SUC4被鉴定为质子/蔗糖同向转运蛋白，其应也位于液泡膜中。
公开的国际申请WO 2011/120549 A1揭示了在植物中通过液泡膜单糖转运蛋白AtTMT1的过表达，可以增加种子产量、可以增加种子的蛋白质和油含量或者可以促进单子叶植物或双子叶植物的早期生长。贮存器官中蔗糖的积聚未揭示。
针对这个背景，通过鉴别使得糖输入至甜菜主根细胞的液泡中的蛋白质，特别是特异于蔗糖的使得蔗糖输入至甜菜的主根细胞的液泡中的蛋白质，实现本发明的目标。鉴于这些蛋白质的鉴别，特别是这个首次鉴别了蔗糖特异性液泡膜质子/糖逆向转运蛋白及编码这些蛋白质的核苷酸序列，本发明提供了增加植物中蔗糖浓度的培植方法和/或分子遗传学方法，及因此的具有较高蔗糖浓度的植物。
根据第一方面，本发明涉及编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的核酸分子。优选地，编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的核酸分子特异于蔗糖。在下文中，特异于蔗糖的这种质子/糖逆向转运蛋白也称作质子/蔗糖逆向转运蛋白。
根据第二方面，本发明涉及重组基因，其包含根据第一方面的核酸分子或者具有编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白、优选液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白的核苷酸序列的核酸分子。所述核酸分子可以与至少一个调节元件可操纵地连接。
根据第三方面，本发明涉及载体或可动遗传因子，其包含根据第一方面的核酸分子或者根据第二方面的重组基因。
根据另一方面，本发明涉及真核宿主细胞或原核宿主细胞，其包含优选作为转基因的根据第一方面的核酸分子、根据第二方面的重组基因或者根据第三方面的载体或可动遗传因子。
根据另一方面，本发明涉及发挥质子/糖逆向转运蛋白功能的蛋白质，其优选特异于蔗糖，或者优选作为液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白。
根据另一方面，本发明涉及转基因植物细胞，其包含根据作为转基因的第一方面的核酸分子，作为转基因的根据第二方面的重组基因，或者根据第三方面的载体或可动遗传因子，及包含至少一种这样的转基因植物细胞的转基因植物或其一部分。
根据另一方面，本发明涉及根据前述方面的转基因植物的种子，其中所述种子包含作为转基因的根据第一方面的核酸分子，作为转基因的根据第二方面的重组基因，或者根据第三方面的载体或可动遗传因子。
根据另一方面，本发明涉及产生转基因植物的方法。
根据另一方面，本发明涉及增加植物的蔗糖贮存器官的蔗糖浓度的方法。
根据另一方面，本发明涉及鉴别适于产生植物的蔗糖贮存器官中蔗糖浓度增加的植物的方法。
根据另一方面，本发明涉及适于用作分子标记的寡核苷酸，用于诊断(diagnostic)检测根据第一方面的核酸分子。
根据另一方面，本发明涉及诊断发挥液泡膜质子/糖逆向转运功能的蛋白质的抗体，其优选特异于蔗糖，优选作为液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白。
根据另一方面，本发明涉及液泡膜质子/糖逆向转运蛋白增加植物的蔗糖贮存器官的蔗糖浓度的用途。
图1示出一个表格，表示来自拟南芥的三个旁系同源(paralogous)液泡膜单糖转运蛋白(TMT)及来自甜菜(Beta vulgaris)的四个旁系同源液泡膜糖转运蛋白(TST)的氨基酸序列的相同性和相似性。
图2示出来自拟南芥的三个旁系同源液泡膜单糖转运蛋白(TMT)与来自甜菜的四个旁系同源液泡膜糖转运蛋白(TST)的系统发育关系的进化分枝图。
图3示出不同年龄的两个甜菜品种主根的蔗糖浓度的条形图。
图4示出在两种不同的甜菜品种中在不同的发育时间，甜菜的四个旁系同源TST基因的mRNA相对量的条形图。
图5示出在不同的发育时间甜菜品种“Belladonna KWS”的叶中各种糖的浓度的条形图。
图6示出在不同的发育时间甜菜品种“Belladonna KWS”的叶中四个旁系同源BvTST基因的mRNA的相对量的条形图。
图7示出在瞬时转化的叶肉细胞的液泡中不同的糖(糖类)的诱导的当前密度变化的条形图。
本发明人鉴别了在此称作BvTST2.1的蛋白质是在甜菜的主根细胞的液泡膜中数量最丰富的蛋白质之一，及令人惊奇地发现蛋白质BvTST2.1可以作为液泡膜糖转运蛋白特别地将蔗糖从细胞溶质输入植物细胞的液泡中。因此，这种蛋白质及具有相同功能的蛋白质不仅作为液泡膜糖转运蛋白(TST)，而且还被当作液泡膜蔗糖转运蛋白或者液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白或者液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白，其中本文所用缩写“Bv”是指甜菜，这是这种蛋白质最初从中鉴别的生物体。本发明人鉴别蛋白质BvTST2.1为质子/糖逆向转运蛋白，其高度特异于蔗糖，并且是这种植物糖-转运蛋白家族的第一个已知代表。此外，已经成功地鉴别了三个旁系同源亚型BvTST1、BvTST2.2和BvTST3，其与来自拟南芥的已知TMT蛋白在功能上相关。
基于这种新的蔗糖特异性逆向转运蛋白的鉴别，本发明人还鉴别了编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白及其它亚型的核苷酸序列。
因此，根据第一方面，本发明涉及编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白、优选液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白的核酸分子。
根据一个实施方案，编码液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白的核酸分子包含选自如下一组的核酸分子：
a)具有SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的核酸分子，或者具有与SEQ ID NO:2所示核苷酸序列具有至少80％相同性的核苷酸序列的核酸分子；
b)具有与a)的核苷酸序列之一互补的核苷酸序列的核酸分子；
c)与a)或b)的核酸分子杂交的核酸分子；
d)具有编码具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的核酸分子，或者具有编码其氨基酸序列与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列具有至少80％序列相同性的多肽的核苷酸序列的核酸分子；及
e)具有编码SEQ ID NO:1所示多肽的同系物、类似物或直系同源物(ortholog)的核苷酸序列的核酸分子。
根据另外的实施方案，编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的核酸分子包含选自如下一组的核酸分子：
a)具有SEQ ID NO:4、6或8所示核苷酸序列的核酸分子，或者具有与SEQ ID NO:4、6或8所示核苷酸序列具有至少80％相同性的核苷酸序列的核酸分子；
b)具有与a)的核苷酸序列之一互补的核苷酸序列的核酸分子；
c)与a)或b)的核酸分子杂交的核酸分子；
d)具有编码具有SEQ ID NO:3、5或7所示氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的核酸分子，或者具有编码其氨基酸序列与SEQ ID NO:3、5或7所示氨基酸序列具有至少80％相同性的多肽的核苷酸序列的核酸分子；及
e)具有编码SEQ ID NO:3、5或7所示多肽的同系物、类似物或直系同源物的核苷酸序列的核酸分子。
术语“具有核苷酸序列的核酸分子”不仅包含其核苷酸序列由随后详细描述的核苷酸序列组成的核酸分子，而且还包含除了随后详细描述的核苷酸序列之外具有至少一个核苷酸或核苷酸序列的核酸分子。
根据另一个实施方案，核酸分子编码SEQ ID NO:1、3、5或7所示氨基酸序列。然而，核酸分子也可以编码这样的氨基酸序列，其中氨基酸序列的至少一个氨基酸残基由具有相似化学性质的氨基酸取代(保守或半保守氨基酸取代)。在保守氨基酸取代中，氨基酸由具有相似化学性质的另一氨基酸置换。在半保守氨基酸取代中，氨基酸由具有相似空间构象的另一氨基酸取代。取代优选对蛋白质功能无影响。举例的氨基酸取代是Asp和Glu、Leu和Ile、Ala和Val、Arg和Lys及Phe和Trp。
根据另一和/或另外的实施方案，所述核酸的核苷酸序列和/或由所述核苷酸序列编码的氨基酸序列与SEQ ID NO:2、4、6或8所示核苷酸序列或者与SEQ ID NO:1、3、5或7所示氨基酸序列具有至少80％、至少85％、优选至少90％、特别优选至少95％、至少96％、至少97％或者至少98％、及最优选至少99％相同性。
如本文所用，术语“杂交”是指在常规条件下杂交，如在Sambrook et al.(1989)"Molecular Cloning,A Laboratory Manual"(Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York)中所述，优选在严格条件下杂交。严格杂交条件是例如：在4×SSC在65℃杂交，随后0.1x SSC在65℃多次洗涤，总共大约1小时。较低严格杂交条件是例如：在4×SSC在37℃杂交，随后在1xSSC中在室温多次洗涤。“严格杂交条件”也可以是：在68℃在0.25M磷酸钠pH7.2、7％SDS、1mM EDTA和1％BSA中杂交16小时，随后用2x SSC和0.1％SDS在68℃洗涤2次。
对于本发明，“特异于蔗糖”或者“高度特异于蔗糖”或者“蔗糖特异性转运”或者“蔗糖高度特异性转运”或者“针对蔗糖的特异性”或者“蔗糖特异性”是指液泡膜质子/糖逆向转运蛋白对于蔗糖的特异性比对于另一种糖的特异性高至少5倍、10倍或15倍、优选至少18倍、20倍、22倍、24倍、26倍或28倍、特别优选至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍或至少39倍，及最优选至少40倍。此外，这也可以是液泡膜质子/糖逆向转运蛋白对于蔗糖的特异性比对于单糖如葡萄糖或果糖的特异性高至少5倍、10倍或15倍，优选至少18倍、20倍、22倍、24倍、26倍或28倍，特别优选至少30倍、至少31倍、至少32倍、至少33倍、至少34倍、至少35倍、至少36倍、至少37倍、至少38倍或至少39倍，及最优选至少40倍。
对于本发明，“同源物”是指相同种系起源的蛋白质，“类似物”是指具有相同功能，但是具有不同种系起源的蛋白质，“直系同源物”是指来自另一物种具有相同功能的蛋白质。
根据第二方面，本发明涉及重组基因，其包含根据第一方面的核酸分子或者具有优选编码液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白的核苷酸序列的核酸分子。所述核酸分子可与至少一个调节元件可操纵地连接。
“调节元件”是指这样的核苷酸序列，其不是蛋白质-编码核苷酸序列的一部分，但是介导该蛋白质-编码核苷酸序列的表达。调节元件包括例如启动子、顺式调节元件、增强子、内含子或者终止子。根据调节元件的类型，其位于蛋白质编码核苷酸序列的之前(即5')或之后(即3')的核酸分子上。所述调节元件在活的植物细胞中起作用。
术语“可操纵地连接”是指调节元件以这样的方式与蛋白质编码核苷酸序列连接，即其相对于蛋白质编码核苷酸序列以例如在调节元件的控制下的蛋白质编码核苷酸序列的表达可以在活细胞中发生的方式位于核酸分子上。
对于本发明，“启动子”是调节基因表达的核苷酸序列，其典型地位于基因的5’末端，并通过与某些DNA结合蛋白相互作用介导由RNA聚合酶执行的转录开始。在植物细胞中起作用的启动子例如包括组成型启动子，如病毒启动子，例如CaM35S启动子，双CaM35S启动子，或者植物启动子如遍在蛋白启动子，如在EP 0 305 668和US 6,528,701中描述。进一步地，可以使用例如在某些发育阶段具有例如特异性活性的启动子或者通过环境因素如生物或非生物逆境等可诱导的启动子或者组织特异性启动子。特别可以使用这样的启动子，其示出对于蔗糖贮存器官或其一部分的增加的特异性，即其在蔗糖贮存器官或其一部分中是特别活性的。对于甜菜，启动子可例如是根特异性或主根特异性的启动子。本领域技术人员从现有技术中已知这些启动子：WO 02/40687,Oltmanns,H.et al.(2006)"Taprootpromoters cause tissue specific gene expression within the storage root ofsugar beet",Planta 224:485-495,Noh,Seol Ah,et al.(2012)"A sweetpotato SRD1promoter confers strong root,taproot-,and tuber-specific expression inArabidopsis,carrot,and potato"Transgenic research 21:265-278。对于甘蔗，优选可以使用茎-特异性启动子，如通过如下文献中获知的那些启动子：Goshu Abraha,Tsion."Isolation and characterization of a culm-specific promoter element fromsugarcane",diss.Stellenbosch:University of Stellenbosch,2005.Govender,C."Stemspecific promoters from sorghum and maize for use in sugarcane",diss.Stellenbosch:Stellenbosch University,2008；及Mudge,S.R.et al.(2013)"Mature-stem expression of a silencing-resistant sucrose isomerase gene drivesisomaltulose accumulation to high levels in sugarcane,"Plant BiotechnologyJournal 1:502-509)。
进一步地，合适的启动子包括合成启动子。这些是通过分子生物学技术产生的启动子，在天然中未发现这种构型。合成的启动子是微小启动子，其是除了最小启动子之外仅含有一或多个选择的限定的顺式元件。这些顺式元件是DNA-结合蛋白如转录因子的结合位点，及分离自天然启动子，衍生自先前分离的顺式元件，或者通过随机重组技术产生及通过适当方法选择；与天然启动子比较，由于其较低复杂结构，合成的启动子仅通过几个外源性和内源性因子激活，因此是更特异性调节的。
“最小启动子”或者“核心”启动子是含有基本转录因子复合物的结合位点并使得RNA聚合酶II的转录精确起始。最小启动子的特征性序列基序是TATA box、起始元件(lnr)、“TFBII识别元件”(BRE)及“下游核心启动子元件”(OPE)。在最小启动子中，这些元件可单独或组合出现。最小启动子或者其序列基序可得自任何植物、细菌、真菌或病毒基因。
“顺式元件”是位于与表达的蛋白质编码核苷酸序列相同的核酸分子上的核苷酸序列。顺式元件不必须编码RNA或蛋白质，并且在转录方向可以位于表达的蛋白质编码核苷酸序列之前或之后。在表达的蛋白质编码核苷酸序列之前上游顺式元件通常提供特别对于转录因子必需的结合基序，其作为反式-作用元件(拉丁语trans，之外)，在分子水平，来自这个基因转录调节的另一侧。此外，如果顺式元件导致转录抑制，其被称作沉默子。导致转录的增强的顺式元件称作增强子。启动子中顺式/反式活性的总数决定了RNA聚合酶用其进行转录的强度。
进一步地，启动子可以是嵌合启动子和/或已由顺式元件修饰的启动子。启动子的修饰也可以是在例如已经天然具有顺式元件的启动子中另外掺入顺式元件。此外，所述修饰也包括顺式元件的多聚化，特别是天然存在的顺式元件的多聚化。与天然形式比较，这种修饰的启动子在例如特异性、表达水平或背景活性方面可具有改变的性质。
终止子是DNA上通常标记基因末端及导致转录终止的核苷酸序列。
根据另一和/或另外的实施方案，编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的核苷酸序列、特别是编码液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白的核苷酸序列，及具有至少一个调节元件的核苷酸序列是异源的。这意味着其衍生自不同物种或者在一个物种中不以指定组合天然发生。
根据第三方面，本发明涉及载体或可动遗传因子，包含具有根据第一方面的核苷酸序列或者根据第二方面的重组基因的核酸分子。
在此，载体是指根据第一方面的核酸分子或者根据第二方面的重组基因的转运载体，特别是将外来核酸转移至活的受体细胞中。活的受体细胞可以是真核细胞或原核细胞。载体包括例如质粒、粘粒、酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或者P1人工染色体(PAC)以及修饰的病毒如腺病毒、逆转录病毒和噬菌体。
可动遗传因子是这样的核苷酸序列，其在生物体基因组中的位置是可变的。可动遗传因子包括例如自助(self-serving)核苷酸序列，如转座子、逆转录因子、插入序列及内含肽(intein)，但是也包括II型内含子、插入质粒及某些噬菌体如Mu噬菌体。
根据另一方面，本发明涉及真核宿主细胞或原核宿主细胞，其包含作为转基因的根据第一方面的核酸分子、作为转基因的根据第二方面的重组基因，或者作为转基因的根据第三方面的载体或可动遗传因子。这是指所述核酸分子、重组基因和/或载体或可动遗传因子已经掺入宿主细胞中，例如通过转化或转染方式进行。举例的原核宿主细胞是根瘤农杆菌(A.tumefaciens)、大肠杆菌(E.coli)和枯草杆菌(B.subtilis)菌属细菌。举例的真核宿主细胞是酵母细胞如酵母属(Saccharomyces)或裂殖酵母属(Schizosaccharomyces)，但是也可以是动物或植物来源的细胞。
根据再一方面，本发明涉及发挥液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白功能的蛋白质。这种逆向转运蛋白特异于蔗糖。优选所述蛋白质由根据第一方面的核酸分子编码。
根据一个实施方案，所述液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白选自这样一组蛋白质，其：
a)具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列；
b)具有与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列具有至少80％相同性的氨基酸序列；
c)是SEQ ID NO:1所示蛋白质的同源物、类似物或直系同源物。
SEQ ID NO:1所示液泡膜质子/糖逆向转运蛋白也称作BvTST2.1，其具有长度为735个氨基酸的氨基酸序列。疏水性分析表明BvTST2.1显然具有12个疏水性跨膜结构域和一个大的位于中心的亲水性环，连接第六个和第七个跨膜结构域。BvTST2.1与来自拟南芥的液泡膜单糖转运蛋白2(AtTMT2)具有最高的序列相同性。这两个氨基酸序列的相同性是68％，考虑到保守和半保守氨基酸取代之后的序列相似性为84％(图1)。
根据再一方面，本发明涉及发挥液泡膜质子/糖逆向转运蛋白功能的蛋白质。优选地，所述蛋白质是由根据第一方面的核酸分子编码。
根据一个实施方案，所述液泡膜质子/糖逆向转运蛋白选自这样一组蛋白质，其：
a)具有SEQ ID NO:3、5或7所示氨基酸序列；
b)具有与SEQ ID NO:3、5或7所示氨基酸序列具有至少80％相同性的氨基酸序列；
c)是SEQ ID NO:3、5或7所示蛋白质的同源物、类似物或直系同源物。
SEQ ID NO:3所示液泡膜质子/糖逆向转运蛋白也称作BvTST1，SEQ ID NO:5所示蛋白质也称作BvTST2.2，SEQ ID NO:7所示蛋白质也称作BvTST3。
由于在甜菜中鉴别的液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白BvTST2.1以及其它液泡膜质子/糖逆向转运蛋白BvTST1、BvTST2.2和BvTST3与其它植物的逆向转运蛋白也具有序列相同性，因此液泡膜质子/糖逆向转运蛋白、特别是液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白也包含这样的蛋白质，其氨基酸序列与SEQ ID NO:1、3、5或7所示氨基酸序列具有至少80％相同性优选至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％相同性，以及包含其同源物、类似物或直系同源物。在本文中，不相关的是这些蛋白质天然发生的物种是哪个或者这些蛋白质不是天然发生的蛋白质，是例如通过分子遗传方法产生的蛋白质。
根据再一方面，本发明涉及转基因植物细胞，其包含作为转基因的根据第一方面的核酸分子、作为转基因的根据第二方面的重组基因或者作为转基因的根据第三方面的载体或可动遗传因子，以及涉及转基因植物或包含至少一种这样的植物细胞的其一部分。在本文中，所述转基因植物或其一部分还包含作为转基因的根据第一方面的核酸分子、作为转基因的根据第二方面的重组基因或者作为转基因的根据第三方面的载体或可动遗传因子。
根据再一方面，本发明涉及根据前述方面的转基因植物的种子，其中所述种子、特别是种子的至少胚细胞包含作为转基因的根据第一方面的核酸分子、作为转基因的根据第二方面的重组基因或者根据第三方面的载体或可动遗传因子。
在一个实施方案中，植物细胞是单子叶植物细胞。在另一个实施方案中，植物细胞是双子叶植物细胞。根据另一个和/或另外的实施方案，所述植物细胞是选自包括如下物种或亲本种属的植物的细胞：甜菜(Beta vulgaris)、甘蔗(Saccharum officinarum)、砂糖椰子(Arenga saccharifera)、糖槭(Acer saccharum)和高粱(Sorghum sp.)。因此，根据另一实施方案，转基因植物选自甜菜、甘蔗、砂糖椰子、糖槭和高粱。根据另一个实施方案，转基因植物的一部分或转基因植物的种子得自甜菜、甘蔗、砂糖椰子、糖槭和高粱。
在另外的和/或另一个实施方案中，转基因植物细胞、转基因植物或者转基因植物的一部分，优选是植物的蔗糖贮存器官，与在相同条件下培养的同基因植物细胞或植物相比具有较高的蔗糖浓度。此外，植物的一部分可以与完整的完整植物连接或者与其分离。这种部分包括例如植物的器官、组织、细胞和种子。
优选地，较高的蔗糖浓度是基于在植物液泡、特别是在植物的蔗糖贮存器官的至少一个细胞的液泡中具有较高的蔗糖浓度。特别优选地，具有较高蔗糖浓度的植物也具有增加的蔗糖产量。在本文中，产量是指关于在指定栽培面积(例如公顷)或者关于蔗糖贮存器官的重量，考虑到蔗糖贮存器官中的水含量(优选根据鲜重或干重标准化)，蔗糖贮存器官中蔗糖的产量。
根据再一方面，本发明涉及产生转基因植物的方法，其中所述方法包括至少如下步骤：
(a)将根据第一方面的核酸分子、根据第二方面的重组基因和/或根据第三方面的载体或可动遗传因子掺入植物的至少一个细胞中，及
(b)从在步骤a)获得的植物细胞再生所述转基因植物。
根据一个实施方案，得自该方法的转基因植物能在其细胞的液泡中浓缩蔗糖，优选在其蔗糖贮存器官的细胞的液泡中浓缩蔗糖至与在相同条件下培养的同基因对照植物相比较高的水平。
对于本发明，“同基因植物或对照植物”或者“同基因植物细胞”是指那些植物或植物细胞，其用作起始材料产生转基因植物或转基因植物细胞。因此，转基因植物和/或植物细胞的基因组除了通过基因技术转移的基因和/或掺入的核苷酸序列之外，就其是遗传修饰的植物或植物细胞而言是不同的。
根据另外和/或另一个实施方案，转基因植物在至少一个细胞中表达或过表达编码至少一个质子/糖逆向转运蛋白的核苷酸序列。
例如通过转化掺入核酸分子可以使用本领域技术人员基本已知的技术实现。例如，核酸分子可以通过如下方式掺入，即用含有在其质粒中转移的所述核酸序列的根瘤农杆菌感染植物组织或植物细胞，可以整合进植物基因组中。通过基因枪转移掺入是另一选择，其中待掺入植物细胞中的核酸施加于金粒子或钨粒子，然后以高速射入细胞中。将核酸掺入植物细胞中的为本领域技术人员已知的另一观点是原生质体转化，其中在存在待掺入的核酸分子条件下将聚乙二醇加入原生质体中，或者将原生质体暴露于短电流脉冲，由此原生质体膜瞬时成为所述核酸分子通透性的。从转化的组织或细胞中再生全植物的方法也为本领域技术人员从现有技术中已知。
优选地，根据第一方面的核酸分子、根据第二方面的重组基因和/或根据第三方面的载体或可动遗传因子被稳定掺入植物细胞的基因组中。这意味着在植物再生后，转移的核酸序列可以从这个植物至子代植物稳定传代。
优选地，甜菜的转化和再生是通过Lindsey(Lindsey K.(1991)"Regenerationand transformation of sugar beet by Agrobacterium tumefaciens"Plant TissueCulture Manual B7:1-13,Kluwer Academic Publishers)所述方法进行的。
植物的转基因可以通过聚合酶链反应使用适当的寡核苷酸引物核实。在再生之后，转化体可以在温室中生长及自花授粉以获得种子。
在一个实施方案中，转化的植物细胞是单子叶植物细胞。在另一个实施方案中，转化的植物细胞是双子叶植物细胞。根据另外和/或另一个实施方案，转化的植物细胞是选自包含如下物种或亲本种属的植物细胞：甜菜(Beta vulgaris)、甘蔗(Saccharumofficinarum)、砂糖椰子(Arenga saccharifera),糖槭(Acer saccharum)和高粱(Sorghumsp.)。
根据另一方面，本发明涉及增加植物的蔗糖贮存器官的蔗糖浓度的方法，通过在植物的至少一个细胞中表达或过表达液泡膜质子/糖逆向转运蛋白、特别是液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白而进行。所述表达或过表达可以通过植物的至少一个细胞的遗传修饰而获得，包括：
(1)将根据第一方面的核酸分子、根据第二方面的重组基因和/或根据第三方面的载体或可动遗传因子掺入植物的至少一个细胞中，从而导致液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的额外的表达或过表达，或者
(2)遗传修饰内源调节因子，如启动子，其调节编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的内源基因的表达，例如通过插入额外的顺式元件或增强子，从而导致受调控的液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的增加的表达。
通过在植物的至少一个细胞中表达或过表达液泡膜质子/糖逆向转运蛋白、特别是液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白，改良了经遗传修饰的细胞的液泡中蔗糖的输入。这样与同基因植物细胞相比也增加了这种细胞的液泡中的蔗糖浓度。
“蔗糖浓度增加”或者“增加的蔗糖浓度”或者“植物蔗糖贮存器官中较高的蔗糖浓度”是指基于蔗糖贮存器官的鲜重，与在相同条件下培养的非转基因(同基因)对照植物相比，平均蔗糖浓度增加至少0.2％、0.4％、0.6％、0.8％或1％，优选至少1.2％、1.4％、1.6％、1.8％或2％，特别优选至少2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、6％、7％、8％或10％，最优选至少15％。
对于本发明，术语“过表达”是指植物、植物细胞或其液泡膜中液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的量高于在同基因植物、同基因植物细胞或其液泡膜中相应量。
根据一个实施方案，增加植物蔗糖贮存器官中蔗糖浓度的方法包括表达和/或过表达根据第一方面的编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的核酸分子的核苷酸序列。
为此，根据上述方法产生转基因植物，其中如上述转基因植物中质子/糖逆向转运蛋白的表达和/或过表达可以通过各种遗传修饰促进。
例如，由强启动子和根据第一方面的核苷酸序列组成的构建体可以掺入转化的植物细胞中。或者，编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的基因、特别是编码液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白的基因的内源启动子可以被修饰，由此其在转基因植物中比在同基因对照植物中更具活性。修饰内源启动子的方式可例如是TALENs或锌指核酸酶。根据另一实施方案，可以将编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的内源基因、特别是编码液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白的内源基因的另外的基因拷贝，包括其天然启动子，掺入植物细胞中。
在另一和/或另外的实施方案中，液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白选自BvTST2.1蛋白质、其同源物、类似物和直系同源物。
另一方面，本发明涉及鉴别适于产生在其蔗糖贮存器官中蔗糖浓度增加的植物的方法。
根据一个实施方案，待鉴别的植物进行标记辅助鉴别。为此，分离待检验的每个植物的DNA，并使用合适的引物进行聚合酶链反应(PCR)，由此从PCR的反应产物分析中可以鉴别由于其遗传组成而适于在其蔗糖贮存器官中产生增加的蔗糖浓度的这些植物，通过凝胶层析或者通过在RT-PCR中荧光检测进行。根据另外和/或另一个实施方案，植物的遗传组成的鉴别可以通过限制长度多态性进行，其中分离的DNA用不同的限制性核酸内切酶水解，限制片段通过凝胶层析分离，印迹及与合适的探针杂交。鉴别由于其表达或过表达SEQ IDNO:2所示核苷酸序列而适于在其蔗糖贮存器官中产生增加的蔗糖浓度的转基因植物的合适寡核苷酸，例如可选自SEQ ID NO:15至SEQ ID NO:26所示寡核苷酸。本领域技术人员已知怎样提供对于SEQ ID NO:2的同源物、类似物或直系同源物也合适的寡核苷酸。
根据另外和/或另一个实施方案，适于在其蔗糖贮存器官中产生增加的蔗糖浓度的植物的鉴别不是基于其遗传组成而进行，而是通过表达其液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白而进行。这可发生在例如mRNA水平，通过例如“定量实时PCR”确定编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的脱氧核糖核苷酸、特别是编码液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白的脱氧核糖核苷酸序列的mRNA的量。在某植物、植物组织或植物细胞、特别是在植物的蔗糖贮存器官的组织或细胞中，与相同物种对比植物或其一部分或者相同植物的不是植物蔗糖贮存器官一部分的另一植物组织或植物细胞相比，确定在该植物中上述编码至少一个液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的mRNA的量较高，证明该植物产生在其蔗糖贮存器官中增加的蔗糖浓度的适合性。
鉴别适于产生在其蔗糖贮存器官中增加的蔗糖浓度的植物也可以通过定量检测在植物一部分中液泡膜质子/糖逆向转运蛋白、特别是液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白的量而进行。为此，使用所谓的Western印迹，其中将植物一部分、优选液泡、特别优选这部分的液泡膜的经电泳分离的蛋白质与特异于上述一或多种液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的抗体一起保温。使用结合特异于上述一或多种液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的抗体并具有可检测标记的二级抗体，可以确定所述植物一部分中液泡膜质子/糖逆向转运蛋白、特别是液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白的量，及可以鉴别适于产生在其蔗糖贮存器官中增加的蔗糖浓度的那些植物。在某植物、植物一部分或植物细胞中、特别是在植物的蔗糖贮存器官的组织或细胞中，与相同物种对比植物或其一部分或者相同植物的不是植物蔗糖贮存器官一部分的另一植物组织或植物细胞相比，确定至少一种液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白的量较大，证明了该植物在其蔗糖贮存器官中产生增加的蔗糖浓度的适合性。
因此，本发明还涵盖了用前述方法鉴别的植物，其适于在其蔗糖贮存器官中产生增加的蔗糖浓度。根据再一方面，本发明涉及适用作分子标记的寡核苷酸，以诊断检测根据第一方面的核酸分子。
根据一个实施方案，至少一个合适的寡核苷酸选自如下一组：SEQ ID NO:15、SEQID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:21、SEQID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25和SEQ ID NO:26。其可用作分子标记以诊断检测具有SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的核酸分子。
根据另一方面，本发明涉及抗体，其诊断发挥液泡膜质子/糖逆向转运蛋白、优选液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白功能的蛋白质。
在一个实施方案中，诊断抗体是单克隆抗体。在另一个实施方案中，诊断抗体是多克隆抗血清的一部分。
在另外和/或另一个实施方案中，诊断抗体或多克隆抗血清特异于特定的液泡膜质子/糖逆向转运蛋白，如液泡膜质子/蔗糖逆向转运蛋白。优选地，诊断抗体识别并结合在质子/蔗糖逆向转运蛋白的第六个与第七个跨膜结构域之间的环上的一个表位。
根据再一方面，本发明涉及液泡膜质子/糖逆向转运蛋白增加植物的蔗糖贮存器官中的蔗糖浓度的用途。
根据一个实施方案，使用液泡膜质子/糖逆向转运蛋白增加植物的蔗糖贮存器官中蔗糖浓度包括通过表达或过表达编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的核酸分子而增加蔗糖浓度。优选地，所述核酸分子包含：
i.核酸分子，其具有SEQ ID NO.2、4、6、8、10、12或14所示核苷酸序列，或者具有与SEQ ID NO.2、4、6、8、10、12或14所示核苷酸序列之一具有至少80％相同性的核苷酸序列；
ii.核酸分子，其具有与i所示核苷酸序列之一互补的核苷酸序列；
iii.核酸分子，其与i或ii所示核苷酸序列之一杂交；或者
iv.核酸分子，其编码具有SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11或13所示氨基酸序列的多肽，或者编码具有与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11或13所示氨基酸序列之一具有至少80％相同性的氨基酸序列的多肽。
SEQ ID NO:2所示核酸分子编码来自甜菜的具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的液泡膜质子/糖逆向转运蛋白TST2.1。
SEQ ID NO:4所示核酸分子编码来自甜菜的具有SEQ ID NO:3所示氨基酸序列的液泡膜质子/糖逆向转运蛋白TST1。
SEQ ID NO:6所示核酸分子编码来自甜菜的具有SEQ ID NO:5所示氨基酸序列的液泡膜质子/糖逆向转运蛋白TST2.2。
SEQ ID NO:8所示核酸分子编码来自甜菜的具有SEQ ID NO:7所示氨基酸序列的液泡膜质子/糖逆向转运蛋白TST3。
SEQ ID NO:10所示核酸分子编码来自拟南芥的具有SEQ ID NO:9所示氨基酸序列的液泡膜质子/糖逆向转运蛋白TMT1。
SEQ ID NO:12所示核酸分子编码来自拟南芥的具有SEQ ID NO:11所示氨基酸序列的液泡膜质子/糖逆向转运蛋白TMT2。
SEQ ID NO:14所示核酸分子编码来自拟南芥的具有SEQ ID NO:13所示氨基酸序列的液泡膜质子/糖逆向转运蛋白TMT3。
在上文i至iv中提及的至少一种核苷酸序列掺入植物的至少一个细胞中之后，通过所述核苷酸序列的表达和/或过表达，这种植物液泡中、特别是在这种植物的蔗糖贮存器官的液泡的膜中质子/糖逆向转运蛋白的量可增加，由此更多的蔗糖可以被转运至植物的液泡中，该植物的蔗糖贮存器官中的蔗糖浓度与在相同条件下培养的同基因对照植物中相应浓度相比增加。这样使得可以增加每株植物、每个蔗糖贮存器官和/或单位面积的蔗糖产量。
本发明通过举例的实施方案例证，其中举例的实施方案只是举例说明本发明，无限制本发明之意。本发明仅由权利要求书限定。术语“一个”不应理解为说明具体数目。
举例的实施方案清晰示出来自甜菜的TST2.1是液泡膜蛋白，其可以作为质子/糖逆向转运蛋白高度特异性地将蔗糖输入植物细胞的液泡中。
实施例1：植物材料和生长条件
如下实验使用甜菜栽培品种“Belladonna KWS”和“Brigadier”。品种“BelladonnaKWS”的种子由KWS Saat AG,Einbeck,DE提供，甜菜品种“Brigadier”的种子购自当地种子商店。
此外，使用本生烟(Nicotiana benthamiana)和拟南芥的植物和植物细胞。将植物在生长室内在Einheitserde-and Humuswerke Gebr.Patzer GmbH&Co.KG公司的标准基质ED 73上在光-暗循环为10小时光亮和14小时黑暗及22℃和125μmol quanta m-2s-1条件下生长。
拟南芥Attst1-2T-DNA双基因敲除突变体已在现有技术中描述(Wormit,A.et al.(2006)"Molecular identification and physiological characterization of a novelmonosaccharide transporter from Arabidopsis involved in vacuolar sugartransport"Plant Cell 18,3476-3490)。对于生长实验，如述将2-脱氧葡萄糖表面灭菌的拟南芥种子种植在半浓缩的Murashige and Skoog(1/2MS)琼脂平板上(Reiser,J.et al.(2004)"Molecular physiological analysis of the two plastidic ATP/ADPtransporters from Arabidopsis",Plant Physiol.136:3524-3536)。pUBQ:BvTST2.1-GFP和35S:BvTST1过表达植物的选择在含有50μg/ml潮霉素或者40μg/ml卡那霉素的1/2MS琼脂平板上进行。
实施例2：甜菜组织中糖的定量确定
用植物切片机收获甜菜的主根组织，在液氮中速冻并在-80℃贮存直至在进行定量葡萄糖检测。为了确定糖含量，将植物组织在液氮中研磨，并将50μg研磨的组织用80％乙醇在80℃提取两次20分钟。合并上清，用SpeedVac(Eppendorf,Hamburg,Germany)蒸发。将干燥的糖溶解于水中，通过NADP-偶联的酶测定在微平板读器中量化(Bergmeyer,H.U.andBernt,E.(1974)"Methods of Enzymatic Analysis",vol.3,Bergmeyer,H.U.ed.,VerlagChemie New York,S.1176-117；Lee,Y.C.(1972)"α-Mannosidase,β-glucosidase,andβ-galactosidase from sweet almond emulsion"Methods Enzymol.28:699-702)。
实施例3：基因表达分析
mRNA的相对积聚通过Northern印迹分析进行(Young,B.et al.(2011)"Arabidopsis nucleoside hydrolases involved in intracellular and extracellulardegradation of purines"Plant J.65:703-711)。如先前所述进行定量RT-PCR(LerochM.et al(2005)"Identification and characterization of a novel plastidicadenine nucleotide uniporter from Solanum tuberosum"J.Biol.Chem.280:17992-18000)。使用的基因特异性引物在表1中列出。
表1：扩增编码BvTST1和BvTST2.1的核苷酸序列及来自甜菜旁系同源TST基因的四个的基因的表达分析定量PCR的特异性引物。
实施例4：主根组织的液泡及液泡膜的分离
液泡通过Leigh and Branton所述方法分离(Leigh,R.A.and Branton,D.(1976)"Isolation of Vacuoles from Root Storage Tissue of Beta vulgaris"L.PlantPhysiol 58:656-662)，做出如下改变：将主根组织用植物切片机切成0.1-0.2mm厚度的切片，立即在收集培养基(1M山梨醇，1mM DTT，5mM EDTA，50mM Tris-HCl，pH 7.6)中在室温保温。随后，将主根组织的薄片用剃须刀片在收集培养基(1M山梨醇，1mM DTT，5mM EDTA，50mMTris-HCl，pH 7.6)中粉碎，通过不锈钢筛网(100mm筛孔尺寸)过滤，并通过离心沉淀(2,000×g，20分钟，4℃)。将沉淀物再悬浮于具有30％Nycodenz(Axis-Shield GmbH,Heidelberg,Germany)的收集培养基中，移至17ml离心管(Beckman UltraClear)中。在随后的摆动桶离心中(1,500×g，15分钟，8℃)，Nycodenz形成密度梯度，液泡浮于密度梯度的上层相。
如现有技术所述分离液泡膜(Schulze W.X.et al.(2012)"Cold acclimationinduce changes in Arabidopsis tonoplast protein abundance and activity andalters phosphorylation of tonoplast monosaccharide transporters",Plant J.69:529-541)。如述进行超声处理的液泡中α-甘露糖苷酶的活性测定(Boller,T.and Kende,H.(1979)"Hydrolytic enzymes in the central vacuole of plant cells"Plant Physiol63:1123-1132；Lee,Y.C.(1972)"α-Mannosidase,β-glucosidase,andβ-galactosidasefrom sweet almond emulsion"Methods Enzymol.28:699-702)。
实施例5：液相层析和串联质谱测定
在缓冲液(4％SDS，50mM NH4HCO3)中收集2或5个月龄的植物的分离的液泡膜沉淀物，浓度为1μg/ml。使收集的蛋白质在-20℃在80％丙酮中沉淀过夜，并如Mühlhaus所述进一步处理(Mühlhaus,T.et al.(2011)"Quantitative shotgun proteomics using auniform 15N-labeled standard to monitor proteome dynamics in time courseexperiments reveals new insights into the heat stress response ofChlamydomonas reinhardtii,"Mol.Cell.Proteomics 10:M110 004739)。提取的肽再悬浮于200μl缓冲液(2％乙腈，0.4％乙酸)中。
将3μl提取的肽样品进行液相层析串联质谱测定(LC-MS/MS分析)。在nanoAquityUPLC(Waters,Eschborn,Germany)上使用"Symmetry C18trap柱(5mm粒子大小，180μm x20mm柱直径)和BEH 130 C18柱(1.7μm粒子大小，75mm x 150mm柱直径)进行层析分离。洗脱液是双重梯度，第一个梯度是在2或3小时内从100％缓冲液A(0.4％乙酸，1％2-丙醇，2％乙腈)至40％缓冲液B(0.4％乙酸，1％2-丙醇，90％乙腈)，然后在90％缓冲液B超过5min，然后用90％缓冲液B最后15min。最后用100％缓冲液A平衡柱15min。混合的LTQ XL-Orbitrap质谱分析仪(ThermoScientific,Hamburg,Germany)以数据-依赖性模式运行，在设定分辨率60,000在400m/z进行质谱300-1500m/z(Orbitrap)的一个完整扫描循环，随后进行最强离子的7个连续数据-依赖性MS2扫描(LTQ)。单独带电离子从MS2分析中排除，MS2分析的母离子在排除列表上放置20秒。每个样品一式三份进行分析。
蛋白质使用MaxQuant软件及Andromeda Search Engine(Cox,J.and Mann,M.(2008)"MaxQuant enables high peptide identification rates,individualizedp.p.b.-range mass accuracies and proteome-wide protein quantification".Nat.Biotechnol.26:1367-72)在发明人之一内部产生的甜菜蛋白质数据库中鉴别。
实施例6：核酸构建体
甜菜的互补DNA(cDNA)通过分离自主根或叶的RNA的逆转录而制备。所有聚合酶链反应(PCR)均使用Phusion HF DNA Polymerase(Thermo Scientific)进行。
使用载体pUBC-GFP-Dest制备pUBQ:BvTST1-GFP融合构建体(Grefen et al(2010)"A ubiquitin-10promoter-based vector set for fluorescent proteintagging facilitates temporal stability and native protein distribution intransient and stable expression studies",Plant J.64:355-365)。为此，扩增BvTST1的cDNA，终止密码子通过PCR使用含有attB1和attB2位点的BvTST1引物除去。扩增产物在pDONRZEO(Invitrogen,Heidelberg,Germany)中通过BP反应随后在pUBC-GFP-Dest中通过LR反应而克隆。
如下所述制备pUBQ:BvTST2.1-GFP构建体：使用引物BvTST2.1fw_XhoI/BvTST2.1rev_XbaI扩增BvTST2.1基因的完整开放读框。所得PCR产物用XhoI和XbaI消化，并在用XhoI和SpeI切开的pUBC-cGFP-Dest载体内连接(Grefen et al.(2010))。如此产生的构建体含有bar基因，其在转化的植物中导致Basta抗性。随后，使用XhoI/PstI将编码BvTST2.1-GFP的完整核苷酸序列从这个构建体中切离，插入用XhoI和PstI相应切开的载体pUBN-nYFP-Dest中，其介导在转化的植物中的潮霉素抗性。用XhoI/PstI消化pUBN-nYFPDest导致完全除去nYFP序列及靶载体的“网关(Gateway)”性质，由此其适于利用农杆菌转化Attst1-2双基因敲除突变体(Clough S.J.,Bent,A.F.(1998)"Floral dip:asimplified method for Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsisthaliana"Plant J.16:735-743)。产生的所有基因构建体的核苷酸序列均通过序列分析核实。
实施例7：转化的本生烟(Nicotiana benthamina)植物液泡的膜片钳研究
为了在本生烟(N.benthamiana)叶肉细胞中瞬时过表达在其C末端用绿色荧光蛋白(GFP)或者仅用在遍在蛋白启动子(pUBQ10)控制下的GFP标记的糖转运蛋白(BvTST1-GFP和BvTST2.1-GFP)，使用Latz et al.(2007)所述的5-7周龄植物的农杆菌渗入法(Latz etal.(2007)"In planta AKT2subunits constitute a pH and Ca2+-sensitive inwardrectifying K+channel"Planta,225:1179-1191)。与现有技术中所述方法相反，根瘤农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株GV3101用作编码基因19K的核苷酸序列及相应糖转运蛋白/GFP构建体的载体、将细菌在5ml YEB培养基中培养过夜，在8,000×g在室温离心1分钟，用Agromix洗涤2次(Latz et al.(2007))。细菌细胞再悬浮于3ml Agromix中，在28℃黑暗中保持2-3小时。为了渗透，将含有19K农杆菌的1ml悬浮液与含有pUBQ:BvTST1-GFP、pUBQ:BvTST2.1GFP或pUBQ:GFP的1ml农杆菌悬浮液混合，加入2ml Agromix。
在农杆菌渗入两天后，基本如Beyhl等所述分离叶肉细胞的原生质体(Beyhl,D.etal(2009)"The fou2mutation in the major vacuolar cation channel TPC1conferstolerance to inhibitory luminal calcium",Plant J.58:715-723)。在叶切片与酶保温1小时后，释放的原生质体用500mM山梨醇和1mM CaCl2洗涤。通过暴露于渗透压为280mOsmol x kg-1裂解缓冲液(10mM EGTA，10mM Hepes/Tris，pH 7.4；用D-梳山梨醇设定渗透压)，液泡在膜片钳技术室内直接从原生质体中释放。宏观电流(Macroscopic currents)在“完整-液泡”构型中测量(Beyhl,D.et al.(2009)"The fou2mutation in the majorvacuolar cation channel TPC1confers tolerance to inhibitory luminal calcium"Plant J.58:715-723)；并在100Hz低通滤波。洗涤(bath)和移液溶液除了pH之外在其组成方面是相同的(100mM KCl，2mM MgCl2，1mM CaCl2，450-500Osmol x kg-1，用D-山梨醇设定渗透压)。洗涤溶液的pH是7.4(Hepes/Tris)，移液溶液的pH是5.5(Mes/Tris)。为了测量糖诱导的质子流出，将葡萄糖或蔗糖加入液泡膜的胞质侧，终浓度为50mM。
实施例8：甜菜主根细胞的液泡的膜蛋白质组分析
为了分析甜菜主根细胞的液泡膜的蛋白质组，分离栽培品种“Belladonna KWS”的5个月的甜菜主根细胞的液泡，液泡膜通过高速离心富集。疏水性膜蛋白用丙酮从几次洗涤的液泡膜级分中沉淀，随后再悬浮于尿素溶液(8M尿素)中，并进行胰蛋白酶消化，之后进行LC-MS/MS分析。
在每个富集的液泡膜制备物中鉴别总共大约400个不同的蛋白质。这些蛋白质之一在后文称作BvTST2.1(SEQ ID NO:1)在所有单独进行的制备物中均以较大数量存在，具有糖转运蛋白特征([LIVMSTAG]-[LIVMFSAG]-(SH)-(RDE)-[LIVMSA]-[DE]-(TD)-[LIVMFYWA]-G-R-[RK]-x(4.6)-[GSTA]；prosite pattern PS00216,http://prosite.expasy.org/)并与拟南芥的液泡单糖转运蛋白TMT2具有最高相似性(图1)。
实施例9：甜菜基因组中液泡膜糖转运蛋白基因
当检索B.vulgaris的基因组时，鉴别了4个旁系同源基因，其编码液泡膜糖转运蛋白。系统发育分析(图2)示出糖转运蛋白BvTST1和BvTST3与拟南芥(Arabidopsis)的直系同源基因AtTMT1或AtTMT3最密切相关，而BvTST2.1和BvTST2.2，非常相似的一对基因，与拟南芥直系同源物AtTMT2具有最高的序列相似性(图1)。BvTST2.1的氨基酸序列相应于大约68％的AtTMT2序列，相似性为84％(图1)。
实施例10：BvTST2.1的亚细胞定位
BvTST2.1的亚细胞定位在用pUBQ:BvTST2.1-GFP稳定转化的Attst1-2双基因敲除突变体中进行研究。
通过已知方法从叶肉细胞中分离原生质体及释放液泡(Yoo,S.D.et al.(2007)"Arabidopsis mesophyll protoplasts:a versatile cell system for transient geneexpression analysis",Nat.Protocol 1565-1572)。
使用共聚焦激光扫描显微镜(Leica TCS SP5,Leica Microsystems,Wetzlar,Germany)进行荧光显微镜成像。所有图像均用Leica HCX PL APO63x/1.20w motCORR CS镜头拍摄。图像处理使用Leica Application Suite Advanced Fluorescence Lite软件进行。
在完整BvTST2.1mRNA克隆之后，蛋白质的亚细胞定位通过在拟南芥中稳定表达BvTST2.1-GFP融合蛋白而确定。在稳定表达BvTS2.1-GFP的拟南芥突变体的叶的叶肉细胞中观测到的绿色荧光表明所述融合蛋白位于液泡膜中，紧密围绕叶绿体。
对表达BvTST2.1-GFP的植物的叶肉细胞进行酶消化，获得单独的完整原生质体。随后对这些原生质体进行低渗处理，导致稳定的绿色荧光液泡释放，从而证实BvTST2.1GFP在液泡膜中的定位。
实施例11：甜菜主根中BvTST2.1表达与蔗糖浓度的相关性
为了发现在甜菜主根中BvTST2.1表达与甜菜的蔗糖浓度之间的可能的相关性，在甜菜栽培品种“Belladonna KWS”和“Brigadier”中确定BvTST2.1基因的表达。
品种“Belladonna KWS”已知是甜菜品种，其具有较高的蔗糖浓度，及在种植后早如2个月在主根中即具有大约160μmol x g-1鲜重的蔗糖浓度(图3)。这种高蔗糖浓度在随后3个月发育期间增加，达到大约450μmol x g-1鲜重。这相应于基于2个月龄主根浓度增加3倍。
相反，在生长2个月后，品种“Brigadier”的主根含有低于70μmol蔗糖/g鲜重，在接下来的3个月其积聚仅大约195μmol蔗糖/g鲜重(图3)。
当对比叶与主根的蔗糖浓度时，发现在主根中与在叶中相比高大约30倍，而葡萄糖浓度在叶中比在主根中高大约80倍。
在不同甜菜品种之间蔗糖积聚的差别也反映在编码BvTST2.1的mRNA的量上(图4)。在品种“Belladonna KWS”与在“Brigadier”的主根中，所有四个旁系同源糖转运蛋白的mRNA的量在生长2个月后均较低。
在生长和发育另一个月后，这两个品种中BvTST2.1的mRNA的量均明显高于编码BvTMT1、BvTMT2.2和BvTMT3的mRNA的量。此外，在品种“Belladonna KWS”主根中BvTST2.1mRNA的量比品种“Brigadier”主根中的相应量高大约2.6倍(图4)。
虽然另外生长2个月，但是这两个品种中BvTST2.1mRNA的量相比于在生长3个月后的量未明显改变，甚至在5个月生长和发育阶段之后，品种“Belladonna KWS”主根中BvTST2.1的mRNA的量比品种“Brigadier”主根中相应量仍高大约2.6倍。
为了收集关于BvTST2.1蛋白质对于蔗糖贮存的重要性的更多的信息，在品种“Belladonna KWS”的3个月和5个月龄甜菜叶中确定葡萄糖、果糖和蔗糖的浓度(图5)，并与四个TST-旁系同源物的mRNA量对比(图6)。与主根相反，其中葡萄糖和果糖含量非常低，这两种单糖积聚在叶中。在3月龄甜菜的叶中，葡萄糖和果糖的浓度在33-35μmol/g鲜重，而蔗糖浓度低于15μmol/g鲜重。在生长5个月后，三种糖的浓度均为6-9μmol/g鲜重(图5)。
值得注意的是叶中BvTST2.1的mRNA的量一致地低于BvTMT1、BvTMT2.2和BvTMT3的mRNA的量，而主根中BvTST2.1的mRNA量总是高于其它亚型的mRNA的量(图6)。
实施例12：BvTST2.1介导的蔗糖液泡膜转运
为了证实BvTST2.1的转运功能，“膜片钳”技术用于分离的液泡。为此，将BvTST2.1-GFP融合蛋白在本生烟(Nicotiana benthaminana)的叶肉细胞中瞬时表达。转化的原生质体的完整液泡通过其在轻度低渗裂解后的绿色加以鉴别。
为了复制贯穿分离的液泡的液泡膜的生理学质子梯度，将代表液泡细胞腔内容物的移液管中的基质缓冲为pH 5.5，而代表细胞溶质的室内的基质(＝Bad)调节为pH 7.5。当在“细胞溶质”基质中加入蔗糖时，液泡与电流流动的强向下偏向起反应。在分离的液泡周围的基质中加入蔗糖导致内向电流，这提示蔗糖转运中的质子逆向转运。
在不存在BvTST2.1的条件下，本生烟(N.benthaminana)的分离的液泡示出无明显蔗糖/质子转运活性。相反，在含有BvTST2.1的液泡的情况中，在腔室基质中加入蔗糖导致几乎-1pA/pF量级的内向电流(图7)。这些电流代表质子驱动的穿过含有BvTST2.1-GFP的液泡膜的蔗糖输入的生物指纹，并且是一种清楚的迹象，表明BvTST2.1将质子沿质子梯度的跨膜输出与蔗糖逆已有蔗糖梯度的输入偶联起来。后者的功能是甜菜在其主根液泡中能积聚大量蔗糖的生物化学先决条件。
值得注意的是BvTST2.1不促进任何葡萄糖介导的质子输出。与BvTST2.1不同，亚型BvTST1介导蔗糖相关的和葡萄糖相关的电流，级别为大约-03,pA/pF(图7；表2)。
表2：糖诱导的各个液泡中电流密度的改变。这些数据证实BvTST2.1对于蔗糖的特异性。
实施例13：BvTST2.1在体内的蔗糖特异性
为了分析BvTST2.1在活的植物细胞中的高度底物特异性，将不具有两种重要的液泡膜单糖转运蛋白任一个的AtTMT双基因敲除突变体用PUBQ:BvTST2.1-GFP或pUBQ:BvTST1构建体转化。转化体在存在毒性葡萄糖类似物2-脱氧葡萄糖条件下生长。在不具有2-脱氧葡萄糖的对照实验中，所有植物品系均示出相似的生长。在存在2-脱氧葡萄糖的条件下，tst1-2双基因敲除突变体不恰当地发育，而野生型植物和表达BvTST1的品系示出更好的生长。野生型植物和表达BvTST1的双基因敲除突变体在存在2-脱氧葡萄糖条件下更好地生长，大概是因为2-脱氧葡萄糖可以在液泡中转运解毒。双基因敲除突变体不能如此生长。表达BvTST2.1的这些双基因敲除突变体不能补偿在存在2-脱氧葡萄糖条件下Attst1-2双基因敲除突变体的生长停滞，尽管BvTST2.1-GFP融合蛋白存在于液泡膜中。
Attst1-2::BvTST2.1-GFP植物在体内对于2-脱氧葡萄糖的显著敏感性与通过分离的液泡获得的电生理学数据和BvTST2.1的蔗糖特异性一致。
序列表
<110> KWS种子欧洲股份公司
祖德楚克尔股份公司
<120> 液泡膜质子/糖逆向转运蛋白及其增加植物蔗糖贮存器官的蔗糖浓度的用途
<130> KWS0218PCT
<150> DE102014005337
<151> 2014-04-11
<160> 28
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 735
<212> PRT
<213> Beta vulgaris
<400> 1
Met Ser Ala Ala Val Leu Val Ala Ile Ala Ala Thr Val Gly Asp Leu
1 5 10 15
Leu Tyr Gly Trp Asp Asn Ala Thr Ile Ala Gly Ala Val Leu Tyr Ile
20 25 30
Lys Lys Glu Phe Asn Leu Glu Ser Ser Pro Thr Leu Glu Gly Leu Ile
35 40 45
Val Ala Thr Ser Ile Ile Gly Ala Thr Leu Ile Thr Thr Cys Ser Gly
50 55 60
Pro Ile Ala Asp Arg Leu Gly Arg Arg Pro Met Met Ile Ile Ser Ser
65 70 75 80
Val Cys Phe Phe Val Ser Ala Leu Ile Met Leu Trp Ser Pro Asn Val
85 90 95
Tyr Val Leu Leu Phe Gly Arg Leu Leu Asp Gly Phe Gly Ser Gly Leu
100 105 110
Ala Val Thr Leu Gly Pro Leu Tyr Ile Ser Glu Thr Ala Pro Thr Asp
115 120 125
Ile Arg Gly Ser Leu Asn Thr Leu Pro Gln Phe Thr Gly Ser Gly Gly
130 135 140
Met Phe Leu Ala Tyr Cys Met Val Phe Gly Met Ser Leu Met Glu Thr
145 150 155 160
Pro Ser Trp Arg Leu Met Leu Gly Ile Leu Phe Val Pro Ser Thr Val
165 170 175
Tyr Phe Leu Leu Thr Val Phe Phe Leu Pro Glu Ser Pro Arg Trp Leu
180 185 190
Val Ser Lys Gly Arg Met Asn Glu Ala Lys Lys Val Leu Gln Trp Leu
195 200 205
Arg Gly Arg Glu Asp Val Phe Ala Glu Met Ala Leu Leu Val Glu Gly
210 215 220
Leu Arg Val Gly Gly Asp Thr Ser Ile Glu Glu Tyr Leu Ile Glu Pro
225 230 235 240
Asp Ala Gly Leu Ala Glu Asp Gln Asp Pro Met Thr Val Lys Asp Gln
245 250 255
Val Arg Leu Tyr Gly Ser Glu Ala Gly Cys Ser Trp Val Ala Arg Pro
260 265 270
Val Thr Gly Gln Ser Met Leu Gly Ile Ala Ser Arg Gln Gly Ser Met
275 280 285
Gln Ser Pro Ser Val Pro Leu Met Asp Pro Leu Val Thr Leu Phe Gly
290 295 300
Ser Val His Glu Lys Leu Pro Glu Gln Gly Ser Met Leu Ser Val Ile
305 310 315 320
Phe Pro Thr Phe Gly Ser Met Phe Ser Met Gly Gly Lys Glu Pro Lys
325 330 335
Asn Glu Glu Trp Asp Asp Glu Asn Thr Ile Gly Asp Asp Asp Asp Tyr
340 345 350
Gly His Asp Asp Glu Asp Tyr Ala Gly Asp Ala Asp Glu Asp Asp Asn
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Leu Arg Ser Ser Leu Ile Ser Arg Gln Asp Thr Gly Pro Asp Lys Ala
370 375 380
Met Val Ala Pro Thr Ser Gly Ser Met Phe Ser Met Lys His Ser Ser
385 390 395 400
Trp Leu Gln Gly Ser Glu Ala Ser Gly Ile Gly Gly Gly Trp Gln Leu
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Ala Trp Lys Trp Ser Glu Arg Glu Gly Leu Asp Gly Thr Lys Glu Gly
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Gly Phe Lys Arg Leu Tyr Leu His Gln Glu Gly Asp Ala Gly Ser Lys
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Arg Gly Ser Val Ile Ser Leu Ala Gly Gly Glu Val Ile Gly Asp Asn
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Arg Asp Phe Met Asp Arg Asp Ser Ile Gly Pro Ala Met Val His Pro
485 490 495
Ser Glu Ala Ser Ala Lys Arg Pro Ser Trp Arg Asp Phe Leu Glu Pro
500 505 510
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Gln Phe Ala Gly Ile Asn Gly Val Leu Tyr Tyr Thr Pro Gln Ile Leu
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Ser Ser Ala Leu Leu Leu Ile Ser Ala Leu Thr Thr Leu Leu Met Leu
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Pro Ala Ile Ala Val Ala Met Arg Leu Met Asp Leu Ser Gly Arg Arg
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Ile Phe Ile Phe Leu Lys Val Pro Glu Thr Lys Gly Met Pro Leu Glu
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Val Ile Thr Glu Phe Phe Ala Leu Gly Ala Arg Gln Ala Ser His
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<210> 2
<211> 2208
<212> DNA
<213> Beta vulgaris
<400> 2
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gataatgcta ctattgctgg ggctgtatta tatattaaga aagagttcaa cttggagagt 120
tctccaacct tggaagggtt aattgtggcc acatcaataa ttggagccac tcttattaca 180
acatgttctg gaccgattgc agatcgtctt ggtcgtcgcc ctatgatgat aatttcctca 240
gtttgtttct ttgttagtgc cttaataatg ttgtggtctc ccaatgttta tgttttactc 300
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atatcagaga ccgctccaac tgatataaga ggctcactga acacacttcc tcagtttact 420
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cctagctgga gattaatgct tgggattctt tttgttccat ctactgttta ttttctatta 540
actgtattct tcttacctga gtctcctcgc tggcttgtta gcaaaggacg gatgaatgag 600
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<211> 735
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<400> 3
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385 390 395 400
Ile Thr Thr Thr Gly Ile Gly Gly Gly Trp Gln Leu Ala Trp Thr Leu
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Asp Glu Lys Glu Ala Glu Asp Gly Lys Lys Ser Lys Asp Phe Lys Arg
420 425 430
Ile Tyr Leu His Gln Asp Gly Gly Pro Ala Ser Met Arg Gly Ser Leu
435 440 445
Leu Ser Leu Pro Gly Gly Asp Phe Pro Gly Asp Gly Asp Cys Val Gln
450 455 460
Ala Ser Ala Leu Val Ser Asn Pro Ala Leu Tyr Ser Lys Glu Val Leu
465 470 475 480
Gly Gln Ser Pro Ile Gly Pro Ala Met Val His Pro Ala Glu Ile Ala
485 490 495
Ser Gln Gly Pro Thr Trp Lys Ala Leu Leu Asp Pro Gly Val Lys Arg
500 505 510
Ala Leu Ile Val Gly Val Gly Ile Gln Met Leu Gln Gln Phe Ala Gly
515 520 525
Ile Asn Gly Val Leu Tyr Tyr Thr Pro Gln Ile Leu Glu Glu Ala Gly
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Val Glu Val Leu Leu Ser Asp Leu Gly Ile Ser Ser Thr Ser Ala Ser
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Phe Leu Ile Ser Ala Leu Thr Thr Phe Leu Met Leu Pro Cys Ile Ala
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Val Ala Met Arg Leu Met Asp Ile Ser Gly Arg Arg Ser Leu Leu Leu
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Ala Thr Ile Pro Val Leu Ile Ala Ser Leu Val Ile Leu Val Ile Ser
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Pro Asn Ile Leu Cys Ser Glu Ile Phe Pro Thr Arg Val Arg Gly Val
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Cys Ile Ala Ile Cys Gly Leu Val Phe Trp Ile Cys Asp Ile Ile Val
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Phe Ala Ile Tyr Ala Val Val Cys Val Ile Ser Leu Val Phe Val Tyr
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<212> DNA
<213> Beta vulgaris
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<212> PRT
<213> Beta vulgaris
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Ile Gly Gly Glu Lys Thr Met Glu Asp Leu Leu Val Thr Leu Glu Asp
225 230 235 240
His Glu Gly Asp Asp Thr Leu Glu Thr Val Asp Glu Asp Gly Gln Met
245 250 255
Arg Leu Tyr Gly Thr His Glu Asn Gln Ser Tyr Leu Ala Arg Pro Val
260 265 270
Pro Glu Gln Asn Ser Ser Leu Gly Leu Arg Ser Arg His Gly Ser Leu
275 280 285
Ala Asn Gln Ser Met Ile Leu Lys Asp Pro Leu Val Asn Leu Phe Gly
290 295 300
Ser Leu His Glu Lys Met Pro Glu Ala Gly Gly Asn Thr Arg Ser Gly
305 310 315 320
Ile Phe Pro His Phe Gly Ser Met Phe Ser Thr Thr Ala Asp Ala Pro
325 330 335
His Gly Lys Pro Ala His Trp Glu Lys Asp Ile Glu Ser His Tyr Asn
340 345 350
Lys Asp Asn Asp Asp Tyr Ala Thr Asp Asp Gly Ala Gly Asp Asp Asp
355 360 365
Asp Ser Asp Asn Asp Leu Arg Ser Pro Leu Met Ser Arg Gln Thr Thr
370 375 380
Ser Met Asp Lys Asp Met Ile Pro His Pro Thr Ser Gly Ser Thr Leu
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Ser Met Arg Arg His Ser Thr Leu Met Gln Gly Asn Gly Glu Ser Ser
405 410 415
Met Gly Ile Gly Gly Gly Trp His Met Gly Tyr Arg Tyr Glu Asn Asp
420 425 430
Glu Tyr Lys Arg Tyr Tyr Leu Lys Glu Asp Gly Ala Glu Ser Arg Arg
435 440 445
Gly Ser Ile Ile Ser Ile Pro Gly Gly Pro Asp Gly Gly Gly Ser Tyr
450 455 460
Ile His Ala Ser Ala Leu Val Ser Arg Ser Val Leu Gly Pro Lys Ser
465 470 475 480
Val His Gly Ser Ala Met Val Pro Pro Glu Lys Ile Ala Ala Ser Gly
485 490 495
Pro Leu Trp Ser Ala Leu Leu Glu Pro Gly Val Lys Arg Ala Leu Val
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545 550 555 560
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580 585 590
Pro Val Leu Ile Val Ser Leu Val Val Leu Val Ile Ser Glu Leu Ile
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His Ile Ser Lys Val Val Asn Ala Ala Leu Ser Thr Gly Cys Val Val
610 615 620
Leu Tyr Phe Cys Phe Phe Val Met Gly Tyr Gly Pro Ile Pro Asn Ile
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Leu Cys Ser Glu Ile Phe Pro Thr Arg Val Arg Gly Leu Cys Ile Ala
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Ile Cys Ala Met Val Phe Trp Ile Gly Asp Ile Ile Val Thr Tyr Ser
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675 680 685
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<212> DNA
<213> Arabidopsis thaliana
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<213> Arabidopsis thaliana
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225 230 235 240
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245 250 255
Ile Lys Leu Tyr Gly Ala Glu Glu Gly Leu Ser Trp Val Ala Arg Pro
260 265 270
Val Lys Gly Gly Ser Thr Met Ser Val Leu Ser Arg His Gly Ser Thr
275 280 285
Met Ser Arg Arg Gln Gly Ser Leu Ile Asp Pro Leu Val Thr Leu Phe
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Gly Ser Val His Glu Lys Met Pro Asp Thr Gly Ser Met Arg Ser Ala
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<213> Arabidopsis thaliana
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<210> 13
<211> 737
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<213> Arabidopsis thaliana
<400> 13
Met Arg Ser Val Val Leu Val Ala Leu Ala Ala Ala Ile Gly Asn Met
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Lys Lys Glu Phe His Leu Glu Lys Glu Pro Lys Ile Glu Gly Leu Ile
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Ile Lys Leu Tyr Gly Pro Glu Asp Gly Gln Ser Trp Met Ala Lys Pro
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Val Lys Gly Gln Ser Ser Leu Ala Leu Ala Ser Arg Gln Gly Ser Met
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Leu Pro Arg Gly Gly Ser Leu Met Asp Pro Leu Val Thr Leu Phe Gly
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Ile Gly Gly Gly Trp Gln Leu Ala Trp Lys Tyr Asn Asp Lys Val Gly
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Ala Asp Gly Lys Arg Val Asn Gly Gly Leu Gln Arg Met Tyr Ile His
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Gly
<210> 14
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<213> Arabidopsis thaliana
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5'-Primer f黵 die PCR-Amplification der f黵 Beta vulgaris
Tonoplast Zucker Transportprotein 1-kodierenden Nukleotidsequenz
<400> 15
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<211> 48
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
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Tonoplast Zucker Transportprotein 1-kodierenden Nukleotidsequenz
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ggggaccact ttgtacaaga aagctgggta ctccgcctta gcggcttc 48
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<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5'-Primer f黵 die PCR-Amplification der f黵 Beta vulgaris
Tonoplast Zucker Transportprotein 2.1-kodierenden
Nukleotidsequenz
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ctcgagatga gtgcagcagt attag 25
<210> 18
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<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3'-Primer f黵 die PCR-Amplification der f黵 Beta vulgaris
Tonoplast Zucker Transportprotein 2.1-kodierenden
Nukleotidsequenz
<400> 18
tctagagtgg cttgcttgtc ttgcacc 27
<210> 19
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5'-Primer f黵 die quantitative PCR-Reaktion zur Amplifikation
eines Fragments eines Nukleins鋟remolek黮s, das f黵 das Beta
vulgaris Tonoplastid鋜es Zucker Transportprotein 1 kodiert
<400> 19
gctgttgcta tgaggctcat gga 23
<210> 20
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3'-Primer f黵 die quantitative PCR-Reaktion zur Amplifikation
eines Fragments eines Nukleins鋟remolek黮s, das f黵 das Beta
vulgaris Tonoplastid鋜es Zucker Transportprotein 1 kodiert
<400> 20
ccttagcggc ttctaactgt ttagg 25
<210> 21
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5'-Primer f黵 die quantitative PCR-Reaktion zur Amplifikation
eines Fragments eines Nukleins鋟remolek黮s, das f黵 das Beta
vulgaris Tonoplastid鋜es Zucker Transportprotein 2.1 kodiert
<400> 21
aaagatgaac accactgtgt atg 23
<210> 22
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3'-Primer f黵 die quantitative PCR-Reaktion zur Amplifikation
eines Fragments eines Nukleins鋟remolek黮s, das f黵 das Beta
vulgaris Tonoplastid鋜es Zucker Transportprotein 2.1 kodiert
<400> 22
gtcatcagtg gcttgcttgt cttg 24
<210> 23
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5'-Primer f黵 die quantitative PCR-Reaktion zur Amplifikation
eines Fragments eines Nukleins鋟remolek黮s, das f黵 das Beta
vulgaris Tonoplastid鋜es Zucker Transportprotein 2.2 kodiert
<400> 23
aaagatgagc actactgtgc acg 23
<210> 24
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3'-Primer f黵 die quantitative PCR-Reaktion zur Amplifikation
eines Fragments eines Nukleins鋟remolek黮s, das f黵 das Beta
vulgaris Tonoplastid鋜es Zucker Transportprotein 2.2 kodiert
<400> 24
tcagttgtcc ttgtcttcag aagg 24
<210> 25
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5'-Primer f黵 die quantitative PCR-Reaktion zur Amplifikation
eines Fragments eines Nukleins鋟remolek黮s, das f黵 das Beta
vulgaris Tonoplastid鋜es Zucker Transportprotein 3 kodiert
<400> 25
tctacttctg ctgctttgtc atgg 24
<210> 26
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3'-Primer f黵 die quantitative PCR-Reaktion zur Amplifikation
eines Fragments eines Nukleins鋟remolek黮s, das f黵 das Beta
vulgaris Tonoplastid鋜es Zucker Transportprotein 3 kodiert
<400> 26
tcagcttcag cttgccttgc ac 22
<210> 27
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 5'-Primer f黵 die quantitative PCR-Reaktion zur Amplifikation
eines Fragments eines Nukleins鋟remolek黮s, das f黵 den Beta
vulgaris Elongationsfaktor 1 alpha 1 kodiert
<400> 27
ccacattgct gtcaagtttg ctg 23
<210> 28
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 3'-Primer f黵 die quantitative PCR-Reaktion zur Amplifikation
eines Fragments eines Nukleins鋟remolek黮s, das f黵 den Beta
vulgaris Elongationsfaktor 1 alpha 1 kodiert
<400> 28
tggtaacctt ggcaccggtt g 21

Claims (15)

1.编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白的核酸分子，特征在于所述液泡膜质子/糖逆向转运蛋白特异于蔗糖。
2.权利要求1的核酸分子，其中所述核酸分子包含选自如下一组的核酸分子：
a)具有SEQ ID NO:2所示核苷酸序列的核酸分子，或者具有与SEQ ID NO:2所示核苷酸序列具有至少80％相同性的核苷酸序列的核酸分子；
b)具有与a)的核苷酸序列之一互补的核苷酸序列的核酸分子；
c)与a)或b)的核酸分子之一杂交的核酸分子；
d)具有编码具有SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的多肽的核苷酸序列的核酸分子，或者具有编码其氨基酸序列与SEQ ID NO:1具有至少80％相同性的多肽的核苷酸序列的核酸分子；及
e)具有编码SEQ ID NO:1所示多肽的同系物、类似物或直系同源物的核苷酸序列的核酸分子。
3.包含权利要求1或2的核酸分子的重组基因。
4.载体或可动遗传因子，其包含权利要求1或2的核酸分子或者权利要求3的重组基因。
5.真核或原核宿主细胞，其包含作为转基因的权利要求1或2的核酸分子、作为转基因的权利要求3的重组基因，或者权利要求4的载体或可动遗传因子。
6.发挥权利要求1定义的液泡膜质子/糖逆向转运功能的蛋白质。
7.转基因植物细胞，其包含作为转基因的权利要求1或2的核酸分子、作为转基因的权利要求3的重组基因，或者权利要求4的载体或可动遗传因子。
8.转基因植物或其一部分，其包含至少权利要求7的转基因植物细胞。
9.权利要求8的转基因植物的种子，其中所述种子具有作为转基因的权利要求1或2的核酸分子、作为转基因的权利要求3的重组基因，或者权利要求4的载体或可动遗传因子。
10.产生转基因植物的方法，所述方法包括如下步骤：
(a)将权利要求1或2的核酸分子、权利要求3的重组基因或者权利要求4的载体或可动遗传因子掺入植物的至少一个细胞中，及
(b)从在步骤(a)中获得的植物细胞再生转基因植物。
11.一种增加植物的蔗糖贮存器官的蔗糖浓度的方法，通过在植物的至少一个细胞中表达或过表达权利要求1或2的核酸分子。
12.一种鉴别适于在其蔗糖贮存器官中产生增加的蔗糖浓度的植物的方法，包括检测权利要求1或2的核酸分子、确定编码权利要求6的蛋白质的mRNA的量，或者检测权利要求6的蛋白质的量。
13.适用作分子标记的寡核苷酸，其用于诊断检测权利要求1或2的核酸分子。
14.抗体，其用于诊断权利要求6的蛋白质。
15.液泡膜质子/糖逆向转运蛋白增加植物的蔗糖贮存器官的蔗糖浓度的用途，通过表达或过表达编码液泡膜质子/糖逆向转运蛋白质的核酸分子，核酸分子包括：
i.具有SEQ ID NO.2、4、6、8、10、12或14所示核苷酸序列或者具有与SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12或14所示核苷酸序列之一具有至少80％相同性的核苷酸序列的核酸分子；
ii.具有与i的核苷酸序列之一互补的核苷酸序列的核酸分子；
iii.与i或ii的核酸分子之一杂交的核酸分子；或者
iv.编码具有SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11或13所示氨基酸序列的多肽或者编码具有与SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11或13所示氨基酸序列之一具有至少80％相同性的氨基酸序列的多肽的核酸分子。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112074601A (zh) * 2018-05-29 2020-12-11 孟山都技术公司 具有增强的性状的转基因植物
CN113025556A (zh) * 2021-04-26 2021-06-25 东北师范大学 一种小麦原生质体、细胞质和叶绿体的分离方法

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3835309A1 (en) * 2019-12-13 2021-06-16 KWS SAAT SE & Co. KGaA Method for increasing cold or frost tolerance in a plant
CN111187777B (zh) * 2020-02-06 2023-03-24 东北农业大学 大豆GmTST2.1基因在大豆育种中的应用
CN112724211B (zh) * 2020-07-22 2021-10-22 宁夏农林科学院农业生物技术研究中心（宁夏农业生物技术重点实验室） 马铃薯液泡膜单糖转运蛋白StTMT2基因在提高植物糖含量中的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103097401A (zh) * 2010-03-27 2013-05-08 凯撒斯劳滕工业大学 提高种子产量和促进植物生长的方法

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE3612384A1 (de) 1986-04-12 1987-10-15 Krupp Koppers Gmbh Verfahren zur herstellung eines zur verwendung als blendingkomponente fuer vergaserkraftstoffe geeigneten aromatenkonzentrates
US6007086A (en) 1997-04-18 1999-12-28 Hopkins; Mark D. Electric ski binding system
US5954357A (en) 1998-04-09 1999-09-21 Golling; Eugene J. Apparatus for gliding over snow
US6383776B1 (en) * 1998-04-24 2002-05-07 E.I. Du Pont De Nemours & Company Plant sugar transport proteins
AUPP590198A0 (en) 1998-09-14 1998-10-08 Griplock Pty Limited Sporting equipment binding apparatus
US6528701B1 (en) 1999-03-02 2003-03-04 Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College Rice ubiquitin-derived promoters
US6936467B2 (en) * 2000-03-27 2005-08-30 University Of Delaware Targeted chromosomal genomic alterations with modified single stranded oligonucleotides
EP1207204A1 (de) 2000-11-16 2002-05-22 KWS Saat AG Gewebespezifische Promotoren aus der Zuckerrübe
US6983952B2 (en) 2001-10-02 2006-01-10 Eugene Golling Apparatus for gliding over snow
US7416191B2 (en) 2006-01-17 2008-08-26 Tadashi Yoshino Binding device for snowboard
WO2008070179A2 (en) 2006-12-06 2008-06-12 Monsanto Technology, Llc Genes and uses for plant improvement
DE102008064184A1 (de) 2008-12-22 2010-08-12 Südzucker AG Mannheim/Ochsenfurt Verfahren zur Steigerung des Saccharoseertrages beim landwirtschaftlichen Anbau von Zuckerrüben und Zuckerrohr
US20110193323A1 (en) 2010-01-12 2011-08-11 William Rivard Temporary binding apparatus
KR20110085732A (ko) 2010-01-21 2011-07-27 경희대학교 산학협력단 당의 액포 내 수송에 관여하는 벼 유래의 ＯｓＴＭＴ2 유전자
KR20110085729A (ko) 2010-01-21 2011-07-27 경희대학교 산학협력단 당의 액포 내 수송에 관여하는 벼 유래의 ＯｓＴＭＴ1 유전자
WO2012103480A1 (en) 2011-01-27 2012-08-02 Brendan Walker Board sport bindings

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103097401A (zh) * 2010-03-27 2013-05-08 凯撒斯劳滕工业大学 提高种子产量和促进植物生长的方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALEXANDER SCHULZ等: "Proton-driven sucrose symport and antiport are provided by the vacuolar transporters SUC4 and TMT1/2", 《THE PLANT JOURNAL》 *
ALEXANDRA WORMIT等: "Molecular Identification and Physiological Characterization of a Novel Monosaccharide Transporter from Arabidopsis Involved in Vacuolar Sugar Transport", 《THE PLANT CELL》 *
PAUL J.J. HOOYKAAS等: "Transformation of plant cells via Agrobacterium", 《PLANT MOLECULAR BIOLOGY》 *
SEQUENCE:JP489061.1: "TSA: Beta vulgaris Locus_1975_Transcript_18/21_Confidence_0.269_Length_3084 mRNA sequence.", 《EMBL数据库》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112074601A (zh) * 2018-05-29 2020-12-11 孟山都技术公司 具有增强的性状的转基因植物
CN113025556A (zh) * 2021-04-26 2021-06-25 东北师范大学 一种小麦原生质体、细胞质和叶绿体的分离方法
CN113025556B (zh) * 2021-04-26 2023-08-29 东北师范大学 一种小麦原生质体、细胞质和叶绿体的分离方法

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