CN106456574A - 含有非肽连接的杂合免疫球蛋白 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了具有以下结构的化合物：A‑B‑‑‑‑‑Z其中A是化合物的生物活性结构；其中Z是化合物的蛋白成分，该蛋白成分包括一个或多个多肽，其中该一个或多个多肽中的至少一者包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体和(iii)在它们的N末端具有选自由半胱氨酸或硒代半胱氨酸组成的群组的序列；其中B和Z之间的虚线表示肽连接；以及其中A和B之间的实线表示非肽连接，和其中间体二聚物以及制备本发明的化合物的方法。

Description

含有非肽连接的杂合免疫球蛋白
本申请要求美国临时专利申请号(U.S.Provisional Patent Application No.)61/953,650(于2014年3月14号提交)的优先权，其整个内容通过引用的方式在此被并入到本文中。
本申请通过引用的方式并入核苷酸和/或氨基酸序列，该序列存在于名称为“150313_0893_86450_PCT_Sequence_Listing_REB.txt,”的文档中(大小是499千字节)，该文档以IBM-PC机器格式于2015年3月13日被创建，具有与MS-Windows的操作系统兼容性，它以本申请的一部分被包含在于2015年3月13日提交的文本中。
本申请中引用了各种出版物。所有引用的出版物的全部公开内容通过引用的方式在此被并入到本申请中以充分地描述本发明所属的现有技术的状态。
背景技术
蛋白质优选形成紧凑的球状或纤维结构，将它们对溶剂的暴露减小到最小。在具有它的对于氢键二级结构的倾向的多肽主链中和促进三级折叠的侧链的相互作用中，这种趋势是固有的。因此，之前通过采用肽将“弹性”引到抗体中的努力在很大程度上是不够的。例如，利用有利于溶剂相互作用的氨基酸(例如丝氨酸)和破坏螺旋形结构的氨基酸(例如甘氨酸)的组合是很常见的。虽然这种方法在制备比如单链抗体片段(scFv)的融合蛋白中是有用的，产生的结构实际上是相当紧凑的，没有可扩展性的证据(例如参见Robert etal,(2009)Engineered antibody intervention strategies for Alzheimer’s diseaseand related dementias by targeting amyloid and toxic oligomers.ProteinEng.Des.Sel.22,199-208)。再者，此类序列由于它们固有的免疫原性和蛋白水解敏感性很可能引起其它的问题。
非常需要灵活的且可伸长的合并有非蛋白链的新的蛋白化合物和制备此类化合物的方法。
发明内容
本发明提供了具有以下结构的化合物：
其中A是化合物的生物活性结构；
其中z是化合物的蛋白成分，该蛋白成分包括一个或多个多肽，其中该一个或多个多肽中的至少一者包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体；以及(iii)在它们的N末端具有半胱氨酸或硒代半胱氨酸
其中B是连接A和Z的化学结构；
其中B和Z之间的虚线代表肽连接；以及
其中A和B之间的实线代表非肽连接。
本发明还提供了具有以下结构的化合物：
其中z是化合物的蛋白成分，该蛋白成分包括一个或多个多肽，其中该一个或多个多肽中的至少一者包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体；以及(iii)在它们的N端具有半胱氨酸或硒代半胱氨酸
其中B是连接Ra和C的化学结构；
其中B和Z之间的虚线代表肽连接；
其中L选自由以下组成的基团：-N3、炔烃、基团，其中R5是烷基或芳基，基、四嗪和反式环辛烯；以及
其中Ra是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分(moieties)的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、聚二醇(polyalkylene glycol)、聚氧烷基化多元醇(polyoxyalkylated polyol)、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚(polyvinyl alkyl ether)、聚乳酸、聚(乳-乙醇酸)(poly(lactic-glycolic acid))、多糖、支链残基(branched residue)、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷(isoxazolidine)、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基(acyloxy)、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二羟基哒嗪(dihydropyridazine)的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯(dibenzocyclooctene)、二苯并氮杂环辛烯(dibenzoazacyclooctene)、
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100和z＝1-10。
本发明还提供了用于制备具有以下结构的化合物的方法：
其中A是化合物的生物活性结构；
其中z是化合物的蛋白成分，该蛋白成分包括一个或多个多肽，其中该一个或多个多肽中的至少一者包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体；以及(iii)在它们的N末端具有半胱氨酸或硒代半胱氨酸；
其中B是连接A和Z的化学结构；
其中B和Z之间的虚线代表肽连接；
其中A和B之间的实线代表非肽连接；
它包括下述步骤：
a)获得A’，它包括A或A的衍生物和第一末端反应基团；
b)获得B’，它包括B或B的衍生物、第二末端反应基团和第三末端反应基团，其中该第二末端反应基团能够与该第一末端反应基团反应以形成非肽连接；
c)获得Z’，它包括Z或Z的衍生物和第四末端反应基团，其中该第四末端反应基团能够与该第三末端反应基团反应以形成肽连接；以及
d)以任何顺序反应A’、B’和Z’以制得该化合物。
附图说明
图1显示了通过用胱氨酰炔丙基酰胺(cystyl-propargylamide)断裂TNR1B内含肽融合蛋白制备炔烃修饰的TNR1B。通过几丁质色谱法(chitin chromatography)去除内含肽副产物。分别采用胱氨酰-3-叠氮基丙酰胺和各种半胱氨酸的环辛炔(例如DIBAC)衍生物类似地制备叠氮修饰的TNR1B和环炔烃修饰的TNR1B。
图2显示了通过(1)半胱氨酸、(2)半胱氨酸+巯基乙烷磺酸盐(MESNA)、(3)胱氨酰-炔丙基酰胺(cystyl-propargylamide)、(4)胱氨酰-炔丙基酰胺+MESNA，以及(5)MESNA。所有采用的化合物的浓度是50mM。
图3显示了通过Fc6二聚物和叠氮-DKTHT-硫酯(表1)的连接(肽)制备叠氮修饰的Fc6。
图4显示了通过Fc6二聚物和叠氮-PEGn-DKTHT-硫酯(表1)的连接(肽)制备叠氮修饰的Fc6。通过采用DIBAC-PEG12-硫酯类似地制备环炔烃修饰的Fc。
图5显示了(1)未修饰的Fc6、(2)图3的Az-DKTHT-Fc6的反应产物和(3)图4的Az-PEG4-DKTHT-Fc6的反应产物的SDS-PAGE分析(还原条件)
图6显示了通过炔烃修饰的TNR1B和Az-DKTHT-Fc6的连接合成(非肽)的TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6。
图7显示了通过炔烃修饰的TNR1B和叠氮-PEGn-DKTHT-Fc6的连接(非肽)合成TNR1B-炔烃-叠氮-PEGn-Fc6。在这个实施例中，n＝4。
图8显示了(1)单单炔烃修饰的TNR1B，(2)在不存在催化剂的条件下炔烃修饰的TNR1B+Az-DKTHT-Fc6，(3)导致图6的产物的炔烃修饰的TNR1B+Az-DKTHT-Fc6+催化剂和(4)导致图6的产物的形成增加的透析的炔烃修饰的TNR1B+Az-DKTHT-Fc6+催化剂，(5)在不存在催化剂的条件下的炔烃修饰的TNR1B+Az-PEG4-DKTHT-Fc6，(6)导致图7的产物的炔烃修饰的TNR1B+Az-PEG4-DKTHT-Fc6+催化剂和(7)导致图7的产物的形成增加的透析的炔烃修饰的TNR1B+Az-PEG4-DKTHT-Fc6+催化剂的SDS-PAGE分析(还原条件)。箭头对应于(a)Mr～75,000、(b)Mr～65,000、(c)Mr～43,000和(d)Mr～28,000。
图9显示了(1)单单TNF1B-Fc融合蛋白(依那西普(etanercept))，(2)导致图6的产物的炔烃修饰的TNR1B+Az-DKTHT-Fc6+催化剂，(3)TNF1B-Fc融合蛋白(依那西普)和(4)导致图7的产物的炔烃修饰的TNR1B+Az-PEG4-DKTHT-Fc6的SDS-PAGE分析(还原条件)。箭头对应于(a)Mr～75,000、(b)Mr～65,000、(c)Mr～43,000和(d)Mr～28,000。
图10显示了(1)未修饰的Fc6+催化剂，(2)炔烃修饰的TNR1B+未修饰的Fc6+催化剂(3)Az-DKTHT-Fc6+催化剂，(4)导致图6的产物的炔烃修饰的TNR1B+Az-DKTHT-Fc6+催化剂和(5)单单炔烃修饰的TNR1B的SDS-PAGE分析(还原条件)。箭头对应于(a)Mr～75,000，(b)Mr～65,000，(c)Mr～43,000，(d)Mr～28,000和(e)Mr～27,000
图11显示了在图10的TNR1B-炔烃-叠氮-DKTHT-Fc6产物(Mr～75,000)中由LC/MS鉴定的胰蛋白酶消化形成的肽。加下划线的肽序列是来自亲本TNR1B(上面)和Fc6(下面)序列的由LC/MS鉴定的序列。
图12显示了由图9的TNR1B-炔烃-叠氮-DKTHT-Fc6(左半部分)和TNR1B-炔烃-叠氮-PEG4-DKTHT-Fc6(右半部分)反应产物结合的TNF-□的SPR分析。表2中概括了动力学结合数据。
图13显示了在三步法中制备阿达木单抗Fab’：1)IdeS断裂为Fab’2+Fc’片段，2)蛋白A层析以移除Fc’片段和3)用2-巯基乙胺(2-mercaptoethylamine)(MEA)温和地还原Fab’2片段为Fab’片段。
图14显示了(1)阿达木单抗，(2)IdeS断裂后的阿达木单抗，(3)蛋白A纯化后的阿达木单抗Fab’2，(4)MEA处理蛋白A纯化的Fab’2之后的阿达木单抗Fab’，(5)蛋白A纯化后的阿达木单抗Fab’2和(6)MEA处理蛋白A纯化的Fab’2之后的阿达木单抗Fab’的SDS-PAGE分析。在还原条件下分析泳道1、2、5和6中的样品，而在非还原条件下分析泳道3和4中的样品。箭头对应于(a)重链、(b)重链Fc’片段、(c)重链Fd’(包含可变区)片段和(d)轻链。
图15显示了通过阿达木单抗Fab’和DIBAC-PEGy-Lys(Mal)反应制备环炔烃修饰的Fab’。在该实施例中，PEGy＝PEG12。
图16显示了环炔烃修饰的阿达木单抗Fab’的合成和纯化的SDS-PAGE分析(非还原条件)。上半部分显示了在(1-6)pH 7.4和(7-12)pH 7.0的反应。DIBAC-PEGy-Lys(Mal)与Fab’的比率是(1)0，(2)10:1，(3)5:1，(4)2.5:1，(5)1.2:1，(6)0.6:1，(7)0，(8)10，(9)5，(10)2.5，(11)1.2和(12)0.6:1。下半部分显示了(1)未反应的Fab’，(2)通过(12)蛋白L流出的仅仅含有环炔烃修饰的Fab’的级分。
图17显示了(1)Fc6，(2)Az-DKTHT-Fc6，(3)Az-PEG12-DKTHT-Fc6，(4)Az-PEG24-DKTHT-Fc6和(5)Az-PEG36-DKTHT-Fc6的SDS-PAGE分析(还原条件)。
图18显示了(a)Az-PEG36-DKTHT-Fc6，(b)Az-PEG24-DKTHT-Fc6，(c)Az-PEG12-DKTHT-Fc6，(d)Az-DKTHT-Fc6和(e)Fc6的排阻色谱。
图19显示了通过环炔烃修饰的阿达木单抗Fab’和叠氮修饰的Fc6的连接(非肽)的Fab’-PEGy-炔烃-叠氮-PEGx-Fc6的合成。
图20显示了Fab’-PEGy-炔烃-叠氮-PEGx-Fc6产物系列。
图21显示了(1)阿达木单抗全部抗体，(2)阿达木单抗Fab’，(3)Fab’-PEG12-炔烃，(4)Fab’-PEG12-炔烃+Az-DKTHT-Fc6，(5)Az-DKTHT-Fc6，(6)Fab’-PEG12-炔烃+Az-PEG12-DKTHT-Fc6，(7)Az-PEG12-DKTHT-Fc6，(8)Fab’-PEG12-炔烃+Az-PEG24-DKTHT-Fc6，(9)单单Az-PEG24-DKTHT-Fc6，(10)Fab’-PEG12-炔烃+Az-PEG36-DKTHT-Fc6，(11)Az-PEG36-DKTHT-Fc6和(12)Fc6的SDS-PAGE分析。样品是在还原条件下(上半部分)和在非还原条件下(下半部分)行进的。在上半部分中，箭头显示了(a)Fab’-PEGy-炔烃-叠氮-PEGx-Fc6重链。在下半部分中箭头显示了(a)双手Fab’-PEGy-炔烃-叠氮-PEGx-Fc6分子(two-handed Fab’-PEGy-alkyne-azide-PEGx-Fc6 molecules)和(b)单手Fab’-PEGy-炔烃-叠氮-PEGx-Fc6分子(one-handed Fab’-PEGy-alkyne-azide-PEGx-Fc6molecules)。
图22显示了下述双手反应产物的排阻色谱(SEC)：(a)Fab’-PEG12-炔烃-叠氮-PEG36-DKTHT-Fc6，(b)Fab’-PEG12-炔烃-叠氮-PEG24-DKTHT-Fc6，(c)Fab’-PEG12-炔烃-叠氮-PEG12-DKTHT-Fc6，(d)Fab’-PEG12-炔烃-叠氮-DKTHT-Fc6和(e)全部阿达木单抗。
图23显示了通过反应产物抑制WEHI细胞上TNF-α细胞毒性。上半部分显示了(a)Fc6对照，(b)环炔烃修饰的Fab’，(c)Fab’-PEG12-炔烃-叠氮-DKTHT-Fc6和(d)Fab’-PEG12-炔烃-叠氮-PEG12-DKTHT-Fc6。下半部分显示了(a)Fc6对照，(b)环炔烃修饰的Fab’，(c)Fab’-PEG12-炔烃-叠氮-PEG24-DKTHT-Fc6和(d)Fab’-PEG12-炔烃-叠氮-PEG36-DKTHT-Fc6。
图24显示了通过在还原条件下(左)和非还原条件下(右)的SDS-PAGE的纯化的N3-Px-Fc蛋白：Fc6对照(泳道a)、N3-P0-Fc(泳道b)、N3-P12-Fc(泳道c)、N3-P24-Fc(泳道d)、N3-P36-Fc(泳道e)和N3-P48-Fc(泳道f)。
图25显示了环辛炔修饰的GLP-1类似物(GLP1-P7-DBCO)的结构和合成。
图26显示了GLP1-P7-DBCO和N3-Px-Fc蛋白之间的反应。
图27显示了GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白的结构。
图28显示了通过还原条件(左)和非还原条件(右)下的SDS-PAGE的纯化的GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白：Fc6对照(泳道a)、GLP1-P4-DN-P0-Fc(泳道b)、GLP1-P4-DN-P12-Fc(泳道c)、GLP1-P4-DN-P24-Fc(泳道d)、GLP1-P4-DN-P36-Fc(泳道e)和GLP1-P4-DN-P48-Fc(泳道f)。
图29通过还原条件下的SDS-PAGE直接比较了GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白和N3-Px-Fc蛋白：Fc6对照(泳道a)、N3-P0-Fc(泳道b)、GLP1-P4-DN-P0-Fc(泳道c)、N3-P12-Fc(泳道d)、GLP1-P4-DN-P12-Fc(泳道e)、N3-P24-Fc(泳道f)、GLP1-P4-DN-P24-Fc(泳道g)、N3-P36-Fc(泳道h)、GLP1-P4-DN-P36-Fc(泳道i)、N3-P48-Fc(泳道j)、GLP1-P4-DN-P48-Fc(泳道k)。
图30比较了通过GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白和GLP-1诱导的在GLP-1受体表达细胞中的cAMP合成。
图31显示了DIBAC-PEG11-DIBAC和N3-Px-Fc蛋白之间的反应。
图32显示了环辛炔-Px-Fc蛋白的结构。
图33显示了通过还原条件下的SDS-PAGE的DIBAC-P11-DN-P0-Fc反应产物：Fc6对照(泳道b)、未纯化的反应产物(泳道c-e)、纯化的N3-P0-Fc蛋白(泳道f)和纯化的DIBAC-P11-DN-P0-Fc蛋白(泳道g)。
图34显示了在叠氮修饰的DNA和环辛炔-Px-Fc蛋白之间的反应。
图35显示了DNA-三唑-Fc杂合免疫球蛋白的结构。
图36显示了通过还原条件下的SDS-PAGE的DNA-三唑-Fc杂合免疫球蛋白反应产物：5AzD-let7d寡核苷酸浓度(mg/ml)如下所示:标记物(泳道a)、0(泳道b)、2.5(泳道c)、1.25(泳道d)、0.063(泳道e)、0.031(泳道f)、0.016(泳道g)、0.08(泳道h)。
图37显示了曲妥株单抗变体、cys1H-IgG1和叠氮修饰的曲妥株单抗重链(N3-Px-Hc)的结构和合成。
图38显示了曲妥株单抗变体、cys1L-IgG1、叠氮修饰的曲妥株单抗轻链(N3-Px-Lc)的结构和合成。
图39显示了环辛炔修饰的DM-1(DM1-P4-DBCO)的结构和合成。
图40显示了环辛炔修饰的DM-1和N3-Px-Hc蛋白之间的反应。
图41显示了DM1-P4-三唑-Px-Hc杂合免疫球蛋白的结构。
图42显示了环辛炔修饰的DM-1和N3-Px-Lc蛋白之间的反应。
图43显示了DM1-P4-三唑-Px-Lc杂合免疫球蛋白的结构。
图44显示了四嗪-DBCO和N3-Px-Fc蛋白之间的反应。
图45显示了四嗪修饰的Fc蛋白((Tet-Px-Fc))的结构。
图46显示了通过还原条件下(左)和非还原条件下(右)的SDS-PAGE的纯化的Tet-Px-Fc蛋白：Fc6对照(泳道a)、Tet-P0-Fc(泳道b)、Tet-P12-Fc(泳道c)、Tet-P24-Fc(泳道d)、Tet-P36-Fc(泳道e)和Tet-P48-Fc(泳道f)。
图47显示了TCO-PEG12-DBCO和N3-Px-Fc蛋白之间的反应。
图48显示了反式环辛烯修饰的Fc蛋白(Tco-Px-Fc)的结构。
图49显示了通过还原条件下的SDS-PAGE的Tco-P12-Px-Fc蛋白：Tco-P12-DBCO连接子的浓度(mg/ml)如下所示：32(泳道a)、16(泳道b)、8(泳道c)、4(泳道d)、2(泳道e)、1(泳道f)、0.5(泳道g)、0.25(泳道h)、0.125(泳道i)和0(泳道j)。
图50显示了通过还原条件下的SDS-PAGE的NH2-PEG23-N3和DBCO-TT-P12-P36-Fc蛋白之间的反应产物：NH2-PEG23-N3连接子的浓度(mg/ml)如下所示：0.12(泳道a)、0.06(泳道b)、0.03(泳道c)、0.015(泳道d)、0.0075(泳道e)、0.0038(泳道f)、0.002(泳道g)、0.001(泳道h)、0(泳道i)。
图51显示了反式环辛烯修饰的GLP-1类似物(GLP1-P6-Tco)的结构和合成。
图52显示了GLP1-P6-Tco肽和Tet-Px-Fc蛋白之间的反应。
图53显示了GLP1-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白的结构。
图54显示了四嗪修饰的GLP-1类似物(GLP1-P6-Tet)的结构和合成。
图55显示了GLP1-P6-Tet肽和Tco-Px-Fc蛋白之间的反应。
图56显示了GLP1-P6-TT-Px-Fc杂合免疫球蛋白的结构。
图57显示了通过还原条件下(左)和非还原条件下(右)的SDS-PAGE的纯化的GLP1-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白：Fc6对照(泳道a)、GLP1-P6-TT-P0-Fc(泳道b)、GLP1-P6-TT-P12-Fc(泳道c)、GLP1-P6-TT-P24-Fc(泳道d)、GLP1-P6-TT-P36-Fc(泳道e)和GLP1-P6-TT-P48-Fc(泳道f)。
图58通过还原条件下的SDS-PAGE直接比较了N3-Px-Fc(I)蛋白、Tet-Px-Fc(II)蛋白和GLP1-dihydropyridizine-Fc(III)杂合免疫球蛋白：Fc6对照(泳道a)、N3-P0-Fc(泳道b)、Tet-P0-Fc(泳道c)、GLP1-P6-TT-P0-Fc(泳道d)、N3-P12-Fc(泳道e)、Tet-P12-Fc(泳道f)、GLP1-P6-TT-P12-Fc(泳道g)、N3-P24-Fc(泳道h)、Tet-P24-Fc(泳道i)、GLP1-P6-TT-P24-Fc(泳道j)、N3-P36-Fc(泳道k)、Tet-P36-Fc(泳道l)、GLP1-P6-TT-P36-Fc(泳道m)、N3-P48-Fc(泳道n)、Tet-P48-Fc(泳道o)、GLP1-P6-TT-P48-Fc(泳道p)。
图59显示了GLP1-P7-DBCO和N3-P36-Fc反应的时程和GLP1-P6-Tco和Tet-P36-Fc反应的时程。
图60比较通过GLP1-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白和GLP-1诱导的在GLP-1受体表达细胞中的cAMP合成。
图61显示了反式环辛烯修饰的阿达木单抗Fab(Fab-P3-Tco)的结构和合成。
图62显示了Fab-P3-Tco蛋白和Tet-Px-Fc蛋白之间的反应。
图63显示了Fab-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白的结构。
图64显示了通过还原条件下的SDS-PAGE的Fab-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白：标记物(泳道a)、阿达木单抗(泳道b)、Fab-P3-TT-P0-Fc(泳道c)、Fab-P3-TT-P12-Fc(泳道d)、Fab-P3-TT-P24-Fc(泳道e)、Fab-P3-TT-P36-Fc(泳道f)、Fab-P3-TT-P48-Fc(泳道g)、Fab-P3-Tco(泳泳道h)、Tet-P0-Fc(泳道i)、Tet-P12-Fc(泳道j)、Tet-P24-Fc(泳道k)、Tet-P36-Fc(泳道l)mTet-P48-Fc(泳道m)。
图65显示了叠氮修饰的和反式环辛烯修饰的奥氮平(olanzapine)(Ola-P12-Tco)的结构和合成。
图66显示了Ola-P12-Tco和Tet-Px-Fc蛋白之间的反应。
图67显示了奥氮平-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白的结构。
发明的详细描述
本发明提供了具有以下结构的化合物：
其中A是化合物的生物活性结构；
其中Z是化合物的蛋白成分，该蛋白成分包括一个或多个多肽，其中该一个或多个多肽中的至少一者包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体和(iii)在它们的N端具有半胱氨酸或硒代半胱氨酸；
其中B是连接A和Z的化学结构；
其中B和Z之间的虚线表示肽连接；以及
其中A和B之间的实线表示非肽连接。
在一些实施方案中，半胱氨酸或硒代半胱氨酸天然地发生在该连续氨基酸段中。在一些实施方案中，半胱氨酸或硒代半胱氨酸不是天然地发生在该连续氨基酸段中。
在一些实施方案中，该连续氨基酸在它们N端具有选自由以下组成的群组的序列：半胱氨酸、硒代半胱氨酸、CP、CPXCP(其中X＝P、R或S)、CDKTHTCPPCP、CVECPPCP、CCVECPPCP和CDTPPPCPRCP。
在一些实施方案中，抗体的Fc区域是抗体的天然发生的Fc区域。
在一些实施方案中，抗体的Fc区域是抗体的变体Fc区域。
在一些实施方案中，抗体的变体Fc区域是抗体的突变的Fc区域。
在一些实施方案中，该突变的Fc区域是取代突变体。
在一些实施方案中，该取代突变体具有在N端、C端或除N端或C端之外的Fc区域的位置的氨基酸取代。
在一些实施方案中，该取代突变体在它的连续氨基酸段中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-15、15-20、10-20或20-50个氨基酸取代。
在一些实施方案中，该取代是连续氨基酸取代。
在一些实施方案中，该突变突变的Fc区域是氨基酸增加突变体(amino acidaddition mutant)。
在一些实施方案中，该氨基酸增加突变体在它的连续氨基酸段中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-15、15-20、10-20或20-50个增加的氨基酸。
在一些实施方案中，该突变的Fc区域是氨基酸缺失突变体。
在一些实施方案中，该氨基酸缺失突变体在它的连续氨基酸段中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-15、15-20、10-20或 20-50个缺失的氨基酸。
在一些实施方案中，该连续氨基酸与抗体的Fc区域的链中存在的至少0、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180或190个连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，该连续氨基酸与Fc区域或其一部分的铰链区、CH2区或CH3区中的氨基酸段相同。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接：
其中
其中R5是烷基或芳基
其中R1是H或是额外结构(该额外结构是环状结构)的一部分，其中额外环状结构包括R1或R1的一部分，并且还可包括R2或R2的一部分以及R2和烯烃双键之间的碳；
条件是，如果那么R3是H；如果 那么是包括的三唑环，以及如果那么是包括的N-烷基或芳基取代的异恶唑啉环；以及
其中R2代表连接A或B中一者的有机结构以及R4代表连接A或B中另一者的有机结构。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接：
其中R1是H或是额外结构(该额外结构是环状结构)的一部分，其中额外环状结构包括R1或R1的一部分，并且还可包括R2或R2的一部分以及R2和烯烃双键之间的碳。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接：
其中R1是H或是额外结构(该额外结构是环状结构)的一部分，其中额外环状结构包括R1或R1的一部分，并且还可包括R2或R2的一部分以及R2和烯烃双键之间的碳。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接：
其中R1是额外结构(该额外结构是环状结构)的一部分，其中额外环状结构包括R1或R1的一部分，并且还可包括R2或R2的一部分以及R2和烯烃双键之间的碳。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接：
其中R1是是环状结构的额外结构的一部分，其中额外环状结构包括R1或R1的一部分，并且还可包括R2或R2的一部分以及R2和烯烃双键之间的碳。
在一些实施方案中，R1和R2通过至少一个直接键(direct bond)连接从而形成包括以下结构的环状结构：
i)R1的一部分，
ii)R2的一部分，
iii)R2和烯烃双键之间的碳，以及
iv)烯烃双键。
在一些实施方案中，R1选自由以下组成的群组：
它任选地在任何位置被取代。
在一些实施方案中，R1是它任选地在任何位置被取代。
在一些实施方案中，R1是它任选地在任何位置被取代。
在一些实施方案中，R1是它任选地在任何位置被取代。
在一些实施方案中，R2和烯烃双键之间的碳是：
(i)用单键直接键合至R2并且由独立地选自由以下组成的群组的两个取代基取代：氢、卤素、任意取代的苄基、任意取代的烷基或任意取代的烷氧基；或
(ii)通过双键和单键直接键合至R2。
在一些实施方案中，R2和烯烃双键之间的碳被两个氢取代并且直接用单键键合至R2。
在一些实施方案中，R2和烯烃双键之间的碳直接通过双键和单键键合至R2。
在一些实施方案中，R2和烯烃双键之间的碳直接通过双键和单键键合至R2从而形成在任何位置任意被取代的苯环。
在一些实施方案中，R2是其中R2通过J被连接至A或B，以及
其中J是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰(phthalyl)、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯，
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100和z＝1-10。
在一些实施方案中，R2是其中R2通过J被连接到A或B，以及
其中R2是通过R2的氮原子被连接到R1，以及
其中J是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯，
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100和z＝1-10。
在一些实施方案中，R2是
它在任何位置被任意地取代,
其中R2是通过R2的氮原子或碳原子被连接到R1，
其中R2是通过J被连接到A或B，
以及
其中J是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是：
其中y＝1-100和z＝1-10。
在一些实施方案中,R2是它在任意位置被任选地取代。
在一些实施方案中，R2是
它在任意的位置被任选地取代。
在一些实施方案中，R2是
它在任意的位置被任选地取代。
在一些实施方案中，R2是
它在任意的位置被任选地取代。
在一些实施方案中，R2是
它在任意的位置被任选地取代。
在一些实施方案中，R2是
它在任意的位置被任选地取代。
在一些实施方案中，R1和R2合起来是：
它在任意的位置被任选地取代，
其中J是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是：
其中y＝1-100以及z＝1-10。
在一些实施方案中，R1和R2合起来是
它在任意位置被任选地取代。
在一些实施方案中，R1和R2合起来是
它在任意位置被任选地取代。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它在任意位置被任选地取代。
其中J是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100以及z＝1-10。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它在任意位置被任选地取代。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它在任意位置被任选地取代。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它在任意位置被任选地取代，
其中J是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100以及z＝1-10。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它任选地在任意位置被取代。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它任选地在任意位置被取代。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它任选地在任意位置被取代，
其中J是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100以及z＝1-10。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它任选地在任意位置被取代。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它任选地在任意位置被取代。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它任选地在任意位置被取代，
其中J是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100和z＝1-10。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它任选地在任意位置被取代。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
它任选地在任意位置被取代。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
在一些实施方案中，R1是H。
在一些实施方案中，其中J是包括[PEG(y)]z基团的有机结构。
在一些实施方案中，其中J是包括以下的有机结构：聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)或多糖基团。
在一些实施方案中，J是包括C1-C4烷基的有机结构。
在一些实施方案中，J是包括琥珀酰亚胺的有机结构。
在一些实施方案中，J是包括胺的有机结构。
在一些实施方案中，J是包括琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰或已二酰的有机结构。
在一些实施方案中，J是包括丙二酰的有机结构。
在一些实施方案中，J是包括氨基酸的有机结构。
在一些实施方案中，J是包括半胱氨酸的有机结构。
在一些实施方案中，J是包括赖氨酸的有机结构。
在一些实施方案中，J是由选自由以下组成的群组的3个部分的链组成的有机结构：
[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
在一些实施方案中，J是由选自由以下组成的群组的4个部分的链组成的有机结构：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
在一些实施方案中，J是由选自由以下组成的群组的5个部分的链组成的有机结构：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
在一些实施方案中，J包括键合至赖氨酸的[PEG(y)]z基团。
在一些实施方案中，J包括键合至琥珀酰亚胺基团的C1-C4酰基。
在一些实施方案中，J包括键合至C1-C4酰基的赖氨酸。
在一些实施方案中，J包括键合至戊二酰的[PEG(y)]z基团。
在一些实施方案中，J是由选自由以下组成的群组的5个部分的链组成的有机结构：[PEG(y)]z、C2-C5酰基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、氨基酸、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
在一些实施方案中，J是键。
在一些实施方案中，J是半胱氨酸。
在一些实施方案中，J具有以下结构：
其中n 1-3，m是1-4，y是1-100以及z是1-10。
在一些实施方案中，J具有线性结构。
在一些实施方案中，J具有支链结构。
在一些实施方案中，R2是
其中n 1-3，m是1-4，y是1-100以及z是1-10。
在一些实施方案中，R2是
其中n 1-3，m是1-4，y是1-100以及z是1-10。
在一些实施方案中，R2是
其中n 1-3，m是1-4，y是1-100以及z是1-10。
在一些实施方案中，R1和R2合起来是:
其中n 1-3，m是1-4，y是1-100以及z是1-10。
在一些实施方案中，R1和R2合起来是:
其中n 1-3，m是1-4，y是1-100以及z是1-10。
在一些实施方案中，R1和R2合起来是:
其中n 1-3，m是1-4，y是1-100以及z是1-10。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100和z＝1-10。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100以及z＝1-10；
其中[PEG(x)]w是:
其中x＝1-100以及w＝1-10。
在一些实施方案中，y是1-20。在一些实施方案中，y是21-40。在一些实施方案中，y是41-60。在一些实施方案中，y是61-80。在一些实施方案中，y是30-50。在
一些实施方案中，y是12、24、36或48。在一些实施方案中，z是1。在一些实施方案中，z是0。
在一些实施方案中，末端羰基是[PEG(y)]z基团，是酰胺键的一部分。
在一些实施方案中，[PEG(y)]z基团的末端胺是酰胺键的一部分。
在一些实施方案中，R4是
其中x是1-100以及w是0-5。
在一些实施方案中，x是1-20。在一些实施方案中。x是21-40。在一些实施方案中，x是41-60。在一些实施方案中，x是61-80。在一些实施方案中，x是30-50。在一些实施方案中，x是12、24、36或48。
在一些实施方案中，w是1。在一些实施方案中，w是0。
在一些实施方案中，R4具有以下结构:
在一些实施方案中，R2通过J被连接到A以及R4被连接到B。
在一些实施方案中，R2通过J被连接到B以及R4被连接到A。
在一些实施方案中，R4通过末端羰基碳被连接到B。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接：
其中p＝0-5、0-10、0-50或0-100。
在一些实施方案中，其中R2通过碳氮键或碳硫键被连接到A。
在一些实施方案中，R2通过碳氮键被连接到A。
在一些实施方案中，该碳氮键是酰胺键。
在一些实施方案中，R2通过生物学上不稳定的键被连接到A。
在一些实施方案中，R2通过A的C末端氨基酸和B的氨基之间的酰胺键被连接到A。
在一些实施方案中，该末端氨基酸是半胱氨酸。
在一些实施方案中，R2通过碳硫键被连接到A。
在一些实施方案中，R2通过在R2和自由硫醇(thiol)之间形成的碳硫键被连接到A。
在一些实施方案中，R2通过琥珀酰亚胺硫键被连接到A。
在一些实施方案中，J包括支链残基。
在一些实施方案中，J通过该支链残基被连接到不止一个A上。
在一些实施方案中，B包括支链残基。
在一些实施方案中，B被连接到不止一个A上，每个通过具有该支链残基的非肽连接。
在一些实施方案中，A和B的实线表示包括以下结构的非肽连接:
其中Xa是含有融合至二氢哒嗪的环辛炔的化学结构；以及
其中Ra表示连接A或B中一者的有机结构以及Rb表示连接A或B中另一者的有机结构。
在一些实施方案中，Xa具有以下结构:
其中Rc是H、烷基或芳基或其互变异构体。
在一些实施方案中，Xa具有以下结构:
其中Rc是H、烷基或芳基或其互变异构体。
在一些实施方案中，Ra被连接到环辛烷以及Rb被连接到二氢哒嗪。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
其中Rc是H、烷基或芳基或其互变异构体。
在一些实施方案中，Xa具有以下结构:
其中Rc是H、烷基或芳基或其互变异构体。
在一些实施方案中，Rc是甲基。
在一些实施方案中，其中Ra和Rb独立地是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯
其中X1是CH或N,X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100以及z＝1-10.
在一些实施方案中，其中Ra和Rb独立地是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、C2-C5酰基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、氨基酸、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100以及z＝1-10。
在一些实施方案中，Ra或Rb通过碳氮键或碳硫键被连接到A。
在一些实施方案中，Ra或Rb通过碳氮键被连接到A。
在一些实施方案中，该碳氮键是酰胺键。
在一些实施方案中，Ra或Rb通过生物学上不稳定的键被连接到A。
在一些实施方案中，Ra或Rb通过A的C末端氨基酸和B的氨基之间的酰胺键被连接到A。
在一些实施方案中，该末端氨基酸是半胱氨酸。
在一些实施方案中，Ra或Rb通过碳硫键被连接到A。
在一些实施方案中，Ra或Rb通过R2和自由硫醇之间形成的碳硫键被连接到A。
在一些实施方案中，其中Ra或Rb通过琥珀酰亚胺-硫键被连接到A。
在一些实施方案中，Ra或Rb包括支链残基。
在一些实施方案中，Ra或Rb通过支链残基被连接到不止一个A上。
在一些实施方案中，相比于当A没有被连接到任何其它结构时它的生物活性，当A是本发明的化合物或二聚物的一部分时，它的生物活性增加了。
在一些实施方案中，A包括化合物的结构，该化合物是被批准用于治疗罹患疾病的个体的药物。
在一些实施方案中，该个体是哺乳动物个体。
在一些实施方案中，该哺乳动物个体是人类个体。
在一些实施方案中，A包括具有小于1000道尔顿的分子量的有机化合物的结构、DNA适体、RNA适体、寡核苷酸或生物学上有活性的蛋白质。
在一些实施方案中，该寡核苷酸是反义寡核苷酸。
在一些实施方案中，该寡核苷酸是RNA干扰诱导分子(RNA interferenceinducing molecule)。
在一些实施方案中，该寡核苷酸编码RNA干扰诱导分子。
在一些实施方案中，A包括一级或二级胺。
在一些实施方案中，A通过该一级或二级胺被连接到B。
在一些实施方案中，A包括一级胺。
在一些实施方案中，A是阿立哌唑或奥司他韦。
在一些实施方案中，A包括二级胺。
在一些实施方案中，A是呼吸道药物、平喘药(antiasthmatic agent)、镇痛剂(analgesic agent)、抗抑郁剂、抗心绞痛药、抗心律失常药、抗高血压药、抗糖尿病药物、抗组胺剂、抗感染药物、抗生素、消炎药(antiinflamatory agent)、抗帕金森病药、抗精神病药、退热药(antipyretic agent)、抗溃疡药、注意力缺失过动症(ADHD)药物(attentiondeficit hyperactivity disorder(ADHD)drug)、中枢神经系统兴奋剂、解充血药(decongestant)或精神兴奋药(psychostimulant)。
在一些实施方案中，A是阿普洛尔、醋丁洛尔、阿米福林(amidephrine)、安咪奈丁(amineptine)、氨磺洛尔、阿莫沙平、安非他尼、阿替洛尔、阿托西汀、巴洛沙星、巴美生、苯呋洛尔、苯那普利、苯氟雷司、苯佐他明、倍他司汀、倍他洛尔、贝凡洛尔、二苯美伦、比索洛尔、布林佐胺、丁苯碘胺、丁胺卡因、开麻若芬、卡拉洛尔、卡替卡因、卡维地洛、吐根酚碱、环丙沙星、氯氮平、氯苄雷司(clobenZorex)、氯丙那林、环喷他明、地拉普利(delapril)、地美替林、地诺帕明、去郁敏、地氯雷他定、双氯芬酸、二甲福林、地奥沙屈、多巴酚丁胺、多培沙明(dopexamine)、多利培南、多佐胺、氢普拉明、度洛西汀、依托拉嗪、依那普利、依诺沙星、肾上腺素、厄他培南(ertapenem)、艾沙拉唑、艾司洛尔、乙苯恶啶、法舒地尔(fasudil)、芬地林(fendiline)、芬乙茶碱、氟苯丙胺、非诺多泮、非诺特罗、芬普雷司、氟卡尼(flecamide)、氟西汀、福莫特罗、夫罗曲坦、加波沙朵、加雷沙星、加替沙星、格雷沙星、海索那尔、咪达普利、茚达品(indalpine)、英地卡尼、盐酸茚氯秦、异克舒令、异丙克兰、柳胺苄心定、兰地洛尔、拉帕替尼、左法哌酯、赖诺普利、洛美沙星、洛曲非班(lotrafiban)、马普替林、梅坎米胺、甲氟喹、甲吲洛尔、美罗培南(meropenem)、美他帕明、奥西那林、甲氧那明、右旋性的哌醋甲酯(dextrorotary methylphenidate)、哌醋甲酯、美替洛尔、美托洛尔、米托蒽醌、米伐折醇、莫昔普利、莫普洛尔(moprolol)、莫西沙星、奈比洛尔、硝苯洛尔、尼普洛尔、诺氟沙星、去甲替林、布酚宁、奥氮平、奥沙尼喹、氧烯洛尔、奥昔麻黄碱、帕罗西汀、perhexyline、芬美曲秦、苯肾上腺素、苯丙甲胺、甲羟苯丙胺(pholedrine)、匹西雷司、pimethylline、心得乐、吡哌酸、匹多卡因(piridocaine)、心得宁、普多沙星、普拉克索、普拉维林、普瑞特罗、心可定、丙胺卡因(prilocalne)、异丙喹喘宁、丙萘洛尔、丙胺苯丙酮、心得安、六氢脱氧麻黄碱、胡椒喘定、普罗替林、假麻黄碱、瑞波西汀、雷沙吉兰、(r)-雷沙吉兰、repinotan、茶丙特罗、瑞米特罗、羟苄羟麻黄碱、沙芬酰胺、柳丁氨醇/沙丁胺醇、沙美特罗、沙立佐坦(sarizotan)、舍曲林、西洛多辛、甲磺胺心定、索特瑞醇、司帕沙星、螺普利、磺苄心定、脱氧肾上腺素、坦索罗辛、替巴克兰(tebanicline)、噻奈普汀、欣维宁、曲托喹芬、曲美他嗪、拉氧头孢(troxipide)、伐尼克兰、维达列汀、维洛沙秦、维喹地尔(viquidil)或扎莫特罗(xamoterol)。
在一些实施方案中，A包括生物学上有活性的蛋白质。
在一些实施方案中，A包括分泌性蛋白质。
在一些实施方案中，A包括蛋白质的胞外域。
在一些实施方案中，A在生物学上是有活性的使得它具有靶向结合活性。
在一些实施方案中，该A独立折叠的蛋白质或其一部分。
在一些实施方案中，A是糖基化的蛋白质。
在一些实施方案中，A包括链内的二硫键。
在一些实施方案中，A结合细胞因子。
在一些实施方案中，该细胞因子是TNFα。
在一些实施方案中，A包括心房肽(ANP)、降血钙素、促肾上腺皮质素释放激素(CRH)、内皮素、艾塞那肽、抑胃肽(GIP)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、胰高血糖素样肽-2(GLP-2)、GLP-1或GLP-2的类似物、胰高糖素血管活性肠肽(GVIP)、胃饥饿素、缩氨酸YY或分泌素或其一部分。
在一些实施方案中，A包括序列HGEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGRG中的连续氨基酸段。
在一些实施方案中，A包括至少一个连续氨基酸段，它与抗体的Fab或Fab’的重链中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，A包括至少一个连续氨基酸段，它与抗体的Fab或Fab’的轻链中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，A包括抗体的至少一个Fab或Fab’或该至少一个Fab或Fab’的一部分。
在一些实施方案中，A包括至少2、3、4、5、6、7、8、9或10份(copies)该Fab或Fab’或其一部分。
在一些实施方案中，A包括抗体的Fab-1或Fab’1或其一部分。
在一些实施方案中，A包括抗体的Fab-2或Fab’2或其一部分。
在一些实施方案中，A包括抗体的两个Fab或Fab’手。
在一些实施方案中，该Fab或Fab’存在于阿达木单抗中。
在一些实施方案中，A包括至少一个连续氨基酸段，该连续氨基酸段与单链抗体中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，A包括至少一个连续氨基酸段，该连续氨基酸段与TNFα受体中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，该TNFα受体是TNR1B。
在一些实施方案中，本发明的化合物形成同二聚物的一部分。
在一些实施方案中，本发明的化合物形成异二聚物的一部分。
本发明提供了包括本发明的化合物的同二聚物。
本发明提供了包括本发明的化合物的异二聚物。
在一些实施方案中，该二聚物的每个化合物能够通过至少一种二硫键结合到另一种化合物。
在一些实施方案中，该二聚物的每个化合物能够通过至少一种每种化合物的Z之间的二硫键结合到另一种化合物。
在一些实施方案中，该二聚物的每个化合物通过至少一个二硫键被结合到另一种化合物。
在一些实施方案中，该二聚物的每个化合物通过至少一个每种化合物的Z之间的二硫键被结合到另一种化合物。
在一些实施方案中，该二聚物的每个化合物非共价地被结合到另一种化合物。
本发明提供了具有以下结构的化合物:
其中z是化合物的蛋白成分，该蛋白成分包括一个或多个多肽，其中该一个或多个多肽中的至少一个包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合Fc受体；以及(iii)在它们的N末端具有半胱氨酸或硒代半胱氨酸；
其中B是连接Ra和C的化学结构；
其中B和Z之间的虚线代表肽连接；
其中L选自由以下组成的群组：-N3、炔烃、基团，其中R5是烷基或芳基，基团、四嗪和反式环辛烯；以及
其中Ra是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100以及z＝1-10。
在一些实施方案中，半胱氨酸或硒代半胱氨酸天然地存在于该连续氨基酸段中。在一些实施方案中，半胱氨酸或硒代半胱氨酸不是天然地存在于该连续氨基酸段中。
在一些实施方案中，该连续氨基酸在它们的N末端具有选自由以下组成的群组的序列：半胱氨酸,硒代半胱氨酸、CP、CPXCP(其中X＝P、R或S)、CDKTHTCPPCP、CVECPPCP、CCVECPPCP和CDTPPPCPRCP。
在一些实施方案中，抗体的Fc区域是抗体的天然的Fc区域。
在一些实施方案中，抗体的Fc区域是抗体的变体Fc区域。
在一些实施方案中，该抗体的变体Fc区域是抗体的突变的Fc区域。
在一些实施方案中，该突变的Fc区域是取代突变体。
在一些实施方案中，该取代突变体具有在N末端、C末端或除了该N末端或该C末端之外的的Fc区域的位置的氨基酸取代。
在一些实施方案中，该取代突变体在它的连续氨基酸段中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-15、15-20、10-20或20-50个氨基酸取代。
在一些实施方案中，该取代是连续氨基酸取代。
在一些实施方案中，该突变突变的Fc区域是氨基酸增加突变体。
在一些实施方案中，该氨基酸增加突变体在它的连续氨基酸段中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-15、15-20、10-20或20-50个添加的氨基酸。
在一些实施方案中，该突变的Fc区域是氨基酸缺失突变体。
在一些实施方案中，该氨基酸缺失突变体在它的连续氨基酸段中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-15、15-20、10-20或20-50个缺失的氨基酸。
在一些实施方案中，该连续氨基酸与抗体的Fc区域的链中存在的至少0、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170,180或190个连续氨基酸的段相同。
在一些实施方案中，该连续氨基酸与Fc区域的铰链区、CH2区或CH3区中的氨基酸段或其一部分相同。
在一些实施方案中，L是–N3。
在一些实施方案中，L是
在一些实施方案中，L是炔烃。
在一些实施方案中，该炔烃是炔丙基。
在一些实施方案中，该炔烃是环辛炔基。
在一些实施方案中，该炔烃具有以下结构:
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基。
在一些实施方案中，该炔烃具有以下结构:
在一些实施方案中，L是四嗪。
在一些实施方案中，四嗪具有以下结构:
其中Rc是H、烷基或芳基。
在一些实施方案中，四嗪具有以下结构:
其中Rc是H、烷基或芳基。
在一些实施方案中，四嗪具有以下结构:
在一些实施方案中，四嗪具有以下结构:
在一些实施方案中，L是反式环辛烯。
在一些实施方案中，该反式环辛烯具有以下结构:
在一些实施方案中，该反式环辛烯具有以下结构:
在一些实施方案中，Ra或Rb是包括[PEG(y)]z基团的有机结构。
在一些实施方案中，Ra或Rb是包括以下的有机结构：聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)或多糖基团。
在一些实施方案中，Ra或Rb是包括C1-C4烷基的有机结构。
在一些实施方案中，Ra或Rb是包括琥珀酰亚胺的有机结构。
在一些实施方案中，Ra或Rb是包括胺的有机结构。
在一些实施方案中，Ra或Rb是包括琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰或已二酰的有机结构。
在一些实施方案中，Ra或Rb是包括丙二酰的有机结构。
在一些实施方案中，Ra或Rb是包括氨基酸的有机结构。
在一些实施方案中，Ra或Rb是包括半胱氨酸的有机结构。
在一些实施方案中，Ra或Rb是包括赖氨酸的有机结构。
在一些实施方案中，Ra或Rb是有机结构，该有机结构由选自由以下组成的群组的3个部分的链组成：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯，
在一些实施方案中，Ra或Rb是有机结构，该有机结构由选自由以下组成的群组的4个部分的链组成：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
在一些实施方案中，Ra或Rb是有机结构，该有机结构由选自由以下组成的群组的5个部分的链组成：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
在一些实施方案中，Ra或Rb包括键合至赖氨酸的[PEG(y)]z基团。
在一些实施方案中，Ra或Rb包括键合至琥珀酰亚胺基团的C1-C4酰基。
在一些实施方案中，Ra或Rb包括键合至C1-C4酰基的赖氨酸。
在一些实施方案中，Ra或Rb包括键合至戊二酰的[PEG(y)]z基团。
在一些实施方案中，Ra或Rb是有机结构，该有机结构由选自由以下组成的群组的3个、4个或5个部分的链组成：[PEG(y)]z、C2-C5酰基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、氨基酸、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯、
其中X1是CH或N,X2是CH2或羰基以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是:
其中y＝1-100以及z＝1-10。
在一些实施方案中，Ra或Rb是键。
在一些实施方案中，Ra或Rb是半胱氨酸。
在一些实施方案中，Ra或Rb具有线性结构。
在一些实施方案中，Ra或Rb具有支链结构。
在一些实施方案中，y是1-20。在一些实施方案中，y是21-40。在一些实施方案中，y是41-60。在一些实施方案中，y是61-80。在一些实施方案中，y是30-50。在一些实施方案中，y是12、24、36或48。
在一些实施方案中，z是1。
在一些实施方案中，[PEG(y)]z基团的末端羰基是酰胺键的一部分。
在一些实施方案中，[PEG(y)]z基团的末端胺是酰胺键的一部分。
在一些实施方案中，Ra或Rb是
其中x是1-100以及w是0-5。
在一些实施方案中，x是1-20。在一些实施方案中，x是21-40。在一些实施方案中，x是41-60。在一些实施方案中，x是61-80。在一些实施方案中，x是30-50。在一些实施方案中，x是12、24、36或48。
在一些实施方案中，w是1。在一些实施方案中，w是0。
在一些实施方案中，Ra或Rb具有以下结构:
在一些实施方案中，Ra或Rb是:
其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50。
在一些实施方案中，Ra或Rb是:
其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50，x是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50以及z是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50。
在一些实施方案中，Ra或Rb是:
其中x是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50以及z是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50。
在一些实施方案中，Ra或Rb是:
其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50，x是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50以及z是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50，x是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50以及x是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50。
本发明提供了用于制备具有以下结构的化合物的方法:
其中A是化合物的生物活性结构；
其中Z是化合物的蛋白成分，该蛋白成分包括一个或多个多肽，其中该一个或多个多肽中的至少一个包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体和(iii)在它们的N末端具有半胱氨酸或硒代半胱氨酸；
其中B是连接A和Z的化学结构；
其中B和Z之间的虚线表示肽连接；以及
其中A和B之间的实线表示非肽连接。
它包括以下步骤：
a)获得A’，它包括A或A的衍生物和第一末端反应基团；
b)获得B’，它包括B或B的衍生物、第二末端反应基团和第三末端反应基团，其中该第二末端反应基团能够与该第一末端反应基团反应以形成非肽连接；
c)获得Z’，它包括Z或Z的衍生物和第四末端反应基团，其中该第四末端反应基团能够与该第三末端反应基团反应以形成肽连接；以及
d)以任何顺序反应A’、B’和Z’以制得化合物。
在一些实施方案中，半胱氨酸或硒代半胱氨酸天然地发生在该连续氨基酸段中。在一些实施方案中，半胱氨酸或硒代半胱氨酸不是天然地发生在该连续氨基酸段中。
在一些实施方案中，该段连续氨基酸在它们的N末端具有选自由以下组成的群组的序列：半胱氨酸、硒代半胱氨酸、CP、CPXCP(其中X＝P、R或S)，CDKTHTCPPCP、CVECPPCP、CCVECPPCP和CDTPPPCPRCP。
在一些实施方案中，抗体的Fc区域是抗体的天然发生的Fc区域。
在一些实施方案中，该抗体的Fc区域是抗体的变体Fc区域。
在一些实施方案中，该抗体的变体Fc区域是抗体的突变的Fc区域。
在一些实施方案中，该突变的Fc区域是取代突变体。
在一些实施方案中，该取代突变体在N末端、C末端或除了N末端、C末端的Fc区域之外的位置的氨基酸取代。
在一些实施方案中，该取代突变体在它的连续氨基酸段中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-15、15-20、10-20或20-50个氨基酸取代。
在一些实施方案中，该取代是连续氨基酸取代。
在一些实施方案中，该突变突变的Fc区域是氨基酸增加突变体。
在一些实施方案中，该氨基酸增加突变体在它的连续氨基酸段中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-15、15-20、10-20或20-50个增加的氨基酸。
在一些实施方案中，该突变的Fc区域是氨基酸缺失突变体。
在一些实施方案中，该氨基酸缺失突变体在它的连续氨基酸段中具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、10-15、15-20、10-20或20-50个缺失的氨基酸。
在一些实施方案中，该连续氨基酸与抗体的Fc区域的链中存在的至少0、20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180或190个连续氨基酸的段相同。
在一些实施方案中，该连续氨基酸与Fc区域的铰链区、CH2区或CH3区中的氨基酸段或其一部分相同。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
其中
其中R5是烷基或芳基
其中R1是H或是额外结构(该额外结构是环状结构)的一部分，其中额外环状结构包括R1或R1的一部分，并且还可包括R2或R2的一部分和R2和烯烃双键之间的碳；
条件是如果那么R3是H；如果 那么是包括的三唑环，以及如果那么是包括的N-烷基或芳基取代的异恶唑啉环；以及
其中R2表示连接至A或B中一者的有机结构，R4表示连接至A或B中另一者的有机结构；
它包括以下步骤：
a)获得A’，它包括A或A的衍生物和第一末端反应基团；
b)获得B’，它包括B或B的衍生物、第二末端反应基团和第三末端反应基团，其中该第二末端反应基团能够与该第一末端反应基团反应以形成非肽连接；
c)获得C’，它包括C或C的衍生物和第四末端反应基团，其中该第四末端反应基团能够与该第三末端反应基团反应以形成肽连接；以及
d)以任何顺序反应A’、B’和C’以制得化合物。
在一些实施方案中，步骤d)通过首先将A’和B’反应以制备其中B”包括B和第三末端反应基团，B”和A之间的实线表示非肽连接；然后将与C’反应以制得化合物被执行。
在一些实施方案中，步骤d)通过首先将C’和B’反应以制备其中B”包括B和第二末端反应基团，B”和C之间的虚线表示肽连接；然后将与A’反应以制得化合物被执行。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是叠氮、硫醇、硝酮或炔烃。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是炔烃。
在一些实施方案中，该炔烃是环炔烃。
在一些实施方案中，该炔烃是八元环。
在一些实施方案中，该炔烃是氮杂环辛炔(azacyclooctyne)。
在一些实施方案中，该环炔烃是双芳基氮杂环辛炔(biarylazacyclooctyne)。
在一些实施方案中，该环炔烃是环辛炔。
在一些实施方案中，该炔烃是末端炔烃。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是叠氮、硫醇或硝酮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是叠氮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是硫醇。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是硝酮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是N-烷基硝酮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是N-芳基硝酮。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是叠氮、硫醇、硝酮或炔烃。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是炔烃。
在一些实施方案中，该炔烃是环炔烃。
在一些实施方案中，该炔烃是八元环。
在一些实施方案中，该炔烃是氮杂环辛炔。
在一些实施方案中，该环炔烃是双芳基氮杂环辛炔。
在一些实施方案中，该环炔烃是环辛炔。
在一些实施方案中，该炔烃是末端炔烃。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是叠氮、硫醇或硝酮。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是叠氮。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是硫醇。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是硝酮。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是N-烷基硝酮。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是N-芳基硝酮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是末端炔烃以及该第二末端反应基团是叠氮、硫醇或硝酮。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是叠氮。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是硫醇。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是硝酮。
在一些实施方案中，该硝酮是N-烷基或N-芳基硝酮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是叠氮、硫醇或硝酮以及该第二末端反应基团是末端炔烃。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是叠氮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是硫醇。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是硝酮。
在一些实施方案中，该硝酮是N-烷基或N-芳基硝酮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是环炔烃以及该第二末端反应基团是叠氮、硫醇或硝酮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是叠氮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是硫醇。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是硝酮。
在一些实施方案中，该硝酮是N-烷基或N-芳基硝酮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是叠氮、硫醇或硝酮以及该第二末端反应基团是环炔烃。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是叠氮。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是硫醇。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是硝酮。
在一些实施方案中，该硝酮是N-烷基或N-芳基硝酮。
在一些实施方案中，该环炔烃是八元环。
在一些实施方案中，该环炔烃是氮杂环辛炔。
在一些实施方案中，该环炔烃是双芳基氮杂环辛炔。
在一些实施方案中，该环炔烃是环辛炔。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是叠氮以及该第二末端反应基团是末端炔烃；或该第一末端反应基团是叠氮以及该第二末端反应基团是环炔烃；或该第一末端反应基团是硫醇以及该第二末端反应基团是环炔烃；或该第一末端反应基团是N-烷基硝酮或N-芳基硝酮以及该第二末端反应基团是环辛炔。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是叠氮以及该第一末端反应基团是末端炔烃；或该第二末端反应基团是叠氮以及该第一末端反应基团是环炔烃；或该第二末端反应基团是硫醇以及该第一末端反应基团是环炔烃；或该第二末端反应基团是N-烷基硝酮或N-芳基硝酮以及该第一末端反应基团是环辛炔。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团和该第二末端反应基团反应以制得三唑、硫醇烯(thiolene)、N-烷基异恶唑啉或N-芳基异恶唑啉。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团和该第二末端反应基团反应以制得三唑。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团和该第二末端反应基团反应以制得硫醇烯(thiolene)。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团和该第二末端反应基团反应以制得N-烷基异恶唑啉或N-芳基异恶唑啉。
在一些实施方案中，该第一反应基团与第二反应基团反应在小于3、6、12、18、24、30、36、42、48或72小时内导致至少80％、85％或90％的反应收率。
在一些实施方案中，A和B之间的实线表示包括以下结构的非肽连接:
其中Xa是包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构；以及
其中Ra表示连接至A或B中一者的有机结构以及Rb表示连接至A或B中另一者的有机结构。
在一些实施方案中，该第一末端反应基团是反式环辛烯或四嗪。
在一些实施方案中,该第一末端反应基团是反式环辛烯。
在一些实施方案中,该炔烃是四嗪。
在一些实施方案中,该第二末端反应基团是反式环辛烯或四嗪。
在一些实施方案中,该第二末端反应基团是反式环辛烯。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团具有以下结构：
在一些实施方案中，该第二末端反应基团具有以下结构:
在一些实施方案中，该第二末端反应基团是四嗪。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团具有以下结构:
其中Rc是H、烷基或芳基。
在一些实施方案中，该第二末端反应基团具有以下结构:
在一些实施方案中，该第一末端反应基因是反式环辛烯以及该第二末端反应基因是四嗪。
在一些实施方案中，该第一末端反应基因是四嗪以及该第二末端反应基因是反式环辛烯。
在一些实施方案中，该第一末端反应基因和该第二末端反应基因反应以制得包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构。
在一些实施方案中，该第一末端反应基因和该第二末端反应基因反应以制得以下化学结构:
其中Rc是H、烷基或芳基或其互变异构体；
在一些实施方案中，该第三反应基团和该第四末端反应基团各自独立地是氨基酸或氨基酸衍生物。
在一些实施方案中，该第三反应基团是苏氨酸或苏氨酸衍生物。
在一些实施方案中，该第三反应基团是氨基酸的硫酯衍生物。
在一些实施方案中，该第四反应基团是半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同硒代半胱氨酸(homoselenosysteine)，或半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同硒代半胱氨酸的衍生物。
在一些实施方案中，该第四反应基团是半胱氨酸或半胱氨酸的衍生物。
在一些实施方案中，该第四反应基团是半胱氨酸。
在一些实施方案中，通过以下步骤制备A’：
i)获得包括A或A的衍生物的A”和包括内含肽的连续氨基酸段；
ii)获得取代的半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同型硒代半胱氨酸残基，或半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同型硒代半胱氨酸残基的取代的衍生物，其中该半胱氨酸残基在C末端由包含炔烃、叠氮、硫醇或硝酮的有机结构取代；以及
iii)A”与取代的半胱氨酸残基反应以制得A’。
在一些实施方案中，该含有炔烃的有机结构是N-炔丙胺。
在一些实施方案中，通过以下步骤制备A’：
i)获得包括A或A的衍生物并且包括至少一个自由硫醇基的A”；
ii)获得包括第一末端反应基团和末端马来酰亚胺的化合物；以及
iii)A”与步骤ii)的化合物反应以制得A’。
在一些实施方案中，通过以下步骤制备A”：
a)获得A”’，其中A”’是包括A或A的衍生物并且包括至少一个二硫键的多肽；以及
b)用巯基乙胺(mercaptoethylamine)(MEA)处理A”’以制得A”。.
在一些实施方案中，通过以下步骤制备A”’：
a)获得包括A或A的衍生物并且包括至少一个二硫键的单克隆抗体；以及
b)用IdeS处理步骤a)的多肽以制得A”’。.
在一些实施方案中，该单克隆抗体结合TNFα。
在一些实施方案中，该单克隆抗体是阿达木单抗。
在一些实施方案中，如果R1是氢以及该第一末端反应基团是炔烃，那么在步骤d)中B’在金属催化剂存在下反应。
在一些实施方案中，如果R1是氢以及该第二末端反应基团是炔烃，那么在步骤d)中B’在金属催化剂的存在下反应。
在一些实施方案中，该金属催化剂是Ag(I)或Cu(I)。
在一些实施方案中，A’包括一个或多个支链残基，其中每个支链残基包括额外的第一末端反应基团。
在一些实施方案中，B’包括一个或多个支链残基，其中每个支链残基包括额外的第二末端反应基团。
在一些实施方案中，B’包括一个或多个支链残基，其中每个支链残基包括额外的第三末端反应基团。
在一些实施方案中，该支链残基是氨基酸残基。
在一些实施方案中，该氨基酸残基是赖氨酸或赖氨酸衍生物、精氨酸或精氨酸衍生物、天冬氨酸或天冬氨酸衍生物、谷氨酸或谷氨酸衍生物、天冬酰胺或天冬酰胺衍生物、谷氨酰胺或谷氨酰胺衍生物、酪氨酸或酪氨酸衍生物、半胱氨酸或半胱氨酸衍生物或鸟氨酸或鸟氨酸衍生物。
在一些实施方案中，该氨基酸残基在N位置由含有末端氨基或羰基反应基团的残基取代。
在一些实施方案中，该支链残基是包含两个或以上末端氨基或两个或以上末端羰基的有机残基。
在一些实施方案中，该有机残基是亚氨基二丙酸、亚氨基二乙酸、4-氨基-庚二酸(4-amino-pimelic acid)、4-氨基-庚二酸(4-amino-heptanedioic acid)、3-氨基己二酸、3-氨基脂肪酸、2-氨基辛二酸或2-氨基-6-羰基-庚二酸。
在一些实施方案中，在不存在非硫醇还原剂的条件下执行该方法。
在一些实施方案中，在不存在硫醇还原剂的条件下执行该方法。
在一些实施方案中，在存在硫醇还原剂的条件下执行该方法。
在一些实施方案中，以80％或更高的总收率执行该方法。
在一些实施方案中，以90％或更高的总收率执行该方法。
在一些实施方案中，该第一反应基团与该第二反应基团反应在少于1、2、3、4、5、6、7、8、9、10或60分钟内导致至少50％、55％、60％、65％、70％、80％、85％或90％的反应收率。
在一些实施方案中，B是有机酸残基。
在一些实施方案中，B是1-50个氨基酸残基，和任选地有机酸残基的段。
在一些实施方案中，B是1-10个氨基酸残基的段。
在一些实施方案中，B包括以下序列的连续氨基酸的段，或其一部分：EPKSCDKTHTCPPCP、ERKCCVECPPCP、ELKTPLGDTTHTCPRCP(EPKSCDTPPPCPRCP)3、ESKYGPPCPSCP。
在一些实施方案中，B在它的C末端具有苏氨酸。
在一些实施方案中，Z包括一个C，其中C是第一多肽，该第一多肽包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体；以及(iii)在它们的N末端具有选自由以下组成的群组的序列：半胱氨酸、硒代半胱氨酸、CP、CPXCP(其中X＝P、R或S)、CDKTHTCPPCP、CVECPPCP、CCVECPPCP和CDTPPPCPRCP。
在一些实施方案中，C包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体；以及(iii)在它们的N末端具有包括选自由以下组成的群组的天然发生的半胱氨酸的序列：CP、CPXCP(其中X＝P、R或S)、CDKTHTCPPCP、CVECPPCP、CCVECPPCP和CDTPPPCPRCP。
在一些实施方案中，C是化合物的多肽成分，该多肽成分包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体；以及(iii)在它们的N末端具有包括非天然发生的半胱氨酸或硒代半胱氨酸的序列。
在一些实施方案中，C包括连续氨基酸，该连续氨基酸与选自由IgG、IgM、IgA、IgD和IgE组成的群组的抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，C包括连续氨基酸，该连续氨基酸与抗体的Fc6区域的链中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，C进一步包括连续氨基酸，该连续氨基酸与除了抗体的Fc区域的链之外的抗体的链中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，C包括连续氨基酸，该连续氨基酸与抗体的Fab或Fab’的重链中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，C包括连续氨基酸，该连续氨基酸与抗体的Fab或Fab’的轻链中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，Z进一步包括第二多肽，该第二多肽包括连续氨基酸，该连续氨基酸与除了抗体的Fc区域的链之外的抗体的链中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，该第二多肽包括连续氨基酸，该连续氨基酸与抗体的Fab或Fab’的重链中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，该第二多肽包括连续氨基酸，该连续氨基酸与抗体的Fab或Fab’的轻链中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，Z包括抗体或其一部分。
在一些实施方案中，Z包括抗体的至少一个Fab或Fab’或该至少一个Fab或Fab’的一部分。
在一些实施方案中，Z包括至少2、3、4、5、6、7、8、9或10份(copies)的该Fab或Fab’或其一部分。
在一些实施方案中，Z包括抗体的Fab-1或Fab’1或其一部分。
在一些实施方案中，Z包括抗体的Fab-2或Fab’2或其一部分。
在一些实施方案中，Z包括抗体的两个Fab或Fab’手。
在一些实施方案中，抗体是IgG、IgM、IgA、IgD或IgE抗体。
在一些实施方案中，该Fab或Fab’存在于阿达木单抗中。
在一些实施方案中，Z包括至少一个连续氨基酸段，该连续氨基酸段与单链抗体中存在的连续氨基酸段相同。
在一些实施方案中，C的C末端包括在已经被修饰的抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段。
在一些实施方案中，C的C末端是半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同型硒代半胱氨酸或半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同型硒代半胱氨酸的衍生物。
在一些实施方案中，B通过Z的多肽的N末端半胱氨酸或硒代半胱氨酸和B的氨基酸残基或有机酸残基之间的肽连接被连接到Z。
在一些实施方案中，Z包括第二多肽以及B通过Z的第二多肽的N末端半胱氨酸或硒代半胱氨酸和B的氨基酸残基或有机酸残基之间的肽连接被连接到Z。
在一些实施方案中，B通过C的N末端半胱氨酸或硒代半胱氨酸和B的氨基酸残基或有机酸残基之间的肽连接被连接到C。
在一些实施方案中，Z包括一个多肽，该多肽是C。
在一些实施方案中，Z包括两个多肽，该多肽是C和第二多肽。
本发明提供了包括本发明的化合物的同源二聚物和异二聚物。
在一些实施方案中，该二聚物的每个化合物能够通过至少一个二硫键连接到另一个化合物。
在一些实施方案中，该二聚物的每个化合物能够通过至少一个每个化合物的C或第二多肽之间的二硫键连接到另一个化合物。
在一些实施方案中，该二聚物的每个化合物通过至少一个二硫键连接到另一个化合物。
在一些实施方案中，该二聚物的每个化合物通过至少一个每个化合物的C和第二多肽之间的二硫键被连接到另一个化合物。
在一些实施方案中，该二聚物的每个化合物非共价地被连接到另一个化合物。
在一些实施方案中，该二聚物是:
附图显示了本发明的化合物的二聚物的额外的非限制性实施例。
在一些实施方案中，该支链残基是赖氨酸或赖氨酸衍生物、精氨酸或精氨酸衍生物、天冬氨酸或天冬氨酸衍生物、谷氨酸或谷氨酸衍生物、天冬酰胺或天冬酰胺衍生物、谷氨酰胺或谷氨酰胺衍生物、酪氨酸或酪氨酸衍生物、半胱氨酸或半胱氨酸衍生物或鸟氨酸或鸟氨酸衍生物。
在一些实施方案中，该支链残基是在N位置由含有末端氨基或羰基反应基的残基取代的氨基酸。在一些实施方案中，该支链残基是包含两个或以上末端氨基或两个或以上末端羰基的有机残基。
在一些实施方案中，该支链残基是包含两个或以上末端氨基的有机残基。在一些实施方案中，该支链残基是包含两个或以上末端羰基的有机残基。在一些实施方案中，该支链残基是二氨基丙酸。在一些实施方案中，该支链残基是二氨基丙羰基化合物(diaminopropionic carbonyl compound)。
在一些实施方案中，该支链残基是4-(羰基甲氧基)苯基丙氨酸(4-(carbonylmethoxy)phenylalanine)、2-氨基-6-(羰基甲基氨基)己酸(2-amino-6-(carbonylmethylamino)hexanoic acid)、S-(羰基丙基)半胱氨酸、S-(羰基乙基)半胱氨酸、S-(羰基甲基)半胱氨酸、N-(羰基乙基)甘氨酸、N-(羰基甲基)甘氨酸、亚氨基二丙酸、亚氨基二乙酸、4-氨基-庚二酸(4-amino-pimelic acid)、4-氨基-庚二酸(4-amino-heptanedioic acid)、3-氨基己二酸、3-氨基己二酸(3-aminoadipic acid)、2-氨基辛二酸或2-氨基-6-羰基-庚二酸。
在一些实施方案中，该支链残基由以下制备：Fmoc-L-Asp-AMC、Fmoc-L-Asp-pNA、Fmoc-L-Glu-AMC、Fmoc-L-Glu-pNA、Fmoc-L-Glu(Edans)-OH、Fmoc-L-Glu(PEG-生物素基)-OH、(S)-Fmoc-2-氨基-己二酸-6-叔丁基酯、(S)-Fmoc-2-氨基-己二酸-6-叔丁基酯、(S)-Fmoc-Aad(OtBu)-OH、(S)-Fmoc-2-氨基-5-叔丁氧羰基-己二酸-6-叔丁基酯((S)-Fmoc-2-amino-5-tert-butoxycarbonyl-hexanedioic acid-6-tert-butyl ester)、(S)-Fmoc-2-氨基-庚二酸-7-叔丁基酯、(S)-Fmoc-2-氨基-庚二酸-7-叔丁基酯、(S)-Fmoc-2-氨基-6-叔丁氧羰基-庚二酸-7-叔丁基酯((S)-Fmoc-2-amino-6-tert-butoxycarbonyl-heptanedioic acid-7-tert-butyl ester)、(S)-Fmoc-2-氨基-辛二酸-8-叔丁基酯、(S)-Fmoc-2-氨基-辛二酸-8-叔丁基酯、(S)-Fmoc-Asu(OtBu)-OH、(R)-Fmoc-3-氨基-己二酸-1-叔丁基酯、(R)-Fmoc-3-氨基-己二酸-1-叔丁基酯、(R)-Fmoc-4-氨基-庚二酸-1-叔丁基酯、(R)-Fmoc-4-氨基-庚二酸-1-叔丁基酯、Boc-亚氨基二乙酸、Fmoc-亚氨基二乙酸、Boc-亚氨基二丙酸、Fmoc-亚氨基二丙酸、Fmoc-N-(叔丁氧羰基甲基)-甘氨酸(Fmoc-N-(tert-butoxycarbonylmethyl)-glycine)、Fmoc-N-(叔丁氧羰基已基)-甘氨酸,Fmoc-L-Cys(叔丁氧羰基甲基)-OH(R)-Fmoc-2-氨基-3-(叔丁氧羰基甲基磺酰基)-丙酸(Fmoc-L-Cys(tert-butoxycarbonylmethyl)-OH(R)-Fmoc-2-amino-3-(tert-butoxycarbonyl methylsulfanyl)-propionic acid)、Fmoc-L-Cys(叔丁氧羰基甲基)-OH(R)-Fmoc-2-氨基-3-(3-叔丁氧羰基丙基磺酰基)-丙酸、Fmoc-L-Cys(叔丁氧羰基乙基)-OH(R)-Fmoc-2-氨基-3-(2-叔丁氧羰基已基磺酰基)-丙酸、Fmoc-4-(叔丁氧羰基甲氧基)-L-苯基丙氨酸(Fmoc-4-(tert-butoxycarbonylmethoxy)-L-phenylalanine)或(S)-Fmoc-2-氨基-6-(Boc-叔丁氧羰基甲基氨基)-己酸((S)-Fmoc-2-amino-6-(Boc-tert-butoxycarbonylmethylamino)-hexanoic acid)。
在一些实施方案中，该支链残基由以下制备：N-α-Boc-DL-二氨基丙酸、N-α-Boc-D-二氨基丙酸、N-α-Boc-L-二氨基丙酸、N-α-Fmoc-L-二氨基丙酸、N-α-Boc-N-β-Alloc-D-二氨基丙酸、N-α-Boc-N-β-Alloc-L-二氨基丙酸、N-α-Fmoc-N-β-alloc-L-二氨基丙酸、N-α-N-β-Bis-Boc-L-二氨基丙酸、N-α-Fmoc-N-β-Boc-D-二氨基丙酸、N-α-Fmoc-N-β-Boc-L-二氨基丙酸、N-α-Z-N-β-Boc-L-二氨基丙酸、N-α-Boc-N-β-Fmoc-D-二氨基丙酸、N-α-Boc-N-β-Fmoc-L-二氨基丙酸、N-α-N-β-Bis-Fmoc-L-二氨基丙酸、N-α-Z-N-β-Fmoc-L-二氨基丙酸、N-α-Boc-N-β-Z-L-二氨基丙酸、N-α-Fmoc-N-β-Z-L-二氨基丙酸、N-α-Fmoc-N-β-(Boc-氨氧乙酰基)-L-二氨基丙酸(N-α-Fmoc-N-β-(Boc-aminooxyacetyl)-L-diaminopropionicacid)、N-α-Boc-N-γ-Fmoc-D-二氨基丁酸、N-α-Boc-N-γ-Fmoc-L-二氨基丁酸、N-α-Boc-N-γ-Fmoc-L-二氨基丁酸、N-α-Fmoc-N-γ-Boc-D-二氨基丁酸、N-α-Fmoc-N-γ-Boc-L-二氨基丁酸、N-α-Fmoc-N-γ-Alloc-L-二氨基丁酸、(S)-N-b-Fmoc-N-γ-Boc-3,4-二氨基丁酸、H-L-鸟氨酸、N-a-Boc-N-δ-Alloc-L-鸟氨酸、N-a-Fmoc-N-δ-Alloc-L-鸟氨酸、N-a-Fmoc-N-δ-Boc-L-鸟氨酸、(S)-Boc-2-氨基-5-叠氮基-戊酸.DCHA、(S)-Fmoc-2-氨基-5-叠氮基-戊酸、N-a-N-δ-bis-Boc-N-a-N-δ-bis(3-Boc-氨丙基)-L-鸟氨酸、N-α-Boc-N-β-N-δ-N-δ-tris(3-Boc-氨丙基)-L-鸟氨酸、Fmoc-L-Lys(生物素)-OH、Fmoc-L-Lys(Dabcyl)-OH、Fmoc-L-Lys(Boc)(Me)-OH、Fmoc-L-Lys(Boc)(iPr)-OH、(2S,5R)-Fmoc-2-氨基-4-(3-Boc-2,2-二甲基-恶唑烷-5-yl)-丁酸((2S,5R)-Fmoc-2-amino-4-(3-Boc-2,2-dimethyl-oxazolidin-5-yl)-butyric acid)、(S)-Fmoc-2-氨基-6-(Boc-叔丁氧羰基甲基-氨基)-己酸((S)-Fmoc-2-amino-6-(Boc-tert-butoxycarbonylmethyl-amino)-hexanoic acid)、(S)-Fmoc-2-氨基-7-(Boc-氨基)-庚酸、Fmoc-L-Arg(Me)(Pbf)-OH、Fmoc-L-Arg(Me)2(Pbf)-OH、Fmoc-L-Arg(Me)2-OH、(S)-Fmoc-3-氨基-5-[(N’-Pbf-吡咯烷-1-羰基亚胺酰基)-氨基]-戊酸((S)-Fmoc-3-amino-5-[(N’-Pbf-pyrrolidine-1-carboximidoyl)-amino]-pentanoic acid)、Fmoc-L-Homoarg(Et)2-OH、Boc-3-氨基-5-(Fmoc-氨基)-苯甲酸、3,5-bis[2-(Boc-氨基)乙氧基]-苯甲酸、Fmoc-4-[2-(Boc-氨基)乙氧基]-L-苯基丙氨酸、N,N-bis(N’-Fmoc-3-氨丙基)-甘氨酸半硫酸钾、N,N-bis(N’-Fmoc-3-氨丙基)-甘氨酸半硫酸钾(N,N-bis(N’-Fmoc-3-aminopropyl)-glycine potassium hemisulfate)、Fmoc-N-(2-Boc-氨乙基)-甘氨酸、Fmoc-N-(3-Boc-氨丙基)-甘氨酸、Fmoc-N-(4-Boc-氨丁基)-甘氨酸(Fmoc-N-(4-Boc-aminobutyl)-glycine)、(R,S)-N-α-Fmoc-N-a’-Boc-二氨基乙酸、N,N’-bis-Fmoc-二氨基乙酸、(S)-N-4-Fmoc-N-8-Boc-二氨基辛酸、(R,S)-N-Fmoc-N’-Boc-咪唑啉啶-2-羧酸、Fmoc-p(NH-Boc)-L-Phe-OH、Boc-p(NH-Fmoc)-L-Phe-OH或Boc-p(NH-Z)-L-Phe-OH。
本文公开的每个实施例被认为适用于其它公开的实施例中的每者。因此，本文描述的各种因素的全部组合落入本发明公开的范围内。
应当理解，在提供了参数范围的情况下，落入该范围的所有整数和其十分之一也由本发明提供。例如“0.2-5mg/kg/天”公开了0.2mg/kg/天、0.3mg/kg/天、0.4mg/kg/天、0.5mg/kg/天、0.6mg/kg/天等一直到5.0mg/kg/天。
术语
如本文所采用的，除非另有说明，下述术语中的每者具有如下阐述的定义。
肽连接:结构肽连接可以是肽键。
连续氨基酸段：排列成链的多个氨基酸，除了链中的第一氨基酸可任选地不连接到前一氨基酸外，各氨基酸通过肽键连接到前一氨基酸。所述链的氨基酸可为天然的或非天然发生的，或可包含其混合物。除非另外指出，氨基酸可为基因编码的、天然发生的但不是基因编码的、或非天然发生的，和其任一选择。
N-末端氨基酸残基：具有自由α-氨基(NH2)官能团或α-氨基(NH2)官能团衍生物的两个或多个连续氨基酸的段的末端残基。
N-末端：N-末端氨基酸残基的自由α-氨基(NH2)(或其衍生物)。
C-末端氨基酸残基：具有自由α-羧基(COOH)官能团或α-羧基(COOH)官能团衍生物的两个或多个连续氨基酸的段的末端残基。
C-末端：C-末端氨基酸残基的自由α-羧基(COOH)(或其衍生物)。
本文所采用的“生物活性结构”意思是能够通过在生物背景下(例如在有机体、细胞或其体外模型内)执行功能或行动或刺激或响应功能、行动或反应治疗疾病或状况或定位或靶向本发明的化合物到体内的疾病或状况的部位的分子或其片段的结构。生物活性结构包括至少一种多肽、核酸、小分子比如小有机或无机分子的结构。
除非另有说明或与上下文相反，“键”理解为包括共价键、偶极-偶极相互作用如氢键和分子间作用力如范德华力。
“信号序列”是指引多肽的翻译后转运的短(3-60个氨基酸长度)肽链。
本文中一个实施方案中所用的“氨基酸”是指基因编码氨基酸即异亮氨酸、丙氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、赖氨酸、天冬氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、甘氨酸、缬氨酸、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、组氨酸、酪氨酸、硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸并还包括同型半胱氨酸和同型硒代半胱氨酸的L或D异构体。
氨基酸的其它实例包括牛磺酸、γ-氨基丁酸(gaba)、多巴胺、羊毛硫氨酸、2-氨基异丁酸、脱氢丙氨酸、鸟氨酸和瓜氨酸的L或D异构体，及其非天然同系物和其合成改性形式，包括具有缩短或增长达两个碳原子的亚烷基链的氨基酸、包含任选取代的芳基的氨基酸和包含卤代基团(包括卤代烷基和芳基的)的氨基酸及β或γ氨基酸和环状类似物。
由于可电离氨基和羧基的存在，这些实施方案中的氨基酸可为酸性或碱性盐，或可为中性形式。各氨基酸残基还可经过氧化或还原改性。其它假定改性包括脯氨酸和赖氨酸的羟基化、丝氨酰或苏氨酰残基的羟基的磷酸化和赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-氨基的甲基化。
共价衍生物可通过将特定官能团连接到氨基酸侧链或在N-或C-末端连接来制备。
包含具有R基团取代的氨基酸的化合物属于本发明范围内。理解的是：本领域普通技术人员可选择本发明化合物上的取代基和取代模式以从容易获得的原料制备化学稳定的化合物。
本文中所用的“天然氨基酸”是指基因编码氨基酸即异亮氨酸、丙氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、赖氨酸、天冬氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、甘氨酸、缬氨酸、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、组氨酸、酪氨酸、硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸和同型半胱氨酸和同型硒代半胱氨酸的L或D异构体。
本文中所用的“非天然氨基酸”是指异亮氨酸、丙氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、赖氨酸、天冬氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸、谷氨酰胺、色氨酸、甘氨酸、缬氨酸、脯氨酸、精氨酸、丝氨酸、组氨酸、酪氨酸、硒代半胱氨酸、吡咯赖氨酸、同型半胱氨酸、同型硒代半胱氨酸、牛磺酸、氨基丁酸、多巴胺、羊毛硫氨酸、2-氨基异丁酸、脱氢丙氨酸、鸟氨酸或瓜氨酸的化学改性L或D异构体，包括在α碳和S或Se之间具有C3-C10脂族侧链的半胱氨酸和硒代半胱氨酸衍生物。在一个实施方案中，所述脂族侧链为亚烷基。在另一实施方案中，所述脂族侧链为亚链烯基或亚炔基。
除了本文中描述的连续氨基酸序列段之外，预期可通过将合适核苷酸变化引入编码DNA和/或通过合成所需连续氨基酸序列制备其变体。本领域技术人员会理解：当表达是选定的合成方法(而不是例如化学合成)，如改变糖基化部位的数目或位置或改变膜锚定特征时，氨基酸变化可改变本文中描述的连续氨基酸段的翻译后加工。
本文中描述的序列变化可通过，例如采用例如美国专利5,364,934中列出的任一保守和不保守突变技术和指南进行。变化可为取代、删除或插入一个或多个编码感兴趣的连续氨基酸序列的密码子，这导致与自然序列相比，氨基酸序列发生变化。任选地，变化是通过至少一个氨基酸被一个或多个所述区域中的任意其它氨基酸取代。确定哪一氨基酸残基可插入、取代或删除而没有负面影响所需活性的指南通过将所述序列与同源已知蛋白质分子对比并使高同源性区域中的氨基酸序列变化数目最小来发现。氨基酸取代可是一个氨基酸被具有类似结构和/或化学性能的另一氨基酸取代的结果，如用丝氨酸代替亮氨酸，即保守氨基酸取代。插入或删除可任选在约1-5个氨基酸范围内。允许的变化可通过系统地插入、删除或取代序列中的氨基酸并测试所得变体通过全长度或成熟自然序列展示的活性。理解的是：所有末端变化都在本文中公开的发明内容内进行。
结合配偶体(伴侣)的氨基酸序列变体可根据各种预想目标制备，包括提高结合配偶体对其配体的亲和力、促进结合配偶体的稳定性、纯化和制备、改变其血浆半衰期、提高疗效和减轻结合配偶体治疗使用中副作用的严重性或几率。
本文中还推断了这些序列的氨基酸序列变体，包括插入、取代或删除的变体。这种变体通常可通过编码靶点结合单体的DNA中的核甘糖的定点突变制备，通过这样获得编码变体的DNA并接着在重组细胞培养中表达所述DNA。具有多达约100-150个氨基酸残基的片断也可方便地通过体外合成来制备。这种氨基酸序列变体是预定变体且在自然中找不到。所述变体具有相同量(尽管不是必需的)的非变体形式的定性生物活性(包括靶点结合)。尽管引入氨基酸序列变化的部位是预定的，突变本身不必是预定的。例如，为了使给定部位的突变的性能最优化，在靶点密码子处进行随机或饱和突变(其中插入全部20个可能残基)并筛选表达的变体以获得所需活性的最佳组合。本领域中普通技术人员可进行这种筛选。
氨基酸插入通常在数量级为约1-10个氨基酸残基上；取代通常引入单个残基；删除将在约1-30个残基范围内。删除或插入优选在相邻对中进行，即删除2个残基或插入2个残基。通过以下讨论非常显然的是：将取代、删除、插入或其任一组合引入或组合以达到最终结构。
本发明一方面涉及包含连续氨基酸段的化合物，该连续氨基酸段与本申请说明书、附图、SEQIDNO.或序列表中公开的氨基酸序列具有至少约80％序列一致性，优选至少约81％序列一致性，更优选至少约82％序列一致性，还更优选至少约83％序列一致性，还更优选至少约84％序列一致性，还更优选至少约85％序列一致性，还更优选至少约86％序列一致性，还更优选至少约87％序列一致性，还更优选至少约88％序列一致性，还更优选至少约89％序列一致性，还更优选至少约90％序列一致性，还更优选至少约91％序列一致性，还更优选至少约92％序列一致性，还更优选至少约93％序列一致性，还更优选至少约94％序列一致性，还更优选至少约95％序列一致性，更优选至少约96％序列一致性，还更优选至少约97％序列一致性，还更优选至少约98％序列一致性和还更优选至少约99％序列一致性。
所述％氨基酸序列一致性值容易采用例如WU-BLAST-2计算机程序获得(Altschuletal.,Methods inEnzymology 266:460-480(1996))。
本文中提供天然序列片段。这种片段可在N-末端或C-末端截断，或可缺少内部残基，例如与全长度天然蛋白质相比时。而且，理解的是：任何末端变化在本文中公开发明内容内进行。
某些片段缺少对感兴趣序列的所需生物活性而言不必需的氨基酸残基。
可采用任一常规技术。所需肽片段或连续氨基酸段片段可化学合成。另一方法包括通过酶消化法产生片段，例如通过用已知酶处理蛋白质来在特定氨基酸残基定义的部位剪切蛋白质，或通过合适限制性内切酶消化DNA并分离所需片段。还有另一合适技术包括通过聚合酶链反应(PCR)分离并扩增编码所需多肽/序列片段的DNA片段。PCR中在5'和3'引物处采用定义DNA片段的所需末端的寡聚核苷酸。
具体实施方案中，感兴趣的保守取代显示于表1的“优选取代”标题下。如果这种取代导致生物活性变化，那么引入更多实质性变化，在表1中称为示例性取代，或下面参考氨基酸类别进一步描述的，并筛选产物。
表1
序列的功能或免疫逻辑一致性的实质性改性通过选择在保持以下的效果上明显不同的取代基实现：(a)取代区域内多肽主链结构例如折叠或螺旋构象，(b)靶点部位处分子的电荷或疏水性，或(c)侧链的体积。根据通常侧链性能将天然发生的残基分成以下组：
(1)疏水的:正亮氨酸、met、ala、val、leu、ile；
(2)中性亲水的:cys、ser、thr；
(3)酸性的:asp、glu；
(4)碱性的:asn、gln、his、lys、arg；
(5)影响链取向的残基:gly、pro；
(6)芳族的:trp、tyr、phe.
非保守性取代会必需将这些类之一的成员换成另一类。这种取代的残基也可引入保守取代部位，或更优选引入剩下的(非保留)部位。
变化可采用本领域中已知的方法进行，如寡核苷酸介导的(定点)突变、丙氨酸扫描和PCR突变。可在克隆DNA上进行定点突变(Carter et al.,Nucl.Acids Res.,13:4331(1986)；Zoller et al.,Nucl.Acids Res.,10:6487(1987))、盒式突变(Wells et al.,Gene,34:315(1985)),局限性选择突变(Wells et al.,Philos.Trans.R.Soc.LondonSerA,317:415(1986))或其它已知技术以制备变异DNA。
还可采用扫描氨基酸分析来鉴定相邻序列的一个或多个氨基酸。优选扫描中，氨基酸是较小的中性氨基酸。这种氨基酸包括丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸和半胱氨酸。丙氨酸通常是这组中的优选扫描氨基酸，因为它排除了β-碳原子外的侧链并不大可能改变变体的主链构象(Cunningham and Wells,Science,244:1081-1085(1989))。丙氨酸也通常是优选的，因为它是最常见的氨基酸。此外经常在埋藏和暴露位置发现它(Creighton,TheProteins,(W.H.Freeman&Co.,N.Y.)；Chothia,J.Mol.Biol.,150:1(1976))。如果丙氨酸取代不产生足够量的变体，可采用电子等排氨基酸(isoteric amino acid)。
共价改性：连续氨基酸段可进行共价改性。一类共价改性包括使靶点氨基酸残基与有机衍生剂反应，所述有机衍生剂能与不在-x-x-键中的选定侧链或N-或C-末端残基反应。用双功能剂衍生对于例如交联到用于感兴趣抗体的反序列的纯化方法中水不溶性支撑基体或表面是有用的，反之亦然。通常使用的交联剂包括例如1,1-双(重氮乙酰基)-2-苯乙烷、戊二醛、N-羟基琥珀酰亚胺酯，例如具有4-叠氮水杨酸的酯、同源双功能酰亚胺酯，包括二琥珀酰亚胺基酯如3,3'-二硫代双(琥珀酰亚胺基丙酸酯)、双功能马来酰亚胺如双-N-马来酰亚胺基-1,8-辛烷和甲基-3-((p-叠氮基苯基)二硫代)丙酰亚胺甲酯等试剂。
其它改性包括谷氨酰胺酰基和天冬酰胺酰残基分别脱酰胺成对应的谷氨酰和天冬氨酰残基、脯氨酸和赖氨酸的羟基化、丝氨酰或苏氨酰残基的羟基的磷酸化、赖氨酸、精氨酸和组氨酸侧链的α-氨基的甲基化(T.E.Creighton,Proteins:Structure andMolecular Properties,W.H.Freeman&Co.,San Francisco,pp.79-86(1983))、N-末端胺的乙酰化和任一C-末端羧基的酰胺化。
另一类共价改性包括改变连续氨基酸段的自然糖基化模式。为了本文中的目的，“改变自然糖基化模式”是指删除氨基酸序列中发现的一个或多个碳水化合物部分(通过移走潜在的糖基化部位(位点)或通过化学和/或酶方法删除糖基化)，和/或增加天然序列中不存在的一个或多个糖基化部位。此外，该短语包括天然蛋白质的糖基化的定性变化，包括存在的各种碳水化合物的本质和部分变化。
增加氨基酸序列的糖基化部位可通过改变氨基酸序列实现。这种改变可通过例如加入或用一个或多个丝氨酸或苏氨酸残基取代到天然序列(0个连接的糖基化部位)来进行。氨基酸序列可任选通过如下方式改变：DNA水平的变化，特别是通过使编码预选基点处的氨基酸序列的DNA突变从而产生将翻译成所需氨基酸的密码子。
增加氨基酸序列上碳水化合物部分数目的另一方法是将糖苷化学或酶偶联到多肽上。这种方法已在本领域例如1987年9月11日公开的WO 87/05330和Aplin and Wriston,CRC Crit.Rev.Biochem.,pp.259-306(1981)中描述。
氨基酸序列上存在的碳水化合物部分的除去可通过化学或酶作用地实现，或通过编码作为糖基化靶点的氨基酸残基的密码子的突变取代实现。化学去糖基化技术在本领域中已知并已在例如Hakimuddin,et al.,Arch.Biochem.Biophys.,259:52(1987)和Edge etal.,Anal.Biochem.,118:131(1981)中描述。多肽上碳水化合物部分的酶切可通过采用Thotakura et al.,Meth.Enzymol.,138:350(1987)描述的多种内切糖苷酶和外切糖苷酶实现。
另一类共价改性包括将氨基酸序列以美国专利4,640,835；4,496,689；4,301,144；4,670,417；4,791,192或4,179,337中列出的方式连接到多种非蛋白质聚合物之一，如聚乙二醇(PEG)、聚丙二醇或聚氧化烯上。
术语“取代”、“取代的”和“取代基”是指官能团，其中一个或以上连接本文含有的氢原子的键由连接非氢原子的键取代，条件是维持正常的化合价以及该取代导致稳定的化合物。取代的基团还包括基团，其中连接碳或氢原子的一个或以上的键由包括双键或三键的连接杂原子的一个或以上的键取代。取代基的实例包括卤素(即F、Cl、Br和I)；烷基比如甲基、乙基、正丙基、异丙基(isopropryl)、正丁基、叔丁基和三氟甲基；芳基比如苯基；杂芳基(heteroaryl groups)比如三唑、二氢哒嗪和四唑；羟基；烷氧基比如甲氧基、乙氧基、丙氧基(n-propoxy)和异丙氧基；芳氧基比如苯氧基；芳烷氧基比如苄氧基(苯基甲氧基)(benzyloxy(phenylmethoxy))和对三氟甲基苄氧基(4-三氟甲基苯基甲氧基)(p-trifluoromethylbenzyloxy(4-trifluoromethylphenylmethoxy))；杂芳氧基(heteroaryloxy groups)；磺酰基比如磺酸酯、三氟甲烷磺酰基(trifluoromethanesulfonyl)、甲磺酰基和对甲苯磺酰基；磺硝基(sulfnitro)、亚硝酰基；巯基；磺酰基比如甲基磺酰基(methylsulfanyl),乙基磺酰基和丙基磺酰基；氰基；氨基基团比如氨基、甲胺基、二甲氨基、乙胺基和二乙氨基；和羧基。其中多个取代基部分被公开了或被要求保护了,该取代的化合物可独立地由一个或以上公开的或请求保护的取代基部分逐一地或复数地被取代。通过独立地取代，意味着(两个或以上)取代基可以是相同的或不同的。在本发明的方法中采用的化合物中，通过用可选择的非氢基团取代一个或以上的氢原子烷基、异烷基、单环(monocycle)、双环(bicycle)、芳基、杂环基和杂环可被取代。这些包括但不局限于卤素、羟基、巯基、氨基、羧基、氰基和氨基甲酰基。
应当理解，本发明的方法中采用的化合物上的取代基和取代模式由本领域技术人员选择以提供化学稳定的并且可通过本领域公知的技术从容易获得的原料容易合成的化合物。如果取代基本身是由一个以上基团取代，应当理解只要导致了稳定的结构，这些多个基团可在相同的碳上或不同的碳上。
在选择本发明的方法中采用的化合物的过程中，本领域技术人员认识到遵照众所周知的化学结构连通性的原则，不同的取代基(即R1、R2等)将被选择。
如本文所采用的，“烷基”包括具有规定数目的碳原子的支链和直链饱和脂肪族烃基团并且是未取代的或取代的。因此，“C1–Cn烷基"中的C1-Cn经定义包含在线性或支链排列中具有1、2、....、n-1或n个碳原子的基团。例如，"C1–C6烷基"中的C1–C6经定义包含在线性或支链排列中具有1、2、3、4、5或6个碳原子的基团以及明确地包含甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、戊烷基和己基。除非另有说明，含有1到12个碳原子。烷基是未取代的或用一个或以上的取代基取代，该取代基包括但不局限于卤素、烷氧基、烷硫基(alkylthio)、三氟甲基、二氟甲基、甲氧基和羟基。一实施方案是C1-C12烷基、C2-C12烷基、C3-C12烷基、C4-C12烷基等。一实施方案是C1-C8烷基、C2-C8烷基、C3-C8烷基、C4-C8烷基等。烷基意图包括一价的、二价的、三价的等部分。
如本文所采用的，"C1-C4烷基"包括有支链和直链C1-C4烷基。
如本文所采用的，术语“环烷烃”是指单环或双环环系，其是未取代的或部分未取代的，即具有一个或以上双键。单环环系由含有3到8个碳原子的饱和环状烃基团例证。单环环系的实例包括环丙基,环丁基,环戊基,环戊烯基,环己基,环己烯基,环庚基和环辛基。双环融合环系(Bicyclic fused ring system)由融合至另一环烷基环的环烷基环例证。双环融合环系的实例包括但不局限于十氢化萘、1,2,3,7,8,8a-六氢化奈(1,2,3,7,8,8a-hexahydro-naphthalene)等。因此，C3-C10环烷烃包括3到8个总的碳原子的烷烃的环环(cyclic ring)(例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基等)。环烷烃基团是未取代的或用一个或以上的取代基取代，该取代基包括但不局限于卤素、烷氧基、烷硫基(alkylthio)、三氟甲基、二氟甲基、甲氧基和羟基。环烷烃意图包括是一价、二价、三价等的部分。
如本文所采用的，术语“环烯烃”是指具有一个或以上双键的环烷烃。因此，C5-C10环烯烃包括5到10个总的碳原子的烷烃的环环(例如环戊烯基,环己烯基,环庚烯基,环己二烯基,环辛烯基(cyclooctenyl)或环辛二烯基(cyclooctadienyl)等)。环烯烃意图是一价、二价、三价等的部分。环烯烃意图包括一价、二价、三价等的部分。
如本文所采用的，“烯烃”包括具有一个或以上双键的和规定数目的碳原子的有支链和直链脂肪族烃基团以及是未取代的或取代的。因此，“C2–Cn烯烃"中的C2-Cn经定义包括在线性或支链排列中具有2、3、....、n-1或n个碳原子的基团。例如，"C2–C10烯烃"中的C2–C10经定义包括在线性或支链排列中具有2、3、4、5...10个碳原子的基团以及明确地包括乙烯基、烯丙基、1-丁烯、2-丁烯、异丁烯、1-戊烯、2-戊烯等。烯烃基团(Alkyene group)是未取代的或用一个或以上取代基取代，该取代基包括但不局限于卤素、烷氧基、烷硫基、三氟甲基、二氟甲基、甲氧基和羟基。一实施方案是C2-C3烯烃、C2-C4烯烃、C2-C5烯烃等。烯烃意图包括是一价、二价、三价等的部分。
如本文所采用的，“酰基”是指在第一位置具有酮的烷基。例如“酰基”实施方案可以是乙酰基、丙酰基、丁酰基和戊酰基。作为另一个实例，“酰基”实施方案可以是其中n是1-10。在另一个实施方案中，n是1-4。
因此，“C2-C5酰基”可以是乙酰基,丙酰基,丁酰基或戊酰基。酰基意图包括是一价、二价、三价等的部分。
C2-C5酰氨基是如上述定义的进一步由胺取代的酰基。胺可被连接到酰基的羰基部分从而形成酰胺或胺可被连接到酰基的非羰基部分。例如，氨基在α位置、β位置、γ位置、δ位置等。作为进一步的实例，酰胺基包括α氨乙酰基和乙酰胺基基团。酰胺基包括β氨丙酰。
C2-C5酸基是如上定义的进一步由氧取代的酰基。氧可被连接到酰基的羰基部分从而形成酰胺或氧可被连接到酰基的非羰基部分。例如氧基在α位置、β位置、γ位置、δ位置等。作为进一步的实例，酸基包括α氧乙酰基(alpha-oxyacetyl)和乙酸基团(acetategroup)。酸基包括β氧丙酰(beta-oxypropionyl)。
如本文所采用的，“氨基”包括一级胺、二级胺、三级胺和四级胺。因此，氨基包括–NH-基团、–NH2基团、–NR-基团、–NR2+-基团、–NRH+-基团、–NH2+-基团、–NH3+基团和-NR3+基团，其中R是烷基或芳基。氨基意图包括是一价、二价、三价等的部分。
如本文所采用的，“硫”包括–S-基团和–SH基团。术语硫意图包括是一价、二价、三价等的部分。
如本文所采用的，“氧”包括–O-基团和–OH基团。术语硫意图包括是一价和二价的部分。
如本文所采用的，“琥珀酰”是通过去除一个或两个羟基的来自琥珀酸。一个实施方案是–C(O)-CH2-CH2-C(O)-。琥珀酰意图包括是一价、二价、三价等的部分。
如本文所采用的，“丙二酰”是通过去除一个或两个羟基的来自丙二酸。一个实施方案是–C(O)-CH2-C(O)-。丙二酰意图包括是一价、二价、三价等的部分。
如本文所采用的，“戊二酰”是通过去除一个或两个羟基的来自戊二酸。一该实施方案是–C(O)-CH2-CH2-CH2-C(O)-。戊二酰意图包括是一价、二价、三价等的部分。
如本文所采用的，“已二酰”是通过去除一个或两个羟基的来自已二酸。一个实施方案是–C(O)-CH2-CH2-CH2-CH2-(O)-。已二酰意图包括是一价、二价、三价等的部分。
“聚二醇”是通过从羟基去除两个氢的来自聚二醇。一个实施方案可来自聚乙二醇、聚丙二醇或聚丁烯醇。
一个"聚二醇"实施方案是
其中n是1-10。
如本文所采用的，“芳基”意图是指任何稳定的单环、双环或在每个环中达到10个原子的多环碳环，其中至少一个环是芳香族的以及是未取代的或取代的。此类芳基元素的实例包括但不局限于：苯基,对亚苄基(4-甲基苯基),萘基,四氢化萘基(tetrahydro-naphthyl),茚满基,菲基,蒽基或苊烯(acenaphthyl)。在芳基取代基是双环以及一个环是非芳香性的情况下，应当理解连接是通过芳环。
如本文所采用的，“芳基”意图是指任何稳定的单环、双环或在每个环中达到10个原子的多环碳环，其中至少一个环是芳香族的以及是未取代的或取代的。此类芳基元素的实例包括但不局限于：苯基,对亚苄基(4-甲基苯基),萘基,四氢化萘基,茚满基,菲基,蒽基或苊烯。在芳基取代基是双环以及一个环是非芳香性的情况下，应当理解连接是通过芳环。
如本文采用的，术语“杂芳基”代表稳定的单环、双环或在每个环中达到10个原子的多环碳环(polycyclic ring)，其中至少一个环是芳香族的并且包含选自由O,N和S组成的群组的1到4个杂原子。双环芳香族杂芳基基团包括苯环,吡啶环,嘧啶环或pyridizine环，这些环(a)融合至具有1个氮原子的6元芳香族(不饱和)杂环；(b)融合至具有2个氮原子的5元或6元芳香族(不饱和)杂环；(c)融合至具有1个氮原子和1个氧原子或1个硫原子的5元芳香族(不饱和)杂环；或(d)融合至具有1个选自O、N或S的杂原子的5元芳香族(不饱和)杂环。落入这种定义的范围内的杂芳基基团包括但不局限于:苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并呋吖基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并恶唑基、咔唑基、咔啉基(carbolinyl)、噌啉基(cinnolinyl)、dihydropyridizine、呋喃基、二氢吲哚基、吲哚基、indolazinyl、吲唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、萘基吡啶基、恶二唑基(oxadiazolyl)、氧氮茂基、恶唑啉、异恶唑啉、oxetanyl、吡喃基、吡嗪基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并吡啶基(pyridopyridinyl)、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四唑基、四唑并吡啶基、噻二唑基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮杂啶基(azetidinyl)、吖丙啶基、1,4-二氧六环基(1,4-dioxanyl)、六羟基吖庚因基(hexahydroazepinyl)、二羟基苯并咪唑基、二羟基苯并呋喃基、二羟基苯并噻吩基、二羟基苯并恶唑基(dihydrobenzoxazolyl)、二羟基呋喃基、二羟基咪唑基、二羟基吲哚基、二羟基异恶唑基、二羟基异噻唑基、二羟基恶二唑基(dihydrooxadiazolyl)、二羟基恶唑基(dihydrooxazolyl)、二羟基吡嗪基、二羟基吡唑基、二羟基吡啶基、二羟基嘧啶基、二羟基吡咯基、二羟基喹啉基、二羟基四唑基、二羟基噻二唑基、二羟基噻唑基、二羟基噻吩基、二羟基三唑基、二羟基氮杂啶基(dihydroazetidinyl)、亚甲基二氧苯甲酰基(methylenedioxybenzoyl)、四羟基呋喃基、四羟基噻吩基、吖啶基、咔唑基、噌啉基、喹喔啉基、吡唑基、吲哚基、苯并三唑基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、异恶唑基、异噻唑基、呋喃基、噻吩基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、喹啉基(quinolinyl)、异喹啉基、恶唑基、异恶唑基、吲哚基、吡嗪基、哒嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、四氢喹啉。在杂芳取代基是双环的以及一个环是非芳香性的或没有包含杂原子的情况下，应当理解，连接分别是通过芳香环或通过包含环的杂原子。如果杂芳基包含氮原子，应当理解它的相应的氮氧化物也被这种定义包含了。
术语“苯基”意图是指含有六个碳原子的芳香族六元环和其任何取代的衍生物。
术语“苄基”意图是指直接连接到苯环的亚甲基。苄基是甲基，其中氢是由苯基和其任何取代的衍生物取代。
术语“三唑”意图是指具有包含两个碳原子和3个氮原子的5元环的杂芳基和其任何取代的衍生物。
二氢哒嗪任选地经取代并且包括1,2-二氢哒嗪,1,4-二氢哒嗪,1,6-二氢哒嗪,和4,5-二氢哒嗪,
包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构包括但不局限于包含融合至二氢哒嗪的第3位置和第4位置的环辛烷的化学结构或包含饱和环辛烷[d]哒嗪(cycloocta[d]pyridazine)的化学结构，它们中的任何一者任选地经取代。例如，包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构包括但不局限于包含以下的化学结构：2,4a,5,6,7,8,9,10-八羟基环辛烷[d]哒嗪(2,4a,5,6,7,8,9,10-octahydrocycloocta[d]pyridazine)，4a,5,6,7,8,9,10,10a-八羟基环辛烷[d]哒嗪,2,3,5,6,7,8,9,10-八羟基环辛烷[d]哒嗪,或1,2,5,6,7,8,9,10-八羟基环辛烷[d]哒嗪,它们中的每一个任选地可被取代。
的互变异构体包括但不局限于:
在一些实施方案中，二氢哒嗪经氧化为哒嗪。
在一些实施方案中，二氢哒嗪经还原以导致具有1,4-二羰基化合物的开口的环结构。
本发明的方法中采用的化合物由有机合成中熟知的且对本领域技术人员熟悉的技术制备。然而，这些也许不是合成或获得理想的化合物的唯一手段。
本发明的化合物被转化为前药以优化吸收和生物利用度。前药的形成包括但不局限于自由羟基和羧基的反应以形成酯，自由羟基和磷酰氯的反应，然后水解以形成磷酸盐或自由羟基和氨基酸的反应以形成氨基酸酯，该方法之前由Chandran在WO 2005/046575记载了。根据医学和药物化学领域熟知的原理(比如构效关系的定量、优化生物活性和ADMET(吸收、分布、新陈代谢、分泌和毒性)性质选择取代基和评估生成的类似物。
连接到本文公开的化合物的芳环的不同R基团可通过标准程序(例如AdvancedOrganic Chemistry:Part B:Reaction and Synthesis,Francis Carey and RichardSundberg,(Springer)5th ed.Edition.(2007)中阐述的标准程序，其内容以引用的方式在此被并入)被添加到环。
本发明的化合物可由Vogel’s Textbook of Practical Organic Chemistry,A.I.Vogel,A.R.Tatchell,B.S.Furnis,A.J.Hannaford,P.W.G.Smith,(Prentice Hall)5th Edition(1996),March's Advanced Organic Chemistry:Reactions,Mechanisms,andStructure,Michael B.Smith,Jerry March,(Wiley-Interscience)5th Edition(2007)和其中的引用(其内容在此通过引用的方式并入)记载的技术制备。然而，这些不是合成或获得理想的化合物的唯一的方式。
本领域技术人员直接理解本文提供的取代基和部分(moieties)(例如J,Ra和Rb的部分)的定义意图按照化学化合价的标准规则。例如，当本文提供的结构要求特定的二价取代基或部分(例如部分的直链中的部分)时，本领域技术人员直接理解取代基或部分的定义是二价的从而遵守化学化合价的标准规则。
本领域技术人员直接理解本发明中描述的一些二价部分以多于一种的方式被连接到其它的化学结构，例如描述的结构当被旋转或翻动时可被连接到其它的化学结构。
在本发明的一些实施方案中，化合物包括非蛋白质的聚合物。在一些实施方案中，该非蛋白质的聚合物可以是亲水的合成的聚合物，即实际上原本没有发现的聚合物。然而，实际上存在并且通过重组或体外的方法制备的聚合物是有用的，正如从自然界分离的聚合物。亲水的聚乙烯聚合物落入本发明的范围内，例如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。尤其有用的是聚烯烃醚(polyalkyleneether)比如聚乙二醇,聚丙二醇,聚氧乙烯酯或甲氧基聚乙二醇；聚氧亚烷基(polyoxyalkylene)比如聚氧乙烯,聚氧丙烯和聚氧乙烯和聚氧丙烯(普郎尼克类(Pluronics))的嵌段共聚物；聚甲基丙烯酸酯；卡波姆；支链或无支链的多糖，其包括糖类单体D-甘露醇,D-和L-半乳糖,海藻糖,果糖,D-木糖,L-树胶醛醣,D-葡萄糖醛酸,唾液酸,D-galacturontc acid,D-甘露糖醛酸(例如藻朊酸或藻酸),D-葡萄糖胺,D-半乳糖胺,D-葡萄糖和神经氨酸，该神经氨酸包括同聚多糖和杂多糖(比如乳糖、支链淀粉,淀粉,羟乙基淀粉,直链淀粉,葡聚糖硫酸酯,右旋糖酐,糊精,糖原或酸性粘多糖(例如透明质酸)的多糖亚组；比如聚山梨醇和聚甘露醇的糖醇的聚合物；和肝素或heparon。
盐
本文中公开的化合物的盐属于本发明的范围。本文中所用的“盐”是本发明化合物已通过制备化合物的酸性或碱性盐改性的盐。
Fc区域
本文采用的术语“Fc区域”通常是指包括免疫球蛋白重链的C末端多肽序列的单体或二聚复合物。该Fc区域包括自然或变异的Fc序列。虽然免疫球蛋白重链的Fc区域的边界也许变化，人类IgG重链Fc区域通常被定义为从铰链区的氨基酸残基到Fc序列的羧基末端的段。免疫球蛋白的Fc序列通常包括两个恒定区、CH2区和CH3区以及任选地包括CH4区。人类Fc区域可从任意合适的免疫球蛋白(比如IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4亚型、IgA、IgE、IgD或IgM)获得。
合适的Fc区域通过前体-Fc嵌合多肽的重组DNA表达制备，该多肽包括1)从分泌蛋白或跨膜蛋白获得的信号肽，该分泌蛋白或跨膜蛋白在具有N末端半胱氨酸残基的成熟的多肽的前方剪切，与以下2)相邻，2)具有N末端半胱氨酸残基的Fc区域多肽。
信号肽的合适的实例是音猬(SHH)(GenBank登记号.NM000193),IFNα-2(IFN)(GenBank登记号.NP000596)和胆固醇酯转移酶(CETP)(GenBank登记号.NM000078)。其它合适的实例包括Indian hedgehog(Genbank登记号.NM002181)、desert hedgehog(Genbank登记号.NM021044)、IFNα-1(Genbank登记号.NP076918)、IFNα-4(Genbank登记号.NM021068)、IFNα-5(Genbank登记号.NM002169)、IFNα-6(Genbank登记号.NM021002)、IFNα-7(Genbank登记号.NM021057)、IFNα-8(Genbank登记号.NM002170)、IFNα-10(Genbank登记号.NM002171)、IFNα-13(Genbank登记号.NM006900)、IFNα-14(Genbank登记号.NM002172)、IFNα-16(Genbank登记号.NM002173)、IFNα-17(Genbank登记号.NM021268)和IFNα-21(Genbank登记号.NM002175)。
Fc区域和它们的前体-Fc嵌合多肽的合适的实例被显示在SEQ ID NO:1直到SEQID NO:96中。在导致它们的分泌和剪切信号肽的条件下通过表达细胞中的前体-Fc嵌合多肽获得Fc区域。在原核或真核宿主细胞内表达前体-Fc多肽。优选地，采用编码前体-Fc多肽的表达载体转染哺乳动物宿主细胞。
具有N末端序列CDKTHTCPPCPAPE,CPPCPAPE和CPAPE的人IgG1Fc区域分别被显示在SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:17中，以及编码它们的DNA序列分别被显示在SEQID NO:2、SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:18中。通过采用分别显示在SEQ ID NO:4,SEQ ID NO:6和SEQ ID NO:8中的DNA序列表达显示在SEQ ID NO:3(SHH信号肽),SEQ ID NO:5(IFN信号肽)和SEQ ID NO:7(CETP信号肽)的前体-Fc嵌合多肽获得SEQ ID NO:1的IgG1区域。通过采用分别显示在SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:14和SEQ ID NO:16中的DNA序列表达SEQ ID NO:11(SHH信号肽)、SEQ ID NO:13(IFN信号肽)和SEQ ID NO:15(CETP信号肽)中显示的前体-Fc嵌合多肽获得SEQ ID NO:9的IgG1区域。通过采用分别显示在SEQ ID NO:20,SEQ ID NO:22,和SEQ ID NO:24中的DNA序列表达SEQ ID NO:19(SHH信号肽)、SEQ ID NO:21(IFN信号肽)和SEQ ID NO:23(CETP信号肽)中显示的前体-Fc嵌合多肽获得SEQ ID NO:17的IgG1区域。
具有N末端序列CCVECPPCPAPE,CVECPPCPAPE,CPPCPAPE和CPAPE的人IgG2Fc区域分别被显示在SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:41和SEQ ID NO:49中以及编码它们的DNA序列分别被显示在SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:50中。通过采用分别显示在SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:30和SEQ ID NO:32中的DNA序列表达显示在SEQ ID NO:27(SHH信号肽)、SEQ ID NO:29(IFN信号肽)和SEQ ID NO:31(CETP信号肽)中的前体-Fc嵌合多肽获得SEQ ID NO:25的IgG2区域。通过采用分别显示在SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:38和SEQ ID NO:40中的DNA序列表达显示在SEQ ID NO:35(SHH信号肽)、SEQ IDNO:37(IFN信号肽)和SEQ ID NO:39(CETP信号肽)中的前体-Fc嵌合多肽获得SEQ ID NO:33的IgG2区域。采用分别显示在SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:46和SEQ ID NO:48中的DNA序列，从SEQ ID NO:43(SHH信号肽)、SEQ ID NO:45(IFN信号肽)和SEQ ID NO:47(CETP信号肽)中显示的前体-Fc嵌合多肽获得SEQ ID NO:41的IgG2区域。采用分别显示在SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:54和SEQ ID NO:56中的DNA序列，从SEQ ID NO:51(SHH信号肽)、SEQ ID NO:53(IFN信号肽)和SEQ ID NO:55(CETP信号肽)中显示的前体-Fc嵌合多肽获得SEQ ID NO:49的IgG2区域。
具有N末端序列(CPRCPEPKSDTPPP)3-CPRCPAPE、CPRCPAPE和CPAPE的人IgG3Fc区域分别被显示在SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:65和SEQ ID NO:73中以及编码它们的DNA序列分别被显示在SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:66、SEQ ID NO:42和SEQ ID NO:74中。通过采用分别显示在SEQ ID NO:60、SEQ ID NO:62和SEQ ID NO:64中的DNA序列表达显示在SEQ ID NO:59(SHH信号肽)、SEQ ID NO:61(IFN信号肽)和SEQ ID NO:63(CETP信号肽)中的前体-Fc嵌合多肽获得SEQ ID NO:57的IgG3区域。通过采用分别显示在SEQ ID NO:68,SEQ ID NO:70和SEQ ID NO:72中的D N A序列表达显示在SEQ ID NO:67(SHH信号肽)、SEQ ID NO:69(IFN信号肽)和SEQ ID NO:71(CETP信号肽)中的前体-Fc嵌合多肽获得SEQ ID NO:65的IgG3区域。通过采用分别显示在SEQ ID NO:76、SEQ ID NO:78和SEQ ID NO:80中的DNA序列表达在SEQ ID NO:75(SHH信号肽),SEQ ID NO:77(IFN信号肽)和SEQ ID NO:79(CETP信号肽)中的前体-Fc嵌合多肽获得SEQ ID NO:73的IgG3区域。
具有N末端序列CPSCPAPE和CPAPE的人IgG4Fc区域的序列分别被显示在SEQ IDNO:81和SEQ ID NO:89中以及编码它们的DNA序列分别被显示在SEQ ID NO:82和SEQ IDNO:90中。通过采用分别显示在SEQ ID NO:84、SEQ ID NO:86和SEQ ID NO:88中的DNA序列表达在SEQ ID NO:83(SHH信号肽)、SEQ ID NO:85(IFN信号肽)和SEQ ID NO:87(CETP信号肽)中显示的前体-Fc嵌合多肽获得SEQ ID NO:81的IgG4区域。通过采用分别显示在SEQ IDNO:92、SEQ ID NO:94和SEQ ID NO:96中的DNA序列表达在SEQ ID NO:91(SHH信号肽)、SEQID NO:93(IFN信号肽)和SEQ ID NO:95(CETP信号肽)中显示的前体-Fc嵌合多肽获得SEQID NO:89的IgG4区域。
在它们的重链N末端具有半胱氨酸残基的合适的抗体变体通过前体重链嵌合多肽的重组DNA表达制备，该嵌合多肽包括1)从分泌蛋白或跨膜蛋白获得的信号肽，该蛋白在具有N末端半胱氨酸残基的成熟多肽的前面剪切，与以下2)相邻，2)具有N末端半胱氨酸残基的抗体重链多肽。
在它们的轻链N末端具有半胱氨酸残基的合适的抗体变体通过前体轻链嵌合多肽的重组DNA表达制备，该嵌合多肽包括1)从分泌蛋白或跨膜蛋白获得的信号肽，该蛋白在具有N末端半胱氨酸残基的成熟多肽的前面剪切，与以下2)相邻，2)具有N末端半胱氨酸残基的抗体轻链多肽。
通过在导致它们分泌和剪切信号肽的条件下表达细胞中的前体重和前体轻嵌合多肽获得曲妥株单抗重链和轻链。前体重链和前体轻链多肽可在原核宿主细胞或真核宿主细胞中表达。优选地，用编码前体重链和前体轻链多肽的表达载体转染哺乳动物宿主细胞。
添加到上述抗体重链、前体重链、轻链和前体轻链变体的N末端的蛋白序列在本文被阐明用于重组抗体曲妥株单抗，但通常应用于任何重组抗体。编码曲妥株单抗和其变体的DNA序列可通过共转染它的重链和轻链以及其衍生的变体(如美国专利号5,821,337中记载的(“免疫球蛋白变体”)，其内容通过引用的方式在此并入)的DNA载体在哺乳动物细胞中被构筑和表达。野生型曲妥株单抗轻链和重链的氨基酸序列分别被显示在SEQ ID NO:128和SEQ ID NO:129中。
具有N末端半胱氨酸残基的曲妥株单抗轻链和它们的前体-Fc嵌合多肽的合适实例被显示在SEQ ID NO:130直到SEQ ID NO:165。具有N末端半胱氨酸残基的曲妥株单抗重链和它们的前体-Fc嵌合多肽的合适的实例被显示在SEQ ID NO:166直到SEQ ID NO:201。
具有N末端序列C、CP、CPP、CPR、CPS、CDKT、CDKTHT、CVE和CDTPPP的曲妥株单抗轻链分别被显示在SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:138、SEQ ID NO:142、SEQ IDNO:146、SEQ ID NO:150、SEQ ID NO:154、SEQ ID NO:158和SEQ ID NO:162中。通过表达显示在SEQ ID NO:131(SHH信号肽)、SEQ ID NO:132(IFN信号肽)和SEQ ID NO:133(CETP信号肽)中的前体轻嵌合多肽获得SEQ ID NO:130的轻链。通过表达显示在SEQ ID NO:135(SHH信号肽)、SEQ ID NO:136(IFN信号肽)和SEQ ID NO:137(CETP信号肽)中的前体轻链嵌合多肽获得SEQ ID NO:134轻链。通过表达显示在SEQ ID NO:139(SHH信号肽)、SEQ ID NO:140(IFN信号肽)和SEQ ID NO:141(CETP信号肽)中的前体轻嵌合多肽获得SEQ ID NO:138轻链。通过表达显示在SEQ ID NO:143(SHH信号肽)、SEQ ID NO:144(IFN信号肽)和SEQ IDNO:145(CETP信号肽)中的前体轻嵌合多肽获得SEQ ID NO:142轻链。通过表达显示在SEQID NO:147(SHH信号肽),SEQ ID NO:148(IFN信号肽)和SEQ ID NO:149(CETP信号肽)中的前体轻嵌合多肽获得SEQ ID NO:146轻链。通过表达显示在SEQ ID NO:151(SHH信号肽),SEQ ID NO:152(IFN信号肽)和SEQ ID NO:153(CETP信号肽)中的前体轻嵌合多肽获得SEQID NO:150轻链。通过表达显示在SEQ ID NO:155(SHH信号肽)、SEQ ID NO:156(IFN信号肽)和SEQ ID NO:157(CETP信号肽)中的前体轻嵌合多肽获得SEQ ID NO:154轻链。通过表达显示在SEQ ID NO:159(SHH信号肽)、SEQ ID NO:160(IFN信号肽)和SEQ ID NO:161(CETP信号肽)中的前体轻嵌合多肽获得SEQ ID NO:158轻链。通过表达显示在SEQ ID NO:163(SHH信号肽)、SEQ ID NO:164(IFN信号肽)和SEQ ID NO:165(CETP信号肽)中的前体轻嵌合多肽获得SEQ ID NO:162轻链。
具有N末端序列C、CP、CPP、CPR、CPS、CDKT、CDKTHT、CVE和CDTPPP的曲妥株单抗重链分别被显示在SEQ ID NO:166、SEQ ID NO:170、SEQ ID NO:174、SEQ ID NO:178、SEQ IDNO:182、SEQ ID NO:186、SEQ ID NO:190、SEQ ID NO:194和SEQ ID NO:198中。通过表达显示在SEQ ID NO:167(SHH信号肽)、SEQ ID NO:168(IFN信号肽)和SEQ ID NO:169(CETP信号肽)中的前体重链嵌合多肽获得SEQ ID NO:166重链。通过表达显示在SEQ ID NO:171(SHH信号肽)、SEQ ID NO:172(IFN信号肽)和SEQ ID NO:173(CETP信号肽)中的前体重链嵌合多肽获得SEQ ID NO:170重链。从显示在SEQ ID NO:175(SHH信号肽)、SEQ ID NO:176(IFN信号肽)和SEQ ID NO:177(CETP信号肽)中的前体重链嵌合多肽获得SEQ ID NO:174重链。从显示在SEQ ID NO:179(SHH信号肽)、SEQ ID NO:180(IFN信号肽)和SEQ ID NO:181(CETP信号肽)中的前体重链嵌合多肽获得SEQ ID NO:178重链。通过表达显示在SEQ ID NO:183(SHH信号肽)、SEQ ID NO:184(IFN信号肽)和SEQ ID NO:185(CETP信号肽)中的前体重链嵌合多肽获得SEQ ID NO:182重链。通过表达显示在SEQ ID NO:187(SHH信号肽)、SEQ ID NO:188(IFN信号肽)和SEQ ID NO:189(CETP信号肽)中的前体重链嵌合多肽获得SEQ ID NO:186重链。从SEQ ID NO:191(SHH信号肽)、SEQ ID NO:192(IFN信号肽)和SEQ ID NO:193(CETP信号肽)中显示的前体重链嵌合多肽获得SEQ ID NO:190重链。从SEQ ID NO:195(SHH信号肽)、SEQ ID NO:196(IFN信号肽)和SEQ ID NO:197(CETP信号肽)中显示的前体重链嵌合多肽获得SEQ ID NO:194重链。从SEQ ID NO:199(SHH信号肽)、SEQ ID NO:200(IFN信号肽)和SEQ ID NO:201(CETP信号肽)中显示的前体重链嵌合多肽获得SEQ ID NO:198重链。
合适的宿主细胞包括从美国标准菌库(Rockville,Md.)获得的293个人胚胎细胞(ATCC CRL-1573)和CHO-K1仓鼠卵巢细胞(ATCC CCL-61)。细胞在37℃，95％空气和5％二氧化碳的气氛中生长。293个细胞被保持在具有2mM L-谷氨酰胺和Earle's BSS的最小必需培养基(Eagle)中，该培养基经调整含有1.5g/L碳酸氢钠、0.1mM非必需氨基酸和90％的1.0mM丙酮酸钠；10％的胎牛血清。CHO-K1细胞被保持在具有2mM L-谷氨酰胺的Ham's F12K培养基中，该培养基经调整包含90％的1.5g/L碳酸氢钠；10％的胎牛血清。其它合适的宿主细胞包括CV1猴子肾脏细胞(ATCC CCL-70),COS-7猴子肾脏细胞(ATCC CRL-1651),VERO-76猴子肾脏细胞(ATCC CRL-1587),HELA人宫颈细胞(ATCC CCL-2),W138人肺细胞(ATCC CCL-75),MDCK犬肾脏细胞(ATCC CCL-34),BRL3A鼠肝细胞(ATCC CRL-1442),BHK仓鼠肾脏细胞(ATCCCCL-10),MMT060562老鼠乳腺细胞(ATCC CCL-51)以及人CD8+T淋巴细胞(美国序列号08/258,152中描述的，通过引用的方式其全部内容并入到本文中)。
合适的表达载体的实例是显示在SEQ ID NO:97中的pCDNA3.1(+)和显示在SEQ IDNO:98中的pSA。质粒pSA包含下述DNA序列要素：1)pBluescriptIIKS(+)(核苷酸912-2941/1-619,GenBank登记号.X52327)，2)人巨细胞病毒启动子、增强子和第一外显子剪接供体(核苷酸63-912,GenBank登记号.K03104)，3)人α-珠蛋白第二外显子剪接受体(核苷酸6808-6919,GenBank登记号.J00153)，4)SV40T抗原多腺苷酸化位点(核苷酸2770-2533,Reddy et al.(1978)Science 200,494-502)和5)SV40复制起点(核苷酸5725-5578,Reddyet al.,ibid)。其它适合的表达载体包括质粒pSVeCD4DHFR和pRKCD4(U.S.Patent No.5,336,603)、质粒pIK.1.1(U.S.Patent No.5,359,046)、质粒pVL-2(U.S.Patent No.5,838,464)、质粒pRT43.2F3(如通过引用的方式整体并入到本文中的U.S.Ser.No.08/258,152所描述的)。
人IgG前体-Fc多肽的合适的表达载体可通过连接从SEQ ID NO:98制备的HindIII-PspOM1载体片段，和从SEQ ID NO:4、6、8、12、14、16、20、22、24、28、30、32、36、38、40、44、46、48、52、54、56、60、62、64、68、70、72、76、78、80、84、86、88、92、94和96制备的HindIII-EagI插入片段被构筑。
合适的可选标物记包括Tn5转座子新霉素磷酸转移酶(NEO)基因(Southern andBerg(1982)J.Mol.Appl.Gen.1,327-341)和二氢叶酸还原酶(DHFR)cDNA(Lucas et al.(1996)Nucl.Acids Res.24,1774-1779)。结合NEO基因的合适的表达载体的实例是质粒pSA-NEO，其通过连接采用EcoRI和BgIII消化SEQ ID NO:99而制备的第一DNA片段和采用EcoRI和BgIII消化SEQ ID NO:98而制备的第二DNA片段被构筑。SEQ ID NO:99合并前面有用于翻译的开始的序列(Kozak(1991)J.Biol.Chem,266,19867-19870)的NEO基因(核苷酸1551到2345,Genbank登记号.U00004)。另一个结合NEO基因和DHFR cDNA的合适的表达载体的实例是质粒pSVe-NEO-DHFR，其通过连接采用EcoRI和BgIII消化SEQ ID NO:99而制备的第一DNA片段，和采用EcoRI和BgIII消化pSVeCD4DHFR而制备的第二DNA片段被构筑。质粒pSVe-NEO-DHFR采用SV40早期启动子/增强子来驱动NEO基因和DHFR cDNA的表达。其它合适的可选标记包括XPGT基因(Mulligan and Berg(1980)Science 209,1422-1427)和潮霉素抗性基因(Sugden et al.(1985)Mol.Cell.Biol.5,410-413)。
在一实施方案中，细胞被如Graham et al.(1977)J.Gen.Virol.36,59-74所述磷酸钙方法转染。DNA混合物(10ug)溶解于0.5ml的1mM Tris-HCl、0.1mM EDTA和 227mMCaCl2的混合溶液中。所述DNA混合物包括(比例为10:1:1)表达载体DNA、可选标记物DNA和编码所述VA RNA基因的DNA(Thimmappaya et al.(1982)Cell 31,543-551)。向所述混合物中逐滴加入0.5ml的50mM Hepes(pH 7.35)、280mM NaCl和1.5mM NaPO4。所述DNA沉淀物在25℃形成10分钟，然后悬浮，并加到生长细胞以在100mm塑料的组织培养皿会合上。在37℃4小时后，抽吸所述培养基，在0.5分钟加入2ml的20％甘油PBS溶液。然后用无血清培养基冲洗细胞，加入新鲜培养基，细胞孵化5天。
在另一实施方案中，细胞被Somparyrac et al.(1981)Proc.Nat.Acad.Sci.12,7575-7579所述的硫酸葡聚糖方法短暂地转染。细胞在旋转烧瓶中生长到最大密度，离心浓缩，用PBS冲洗。所述DNA-葡聚糖沉淀物在细胞团块孵化。在37℃4小时后，抽吸所述DEAE-葡聚糖，在1.5分钟加入20％甘油PBS溶液。然后用无血清培养基冲洗细胞，再放入包含有具有5微克/ml牛胰岛素和0.1微克/ml牛转移的新鲜培养基的旋转烧瓶中，所述细胞孵化4天。
在通过任一方法转染后，条件培养基被离心和过滤以除去宿主细胞和碎屑。然后包含有Fc区域的样品被浓缩，用任选的方法(例如透析和/或柱层析(参见下文))进行纯化。为了鉴别细胞培养上清中的Fc区域，培养基在转染之后24到96小时被移除，浓缩，并且通过存在或缺乏还原剂(例如二硫苏糖醇)下的SDS-聚丙酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析。
对于未扩增的表达，采用高效方法(Gorman et al.,DNA Prot.Eng.Tech.2:3 10(1990))，质粒被转染入人293细胞(Graham et al.,J.Gen.Virol.36:59 74(1977))。将培养基换成无血清的培养基，并每日采集直到5天。对于未扩增的表达，采用高效方法(Gormanet al.,DNA Prot.Eng.Tech.2:3 10(1990))，质粒被转染入人293细胞(Graham et al.,J.Gen.Virol.36:59 74(1977))。将培养基换成无血清的培养基，并每日采集直到5天。Fc区域采用HiTrap蛋白A HP(Pharmacia)从细胞培养上清中纯化。采用Centricon-30(Amicon)洗脱的Fc区域被缓冲液更换成PB S，浓缩至0.5ml，采用Millex-GV(Millipore)在4℃下被无菌过滤。
连续氨基酸段
本文提到的连续氨基酸段的例子包括，但是不局限于包含结合域的连续氨基酸，例如分泌或跨膜蛋白质、细胞内结合域和抗体(其全部或部分)及其改性变体。下面是一些非限定性例子：
1)免疫球蛋白
术语“抗体”以广泛的含义被使用，并且特别涵盖单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、单价抗体、多价抗体和抗体片段，只要它们展示出想要的生物活性(例如，Fab和/或单臂抗体)。
抗体的“种类”指被它的重链拥有的恒定域或恒定区的类型。存在五个主要种类的抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些中的几个可进一步被分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。相当于不同种类的免疫球蛋白的重链恒定域分别被称为α、δ、ε、γ和μ。
“抗体片段”指除完整抗体以外的分子，该分子包括完整抗体的一部分，它结合该完整抗体结合的抗原。抗体片段的例子包括，但是不局限于Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；双体；线型抗体、单链抗体分子(例如，scFv)和从抗体片段形成的多特异性抗体。
术语“全长抗体”，“完整抗体(intact antibody)”和“全部抗体(wholeantibody)”用于本文中可交换地指具有基本上类似于天然抗体结构的结构或具有包含本文定义的Fc区的重链的抗体。
“封闭(blocking)”抗体或“拮抗(antagonist)”抗体是显著地抑制(部分地或完全地)它结合的抗原的生物活性的抗体。
作为参考抗体的“结合相同表位的抗体”指在竞争试验中阻断参考抗体与它的抗原的结合达50％或更多的抗体，反过来，该参考抗体在竞争试验中阻断该抗体与它的抗原的结合达50％或更多。本文提供了典型的竞争试验。
术语“可变区”或“可变域”指在抗体结合抗原中被涉及的抗体重或轻链的域。天然抗体的重链和轻链(分别是VH和VL)的可变域通常具有相似的结构，每个域包括四个保守骨架区(FRs)和三个高变区(HVRs)(参见，例如，Kindt et al.Kuby Immunology,6th ed.,W.H.Freeman and Co.,page 91(2007))。单个VH或VL域可足以赋予抗原结合特异性。此外，结合特定抗原的抗体可被分离，使用来自结合抗原的抗体的VH或VL域，以分别筛选互补VH或VL域的文库。参见，例如Portolano et al.,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarksonet al.,Nature 352:624-628(1991)。
如本文中使用的术语“高变区”或“HVR”指序列高度可变和/或结构上形成确定的环(“高变环(hypervariable loops)”)的抗体可变域的每个区。通常情况下，天然四链抗体包括六个HVRs；VH中三个(H1、H2、H3)，VL中三个(L1、L2、L3)。HVRs通常包括来自高变环和/或来自“互补决定区(complementarity determining regions)”(CDRs)的氨基酸残基，后者具有最高的序列可变性和/或在抗原识别中被涉及。典型的高变环发生在氨基酸残基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)(Chothia and Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。典型的CDRs(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)发生在L1的氨基酸残基 24-34、L2的氨基酸残基50-56、L3的氨基酸残基89-97、H1的氨基酸残基31-35B、H2的氨基酸残基50-65和H3的氨基酸残基95-102(Kabat et al.,Sequences of Proteins of Immunological Interest,5th Ed.Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,Md.(1991).)。除了VH中的CDR1，CDRs通常包括形成高变环的氨基酸残基。CDRs还包括“特异性决定残基”或“SDRs”，它们是接触抗原的残基。SDRs被包含在被称为缩写的CDRs或a-CDRs的CDRs的区之中。典型的a-CDRs(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2和a-CDR-H3)发生在氨基酸残基L1的氨基酸残基31-34、L2的氨基酸残基50-55、L3的氨基酸残基89-96、H1的氨基酸残基31-35B、H2的氨基酸残基50-58和H3的氨基酸残基95-102(参见Almagro and Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))。除非另有指明，HVR残基和可变域中的其他残基(例如FR残基)在本文根据上述Kabat et al.,supra编号。
“骨架(Framework)”或“FR”指除高变区(HVR)残基之外的可变域残基。可变域的FR通常包括四个FR域：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR和FR序列通常出现在下列VH(或VL)的序列中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
本文中使用的短语“N-末端截断的重链(N-terminally truncated heavychain)”指包括全长免疫球蛋白重链的部分但不是全部的多肽，其中缺失的部分是一般位于重链的N端区的部分。缺失的部分可包括，但是不局限于可变域、CH1和铰链序列的部分或全部。通常情况下，如果野生型铰链序列没有出现，N端截断的重链中的剩余恒定域将包括能够连接到另一个Fc序列的组分(即，如本文描述的“第一”Fc多肽)。例如，所述组分可以是修饰的残基或能够形成二硫键的额外半胱氨酸残基。
“Fc受体”或“FcR”描述了结合抗体的Fc区的受体。在一些实施方案中，FcR是天然人FcR。在一些实施方案中，FcR是结合IgG抗体(γ受体)并且包括FcγRI、FcγRII和FcγRIIFcR亚型(包括等位基因变异体和可选择地这些受体的拼接形式)的受体的FcR。FcγRII受体包括FcγRIIA(“活化受体”(“activating receptor”))和FcγRIIB(“抑制受体”(”inhibiting receptor”))，具有主要在它们的胞浆域不同的类似的氨基酸序列。活化受体FcγRIIA包含在它的胞浆域的免疫受体基于络氨酸的活化模体(immunoreceptortyrosine-based activation motif)(ITAM)。抑制受体FcγRIIB包含在它的胞浆域的免疫受体基于络氨酸的抑制模体(ITIM)。(参见，例如，Daeron,Annu.Rev.Immunol.15:203-234(1997))。FcRs在例如Ravetch and Kinet,Annu.Rev.Immunol 9:457-92(1991)；Capel etal.,Immunomethods 4:25-34(1994)和de Haas et al.,J.Lab.Clin.Med.126:330-41(1995)中被评论了。其他的FcRs(包括将来被鉴别的FcRs)被本文的术语“FcR”包含。
术语“Fc受体”或“FcR”还包括新生儿受体(neonatal receptor)，FcRn，其负责传递母亲的IgGs到胎儿(Guyer et al.,J.Immunol.117:587(1976)和Kim et al.,J.Immunol.24:249(1994))，并且调节免疫球蛋白的体内平衡。测量结合FcRn的方法是已知的(参见，例如，Ghetie and Ward.,Immunol.Today 18(12):592-598(1997)；Ghetie etal.,Nature Biotechnology,15(7):637-640(1997)；Hinton et al.,J.Biol.Chem.279(8):6213-6216(2004)；WO 2004/92219(Hinton et al.)。
在体内结合人FcRn和高亲和力结合多肽的人FcRn的血清半衰期可被检测，例如在表达人FcRn的转基因小鼠或转染的人细胞株中，或在给予具有变异Fc区的多肽的灵长类中。WO 2000/42072(Presta)描述了对FcRs具有改良的或减弱的结合的抗体变异体。还参见，例如，Shields et al.J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001)。
如本文使用的“铰链区”，“铰链序列”和它们的变体包括本领域中已知的含义，其被阐明在，例如Janeway et al.,Immuno Biology:the immune system in health anddisease,(Elsevier Science Ltd.,NY)(4th ed.,1999)；Bloom et al.,Protein Science(1997),6:407-415；Humphreys et al.,J.Immunol.Methods(1997),209:193-202中。
除非另外指明，贯穿本说明书表述“多价抗体”用于表示包括三个或更多抗原结合位点的抗体。多价抗体优选地被设计具有三个或更多抗原结合位点，并且通常不是天然序列IgM或IgA抗体。
“Fv”片段是包含完全抗原识别和结合位点的抗体片段。这个区由紧紧联合的一个重和一个轻链可变域的二聚物组成，其本质上可以是共价的，例如在scFv中。正是在这个结构中每个可变域的三个HVRs相互作用以在VH-VL二聚物的表面限定抗原结合位点。共同地，六个HVRs或它们的子集赋予抗体抗原结合特异性。但是，即使单个可变域(或仅仅包括三个对抗原具有特异性的HVRs的Fv的一半)仍具有识别和结合抗原的能力，虽然经常以低于全部结合位点的亲和力。
“Fab”片段包含轻链的可变和恒定域和重链的可变域和第一恒定域(CH1)。F(ab')2抗体片段包括一对Fab片段，其通常靠近它们的羧基末端通过它们之间的铰链半胱氨酸被共价地连接。抗体片段的其他的化学联结在本领域中是已知的。
本文使用的“抗原结合臂”指具有特异地结合感兴趣的靶分子能力的抗体片段的组成部分。通常地和优选地，抗原结合臂是免疫球蛋白多肽序列(例如HVR和/或免疫球蛋白轻和重链的可变域序列)的复合体。
“单链Fv”或“scFv”抗体片段包括抗体的VH和VL域，其中这些域出现在单个多肽链中。通常地，Fv多肽进一步包括VH和VL域之间的多肽连接子，其能够使scFv形成对抗原结合来说想要的结构。对于scFv的评论，参见Pluckthun in The Pharmacology of MonoclonalAntibodies,Vol 113,Rosenburg and Moore eds.Springer-Verlag,New York,pp.269-315(1994)。
术语“双体(diabodies)指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，该片段包括连接到相同多肽链(VH和VL)中的轻链可变域(VL)的重链可变域(VH)。通过使用太短以致不允许在相同链上的两个域之间配对的连接子，该域被迫与另一个链的互补域配对并且创建两个抗原结合位点。双功能抗体在例如EP 404,097；WO 93/11161和Hollinger et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993)中被更充分地描述了。
表述“线型抗体”指在Zapata et al.,Protein Eng.,8(10):1057-1062(1995)中描述的抗体。简略地说，这些抗体包括一对串联Fd片段(VH-CH1-VH-CH1(V.sub.H-C.sub.H1-V.sub.H-C.sub.H1))，其与互补的轻链多肽一起形成一对抗原结合区。线型抗体可以是双特异的或单特异的。
本文中使用的术语“单克隆抗体”指从基本上同源的抗体种群中得到的抗体，即，包括相同的和/或结合相同表位的种群的单独抗体，除可能的变种抗体(例如，包含自然发生的突变或出现在生产单克隆抗体制剂期间)之外，这样的抗体通常以较小的量出现。与多克隆抗体制剂(其典型地包含对抗不同决定因素(表位)的不同抗体)不同，单克隆抗体制剂的每个单克隆抗体对抗抗原上的单个决定因素。因此，改良者(modifier)“单克隆”表明了如从基本上同源种群的抗体中得到的抗体的特性，并且不被解释为要求通过任何特定方法生产抗体。例如，使用的单克隆抗体可以通过多种技术制得，包括，但是不局限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和利用包含全部或部分人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，这样的方法和其他示例性方法用于制备本文描述的单克隆抗体。
术语“嵌合的”抗体指其中部分重和/或轻链来源于特定来源或物种，而剩余的重和/或轻链来源于不同的来源和物种的抗体。
“人源化”抗体指包括来自非人HVRs的氨基酸残基和来自人FRs的氨基酸残基的嵌合抗体。在某些实施方案中，人源化抗体将包括基本上全部的至少一个，和典型地两个可变域，其中全部或基本上全部的HVRs(例如，CDRs)相当于非人抗体的HVRs，并且全部或基本上全部的FRs相当于人抗体的FRs。人源化抗体可选择地可以包括至少一部分的来源于人抗体的抗体恒定区。“人源化形式”的抗体，例如非人抗体，指已经经历人源化的抗体。
“人抗体”是拥有氨基酸序列相当于通过人或人细胞产生的或来源于非人来源(该非人来源利用人抗体库或其他人抗体编码序列)的抗体的氨基酸序列。人抗体的这个定义明确地排除包括非人抗原结合残基的人源化抗体。
“裸抗体”指没有被偶联到异源部分(例如，细胞毒素部分)或放射标记物上的抗体。裸抗体可出现在制药配方中。
“天然抗体(Native antibodies)”指具有不同结构的天然发生的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗体是约为150,000道尔顿的异四聚体的糖蛋白(heterotetramericglycoproteins)，由二硫化物键合的两个相同的轻链和两个相同的重链组成。从N-到C-末端，每个重链具有可变区(VH)，该可变区也被称为可变重域或重链可变域，接着是三个恒定域(CH1、CH2和CH3)。类似地，从N-到C-末端，每个轻链具有可变区(VL)，该可变区还被称为可变轻域或轻链可变域，接着是恒定轻(CL)域。抗体的轻链可指派为两个类型中的一个，该两个类型根据它的恒定域的氨基酸序列被称为kappa(κ)和lambda(λ)。
“亲和力”指分子的单个结合位点(例如，抗体)和它的结合伴侣(例如，抗原)之间的非共价相互作用的总计的强度。除非另外指明，如本文中使用的“结合亲和力”指反映结合对(例如，抗体和抗原)成员之间的1:1相互作用的固有结合亲和力。分子X对它的伴侣Y的亲和力通常可由离解常数(Kd)表示。亲和力可用本领域中已知的常用方法测量，包括本文描述的常用方法。用于测量结合亲和力的具体的说明性和示例性实施方案在下面被描述了。
“亲和力成熟的(affinity matured)”抗体指在一个或多个HVRs中具有一个或多个变化的抗体，与不拥有这样的变化的亲本抗体相比，这样的变化导致抗体对抗原的亲和力的改进。
具有指定抗体的“生物学特征”的抗体是拥有那个抗体的一个或多个生物学特征的抗体，该生物学特征将它与结合相同抗原的其他抗体区分。
抗体的“功能抗原结合位点”是能够结合靶抗原的位点。抗原结合位点的抗原结合亲和力不必然像亲本抗体(抗原结合位点来源于该亲本抗体)一样强，但是结合抗原的能力利用多种评估抗体结合抗原的已知方法的任何一种一定是可测量的。另外，本文的多价抗体的每个抗原结合位点的抗原结合亲和力不需要数量上相同。对本文的多聚抗体(multimeric antibodies)来说，功能抗原结合位点的数目能利用如U.S.PatentApplication Publication No.20050186208的实施例2中描述的超速离心分析被评估。根据这个分析方法，不同比的靶抗原与多聚体抗体被组合，复合物的平均分子量是假设区分功能结合位点的数目计算出来的。这些理论值与得到的实际实验值相比以评估功能结合位点的数目。
“物种依赖的抗体”是与它对来自第二哺乳动物物种的那个抗原的同源物具有的结合亲和力相比对来自第一哺乳动物物种抗原具有更强的结合亲和力的抗体。正常地，物种依赖的抗体“特异地结合”到人抗原(即具有结合亲和力(Kd)值不大于约1X10-7M，优选地不大于约1X10-8M，最优选地不大于约1X10-9M)，但是对来自第二非人哺乳动物物种的抗原的同源物具有结合亲和力至少约50倍，或至少约500倍，或至少约1000倍弱于它的对人抗原的结合亲和力。物种依赖的抗体可以是任一如上面定义的多种抗体。在一些实施方案中，物种依赖的抗体是人源化的或人抗体。
“分离的”是已经从它的自然环境的组分中分离出来的抗体。在一些实施方案中，抗体被纯化到大于95％或99％的纯度，该纯度由如，例如电泳(例如，SDS-PAGE、等电点聚焦(IEF)、毛细管电泳)或层析法(例如，离子交换或反相HPLC)测定。对于评估抗体纯度的方法的评述，参见，例如Flatman et al.,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
2)细胞外蛋白质
在其它情况下，细胞外蛋白质在多细胞生物体的形成、分化和维持中扮演着重要的角色。对感兴趣的各种细胞内蛋白质的讨论在2004年4月公布的U.S.Patent No.6,723,535,Ashkenazi et al.(其通过参考并入本文)中阐明了。
多数单个细胞的命运，例如增殖、迁移、分化或与其它细胞相互作用，典型地由接受到的来自其它细胞和/或直接环境的信息控制。这个信息通常由分泌型多肽(例如促有丝分裂因子、存活因子、细胞毒性因子、分化因子、神经肽和激素)传输，这些分泌型多肽反过来被不同的细胞受体或膜结合蛋白接受和解释。这些分泌型多肽或信号分子通常穿过细胞的分泌途径到达细胞外环境中的它们的作用部位。
分泌型蛋白质具有多种工业用途，包括如制药、诊断、生物传感器和生物反应器。目前大部分可用的蛋白质药物，例如血栓溶解剂、干扰素、白介素、促红细胞生成素、集落刺激因子以及其它各种细胞因子是分泌型蛋白质。它们的受体，即膜蛋白也具有作为治疗或诊断剂的潜能。企业界和学术界都在努力地去鉴定新的、天然的分泌型蛋白质。多数努力都集中在筛选哺乳动物重组DNA文库以鉴定新型分泌型蛋白质的编码序列。筛选方法和技术的实施例已有文献报道(参见，例如Kleinet al.,Proc.Natl.Acad.Sci.93:7108-7113(1996)；U.S.Patent No.5,536,637)。
膜结合蛋白和受体，在其它情况下，可在多细胞生物体的形成、分化和维持扮演着重要的角色。多数单个细胞的命运，例如增殖、迁移、分化或与其它细胞的相互作用，典型地由接受到的来自其它细胞和/或直接环境的信息控制。这个信息通常由分泌型多肽(例如促有丝分裂因子、存活因子、细胞毒性因子、分化因子、神经肽和激素)传输，这些分泌型多肽反过来被不同的细胞受体或膜结合蛋白接受和解释。这样的膜结合蛋白和细胞受体包括，但是不限于细胞因子受体、受体激酶、受体磷酸酯酶、在细胞-细胞相互作用中涉及的受体，和细胞粘附分子如选择蛋白(selectins)和整合蛋白(integrins)。例如，调节细胞生长和分化的信号传递部分地被磷酸化的各种细胞蛋白质调节。蛋白酪氨酸激酶，催化那个过程的酶也可起生长因子受体的作用。例子包括纤维母细胞生长因子受体和神经生长因子受体。
膜结合蛋白和受体分子具有多种工业用途，包括如药物和诊断剂。例如受体免疫粘合素可用作治疗剂来阻断受体配体相互作用。膜结合蛋白也可被用于筛选相关的受体/配体相互作用的潜在的肽或小分子抑制剂。
3)基于内含肽的C-末端(intein-based C-Terminal)合成
如，例如在2005年2月1日授权的U.S.Patent No.6,849,428中所描述的，内含肽是等价于自我剪接的RNA内含子的蛋白质(参见Perler et al.,Nucleic Acids Res.22:1125-1127(1994))，其利用侧翼蛋白质序列(已知为外显肽(exteins))的相伴融合催化它们自己的从前体蛋白质的切除(在Perler et al.,Curr.Opin.Chem.Biol.1:292-299(1997)；Perler,F.B.Cell 92(1):1-4(1998)；Xu et al.,EMBO J.15(19):5146-5153(1996)评述了)。
在内含肽剪接机制方面的研究导致蛋白质纯化系统的发展，该系统利用在SceVMA内含肽的硫醇诱导的N-末端的肽键断裂(Chong et al.,Gene 192(2):271-281(1997))。用这个内含肽介导的系统的纯化生成具有C-末端硫酯的细菌表达的蛋白质(Chong et al.,(1997))。在一个应用中，当描述分离细胞毒素的蛋白质时，具有C-末端硫酯的细菌表达的蛋白质然后被融合到具有N-末端半胱氨酸的化学合成的肽，该融合采用被描述用于“天然化学连接”的化学方法(Evans et al.,Protein Sci.7:2256-2264(1998)；Muir et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:6705-6710(1998))。
这个技术，被称为“内含肽介导的蛋白质连接(IPL)”，代表了在蛋白质半合成技术中的重要进步。然而，由于很难得到大于约100个残基的化学合成的肽，IPL的普遍应用受到作为连接伴侣的化学合成的肽的需求的限制。
当表达的具有预定的N-末端(例如半胱氨酸)的蛋白质产生时，IPL技术被显著地展开了，这作为实施例被描述在U.S.Patent No.6,849,428中。这允许一个或多个来自宿主细胞(例如细菌、酵母或哺乳动物细胞)的表达蛋白质的融合。在一个非限制性的实施例中，内含肽，修饰的RIR1嗜热自养甲烷杆菌(Methanobacterium thermoautotrophicum)，在C-末端或N-末端断裂(cleaves)，被采用了，其允许在一个柱纯化期间释放细菌表达的蛋白质，因此完全消除了蛋白酶的需要
内含肽技术是一种获得组分的途径的一个实例。在一个具体方案中，本发明的化合物的亚单位通过转染合适的细胞被获得，能表达和分泌成熟的嵌合多肽，其中这样的多肽包括，例如与可分离的C-末端内含肽域相连的粘附素域(参见2005年2月1日授权U.S.Patent No.6,849,428，Evans等人，其通过参考并入本文)。细胞，例如哺乳动物细胞或细菌细胞，采用已知的重组DNA技术被转染。然后分泌型嵌合多肽可被分离，例如在内含肽-壳多糖结合域的情况中采用壳多糖衍生的树脂(参见2005年5月24日授权的U.S.PatentNo.6,897,285,Xu等人，其通过参考并入本文)，然后在允许硫醇介导的断裂的条件下被处理，并且释放目前的C-末端硫酯结尾的亚单位。硫酯结尾的粘附亚单位很容易被转换成C-末端半胱氨酸结尾的亚单位。
例如，内含肽自动断裂反应之后，生成硫酯中间体，这允许很容易通过天然化学连接添加半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同型硒代半胱氨酸，或半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同型硒代半胱氨酸的衍生物到C-末端。在本发明各方面是有用的通过天然化学连接添加半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同型硒代半胱氨酸，或半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同型硒代半胱氨酸的衍生物到C-末端的方法被描述在2008年10月16日公开的U.S.Patent Application No.2008/0254512，Capon中，其特此通过参考并入本文。
试剂盒
本发明另一方面提供了包括本文中公开的化合物和包含这些化合物的药物组合物的试剂盒。除了所述化合物或药物组合物外，试剂盒可包含诊断或治疗剂。试剂盒可还包括在诊断或治疗方法中使用的说明书。在诊断实施方案中，试剂盒包括化合物或其药物组合物和诊断剂。在治疗实施方案中，试剂盒包括抗体或其药物组合物和一种或多种治疗剂，例如额外的抗瘤剂(antineoplastic agent)、抗肿瘤剂(anti-tumor agent)或化学治疗剂。
总的技术
下面的描述主要是涉及连续氨基酸段或感兴趣的多肽的生产，其是通过培养用包含编码核酸的载体转化或转染的细胞。当然，人们也期望本领域所熟知的备选的方法可以被使用。例如，氨基酸序列或其蛋白质可通过采用固相技术直接肽合成来生产(参见，例如Stewart et al.,Solid-Phase Peptide Synthesis,W.H.Freeman Co.,San Francisco,Calif.(1969)；Merrifield,J.Am.Chem.Soc.,85:2149-2154(1963))。体外蛋白质合成可利用手动方法或通过自动操作被进行。自动化合成可通过，例如采用利用制造者的使用说明的应用生物系统肽合成仪(Applied Biosystems Peptide Synthesizer)(Foster City,Calif)来完成。连续氨基酸段或感兴趣多肽的不同部分可单独地化学合成，并且利用化学或酶法组合在一起以生产全长的连续氨基酸段或感兴趣的多肽。
1.宿主细胞的选择和转化
用本文描述的表达或克隆载体转染或转化宿主细胞用于生产，然后在常规的营养培养基中培养，该培养基经修饰适合用于诱导启动子、选择转化子或扩增编码想要的序列的基因。培养条件例如培养基、温度、pH等，可由本领域技术人员在不需做过多的实验情况下就能进行选择。一般而言，用于细胞培养产率最大化的原理、实验设计和实践技术可在Mammalian Cell Biotechnology:a Practical Approach,M.Butler,ed.(IRL Press,1991)和Sambrook et al.,supra中找到。
本领域普通技术人员已熟知真核细胞转染和原核细胞转化的方法，例如CaCl2、CaPO4、脂质体-介导的和电穿孔术。根据所使用的宿主细胞，采用适于这种细胞的标准技术进行转化。采用氯化钙的钙处理，如Sambrook et al.,supra中所描述的，或电穿孔术通常用于原核生物。使用根瘤土壤杆菌的感染用于某些植物细胞的转化，如Shaw et al.，Gene,23:315(1983)和1989年6月29日公开的WO 89/05859所描述的。对于没有这样的细胞壁的哺乳动物细胞，可采用磷酸钙沉淀方法，参见Graham and van der Eb,Virology,52:456-457(1978)。哺乳动物细胞宿主体系转染的总的方面已在U.S.Patent No.4,399,216中描述了。进入酵母的转化典型地按照Van Solingen et al.,J.Bact.,130:946(1977)和Hsiao etal.,Proc.Natl.Acad.Sci.(USA),76:3829(1979)的方法实施。然而，也可使用用于将DNA引入细胞的其它方法，例如通过核显微注射法、电穿孔术、与完整细胞融合的细菌原生质体或多聚阳离子，例如聚凝胺(polybrene)、多聚鸟氨酸。对于转化哺乳动物细胞的各种技术，参见Keown et al.,Methods in Enzymology,185:527-537(1990)和Mansour et al.,Nature,336:348-352(1988)。
本文的合适用于克隆或表达载体中DNA的宿主细胞包括原核生物、酵母或高等真核生物。适合的原核生物包括但是不限于真细菌，例如革兰氏阴性或革兰氏阳性有机体，例如肠杆菌科(Enterobacteriaceae)如E.coli。各种E.coli菌株是公众可用的，例如E.coliK12菌株MM294(ATCC 31,446)；E.coli X1776(ATCC 31,537)；E.coli菌株W3110(ATCC 27,325)和K5772(ATCC 53,635)。其它合适的原核宿主细胞包括肠杆菌科如埃希杆菌属(Escherichia)(例如E.coli)、肠道细菌属(Enterobacter)、欧文菌属(Erwinia)、克雷白杆菌属(Klebsiella)、变形菌(Proteus)、沙门氏菌(Salmonella)(例如鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium))、沙雷氏菌属(Serratia)(例如粘质沙雷氏菌(Serratiamarcescans))和志贺氏杆菌属(Shigella)，以及芽孢杆菌(如枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌(例如1989年4月12日公开的DD 266,710中公开的地衣芽孢杆菌41P))、假单胞菌属(例如绿脓杆菌)和链霉菌属。这些实例是作为举例说明而并不是限制。菌株W3110是特别优选的宿主或母体宿主，因为它是用于重组DNA产物发酵的常用宿主菌株。优选地，该宿主细胞分泌最小量的蛋白水解酶。例如，菌株W3110可被修饰用于使宿主内源性的基因编码蛋白发生遗传突变，这样的宿主的实例包括E.coli W3110菌株1A2(其具有完整的基因型tonA)；E.coli W3110菌株9E4(其具有完整的基因型tonA ptr3)；E.coli W3110菌株27C7(ATCC55,244)(其具有完整的基因型tonAptr3phoA E15(argF-lac)169degP ompT kan.sup.r)；E.coli W3110菌株37D6(其具有完整的基因型tonA ptr3phoA E15(argF-lac)169degPompT rbs7ilvG kan.sup.r；E.coli W3110菌株40B4，其是具有非卡那霉素耐受degP缺失突变的菌株37D6)；和如1990年8月7日公开的U.S.Patent No.4,946,783中描述的具有突变的周质蛋白酶的E.coli菌株。备选地，体外克隆方法，例如PCR或其它核苷酸聚合酶反应是合适的。
除了原核生物之外，真核微生物如丝状真菌或酵母对编码的载体来说是适合的克隆或表达宿主。酿酒酵母是常用的低等真核宿主微生物。其它的包括裂殖酵母属(Schizosaccharomyces pombe)(Beach and Nurse,Nature,290:140(1981)；1985年5月2日公开的EP 139,383)；克鲁维酵母属(Kluyveromyces)宿主(U.S.Pat.No.4,943,529，Fleeret et al.,Bio/Technology,9:968-975(1991))如，例如K.lactis(MW98-8C,CBS683,CBS4574；Louvencourt et al.,J.Bacteriol.,737(1983))、K.fragilis(ATCC 12,424)、K.bulgaricus(ATCC 16,045)、K.wickeramii(ATCC 24,178)、K.waltii(ATCC 56,500)、K.drosophilarum(ATCC 36,906；Van den Berg et al.,Bio/Technology,8:135(1990))、K.thermotolerans和K.marxianus；耶氏酵母(yarrowia)(EP 402,226)；Pichia pastoris(毕赤酵母属)(EP 183,070；Sreekrishna et al.,J.Basic Microbiol.,28:265-278(1988))；念珠菌属；里氏木霉(Trichoderma reesia)(EP 244,234)；粗糙链孢霉(Neurospora crassa)(Case et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,76:5259-5263(1979))；许旺酵母属(Schwanniomyces)例如许旺酵母(Schwanniomyces occidentalis)(1990年10月31日公开的EP 394,538)；和丝状真菌(filamentous fungi)例如，脉孢菌(Neurospora)、青霉菌(Penicillium)、弯颈霉(Tolypocladium)(1991年月10日公开WO 91/00357)，和曲霉属(Aspergillus)宿主，例如A.nidulans(Ballance et al.,Biochem.Biophys.Res.Commun.,112:284-289(1983)；Tilburn et al.,Gene,26:205-221(1983)；Yelton et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:1470-1474(1984))和A.niger(Kelly and Hynes,EMBO J.,4:475479(1985))。本文中甲醇酵母(Methylotropic yeasts)是适用的，包括但是不局限于能在甲醇上生长的酵母，这些酵母选自由下列组成的属：汉森氏酵母属(Hansenula)、念珠菌属(Candida)、克勒克酵母属(Kloeckera)、毕赤酵母属(Pichia)、酵母菌(Saccharomyces)、球拟酵母菌属(Torulopsis)和红酵母属(Rhodotorula)。典型的这类酵母的一系列具体物种可参见C.Anthony，The Biochemistry of Methylotrophs,269(1982)。
用于表达糖基化的连续氨基酸段或感兴趣的多肽的合适的宿主细胞来源于多细胞生物体。无脊椎动物细胞的实例包括昆虫细胞(例如果蝇属(Drosophila)S2和Spodoptera Sf9)以及植物细胞。有用的哺乳动物宿主细胞株的实例包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和COS细胞。更多具体的实例包括由SV40转化的猴子肾CV1株(COS-7，ATCC CRL1651)；人类胚胎肾株(293或293细胞亚克隆用于在悬浮培养中生长，Graham et al.,J.GenVirol.,36:59(1977))；中国仓鼠卵巢细胞/-DHFR(CHO,Urlaub and Chasin,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216(1980))；鼠塞尔托利细胞(mouse sertoli cells)(TM4,Mather,Biol.Reprod.,23:243-251(1980))；人肺细胞(W138,ATCC CCL 75)；人肝细胞(Hep G2,HB 8065)；和鼠乳房肿瘤(MMT 060562,ATCC CCL51)。适当的宿主细胞的选择被认为是属于本领域技术。
2.可复制载体的选择和利用
编码连续氨基酸段或感兴趣的多肽的核酸(例如cDNA或基因组DNA)可被插入到可复制载体用于克隆(DNA扩增)或用于表达。各种载体是公众可用的。载体可以，例如呈质粒、粘粒、病毒颗粒或噬菌体形式。适当的核苷酸序列可通过多种方法被插入到载体。一般而言，DNA采用本领域已知技术被插入到适当的限制性内切核酸酶位点。载体组分一般包括，但是不限于一个或多个信号序列、复制起点、一个或多个标记基因、增强子元件、启动子和转录终止序列。包含一个或多个这些组分的合适载体的构建采用本领域技术人员已知的标准连接技术。
连续氨基酸段或感兴趣的多肽不但可以直接重组制备，而且也可作为具有异源多肽的融合多肽，该异源多肽可以是信号序列或其它的具有在成熟蛋白质或多肽的N-末端的特定断裂位点的多肽。一般而言，信号序列可以是载体的组分，或者它是插入到载体的编码DNA的一部分。信号序列可以是原核信号序列，该序列选自例如下列组：碱性磷酸酶、青霉素酶、lpp或耐热肠毒素II前导(leaders)。对于酵母分泌，信号序列可以是例如酵母转化酶前导、α因子前导(包括酵母菌和克鲁维酵母属(Kluyveromyces)α因子前导，后者参见U.S.Pat.No.5,010,182)或酸性磷酸酯酶前导、白色念珠菌葡萄糖淀粉酶前导(C.albicansglucoamylase leader)(1990年4月4日公开的EP 362,179)或如1990年11月15日公开的WO90/13646中描述的信号。在哺乳动物细胞表达中，哺乳动物信号序列可被用于指导蛋白质的分泌，例如来自相同或相关物种的分泌型多肽的信号序列，以及病毒分泌前导(secretory leaders)。
表达和克隆用载体都包含有能够使载体在一种或多种选择的宿主细胞中复制的核酸序列。这样的序列对各种细菌、酵母和病毒来说是非常已知的。质粒pBR322的复制起点适合于大多数革兰氏阴性菌，2mu质粒起点适合于酵母，并且各种病毒起点(SV40、多瘤、腺病毒、VSV或BPV)对在哺乳动物细胞中克隆载体是有用的。
表达和克隆载体将典型地包括选择基因(也称可选标记)。典型的选择基因编码以下蛋白质：(a)赋予对抗生素或其它毒素例如氨苄西林、新霉素、甲氨喋呤或四环素的耐药性，(b)补充营养缺陷型的不足(complement auxotrophic deficiencies)或(c)供给从复合培养基不能得到的关键营养素，例如编码芽胞杆菌属的D-丙氨酸消旋酶的基因。
合适的哺乳动物细胞的可选标记的实例是能够鉴别吸收编码核苷酸(例如DHFR或胸苷激酶)的细胞感受态的可选标记物。当采用野生型DHFR时，适当的宿主细胞为缺乏DHFR活性的CHO细胞株，该细胞株如Urlaub et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:4216(1980)描述的被制备和增殖。用于酵母的适合的选择基因是存在于酵母质粒YRp7的trp1基因(Stinchcomb et al.,Nature,282:39(1979)；Kingsman et al.,Gene,7:141(1979)；Tschemper et al.,Gene,10:157(1980))。trp1基因给缺乏在色氨酸中生长的能力的酵母突变株提供可选标记，例如ATCC No.44076或PEP4-1(Jones,Genetics,85:12(1977))。
表达和克隆载体通常包括可操作地连接到编码核苷酸序列的启动子以指导mRNA合成。被多种潜在宿主细胞认可的启动子是已知的。原核宿主适用的启动子包括β-内酰胺酶和乳糖启动子系统(Chang et al.,Nature,275:615(1978)；Goeddel et al.,Nature,281:544(1979))、碱性磷酸酶、色氨酸(trp)启动子系统(Goeddel,Nucleic Acids Res.,8:4057(1980)；EP 36,776)和杂合启动子例如tac启动子(deBoer et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,80:21-25(1983))。细菌系统中使用的启动子也将包括可操作地连接到编码DNA的核糖体结合位点(Shine-Dalgarno)(S.D.)序列。
用于酵母宿主的合适的启动序列的实例包括针对下列的启动子：3-磷酸甘油酸酯激酶(Hitzeman et al.,J.Biol.Chem.,255:2073(1980))或其它糖酵解酶(Hess et al.,J.Adv.Enzyme Re.g.,7:149(1968)；Holland,Biochemistry,17:4900(1978))例如烯醇化酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶、己糖激酶、丙酮酸脱羧酶、果糖磷酸激酶、葡萄糖-6-磷酸异构酶、3-磷酸甘油酸变位酶、丙酮酸激酶、磷酸丙糖异构酶、磷酸葡萄糖异构酶和葡萄糖激酶。
其它酵母启动子，其具有由生长条件控制的转录的额外优点的诱导型启动子，并且是醇脱氢酶2、异细胞色素C、酸性磷酸酯酶、氮代谢相关的降解酶、金属硫蛋白、甘油醛-3-磷酸脱氢酶和负责利用麦芽糖及半乳糖的酶的启动区。用于酵母表达中的适合的载体和启动子进一步被描述在EP73,657中。
哺乳动物宿主细胞中的载体转录是由，例如从病毒(例如多瘤病毒、鸡痘病毒(fowlpox virus)(1989年7月5日公开的UK 2,211,504)、腺病毒(例如腺病毒2)、牛乳头状瘤病毒、鸟类肉瘤病毒、巨细胞病毒、逆转录病毒、乙型肝炎病毒和猿猴病毒40(SimianVirus 40)(SV40))的基因组获得的启动子、异源哺乳动物启动子(例如肌动蛋白启动子或免疫球蛋白启动子)和热休克启动子所控制，条件是所述启动子与宿主细胞系统是兼容的。
由更高等真核生物转录的编码连续氨基酸段或感兴趣多肽的DNA可通过在载体中插入增强子序列来增强。增强子是DNA的顺式作用元件，通常大约为10到300bp，其作用于启动子以增强它的转录。来自哺乳动物基因(珠蛋白、弹性蛋白酶、白蛋白、α胎儿蛋白和胰岛素)的许多增强子序列目前是已知的。然而典型地，本领域技术人员将采用来自真核细胞病毒的增强子。实例包括位于复制起点晚期侧的SV40增强子(bp100-270)、巨细胞病毒早期启动子增强子、位于复制起点晚期侧的多瘤增强子和腺病毒增强子。增强子可在编码序列的5’或3’位置被拼接入载体，但优选定位于靠近启动子的5’位置。
用于真核生物宿主细胞(酵母、真菌、昆虫、植物、动物、人类或其它多细胞有机体的有核细胞)的表达载体也将包含对转录终止和mRNA稳定所必需的序列。这样的序列一般来自5‘端(偶尔来自3‘端)，真核生物或病毒DNAs或cDNAs的非翻译区。这些区包括在编码连续氨基酸段或感兴趣的多肽的mRNA的非翻译部分中转录为多聚腺苷酸片段的核苷酸片段。
还有，适于在重组体脊椎动物细胞培养中合成连续氨基酸段或多肽的适合的其它方法、载体和宿主细胞描述在Gething et al.,Nature 293:620-625(1981)；Mantei etal.,Nature,281:4046(1979)；EP 117,060和EP 117,058中。
3.检测基因扩增/表达
基因扩增和/或表达可在样本中直接被测量，该测量通过，例如传统的Southern印迹、用于定量mRNA转录的Northern印迹(Thomas,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,77:5201-5205(1980))、斑点印迹(dot blotting)(DNA分析)或原位杂交，采用适当的标记的探针，基于本文提供的序列。备选地，能识别特定双链体的抗体可被采用，该特定双链体包括DNA双链体、RNA双链体和DNA-RNA杂交双链体或DNA-蛋白质双链体。抗体可反过来可被标记，并且当双链体被结合到表面时可进行试验使得在表面上形成双链体时，结合到双链体的抗体的存在可被检测出来。
备选地，基因表达可由免疫方法(例如细胞或组织切片的免疫组织化学染色法和细胞培养或体液试验)测量以直接定量基因产物的表达。对免疫组织化学染色法和/或样本液体试验有用的抗体可以是单克隆的或多克隆的，并且可以在任意哺乳动物中被制备。抗体可被方便地制备，对抗天然序列连续氨基酸段或感兴趣的多肽，或对抗基于本文提供的DNA序列的合成肽，或对抗融合到编码连续氨基酸段或感兴趣的多肽和编码特定抗体表位的DNA的外源性序列。
4.多肽的纯化
连续氨基酸段或感兴趣的多肽的结构可从培养基或从宿主细胞溶胞产物中回收。如果结合膜，它可以利用合适的去污剂溶液(例如Triton-X 100)或通过酶法断裂从膜上被释放。在表达连续氨基酸段或感兴趣的多肽中使用的细胞可通过各种物理或化学方法(例如冷冻-融化循环、声裂法、机械破碎或细胞溶解试剂)被破坏。
人们希望从重组体细胞蛋白质或多肽纯化连续氨基酸段或感兴趣的多肽。下列方法是可作模范的适当的纯化方法：在离子交换柱上分级；乙醇沉淀；反相HPLC；在二氧化硅或阳离子交换树脂(例如DEAE)上层析；色谱聚焦；SDS-PAGE；硫酸铵沉淀；凝胶过滤(采用例如葡聚糖凝胶G-75)；用以除去污染物(例如IgG)的A蛋白琼脂糖柱；和用以结合表位标记结构(epitope-tagged forms)的金属螯合柱。可采用各种蛋白质纯化的方法，这样的方法已被本领域所熟知，并且被描述在，例如Deutscher,Methods in Enzymology,182(1990)；Scopes,Protein Purification:Principles and Practice,Springer-Verlag,New York(1982)中。选择的纯化步骤将依赖于，例如，所采用的生产方法的特点和生产的特定连续氨基酸段或感兴趣的多肽。
在E.coli中表达连续氨基酸段或感兴趣的多肽组分的实施例
编码想要的感兴趣的氨基酸序列或多肽的DNA序列最初采用选择的PCR引物被扩增。引物应该包括对应于选择的表达载体上的限制性内切酶位点的限制性内切酶位点。可采用许多表达载体。适合的载体的实例是pBR322(来源于E.coli；参见Bolivar et al.,Gene,2:95(1977))，它包含有氨苄西林和四环素耐药性的基因。载体用限制性内切酶消化并脱磷酸。PCR扩增的序列然后被连接入载体。载体将优选地包括编码抗生素耐药性基因的序列、trp启动子、组氨酸(polyhis)前导(包括第一六个STII密码子、组氨酸序列和肠激酶切割位点)、感兴趣的特定氨基酸序列/多肽编码区、lambda转录终止子和argU基因。
连接混合物然后被用于转化选择的E.coli菌株，采用Sambrook et al.,supra所描述的方法。转化子通过它们在LB板上的生长能力被鉴别，然后抗生素耐药性菌落被选择。质粒DNA可被分离，并通过限制酶切分析和DNA序列测定来证实。
选择的菌落在液体培养基(例如补充抗生素的LB肉汤)中生长过夜。过夜的培养随后可被用于接种较大规模的培养。然后细胞生长到想要的光密度，在此期间表达启动子被开启。
培养细胞几个更多小时后，细胞可通过离心分离被采集。通过离心分离得到的细胞团可用本领域已知的各种试剂溶解，溶解的感兴趣的氨基酸序列或多肽然后可采用金属螯合柱在允许蛋白质紧密结合的条件下被纯化。
引物可包括对应于选择的表达载体上的限制性内切酶位点的限制性内切酶位点和其他的有用的序列，该序列提供有效的可靠的翻译起始、在金属螯合柱上快速纯化以及利用肠激酶的蛋白质水解移除。PCR-扩增的、聚-His标记的序列可被连接入表达载体，该表达载体用于转化E.coli宿主，基于例如菌株52(W3110fuhA(tonA)Ion galE rpoHts(htpRts)clpP(lacIq))。转化子首先在30℃条件下在包含50mg/ml羧苄青霉素的LB中生长并摇动直到O.D.600为3-5。培养然后在C RAP培养基(通过混合3.57g(NH4)2SO4、0.71g柠檬树钠-2H2O、1.07g KCl、5.36g Difco酵母提取液、溶于500mL水中的5.36g Sheffieldhycase SF、以及110mM MPOS，pH 7.3，0.55％(w/v)的葡萄糖和7mM MgSO4被制备)中被稀释50-100倍，然后在30℃摇动生长约20-30小时，并摇动。样品被移除以通过SDS-PAGE分析验证表达，并且大量培养物被离心分离以使细胞成团。细胞团被冷冻直到纯化和复性(purification and refolding)。
0.5到1L的E.coli糊团发酵(6-10g团)以10体积(w/v)在7M胍、20mM Tris、pH8缓冲液中再悬浮。加入固体亚硫酸钠和连四硫酸钠，使得最后浓度分别为0.1M和0.02M，溶液在4℃搅拌过夜。这个步骤导致产生具有由亚硫酸化(sulfitolization)阻滞的全部半胱氨酸残基的变性蛋白质。该溶液在Beckman超速离心机中以40,000rpm离心分离30分钟。上清用3-5体积的金属螯合柱缓冲液(6M胍，20mM Tris,pH 7.4)稀释，并且通过0.22微米过滤器被过滤以澄清。取决于澄清的提取物被加载到用金属螯合物柱缓冲液平衡的5ml Qiagen Ni-NTA金属螯合物柱上。该柱用包含有50mM咪唑(Calbiochem,Utrol等级)，pH 7.4的额外缓冲液淋洗。蛋白质用包含有250mM咪唑的缓冲液洗脱。包含想要的蛋白质的级分(fractions)被合并，并且在4℃下被储存。蛋白质浓度通过它的在280nm的吸光度，利用计算的消光系数，基于它的氨基酸序列被估计。
在哺乳动物细胞中表达连续氨基酸段或多肽
这个普通的实施例说明了通过在哺乳动物细胞中重组表达来制备想要的感兴趣的氨基酸序列或多肽组分的糖基化形式。
载体pRK5(参见1989年3月15日公开的EP 307,247)可用作表达载体。可选择地，编码DNA利用连接方法(如Sambrook et al.,supra所描述的)被连接入具有选择的限制性内切酶以允许DNA插入的pRK5中。
在一个实施方案中，选择的宿主细胞可以是293细胞。人293细胞(ATCC CCL 1573)在组织培养板中，在培养基(例如补充有小牛胎儿血清和，可选择地，营养成分和/或抗生素的DMEM)中生长到汇合。大约10μg的连接的载体DNA与编码VA RNA基因的大约1μg DNA(Thimmappaya et al.,Cell 31:543(1982))混合，并且溶于500μl的I mM Tris-HCl、0.1mMEDTA、0.227M CaCl2中。向该混合液中逐滴加入500μl的50mM HEPES(pH 7.35)、280mMNaCl、1.5mM NaPO4，沉淀物在25℃被允许形成10分钟。该沉淀物被悬浮，加入到293细胞，并且允许在37℃沉降约4小时。抽去培养基，在30秒内加入2ml 20％甘油的PB S溶液。293细胞然后用没有血清的培养基冲洗，新鲜培养基被加入，细胞被孵化约5天。
转染后将近24小时，移除培养基，并用培养基(单独)或包含有200μCi/ml 35S-半胱氨酸和200μCi/ml 35S-蛋氨酸的培养基取代。孵化12小时后，条件培养基被收集，在旋转过滤器被浓缩，然后加载到15％SDS凝胶上。加工的凝胶(processed gel)可被干燥，并暴露于胶片(film)一段选择的时间，以揭示感兴趣的氨基酸序列或多肽组分的存在。包含转染细胞的培养物可进行进一步的孵化(在没有血清的培养基中)，用选择的生物测定测试培养基。
在供选择的技术中，感兴趣的核酸氨基酸序列或多肽组分通过采用Somparyracet al.,Proc.Natl.Acad.Sci.,12:7575(1981)描述的硫酸葡聚糖方法可被短暂地引入293细胞。293细胞在旋转烧瓶中生长至最大浓度，加入700μg连接的载体。该细胞首先通过离心分离从该旋转烧瓶中被浓缩，并且用PBS冲洗。DNA-葡聚糖沉淀物在细胞团上被孵化4小时。细胞用20％甘油处理90秒，用组织培养基冲洗，并且被再次引入包含有组织培养基、5μg/ml牛胰岛素和1μg/ml牛运铁蛋白的旋转烧瓶中。约四天后，条件培养基被离心分离和过滤以移除细胞和碎屑。包含表达的感兴趣的氨基酸序列或多肽组分的样品然后可被浓缩，并且采用任意选择的方法(例如透析和/或柱层析)被纯化。
在另一个实施方案中，感兴趣的氨基酸序列或多肽组分可在CHO细胞中被表达。该感兴趣的氨基酸序列或多肽组分可采用已知的试剂(例如CaPO4或DEAE-葡聚糖)被转染到CHO细胞中。如上面描述的，细胞培养可被孵化，培养基被培养基(单独)或包含有放射标记物(例如35S-蛋氨酸)的培养基取代。在测定感兴趣的氨基酸序列或多肽组分的存在后，培养基可被没有血清的培养基取代。优选地，培养基被孵化约6天，条件培养基然后被采集。包含表达的感兴趣的氨基酸序列或多肽组分的培养基然后可被浓缩，并且采用任一选择的方法被纯化。
表位标记的感兴趣的氨基酸序列或多肽组分也可在宿主CHO细胞中被表达。该感兴趣的氨基酸序列或多肽组分可在pRK5载体外被亚克隆。该亚克隆插入物可进行PCR以便在结构中与选择的表位标签(例如聚-his标记)在杆状病毒表达载体中融合。聚-his标记的感兴趣的氨基酸序列或多肽组分插入物然后被亚克隆入SV40驱动的载体中，该SV40驱动的载体包含用于选择稳定克隆的选择标记(例如DHFR)。最后，CHO细胞可用SV40驱动的载体转染(如上所述)。可进行标记，如上面描述的，以证实表达。包含表达的聚-his标记的感兴趣的氨基酸序列或多肽组分的培养基然后可被浓缩，并通过任一选择的方法被纯化，例如通过Ni2+-螯合亲和层析。
在一个实施方案中，感兴趣的氨基酸或多肽组分被表达成IgG构造(免疫粘合素)，其中针对各自蛋白的可溶结构(例如胞外域)的编码序列被融合到包含铰链、CH2和CH2区域的IgG1恒定区序列，和/或是聚-His标记的结构。
在PCR扩增后，各自DNAs采用如Ausubel et al.,Current Protocols ofMolecular Biology,Unit 3.16,John Wiley and Sons(1997)中描述的标准技术在CHO表达载体中被亚克隆。CHO表达载体被构建具有相容的感兴趣的DNA的限制性位点5′和3′，以允许cDNA′s的便利的穿梭运动。在CHO细胞中在表达中所使用的载体如Lucas et al.,Nucl.Acids Res.24:9(1774-1779(1996)中所描述的，并使用SV40早期启动子/增强子来驱动感兴趣的cDNA的和二氢叶酸还原酶(DHFR)的表达。DHFR表达允许在转染后选择稳定维持的质粒。
在酵母中表达连续氨基酸段或多肽
下面的方法描述了在酵母中重组表达想要的感兴趣的氨基酸序列或多肽组分
首先，酵母表达载体被构建用于从ADH2/GAPDH启动子细胞内产生或分泌连续氨基酸段。编码想要的感兴趣的氨基酸序列或多肽组分、选择的信号肽和启动子的DNA被插入选择的质粒中的适合的限制性酶切位点以指导细胞内表达感兴趣的氨基酸序列或多肽组分。对于分泌，编码连续氨基酸段的DNA同编码ADH2/GAPDH启动子的DNA、酵母α–因子分泌信号/前导序列和用于表达连续氨基酸段的连接子序列(如果需要)一起可被克隆入选择的质粒中。
酵母细胞(例如酵母菌株AB110)然后用上面描述的表达质粒转化，并且在选择的发酵培养基中被培养。转化的酵母上清可通过用10％三氯醋酸的沉淀、通过SDS-PAGE法的分离、然后用考马斯蓝染色剂(Coomassie Blue stain)的凝胶染色被分析。
重组感兴趣的氨基酸序列或多肽组分随后可被分离，并且通过离心分离从发酵培养基中移除酵母细胞被纯化，然后采用选择的筒过滤器(cartridge filters)浓缩该培养基。包含感兴趣的氨基酸序列或多肽组分的浓缩物可进一步采用选择的柱层析树脂被纯化。
在杆状病毒感染的昆虫细胞中表达连续氨基酸段或多肽
下面的方法描述了在杆状病毒感染的昆虫细胞中重组表达连续氨基酸段。
编码连续氨基酸段的想要的核酸在包含的表位标记上游与杆状病毒表达载体融合。这样的表位标记包括聚-his标记和免疫球蛋白标记(如IgG的Fc区)。可采用多种质粒，包括来源于市售可得的质粒(例如pVL1393(Novagen))。简要地，感兴趣的氨基酸序列或多肽组分或该感兴趣氨基酸序列或多肽组分的想要的一部分(例如编码跨膜蛋白的胞外域的序列)通过PCR用与5′和3′区互补的引物被扩增。5′引物可掺入侧翼(选择的)限制性酶切位点。产物然后用那些选择的限制性内切酶消化，并且被亚克隆入表达载体中。
重组杆状病毒通过利用脂质体(lipofectin)(从GIBCO-BRL购买)共转染(co-transfecting)上述质粒和BaculoGoldTM病毒DNA(Pharmingen)进入Spodopterafrugiperda("Sf9")细胞(ATCC CRL 1711)来产生。在28℃孵化4-5天后，释放的病毒被收集并被用于进一步扩增。病毒感染和蛋白质表达如O'Reilley et al.,Baculovirusexpression vectors:A laboratory Manual,Oxford:Oxford University Press(1994)中所描述的来完成。
表达的聚-his标记的感兴趣氨基酸序列或多肽组分然后可被纯化，例如采用如下所述的Ni2+-螯合的亲和层析被纯化。提取物是从重组病毒-感染的Sf9细胞制备的，如Rupert et al.,Nature,362:175-179(1993)所描述的。简要地，Sf9细胞被冲洗，在声裂法缓冲液(25mL Hepes,pH 7.9；12.5mM MgCl2；0.1mM EDTA；10％甘油；0.1％NP40；0.4M KCl)中被再悬浮，并且在冰上声处理两次20秒钟。声处理物通过离心分离被澄清，上清液在加载缓冲液(50mM磷酸盐,300mM NaCl,10％甘油,pH 7.8)中稀释50倍，通过0.45μm过滤器被过滤。Ni2+-NTA琼脂糖柱(从Qiagen购买)用5ml的床柱体积制备，用25ml水淋洗，并且用25ml加载缓冲液平衡。过滤的细胞提取物以每分钟0.5ml被加载到柱上。柱用加载缓冲液淋洗直到基线A280，在这个点开始收集级分。接着，柱用第二淋洗缓冲液(50mM磷酸盐；300mM NaCl,10％甘油,pH 6.0)淋洗，该第二淋洗缓冲液洗脱非特异性结合的蛋白质。在再次到达基线A280后，柱演变成用第二淋洗缓冲液中的0到500mM咪唑梯度淋洗。1ml级分被收集，并通过SDS-PAGE和银染色或用Ni2+-NTA-结合到碱性磷酸酶(Qiagen)的western印迹被分析。包含洗脱的His10-标记的序列的级分被合并，并且用加载缓冲液透析。
备选地，IgG标记的(或Fc标记的)氨基酸序列的纯化可采用已知的层析技术，包括例如A蛋白或G蛋白柱层析来完成。
包含蛋白质构造的Fc可从条件培养基中被纯化，如下所述。条件培养基被注入5ml的A蛋白柱(Pharmacia)中，该A蛋白柱用pH6.8、20mM钠磷酸盐缓冲液平衡。加载后，柱用平衡缓冲液充分地淋洗，然后用100mM柠檬酸，pH 3.5洗脱。洗脱的蛋白质立即用收集的1ml级分在包含275mL的1M Tris缓冲液，pH 9的管中中和。高度纯化的蛋白质随后在存储缓冲液中除去盐分，如上面对聚-His标记的蛋白质的描述。蛋白质的同源性通过SDS聚丙烯酰胺凝胶(PEG)电泳和通过埃德曼降解(Edman degradation)的N-末端氨基酸测序被验证。
药物组合物的实例
这样的组合物和剂量的非限定实例阐述如下：
包括化合物的组合物，该化合物包括连续氨基酸段，该连续氨基酸段包括具有依那西普(etanercept)(例如Enbrel)序列的连续氨基酸，所述组合物可包括甘露醇、苷糖和氨基丁三醇。在一个实施方案中，该组合物呈冻干物形式。在一个实施方案中，该组合物是用例如无菌抑菌注射用水(Sterile Bacteriostatic Water for Injection，BWFI),USP(含0.9％苯甲醇)重构的。在一个实施方案中，将该化合物给药给受治疗者用于减轻患有中到重度活动期类风湿性关节炎的受治疗者的病症和症状、诱导主要临床响应、抑制结构性损伤的进展并提高生理机能。该化合物可与甲氨喋呤(MTX)一起开始或者单独使用。在一个实施方案中，将该化合物给药给受治疗者用于减轻对一种或多种DMARD响应不够的受治疗者的中到重度活动期多关节过程幼年型类风湿性关节炎(active polyarticular-coursejuvenile rheumatoid arthritis)的病症和症状。在一个实施方案中，将该化合物给药给受治疗者用于减轻有银屑病关节炎的受治疗者的病症和症状、抑制活动关节炎的结构性损伤进展并提高生理机能。在一个实施方案中，将该化合物给药给受治疗者用于减轻有活动期强直性脊柱炎的受治疗者的病症和症状。在一个实施方案中，将该化合物给药给受治疗者用于治疗慢性中度到重度斑块型银屑病。在一个实施方案，其中受治疗者有类风湿性关节炎、银屑病关节炎或强直性脊柱炎，将该化合物以25-75mg/周，作为一次或多次皮下(SC)注射给药。在另一个实施方案中，将该化合物以50mg/周，以单次SC注射给药。在一个实施方案中，其中受治疗者有斑块型银屑病，将该化合物以25-75mg，每周两次或4天一次，连续3个月给药，接着减少到25-75mg/周的维持剂量。在另一个实施方案中，将该化合物以50mg，每周两次或4天一次，连续3个月给药，接着减少到50mg/周的维持剂量。在一个实施方案中，该剂量比本文中所列剂量少2x-100x。在一个实施方案中，其中受治疗者有活动期多关节过程JRA，可将该化合物以0.2-1.2mg/kg/周的剂量给药(达到最大量75mg/周)。在另一个实施方案中，将该化合物以0.8mg/kg/周的剂量给药(达到最大量50mg/周)。在一些实施方案中，该剂量比本文上面所列的剂量少2x-100x。
包括化合物的组合物，该化合物包括连续氨基酸段，该连续氨基酸段包括具有英夫利西单抗(infliximab)(例如Remicade)序列的连续氨基酸，该组合物可括含苷糖、聚山梨醇80、磷酸二氢钠一水合物和磷酸氢二钠二水合物。在一个实施方案中，不存在防腐剂。在一个实施方案中，该组合物呈冻干物形式。在一个实施方案中，该组合物是用例如注射用水(BWFI),USP重构的。在一个实施方案中，该组合物的pH为7.2或约7.2。在一个实施方案中，将该化合物给药给有类风湿性关节炎的受治疗者，以2-4mg/kg的剂量作为静脉内输注，接着第一次输注后的2和6周和之后的每8周用额外的类似剂量。在另一实施方案中，将该化合物以3mg/kg的剂量作为静脉内输注，接着第一次输注后的2和6周和之后的每8周用额外的类似剂量。在一个实施方案中，将剂量调节到10mg/kg或以每4周的频率治疗。在一个实施方案中，该化合物与甲氨喋呤组合给药。在一个实施方案中，将该化合物给药给有克罗恩(Crohn)病或瘘管性克罗恩病的受治疗者，在0、2和6周剂量以2-7mg/kg作为诱导方案，然后之后以每8周4-6mg/kg的维持方案来治疗中到重度活动期克罗恩病或瘘管性克罗恩病。在另一实施方案中，将该化合物在0、2和6周以5mg/kg的诱导方案剂量，然后之后以每8周5mg/kg的维持方案给药，来治疗中到重度活动期克罗恩病或瘘管性克罗恩病。在一个实施方案中，将剂量调节到10mg/kg。在一个实施方案中，将该化合物给药给有强直性脊柱炎的受治疗者，以2-7mg/kg的剂量作为静脉内输注，然后在第一次输注后的2和6周，接着之后每6周用额外的类似剂量。在另一实施方案中，将该化合物以5mg/kg的剂量作为静脉内输注给药，然后在第一次输注后的2和6周，接着之后每6周用额外的类似剂量。在一个实施方案中，将该化合物给药给有银屑病关节炎的受治疗者，以2-7mg/kg的剂量作为静脉内输注，然后在第一次输注后的2和6周，接着之后每8周用额外的类似剂量。在另一个实施方案中，将该化合物以5mg/kg的剂量作为静脉内输注，然后在第一次输注后的2和6周，接着之后每8周用额外的类似剂量。在一个实施方案中，将该化合物与氨甲喋呤一起给药。在一个实施方案中，将该化合物给药给有溃疡性结肠炎的受治疗者，在0、2和6周以剂量2-7mg/kg作为诱导方案，然后以每8周2-7mg/kg的维持方案来治疗中到重度活动期溃疡性结肠炎。在另一个实施方案中，将该化合物给药给有溃疡性结肠炎的受治疗者，在0、2和6周以剂量5mg/kg作为诱导方案，然后每8周5mg/kg的维持方案。在一些实施方案中，剂量比本文上面所列的用于治疗个体疾病的剂量少2x-100x。
在本文中描述的组合物的每个实施方案中，该组合物，当呈冻干物形式时，可用，例如无菌水溶液、无菌水、无菌注射用水(Sterile Water for Injections，USP)、无菌抑菌注射用水(Sterile Bacteriostatic Water for Injections，USP)及本领域中技术人员已知的其等同物重构。
应当理解在任何本发明化合物的给药中，该化合物可以单独、在载体中、作为药物组合物的部分或在任何合适载体中的形式给药。
剂量
应当理解本文陈述的剂量范围的地方，如每周1-l0mg/kg，本文公开的发明还考虑了上限和下限之间的各整数剂量及其十分之一。因此，在给出的实例的情况中，本发明考虑了1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4等mg/kg至10mg/kg。
在实施方案中，本发明化合物可作为单剂量给药或作为多剂量给药。
总地来说，按照以上面描述的方法治疗疾病或病状的日剂量将通常为约0.01-约10.0mg/kg待治疗的受治疗者体重。
基于前面提及的剂量的变化剂量的范围变化可由普通医师在考虑体重、年龄和待治疗者的状况、患病程度和选定的具体给药途径等的情况下制定。
还预计所公开的化合物协同结合相伴的结果影响所需有效剂量。
药剂
术语“药学上可接收的载体”应被理解为包括赋形剂、载体或稀释剂。所用的特定载体、稀释剂或赋形剂将取决于应用活性成分的方式和目的。
就肠胃外给药而言，可采用包含在无菌水溶液的本发明化合物或其药学上可接受的盐的溶液。如果需要这种水溶液适当地缓冲，并且液体稀释剂用足够盐或葡萄糖首先提供等渗。这些特定水溶液特别适于静脉内给药、肌肉内给药、皮下给药和腹腔内给药。采用的无菌水介质都很容易通过本领域中技术人员已知的标准技术获得。
本发明组合物可为多种形式。这些包括，例如液体、半固体和固体剂型，如液体溶液(如可注射和可输注溶液)、分散液或悬浮液。优选形式取决于预期给药方式和治疗应用。一些组合物呈可注射或可输注溶液形式。给药方式为肠胃外(例如静脉内、皮下、腹腔内和肌肉内)。在一个实施方案中，该化合物通过静脉内输注或注射给药。在另一个实施方案中，该化合物通过肌肉内或皮下注射给药。
就治疗用途而言，本文中公开的组合物可以各种方式给药，包括通过团注法(bolus injection)的可溶形式、持续输注、从植入物上缓释、口服给药、局部注射(例如心脏内、肌肉内)、系统注射或药学领域中众所周知的其它合适技术。其它给药方法包括，但是不局限于口服、皮下、经皮、静脉内、肌肉内和肠胃外给药方法。通常，可溶的组合物将包括纯化的化合物和生理上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。这种载体在所用剂量和浓度下对赋形剂是无毒的。这样的组合物的制备可需要化合物与缓冲剂、抗氧剂、碳水化合物包括葡萄糖、蔗糖或葡聚糖、螯合剂如EDTA、谷胱甘肽和其它稳定剂和赋形剂组合。与同种血清蛋白混合的中性缓冲盐水或盐水是示例性的合适稀释剂。产品可被配制成冻干物，采用合适赋形剂溶液(例如苷糖)作为稀释剂。
其它衍生物包含共价结合到非蛋白聚合物的本发明化合物/组合物。结合到聚合物通常以一定的方式进行从而不干扰化合物的优选生物活性，例如化合物对靶点的结合活性。非蛋白聚合物通常为亲水合成聚合物，即不是在自然中发现的聚合物。然而，存在自然中并通过重组或体外方法生产的聚合物是可用的，正如从自然中分离的聚合物。亲水聚乙烯聚合物属于本发明范围，例如聚乙烯醇和聚乙烯吡咯烷酮。特别有用的是聚烯烃醚如聚乙二醇、聚丙二醇、聚氧乙烯酯或甲氧基聚乙二醇；聚氧化烯烃如聚氧乙烯、聚氧丙烯、聚氧乙烯和聚氧丙烯的嵌段共聚物(Pluronics)；聚甲基丙烯酸酯；卡波姆(carbomer)；包含如下糖单体的支链或无支链多糖：D-甘露糖、D-和L-半乳糖、岩藻糖、果糖、D-木糖、L-树胶醛糖、D-葡萄糖醛酸、唾液酸、D-半乳糖醛酸、D-甘露糖醛酸(例如褐藻酸或海藻酸)、D-葡萄糖胺、D-半乳糖胺、D-葡萄糖和神经氨酸包括同多糖和杂多糖如乳糖、支链淀粉、淀粉、羟乙基淀粉、直链淀粉、硫酸葡聚糖、葡聚糖、糖原或酸性粘多糖的多糖亚单位，例如透明质酸；糖醇的聚合物如聚山梨醇和聚甘露醇；以及肝素或heparon。
本发明药物组合物可包含“治疗有效量”或“预防有效量”的本发明化合物。“治疗有效量”是指在一定剂量和必需时间周期下对获得所需治疗结果有效的量。化合物的治疗有效量可根据个人病情、年龄、性别和重量等因素而变化。治疗有效量还是治疗有利影响超过化合物的毒性或不利影响的量。“预防有效量”是指在一定剂量和必需时间周期下对获得所需预防结果有效的量。通常，由于预防剂量是在发病之前或发病的较早阶段用于受治疗者，预防有效量会少于治疗有效量。
本文中公开的各种元素的所有组合都属于本发明范围。
参考下面的试验详述将更好地理解本发明，但本领域中技术人员将很容易理解的是：详述的具体实施例仅用于说明本发明，其在之后的权利要求书得到更详尽描述。
实验细节
实例1：TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6(TNR1B-alkyne-azide-Fc6)
TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6经由炔烃修饰的TNR1B(TNF受体1B)与叠氮修饰的Fc6反应被制备，如下所述。TNR1B-叠氮-炔烃-Fc6利用同样的原理经由叠氮修饰的TNR1B与炔烃修饰的Fc6反应被制备。
炔烃修饰的TNR1B(TNR1B-Alk)是通过用胱氨酰-炔丙胺(cystyl-propargylamide)，HSCH2CH[NH2]CONHCH2C≡CH3(图1)断裂TNR1B-内含肽(TNR1B-Mth融合蛋白)制备的，叠氮修饰的TNR1B(TNR1B-Az)通过用胱氨酰-3-叠氮炔丙胺(cystyl-3-azidopropylamide)，HSCH2CH[NH2]CONH(CH2)3NH2断裂TNR1B-内含肽被制备。
TNR1B-内含肽和Fc6被描述在2008年10月16日公开的U.S.Serial No.11/982085(其全部内容通过引用并入本文)中。
TNR1B-内含肽融合蛋白是利用载体pCDNA3-TNR1B-Mth(其序列显示在SEQ ID NO:100中)制备的。最初表达的，包含TNR1B胞外域(它的C-末端通过肽键在自动断裂位点连接到Mth RIR1自我剪接内含肽的N-末端)前体-TNR1B-内含肽(pre-TNR1B-intein)嵌合多肽被显示在SEQ ID NO:101中。通过细胞信号肽酶断裂同源TNR信号序列提供被分泌进入细胞培养液的成熟TNR1B-内含肽融合蛋白质，其序列被显示在SEQ ID NO:102中。
Fc6蛋白是利用载体pCDNA3-SHH-IgG1-Fc11(其序列被显示在SEQ ID NO:103中)表达的。最初被表达的前体-Fc6-多肽被显示在SEQ ID NO:104中。通过细胞信号肽酶断裂异源音猬(sonic hedgehog)(SHH)信号序列提供被分泌进入细胞培养液的成熟Fc6蛋白质，其序列被显示在SEQ ID NO:102中。
蛋白质生产是通过在CHO-DG44细胞中瞬时表达进行的，适应于无血清悬浮培养。瞬时转染是用聚乙烯亚胺作为转染剂，与DNA络合，在高密度条件下完成的，如Rajendra etal.,J.Biotechnol.153,22-26(2011)所描述的。种株培养(seed train cultures)被保持在从TPP(Trasadingen,CH)得到的生物反应器50个管中，并且被按体积比例放大以产生足够的生物质用于转染。转染是在0.5-1.0L的培养物中进行的。此规模的培养物被保持在具有通风帽的2L或5L Schott瓶中。该瓶以180rpm在Kühner培养摇床中摇动，加湿并且CO2控制在5％。细胞培养液在10天后被采集，纯化之前被离心分离和无菌过滤。
胱氨酰-炔丙胺和胱氨酰-3-叠氮炔丙胺是按照如下所述制备的。Boc-Cys(Trt)-OH，(C6H5)3CSCH2CH[NHCO2C(CH3)3]CO2H；炔丙胺，HC≡CCH2NH；3-叠氮炔丙胺，NH2CH2CH2CH2N3；EDC，N-(3-二甲胺基丙基)-N′-乙基碳化二胺盐酸盐(N-(3-Dimethylaminopropyl)-N′-ethylcarbodiimidehydrochloride)和HOBt，1-羟基苯并三唑是从AnaSpec(Freemont,CA)或CPC Scientific(San Jose,CA)得到的。全部其他化学品是从Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)得到的。为了合成胱氨酰-炔丙胺，Boc-Cys(Trt)-OH(100mM)和炔丙胺(100mM)的CH2Cl2溶液被制得，100mM每个在EDC、HOBt和三乙胺中。为了合成胱氨酰-3-叠氮炔丙胺，3-叠氮炔丙胺替代炔丙胺。两个反应通过下面的过程工作。在室温搅拌过夜之后，反应用过量的饱和NaHCO3水溶液停止，用CH2Cl2萃取，用MgSO4干燥，过滤，蒸发并用柱层析纯化。为了除去Boc/Trt保护基团，中间产物以0.05M的浓度溶解在TFA/三异丙基硅烷/H2O(90:5:5)中，并且在室温搅拌30分钟。反应然后通过蒸发被干燥并且用CH2Cl2萃取。有机层然后用水萃取，产生的最终胱氨酰-炔丙胺产物为淡黄色油，最终的胱氨酰-3-叠氮炔丙胺产物为淡黄色固体。
为制备炔烃修饰的TNR1B(图1)或叠氮修饰的TNR1B，细胞培养液中的TNR1B–内含肽蛋白质被施加到塞满甲壳素珠(chitin beads)(从New England BioLabs(Beverley,MA)得到)的柱上，该柱用缓冲液A(20mM Tris-HCl，500mM NaCl，pH 7.5)预平衡。未结合的蛋白质用缓冲液A从柱上冲洗掉。断裂是通过在缓冲液B(20mM Tris-HCl，500mM NaCl，pH 8.0)中快速平衡甲壳素树脂引发的，包含50mM胱氨酰-炔丙胺(对炔烃修饰的TNR1B而言)或50mM胱氨酰-3-叠氮炔丙胺(对叠氮修饰的TNR1B而言)，孵化在室温进行24到96小时。断裂的炔烃修饰的TNR1B(SEQ ID NO:106)或叠氮修饰的TNR1B蛋白质(SEQ ID NO:107)用缓冲液A从柱中洗脱，利用来自Millipore(Billerica,MA)的Amicon Ultracel-3离心过滤装置(Centrifugal Filter Unit)被浓缩，用从UCSF Cell Culture Facility(San Francisco,CA)得到的不含Ca或Mg盐(PBS)的Dulbecco’s磷酸缓冲盐水透析，并且在使用之前在4℃被储存。
图2显示了炔烃修饰的TNR1B的SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析，与用50mM半胱氨酸而不是胱氨酰-炔丙胺制备的半胱氨酸修饰的TNR1B(SEQ ID NO:108)相比较。SDS-PAGE是利用从Invitrogen(Carlsbad,CA)得到的 Novex Bis-Tris MidiGels(10％)进行的。蛋白质利用从Bio-Rad(Hercules,CA)得到的银染色剂附加(SilverStain Plus)或Bio-Safe Coomassie染色剂是可视化的。炔烃修饰的TNR1B(泳道3)和半胱氨酸修饰的TNR1B(泳道1)具有相同的Mr～43,000。另外，炔烃修饰的TNR1B具有比得上半胱氨酸修饰的TNR1B的生物活性，如利用从R&D Systems(Minneapolis,MN)得到的HumansTNFRII/TNFRSF1B Quantikine ELISA所测量的。在存在50mM MESNA情况下制得的半胱氨酸修饰的TNR1B(泳道2)、炔烃修饰的TNR1B(泳道4)或硫酯修饰的TNR1B(SEQ ID NO:109)(泳道5)的制备物具有相似的Mr，但是对在缺乏MESNA情况下制得的制备物来说，具有少于5％观察到的生物活性。因此，在缺乏MESNA情况下制备的炔烃修饰的TNR1B被用于进一步的研究。
叠氮修饰的Fc6(Az-Fc6)是通过Fc6蛋白质与各种包含叠氮的肽硫酯(图3)和包含叠氮的PEG硫酯(图4)反应制备的。炔烃修饰的Fc6(Alk-Fc6)是通过包含炔烃的硫酯与Fc6蛋白质反应制备的。
重组Fc6蛋白质是在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中表达的，如对TNR1B-内含肽(参见上面)所描述的，并且是通过蛋白质A(Protein A)亲和层析纯化的。培养物上清被施加到塞满rProtein A Fast Flow(来自harmacia(Uppsala,Sweden))的柱上，该柱用PBS预平衡。柱用PBS充分淋洗，Fc6蛋白质然后用0.1M甘氨酸缓冲液pH 2.7洗脱。级分被收集到包含0.05体积/体积的1.0MTris-HCl pH 9.0(假定最终pH为7.5)的管中，合并，用PBS透析，并且使用之前在4℃被储存。
表1显示了代表性的包含叠氮和包含炔烃的肽/PEG硫酯。硫酯是通过Fmoc/叔丁基固相策略在用Fmoc-Thr(tBu)-OH预加载的2-氯三苯甲基氯树脂上合成的。氨基酸衍生物是从CPC Scientific(Sunnyvale,CA)得到的，Fmoc-PEGn-OH衍生物是从Quanta BioDesign(Powell,OH)得到的，2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基铵六氟磷酸盐(2-(1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium hexafluorophosphate)(HBTU)、二氯甲烷(DCM)、三氯乙酸(TFA)、N,N’-二异丙基碳二亚胺(DIC)、1-羟基苯并三唑(HOBt)、N,N’-二异丙基乙胺(DIEA)和三异丙基硅烷(TIS)是从Sigma(St.Louis,MO)得到的。标准HBTU激活被用于肽延长。包含PEG的肽要求插入Fmoc-PEGn-OH。作为肽延长中的最后步骤，末端α-Fmoc(9-芴甲氧羰基)保护基团被转换成Boc(叔丁氧羰基)。肽树脂用DCM淋洗，并且用1％TFA/DCM断裂以产生用C-末端上的自由羧基完全保护的肽。肽的硫酯是通过用DIC/HOBt/DIEA、苄硫醇或苯硫酚在DCM中处理粗保护肽过夜形成的。浓缩后，粗保护肽硫酯通过用冷的醚多次研磨(multipletriturations)然后离心分离被沉淀。去保护是通过用95:2.5:2.5TFA/TIS/H2O在室温处理粗保护产物2小时进行的。用冰冷却的醚沉淀后，去保护肽硫酯通过制备型RP-HPLC在H2O-乙腈(0.1％TFA)体系中被纯化以提供具有91-95％纯度和想要的MS的最终产物。
叠氮修饰的Fc6和炔烃修饰的Fc6是通过天然化学连接制备的，如下所述。2-(N-吗啉)乙磺酸(MES)是从Acros(Morris Plains,NJ)得到的，三(2-羧乙基)磷化氢(tris(2-carboxyethyl)phosphine)(TCEP)是从Pierce(Rockford,IL)得到的，4-巯基苯基乙酸(4-mercaptophenylacetic acid)(MPAA)是从Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)得到的。反应是通过连接表1中显示的各种硫酯和Fc6蛋白质进行的，如下所述。反应(100uL)含有50mM MES缓冲液、pH 6.5,0.8mM TCEP、10mM MPAA、4mg/ml的肽硫酯和0.5mg/ml的Fc6蛋白质。在室温过夜孵化之后，反应用0.05体积/体积的1.0M Tris-HCl pH 9.0调整到pH 7.0，利用来自NewEngland BioLabs的蛋白A磁珠(Protein A Magnetic Beads)被纯化，在0.1M磷酸盐pH 8.0中被透析，并且被浓缩。
图5显示了SDS-PAGE分析证明了Fc6蛋白(泳道1)与叠氮-DKTHT-硫酯定量地反应，生成叠氮(Az)-DKTHT-Fc6蛋白质(泳道2)，与叠氮-PEG4-DKTHT-硫酯定量地反应，生成Az-PEG4-DKTHT-Fc6蛋白质(泳道3)。Az-DKTHT-Fc6蛋白质的序列被显示在SEQ ID NO:110中，Az-PEG4-DKTHT-Fc6的序列被显示在SEQ ID NO:111中。PEG4寡聚物给出增加的尺寸增加相当于5氨基酸DKTHT序列。这显示了单个氧乙烯单体单元贡献类似于单个氨基酸残基的伸直长度，与它们具有～3.5到的相当于完全伸展的构像一致(Flory(1969)StatisticalMechanics of Chain Molecules(Interscience Publishers,New York)。
TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6经由炔烃修饰的TNR1B与Az-DKTHT-Fc6蛋白质(图6)和Az-PEG4-DKTHT-Fc6蛋白质(图7)反应被制备。磷酸氢二钠(无水)和磷酸二氢钠(一水合物)是从Acros得到的，TCEP是从Pierce得到的，CuSO4(五水化物)是从Sigma-Aldrich得到的，三[1-苄基-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基]胺(Tris[1-benzyl-1H-1,2,3-triazol-4-yl)methyl]amine)(TBTA)是从AnaSpec(Freemont,CA)得到的。反应(60uL)包含0.1M磷酸钠，pH8.0、1.0mM CuSO4、2.0mM TBTA、炔烃修饰的TNR1B(30ug)和未修饰的Fc6蛋白质，Az-DKTHT-Fc6蛋白质或Az-PEG4-DKTHT-Fc6蛋白质(10ug)。反应通过加入2.0mM TCEP引发，并且在室温被孵化过夜。反应产物利用蛋白A磁珠被纯化以除去任何未反应的炔烃修饰的TNR1B。
图8显示了还原条件下的TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6产物的SDS-PAGE分析。在缺乏CuSO4、TBTA和TCEP情况下，Az-DKTHT-Fc6(泳道2)和Az-PEG4-DKTHT-Fc6(泳道5)都给出单个带的Mr～28-30,000道尔顿(箭头d)，其相当于投入叠氮修饰的Fc6蛋白质，没有任何产物形成的迹象。此外，在蛋白A纯化之后，没有证据证明投入炔烃修饰的TNR1B的任何残留(显示在泳道1中)。但是，在存在CuSO4、TBTA和TCEP情况下，炔烃修饰的TNR1B与Az-DKTHT-Fc6之间的反应(泳道3)和炔烃修饰的TNR1B与Az-PEG4-DKTHT-Fc6之间的反应(泳道6)都产生两个新的产物，Mr～75,000道尔顿(箭头a)和～65,000道尔顿(箭头b)。利用在0.1M磷酸盐pH8.0中缓冲液更换除去盐之后的炔烃修饰的TNR1B的制备物进行的反应给出实质上与Az-DKTHT-Fc6(泳道4)和Az-PEG4-DKTHT-Fc6(泳道6)都相似的反应产物，虽然Mr～75,000道尔顿的产物的产率比Mr～65,000道尔顿的产物显著更加。
图9显示了对比TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6反应产物(左半部分)和TNR1B-炔烃-叠氮-PEG4-Fc6反应产物(右半部分)与TNR1B-Fc融合蛋白(依那西普(etanercept))的SDS-PAGE分析。Mr～75,000道尔顿的TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6产物(泳道2)(其具有显示在SEQ ID NO:112中的预测序列)和Mr～75,000道尔顿的TNR1B-炔烃-叠氮-PEG4-Fc6产物(泳道4)(其具有显示在SEQ ID NO:113中的预测序列)在大小方面实质上不能与依那西普(泳道1和3)(其序列显示在SEQ ID NO:114中)区分。
图10显示了提供进一步证据证实炔烃和叠氮基团要求反应性(reactivity)的SDS-PAGE分析。含有炔烃修饰的TNR1B和未修饰的Fc6蛋白质的反应混合物与单独Fc6(泳道1)相比没有给出反应产物(泳道2)，而炔烃修饰的TNR1B和Az-DKTHT-Fc6与单单Az-DKTHT-Fc6(泳道3)相比给出了预期产物(泳道4)。再次，蛋白质A纯化之后没有明显的投入炔烃修饰的TNR1B(显示在泳道5中)的残留。
图10的TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6产物进一步通过测序它们的胰蛋白酶分解形成的肽段(tryptic peptide)被表征，该测序通过LC-MS。SDS-PAGE之后，凝胶被Coomassie染色，并且四个凝胶区被切除，这四个区对应于Mr～75,000产物(箭头a)，Mr～65,000产物(箭头b)，其中炔烃修饰的TNR1B将迁移的未染色区(箭头c)和Mr～28,000的未反应Az-DKTHT-Fc6蛋白质(箭头d)。四个凝胶切片被切成小的小块(～0.5-1.0mm3)并且被处理，如下所述。碳酸氢铵(ammonium bicarbonate)，乙腈、二硫苏糖醇和碘乙酰胺是从Sigma-Aldrich得到的，甲酸是从Pierce得到的，猪胰蛋白酶(测序级别)是从Promega(Madison,WI)得到的。为了除去Coomassie染色，每个凝胶切片用200uL的25mM NH4HCO3的50％乙腈溶液通过涡流被提取，被离心分离以除去上清，并且通过持续几分钟加入乙腈直到凝胶块收缩和变白被脱水。乙腈被丢弃，凝胶切片在Speed Vac(Savant Instruments,Farmingdale,NY)中被干燥。还原和烷基化然后是通过在40ul的在25mMNH4HCO3中的10mM二硫苏糖醇中，再水合凝胶切片，涡流进行的，并且在56℃被孵化45分钟。上清液然后被丢弃，40uL的在25mM NH4HCO3中的55mM碘乙酰胺被加入，凝胶切片被漩涡并且在黑暗中在室温下被孵化30分钟。上清被丢弃，凝胶切片再次在乙腈中被脱水并且在Speed Vac中被干燥。胰蛋白酶消化然后是通过在25uL的在25mM NH4HCO3中的胰蛋白酶(12.5ug/mL)中在冰上再水合凝胶切片60分钟进行的。过量的胰蛋白酶溶液然后被除去，凝胶切片用25mM NH4HCO3覆盖，并且在37℃被孵化过夜。上清被除去，凝胶然后用30uL的50％乙腈/0.1％甲酸的水溶液提取两次。有机提取物与水上清混合，在Speed Vac中被减少到10uL体积，然后利用Q-Star Elite质谱仪(AB SCIEX,FosterCity,CA)通过LC-MS被分析。
图11概述了通过质谱表征TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6反应产物的结构。Mr～75,000产物，正如对全长TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6产物的预期，包含来自炔烃修饰的TNR1B和叠氮修饰的Fc6亲本蛋白质的肽。另外，炔烃修饰的TNR1B序列(上半部分)的肽覆盖范围从N-末端区(EYYDQTAQMCCSK)延伸到C-末端区(SMAPGAVHLPQPVST)。类似地，叠氮修饰的Fc6蛋白质序列的肽覆盖范围(下半部分)从N-末端区(DTLMISR)延伸到C-末端区(TTPPPVLDSDGSFFLYSK)。相比之下，Mr～65,000缺少EYYDQTAQMCCSK肽，暗示它是预期的全长TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6产物的N-末端缺失版本。来源于TNR1B蛋白质的序列在Mr～43,000的未染色区(其中炔烃修饰的TNR1B将正常地迁移)(箭头C)中没有被检测出，仅仅来源于Fc6蛋白质的序列在Mr～28,000的未反应Az-DKTHT-Fc6蛋白质(箭头d)中被检测出。
图10的TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6和TNR1B-炔烃-叠氮-PEG4-Fc6产物通过利用表面等离子体共振(SPR)测量它们结合TNF-α的能力进一步表征它们的生物活性。重组人TNF-α蛋白质(不含载体)是从R&D Systems得到的，并且在PBS中被重构。SPR研究是利用来自Biacore AB(Uppsala, Sweden)的Biacore T100仪器进行的。表面结合配体、TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6和TNR1B-炔烃-叠氮-PEG4-Fc6被固定在CM5传感器芯片上，系列S，该固定利用从GE Healthcare(Piscataway,NJ)得到的胺结合试剂盒(Amine Coupling Kit)(BR-1000-50)，按照制造商的使用说明。TNF-α的结合是在25℃在10mM Hepes缓冲液pH 7.4、150mMNaCl、3mM EDTA和0.005％Tween-20中进行的。结合在TNF-α的浓度为 0.156nM、0.312nM、0.625nM、1.25nM、2.5nM、5.0nM、10.0nM、20.0nM和40nM条件下一式两份地被评估。数据利用Biacore T100Evaluation Software(版本 2.0.3)被评估。
图12显示了TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6(左半部分)和TNR1B-炔烃-叠氮-PEG4-Fc6(右半部分)的动力学结合曲线。两个产物都显示了可饱和的TNF-α结合，得到非常好的拟合，使用双指数模型(Chi2～0.05)。表2概述了动力学结合数据。对每个产物来说，大约40％的结合位点具有较高的亲和力，TNR1B-炔烃-叠氮-PEG4-Fc6的离解常数(KD＝1.86x10-10M)比TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6(KD＝2.99x10-10M)大1.6倍。剩余60％的结合位点具有较低的亲和力，TNR1B-炔烃-叠氮-PEG4-Fc6(KD＝5.12x10-9M)和TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6(KD＝5.17x10- 9M)的离解常数大约相同。PEG4连接子与增加的高亲和力结合的关联(但是相等的低亲和力结合)通过比较TNR1B-炔烃-叠氮-PEG4-Fc6与TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6对较高程度的TNF-α的协同(两只手)结合提供了令人叹服的证据。
实施例2:Fab’-炔烃-叠氮-Fc6
Fab’-炔烃-叠氮-Fc6经由环炔烃修饰的Fab’与叠氮修饰的Fc6反应被制备，如下所述。
阿达木单抗(Adalimumab)(Humira)是作为液体剂型(50mg/ml)从Abbott(AbbottPark,IL)的得到的。Fab’片段是利用IdesS蛋白酶制备的，首先生成Fab’2片段然后用2-巯基乙胺选择性还原链间二硫化物(图13)。抗体(10mg)利用Slide-A-Lyzer迷你透析装置(Mini Dialysis Unit)，来自Pierce(Rockford,IL)的10K MWCO，被更换成裂解缓冲液(50mM磷酸钠,150mM NaCl，pH 6.6)，然后用固定在来自Genovis(Lund,Sweden)的琼脂糖珠(FragIT MidiSpin柱)上的his-标记的重组IdeS在室温下孵化1小时，不断地混合。该珠通过离心分离从消化溶液中被除去，用裂解缓冲液冲洗两次，消化和冲洗溶液然后被组合在一起，并且被施加到来自GE Life Sciences(Piscataway,NJ)的HiTrap蛋白质A HP柱上以除去Fc’片段和未消化的抗体。包含Fab’2片段的流出级分(Flow-through fractions)通过将1mL小份添加到包含来自Pierce的6mg 2-巯基乙胺(MEA)的小瓶中被还原成Fab’片段。还原是用10mM EDTA进行的，以最小化链间二硫化物的再氧化。在37℃孵化110分钟之后，过量的MEA通过利用来自GE Life Sciences(Piscataway,NJ)的PD-10脱盐柱缓冲液更换成包含10mM EDTA的PBS被除去。包含的Fab’片段的洗脱液利用来自Millipore(Billerica,MA)的Amicon Ultracel-3离心过滤器装置(Centrifugal Filter Unit)被浓缩。
图14显示了SDS-PAGE分析用IdeS断裂之后的阿达木单抗(A半部分)，然后蛋白质A层析并用MEA温和还原(B半部分)。在强还原剂(二硫苏糖醇)存在情况下在聚丙烯酰胺凝胶中，全部抗体(泳道1)迁移为Mr～55,000的重链(箭头a)和Mr～25,000的轻链(箭头d)。IdeS将重链(泳道2)断裂为Mr～29,000的C-末端片段(箭头b)和Mr～26,000的N-末端片段(箭头c)。轻链和N-末端重链片段包括Fab’2域，而C-末端重链片段包括Fc’域。蛋白质A柱将Fc’域从Fab’域有效地除去(对比泳道2与泳道5和6)。在非还原条件下，Fab’2域迁移为单一种的Mr～110,000(泳道3)，而通过用MEA的温和还原生产的Fab’域迁移为单一种的Mr～55,000(泳道4)。在还原条件下，Fab’2域(泳道5)和Fab’域(泳道6)两者都产生相同的轻链(箭头d)和N-末端重链片段(箭头c)，正如预期的。因此，通过这个方法得到的Fab’域实质上不含Fab’2和Fc’域。
环炔烃修饰的Fab’是从阿达木单抗Fab’域制备的，利用双功能连接子，DIBAC-PEG12-Lys(Mal)，其包含能够与Fab’片段上的自由硫醇基团反应的马来酰亚胺基团(图15)。DIBAC-PEG12-Lys(Mal)是利用Fmoc固相合成策略制备的。Lys(Mtt)-Wang树脂和琥珀酰亚胺基3-丙酸马来酰亚胺(succinimido 3-maleimidopropanoate)(Mpa-OSu)是从CPCScientific(Sunnyvale,CA)得到的，Fmoc-N-氨基-dPEG12-酸是从Quanta BioDesign(Powell,OH)得到的，以及5-(11,12-二脱氧苯并[b,f]亚胺-5(6H)-yl)-5-戊酮酸(5-(11,12-Didehydrodibenzo[b,f]azocin-5(6H)-yl)-5-oxopentanoic acid)，酸功能化的氮杂-二苯环辛炔(aza-dibenzocyclooctyne)(DIBAC-酸)，如Debets,M.F.et al.,Chem.Commun.46,97–99(2010)所描述的被合成。Fmoc-N-氨基-dPEG12-酸和DIBAC-酸依次与Lys(Mtt)-Wang树脂反应以得到DIBAC-PEG12-Lys(Mtt)-Wang树脂，然后用TFA/DCM/TIS(1:96:3)处理以除去Mtt基团。去保护树脂与Mpa-OSu在赖氨酸侧链上的自由氨基上反应以得到DIBAC-PEG12-Lys(Mpa)-Wang树脂。用TFA/水(95:5)断裂之后，粗产物通过制备型RP-HPLC被纯化以提供具有93％纯度和想要的MS谱的DIBAC-PEG12-Lys(Mal)产物(DPKM)。
图16显示了具有DIBAC-PEG12-Lys(Mal)连接子的阿达木单抗Fab’片段的化学修饰和生成的环炔烃修饰的Fab’的纯化。为了纯化，反应(0.535mL)是在0.1M磷酸钠在pH 7.0和pH 7.4进行的，每个包含5mg Fab’片段和10mg的DIBAC-PEG12-Lys(Mal)。在室温孵育30小时之后，两个反应被组合并且利用PD-10柱被缓冲液更换成20mM醋酸钠，20mM NaCl,pH 5.5。洗脱液(3.5mL)被施加到来自GE Life Sciences的HiTrap SP HP阳离子交换柱上，其保留全部未修饰的Fab’和剩余的Fab’2。包含纯化的环炔烃修饰的Fab’流出级分(5.5mL)(图16)被合并，用10x PBS(0.55mL)调节到pH 7.0，并且通过在来自GE Life Sciences的蛋白质L柱(Capto L)上亲和层析被浓缩。环炔烃修饰的Fab’用0.1M甘氨酸HCl pH 2.7(2.4mL)从蛋白质L柱上洗脱，用1/20体积1.0M Tris HCl，pH 9.0中和，利用PD-10柱(3.5mL)被缓冲液更换成PBS，并且利用Amicon Ultracel-3离心过滤器装置被浓缩到最终体积为70uL，浓度为9.5mg/mL。
具有不同长度的PEG连接子的各种叠氮修饰的Fc6蛋白质被用在阿达木单抗Fab’-环炔烃-叠氮-Fc6的制备中。Az-DKTHT-Fc6(图3)和Az-DKTHT-PEGx-Fc6衍生物(x＝12、24和36)(图4)是在包含50mM MES，pH 6.5、0.8mM TCEP、10mM MPAA、5mg/ml的四个叠氮化合物-DKTHT-PEGx-硫酯中的每一个和2.36mg/ml的Fc6蛋白质的反应(2ml)中制备的。在室温20小时之后，反应用100uL Tris HCl，pH 9.0中和，通过离心分离以12,000xg被澄清，并且被施加到1ml HiTrap蛋白质A HP柱上。该柱用12体积的PBS淋洗，叠氮修饰的Fc6蛋白质然后用0.1M甘氨酸HCl，pH 2.7(2.0mL)洗脱，用1/20体积的1.0M Tris HCl，pH 9.0中和，用三个变化的PBS透析12小时(每个利用Slide-A-Lyzer迷你透析装置，10K MWCO)，并且利用AmiconUltracel-3离心过滤器装置被浓缩。
图17显示了通过还原条件下的SDS-PAGE分析Fc6(泳道1)、Az-DKTHT-Fc6(泳道2)、Az-DKTHT-PEG12-Fc6(泳道3)、Az-DKTHT-PEG24-Fc6(泳道4)和Az-DKTHT-PEG36-Fc6(泳道5)蛋白，通过SDS-PAGE。Fc6蛋白与全部四个硫酯定量地反应(>90％)，产生尺寸增加的阶梯产物。
图18显示了通过排阻色谱(SEC)的分析以确认四个叠氮修饰的Fc6蛋白质产物具有与亲本Fc6分子相同的二聚物结构。SEC是利用突出HPLC体系(Prominence HPLC System)(Shimadzu Corp,东京，日本)进行的。TSKgel Super SW3000柱(4.6mm x 30cm柱、4.6mm x5cm保护柱)是从TOSOH Bioscience(东京，日本)得到的。使用的流动相，流速、柱温度和检测波长分别是50mM磷酸钠，300mM NaCl，pH 7.4，0.35mL/分钟，30℃和280nm。四个叠氮修饰的Fc6蛋白质产物展示了随PEG连接子尺寸增加而减小的保留时间，确认了它们的二聚物结构。全部四个产物实质上还给出单峰，证明了其中亲本Fc6二聚物的两个N-末端都是通过PEG连接子修饰的双手结构，这通过在非还原条件下SDS-PAGE分析被确认(参见下面)。
环辛炔修饰的Fab’与全部四个叠氮修饰的Fc6分子反应(图19)，产生一族Fab’-PEGy-环炔烃-叠氮-PEGx-Fc6结构，具有增加长度的臂(图20)。生成的臂的总长度是Fab’-PEG12-Fc6(对x＝0,y＝12而言)、Fab’-PEG24-Fc6(对x＝12,y＝12而言)、Fab’-PEG36-Fc6(对x＝24,y＝12而言)和Fab’-PEG48-Fc6(对x＝36,y＝12而言)。与四个叠氮修饰的Fc6蛋白的每一个(2.5mg/ml)的反应(8uL)是在0.1M磷酸钠，pH 7.0，过夜，在室温下，在存在或缺乏环炔烃修饰的Fab’(5mg/ml)情况下进行的。
图21显示了在还原和非还原条件下SDS-PAGE分析Fab’-环炔烃-叠氮-Fc6反应。在缺乏环炔烃修饰的Fab’(泳道5、7、9和11)情况下，全部四个叠氮修饰的Fc6蛋白质在还原和非还原凝胶上都给出单个带，确认了它们的二聚物，双手结构。在存在环炔烃修饰的Fab’(泳道 4、6、8和10)情况下，全部四个叠氮修饰的Fc6蛋白质在产生的反应中都被大大地消耗。在还原条件下，全部四个反应都给出具有Mr～57,000到62,000(箭头a)的产物。Fab’-PEG12-Fc6产物(泳道4)的大小约是1-2kD，比野生型阿达木单抗重链(泳道1)大，而Fab’-PEG24-Fc6(泳道6)，Fab’-PEG36-Fc6(泳道8)和Fab’-PEG48-Fc6(泳道10)产物的大小进一步随PEG连接子的总长度增加。在非还原条件下，两个产物被观察到，第一个产物为Mr～155,000到160,000(箭头a)，第二个为Mr～110,000到115,000(箭头b)。较大的Fab’-PEG12-Fc6产物(泳道4)大约是5kD，比阿达木单抗全部抗体(泳道1)大，与预期的双手产物一致，而较大的Fab’-PEG24-Fc6(泳道6)、Fab’-PEG36-Fc6(泳道8)和Fab’-PEG48-Fc6(泳道10)产物的大小仍然随PEG连接子总长度的增加进一步增加。
图22显示了通过SEC分析以确认双手结构(即两个Fab’手被附接到一个Fc6域)的较大反应产物，具有Mr～155,000到160,000的Fab’-PEG12-Fc6、Fab’-PEG24-Fc6、Fab’-PEG36-Fc6和Fab’-PEG48-Fc6反应。全部四个反应产物都展示出比阿达木单抗全部抗体短的保留时间，其随PEG连接子的大小的增加进一步减小，确认了通过SDS-PAGE分析观察到的双手结构。
Fab’-环炔烃-叠氮-Fc6产物的生物活性通过它们的中和TNF-α-介导的用放线菌素D处理的小鼠WEHI细胞上的细胞毒性的能力被评估。鼠WEHI-13VAR细胞株(ATCC CRL-2148)是从American Type Culture Collection(Rockville,MD)得到的，并且在用10％胎牛血清(FBS)和盘尼西林和链霉素(10U/ml)(从Life Technologies(Grand Island,NY)得到)补充的Gibco RPMI培养基1640(RPMI-1640)中生长。TNF-α细胞毒性分析(cytotoxityassays)是按照如下进行的。WEHI-13VAR细胞被平铺在从Thermo Fisher(Waltham,MA)得到的96孔Nunc白色细胞培养板上，以2×104细胞/孔，过夜，然后用从Sigma(St Louis,MO)得到的放线菌素D(0.5μg/ml)和TNF-α(0.2ng/ml)在缺乏或存在TNFR-IgG或其他抑制剂的情况下处理。在37℃/5％CO2下孵化24小时之后，细胞活性用CellTiter-Glo LuminescentCell Viability Assay Systems(Promega,Madison,WI)测定，测量存在于代谢活跃的细胞中的ATP的量和利用POLARstar luminometer(BMG LABTECH Inc.,Cary,NC)测量的发光。每个抑制剂用十个开始于10μg/ml的3倍系列稀释液稀释，并且被一式两份或一式三份地测量。细胞毒性数据利用下面的方程式被计算：(1样品荧光素酶读数/用单独放线菌素D处理的细胞的荧光素酶读数)×100％，并且以平均数±标准偏差的形式体现。依那西普(Enbrel)作为细胞毒性阳性对照被使用，Fc6作为阴性对照。
图23显示了通过对比Fab’-PEG12-Fc6、Fab’-PEG24-Fc6、Fab’-PEG36-Fc6和Fab’-PEG48-Fc6反应混合物与环炔烃修饰的Fab’(基于相等量的投入环炔烃修饰的Fab’)的TNF-α-介导的细胞毒性的中和。Fab’-PEG12-Fc6和Fab’-PEG24-Fc6反应混合物与投入环炔烃修饰的Fab’的TNF-α中和活性相比都展示出比得上的TNF-α中和活性(上半部分)。然而，Fab’-PEG36-Fc6和Fab’-PEG48-Fc6反应混合物在它们的TNF-α中和活性方面与投入环炔烃修饰的Fab’相比分别展示出1.5倍和2.0倍的增加(下半部分)。由于双手产物的量在每一个反应中仅仅代表全部环炔烃修饰的Fab’的10-20％，如通过SDS-PAGE估计的(图22)，Fab’-PEG36-Fc6和Fab’-PEG48-Fc6反应的双手产物估计比投入环炔烃修饰的Fab’分别大至少7.5倍和10倍。
实施例3：Fab-炔烃-叠氮-Fc6
Fab-炔烃-叠氮-Fc6是通过将叠氮修饰的Fc6与通过断裂Fab内含肽融合蛋白产生的炔烃修饰的或环炔烃修饰的Fab蛋白质反应制备的，如下所述。同样地，Fab-叠氮-炔烃-Fc6是通过将炔烃修饰的或环炔烃修饰的Fc6与通过断裂Fab内含肽融合蛋白产生的叠氮修饰的Fab蛋白质反应制备的。
阿达木单抗Fab内含肽融合蛋白是通过共转染表达载体pFUSE2ss-DE27-V-CLIg-hk(SEQ ID NO:115)和pPUSEss-DE27-V 1-CHIg-hG1-Mth-1(SEQ ID NO:116)或pFUSEss-DE27-V 1-CHIg-hG1-Mth-2(SEQ ID NO:117)产生的。
载体pFUSE2ss-DE27-V-CLIg-hk指导显示在SEQ ID NO:118中的阿达木单抗的前体kappa轻链(pre-kappa light chain)的表达。通过细胞信号肽酶断裂异源的IL-2信号序列提供显示在SEQ ID NO:119中的阿达木单抗的成熟kappa轻链。
载体pFUSEss-DE27-V 1-CHIg-hG1-Mth-1指导显示在SEQ ID NO:120中的第一类前体重链内含肽嵌合多肽的表达，其中阿达木单抗重链VH和CH1域在它们C-末端被连接到RIR1自我剪接内含肽的N-末端(在自动断裂位点)。通过细胞信号肽酶断裂异源IL-2信号序列提供显示在SEQ ID NO:121中的成熟重链内含肽融合蛋白。SEQ ID NO:119和SEQ ID NO:121蛋白质同时地包括被分泌进入细胞培养液的阿达木单抗Fab-1-内含肽融合蛋白质。
载体pFUSEss-DE27-V 1-CHIg-hG1-Mth-2指导显示在SEQ ID NO:122中的第二类前体重链内含肽嵌合多肽的表达，其中阿达木单抗重链VH和CH1域在它们的C-末端被连接到RIR1自我剪接内含肽的N-末端(在自动断裂位点)。通过细胞信号肽酶断裂异源IL-2信号序列提供显示在SEQ ID NO:123中的成熟重链内含肽融合蛋白。SEQ ID NO:119和SEQ IDNO:123蛋白质同时地包括被分泌进入细胞培养液的阿达木单抗Fab-2-内含肽融合蛋白质。
蛋白质生产是通过在CHO-DG44细胞中瞬时表达进行的，如在实施例1中描述的，通过共转染SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:116产生阿达木单抗Fab-1-内含肽融合蛋白质，通过共转染SEQ ID NO:115和SEQ ID NO:117产生阿达木单抗Fab-2内含肽融合蛋白质。
炔烃修饰的阿达木单抗Fab蛋白质实质上是通过用50mM胱氨酰-炔丙胺断裂阿达木单抗Fab内含肽融合蛋白质产生的，如实施例1中描述的。阿达木单抗Fab-1-内含肽融合蛋白质用胱氨酰-炔丙胺断裂以产生炔烃修饰的阿达木单抗Fab-1蛋白质，其是SEQ ID NO:119和SEQ ID NO:124的异二聚物蛋白质。阿达木单抗Fab-2-内含肽融合蛋白质用胱氨酰-炔丙胺断裂以产生炔烃修饰的阿达木单抗Fab-2蛋白质，其是SEQ ID NO:119和SEQ ID NO:125的异二聚物蛋白质。
叠氮修饰的阿达木单抗Fab蛋白质实质上是通过用50mM胱氨酰-3-叠氮炔丙胺断裂阿达木单抗Fab-内含肽融合蛋白质产生的，如实施例1中描述的。阿达木单抗Fab-1-内含肽融合蛋白质用胱氨酰-3-叠氮炔丙胺断裂以产生叠氮修饰的阿达木单抗Fab-1蛋白质，其是SEQ ID NO:119和SEQ ID NO:126的异二聚物蛋白质。阿达木单抗Fab-2-内含肽融合蛋白质用胱氨酰-3-叠氮炔丙胺断裂以产生叠氮修饰的阿达木单抗Fab-2蛋白质，其是SEQ IDNO:119和SEQ ID NO:127的异二聚物蛋白质。
阿达木单抗Fab-1-炔烃-叠氮-Fc6和阿达木单抗Fab-2-炔烃-叠氮-Fc6经由炔烃修饰的阿达木单抗Fab-1蛋白质或炔烃修饰的阿达木单抗Fab-2蛋白质与Az-DKTHT-Fc6蛋白质(图6)或Az-PEGx-DKTHT-Fc6蛋白质(图7)反应被制备。
三(3-羟基丙基三唑基甲基)胺(Tris(3-hydroxypropyltriazolylmethyl)amine)(THTPA)是如Hong et al.,Angew.Chem.Int.Ed.48,1–7(2009)所描述的制备的。反应是在0.1M磷酸钠(pH 7.0)中进行的，连接子-Fc的浓度为5mgs/mL或更大，Fab-A：连接子-Fc的摩尔比>2:1。向反应中加入最终浓度为0.0001M CuSO4、0.0005M THTPA。反应通过加入最终浓度0.005M氨基胍和0.005M抗坏血酸钠被引发。在封闭管中在室温下孵化12-18小时之后，反应混合物被施加到塞满蛋白质A(GELifesciences,NJ)的层析柱上以除出过量的反应剂和未反应的Fab-A，用PBS淋洗，用0.1M甘氨酸-HCl(pH 2.7)洗脱，并且立即通过加入1.0MTris-HCl,pH 9.0被中和。洗脱出的阿达木单抗Fab-1-炔烃-叠氮-Fc6和阿达木单抗Fab-2-炔烃-叠氮-Fc6产品用PBS透析。
阿达木单抗Fab-1-叠氮-炔烃-Fc6和阿达木单抗Fab-2-叠氮-炔烃-Fc6经由叠氮修饰的阿达木单抗Fab-1或叠氮修饰的阿达木单抗Fab-2与环炔烃修饰的Fc6蛋白质反应被制备。
环炔烃修饰的Fc6蛋白质实质上如实施例1中描述的利用DIBAC-PEG12-硫酯(表1)和其他的同样地制备的DIBAC-PEGx-硫酯和DIBAC-PEGx-DKTHT-硫酯被制备。
实施例4：N-末端叠氮修饰的Fc蛋白质
一系列叠氮修饰的Fc蛋白质(N3-Px-Fc)(每个具有在它的N-末端的叠氮官能团，和可选择地PEG连接子)是通过将Fc6蛋白质与具有序列叠氮乙酰基-Px-DKTHT-硫酯(x＝0、12、24、36、48)的5个硫酯反应制备的。反应是在缺乏TCEP情况下进行的，以最小化任何叠氮基团还原为伯胺。叠氮乙酰基-Px-DKTHT-苯硫酚硫酯(x＝12、24、36)被显示在表1中。叠氮乙酰基-DKTHT-硫酯是如实例1所描述的制备的(C32H45O10N11S[M+H]+的计算值为776.8,实测值为776.3)。叠氮乙酰基-PEG48-DKTHT-苯硫酚通过固相，通过从Quanta BioDesign得到的Fmoc-PEG12-OH和Fmoc-PEG36-OH的多步缩合(sequential condensation)被制备(C134H247N13O60S[M+H]+的计算值为3032.5，实测值为 3032.8)。结构式如下：
每个反应(2mL)包含50mM MES pH 6.5、10mM巯基苯基乙酸、2.2mg的Fc6和五个如下的硫酯化合物中的一个：叠氮乙酰基-DKTHT-苯硫酚(5mg)、叠氮乙酰基-PEG12-DKTHT-苯硫酚(5mg)、叠氮乙酰基-PEG24-DKTHT-苯硫酚(10mg)、叠氮乙酰基-PEG36-DKTHT-苯硫酚(10mg)或叠氮乙酰基-PEG48-DKTHT-苯硫酚(20mg)。反应在室温进行20小时，用0.1mL的Tris HCl pH 9.0中和，以12,000x g被离心分离，并且被施加到HiTrap蛋白质A HP柱上。柱用12体积的PBS淋洗，N3-Px-Fc蛋白质然后用0.1M甘氨酸HCl pH 2.7洗脱，并且用1/20体积的1.0M Tris HCl pH 9.0中和。通过A280的峰级分被组合在一起，在PD-10柱上被脱盐，并且利用Amicon Ultracel-3离心过滤装置被浓缩。
图24显示了通过还原(左)和非还原(右)条件下的SDS-PAGE的纯化的N3-Px-Fc蛋白质：Fc6对照(泳道a)、N3-P0-Fc(泳道b)、N3-P12-Fc(泳道c)、N3-P24-Fc(泳道d)、N3-P36-Fc(泳道e)和N3-P48-Fc(泳道f)。N3-Px-Fc蛋白质的大小随PEG连接子的长度增加。另外，制备的不带有TCEP的N3-Px-Fc蛋白质(图24)的大小不能通过SDS-PAGE与制备的带有TCEP的N3-Px-Fc(图17)的大小相区分。
实施例5：GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白
一系列GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白(GLP1-P4-DN-Px-Fc)是通过将GLP-1(胰高糖素样肽1)类似物(其经进一步修饰具有环辛炔官能团)与实施例4的五个N3-Px-Fc蛋白质中的每一个反应制备的。GLP-1类似物的序列HGEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGRG-PEG3-C-NH2(HGEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGRG是SEQ ID NO:202)相当于天然GLP-1肽的残基7-37，其中甘氨酸在位置8替代丙氨酸，谷氨酸在位置22替代甘氨酸。另外，GLP-1类似物在它的C-末端具有PEG3连接子和半胱氨酸残基，用于附接环辛炔官能团。这个GLP-1类似物，gly8-glu22-GLP-1(7-37)-PEG3-cys-NH2通过SPPS被制备(C165H253N43O53S[M+H]+的计算值为3720.3，实测值为 3721.3)。
环辛炔官能团被添加到gly8-glu22-GLP-1(7-37)-PEG3-cys-NH2上，该添加利用异双功能连接子，DBCO-PEG4-马来酰亚胺，其包含能够与C-末端半胱氨酸残基上的自由硫醇基反应的马来酰亚胺基团(图25)。DBCO-PEG4-马来酰亚胺(C50H54N4O9,分子量854.92)是从Click Chemistry Tools(Scottsdale,AZ)得到的。在使用之前，连接子以25mg/mL的浓度被溶解在从Sigma-Aldrich(St.Louis,MO)得到的二甲亚砜(DMSO)中。反应(0.4mL)包含50mM MES pH 6.5、5mM EDTA、0.45mg的gly8-glu22-GLP-1(7-37)-PEG3-cys-NH2肽和0.9mg/mL的DBCO-PEG4-马来酰亚胺连接子。反应在室温进行30分钟。过量的未反应的连接子利用从GE Life Sciences得到的5mL HiTrap脱盐柱被除去。图25显示了生成的环辛炔修饰的GLP-1类似物反应产物GLP1-P7-DBCO)的结构(。
GLP1-P7-DBCO单独地与五个N3-Px-Fc蛋白质中的每一个反应(图26)，生成一系列GLP1-P7-三唑-Px-Fc杂合免疫球蛋白(图27)。每个反应(1.5mL)包含0.1M磷酸钠pH 7.0、0.375mg的GLP1-P7-DBCO肽和0.5mg的五个N3-Px-Fc蛋白质中的每一个。反应在室温下进行3.5小时，反应通过HiTrap蛋白A HP层析被纯化，脱盐和浓缩，如实施例4所描述的。
图28显示了通过还原条件(左)和非还原(右)条件下的SDS-PAGE的纯化的GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白：Fc6对照(泳道a)、GLP1-P4-DN-P0-Fc(泳道b)、GLP1-P4-DN-P12-Fc(泳道c)、GLP1-P4-DN-P24-Fc(泳道d)、GLP1-P4-DN-P36-Fc(泳道e)和GLP1-P4-DN-P48-Fc(泳道f)。GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白的大小随PEG连接子的长度增加，比得上N3-Px-Fc蛋白质。
图29通过还原条件下的SDS-PAGE直接比较了GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白和N3-Px-Fc蛋白质：Fc6对照(泳道a)、N3-P0-Fc(泳道b)、GLP1-P4-DN-P0-Fc(泳道c)、N3-P12-Fc(泳道d)、GLP1-P4-DN-P12-Fc(泳道e)、N3-P24-Fc(泳道f)、GLP1-P4-DN-P24-Fc(泳道g)、N3-P36-Fc(泳道h)、GLP1-P4-DN-P36-Fc(泳道i)、N3-P48-Fc(泳道j)、GLP1-P4-DN-P48-Fc(泳道k)。每个N3-Px-Fc蛋白转化为相应的GLP1-P4-DN-Px-Fc杂合免疫球蛋白的转化率约95％。
实施例6：GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白的生物活性
GLP1-P7-三唑-Px-Fc杂合免疫球蛋白的生物活性在基于细胞的试验中被评估，该试验测量表达人GLP-1受体(GLP-1R)的细胞中的诱导cAMP合成。为分离GLP-1R表达细胞，来自Invitrogen(Grand Island,NY)的Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM)、胎牛血清(FBS)、青霉素、链霉素和遗传霉素硫酸盐(geneticin sulfate)(G418)从Corning(Manassas,VA)得到，CalPhos转染试剂盒是从Clontech(Mountain View,CA)得到的，人GLP-1受体表达质粒是从GeneCopoeia(Rockville,MD)得到的，抗人GLP-1R-藻红蛋白单克隆抗体是从R&D Systems(Minneapolis,MN)得到的。为cAMP分析，3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)是从Sigma-Aldrich(编号I5879)得到的，cAMP dynamic 2试剂盒是从CisbioBioassays(Bedford,MA)得到的，GLP-1(7-37)肽是从AnaSpec(编号20761)得到的。
GLP-1R表达细胞通过将GLP-1R表达载体(EX-A0510-M02)转染入人293T胚胎肾细胞，利用CalPho哺乳动物转染试剂盒被制备。转染的细胞在用10％FB S和青霉素和链霉素(10IU/ml)补充的DMEM中生长，对稳定转染子的选择是在包含2mg/ml G418的相同培养基中进行的。GLP-1R表达通过流式细胞检测分析利用抗人GLP-1R-藻红蛋白单克隆抗体被评估。
为了cAMP分析，293T-GLP-1R细胞以5,000、8,000或10,000细胞/孔的密度以20uL培养基/孔被平铺在384-孔组织培养处理的白色微量滴定板(Corning编号3704)上，过夜。次日，包含0.5mM IBMX的20uL PBS中的系列稀释的激动剂(GLP-1肽或GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白)被加入到细胞，细胞然后在37℃孵化1、4或24小时。刺激之后，cAMP含量水平通过均匀时间分辨荧光(Homogeneous Time-Resolved Fluorescence)(HTRF)，在ClarioStar酶标仪(BMG Labtech)中，利用Cisbio cAMP dynamic 2试剂盒，根据制造商的使用说明被测定。加入HTRF检测试剂、用Cryptate标记的抗-cAMP Mab(20uL)和用d2染料标记的cAMP(20uL)之后，板在室温被孵化1小时，计算荧光比(665nm/620nm)并用于通过四参数拟合cAMP标准曲线(four-parameter fit to a cAMP standard curve)测定细胞裂解物中的cAMP浓度。
图30显示了GLP-1(7-37)肽和GLP1-P7-DN-Px-Fc蛋白质(x＝0、12、24、36、48)的结果。全部五个GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白诱导的cAMP含量水平比得上GLP-1(7-37)肽。无论细胞暴露于激动剂1、4或24小时，通过GLP-1(7-37)的刺激是类似的，在24小时的EC50为～2nM，然而通过GLP1-三唑-Fc杂合免疫球蛋白的刺激随细胞被暴露于激动剂更长时间显著地增加，在24小时的EC50为～0.4nM。
实施例7：N-末端环辛炔-Fc蛋白质
一系列环辛炔修饰的Fc蛋白质(DIBAC-P11-DN-Px-Fc)(每个具有在它的N-末端的环辛炔官能团)通过将同双功能环辛炔连接子与实施例4的叠氮修饰的N3-Px-Fc蛋白质反应被制备。显示在图31中的连接子，DIBAC-PEG11-DIBAC是从CPC Scientific得到的(C74H102N6O17[M+H]+计算值为1346.6，实测值为1346.4)。这个连接子的PEG11部分来源于二氨基-dPEG11-二胺(Quanta Biodesigns No.10361)，具有结构：[-NH-CH2-(CH2-CH2-O)3-(CH2)3-CO-NH-(CH2-CH2-O)5-(CH2)2-CO-NH-CH2-(CH2-CH2-O)3-(CH2)3-NH-]。
DIBAC-PEG11-DIBAC单独地与五个N3-Px-Fc蛋白质中的每一个反应(图31)，生成一系列DIBAC-P11-DN-Px-Fc蛋白质(图32)。显示了DIBAC-PEG11-DIBAC与N3-P0-Fc蛋白质反应以生成DIBAC-P11-DN-P0-Fc的代表性结构。反应(1mL)通过将84mg的N3-Px-Fc蛋白质加入到11.25mg的DIBAC-PEG11-DIBAC连接子(其在0.02M磷酸钠pH 7.0的水-乙醇溶液(0.64:0.36体积/体积)中)中被引发。反应在室温进行12小时，DIBAC-PEG11-DIBAC连接子然后通过加入1mL的PBS，充分混合并且在12,000x g下离心(其分离出作为高密度，油相的连接子)被提取。包含在上面水相中的想要的DIBAC-P11-DN-P0-Fc产物通过HiTrap蛋白质AHP层析被纯化，脱盐和浓缩，如实施例4所描述的。
图33显示了通过还原条件下的SDS-PAGE的DIBAC-P11-DN-P0-Fc反应产物：Fc6对照(泳道b)、未纯化的反应产物(泳道c-e)、纯化的N3-P0-Fc蛋白质(泳道f)和纯化的DIBAC-P11-DN-P0-Fc蛋白质(泳道g)。大约70％的N3-P0-Fc(I)蛋白质被转变成具有预期大小的DIBAC-P11-DN-P0-Fc(II)蛋白质的产物。
实施例8：DNA-三唑-Fc杂合免疫球蛋白
一系列的DNA-三唑-Fc杂合免疫球蛋白(DNA-P11-DN-Px-Fc)通过将叠氮修饰的DNA或RNA与实施例7的五个DIBAC-P11-DN-Px-Fc蛋白质中的每一个反应被制备。图34显示了叠氮修饰的DNA 5AzD-let7d，的结构，其具有针对成熟人hsa-let-7d-5p miRNA的DNA编码链的序列5’-AGAGGTAGTAGGTTGCATAGTT-3’(SEQ ID NO:203)(www.mirbase.org,Accession No.MIMAT0000065)。5AzD-let7d寡核苷酸(5AzD-let7d)是从Integrated DNATechnologies(Coralville,IA)得到的。使用之前，5AzD-let7d(分子量7187.8)被溶解在10mM Tris HCl，1mM EDTA中。
5AzD-let7d单独地与每个DIBAC-P11-DN-Px-Fc蛋白质反应(图34)反应，生成一系列DNA-三唑-Fc杂合免疫球蛋白(图35)。显示了5AzD-let7d与DIBAC-P11-DN-P0-Fc蛋白质反应的代表性结果。反应(20ul)包含0.1M磷酸钠pH 7.0、50ug的5AzD-let7d或它们的一系列的两倍稀释液和5.7ug的DNA-P11-DN-Px-Fc蛋白质。反应在室温下进行2小时。
图36显示了通过还原条件下的SDS-PAGE的反应产物：5AzD-let7d寡核苷酸浓度(mg/ml)如下：标记物(泳道a)、0(泳道b)、2.5(泳道c)、1.25(泳道d)、0.063(泳道e)、0.031(泳道f)、0.016(泳道g)、0.08(泳道h)。大约90％的DIBAC-P11-DN-P0-Fc(II)蛋白质被转化成具有预期大小的DNA-ND-P11-DN-PEG0-Fc(III)杂合免疫球蛋白的产物。
实施例9：N-末端叠氮-Mab蛋白质
一系列叠氮修饰的曲妥珠单抗蛋白质(N3-Px-Hc)(每个具有在它的重链的N-末端的叠氮官能团，和可选择地PEG连接子)通过将曲妥珠单抗蛋白质变体，cys1H-IgG1，与具有序列叠氮乙酰基-Px-DKTHT-苯硫酚的硫酯反应被制备(图37)。
Cys1H-IgG1由显示在SEQ ID NO:128中的野生型曲妥珠单抗轻链和变体曲妥珠单抗重链组成，在它的重链N-末端具有半胱氨酸残基。cys1H-IgG1重链最初初始地被表达为变体曲妥珠单抗前体重链，其显示在SEQ ID NO:167、SEQ ID NO:168和SEQ ID NO:169中，分别具有SHH信号肽、IFN信号肽和CETP信号肽。通过细胞信号肽酶断裂异源信号序列提供具有N-末端半胱氨酸的成熟重链蛋白质，其序列显示在SEQ ID NO:166中。
第二系列叠氮修饰的曲妥珠单抗蛋白质(N3-Px-Lc)(每个具有在它的轻链的N-末端的叠氮官能团，和可选择地PEG连接子)通过将曲妥珠单抗蛋白质变体，cys1L-IgG1，与具有序列叠氮乙酰-Px-DKTHT-苯硫酚的硫酯反应被制备(图38)。
Cys1L-IgG1由显示在SEQ ID NO:129中的野生型曲妥珠单抗重链和变体曲妥珠单抗轻链组成，在它的重链N-末端具有半胱氨酸残基。cys1L-IgG1轻链最初被初始地表达为变体曲妥珠单抗前体轻链，其显示在SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:132,和SEQ ID NO:133中，分别具有SHH信号肽、IFN信号肽和CETP信号肽。通过细胞信号肽酶断裂异源信号序列提供具有N-末端半胱氨酸的成熟轻链蛋白质，其序列显示在SEQ ID NO:130中。
合适的轻和重链表达载体被共转染以产生cys1H-IgG1和cysL-IgG蛋白质。蛋白质产物是通过在CHO-DG44细胞中瞬时表达进行的，适合无血清悬浮培养，之后蛋白质A纯化，如实施例1所描述的。
实施例10：Mertansine-三唑-曲妥珠单抗杂合免疫球蛋白
一系列Mertansine-三唑-曲妥珠单抗杂合免疫球蛋白通过将maytansinoid DM1(mertansine)(其被进一步修饰具有环炔烃官能团)与实施例9的N3-Px-Hc和N3-Px-Lc蛋白质的每一个反应被制备。
DM1(自由硫醇形式；M.W.737.5g/摩尔)如先前在U.S.Patent Nos.5,208,020和6,333,410B1(其通过参考被并入本文)中所描述的被制备。环辛炔官能团利用DBCO-PEG4-马来酰亚胺异双功能连接子被添加到DM1上(图39)，该连接子包含能够与DM1的自由硫醇基团反应的马来酰亚胺基团。DM1在DMSO中利用实施例5的方法与DBCO-PEG4-马来酰亚胺反应。环辛炔(cycloctyne)修饰的DM1产物(DM1-P4-DBCO)通过HPLC被纯化，并且使用之前被溶解在DMSO中。
DM1-P4-DBCO单独地与五个N3-Px-Hc蛋白质中的每一个反应(图40)，生成一系列的在曲妥珠单抗重链的N-末端用DM1修饰的mertansine-三唑曲妥珠单抗杂合免疫球蛋白(M1-P4-三唑-Px-Hc)(图41)。
DM1-P4-DBCO单独地与五个N3-Px-Lc蛋白质中的每一个反应(图42)，生成一系列的在曲妥珠单抗轻链的N-末端用DM1修饰的mertansine-三唑曲妥珠单抗杂合免疫球蛋白(M1-P4-三唑-Px-Hc)(图41)。
mertansine-三唑曲妥珠单抗杂合免疫球蛋白作为新型抗体药物轭合物的功效被评估了并且与从Genentech(South San Francisco,CA)得到的ado-曲妥珠单抗emtansine对比，利用如U.S.Patent No.7,521,541B2(其通过参考被并入本文)中所描述的体外细胞增殖试验和体内肿瘤生长抑制试验。
实施例11：N-末端四嗪-Fc蛋白质(N-terminal Tetrazine-Fc proteins)
一系列四嗪修饰的Fc蛋白质(Tet-Px-Fc)(每个具有在它的N-末端的四嗪基团，和可选择地PEGx连接子)通过将异双功能连接子与实例4的叠氮修饰的N3-Px-Fc蛋白质反应被制备。图44显示了四嗪-DBCO异双功能连接子，其具有在一端的能够与N3-Px-Fc蛋白质的叠氮基团反应的环辛炔基团(cycloctyne group)和在另一端的四嗪基团。四嗪DBCO连接子是从Click Chemistry Tools(产品编号1022；C32H29N7O6S，质子化了的；分子量639.68，质子化了的)得到的。在使用之前，四嗪-DBCO以25mg/mL的浓度被溶解在水中。
四嗪-DBCO单独地与每个N3-Px-Fc蛋白质反应(图44)，生成相应系列的Tet-Px-Fc蛋白质(图45)。反应(0.72mL)包含0.1M磷酸钠pH 7.0、0.1875mg的四嗪-DBCO连接子和0.6mg的N3-Px-Fc蛋白质。反应在室温进行3.5小时。过量的未反应的连接子通过HiTrap蛋白质A HP层析被除去。
图46显示了通过还原(左)和非还原(右)条件下的SDS-PAGE的纯化的Tet-Px-Fc蛋白质：Fc6对照(泳道a)、Tet-P0-Fc(泳道b)、Tet-P12-Fc(泳道c)、Tet-P24-Fc(泳道d)、Tet-P36-Fc(泳道e)和Tet-P48-Fc(泳道f)。在还原和非还原条件下，Tet-Px-Fc蛋白质的SDS-PAGE上的大小随PEG连接子长度增加而增加。另外，通过还原条件下的SDS-PAGE，每个Tet-Px-Fc蛋白质比相应的N3-Px-Fc蛋白质大(图50)。
实施例12：N-末端反式环辛烯-Fc蛋白质
一系列反式环辛烯修饰的Fc蛋白质(Tco-Px-Fc)(每个具有在它的N-末端的反式环辛烯基团，和可选择地PEGx连接子)通过将异双功能连接子与实施例4的叠氮修饰的N3-Px-Fc蛋白质反应被制备。图47显示了TCO-PEG12-DBCO异双功能连接子，其具有在一端的能够与N3-Px-Fc蛋白质的叠氮基团反应的环辛炔基团，和在另一端的反式环辛烯。TCO-PEG12-DBCO连接子是从Click Chemistry Tools(产品编号 1005；C54H81N3O16；分子量1028.23)得到的。在使用之前，TCO-PEG12-DBCO以100mg/mL的浓度溶解在DMSO中。
TCO-PEG12-DBCO单独与每个N3-Px-Fc蛋白质反应(图47)，生成相应系列的Tco-P12-Px-Fc蛋白质(图48)。显示了TCO-PEG12-DBCO与N3-P36-Fc蛋白质反应的代表性结果。反应(6uL)包含0.1M磷酸钠pH 7.0、0.2mg的TCO-PEG12-DBCO连接子或在DMSO中的它的一系列双倍稀释液和5ug的N3-P36-Fc蛋白质。反应在室温进行3.5个小时。
图49显示了通过还原条件下的SDS-PAGE的Tco-P12-Px-Fc蛋白质：Tco-P12-DBCO连接子浓度(mg/ml)如下：32(泳道a)、16(泳道b)、8(泳道c)、4(泳道d)、2(泳道e)、1(泳道f)、0.5(泳道g)、0.25(泳道h)、0.125(泳道i)和0(泳道j)。N3-P36-Fc(I)蛋白质转化成Tco-P12-P36-Fc(II)蛋白质实质上是在Tco-P12-DBCO连接子浓度为1mg/ml(泳道f)下完成的。在进一步的研究中，因此得到的Tco-P12-P36-Fc蛋白质通过HiTrap蛋白质A HP层析被纯化，脱盐和浓缩，如实施例4中所描述的。
为了检测Tco-P12-P36-Fc蛋白质与四嗪官能团的反应性，纯化的Tco-P12-P36-Fc蛋白质首先与异双功能四嗪-DBCO连接子反应以制备DBCO-TT-P12-P36-Fc蛋白质，该蛋白质通过蛋白质A被纯化，然后检测它的与从Quanta Biodesigns(产品编号10525，C48H98N4O23，分子量1099.30)得到的叠氮基-PEG-胺连接子，NH2-PEG23-N3，的反应能力。检测反应(6uL)包含0.1M磷酸钠pH 7.0、0.2mg的NH2-PEG23-N3连接子或它的一系列双倍稀释液和5ug的DBCO-TT-P12-P36-Fc蛋白质。反应在室温下进行1小时。
图50显示了通过还原条件下的SDS-PAGE的反应产物：NH2-PEG23-N3连接子浓度如下：0.12(泳道a)、0.06(泳道b)、0.03(泳道c)、0.015(泳道d)、0.0075(泳道e)、0.0038(泳道f)、0.002(泳道g)、0.001(泳道h)、0(泳道i)。DBCO-TT-P12-P36-Fc(III)蛋白质，但不是Tco-P12-P36-Fc蛋白质(未显示)，被转化成预期的NH2-P23-ND-TT-P12-P36-Fc(IV)蛋白质，确认了Tco-P12-P36-Fc蛋白质与四嗪官能团的反应性。
实施例13：GLP1-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白
一系列的GLP1-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白(GLP1-P3-TT-Px-Fc)通过将反式环辛烯修饰的GLP-1类似物与实施例11的Tet-Px-Fc蛋白质反应被制备。GLP1-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白也通过将四嗪修饰的GLP-1类似物与实施例12的Tco-Px-Fc蛋白质反应被制备。
为了制备反式环辛烯修饰的GLP-1类似物，gly8-glu22-GLP-1(7-37)-PEG3-cys-NH2肽与异双功能连接子(TCO-PEG3-马来酰亚胺)反应，该连接子包含能够与C-末端半胱氨酸残基上的自由硫醇基团反应的马来酰亚胺基团(图51)。TCO-PEG3-马来酰亚胺(C26H41N3O8，分子量523.62)是从Click Chemistry Tools(产品编号 1002)得到的。使用之前，连接子以25mg/mL的浓度被溶解在DMSO中。反应(0.42ml)包含 50mM MES pH 6.5、5mMEDTA、0.45mg的gly8-glu22-GLP-1(7-37)-PEG3-cys-NH2肽和0.375mg的TCO-PEG3-马来酰亚胺连接子。反应在室温进行60分钟。过量的未反应的连接子通过缓冲液更换成0.02M磷酸钠pH 7.0，利用5mL HiTrap脱盐柱被除去。图51显示了反式环辛烯修饰的GLP-1类似物(GLP1-P6-Tco)的结构。
GLP1-P6-Tco肽单独地与每个Tet-Px-Fc蛋白质反应(图52)，生成GLP1-P3-TT-Px-Fc系列的杂合免疫球蛋白(图53)。反应(0.99ml)包含0.1M磷酸钠pH 7.0、0.145mg的GLP1-P6-Tco肽和0.33mg的每个Tet-Px-Fc蛋白质。反应在室温下进行30分钟。GLP1-P6-TT-Px-Fc杂合免疫球蛋白然后通过在HiTrap蛋白质A HP上层析被纯化。
为了制备四嗪修饰GLP-1类似物，gly8-glu22-GLP-1(7-37)-PEG3-cys-NH2肽与异双功能连接子(四嗪-PEG4-马来酰亚胺)反应，该连接子包含能够与C-末端半胱氨酸残基上的自由硫醇基团反应的马来酰亚胺基团(图54)。四嗪-PEG4-马来酰亚胺(C29H39N7O,分子量613.66)是从Click Chemistry Tools(产品编号A139)得到的。使用之前，连接子以25mg/mL的浓度被溶解在DMSO中，反应(0.42ml)包含50mM MES pH 6.5、5mM EDTA、0.45mg的gly8-glu22-GLP-1(7-37)-PEG3-cys-NH2肽和0.375mg的四嗪-PEG4-马来酰亚胺连接子。反应在室温下进行60分钟。过量的未反应的连接子通过缓冲液更换成0.02M磷酸钠pH 7.0，利用5mL HiTrap脱盐柱被除去。图54显示四嗪修饰的GLP-1类似物(GLP1-P7-Tet)的结构。
GLP1-P7-Tet肽单独地与每个Tco-Px-Fc肽反应(图55)，生成GLP1-P7-TetTco-Px-Fc系列的杂合免疫球蛋白(图56)。反应(0.99ml)包含0.1M磷酸钠pH 7.0、0.145mg的GLP1-P7-Tet肽和0.33mg的每个Tco-Px-Fc蛋白质。反应在室温下进行30分钟。GLP1-P7-Tet/Tco-Px-Fc杂合免疫球蛋白然后通过在HiTrap蛋白质A HP上层析被纯化。
图57显示了通过还原(左)和非还原(右)条件下的SDS-PAGE的纯化的GLP1-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白：Fc6对照(泳道a)、GLP1-P6-TT-P0-Fc(泳道b)、GLP1-P6-TT-P12-Fc(泳道c)、GLP1-P6-TT-P24-Fc(泳道d)、GLP1-P6-TT-P36-Fc(泳道e)和GLP1-P6-TT-P48-Fc(泳道f)。GLP1-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白的大小随PEG连接子长度增加，可比得上Tet-Px-Fc蛋白质。
图58通过还原条件下的SDS-PAGE直接对比了N3-Px-Fc(I)蛋白质、Tet-Px-Fc(II)蛋白质和GLP1-dihydropyridizine-Fc(III)杂合免疫球蛋白：Fc6对照(泳道a)、N3-P0-Fc(泳道b)、Tet-P0-Fc(泳道c)、GLP1-P6-TT-P0-Fc(泳道d)、N3-P12-Fc(泳道e)、Tet-P12-Fc(泳道f)、GLP1-P6-TT-P12-Fc(泳道g)、N3-P24-Fc(泳道h)、Tet-P24-Fc(泳道i)、GLP1-P6-TT-P24-Fc(泳道j)、N3-P36-Fc(泳道k)、Tet-P36-Fc(泳道l)、GLP1-P6-TT-P36-Fc(泳道m)、N3-P48-Fc(泳道n)、Tet-P48-Fc(泳道o)、GLP1-P6-TT-P48-Fc(泳道p)。每个Tet-Px-Fc蛋白质到相应的GLP1-P6-TT-Px-Fc杂合免疫球蛋白的转化是约92％。
图59显示了GLP1-P7-DBCO与N3-P36-Fc反应的时间进程以及GLP1-P6-Tco与Tet-P36-Fc反应的时间进程。反应如上面描述的进行指明的各种时间，除非每个反应通过加入过量的竞争剂被终止。对于GLP1-P7-DBCO与N3-P36-Fc的反应，叠氮化钠被加入到最终浓度为0.1％，对于GLP1-P6-Tco与Tet-P36-Fc的反应，TCO-PEG3-马来酰亚胺被加入到最终浓度为3.5mg/ml。每个反应被还原条件下的SDS-PAGE分析：(上半部分)单独N3-P36-Fc(泳道a)，N3-P36-Fc+GLP1-P7-DBCO为下列的时间0、1、2、4、6、24、48和72小时；(下半部分)单单Tet-P36-Fc(泳道a)，单单Tet-P36-Fc+TCO-PEG3-马来酰亚胺(泳道b)，Tet-P36-Fc+GLP1-P6-Tco为下列的时间，-4、-2、-1、0、1、2、4分钟。导致GLP1-P7-DN-P36-Fc(II)形成的GLP1-P6-Tco与Tet-P36-Fc(I)的反应快得多，在1分钟内反应达到完成，然而导致GLP1-P7-DN-P36-Fc(II)形成的GLP1-P7-DBCO与N3-P36-Fc(I)的反应6小时后仅仅完成50％。
GLP1-P6-dihydropyridizine-Px-Fc杂合免疫球蛋白的生物活性在基于细胞的试验中被评估，如实例6中所描述的。图60显示了GLP-1(7-37)肽和GLP1-P6-TT-Px-Fc蛋白质(x＝0、12、24、36、48)的结果。全部五个GLP1-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白诱导的cAMP含量水平比得上GLP-1(7-37)肽。无论细胞暴露于激动剂1、4或24小时，通过GLP-1(7-37)的刺激是类似的，在24小时EC50为～2nM，然而通过GLP1-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白的刺激随细胞被暴露于激动剂更长时间显著地增加，在24小时EC50为～0.2nM。
实施例14：阿达木单抗Fab-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白
一系列Fab-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白(Fab-P3-TT-Px-Fc)通过将反式环辛烯修饰的Fab片段与实施例11的Tet-Px-Fc蛋白质反应被制备。Fab-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白也通过将四嗪修饰的Fab片段与实施例12的Tco-Px-Fc蛋白质反应被制备。
为了制备反式环辛烯修饰的Fab，TCEP处理的Fab与异双功能连接子(TCO-PEG3-马来酰亚胺)反应，该连接子包含能够与TCEP处理的Fab上的自由硫醇基团反应的马来酰亚胺基团(图61)。Fab片段是通过木瓜蛋白酶消化10mg从Abbott得到的阿达木单抗(HumiraTM)，利用PierceTM Fab Preparation Kit(Cat.No.44985)，按照制造商的使用说明生成的。消化之后，Fab片段通过在HiTrap蛋白质A HP上层析被纯化以除去Fc片段和未消化的抗体。包含Fab片段的流出级分被缓冲液更换成PBS，并且被浓缩到5mg/ml。
为了用TCEP部分还原Fab片段，反应(0.26ml)包含0.1M磷酸钠pH 7.0、0.5mg的Fab和0.08mg/ml TCEP。在室温孵化60分钟之后，反应用加入0.24ml的0.3M磷酸钠pH 7.0和0.22ml的水变成0.72ml。TCO-PEG3-马来酰亚胺连接子然后加入到反应中(0.12ml的浓度为50ug/ml的DMSO溶液)，并且反应在室温孵化20分钟。反式环辛烯修饰的Fab在PD-10柱上被缓冲液更换成0.02M磷酸钠pH 7.0以除去过量的连接子，最终产物被浓缩到2.7mg/ml。在这种条件下，大于90％的Fab重链和小于10％的Fab轻链通过TCO-PEG3-马来酰亚胺连接子被修饰。图61显示了反式环辛烯修饰的Fab蛋白质(Fab-P3-Tco)的结构。
Fab-P3-Tco蛋白质单独地与每个Tet-Px-Fc蛋白质反应(图62)，生成Fab-P3-TT-Px-Fc系列的杂合免疫球蛋白(图63)。反应(6ul)包含0.1M磷酸钠pH 7.0、3.6ug的Fab-P3-Tco蛋白质和1ug的每个Tet-Px-Fc蛋白质。反应在室温进行60分钟。
图64显示了通过还原条件下的SDS-PAGE的Fab-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白：标记物(泳道a)、阿达木单抗(泳道b)、Fab-P3-TT-P0-Fc(泳道c)、Fab-P3-TT-P12-Fc(泳道d)、Fab-P3-TT-P24-Fc(泳道e)、Fab-P3-TT-P36-Fc(泳道f)、Fab-P3-TT-P48-Fc(泳道g)、Fab-P3-Tco(泳道h)、Tet-P0-Fc(泳道i)、Tet-P12-Fc(泳道j)、Tet-P24-Fc(泳道k)、Tet-P36-Fc(泳道l)m Tet-P48-Fc(泳道m)。通过与阿达木单抗(泳道b)对比，Fab-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白具有预期的大小，显示出随PEG连接子长度增加，比得上Tet-Px-Fc蛋白质。每个Tet-Px-Fc到相应Fab-P3-TT-Px-Fc杂合免疫球蛋白的转化是约75％。
实施例15：奥氮平(Olanzapine)-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白
在这个实施例中，杂合免疫球蛋白用伯胺、仲胺或醇化合物的叠氮衍生物制备。叠氮衍生化合物可如在Pothukanuri,S.and Winssinger,N.,Org Lett.2007；9(11):2223-5(其通过参考被并入本文)中所描述被制备。伯胺、仲胺或醇化合物首先与氯烷基氯甲酸酯(chloroalkyl chloroformate)反应以得到氯烷基氨基甲酸酯，然后叠氮取代氯，提供叠氮烷基氨基甲酸酯。全部化学品都是从Sigma-Aldrich得到的。
奥氮平(Sigma Cat.No.O1141)首先与氯甲基氯甲酸酯反应，如2013年10月10日公开的U.S.Patent application 13/801,344，Publication No.US20130267505A1(通过参考被并入本文)中所描述的。奥氮平(60mmoles)和三乙胺(120mmoles)在无水二氯甲烷(250ml)中的溶液被加热到35℃直到澄清溶液形成，然后被冷却到5℃。氯甲基氯甲酸酯(90mmoles)然后经20分钟被加入。其他合适的氯烷基氯甲酸酯包括2-氯乙基氯甲酸酯、3-氯丙基氯甲酸酯和4-氯丁基氯甲酸酯。反应在室温下被搅拌30分钟，并且允许加热到室温。在室温15分钟之后，反应混合物用二氯甲烷(100ml)稀释，然后用饱和NaHCO3(75ml)水溶液和水(350ml)洗涤。有机相用MgSO4干燥并被过滤。有机相然后在真空下在45℃被浓缩到体积为150ml。混合物用30ml乙酸乙酯稀释并且进一步在真空下被蒸发(20-30ml)。混合物被冷却到室温，生成的固体沉淀物被过滤并且用乙酸乙酯冲涤。在真空下在35℃干燥90分钟之后，得到氯甲基2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5H-苯并[b]噻吩[2,3-e][1,4]二氮杂卓-5-羧酸酯(chloromethyl2-methyl-4-(4-methylpiperazin-1-yl)-5H-benzo[b]thieno[2,3-e][1,4]diazepine-5-carboxylate)。这个化合物(1.5eq)然后用NaN3(1.5eq)的CH3CN:H2O(1:1,0.3M)溶液在室温下处理8到36小时。反应混合物用乙酸乙酯稀释，有机相用水、盐水洗涤，然后用Na2SO4干燥并且在真空下被浓缩。通过HPLC的纯化提供叠氮奥氮平衍生物，叠氮甲基2-甲基-4-(4-甲基哌嗪-1-基)-5H-苯并[b]噻吩[2,3-e][1,4]二氮杂卓-5-羧酸酯(图65)。
叠氮奥氮平衍生物然后被用于制备系列的奥氮平-dihydropyridizine-Fc杂合免疫球蛋白(Ola-P12-TT-Px-Fc)，如下所述。在第一步骤中，叠氮奥氮平衍生物用反式环辛烯官能团修饰，该修饰利用异双功能连接子。在第二步骤中，反式环辛烯修饰的奥氮平与实施例11的Tet-Px-Fc蛋白质反应。
为了制备反式环辛烯修饰的奥氮平，叠氮奥氮平衍生物与异双功能连接子TCO-PEG12-DBCO反应(图65)，该连接子包含能够与叠氮基团反应的环辛炔基团。反应(1ml)包含0.5mg的叠氮奥氮平衍生物和5mg的TCO-PEG12-DBCO连接子的DMSO溶液。反应在室温进行3到20个小时。反式环辛烯修饰的奥氮平(Ola-P12-Tco)通过HPLC被纯化以除去过量的未反应的TCO-PEG12-DBCO连接子。使用之前，Ola-P12-Tco以1mg/mL的浓度被溶解在DMSO中。
Ola-P12-Tco单独地与每个Tet-Px-Fc蛋白质反应(图66)，生成Ola-P12-TT-Px-Fc系列的杂合免疫球蛋白(图67)。反应(1ml)包含0.1mg的GLP1-P7-Tet肽和0.33mg的每个Tco-Px-Fc蛋白质的DMSO溶液。反应在室温进行60分钟，Ola-P12-TT-Px-Fc杂合免疫球蛋白然后通过在HiTrap蛋白质A HP上层析被纯化。
讨论
本发明各方面提供了具有非蛋白质铰链的抗体的化学半合成，该铰链合并大结合域，例如Fab本身或受体胞外域。本发明涉及与同源蛋白质的天然结构和功能兼容和有效进行的连接反应的鉴别。本发明各方面还提供具有灵活的和可延长的非蛋白质链的化合物。本发明的实施方案中提供的抗体样分子具有作为治疗候选者的巨大潜能，该候选治疗者对它们的疾病目标具有改进的结合亲和力。
*序列表
<110> 丹尼尔·J·卡鹏
<120> 含有非肽连接的杂合免疫球蛋白
<130> 0893/86150-PCT/JPW/REB/PEA
<150> 61/953,650
<151> 2014-03-14
<160> 203
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 228
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CDKTHTCPPCPAPE的人IgG1 Fc区域
<400> 1
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
1 5 10 15
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
20 25 30
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
35 40 45
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
50 55 60
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
65 70 75 80
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
85 90 95
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
100 105 110
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
115 120 125
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
130 135 140
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
145 150 155 160
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
165 170 175
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
180 185 190
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
195 200 205
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
210 215 220
Ser Pro Gly Lys
225
<210> 2
<211> 684
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列CDKTHTCPPCPAPE的人IgG1 Fc区域的DNA
<400> 2
tgtgacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg ggggccctca 60
gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc 120
acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg 180
gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg 240
taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac 300
aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc 360
aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc 420
aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg 480
gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac 540
tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag 600
gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag 660
agcctctccc tgtctccggg taaa 684
<210> 3
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 3
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
20 25 30
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
35 40 45
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
50 55 60
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
65 70 75 80
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
85 90 95
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
100 105 110
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
115 120 125
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
130 135 140
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
145 150 155 160
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
165 170 175
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
180 185 190
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
195 200 205
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
210 215 220
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
225 230 235 240
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
245 250
<210> 4
<211> 785
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 4
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag 120
cacctgaact cctggggggg ccctcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc 180
tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc 240
ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc 300
cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc 360
aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc 420
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc 480
tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag 540
gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact 600
acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca 660
ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg 720
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tgactcgagc 780
ggccg 785
<210> 5
<211> 251
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 5
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
20 25 30
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
35 40 45
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
50 55 60
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
65 70 75 80
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
85 90 95
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
100 105 110
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
115 120 125
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
130 135 140
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
145 150 155 160
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
165 170 175
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
180 185 190
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
195 200 205
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
210 215 220
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
225 230 235 240
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
245 250
<210> 6
<211> 785
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 6
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgtg acaaaactca cacatgccca ccgtgcccag 120
cacctgaact cctggggggg ccctcagtct tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc 180
tcatgatctc ccggacccct gaggtcacat gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc 240
ctgaggtcaa gttcaactgg tacgtggacg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc 300
cgcgggagga gcagtacaac agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc 360
aggactggct gaatggcaag gagtacaagt gcaaggtctc caacaaagcc ctcccagccc 420
ccatcgagaa aaccatctcc aaagccaaag ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc 480
tgcccccatc ccgggatgag ctgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag 540
gcttctatcc cagcgacatc gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact 600
acaagaccac gcctcccgtg ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaagctca 660
ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg 720
ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc tctccctgtc tccgggtaaa tgactcgagc 780
ggccg 785
<210> 7
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 7
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
20 25 30
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
115 120 125
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Pro Gly Lys
245
<210> 8
<211> 767
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 8
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg tgacaaaact cacacatgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg 120
ggccctcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc 180
ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact 240
ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca 300
acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca 360
aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct 420
ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg 480
agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca 540
tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg 600
tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt 660
ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca 720
cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aatgactcga gcggccg 767
<210> 9
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPPCPAPE的人IgG1 Fc区域
<400> 9
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 10
<211> 666
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列CPPCPAPE的人IgG1 Fc区域的 DNA
<400> 10
tgcccaccgt gcccagcacc tgaactcctg ggggggccct cagtcttcct cttcccccca 60
aaacccaagg acaccctcat gatctcccgg acccctgagg tcacatgcgt ggtggtggac 120
gtgagccacg aagaccctga ggtcaagttc aactggtacg tggacggcgt ggaggtgcat 180
aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag tacaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc 240
ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaat ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 300
aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagaa 360
ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gatgagctga ccaagaacca ggtcagcctg 420
acctgcctgg tcaaaggctt ctatcccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg 480
cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 540
ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacgt cttctcatgc 600
tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacgcaga agagcctctc cctgtctccg 660
ggtaaa 666
<210> 11
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 11
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
20 25 30
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
115 120 125
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Pro Gly Lys
245
<210> 12
<211> 767
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 12
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg 120
ggccctcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc 180
ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact 240
ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca 300
acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca 360
aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct 420
ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg 480
agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca 540
tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg 600
tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt 660
ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca 720
cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aatgactcga gcggccg 767
<210> 13
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 13
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
20 25 30
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
115 120 125
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Pro Gly Lys
245
<210> 14
<211> 767
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 14
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgcc caccgtgccc agcacctgaa ctcctggggg 120
ggccctcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc 180
ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc aagttcaact 240
ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca 300
acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaatggca 360
aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct 420
ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggatg 480
agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat cccagcgaca 540
tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg 600
tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt 660
ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca 720
cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aatgactcga gcggccg 767
<210> 15
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 15
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
20 25 30
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
35 40 45
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
50 55 60
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
65 70 75 80
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
85 90 95
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
100 105 110
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
115 120 125
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
130 135 140
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
145 150 155 160
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
165 170 175
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
180 185 190
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
195 200 205
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
210 215 220
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 16
<211> 749
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 16
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg cccaccgtgc ccagcacctg aactcctggg ggggccctca gtcttcctct 120
tccccccaaa acccaaggac accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg 180
tggtggacgt gagccacgaa gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg 240
aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg 300
tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg 360
tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc 420
cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg 480
tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga 540
gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct 600
ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct 660
tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc 720
tgtctccggg taaatgactc gagcggccg 749
<210> 17
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPAPE的人IgG1 Fc区域
<400> 17
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
1 5 10 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
20 25 30
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
35 40 45
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
50 55 60
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
65 70 75 80
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
85 90 95
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100 105 110
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
115 120 125
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
130 135 140
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
165 170 175
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
180 185 190
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
195 200 205
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 18
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列CPAPE的人IgG1 Fc区域的DNA
<400> 18
tgcccagcac ctgaactcct gggggggccc tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 60
gacaccctca tgatctcccg gacccctgag gtcacatgcg tggtggtgga cgtgagccac 120
gaagaccctg aggtcaagtt caactggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 180
acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 240
ctgcaccagg actggctgaa tggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 300
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga accacaggtg 360
tacaccctgc ccccatcccg ggatgagctg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 420
gtcaaaggct tctatcccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 480
aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 540
aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaacg tcttctcatg ctccgtgatg 600
catgaggctc tgcacaacca ctacacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaa 657
<210> 19
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 19
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
50 55 60
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
65 70 75 80
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
100 105 110
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
115 120 125
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
165 170 175
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
180 185 190
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
195 200 205
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
210 215 220
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
225 230 235 240
Gly Lys
<210> 20
<211> 758
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 20
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgcc cagcacctga actcctgggg gggccctcag 120
tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca 180
catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg 240
acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac aacagcacgt 300
accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca 360
agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca 420
aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat gagctgacca 480
agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg 540
agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact 600
ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg 660
ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga 720
gcctctccct gtctccgggt aaatgactcg agcggccg 758
<210> 21
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 21
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
50 55 60
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
65 70 75 80
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
100 105 110
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
115 120 125
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
165 170 175
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
180 185 190
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
195 200 205
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
210 215 220
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
225 230 235 240
Gly Lys
<210> 22
<211> 758
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 22
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgcc cagcacctga actcctgggg gggccctcag 120
tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca 180
catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg 240
acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac aacagcacgt 300
accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca 360
agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca 420
aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat gagctgacca 480
agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg 540
agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact 600
ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg 660
ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga 720
gcctctccct gtctccgggt aaatgactcg agcggccg 758
<210> 23
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 23
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
20 25 30
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
35 40 45
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
50 55 60
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
65 70 75 80
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
85 90 95
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
100 105 110
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
115 120 125
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
130 135 140
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
145 150 155 160
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
165 170 175
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
180 185 190
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
195 200 205
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
210 215 220
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 24
<211> 740
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 24
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg cccagcacct gaactcctgg gggggccctc agtcttcctc ttccccccaa 120
aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacatgcgtg gtggtggacg 180
tgagccacga agaccctgag gtcaagttca actggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata 240
atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc 300
tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaatg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca 360
aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagaac 420
cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg atgagctgac caagaaccag gtcagcctga 480
cctgcctggt caaaggcttc tatcccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc 540
agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc 600
tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc ttctcatgct 660
ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg 720
gtaaatgact cgagcggccg 740
<210> 25
<211> 225
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CCVECPPCPAPE的人IgG2 Fc区域
<400> 25
Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
1 5 10 15
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
20 25 30
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
35 40 45
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
50 55 60
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val
65 70 75 80
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
85 90 95
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
100 105 110
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
115 120 125
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
130 135 140
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
145 150 155 160
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu
165 170 175
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
180 185 190
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
195 200 205
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
210 215 220
Lys
225
<210> 26
<211> 675
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列 CCVECPPCPAPE的人IgG2 Fc区域的DNA
<400> 26
tgttgtgtcg agtgcccacc gtgcccagca ccacctgtgg caggaccgtc agtcttcctc 60
ttccccccaa aacccaagga caccctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg 120
gtggtggacg tgagccacga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggacggcgtg 180
gaggtgcata atgccaagac aaagccacgg gaggagcagt tcaacagcac gttccgtgtg 240
gtcagcgtcc tcaccgttgt gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag 300
gtctccaaca aaggcctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaagggcag 360
ccccgagaac cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag 420
gtcagcctga cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag 480
agcaatgggc agccggagaa caactacaag accacacctc ccatgctgga ctccgacggc 540
tccttcttcc tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacgtc 600
ttctcatgct ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacgcagaa gagcctctcc 660
ctgtctccgg gtaaa 675
<210> 27
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 27
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
20 25 30
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
35 40 45
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
50 55 60
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
65 70 75 80
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
85 90 95
Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln
100 105 110
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
115 120 125
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro
130 135 140
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
145 150 155 160
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
165 170 175
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
180 185 190
Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
195 200 205
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
210 215 220
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
225 230 235 240
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
245
<210> 28
<211> 776
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 28
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac 120
ctgtggcagg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct 180
cccggacccc tgaggtcacg tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc 240
agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg 300
agcagttcaa cagcacgttc cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc 360
tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga 420
aaaccatctc caaaaccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat 480
cccgggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc 540
ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca 600
cacctcccat gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca 660
agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca 720
accactacac gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa atgactcgag cggccg 776
<210> 29
<211> 248
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 29
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro
20 25 30
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
35 40 45
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
50 55 60
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
65 70 75 80
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
85 90 95
Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln
100 105 110
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
115 120 125
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro
130 135 140
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
145 150 155 160
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
165 170 175
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
180 185 190
Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
195 200 205
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
210 215 220
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
225 230 235 240
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
245
<210> 30
<211> 776
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 30
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgtt gtgtcgagtg cccaccgtgc ccagcaccac 120
ctgtggcagg accgtcagtc ttcctcttcc ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct 180
cccggacccc tgaggtcacg tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc 240
agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg 300
agcagttcaa cagcacgttc cgtgtggtca gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc 360
tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtct ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga 420
aaaccatctc caaaaccaaa gggcagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat 480
cccgggagga gatgaccaag aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc 540
ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca 600
cacctcccat gctggactcc gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca 660
agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca 720
accactacac gcagaagagc ctctccctgt ctccgggtaa atgactcgag cggccg 776
<210> 31
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 31
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
50 55 60
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
65 70 75 80
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
100 105 110
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu
115 120 125
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
165 170 175
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met
180 185 190
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
195 200 205
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
210 215 220
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
225 230 235 240
Gly Lys
<210> 32
<211> 758
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 32
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg ttgtgtcgag tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca ggaccgtcag 120
tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca 180
cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg 240
acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccacggga ggagcagttc aacagcacgt 300
tccgtgtggt cagcgtcctc accgttgtgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca 360
agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca 420
aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca 480
agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg 540
agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacacctccc atgctggact 600
ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg 660
ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga 720
gcctctccct gtctccgggt aaatgactcg agcggccg 758
<210> 33
<211> 224
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CVECPPCPAPE的人IgG2 Fc区域
<400> 33
Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser
1 5 10 15
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
20 25 30
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
35 40 45
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
50 55 60
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val
65 70 75 80
Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
85 90 95
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
100 105 110
Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
115 120 125
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
130 135 140
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
145 150 155 160
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp
165 170 175
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
180 185 190
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
195 200 205
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 34
<211> 672
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列CVECPPCPAPE的人IgG2 Fc区域的DNA
<400> 34
tgtgtcgagt gcccaccgtg cccagcacca cctgtggcag gaccgtcagt cttcctcttc 60
cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg 120
gtggacgtga gccacgaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 180
gtgcataatg ccaagacaaa gccacgggag gagcagttca acagcacgtt ccgtgtggtc 240
agcgtcctca ccgttgtgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc 300
tccaacaaag gcctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa agggcagccc 360
cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc 420
agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc 480
aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acacctccca tgctggactc cgacggctcc 540
ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc 600
tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg 660
tctccgggta aa 672
<210> 35
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 35
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala
20 25 30
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
85 90 95
Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
245
<210> 36
<211> 773
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 36
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg 120
tggcaggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc 180
ggacccctga ggtcacgtgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt 240
tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc 300
agttcaacag cacgttccgt gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga 360
acggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa 420
ccatctccaa aaccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc 480
gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca 540
gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac 600
ctcccatgct ggactccgac ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga 660
gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc 720
actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaatg actcgagcgg ccg 773
<210> 37
<211> 247
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 37
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala
20 25 30
Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
35 40 45
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
50 55 60
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
65 70 75 80
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
85 90 95
Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp
100 105 110
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
115 120 125
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg
130 135 140
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
145 150 155 160
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
165 170 175
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
180 185 190
Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
195 200 205
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
210 215 220
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
245
<210> 38
<211> 773
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 38
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgtg tcgagtgccc accgtgccca gcaccacctg 120
tggcaggacc gtcagtcttc ctcttccccc caaaacccaa ggacaccctc atgatctccc 180
ggacccctga ggtcacgtgc gtggtggtgg acgtgagcca cgaagacccc gaggtccagt 240
tcaactggta cgtggacggc gtggaggtgc ataatgccaa gacaaagcca cgggaggagc 300
agttcaacag cacgttccgt gtggtcagcg tcctcaccgt tgtgcaccag gactggctga 360
acggcaagga gtacaagtgc aaggtctcca acaaaggcct cccagccccc atcgagaaaa 420
ccatctccaa aaccaaaggg cagccccgag aaccacaggt gtacaccctg cccccatccc 480
gggaggagat gaccaagaac caggtcagcc tgacctgcct ggtcaaaggc ttctacccca 540
gcgacatcgc cgtggagtgg gagagcaatg ggcagccgga gaacaactac aagaccacac 600
ctcccatgct ggactccgac ggctccttct tcctctacag caagctcacc gtggacaaga 660
gcaggtggca gcaggggaac gtcttctcat gctccgtgat gcatgaggct ctgcacaacc 720
actacacgca gaagagcctc tccctgtctc cgggtaaatg actcgagcgg ccg 773
<210> 39
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 39
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
20 25 30
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
35 40 45
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
50 55 60
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
65 70 75 80
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val
85 90 95
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
100 105 110
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
115 120 125
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
130 135 140
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
165 170 175
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu
180 185 190
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
195 200 205
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
210 215 220
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
225 230 235 240
Lys
<210> 40
<211> 755
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 40
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg tgtcgagtgc ccaccgtgcc cagcaccacc tgtggcagga ccgtcagtct 120
tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacgt 180
gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg tacgtggacg 240
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac agcacgttcc 300
gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag gagtacaagt 360
gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaaaccaaag 420
ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga 480
accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt 540
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg ctggactccg 600
acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga 660
acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc 720
tctccctgtc tccgggtaaa tgactcgagc ggccg 755
<210> 41
<211> 221
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPPCPAPE的人IgG2 Fc区域
<400> 41
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu
1 5 10 15
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
20 25 30
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln
35 40 45
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
50 55 60
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu
65 70 75 80
Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
85 90 95
Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
100 105 110
Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
115 120 125
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
130 135 140
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
145 150 155 160
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly
165 170 175
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
180 185 190
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
195 200 205
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 42
<211> 663
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列CPPCPAPE的人IgG2 Fc区域的DNA
<400> 42
tgcccaccgt gcccagcacc acctgtggca ggaccgtcag tcttcctctt ccccccaaaa 60
cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca cgtgcgtggt ggtggacgtg 120
agccacgaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg acggcgtgga ggtgcataat 180
gccaagacaa agccacggga ggagcagttc aacagcacgt tccgtgtggt cagcgtcctc 240
accgttgtgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca agtgcaaggt ctccaacaaa 300
ggcctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca aagggcagcc ccgagaacca 360
caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca agaaccaggt cagcctgacc 420
tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg agtgggagag caatgggcag 480
ccggagaaca actacaagac cacacctccc atgctggact ccgacggctc cttcttcctc 540
tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg ggaacgtctt ctcatgctcc 600
gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga gcctctccct gtctccgggt 660
aaa 663
<210> 43
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 43
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
20 25 30
Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
35 40 45
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
50 55 60
His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
65 70 75 80
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
85 90 95
Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn
100 105 110
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro
115 120 125
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
130 135 140
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
145 150 155 160
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
165 170 175
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
180 185 190
Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
195 200 205
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
210 215 220
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
225 230 235 240
Ser Pro Gly Lys
<210> 44
<211> 764
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 44
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac 120
cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg 180
aggtcacgtg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt 240
acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca 300
gcacgttccg tgtggtcagc gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg 360
agtacaagtg caaggtctcc aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca 420
aaaccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga 480
tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg 540
ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc 600
tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc 660
agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc 720
agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat gactcgagcg gccg 764
<210> 45
<211> 244
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 45
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val
20 25 30
Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
35 40 45
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
50 55 60
His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
65 70 75 80
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
85 90 95
Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn
100 105 110
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro
115 120 125
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
130 135 140
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
145 150 155 160
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
165 170 175
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
180 185 190
Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
195 200 205
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
210 215 220
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
225 230 235 240
Ser Pro Gly Lys
<210> 46
<211> 764
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 46
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgcc caccgtgccc agcaccacct gtggcaggac 120
cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc cggacccctg 180
aggtcacgtg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaactggt 240
acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc acgggaggag cagttcaaca 300
gcacgttccg tgtggtcagc gtcctcaccg ttgtgcacca ggactggctg aacggcaagg 360
agtacaagtg caaggtctcc aacaaaggcc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca 420
aaaccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga 480
tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg 540
ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccaca cctcccatgc 600
tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc 660
agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cactacacgc 720
agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat gactcgagcg gccg 764
<210> 47
<211> 238
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 47
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
20 25 30
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
35 40 45
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
50 55 60
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
65 70 75 80
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
85 90 95
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
100 105 110
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
115 120 125
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
130 135 140
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
145 150 155 160
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
165 170 175
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
180 185 190
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
195 200 205
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
210 215 220
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 48
<211> 746
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 48
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg cccaccgtgc ccagcaccac ctgtggcagg accgtcagtc ttcctcttcc 120
ccccaaaacc caaggacacc ctcatgatct cccggacccc tgaggtcacg tgcgtggtgg 180
tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaactg gtacgtggac ggcgtggagg 240
tgcataatgc caagacaaag ccacgggagg agcagttcaa cagcacgttc cgtgtggtca 300
gcgtcctcac cgttgtgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag tgcaaggtct 360
ccaacaaagg cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa gggcagcccc 420
gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag aaccaggtca 480
gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag tgggagagca 540
atgggcagcc ggagaacaac tacaagacca cacctcccat gctggactcc gacggctcct 600
tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg aacgtcttct 660
catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accactacac gcagaagagc ctctccctgt 720
ctccgggtaa atgactcgag cggccg 746
<210> 49
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPAPE的人IgG2 Fc区域
<400> 49
Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
1 5 10 15
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
20 25 30
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp
35 40 45
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
50 55 60
Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val
65 70 75 80
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
85 90 95
Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly
100 105 110
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
115 120 125
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
130 135 140
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
145 150 155 160
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
165 170 175
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
180 185 190
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
195 200 205
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 50
<211> 654
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列 CPAPE的人IgG2 Fc区域的DNA
<400> 50
tgcccagcac cacctgtggc aggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 60
accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acgtgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 120
gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 180
aagccacggg aggagcagtt caacagcacg ttccgtgtgg tcagcgtcct caccgttgtg 240
caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa aggcctccca 300
gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 360
accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 420
aaaggcttct accccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 480
aactacaaga ccacacctcc catgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 540
ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 600
gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaa 654
<210> 51
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 51
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
20 25 30
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
35 40 45
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
50 55 60
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
65 70 75 80
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val
85 90 95
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
100 105 110
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
115 120 125
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
130 135 140
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
165 170 175
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu
180 185 190
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
195 200 205
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
210 215 220
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
225 230 235 240
Lys
<210> 52
<211> 755
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 52
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgcc cagcaccacc tgtggcagga ccgtcagtct 120
tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacgt 180
gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg tacgtggacg 240
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac agcacgttcc 300
gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag gagtacaagt 360
gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaaaccaaag 420
ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga 480
accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt 540
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg ctggactccg 600
acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga 660
acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc 720
tctccctgtc tccgggtaaa tgactcgagc ggccg 755
<210> 53
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 53
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro
20 25 30
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
35 40 45
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
50 55 60
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
65 70 75 80
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val
85 90 95
Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
100 105 110
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
115 120 125
Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
130 135 140
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
145 150 155 160
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
165 170 175
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu
180 185 190
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
195 200 205
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
210 215 220
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
225 230 235 240
Lys
<210> 54
<211> 755
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 54
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgcc cagcaccacc tgtggcagga ccgtcagtct 120
tcctcttccc cccaaaaccc aaggacaccc tcatgatctc ccggacccct gaggtcacgt 180
gcgtggtggt ggacgtgagc cacgaagacc ccgaggtcca gttcaactgg tacgtggacg 240
gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cacgggagga gcagttcaac agcacgttcc 300
gtgtggtcag cgtcctcacc gttgtgcacc aggactggct gaacggcaag gagtacaagt 360
gcaaggtctc caacaaaggc ctcccagccc ccatcgagaa aaccatctcc aaaaccaaag 420
ggcagccccg agaaccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccgggaggag atgaccaaga 480
accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc gccgtggagt 540
gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac acctcccatg ctggactccg 600
acggctcctt cttcctctac agcaagctca ccgtggacaa gagcaggtgg cagcagggga 660
acgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacacg cagaagagcc 720
tctccctgtc tccgggtaaa tgactcgagc ggccg 755
<210> 55
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 55
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
20 25 30
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
35 40 45
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
50 55 60
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
65 70 75 80
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
85 90 95
Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
100 105 110
Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys
115 120 125
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
130 135 140
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
165 170 175
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
180 185 190
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
195 200 205
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
210 215 220
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 56
<211> 737
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 56
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg cccagcacca cctgtggcag gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac 120
ccaaggacac cctcatgatc tcccggaccc ctgaggtcac gtgcgtggtg gtggacgtga 180
gccacgaaga ccccgaggtc cagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg 240
ccaagacaaa gccacgggag gagcagttca acagcacgtt ccgtgtggtc agcgtcctca 300
ccgttgtgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag 360
gcctcccagc ccccatcgag aaaaccatct ccaaaaccaa agggcagccc cgagaaccac 420
aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg agatgaccaa gaaccaggtc agcctgacct 480
gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc 540
cggagaacaa ctacaagacc acacctccca tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct 600
acagcaagct caccgtggac aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg 660
tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta 720
aatgactcga gcggccg 737
<210> 57
<211> 267
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列(CPRCPEPKSDTPPP)3-CPRCPAPE的人IgG3 Fc区域
<400> 57
Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys
1 5 10 15
Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro
20 25 30
Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg
35 40 45
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
50 55 60
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
65 70 75 80
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys
85 90 95
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
100 105 110
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
115 120 125
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
130 135 140
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys
145 150 155 160
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
165 170 175
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
180 185 190
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu
195 200 205
Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
210 215 220
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
225 230 235 240
Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe
245 250 255
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
260 265
<210> 58
<211> 801
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列(CPRCPEPKSDTPPP)3-CPRCPAPE的人IgG3 Fc区域的DNA
<400> 58
tgcccacggt gcccagagcc caaatcttgt gacacacctc ccccgtgccc acggtgccca 60
gagcccaaat cttgtgacac acctccccca tgcccacggt gcccagagcc caaatcttgt 120
gacacacctc ccccgtgccc aaggtgccca gcacctgaac tcctgggagg accgtcagtc 180
ttcctcttcc ccccaaaacc caaggatacc cttatgattt cccggacccc tgaggtcacg 240
tgcgtggtgg tggacgtgag ccacgaagac cccgaggtcc agttcaagtg gtacgtggac 300
ggcgtggagg tgcataatgc caagacaaag ccgcgggagg agcagtacaa cagcacgttc 360
cgtgtggtca gcgtcctcac cgtcctgcac caggactggc tgaacggcaa ggagtacaag 420
tgcaaggtct ccaacaaagc cctcccagcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 480
ggacagcccc gagaaccaca ggtgtacacc ctgcccccat cccgggagga gatgaccaag 540
aaccaggtca gcctgacctg cctggtcaaa ggcttctacc ccagcgacat cgccgtggag 600
tgggagagca gcgggcagcc ggagaacaac tacaacacca cgcctcccat gctggactcc 660
gacggctcct tcttcctcta cagcaagctc accgtggaca agagcaggtg gcagcagggg 720
aacatcttct catgctccgt gatgcatgag gctctgcaca accgcttcac gcagaagagc 780
ctctccctgt ctccgggtaa a 801
<210> 59
<211> 290
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 59
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser
20 25 30
Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys
35 40 45
Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp
50 55 60
Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
65 70 75 80
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
85 90 95
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
100 105 110
Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
115 120 125
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg
130 135 140
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
145 150 155 160
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
165 170 175
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
180 185 190
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
195 200 205
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
210 215 220
Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met
225 230 235 240
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
245 250 255
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His
260 265 270
Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
275 280 285
Gly Lys
290
<210> 60
<211> 902
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 60
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgcc cacggtgccc agagcccaaa tcttgtgaca 120
cacctccccc gtgcccacgg tgcccagagc ccaaatcttg tgacacacct cccccatgcc 180
cacggtgccc agagcccaaa tcttgtgaca cacctccccc gtgcccaagg tgcccagcac 240
ctgaactcct gggaggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gataccctta 300
tgatttcccg gacccctgag gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg 360
aggtccagtt caagtggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc 420
gggaggagca gtacaacagc acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg 480
actggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca 540
tcgagaaaac catctccaaa accaaaggac agccccgaga accacaggtg tacaccctgc 600
ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct 660
tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcagcgg gcagccggag aacaactaca 720
acaccacgcc tcccatgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg 780
tggacaagag caggtggcag caggggaaca tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc 840
tgcacaaccg cttcacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga ctcgagcggc 900
cg 902
<210> 61
<211> 290
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 61
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser
20 25 30
Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys
35 40 45
Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp
50 55 60
Thr Pro Pro Pro Cys Pro Arg Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
65 70 75 80
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
85 90 95
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
100 105 110
Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
115 120 125
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg
130 135 140
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
145 150 155 160
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
165 170 175
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
180 185 190
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
195 200 205
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
210 215 220
Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met
225 230 235 240
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
245 250 255
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His
260 265 270
Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
275 280 285
Gly Lys
290
<210> 62
<211> 902
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 62
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgcc cacggtgccc agagcccaaa tcttgtgaca 120
cacctccccc gtgcccacgg tgcccagagc ccaaatcttg tgacacacct cccccatgcc 180
cacggtgccc agagcccaaa tcttgtgaca cacctccccc gtgcccaagg tgcccagcac 240
ctgaactcct gggaggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag gataccctta 300
tgatttcccg gacccctgag gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac gaagaccccg 360
aggtccagtt caagtggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc 420
gggaggagca gtacaacagc acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg 480
actggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc ccagccccca 540
tcgagaaaac catctccaaa accaaaggac agccccgaga accacaggtg tacaccctgc 600
ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct 660
tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcagcgg gcagccggag aacaactaca 720
acaccacgcc tcccatgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc aagctcaccg 780
tggacaagag caggtggcag caggggaaca tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc 840
tgcacaaccg cttcacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga ctcgagcggc 900
cg 902
<210> 63
<211> 284
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 63
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro
20 25 30
Cys Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys
35 40 45
Pro Arg Cys Pro Glu Pro Lys Ser Cys Asp Thr Pro Pro Pro Cys Pro
50 55 60
Arg Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
65 70 75 80
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
85 90 95
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
100 105 110
Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
115 120 125
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr
130 135 140
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
145 150 155 160
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr
165 170 175
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
180 185 190
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
195 200 205
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro
210 215 220
Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser
225 230 235 240
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
245 250 255
Gly Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg
260 265 270
Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
275 280
<210> 64
<211> 884
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 64
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg cccacggtgc ccagagccca aatcttgtga cacacctccc ccgtgcccac 120
ggtgcccaga gcccaaatct tgtgacacac ctcccccatg cccacggtgc ccagagccca 180
aatcttgtga cacacctccc ccgtgcccaa ggtgcccagc acctgaactc ctgggaggac 240
cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggataccct tatgatttcc cggacccctg 300
aggtcacgtg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc cgaggtccag ttcaagtggt 360
acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag cagtacaaca 420
gcacgttccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg aacggcaagg 480
agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa accatctcca 540
aaaccaaagg acagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc cgggaggaga 600
tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctacccc agcgacatcg 660
ccgtggagtg ggagagcagc gggcagccgg agaacaacta caacaccacg cctcccatgc 720
tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag agcaggtggc 780
agcaggggaa catcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac cgcttcacgc 840
agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat gactcgagcg gccg 884
<210> 65
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPRCPAPE的人IgG3 Fc区域
<400> 65
Cys Pro Arg Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Gln Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Gln Gly Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 66
<211> 681
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列CPRCPAPE的人IgG3 Fc区域的DNA
<400> 66
tgcccaaggt gcccagcacc tgaactcctg ggaggaccgt cagtcttcct cttcccccca 60
aaacccaagg atacccttat gatttcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 120
gtgagccacg aagaccccga ggtccagttc aagtggtacg tggacggcgt ggaggtgcat 180
aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag tacaacagca cgttccgtgt ggtcagcgtc 240
ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 300
aaagccctcc cagcccccat cgagaaaacc atctccaaaa ccaaaggaca gccccgagaa 360
ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccgg gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 420
acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcagcggg 480
cagccggaga acaactacaa caccacgcct cccatgctgg actccgacgg ctccttcttc 540
ctctacagca agctcaccgt ggacaagagc aggtggcagc aggggaacat cttctcatgc 600
tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccgc ttcacgcaga agagcctctc cctgtctccg 660
ggtaaatgac tcgagcggcc g 681
<210> 67
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 67
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Arg Cys Pro Ala Pro Glu Leu
20 25 30
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
85 90 95
Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
115 120 125
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Pro Gly Lys
245
<210> 68
<211> 767
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 68
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgcc caaggtgccc agcacctgaa ctcctgggag 120
gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggatac ccttatgatt tcccggaccc 180
ctgaggtcac gtgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccccgaggtc cagttcaagt 240
ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca 300
acagcacgtt ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaacggca 360
aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct 420
ccaaaaccaa aggacagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg 480
agatgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca 540
tcgccgtgga gtgggagagc agcgggcagc cggagaacaa ctacaacacc acgcctccca 600
tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt 660
ggcagcaggg gaacatcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccgcttca 720
cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aatgactcga gcggccg 767
<210> 69
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 69
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Arg Cys Pro Ala Pro Glu Leu
20 25 30
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
85 90 95
Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
115 120 125
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Pro Gly Lys
245
<210> 70
<211> 767
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 70
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgcc caaggtgccc agcacctgaa ctcctgggag 120
gaccgtcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggatac ccttatgatt tcccggaccc 180
ctgaggtcac gtgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccccgaggtc cagttcaagt 240
ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagtaca 300
acagcacgtt ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaacggca 360
aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag aaaaccatct 420
ccaaaaccaa aggacagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca tcccgggagg 480
agatgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca 540
tcgccgtgga gtgggagagc agcgggcagc cggagaacaa ctacaacacc acgcctccca 600
tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac aagagcaggt 660
ggcagcaggg gaacatcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccgcttca 720
cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aatgactcga gcggccg 767
<210> 71
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 71
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Arg Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
20 25 30
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
35 40 45
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
50 55 60
Val Gln Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
65 70 75 80
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser
85 90 95
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
100 105 110
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
115 120 125
Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
130 135 140
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
145 150 155 160
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser
165 170 175
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser
180 185 190
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
195 200 205
Trp Gln Gln Gly Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
210 215 220
His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230 235
<210> 72
<211> 749
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 72
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg cccaaggtgc ccagcacctg aactcctggg aggaccgtca gtcttcctct 120
tccccccaaa acccaaggat acccttatga tttcccggac ccctgaggtc acgtgcgtgg 180
tggtggacgt gagccacgaa gaccccgagg tccagttcaa gtggtacgtg gacggcgtgg 240
aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagta caacagcacg ttccgtgtgg 300
tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg 360
tctccaacaa agccctccca gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc aaaggacagc 420
cccgagaacc acaggtgtac accctgcccc catcccggga ggagatgacc aagaaccagg 480
tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg gagtgggaga 540
gcagcgggca gccggagaac aactacaaca ccacgcctcc catgctggac tccgacggct 600
ccttcttcct ctacagcaag ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacatct 660
tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccgctt cacgcagaag agcctctccc 720
tgtctccggg taaatgactc gagcggccg 749
<210> 73
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPAPE的人IgG3 Fc区域
<400> 73
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
1 5 10 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
20 25 30
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys
35 40 45
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
50 55 60
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
65 70 75 80
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
85 90 95
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys
100 105 110
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu
115 120 125
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
130 135 140
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
165 170 175
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
180 185 190
Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe
195 200 205
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 74
<211> 672
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列CPAPE的人IgG3 Fc区域的DNA
<400> 74
tgcccagcac ctgaactcct gggaggaccg tcagtcttcc tcttcccccc aaaacccaag 60
gataccctta tgatttcccg gacccctgag gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccac 120
gaagaccccg aggtccagtt caagtggtac gtggacggcg tggaggtgca taatgccaag 180
acaaagccgc gggaggagca gtacaacagc acgttccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 240
ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaagccctc 300
ccagccccca tcgagaaaac catctccaaa accaaaggac agccccgaga accacaggtg 360
tacaccctgc ccccatcccg ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 420
gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcagcgg gcagccggag 480
aacaactaca acaccacgcc tcccatgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 540
aagctcaccg tggacaagag caggtggcag caggggaaca tcttctcatg ctccgtgatg 600
catgaggctc tgcacaaccg cttcacgcag aagagcctct ccctgtctcc gggtaaatga 660
ctcgagcggc cg 672
<210> 75
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 75
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
50 55 60
Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
65 70 75 80
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
100 105 110
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
115 120 125
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
165 170 175
Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met
180 185 190
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
195 200 205
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His
210 215 220
Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
225 230 235 240
Gly Lys
<210> 76
<211> 758
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 76
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgcc cagcacctga actcctggga ggaccgtcag 120
tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggata cccttatgat ttcccggacc cctgaggtca 180
cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaag tggtacgtgg 240
acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac aacagcacgt 300
tccgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca 360
agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca 420
aaggacagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca 480
agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg 540
agtgggagag cagcgggcag ccggagaaca actacaacac cacgcctccc atgctggact 600
ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg 660
ggaacatctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccgcttc acgcagaaga 720
gcctctccct gtctccgggt aaatgactcg agcggccg 758
<210> 77
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 77
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
50 55 60
Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
65 70 75 80
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
100 105 110
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
115 120 125
Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
165 170 175
Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met
180 185 190
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
195 200 205
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His
210 215 220
Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
225 230 235 240
Gly Lys
<210> 78
<211> 758
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 78
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgcc cagcacctga actcctggga ggaccgtcag 120
tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggata cccttatgat ttcccggacc cctgaggtca 180
cgtgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accccgaggt ccagttcaag tggtacgtgg 240
acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac aacagcacgt 300
tccgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca 360
agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaaacca 420
aaggacagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggag gagatgacca 480
agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg 540
agtgggagag cagcgggcag ccggagaaca actacaacac cacgcctccc atgctggact 600
ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg 660
ggaacatctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccgcttc acgcagaaga 720
gcctctccct gtctccgggt aaatgactcg agcggccg 758
<210> 79
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 79
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
20 25 30
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
35 40 45
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
50 55 60
Lys Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
65 70 75 80
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr
85 90 95
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
100 105 110
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr
115 120 125
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
130 135 140
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
145 150 155 160
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro
165 170 175
Glu Asn Asn Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser
180 185 190
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
195 200 205
Gly Asn Ile Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg
210 215 220
Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
225 230 235
<210> 80
<211> 740
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 80
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg cccagcacct gaactcctgg gaggaccgtc agtcttcctc ttccccccaa 120
aacccaagga tacccttatg atttcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg gtggtggacg 180
tgagccacga agaccccgag gtccagttca agtggtacgt ggacggcgtg gaggtgcata 240
atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt acaacagcac gttccgtgtg gtcagcgtcc 300
tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca 360
aagccctccc agcccccatc gagaaaacca tctccaaaac caaaggacag ccccgagaac 420
cacaggtgta caccctgccc ccatcccggg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga 480
cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcagcgggc 540
agccggagaa caactacaac accacgcctc ccatgctgga ctccgacggc tccttcttcc 600
tctacagcaa gctcaccgtg gacaagagca ggtggcagca ggggaacatc ttctcatgct 660
ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccgct tcacgcagaa gagcctctcc ctgtctccgg 720
gtaaatgact cgagcggccg 740
<210> 81
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPSCPAPE的人IgG4 Fc区域
<400> 81
Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
210 215 220
<210> 82
<211> 666
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列CPSCPAPE的人IgG4 Fc区域的DNA
<400> 82
tgcccatcat gcccagcacc tgagttcctg gggggaccat cagtcttcct gttcccccca 60
aaacccaagg acactctcat gatctcccgg acccctgagg tcacgtgcgt ggtggtggac 120
gtgagccagg aagaccccga ggtccagttc aactggtacg tggatggcgt ggaggtgcat 180
aatgccaaga caaagccgcg ggaggagcag ttcaacagca cgtaccgtgt ggtcagcgtc 240
ctcaccgtcc tgcaccagga ctggctgaac ggcaaggagt acaagtgcaa ggtctccaac 300
aaaggcctcc cgtcctccat cgagaaaacc atctccaaag ccaaagggca gccccgagag 360
ccacaggtgt acaccctgcc cccatcccag gaggagatga ccaagaacca ggtcagcctg 420
acctgcctgg tcaaaggctt ctaccccagc gacatcgccg tggagtggga gagcaatggg 480
cagccggaga acaactacaa gaccacgcct cccgtgctgg actccgacgg ctccttcttc 540
ctctacagca ggctaaccgt ggacaagagc aggtggcagg aggggaatgt cttctcatgc 600
tccgtgatgc atgaggctct gcacaaccac tacacacaga agagcctctc cctgtctctg 660
ggtaaa 666
<210> 83
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 83
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
20 25 30
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
115 120 125
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Gly Lys
245
<210> 84
<211> 767
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 84
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgcc catcatgccc agcacctgag ttcctggggg 120
gaccatcagt cttcctgttc cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc tcccggaccc 180
ctgaggtcac gtgcgtggtg gtggacgtga gccaggaaga ccccgaggtc cagttcaact 240
ggtacgtgga tggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagttca 300
acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaacggca 360
aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag gcctcccgtc ctccatcgag aaaaccatct 420
ccaaagccaa agggcagccc cgagagccac aggtgtacac cctgccccca tcccaggagg 480
agatgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca 540
tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg 600
tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaggct aaccgtggac aagagcaggt 660
ggcaggaggg gaatgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca 720
cacagaagag cctctccctg tctctgggta aatgactcga gcggccg 767
<210> 85
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 85
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe
20 25 30
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser
115 120 125
Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Leu Gly Lys
245
<210> 86
<211> 767
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 86
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgcc catcatgccc agcacctgag ttcctggggg 120
gaccatcagt cttcctgttc cccccaaaac ccaaggacac tctcatgatc tcccggaccc 180
ctgaggtcac gtgcgtggtg gtggacgtga gccaggaaga ccccgaggtc cagttcaact 240
ggtacgtgga tggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag gagcagttca 300
acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg ctgaacggca 360
aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag gcctcccgtc ctccatcgag aaaaccatct 420
ccaaagccaa agggcagccc cgagagccac aggtgtacac cctgccccca tcccaggagg 480
agatgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctac cccagcgaca 540
tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc acgcctcccg 600
tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaggct aaccgtggac aagagcaggt 660
ggcaggaggg gaatgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac aaccactaca 720
cacagaagag cctctccctg tctctgggta aatgactcga gcggccg 767
<210> 87
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 87
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
20 25 30
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
35 40 45
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
50 55 60
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
65 70 75 80
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
85 90 95
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
100 105 110
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
115 120 125
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
130 135 140
Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
145 150 155 160
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
165 170 175
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
180 185 190
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
195 200 205
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
210 215 220
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
225 230 235
<210> 88
<211> 749
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 88
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg cccatcatgc ccagcacctg agttcctggg gggaccatca gtcttcctgt 120
tccccccaaa acccaaggac actctcatga tctcccggac ccctgaggtc acgtgcgtgg 180
tggtggacgt gagccaggaa gaccccgagg tccagttcaa ctggtacgtg gatggcgtgg 240
aggtgcataa tgccaagaca aagccgcggg aggagcagtt caacagcacg taccgtgtgg 300
tcagcgtcct caccgtcctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac aagtgcaagg 360
tctccaacaa aggcctcccg tcctccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc 420
cccgagagcc acaggtgtac accctgcccc catcccagga ggagatgacc aagaaccagg 480
tcagcctgac ctgcctggtc aaaggcttct accccagcga catcgccgtg gagtgggaga 540
gcaatgggca gccggagaac aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct 600
ccttcttcct ctacagcagg ctaaccgtgg acaagagcag gtggcaggag gggaatgtct 660
tctcatgctc cgtgatgcat gaggctctgc acaaccacta cacacagaag agcctctccc 720
tgtctctggg taaatgactc gagcggccg 749
<210> 89
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPAPE的人IgG4 Fc区域
<400> 89
Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
1 5 10 15
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
20 25 30
Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn
35 40 45
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
50 55 60
Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
65 70 75 80
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
85 90 95
Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
100 105 110
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu
115 120 125
Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
130 135 140
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
145 150 155 160
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
165 170 175
Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly
180 185 190
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
195 200 205
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
210 215
<210> 90
<211> 657
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有N末端序列CPAPE的人IgG4 Fc区域的DNA
<400> 90
tgcccagcac ctgagttcct ggggggacca tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag 60
gacactctca tgatctcccg gacccctgag gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag 120
gaagaccccg aggtccagtt caactggtac gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag 180
acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc 240
ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc 300
ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg 360
tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg 420
gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag 480
aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg gactccgacg gctccttctt cctctacagc 540
aggctaaccg tggacaagag caggtggcag gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg 600
catgaggctc tgcacaacca ctacacacag aagagcctct ccctgtctct gggtaaa 657
<210> 91
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 91
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu
50 55 60
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
65 70 75 80
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
100 105 110
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu
115 120 125
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
165 170 175
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
180 185 190
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp
195 200 205
Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
210 215 220
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu
225 230 235 240
Gly Lys
<210> 92
<211> 758
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有SHH信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 92
aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc ctcgtctcct 60
cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgcc cagcacctga gttcctgggg ggaccatcag 120
tcttcctgtt ccccccaaaa cccaaggaca ctctcatgat ctcccggacc cctgaggtca 180
cgtgcgtggt ggtggacgtg agccaggaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg 240
atggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagttc aacagcacgt 300
accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca 360
agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccgt cctccatcga gaaaaccatc tccaaagcca 420
aagggcagcc ccgagagcca caggtgtaca ccctgccccc atcccaggag gagatgacca 480
agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg 540
agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact 600
ccgacggctc cttcttcctc tacagcaggc taaccgtgga caagagcagg tggcaggagg 660
ggaatgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acacagaaga 720
gcctctccct gtctctgggt aaatgactcg agcggccg 758
<210> 93
<211> 242
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 93
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly
20 25 30
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
35 40 45
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu
50 55 60
Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
65 70 75 80
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg
85 90 95
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
100 105 110
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu
115 120 125
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
130 135 140
Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
145 150 155 160
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
165 170 175
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
180 185 190
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp
195 200 205
Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
210 215 220
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu
225 230 235 240
Gly Lys
<210> 94
<211> 758
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有IFN信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 94
aagcttgaat tcccaccatg gccttgacct ttgctttact ggtggccctc ctggtgctca 60
gctgcaagtc aagctgctct gtgggctgcc cagcacctga gttcctgggg ggaccatcag 120
tcttcctgtt ccccccaaaa cccaaggaca ctctcatgat ctcccggacc cctgaggtca 180
cgtgcgtggt ggtggacgtg agccaggaag accccgaggt ccagttcaac tggtacgtgg 240
atggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagttc aacagcacgt 300
accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaacggc aaggagtaca 360
agtgcaaggt ctccaacaaa ggcctcccgt cctccatcga gaaaaccatc tccaaagcca 420
aagggcagcc ccgagagcca caggtgtaca ccctgccccc atcccaggag gagatgacca 480
agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta ccccagcgac atcgccgtgg 540
agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact 600
ccgacggctc cttcttcctc tacagcaggc taaccgtgga caagagcagg tggcaggagg 660
ggaatgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acacagaaga 720
gcctctccct gtctctgggt aaatgactcg agcggccg 758
<210> 95
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽
<400> 95
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
20 25 30
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
35 40 45
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe
50 55 60
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
65 70 75 80
Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
85 90 95
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
100 105 110
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
115 120 125
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln
130 135 140
Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
145 150 155 160
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
165 170 175
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
180 185 190
Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu
195 200 205
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
210 215 220
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
225 230 235
<210> 96
<211> 740
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 编码具有CETP信号肽的前体-Fc嵌合多肽的DNA
<400> 96
aagcttgaat tcccaccatg ctggctgcca cagtcctgac cctggccctg ctgggcaatg 60
cccatgcctg cccagcacct gagttcctgg ggggaccatc agtcttcctg ttccccccaa 120
aacccaagga cactctcatg atctcccgga cccctgaggt cacgtgcgtg gtggtggacg 180
tgagccagga agaccccgag gtccagttca actggtacgt ggatggcgtg gaggtgcata 240
atgccaagac aaagccgcgg gaggagcagt tcaacagcac gtaccgtgtg gtcagcgtcc 300
tcaccgtcct gcaccaggac tggctgaacg gcaaggagta caagtgcaag gtctccaaca 360
aaggcctccc gtcctccatc gagaaaacca tctccaaagc caaagggcag ccccgagagc 420
cacaggtgta caccctgccc ccatcccagg aggagatgac caagaaccag gtcagcctga 480
cctgcctggt caaaggcttc taccccagcg acatcgccgt ggagtgggag agcaatgggc 540
agccggagaa caactacaag accacgcctc ccgtgctgga ctccgacggc tccttcttcc 600
tctacagcag gctaaccgtg gacaagagca ggtggcagga ggggaatgtc ttctcatgct 660
ccgtgatgca tgaggctctg cacaaccact acacacagaa gagcctctcc ctgtctctgg 720
gtaaatgact cgagcggccg 740
<210> 97
<211> 5428
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pCDNA3.1(+)
<400> 97
gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg 60
ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg 120
cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc 180
ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt 240
gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata 300
tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc 360
cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc 420
attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt 480
atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt 540
atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca 600
tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg 660
actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc 720
aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg 780
gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca 840
ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc 900
gtttaaactt aagcttggta ccgagctcgg atccactagt ccagtgtggt ggaattctgc 960
agatatccag cacagtggcg gccgctcgag tctagagggc ccgtttaaac ccgctgatca 1020
gcctcgactg tgccttctag ttgccagcca tctgttgttt gcccctcccc cgtgccttcc 1080
ttgaccctgg aaggtgccac tcccactgtc ctttcctaat aaaatgagga aattgcatcg 1140
cattgtctga gtaggtgtca ttctattctg gggggtgggg tggggcagga cagcaagggg 1200
gaggattggg aagacaatag caggcatgct ggggatgcgg tgggctctat ggcttctgag 1260
gcggaaagaa ccagctgggg ctctaggggg tatccccacg cgccctgtag cggcgcatta 1320
agcgcggcgg gtgtggtggt tacgcgcagc gtgaccgcta cacttgccag cgccctagcg 1380
cccgctcctt tcgctttctt cccttccttt ctcgccacgt tcgccggctt tccccgtcaa 1440
gctctaaatc gggggctccc tttagggttc cgatttagtg ctttacggca cctcgacccc 1500
aaaaaacttg attagggtga tggttcacgt agtgggccat cgccctgata gacggttttt 1560
cgccctttga cgttggagtc cacgttcttt aatagtggac tcttgttcca aactggaaca 1620
acactcaacc ctatctcggt ctattctttt gatttataag ggattttgcc gatttcggcc 1680
tattggttaa aaaatgagct gatttaacaa aaatttaacg cgaattaatt ctgtggaatg 1740
tgtgtcagtt agggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt atgcaaagca 1800
tgcatctcaa ttagtcagca accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca gcaggcagaa 1860
gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta actccgccca 1920
tcccgcccct aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga ctaatttttt 1980
ttatttatgc agaggccgag gccgcctctg cctctgagct attccagaag tagtgaggag 2040
gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaaa agctcccggg agcttgtata tccattttcg 2100
gatctgatca agagacagga tgaggatcgt ttcgcatgat tgaacaagat ggattgcacg 2160
caggttctcc ggccgcttgg gtggagaggc tattcggcta tgactgggca caacagacaa 2220
tcggctgctc tgatgccgcc gtgttccggc tgtcagcgca ggggcgcccg gttctttttg 2280
tcaagaccga cctgtccggt gccctgaatg aactgcagga cgaggcagcg cggctatcgt 2340
ggctggccac gacgggcgtt ccttgcgcag ctgtgctcga cgttgtcact gaagcgggaa 2400
gggactggct gctattgggc gaagtgccgg ggcaggatct cctgtcatct caccttgctc 2460
ctgccgagaa agtatccatc atggctgatg caatgcggcg gctgcatacg cttgatccgg 2520
ctacctgccc attcgaccac caagcgaaac atcgcatcga gcgagcacgt actcggatgg 2580
aagccggtct tgtcgatcag gatgatctgg acgaagagca tcaggggctc gcgccagccg 2640
aactgttcgc caggctcaag gcgcgcatgc ccgacggcga ggatctcgtc gtgacccatg 2700
gcgatgcctg cttgccgaat atcatggtgg aaaatggccg cttttctgga ttcatcgact 2760
gtggccggct gggtgtggcg gaccgctatc aggacatagc gttggctacc cgtgatattg 2820
ctgaagagct tggcggcgaa tgggctgacc gcttcctcgt gctttacggt atcgccgctc 2880
ccgattcgca gcgcatcgcc ttctatcgcc ttcttgacga gttcttctga gcgggactct 2940
ggggttcgaa atgaccgacc aagcgacgcc caacctgcca tcacgagatt tcgattccac 3000
cgccgccttc tatgaaaggt tgggcttcgg aatcgttttc cgggacgccg gctggatgat 3060
cctccagcgc ggggatctca tgctggagtt cttcgcccac cccaacttgt ttattgcagc 3120
ttataatggt tacaaataaa gcaatagcat cacaaatttc acaaataaag catttttttc 3180
actgcattct agttgtggtt tgtccaaact catcaatgta tcttatcatg tctgtatacc 3240
gtcgacctct agctagagct tggcgtaatc atggtcatag ctgtttcctg tgtgaaattg 3300
ttatccgctc acaattccac acaacatacg agccggaagc ataaagtgta aagcctgggg 3360
tgcctaatga gtgagctaac tcacattaat tgcgttgcgc tcactgcccg ctttccagtc 3420
gggaaacctg tcgtgccagc tgcattaatg aatcggccaa cgcgcgggga gaggcggttt 3480
gcgtattggg cgctcttccg cttcctcgct cactgactcg ctgcgctcgg tcgttcggct 3540
gcggcgagcg gtatcagctc actcaaaggc ggtaatacgg ttatccacag aatcagggga 3600
taacgcagga aagaacatgt gagcaaaagg ccagcaaaag gccaggaacc gtaaaaaggc 3660
cgcgttgctg gcgtttttcc ataggctccg cccccctgac gagcatcaca aaaatcgacg 3720
ctcaagtcag aggtggcgaa acccgacagg actataaaga taccaggcgt ttccccctgg 3780
aagctccctc gtgcgctctc ctgttccgac cctgccgctt accggatacc tgtccgcctt 3840
tctcccttcg ggaagcgtgg cgctttctca tagctcacgc tgtaggtatc tcagttcggt 3900
gtaggtcgtt cgctccaagc tgggctgtgt gcacgaaccc cccgttcagc ccgaccgctg 3960
cgccttatcc ggtaactatc gtcttgagtc caacccggta agacacgact tatcgccact 4020
ggcagcagcc actggtaaca ggattagcag agcgaggtat gtaggcggtg ctacagagtt 4080
cttgaagtgg tggcctaact acggctacac tagaagaaca gtatttggta tctgcgctct 4140
gctgaagcca gttaccttcg gaaaaagagt tggtagctct tgatccggca aacaaaccac 4200
cgctggtagc ggtttttttg tttgcaagca gcagattacg cgcagaaaaa aaggatctca 4260
agaagatcct ttgatctttt ctacggggtc tgacgctcag tggaacgaaa actcacgtta 4320
agggattttg gtcatgagat tatcaaaaag gatcttcacc tagatccttt taaattaaaa 4380
atgaagtttt aaatcaatct aaagtatata tgagtaaact tggtctgaca gttaccaatg 4440
cttaatcagt gaggcaccta tctcagcgat ctgtctattt cgttcatcca tagttgcctg 4500
actccccgtc gtgtagataa ctacgatacg ggagggctta ccatctggcc ccagtgctgc 4560
aatgataccg cgagacccac gctcaccggc tccagattta tcagcaataa accagccagc 4620
cggaagggcc gagcgcagaa gtggtcctgc aactttatcc gcctccatcc agtctattaa 4680
ttgttgccgg gaagctagag taagtagttc gccagttaat agtttgcgca acgttgttgc 4740
cattgctaca ggcatcgtgg tgtcacgctc gtcgtttggt atggcttcat tcagctccgg 4800
ttcccaacga tcaaggcgag ttacatgatc ccccatgttg tgcaaaaaag cggttagctc 4860
cttcggtcct ccgatcgttg tcagaagtaa gttggccgca gtgttatcac tcatggttat 4920
ggcagcactg cataattctc ttactgtcat gccatccgta agatgctttt ctgtgactgg 4980
tgagtactca accaagtcat tctgagaata gtgtatgcgg cgaccgagtt gctcttgccc 5040
ggcgtcaata cgggataata ccgcgccaca tagcagaact ttaaaagtgc tcatcattgg 5100
aaaacgttct tcggggcgaa aactctcaag gatcttaccg ctgttgagat ccagttcgat 5160
gtaacccact cgtgcaccca actgatcttc agcatctttt actttcacca gcgtttctgg 5220
gtgagcaaaa acaggaaggc aaaatgccgc aaaaaaggga ataagggcga cacggaaatg 5280
ttgaatactc atactcttcc tttttcaata ttattgaagc atttatcagg gttattgtct 5340
catgagcgga tacatatttg aatgtattta gaaaaataaa caaatagggg ttccgcgcac 5400
atttccccga aaagtgccac ctgacgtc 5428
<210> 98
<211> 4195
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pSA
<400> 98
ctaaattgta agcgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc 60
attttttaac caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga 120
gatagggttg agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc 180
caacgtcaaa gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgtg aaccatcacc 240
ctaatcaagt tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag 300
cccccgattt agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa 360
agcgaaagga gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac 420
cacacccgcc gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtcc cattcgccat tcaggctgcg 480
caactgttgg gaagggcgat cggtgcgggc ctcttcgcta ttacgccagc tggcgaaagg 540
gggatgtgct gcaaggcgat taagttgggt aacgccaggg ttttcccagt cacgacgttg 600
taaaacgacg gccagtgagc gcgcaagcgg ccgcaacccg ggaaaagctt ggccattgca 660
tacgttgtat ccatatcata atatgtacat ttatattggc tcatgtccaa cattaccgcc 720
atgttgacat tgattattga ctagttatta atagtaatca attacggggt cattagttca 780
tagcccatat atggagttcc gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc 840
gcccaacgac ccccgcccat tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat 900
agggactttc cattgacgtc aatgggtgga gtatttacgg taaactgccc acttggcagt 960
acatcaagtg tatcatatgc caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc 1020
cgcctggcat tatgcccagt acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta 1080
cgtattagtc atcgctatta ccatggtgat gcggttttgg cagtacatca atgggcgtgg 1140
atagcggttt gactcacggg gatttccaag tctccacccc attgacgtca atgggagttt 1200
gttttggcac caaaatcaac gggactttcc aaaatgtcgt aacaactccg ccccattgac 1260
gcaaatgggc ggtaggcgtg tacggtggga ggtctatata agcagagctc gtttagtgaa 1320
ccgtcagatc gcctggagac gccatccacg ctgttttgac ctccatagaa gacaccggga 1380
ccgatccagc ctccgcggcc gggaacggtg cattggaacg cggattcccc gtgccaagag 1440
tgacgtaagt accgcctata gagtctatag gcccaccccc ttggcttctt atgcatgctc 1500
ccctgctccg acccgggctc ctcgcccgcc cggacccaca ggccaccctc aaccgtcctg 1560
gccccggacc caaaccccac ccctcactct gcttctcccc gcaggagaat tcaatcgcga 1620
aagggcccaa agatctgcca taccacattt gtagaggttt tacttgcttt aaaaaacctc 1680
ccacacctcc ccctgaacct gaaacataaa atgaatgcaa ttgttgttgt taacttgttt 1740
attgcagctt ataatggtta caaataaagc aatagcatca caaatttcac aaataaagca 1800
tttttttcac tgcattctag ttgtggtttg tccaaactca tcaatgtatc ttatcatgtc 1860
tggagctagc atcccgcccc taactccgcc ctgttccgcc cattctccgc cccatggctg 1920
actaattttt tttatttatg cagaggccga ggccgcctcg gcctctgagc tattccagaa 1980
gtagtgagga ggcttttttg gaggcctagg cttttgcgtc gagaagcgcg cttggcgtaa 2040
tcatggtcat agctgtttcc tgtgtgaaat tgttatccgc tcacaattcc acacaacata 2100
cgagccggaa gcataaagtg taaagcctgg ggtgcctaat gagtgagcta actcacatta 2160
attgcgttgc gctcactgcc cgctttccag tcgggaaacc tgtcgtgcca gctgcattaa 2220
tgaatcggcc aacgcgcggg gagaggcggt ttgcgtattg ggcgctcttc cgcttcctcg 2280
ctcactgact cgctgcgctc ggtcgttcgg ctgcggcgag cggtatcagc tcactcaaag 2340
gcggtaatac ggttatccac agaatcaggg gataacgcag gaaagaacat gtgagcaaaa 2400
ggccagcaaa aggccaggaa ccgtaaaaag gccgcgttgc tggcgttttt ccataggctc 2460
cgcccccctg acgagcatca caaaaatcga cgctcaagtc agaggtggcg aaacccgaca 2520
ggactataaa gataccaggc gtttccccct ggaagctccc tcgtgcgctc tcctgttccg 2580
accctgccgc ttaccggata cctgtccgcc tttctccctt cgggaagcgt ggcgctttct 2640
catagctcac gctgtaggta tctcagttcg gtgtaggtcg ttcgctccaa gctgggctgt 2700
gtgcacgaac cccccgttca gcccgaccgc tgcgccttat ccggtaacta tcgtcttgag 2760
tccaacccgg taagacacga cttatcgcca ctggcagcag ccactggtaa caggattagc 2820
agagcgaggt atgtaggcgg tgctacagag ttcttgaagt ggtggcctaa ctacggctac 2880
actagaagga cagtatttgg tatctgcgct ctgctgaagc cagttacctt cggaaaaaga 2940
gttggtagct cttgatccgg caaacaaacc accgctggta gcggtggttt ttttgtttgc 3000
aagcagcaga ttacgcgcag aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg 3060
gggtctgacg ctcagtggaa cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca 3120
aaaaggatct tcacctagat ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt 3180
atatatgagt aaacttggtc tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca 3240
gcgatctgtc tatttcgttc atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg 3300
atacgggagg gcttaccatc tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca 3360
ccggctccag atttatcagc aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt 3420
cctgcaactt tatccgcctc catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt 3480
agttcgccag ttaatagttt gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca 3540
cgctcgtcgt ttggtatggc ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca 3600
tgatccccca tgttgtgcaa aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga 3660
agtaagttgg ccgcagtgtt atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact 3720
gtcatgccat ccgtaagatg cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga 3780
gaatagtgta tgcggcgacc gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg 3840
ccacatagca gaactttaaa agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc 3900
tcaaggatct taccgctgtt gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga 3960
tcttcagcat cttttacttt caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat 4020
gccgcaaaaa agggaataag ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt 4080
caatattatt gaagcattta tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt 4140
atttagaaaa ataaacaaat aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccac 4195
<210> 99
<211> 824
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 人工构造
<400> 99
gttaacgaat tcccaccatg attgaacaag atggattgca cgcaggttct ccggccgctt 60
gggtggagag gctattcggc tatgactggg cacaacagac aatcggctgc tctgatgccg 120
ccgtgttccg gctgtcagcg caggggcgcc cggttctttt tgtcaagacc gacctgtccg 180
gtgccctgaa tgaactgcag gacgaggcag cgcggctatc gtggctggcc acgacgggcg 240
ttccttgcgc agctgtgctc gacgttgtca ctgaagcggg aagggactgg ctgctattgg 300
gcgaagtgcc ggggcaggat ctcctgtcat ctcaccttgc tcctgccgag aaagtatcca 360
tcatggctga tgcaatgcgg cggctgcata cgcttgatcc ggctacctgc ccattcgacc 420
accaagcgaa acatcgcatc gagcgagcac gtactcggat ggaagccggt cttgtcgatc 480
aggatgatct ggacgaagag catcaggggc tcgcgccagc cgaactgttc gccaggctca 540
aggcgcgcat gcccgacggc gaggatctcg tcgtgaccca tggcgatgcc tgcttgccga 600
atatcatggt ggaaaatggc cgcttttctg gattcatcga ctgtggccgg ctgggtgtgg 660
cggaccgcta tcaggacata gcgttggcta cccgtgatat tgctgaagag cttggcggcg 720
aatgggctga ccgcttcctc gtgctttacg gtatcgccgc tcccgattcg cagcgcatcg 780
ccttctatcg ccttcttgac gagttcttct gaagatctgt taac 824
<210> 100
<211> 6739
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pCDNA3-TNR1B-Mth
<400> 100
gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg 60
ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg 120
cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc 180
ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt 240
gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata 300
tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc 360
cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc 420
attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt 480
atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt 540
atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca 600
tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg 660
actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc 720
aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg 780
gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca 840
ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc 900
gtttaaactt aagcttgaat tcccaccatg gcgcccgtcg ccgtctgggc cgcgctggcc 960
gtcggactgg agctctgggc tgcggcgcac gccttgcccg cccaggtggc atttacaccc 1020
tacgccccgg agcccgggag cacatgccgg ctcagagaat actatgacca gacagctcag 1080
atgtgctgca gcaaatgctc gccgggccaa catgcaaaag tcttctgtac caagacctcg 1140
gacaccgtgt gtgactcctg tgaggacagc acatacaccc agctctggaa ctgggttccc 1200
gagtgcttga gctgtggctc ccgctgtagc tctgaccagg tggaaactca agcctgcact 1260
cgggaacaga accgcatctg cacctgcagg cccggctggt actgcgcgct gagcaagcag 1320
gaggggtgcc ggctgtgcgc gccgctgcgc aagtgccgcc cgggcttcgg cgtggccaga 1380
ccaggaactg aaacatcaga cgtggtgtgc aagccctgtg ccccggggac gttctccaac 1440
acgacttcat ccacggatat ttgcaggccc caccagatct gtaacgtggt ggccatccct 1500
gggaatgcaa gcatggatgc agtctgcacg tccacgtccc ccacccggag tatggcccca 1560
ggggcagtac acttacccca gccagtgtcc acacgatccc aacacacgca gccaactcca 1620
gaacccagca ctgctccaag cacctccttc ctgctcccaa tggggcccag ccccccagct 1680
gaagggagca ctggcgacgg gtgcgtatcc ggtgacacca ttgtaatgac tagtggcggg 1740
ccccgcactg tggctgaact ggagggcaaa ccgttcaccg cactgattcg cggctctggc 1800
tacccatgcc cctcaggttt cttccgcacc tgtgaacgtg acgtatatga tctgcgtaca 1860
cgtgagggtc attgcttacg tttgacccat gatcaccgtg ttctggtgat ggatggtggc 1920
ctggaatggc gtgccgcggg tgaactggaa cgcggcgacc gcctggtgat ggatgatgca 1980
gctggcgagt ttccggcact ggcaaccttc cgtggcctgc gtggcgctgg ccgccaggat 2040
gtttatgacg ctactgttta cggtgctagc gcattcactg ctaatggctt cattgtacac 2100
gcatgtggcg agcagcccgg gaccggtctg aactcaggcc tcacgacaaa tcctggtgta 2160
tccgcttggc aggtcaacac agcttatact gcgggacaat tggtcacata taacggcaag 2220
acgtataaat gtttgcagcc ccacacctcc ttggcaggat gggaaccatc caacgttcct 2280
gccttgtggc agcttcaatg actcgagcgg cccgtttaaa cccgctgatc agcctcgact 2340
gtgccttcta gttgccagcc atctgttgtt tgcccctccc ccgtgccttc cttgaccctg 2400
gaaggtgcca ctcccactgt cctttcctaa taaaatgagg aaattgcatc gcattgtctg 2460
agtaggtgtc attctattct ggggggtggg gtggggcagg acagcaaggg ggaggattgg 2520
gaagacaata gcaggcatgc tggggatgcg gtgggctcta tggcttctga ggcggaaaga 2580
accagctggg gctctagggg gtatccccac gcgccctgta gcggcgcatt aagcgcggcg 2640
ggtgtggtgg ttacgcgcag cgtgaccgct acacttgcca gcgccctagc gcccgctcct 2700
ttcgctttct tcccttcctt tctcgccacg ttcgccggct ttccccgtca agctctaaat 2760
cgggggctcc ctttagggtt ccgatttagt gctttacggc acctcgaccc caaaaaactt 2820
gattagggtg atggttcacg tagtgggcca tcgccctgat agacggtttt tcgccctttg 2880
acgttggagt ccacgttctt taatagtgga ctcttgttcc aaactggaac aacactcaac 2940
cctatctcgg tctattcttt tgatttataa gggattttgc cgatttcggc ctattggtta 3000
aaaaatgagc tgatttaaca aaaatttaac gcgaattaat tctgtggaat gtgtgtcagt 3060
tagggtgtgg aaagtcccca ggctccccag caggcagaag tatgcaaagc atgcatctca 3120
attagtcagc aaccaggtgt ggaaagtccc caggctcccc agcaggcaga agtatgcaaa 3180
gcatgcatct caattagtca gcaaccatag tcccgcccct aactccgccc atcccgcccc 3240
taactccgcc cagttccgcc cattctccgc cccatggctg actaattttt tttatttatg 3300
cagaggccga ggccgcctct gcctctgagc tattccagaa gtagtgagga ggcttttttg 3360
gaggcctagg cttttgcaaa aagctcccgg gagcttgtat atccattttc ggatctgatc 3420
aagagacagg atgaggatcg tttcgcatga ttgaacaaga tggattgcac gcaggttctc 3480
cggccgcttg ggtggagagg ctattcggct atgactgggc acaacagaca atcggctgct 3540
ctgatgccgc cgtgttccgg ctgtcagcgc aggggcgccc ggttcttttt gtcaagaccg 3600
acctgtccgg tgccctgaat gaactgcagg acgaggcagc gcggctatcg tggctggcca 3660
cgacgggcgt tccttgcgca gctgtgctcg acgttgtcac tgaagcggga agggactggc 3720
tgctattggg cgaagtgccg gggcaggatc tcctgtcatc tcaccttgct cctgccgaga 3780
aagtatccat catggctgat gcaatgcggc ggctgcatac gcttgatccg gctacctgcc 3840
cattcgacca ccaagcgaaa catcgcatcg agcgagcacg tactcggatg gaagccggtc 3900
ttgtcgatca ggatgatctg gacgaagagc atcaggggct cgcgccagcc gaactgttcg 3960
ccaggctcaa ggcgcgcatg cccgacggcg aggatctcgt cgtgacccat ggcgatgcct 4020
gcttgccgaa tatcatggtg gaaaatggcc gcttttctgg attcatcgac tgtggccggc 4080
tgggtgtggc ggaccgctat caggacatag cgttggctac ccgtgatatt gctgaagagc 4140
ttggcggcga atgggctgac cgcttcctcg tgctttacgg tatcgccgct cccgattcgc 4200
agcgcatcgc cttctatcgc cttcttgacg agttcttctg agcgggactc tggggttcga 4260
aatgaccgac caagcgacgc ccaacctgcc atcacgagat ttcgattcca ccgccgcctt 4320
ctatgaaagg ttgggcttcg gaatcgtttt ccgggacgcc ggctggatga tcctccagcg 4380
cggggatctc atgctggagt tcttcgccca ccccaacttg tttattgcag cttataatgg 4440
ttacaaataa agcaatagca tcacaaattt cacaaataaa gcattttttt cactgcattc 4500
tagttgtggt ttgtccaaac tcatcaatgt atcttatcat gtctgtatac cgtcgacctc 4560
tagctagagc ttggcgtaat catggtcata gctgtttcct gtgtgaaatt gttatccgct 4620
cacaattcca cacaacatac gagccggaag cataaagtgt aaagcctggg gtgcctaatg 4680
agtgagctaa ctcacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt cgggaaacct 4740
gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt tgcgtattgg 4800
gcgctcttcc gcttcctcgc tcactgactc gctgcgctcg gtcgttcggc tgcggcgagc 4860
ggtatcagct cactcaaagg cggtaatacg gttatccaca gaatcagggg ataacgcagg 4920
aaagaacatg tgagcaaaag gccagcaaaa ggccaggaac cgtaaaaagg ccgcgttgct 4980
ggcgtttttc cataggctcc gcccccctga cgagcatcac aaaaatcgac gctcaagtca 5040
gaggtggcga aacccgacag gactataaag ataccaggcg tttccccctg gaagctccct 5100
cgtgcgctct cctgttccga ccctgccgct taccggatac ctgtccgcct ttctcccttc 5160
gggaagcgtg gcgctttctc atagctcacg ctgtaggtat ctcagttcgg tgtaggtcgt 5220
tcgctccaag ctgggctgtg tgcacgaacc ccccgttcag cccgaccgct gcgccttatc 5280
cggtaactat cgtcttgagt ccaacccggt aagacacgac ttatcgccac tggcagcagc 5340
cactggtaac aggattagca gagcgaggta tgtaggcggt gctacagagt tcttgaagtg 5400
gtggcctaac tacggctaca ctagaagaac agtatttggt atctgcgctc tgctgaagcc 5460
agttaccttc ggaaaaagag ttggtagctc ttgatccggc aaacaaacca ccgctggtag 5520
cggttttttt gtttgcaagc agcagattac gcgcagaaaa aaaggatctc aagaagatcc 5580
tttgatcttt tctacggggt ctgacgctca gtggaacgaa aactcacgtt aagggatttt 5640
ggtcatgaga ttatcaaaaa ggatcttcac ctagatcctt ttaaattaaa aatgaagttt 5700
taaatcaatc taaagtatat atgagtaaac ttggtctgac agttaccaat gcttaatcag 5760
tgaggcacct atctcagcga tctgtctatt tcgttcatcc atagttgcct gactccccgt 5820
cgtgtagata actacgatac gggagggctt accatctggc cccagtgctg caatgatacc 5880
gcgagaccca cgctcaccgg ctccagattt atcagcaata aaccagccag ccggaagggc 5940
cgagcgcaga agtggtcctg caactttatc cgcctccatc cagtctatta attgttgccg 6000
ggaagctaga gtaagtagtt cgccagttaa tagtttgcgc aacgttgttg ccattgctac 6060
aggcatcgtg gtgtcacgct cgtcgtttgg tatggcttca ttcagctccg gttcccaacg 6120
atcaaggcga gttacatgat cccccatgtt gtgcaaaaaa gcggttagct ccttcggtcc 6180
tccgatcgtt gtcagaagta agttggccgc agtgttatca ctcatggtta tggcagcact 6240
gcataattct cttactgtca tgccatccgt aagatgcttt tctgtgactg gtgagtactc 6300
aaccaagtca ttctgagaat agtgtatgcg gcgaccgagt tgctcttgcc cggcgtcaat 6360
acgggataat accgcgccac atagcagaac tttaaaagtg ctcatcattg gaaaacgttc 6420
ttcggggcga aaactctcaa ggatcttacc gctgttgaga tccagttcga tgtaacccac 6480
tcgtgcaccc aactgatctt cagcatcttt tactttcacc agcgtttctg ggtgagcaaa 6540
aacaggaagg caaaatgccg caaaaaaggg aataagggcg acacggaaat gttgaatact 6600
catactcttc ctttttcaat attattgaag catttatcag ggttattgtc tcatgagcgg 6660
atacatattt gaatgtattt agaaaaataa acaaataggg gttccgcgca catttccccg 6720
aaaagtgcca cctgacgtc 6739
<210> 101
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 前体-TNR1B-内含肽嵌合多肽
<400> 101
Met Ala Pro Val Ala Val Trp Ala Ala Leu Ala Val Gly Leu Glu Leu
1 5 10 15
Trp Ala Ala Ala His Ala Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr
20 25 30
Ala Pro Glu Pro Gly Ser Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln
35 40 45
Thr Ala Gln Met Cys Cys Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys
50 55 60
Val Phe Cys Thr Lys Thr Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp
65 70 75 80
Ser Thr Tyr Thr Gln Leu Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys
85 90 95
Gly Ser Arg Cys Ser Ser Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg
100 105 110
Glu Gln Asn Arg Ile Cys Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu
115 120 125
Ser Lys Gln Glu Gly Cys Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg
130 135 140
Pro Gly Phe Gly Val Ala Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val
145 150 155 160
Cys Lys Pro Cys Ala Pro Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr
165 170 175
Asp Ile Cys Arg Pro His Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly
180 185 190
Asn Ala Ser Met Asp Ala Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser
195 200 205
Met Ala Pro Gly Ala Val His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser
210 215 220
Gln His Thr Gln Pro Thr Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser
225 230 235 240
Phe Leu Leu Pro Met Gly Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly
245 250 255
Asp Gly Cys Val Ser Gly Asp Thr Ile Val Met Thr Ser Gly Gly Pro
260 265 270
Arg Thr Val Ala Glu Leu Glu Gly Lys Pro Phe Thr Ala Leu Ile Arg
275 280 285
Gly Ser Gly Tyr Pro Cys Pro Ser Gly Phe Phe Arg Thr Cys Glu Arg
290 295 300
Asp Val Tyr Asp Leu Arg Thr Arg Glu Gly His Cys Leu Arg Leu Thr
305 310 315 320
His Asp His Arg Val Leu Val Met Asp Gly Gly Leu Glu Trp Arg Ala
325 330 335
Ala Gly Glu Leu Glu Arg Gly Asp Arg Leu Val Met Asp Asp Ala Ala
340 345 350
Gly Glu Phe Pro Ala Leu Ala Thr Phe Arg Gly Leu Arg Gly Ala Gly
355 360 365
Arg Gln Asp Val Tyr Asp Ala Thr Val Tyr Gly Ala Ser Ala Phe Thr
370 375 380
Ala Asn Gly Phe Ile Val His Ala Cys Gly Glu Gln Pro Gly Thr Gly
385 390 395 400
Leu Asn Ser Gly Leu Thr Thr Asn Pro Gly Val Ser Ala Trp Gln Val
405 410 415
Asn Thr Ala Tyr Thr Ala Gly Gln Leu Val Thr Tyr Asn Gly Lys Thr
420 425 430
Tyr Lys Cys Leu Gln Pro His Thr Ser Leu Ala Gly Trp Glu Pro Ser
435 440 445
Asn Val Pro Ala Leu Trp Gln Leu Gln
450 455
<210> 102
<211> 435
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 成熟TNR1B-内含肽融合蛋白
<400> 102
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Gly Cys Val Ser Gly
225 230 235 240
Asp Thr Ile Val Met Thr Ser Gly Gly Pro Arg Thr Val Ala Glu Leu
245 250 255
Glu Gly Lys Pro Phe Thr Ala Leu Ile Arg Gly Ser Gly Tyr Pro Cys
260 265 270
Pro Ser Gly Phe Phe Arg Thr Cys Glu Arg Asp Val Tyr Asp Leu Arg
275 280 285
Thr Arg Glu Gly His Cys Leu Arg Leu Thr His Asp His Arg Val Leu
290 295 300
Val Met Asp Gly Gly Leu Glu Trp Arg Ala Ala Gly Glu Leu Glu Arg
305 310 315 320
Gly Asp Arg Leu Val Met Asp Asp Ala Ala Gly Glu Phe Pro Ala Leu
325 330 335
Ala Thr Phe Arg Gly Leu Arg Gly Ala Gly Arg Gln Asp Val Tyr Asp
340 345 350
Ala Thr Val Tyr Gly Ala Ser Ala Phe Thr Ala Asn Gly Phe Ile Val
355 360 365
His Ala Cys Gly Glu Gln Pro Gly Thr Gly Leu Asn Ser Gly Leu Thr
370 375 380
Thr Asn Pro Gly Val Ser Ala Trp Gln Val Asn Thr Ala Tyr Thr Ala
385 390 395 400
Gly Gln Leu Val Thr Tyr Asn Gly Lys Thr Tyr Lys Cys Leu Gln Pro
405 410 415
His Thr Ser Leu Ala Gly Trp Glu Pro Ser Asn Val Pro Ala Leu Trp
420 425 430
Gln Leu Gln
435
<210> 103
<211> 6103
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> pCDNA3-SHH-IgG1-Fc11
<400> 103
gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg 60
ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg 120
cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc 180
ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt 240
gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata 300
tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc 360
cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc 420
attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt 480
atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt 540
atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca 600
tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg 660
actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc 720
aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg 780
gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca 840
ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc 900
gtttaaactt aagcttgaat tcccaccatg ctgctgctgg cgagatgtct gctgctagtc 960
ctcgtctcct cgctgctggt atgctcggga ctggcgtgcc caccgtgccc agcacctgaa 1020
ctcctggggg ggccctcagt cttcctcttc cccccaaaac ccaaggacac cctcatgatc 1080
tcccggaccc ctgaggtcac atgcgtggtg gtggacgtga gccacgaaga ccctgaggtc 1140
aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtgcataatg ccaagacaaa gccgcgggag 1200
gagcagtaca acagcacgta ccgtgtggtc agcgtcctca ccgtcctgca ccaggactgg 1260
ctgaatggca aggagtacaa gtgcaaggtc tccaacaaag ccctcccagc ccccatcgag 1320
aaaaccatct ccaaagccaa agggcagccc cgagaaccac aggtgtacac cctgccccca 1380
tcccgggatg agctgaccaa gaaccaggtc agcctgacct gcctggtcaa aggcttctat 1440
cccagcgaca tcgccgtgga gtgggagagc aatgggcagc cggagaacaa ctacaagacc 1500
acgcctcccg tgctggactc cgacggctcc ttcttcctct acagcaagct caccgtggac 1560
aagagcaggt ggcagcaggg gaacgtcttc tcatgctccg tgatgcatga ggctctgcac 1620
aaccactaca cgcagaagag cctctccctg tctccgggta aatgactcga gcggcccgtt 1680
taaacccgct gatcagcctc gactgtgcct tctagttgcc agccatctgt tgtttgcccc 1740
tcccccgtgc cttccttgac cctggaaggt gccactccca ctgtcctttc ctaataaaat 1800
gaggaaattg catcgcattg tctgagtagg tgtcattcta ttctgggggg tggggtgggg 1860
caggacagca agggggagga ttgggaagac aatagcaggc atgctgggga tgcggtgggc 1920
tctatggctt ctgaggcgga aagaaccagc tggggctcta gggggtatcc ccacgcgccc 1980
tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt 2040
gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc 2100
ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggg ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta 2160
cggcacctcg accccaaaaa acttgattag ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc 2220
tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg gagtccacgt tctttaatag tggactcttg 2280
ttccaaactg gaacaacact caaccctatc tcggtctatt cttttgattt ataagggatt 2340
ttgccgattt cggcctattg gttaaaaaat gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat 2400
taattctgtg gaatgtgtgt cagttagggt gtggaaagtc cccaggctcc ccagcaggca 2460
gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccag gtgtggaaag tccccaggct 2520
ccccagcagg cagaagtatg caaagcatgc atctcaatta gtcagcaacc atagtcccgc 2580
ccctaactcc gcccatcccg cccctaactc cgcccagttc cgcccattct ccgccccatg 2640
gctgactaat tttttttatt tatgcagagg ccgaggccgc ctctgcctct gagctattcc 2700
agaagtagtg aggaggcttt tttggaggcc taggcttttg caaaaagctc ccgggagctt 2760
gtatatccat tttcggatct gatcaagaga caggatgagg atcgtttcgc atgattgaac 2820
aagatggatt gcacgcaggt tctccggccg cttgggtgga gaggctattc ggctatgact 2880
gggcacaaca gacaatcggc tgctctgatg ccgccgtgtt ccggctgtca gcgcaggggc 2940
gcccggttct ttttgtcaag accgacctgt ccggtgccct gaatgaactg caggacgagg 3000
cagcgcggct atcgtggctg gccacgacgg gcgttccttg cgcagctgtg ctcgacgttg 3060
tcactgaagc gggaagggac tggctgctat tgggcgaagt gccggggcag gatctcctgt 3120
catctcacct tgctcctgcc gagaaagtat ccatcatggc tgatgcaatg cggcggctgc 3180
atacgcttga tccggctacc tgcccattcg accaccaagc gaaacatcgc atcgagcgag 3240
cacgtactcg gatggaagcc ggtcttgtcg atcaggatga tctggacgaa gagcatcagg 3300
ggctcgcgcc agccgaactg ttcgccaggc tcaaggcgcg catgcccgac ggcgaggatc 3360
tcgtcgtgac ccatggcgat gcctgcttgc cgaatatcat ggtggaaaat ggccgctttt 3420
ctggattcat cgactgtggc cggctgggtg tggcggaccg ctatcaggac atagcgttgg 3480
ctacccgtga tattgctgaa gagcttggcg gcgaatgggc tgaccgcttc ctcgtgcttt 3540
acggtatcgc cgctcccgat tcgcagcgca tcgccttcta tcgccttctt gacgagttct 3600
tctgagcggg actctggggt tcgaaatgac cgaccaagcg acgcccaacc tgccatcacg 3660
agatttcgat tccaccgccg ccttctatga aaggttgggc ttcggaatcg ttttccggga 3720
cgccggctgg atgatcctcc agcgcgggga tctcatgctg gagttcttcg cccaccccaa 3780
cttgtttatt gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa 3840
taaagcattt ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta 3900
tcatgtctgt ataccgtcga cctctagcta gagcttggcg taatcatggt catagctgtt 3960
tcctgtgtga aattgttatc cgctcacaat tccacacaac atacgagccg gaagcataaa 4020
gtgtaaagcc tggggtgcct aatgagtgag ctaactcaca ttaattgcgt tgcgctcact 4080
gcccgctttc cagtcgggaa acctgtcgtg ccagctgcat taatgaatcg gccaacgcgc 4140
ggggagaggc ggtttgcgta ttgggcgctc ttccgcttcc tcgctcactg actcgctgcg 4200
ctcggtcgtt cggctgcggc gagcggtatc agctcactca aaggcggtaa tacggttatc 4260
cacagaatca ggggataacg caggaaagaa catgtgagca aaaggccagc aaaaggccag 4320
gaaccgtaaa aaggccgcgt tgctggcgtt tttccatagg ctccgccccc ctgacgagca 4380
tcacaaaaat cgacgctcaa gtcagaggtg gcgaaacccg acaggactat aaagatacca 4440
ggcgtttccc cctggaagct ccctcgtgcg ctctcctgtt ccgaccctgc cgcttaccgg 4500
atacctgtcc gcctttctcc cttcgggaag cgtggcgctt tctcatagct cacgctgtag 4560
gtatctcagt tcggtgtagg tcgttcgctc caagctgggc tgtgtgcacg aaccccccgt 4620
tcagcccgac cgctgcgcct tatccggtaa ctatcgtctt gagtccaacc cggtaagaca 4680
cgacttatcg ccactggcag cagccactgg taacaggatt agcagagcga ggtatgtagg 4740
cggtgctaca gagttcttga agtggtggcc taactacggc tacactagaa gaacagtatt 4800
tggtatctgc gctctgctga agccagttac cttcggaaaa agagttggta gctcttgatc 4860
cggcaaacaa accaccgctg gtagcggttt ttttgtttgc aagcagcaga ttacgcgcag 4920
aaaaaaagga tctcaagaag atcctttgat cttttctacg gggtctgacg ctcagtggaa 4980
cgaaaactca cgttaaggga ttttggtcat gagattatca aaaaggatct tcacctagat 5040
ccttttaaat taaaaatgaa gttttaaatc aatctaaagt atatatgagt aaacttggtc 5100
tgacagttac caatgcttaa tcagtgaggc acctatctca gcgatctgtc tatttcgttc 5160
atccatagtt gcctgactcc ccgtcgtgta gataactacg atacgggagg gcttaccatc 5220
tggccccagt gctgcaatga taccgcgaga cccacgctca ccggctccag atttatcagc 5280
aataaaccag ccagccggaa gggccgagcg cagaagtggt cctgcaactt tatccgcctc 5340
catccagtct attaattgtt gccgggaagc tagagtaagt agttcgccag ttaatagttt 5400
gcgcaacgtt gttgccattg ctacaggcat cgtggtgtca cgctcgtcgt ttggtatggc 5460
ttcattcagc tccggttccc aacgatcaag gcgagttaca tgatccccca tgttgtgcaa 5520
aaaagcggtt agctccttcg gtcctccgat cgttgtcaga agtaagttgg ccgcagtgtt 5580
atcactcatg gttatggcag cactgcataa ttctcttact gtcatgccat ccgtaagatg 5640
cttttctgtg actggtgagt actcaaccaa gtcattctga gaatagtgta tgcggcgacc 5700
gagttgctct tgcccggcgt caatacggga taataccgcg ccacatagca gaactttaaa 5760
agtgctcatc attggaaaac gttcttcggg gcgaaaactc tcaaggatct taccgctgtt 5820
gagatccagt tcgatgtaac ccactcgtgc acccaactga tcttcagcat cttttacttt 5880
caccagcgtt tctgggtgag caaaaacagg aaggcaaaat gccgcaaaaa agggaataag 5940
ggcgacacgg aaatgttgaa tactcatact cttccttttt caatattatt gaagcattta 6000
tcagggttat tgtctcatga gcggatacat atttgaatgt atttagaaaa ataaacaaat 6060
aggggttccg cgcacatttc cccgaaaagt gccacctgac gtc 6103
<210> 104
<211> 245
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> pre-Fc6多肽
<400> 104
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
20 25 30
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
35 40 45
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
50 55 60
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
65 70 75 80
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
85 90 95
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
100 105 110
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
115 120 125
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
130 135 140
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
145 150 155 160
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
165 170 175
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
180 185 190
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
195 200 205
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
210 215 220
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
225 230 235 240
Leu Ser Pro Gly Lys
245
<210> 105
<211> 222
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 成熟Fc6蛋白
<400> 105
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe
1 5 10 15
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
20 25 30
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
35 40 45
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
50 55 60
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val
65 70 75 80
Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
85 90 95
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
100 105 110
Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
115 120 125
Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
130 135 140
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
145 150 155 160
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp
165 170 175
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
180 185 190
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
195 200 205
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215 220
<210> 106
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 断裂的炔烃修饰的TNR1B
<220>
<221> SITE
<222> (237)..(237)
<223> Xaa = 半胱氨酸-炔烃
<400> 106
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Gly Xaa
225 230 235
<210> 107
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 叠氮修饰的TNR1B蛋白
<220>
<221> SITE
<222> (237)..(237)
<223> Xaa = 半胱氨酸-叠氮
<400> 107
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Gly Xaa
225 230 235
<210> 108
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 半胱氨酸修饰的TNR1B
<400> 108
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Gly Cys
225 230 235
<210> 109
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 硫酯修饰的TNR1B
<220>
<221> SITE
<222> (236)..(236)
<223> Xaa = 甘氨酸-硫酯
<400> 109
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Xaa
225 230 235
<210> 110
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Az-DKTHT-Fc6蛋白
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = 叠氮-天冬氨酸
<400> 110
Xaa Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 111
<211> 227
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Az-PEG4-DKTHT-Fc6
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(1)
<223> Xaa = 叠氮-PEG4-天冬氨酸
<400> 111
Xaa Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 112
<211> 465
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有内部非肽部分的多肽。
TNR1B-炔烃-叠氮-Fc6
<220>
<221> SITE
<222> (238)..(238)
<223> Xaa = 非肽部分
<400> 112
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Gly Cys Xaa Asp Lys
225 230 235 240
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
245 250 255
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
260 265 270
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
275 280 285
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
290 295 300
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
305 310 315 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
325 330 335
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
340 345 350
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
355 360 365
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
370 375 380
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
385 390 395 400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
405 410 415
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
420 425 430
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
435 440 445
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455 460
Lys
465
<210> 113
<211> 465
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有内部非肽部分的多肽。
TNR1B-炔烃-叠氮-PEG4-Fc6
<220>
<221> SITE
<222> (238)..(238)
<223> Xaa =包含PEG4连接子的非肽部分
<400> 113
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Gly Cys Xaa Asp Lys
225 230 235 240
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
245 250 255
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
260 265 270
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
275 280 285
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
290 295 300
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
305 310 315 320
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
325 330 335
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
340 345 350
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
355 360 365
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
370 375 380
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
385 390 395 400
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
405 410 415
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
420 425 430
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
435 440 445
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
450 455 460
Lys
465
<210> 114
<211> 467
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 依那西普
<400> 114
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys
225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260 265 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275 280 285
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340 345 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355 360 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
370 375 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435 440 445
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ccagtgcaag tgcaggtgcc agaacatttc tctatcgaa 4779
<210> 118
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 阿达木单抗的前体-kappa轻链
<400> 118
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly
35 40 45
Ile Arg Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn
100 105 110
Arg Ala Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 119
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 阿达木单抗的成熟kappa轻链
<400> 119
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 120
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 前体-重链-内含肽嵌合多肽
<400> 120
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
20 25 30
Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
35 40 45
Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
85 90 95
Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu
115 120 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130 135 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145 150 155 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165 170 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180 185 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195 200 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210 215 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225 230 235 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Val Ser Gly Asp Thr Ile
245 250 255
Val Met Thr Ser Gly Gly Pro Arg Thr Val Ala Glu Leu Glu Gly Lys
260 265 270
Pro Phe Thr Ala Leu Ile Arg Gly Ser Gly Tyr Pro Cys Pro Ser Gly
275 280 285
Phe Phe Arg Thr Cys Glu Arg Asp Val Tyr Asp Leu Arg Thr Arg Glu
290 295 300
Gly His Cys Leu Arg Leu Thr His Asp His Arg Val Leu Val Met Asp
305 310 315 320
Gly Gly Leu Glu Trp Arg Ala Ala Gly Glu Leu Glu Arg Gly Asp Arg
325 330 335
Leu Val Met Asp Asp Ala Ala Gly Glu Phe Pro Ala Leu Ala Thr Phe
340 345 350
Arg Gly Leu Arg Gly Ala Gly Arg Gln Asp Val Tyr Asp Ala Thr Val
355 360 365
Tyr Gly Ala Ser Ala Phe Thr Ala Asn Gly Phe Ile Val His Ala Cys
370 375 380
Gly Glu Gln Pro Gly Thr Gly Leu Asn Ser Gly Leu Thr Thr Asn Pro
385 390 395 400
Gly Val Ser Ala Trp Gln Val Asn Thr Ala Tyr Thr Ala Gly Gln Leu
405 410 415
Val Thr Tyr Asn Gly Lys Thr Tyr Lys Cys Leu Gln Pro His Thr Ser
420 425 430
Leu Ala Gly Trp Glu Pro Ser Asn Val Pro Ala Leu Trp Gln Leu Gln
435 440 445
<210> 121
<211> 428
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 成熟重链内含肽融合蛋白
<400> 121
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Val Ser Gly Asp Thr Ile Val Met Thr Ser
225 230 235 240
Gly Gly Pro Arg Thr Val Ala Glu Leu Glu Gly Lys Pro Phe Thr Ala
245 250 255
Leu Ile Arg Gly Ser Gly Tyr Pro Cys Pro Ser Gly Phe Phe Arg Thr
260 265 270
Cys Glu Arg Asp Val Tyr Asp Leu Arg Thr Arg Glu Gly His Cys Leu
275 280 285
Arg Leu Thr His Asp His Arg Val Leu Val Met Asp Gly Gly Leu Glu
290 295 300
Trp Arg Ala Ala Gly Glu Leu Glu Arg Gly Asp Arg Leu Val Met Asp
305 310 315 320
Asp Ala Ala Gly Glu Phe Pro Ala Leu Ala Thr Phe Arg Gly Leu Arg
325 330 335
Gly Ala Gly Arg Gln Asp Val Tyr Asp Ala Thr Val Tyr Gly Ala Ser
340 345 350
Ala Phe Thr Ala Asn Gly Phe Ile Val His Ala Cys Gly Glu Gln Pro
355 360 365
Gly Thr Gly Leu Asn Ser Gly Leu Thr Thr Asn Pro Gly Val Ser Ala
370 375 380
Trp Gln Val Asn Thr Ala Tyr Thr Ala Gly Gln Leu Val Thr Tyr Asn
385 390 395 400
Gly Lys Thr Tyr Lys Cys Leu Gln Pro His Thr Ser Leu Ala Gly Trp
405 410 415
Glu Pro Ser Asn Val Pro Ala Leu Trp Gln Leu Gln
420 425
<210> 122
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 前体-重链-内含肽嵌合多肽
<400> 122
Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Ser Cys Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu
1 5 10 15
Val Thr Asn Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
20 25 30
Gln Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr
35 40 45
Phe Asp Asp Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
Leu Glu Trp Val Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr
65 70 75 80
Ala Asp Ser Val Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys
85 90 95
Asn Ser Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala
100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu
115 120 125
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
130 135 140
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
145 150 155 160
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
165 170 175
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
180 185 190
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
195 200 205
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
210 215 220
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu
225 230 235 240
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Gly Cys Val Ser Gly Asp Thr
245 250 255
Ile Val Met Thr Ser Gly Gly Pro Arg Thr Val Ala Glu Leu Glu Gly
260 265 270
Lys Pro Phe Thr Ala Leu Ile Arg Gly Ser Gly Tyr Pro Cys Pro Ser
275 280 285
Gly Phe Phe Arg Thr Cys Glu Arg Asp Val Tyr Asp Leu Arg Thr Arg
290 295 300
Glu Gly His Cys Leu Arg Leu Thr His Asp His Arg Val Leu Val Met
305 310 315 320
Asp Gly Gly Leu Glu Trp Arg Ala Ala Gly Glu Leu Glu Arg Gly Asp
325 330 335
Arg Leu Val Met Asp Asp Ala Ala Gly Glu Phe Pro Ala Leu Ala Thr
340 345 350
Phe Arg Gly Leu Arg Gly Ala Gly Arg Gln Asp Val Tyr Asp Ala Thr
355 360 365
Val Tyr Gly Ala Ser Ala Phe Thr Ala Asn Gly Phe Ile Val His Ala
370 375 380
Cys Gly Glu Gln Pro Gly Thr Gly Leu Asn Ser Gly Leu Thr Thr Asn
385 390 395 400
Pro Gly Val Ser Ala Trp Gln Val Asn Thr Ala Tyr Thr Ala Gly Gln
405 410 415
Leu Val Thr Tyr Asn Gly Lys Thr Tyr Lys Cys Leu Gln Pro His Thr
420 425 430
Ser Leu Ala Gly Trp Glu Pro Ser Asn Val Pro Ala Leu Trp Gln Leu
435 440 445
Gln
<210> 123
<211> 429
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 成熟重链内含肽融合蛋白
<400> 123
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Gly Cys Val Ser Gly Asp Thr Ile Val Met Thr
225 230 235 240
Ser Gly Gly Pro Arg Thr Val Ala Glu Leu Glu Gly Lys Pro Phe Thr
245 250 255
Ala Leu Ile Arg Gly Ser Gly Tyr Pro Cys Pro Ser Gly Phe Phe Arg
260 265 270
Thr Cys Glu Arg Asp Val Tyr Asp Leu Arg Thr Arg Glu Gly His Cys
275 280 285
Leu Arg Leu Thr His Asp His Arg Val Leu Val Met Asp Gly Gly Leu
290 295 300
Glu Trp Arg Ala Ala Gly Glu Leu Glu Arg Gly Asp Arg Leu Val Met
305 310 315 320
Asp Asp Ala Ala Gly Glu Phe Pro Ala Leu Ala Thr Phe Arg Gly Leu
325 330 335
Arg Gly Ala Gly Arg Gln Asp Val Tyr Asp Ala Thr Val Tyr Gly Ala
340 345 350
Ser Ala Phe Thr Ala Asn Gly Phe Ile Val His Ala Cys Gly Glu Gln
355 360 365
Pro Gly Thr Gly Leu Asn Ser Gly Leu Thr Thr Asn Pro Gly Val Ser
370 375 380
Ala Trp Gln Val Asn Thr Ala Tyr Thr Ala Gly Gln Leu Val Thr Tyr
385 390 395 400
Asn Gly Lys Thr Tyr Lys Cys Leu Gln Pro His Thr Ser Leu Ala Gly
405 410 415
Trp Glu Pro Ser Asn Val Pro Ala Leu Trp Gln Leu Gln
420 425
<210> 124
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 炔烃修饰的阿达木单抗Fab-1蛋白质的一部分。在
C末端修饰。
<220>
<221> SITE
<222> (230)..(230)
<223> Xaa = 半胱氨酸-炔烃
<400> 124
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Xaa
225 230
<210> 125
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 炔烃修饰的阿达木单抗Fab-2蛋白质的一部分。在
C末端修饰
<220>
<221> SITE
<222> (131)..(131)
<223> Xaa = 半胱氨酸-炔烃
<220>
<221> misc_feature
<222> (231)..(231)
<223> Xaa可以是任何天然发生的氨基酸
<400> 125
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Gly Xaa
225 230
<210> 126
<211> 230
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 叠氮修饰的阿达木单抗Fab-1蛋白质的一部分。修饰的
C末端
<220>
<221> SITE
<222> (230)..(230)
<223> Xaa = 半胱氨酸-叠氮
<400> 126
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Xaa
225 230
<210> 127
<211> 231
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 叠氮修饰的阿达木单抗Fab-2蛋白质的一部分。修饰的
C末端
<220>
<221> SITE
<222> (231)..(231)
<223> Xaa = 半胱氨酸-叠氮
<400> 127
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Gly Xaa
225 230
<210> 128
<211> 214
<212> PRT
<213> 智人
<400> 128
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala
20 25 30
Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 129
<211> 450
<212> PRT
<213> 智人
<400> 129
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr
20 25 30
Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys
195 200 205
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp
210 215 220
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
245 250 255
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
260 265 270
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
275 280 285
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
290 295 300
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
305 310 315 320
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
370 375 380
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
405 410 415
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
420 425 430
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 130
<211> 215
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列C的曲妥珠单抗轻链
<400> 130
Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val
1 5 10 15
Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr
20 25 30
Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala
100 105 110
Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser
115 120 125
Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu
130 135 140
Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser
145 150 155 160
Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu
165 170 175
Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val
180 185 190
Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys
195 200 205
Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 131
<211> 238
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 131
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
20 25 30
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
35 40 45
Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
115 120 125
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
130 135 140
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
145 150 155 160
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
165 170 175
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
180 185 190
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
195 200 205
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
210 215 220
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 132
<211> 238
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 132
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro
20 25 30
Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg
35 40 45
Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
100 105 110
Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val
115 120 125
Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro
130 135 140
Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu
145 150 155 160
Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn
165 170 175
Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser
180 185 190
Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala
195 200 205
Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly
210 215 220
Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 133
<211> 232
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 133
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
20 25 30
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn
35 40 45
Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
50 55 60
Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
65 70 75 80
Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
85 90 95
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr
100 105 110
Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
115 120 125
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
130 135 140
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
145 150 155 160
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
165 170 175
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
195 200 205
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
210 215 220
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 134
<211> 216
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CP的曲妥珠单抗轻链
<400> 134
Cys Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser
1 5 10 15
Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn
20 25 30
Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu
65 70 75 80
Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr
85 90 95
Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val
100 105 110
Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys
115 120 125
Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg
130 135 140
Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn
145 150 155 160
Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser
165 170 175
Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys
180 185 190
Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr
195 200 205
Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 135
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 135
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
20 25 30
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
35 40 45
Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
50 55 60
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
100 105 110
Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
115 120 125
Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145 150 155 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165 170 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195 200 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210 215 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 136
<211> 239
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 136
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser
20 25 30
Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys
35 40 45
Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys
50 55 60
Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr
65 70 75 80
Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe
85 90 95
Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr
100 105 110
Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys
115 120 125
Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro
130 135 140
Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu
145 150 155 160
Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp
165 170 175
Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp
180 185 190
Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys
195 200 205
Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln
210 215 220
Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 137
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 137
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
20 25 30
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val
35 40 45
Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
50 55 60
Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg
65 70 75 80
Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
85 90 95
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr
100 105 110
Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
115 120 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
130 135 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145 150 155 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
165 170 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
195 200 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
210 215 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 138
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPP的曲妥珠单抗轻链
<400> 138
Cys Pro Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
1 5 10 15
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val
20 25 30
Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
35 40 45
Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg
50 55 60
Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
65 70 75 80
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr
85 90 95
Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 139
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH 信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 139
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln
20 25 30
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
35 40 45
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp
85 90 95
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
100 105 110
Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
130 135 140
Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys
145 150 155 160
Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val
165 170 175
Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln
180 185 190
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser
195 200 205
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
210 215 220
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235 240
<210> 140
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 140
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln
20 25 30
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
35 40 45
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp
85 90 95
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
100 105 110
Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
130 135 140
Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys
145 150 155 160
Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val
165 170 175
Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln
180 185 190
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser
195 200 205
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
210 215 220
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235 240
<210> 141
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 141
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr
100 105 110
Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 142
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPR的曲妥珠单抗轻链
<400> 142
Cys Pro Arg Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
1 5 10 15
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val
20 25 30
Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
35 40 45
Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg
50 55 60
Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
65 70 75 80
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr
85 90 95
Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 143
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 143
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Arg Asp Ile Gln Met Thr Gln
20 25 30
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
35 40 45
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp
85 90 95
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
100 105 110
Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
130 135 140
Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys
145 150 155 160
Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val
165 170 175
Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln
180 185 190
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser
195 200 205
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
210 215 220
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235 240
<210> 144
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 144
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Arg Asp Ile Gln Met Thr Gln
20 25 30
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
35 40 45
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp
85 90 95
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
100 105 110
Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
130 135 140
Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys
145 150 155 160
Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val
165 170 175
Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln
180 185 190
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser
195 200 205
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
210 215 220
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235 240
<210> 145
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 145
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Arg Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr
100 105 110
Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 146
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列 CPS的曲妥珠单抗轻链
<400> 146
Cys Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
1 5 10 15
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val
20 25 30
Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
35 40 45
Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg
50 55 60
Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
65 70 75 80
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr
85 90 95
Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 147
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 147
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln
20 25 30
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
35 40 45
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp
85 90 95
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
100 105 110
Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
130 135 140
Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys
145 150 155 160
Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val
165 170 175
Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln
180 185 190
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser
195 200 205
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
210 215 220
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235 240
<210> 148
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 148
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln
20 25 30
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
35 40 45
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp
85 90 95
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
100 105 110
Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
130 135 140
Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys
145 150 155 160
Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val
165 170 175
Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln
180 185 190
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser
195 200 205
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
210 215 220
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235 240
<210> 149
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 149
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Ser Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr
100 105 110
Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 150
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CDKT的曲妥珠单抗轻链
<400> 150
Cys Asp Lys Thr Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
1 5 10 15
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp
20 25 30
Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr
85 90 95
Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 151
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 151
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Asp Lys Thr Asp Ile Gln Met Thr
20 25 30
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
35 40 45
Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln
50 55 60
Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr
85 90 95
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr
100 105 110
Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly
115 120 125
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile
130 135 140
Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val
145 150 155 160
Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys
165 170 175
Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu
180 185 190
Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu
195 200 205
Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr
210 215 220
His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
225 230 235 240
Cys
<210> 152
<211> 241
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 152
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Lys Thr Asp Ile Gln Met Thr
20 25 30
Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile
35 40 45
Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln
50 55 60
Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe
65 70 75 80
Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr
85 90 95
Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr
100 105 110
Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly
115 120 125
Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile
130 135 140
Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val
145 150 155 160
Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys
165 170 175
Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu
180 185 190
Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu
195 200 205
Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr
210 215 220
His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu
225 230 235 240
Cys
<210> 153
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 153
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Asp Lys Thr Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu
20 25 30
Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
35 40 45
Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
50 55 60
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro
65 70 75 80
Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile
85 90 95
Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His
100 105 110
Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
115 120 125
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
130 135 140
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
165 170 175
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
180 185 190
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
195 200 205
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
210 215 220
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 154
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CDKTHT的曲妥珠单抗轻链
<400> 154
Cys Asp Lys Thr His Thr Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
1 5 10 15
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
20 25 30
Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 155
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 155
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Asp Lys Thr His Thr Asp Ile Gln
20 25 30
Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
35 40 45
Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp
50 55 60
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala
65 70 75 80
Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser
85 90 95
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe
100 105 110
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
130 135 140
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
145 150 155 160
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
165 170 175
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
180 185 190
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
195 200 205
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
210 215 220
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
225 230 235 240
Gly Glu Cys
<210> 156
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 156
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Lys Thr His Thr Asp Ile Gln
20 25 30
Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
35 40 45
Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp
50 55 60
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala
65 70 75 80
Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser
85 90 95
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe
100 105 110
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
130 135 140
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
145 150 155 160
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
165 170 175
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
180 185 190
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
195 200 205
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
210 215 220
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
225 230 235 240
Gly Glu Cys
<210> 157
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 157
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Asp Lys Thr His Thr Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
20 25 30
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala
35 40 45
Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
50 55 60
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly
65 70 75 80
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
100 105 110
Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu
115 120 125
Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
130 135 140
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
145 150 155 160
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
165 170 175
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys
180 185 190
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
195 200 205
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
210 215 220
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 158
<211> 217
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CVE的曲妥珠单抗轻链
<400> 158
Cys Val Glu Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala
1 5 10 15
Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val
20 25 30
Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys
35 40 45
Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg
50 55 60
Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser
65 70 75 80
Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr
85 90 95
Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr
100 105 110
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
115 120 125
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
130 135 140
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
145 150 155 160
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
165 170 175
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
180 185 190
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
195 200 205
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 159
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 159
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Val Glu Asp Ile Gln Met Thr Gln
20 25 30
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
35 40 45
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp
85 90 95
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
100 105 110
Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
130 135 140
Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys
145 150 155 160
Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val
165 170 175
Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln
180 185 190
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser
195 200 205
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
210 215 220
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235 240
<210> 160
<211> 240
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 160
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Val Glu Asp Ile Gln Met Thr Gln
20 25 30
Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr
35 40 45
Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln
50 55 60
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu
65 70 75 80
Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp
85 90 95
Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr
100 105 110
Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr
115 120 125
Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe
130 135 140
Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys
145 150 155 160
Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val
165 170 175
Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln
180 185 190
Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser
195 200 205
Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His
210 215 220
Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235 240
<210> 161
<211> 234
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 161
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Val Glu Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser
20 25 30
Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp
35 40 45
Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro
50 55 60
Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser
65 70 75 80
Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
85 90 95
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr
100 105 110
Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
115 120 125
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
130 135 140
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
145 150 155 160
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
165 170 175
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
180 185 190
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
195 200 205
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
210 215 220
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 162
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CDTPPP的曲妥珠单抗轻链
<400> 162
Cys Asp Thr Pro Pro Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
1 5 10 15
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
20 25 30
Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
35 40 45
Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val
50 55 60
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 163
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 163
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Asp Thr Pro Pro Pro Asp Ile Gln
20 25 30
Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
35 40 45
Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp
50 55 60
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala
65 70 75 80
Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser
85 90 95
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe
100 105 110
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
130 135 140
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
145 150 155 160
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
165 170 175
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
180 185 190
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
195 200 205
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
210 215 220
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
225 230 235 240
Gly Glu Cys
<210> 164
<211> 243
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN 信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 164
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Thr Pro Pro Pro Asp Ile Gln
20 25 30
Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val
35 40 45
Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp
50 55 60
Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala
65 70 75 80
Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser
85 90 95
Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe
100 105 110
Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly
115 120 125
Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val
130 135 140
Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser
145 150 155 160
Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln
165 170 175
Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val
180 185 190
Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu
195 200 205
Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu
210 215 220
Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg
225 230 235 240
Gly Glu Cys
<210> 165
<211> 237
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-轻嵌合多肽
<400> 165
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Asp Thr Pro Pro Pro Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser
20 25 30
Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala
35 40 45
Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly
50 55 60
Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly
65 70 75 80
Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
85 90 95
Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln
100 105 110
Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu
115 120 125
Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser
130 135 140
Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn
145 150 155 160
Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala
165 170 175
Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys
180 185 190
Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp
195 200 205
Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu
210 215 220
Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 166
<211> 451
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列C的曲妥珠单抗重链
<400> 166
Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly
1 5 10 15
Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp
20 25 30
Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser
50 55 60
Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala
65 70 75 80
Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys
450
<210> 167
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 167
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
20 25 30
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
35 40 45
Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala
50 55 60
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly
65 70 75 80
Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala
85 90 95
Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
100 105 110
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe
115 120 125
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
305 310 315 320
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
370 375 380
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 168
<211> 474
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 168
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
20 25 30
Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala
35 40 45
Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala
50 55 60
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly
65 70 75 80
Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala
85 90 95
Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala
100 105 110
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe
115 120 125
Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
130 135 140
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
145 150 155 160
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
165 170 175
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
180 185 190
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
195 200 205
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
210 215 220
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
225 230 235 240
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
245 250 255
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
260 265 270
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
275 280 285
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
290 295 300
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
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Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
325 330 335
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
340 345 350
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
355 360 365
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
370 375 380
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
385 390 395 400
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
405 410 415
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
420 425 430
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
435 440 445
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
450 455 460
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 169
<211> 468
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 169
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
20 25 30
Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys
35 40 45
Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu
50 55 60
Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp
65 70 75 80
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr
85 90 95
Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
100 105 110
Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp
115 120 125
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
130 135 140
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
145 150 155 160
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
165 170 175
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
180 185 190
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
195 200 205
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
210 215 220
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
225 230 235 240
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
245 250 255
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
260 265 270
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
275 280 285
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
290 295 300
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
305 310 315 320
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
325 330 335
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
340 345 350
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
355 360 365
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
370 375 380
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
385 390 395 400
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
405 410 415
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
420 425 430
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435 440 445
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
450 455 460
Ser Pro Gly Lys
465
<210> 170
<211> 452
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CP的曲妥珠单抗重链
<400> 170
Cys Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro
1 5 10 15
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115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser
210 215 220
Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
225 230 235 240
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
245 250 255
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
260 265 270
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
275 280 285
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
290 295 300
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
305 310 315 320
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
325 330 335
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
340 345 350
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
355 360 365
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
370 375 380
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
385 390 395 400
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
405 410 415
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
420 425 430
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
435 440 445
Ser Pro Gly Lys
450
<210> 171
<211> 475
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 171
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
20 25 30
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
35 40 45
Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln
50 55 60
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn
65 70 75 80
Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
85 90 95
Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg
100 105 110
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly
115 120 125
Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
130 135 140
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
145 150 155 160
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
165 170 175
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
180 185 190
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
195 200 205
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
210 215 220
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
225 230 235 240
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
245 250 255
Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
260 265 270
Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr
275 280 285
Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn
290 295 300
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
305 310 315 320
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
325 330 335
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
340 345 350
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
355 360 365
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
370 375 380
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
385 390 395 400
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
405 410 415
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
420 425 430
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
435 440 445
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
450 455 460
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 172
<211> 475
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 172
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser
20 25 30
Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala
35 40 45
Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln
50 55 60
Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn
65 70 75 80
Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser
85 90 95
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100 105 110
Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly
115 120 125
Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
130 135 140
Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser
145 150 155 160
Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp
165 170 175
Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr
180 185 190
Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr
195 200 205
Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln
210 215 220
Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp
225 230 235 240
Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro
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Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro
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275 280 285
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290 295 300
Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg
305 310 315 320
Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val
325 330 335
Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser
340 345 350
Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys
355 360 365
Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp
370 375 380
Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe
385 390 395 400
Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu
405 410 415
Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe
420 425 430
Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly
435 440 445
Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr
450 455 460
Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 173
<211> 469
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 173
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
20 25 30
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile
35 40 45
Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn
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Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
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Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
130 135 140
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
145 150 155 160
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
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Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
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Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
195 200 205
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
210 215 220
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
225 230 235 240
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
245 250 255
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
260 265 270
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
275 280 285
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
290 295 300
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
305 310 315 320
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
325 330 335
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340 345 350
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
355 360 365
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370 375 380
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
385 390 395 400
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
405 410 415
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
420 425 430
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
435 440 445
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
450 455 460
Leu Ser Pro Gly Lys
465
<210> 174
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPP的曲妥珠单抗重链
<400> 174
Cys Pro Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
1 5 10 15
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile
20 25 30
Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
35 40 45
Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
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210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 175
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 175
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Pro Glu Val Gln Leu Val Glu
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
35 40 45
Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg
50 55 60
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr
65 70 75 80
Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
85 90 95
Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
100 105 110
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp
115 120 125
Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
145 150 155 160
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
165 170 175
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
180 185 190
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
195 200 205
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
210 215 220
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
225 230 235 240
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
260 265 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
290 295 300
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
370 375 380
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
450 455 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 176
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 176
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Pro Glu Val Gln Leu Val Glu
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
35 40 45
Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg
50 55 60
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr
65 70 75 80
Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
85 90 95
Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
100 105 110
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp
115 120 125
Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
145 150 155 160
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165 170 175
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
180 185 190
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
195 200 205
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
210 215 220
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
225 230 235 240
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
260 265 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
290 295 300
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
370 375 380
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser
420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
450 455 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 177
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 177
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Pro Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
20 25 30
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn
35 40 45
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50 55 60
Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
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Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 178
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CPR的曲妥珠单抗重链
<400> 178
Cys Pro Arg Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
1 5 10 15
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile
20 25 30
Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
35 40 45
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100 105 110
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115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 179
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 179
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Arg Glu Val Gln Leu Val Glu
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
35 40 45
Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg
50 55 60
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr
65 70 75 80
Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
85 90 95
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100 105 110
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp
115 120 125
Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
145 150 155 160
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
165 170 175
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
180 185 190
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
195 200 205
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Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
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305 310 315 320
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325 330 335
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465 470 475
<210> 180
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 180
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
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Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
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275 280 285
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325 330 335
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<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 183
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
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Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Pro Ser Glu Val Gln Leu Val Glu
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115 120 125
Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
145 150 155 160
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
165 170 175
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195 200 205
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
210 215 220
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
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245 250 255
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
260 265 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
290 295 300
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
370 375 380
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
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420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
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450 455 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 184
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 184
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Pro Ser Glu Val Gln Leu Val Glu
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
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Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg
50 55 60
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr
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Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
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275 280 285
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Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
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385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
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420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
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Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 185
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 185
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1 5 10 15
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100 105 110
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165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
180 185 190
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
195 200 205
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
225 230 235 240
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
245 250 255
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
435 440 445
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 186
<211> 454
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CDKT的曲妥珠单抗重链
<400> 186
Cys Asp Lys Thr Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
1 5 10 15
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn
20 25 30
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100 105 110
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 187
<211> 477
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 187
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Asp Lys Thr Glu Val Gln Leu Val
20 25 30
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
35 40 45
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val
50 55 60
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro
65 70 75 80
Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
85 90 95
Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser
100 105 110
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly
115 120 125
Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
165 170 175
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
180 185 190
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
195 200 205
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
210 215 220
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
225 230 235 240
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
245 250 255
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
260 265 270
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
275 280 285
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
290 295 300
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
305 310 315 320
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
325 330 335
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
340 345 350
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
355 360 365
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405 410 415
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420 425 430
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
435 440 445
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450 455 460
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 188
<211> 477
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 188
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Lys Thr Glu Val Gln Leu Val
20 25 30
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
35 40 45
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50 55 60
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro
65 70 75 80
Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
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Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly
115 120 125
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130 135 140
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
145 150 155 160
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
165 170 175
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Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
195 200 205
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450 455 460
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<210> 189
<211> 471
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 189
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
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20 25 30
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210 215 220
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290 295 300
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370 375 380
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
385 390 395 400
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405 410 415
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450 455 460
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
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165 170 175
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Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
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Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
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290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
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Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
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405 410 415
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420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 191
<211> 479
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 191
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Asp Lys Thr His Thr Glu Val Gln
20 25 30
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met
100 105 110
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp
115 120 125
Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
130 135 140
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
145 150 155 160
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
165 170 175
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
180 185 190
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
195 200 205
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
210 215 220
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
225 230 235 240
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
245 250 255
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
260 265 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275 280 285
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
290 295 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305 310 315 320
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
325 330 335
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
340 345 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355 360 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
370 375 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
385 390 395 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405 410 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420 425 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435 440 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450 455 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 192
<211> 479
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 192
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Lys Thr His Thr Glu Val Gln
20 25 30
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
35 40 45
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His
50 55 60
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile
65 70 75 80
Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
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100 105 110
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115 120 125
Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
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180 185 190
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
195 200 205
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
210 215 220
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
225 230 235 240
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
245 250 255
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
260 265 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275 280 285
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
290 295 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305 310 315 320
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
325 330 335
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340 345 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355 360 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
370 375 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
385 390 395 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405 410 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420 425 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435 440 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450 455 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 193
<211> 473
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 193
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Asp Lys Thr His Thr Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
35 40 45
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro
50 55 60
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
145 150 155 160
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
165 170 175
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
180 185 190
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
195 200 205
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
210 215 220
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
225 230 235 240
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
245 250 255
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
260 265 270
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
275 280 285
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
290 295 300
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
305 310 315 320
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
325 330 335
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
340 345 350
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
355 360 365
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
370 375 380
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
385 390 395 400
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
405 410 415
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
420 425 430
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
435 440 445
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
450 455 460
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 194
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CVE的曲妥珠单抗重链
<400> 194
Cys Val Glu Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln
1 5 10 15
Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile
20 25 30
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35 40 45
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65 70 75 80
Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly
115 120 125
Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly
130 135 140
Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val
145 150 155 160
Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe
165 170 175
Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val
180 185 190
Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val
195 200 205
Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys
210 215 220
Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
245 250 255
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
275 280 285
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
305 310 315 320
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
370 375 380
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
385 390 395 400
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
420 425 430
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
435 440 445
Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 195
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 195
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Val Glu Glu Val Gln Leu Val Glu
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
35 40 45
Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg
50 55 60
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr
65 70 75 80
Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
85 90 95
Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
100 105 110
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp
115 120 125
Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
145 150 155 160
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
165 170 175
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
180 185 190
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
195 200 205
Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr
210 215 220
Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val
225 230 235 240
Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro
245 250 255
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe
260 265 270
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val
275 280 285
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe
290 295 300
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro
305 310 315 320
Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr
325 330 335
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val
340 345 350
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala
355 360 365
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg
370 375 380
Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
385 390 395 400
Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
405 410 415
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420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
450 455 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 196
<211> 476
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 196
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Val Glu Glu Val Gln Leu Val Glu
20 25 30
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
35 40 45
Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg
50 55 60
Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr
65 70 75 80
Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile
85 90 95
Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
100 105 110
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp
115 120 125
Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
130 135 140
Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser
145 150 155 160
Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys
165 170 175
Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu
180 185 190
Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu
195 200 205
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Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly
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Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro
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420 425 430
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln
435 440 445
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His
450 455 460
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<210> 197
<211> 470
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 197
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Val Glu Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val
20 25 30
Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn
35 40 45
Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly
50 55 60
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100 105 110
Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
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Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
145 150 155 160
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
165 170 175
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
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Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
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Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
210 215 220
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
225 230 235 240
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260 265 270
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
275 280 285
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
290 295 300
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
305 310 315 320
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
325 330 335
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340 345 350
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
355 360 365
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370 375 380
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
385 390 395 400
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
405 410 415
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
420 425 430
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
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Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
450 455 460
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<210> 198
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有N末端序列CDTPPP的曲妥珠单抗重链
<400> 198
Cys Asp Thr Pro Pro Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly
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Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp
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Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala
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Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
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Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
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Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
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435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 199
<211> 479
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有SHH信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 199
Met Leu Leu Leu Ala Arg Cys Leu Leu Leu Val Leu Val Ser Ser Leu
1 5 10 15
Leu Val Cys Ser Gly Leu Ala Cys Asp Thr Pro Pro Pro Glu Val Gln
20 25 30
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
35 40 45
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50 55 60
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile
65 70 75 80
Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
85 90 95
Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met
100 105 110
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp
115 120 125
Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
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Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
145 150 155 160
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
165 170 175
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
180 185 190
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
195 200 205
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
210 215 220
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
225 230 235 240
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
245 250 255
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
260 265 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275 280 285
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
290 295 300
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
305 310 315 320
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
325 330 335
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
340 345 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355 360 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
370 375 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
385 390 395 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405 410 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420 425 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435 440 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450 455 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 200
<211> 479
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有IFN信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 200
Met Ala Leu Thr Phe Ala Leu Leu Val Ala Leu Leu Val Leu Ser Cys
1 5 10 15
Lys Ser Ser Cys Ser Val Gly Cys Asp Thr Pro Pro Pro Glu Val Gln
20 25 30
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
35 40 45
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His
50 55 60
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile
65 70 75 80
Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
85 90 95
Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met
100 105 110
Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp
115 120 125
Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
130 135 140
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
145 150 155 160
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
165 170 175
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
180 185 190
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
195 200 205
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
210 215 220
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
225 230 235 240
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
245 250 255
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
260 265 270
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
275 280 285
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290 295 300
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325 330 335
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
340 345 350
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
355 360 365
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
370 375 380
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
385 390 395 400
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
405 410 415
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
420 425 430
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
435 440 445
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
450 455 460
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470 475
<210> 201
<211> 473
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 具有CETP信号肽的前体-重链嵌合多肽
<400> 201
Met Leu Ala Ala Thr Val Leu Thr Leu Ala Leu Leu Gly Asn Ala His
1 5 10 15
Ala Cys Asp Thr Pro Pro Pro Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
20 25 30
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
35 40 45
Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro
50 55 60
Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr
65 70 75 80
Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp
85 90 95
Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
100 105 110
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr
115 120 125
Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
130 135 140
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
145 150 155 160
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
165 170 175
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
180 185 190
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
195 200 205
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
210 215 220
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
225 230 235 240
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
245 250 255
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
260 265 270
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
275 280 285
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
290 295 300
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
305 310 315 320
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
325 330 335
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
340 345 350
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
355 360 365
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
370 375 380
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
385 390 395 400
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
405 410 415
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
420 425 430
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
435 440 445
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
450 455 460
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 202
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人
<400> 202
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1 5 10 15
Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly
20 25 30
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<211> 22
<212> DNA
<213> 智人
<400> 203
agaggtagta ggttgcatag tt 22

Claims (28)

1.一种化合物，其具有结构：
A-B-----Z
其中A是所述化合物的生物活性结构；
其中z是所述化合物的蛋白成分，该蛋白成分包括一个或多个多肽，其中所述一个或多个多肽中的至少一个包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合到Fc受体；以及(iii)在它们的N末端具有半胱氨酸或硒代半胱氨酸
其中B是连接A和Z的化学结构；
其中B和Z之间的虚线代表肽连接；以及
其中A和B之间的实线代表非肽连接。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中A和B之间的实线代表非肽连接，所述非肽连接包括结构：
其中是其中R5是烷基或芳基，
其中R1是H或是额外结构的一部分，该额外结构是环状结构，其中额外环状结构包括R1或R1的一部分，并且还可包括R2或R2的一部分以及R2和烯烃双键之间的碳；
条件是如果是那么R3是H，如果是那么是包括的三唑环，以及如果是那么是包括的N-烷基或芳基取代的异恶唑啉环；以及
其中R2代表连接A或B中一者的有机结构以及R4代表连接A或B中另一者的有机结构。
3.根据权利要求2所述的化合物，其中A和B之间的实线代表非肽连接，该非肽连接包括结构：
其中R1是H或是额外结构的一部分，该额外结构是环状结构，其中额外环状结构包括R1或R1的一部分，并且还可包括R2或R2的一部分以及R2和烯烃双键之间的碳。
4.根据权利要求2或3所述的化合物，其中R2是
i)通过碳氮键或碳硫键被附接到A；
ii)通过碳氮键被附接到A；
iii)通过碳氮键被附接到A，其中所述碳氮键是酰胺键；
iv)通过生物不稳定键被附接到A；
v)通过A的C-末端氨基酸和B中的氨基之间的酰胺键被附接到A；
vi)通过A的C-末端氨基酸和B中的氨基之间的酰胺键附接到A，其中所述末端氨基酸是半胱氨酸；
vii)通过碳硫键被附接到A；
viii)通过在R2和自由硫醇之间形成的碳硫键附接到A；或
ix)通过琥珀酰亚胺硫键被附接到A。
5.根据权利要求2-4任一项所述的化合物，其中B包括支链残基并且被连接到不知一个A，每个通过具有支链残基的非肽连接。
6.根据权利要求1所述的化合物，其中A和B之间的实线代表非肽连接，该非肽连接包括结构：
其中Xa是包含融合到二氢哒嗪的环辛烷的化学结构；以及
其中Ra表示连接到A或B中一者的有机结构以及Rb表示连接到A或B中另一者的有机结构。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中Xa具有结构：
其中Rc是H、烷基或芳基；
或其互变异构体。
8.根据权利要求6或7所述的化合物，其中Ra被连接到环辛烷以及Rb被连接到二氢哒嗪。
9.根据权利要求6-8任一项所述的化合物，其中A和B之间的实线代表非肽连接，该非肽连接包括结构：
其中Rc是H、烷基或芳基；
或其互变异构体。
10.根据权利要求6-9任一项所述的化合物，其中其中Ra和Rb独立地是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯，
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基，以及R5是芳基或烷基。
其中[PEG(y)]z是：
其中y＝1-100和z＝1-10。
11.根据权利要求6-10任一项所述的化合物，其中Ra或Rb
i)通过碳氮键或碳硫键被附接到A；
ii)通过碳氮键被附接到A；
iii)通过碳氮键被附接到A，其中所述碳氮键是酰胺键；
iv)通过生物不稳定键被附接到A；
v)通过A的C-末端氨基酸和B中的氨基之间的酰胺键被附接到A；
vi)通过A的C-末端氨基酸和B中的氨基之间的酰胺键附接到A，其中所述末端氨基酸是半胱氨酸；
vii)通过碳硫键被附接到A；
viii)通过在R2和自由硫醇之间形成的碳硫键附接到A；或
ix)通过琥珀酰亚胺硫键被附接到A；
x)包括支链残基；或
xi)通过所述支链残基被附接到不止一个A。
12.根据权利要求1-11任一项所述的化合物，其中A
i)包括化合物的结构，该化合物是被批准用于治疗罹患疾病的个体的药物；
ii)包括具有小于1000道尔顿的分子量的有机化合物的结构、DNA适体、RNA适体、寡核苷酸或有生物学活性的蛋白质；
iii)包括一级和二级胺；
iv)通过所述一级或二级胺被连接到B；
v)阿立哌唑或奥司他韦；
vi)包括二级胺；
vii)是呼吸道药物、平喘药(antiasthmatic agent)、镇痛剂(analgesic agent)、抗抑郁剂、抗心绞痛药、抗心律失常药、抗高血压药、抗糖尿病药物、抗组胺剂、抗感染药物、抗生素、消炎药(antiinflamatory agent)、抗帕金森病药、抗精神病药、退热药(antipyreticagent)、抗溃疡药、注意力缺失过动症(ADHD)药物(attention deficit hyperactivitydisorder(ADHD)drug)、中枢神经系统兴奋剂、解充血药(decongestant)或精神兴奋药(psychostimulant)；
viii)阿普洛尔、醋丁洛尔、阿米福林(amidephrine)、安咪奈丁(amineptine)、氨磺洛尔(amosulalol)、阿莫沙平(amoxapine)、安非他尼、阿替洛尔、阿托西汀、巴洛沙星、巴美生(bamethan)、苯呋洛尔、苯那普利、苯氟雷司、苯佐他明、倍他司汀、倍他洛尔、贝凡洛尔、二苯美伦(bifemelane)、比索洛尔、布林佐胺、丁苯碘胺、丁胺卡因、开麻若芬(camylofine)、卡拉洛尔(carazolol)、卡替卡因(carticaine)、卡维地洛(carvedilol)、吐根酚碱、环丙沙星、氯氮平、氯苄雷司(clobenZorex)、氯丙那林、环喷他明(cyclopentamine)、地拉普利(delapril)、地美替林、地诺帕明、去郁敏、地氯雷他定、双氯芬酸、二甲福林、地奥沙屈(dioxadrol)、多巴酚丁胺、多培沙明(dopexamine)、多利培南、多佐胺、氢普拉明(droprenilamine)、度洛西汀、依托拉嗪、依那普利、依诺沙星、肾上腺素、厄他培南(ertapenem)、艾沙拉唑、艾司洛尔、乙苯恶啶、法舒地尔(fasudil)、芬地林(fendiline)、芬乙茶碱、氟苯丙胺、非诺多泮、非诺特罗、芬普雷司、氟卡尼(flecamide)、氟西汀、福莫特罗、夫罗曲坦、加波沙朵、加雷沙星、加替沙星、格雷沙星、海索那尔(hexoprenaline)、咪达普利、茚达品(indalpine)、英地卡尼、盐酸茚氯秦、异克舒令、异丙克兰、柳胺苄心定、兰地洛尔、拉帕替尼、左法哌酯、赖诺普利、洛美沙星、洛曲非班(lotrafiban)、马普替林、梅坎米胺、甲氟喹、甲吲洛尔、美罗培南(meropenem)、美他帕明、奥西那林、甲氧那明、右旋性的哌醋甲酯(dextrorotary methylphenidate)、哌醋甲酯、美替洛尔、美托洛尔、米托蒽醌、米伐折醇、莫昔普利、莫普洛尔(moprolol)、莫西沙星、奈比洛尔、硝苯洛尔、尼普洛尔、诺氟沙星、去甲替林、布酚宁、奥氮平、奥沙尼喹、氧烯洛尔、奥昔麻黄碱、帕罗西汀、perhexyline、芬美曲秦、苯肾上腺素、苯丙甲胺、甲羟苯丙胺(pholedrine)、匹西雷司、pimethylline、心得乐、吡哌酸、匹多卡因(piridocaine)、心得宁、普多沙星、普拉克索、普拉维林、普瑞特罗、心可定、丙胺卡因(prilocalne)、异丙喹喘宁、丙萘洛尔、丙胺苯丙酮、心得安、六氢脱氧麻黄碱、胡椒喘定、普罗替林、假麻黄碱、瑞波西汀、雷沙吉兰、(r)-雷沙吉兰、repinotan、茶丙特罗、瑞米特罗、羟苄羟麻黄碱、沙芬酰胺、柳丁氨醇/沙丁胺醇、沙美特罗、沙立佐坦(sarizotan)、舍曲林、西洛多辛、甲磺胺心定、索特瑞醇、司帕沙星、螺普利、磺苄心定、脱氧肾上腺素、坦索罗辛、替巴克兰(tebanicline)、噻奈普汀、欣维宁、曲托喹芬、曲美他嗪、拉氧头孢(troxipide)、伐尼克兰、维达列汀、维洛沙秦、维喹地尔(viquidil)或扎莫特罗(xamoterol)。
ix)包括有生物活性的蛋白质；
x)包括分泌性蛋白质；
xi)包括蛋白质的胞外域
xii)有生物活性使得它具有靶向结合活性；
xiii)独立折叠的蛋白质或其一部分；
xiv)是糖基化的蛋白质；
xv)包括链内的二硫键；
xvi)结合细胞因子；
xvii)结合细胞因子，其中该细胞因子是TNFα；
xviii)包括心房肽(ANP)、降血钙素、促肾上腺皮质素释放激素(CRH)、内皮素、艾塞那肽、抑胃肽(GIP)、胰高血糖素样肽-1(GLP-1)、胰高血糖素样肽-2(GLP-2)、GLP-1或GLP-2的类似物、胰高糖素血管活性肠肽(GVIP)、胃饥饿素、缩氨酸YY或分泌素或其一部分；
ixx)包括序列HGEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGRG中的连续氨基酸段；
xx)包括至少一个连续氨基酸段，其与抗体的Fab或Fab’的重链中存在的连续氨基酸段相同；
xxi)包括至少一个连续氨基酸段，其与抗体的Fab或Fab’的轻链中存在的连续氨基酸段相同；
xxii)包括抗体的至少一个Fab或Fab’或该至少一个Fab或Fab’的一部分；
xxiii)包括抗体的Fab-1或Fab’1或其一部分；
xxiv)包括抗体的Fab-2或Fab’2或其一部分；
xxv)包括抗体的两个Fab或Fab’手；
xxvi)包括至少一个连续氨基酸段，该连续氨基酸段与单链抗体中存在的连续氨基酸段相同；或
xxvii)包括至少一个连续氨基酸段，该连续氨基酸段与TNFα受体中存在的连续氨基酸段相同。
13.一种化合物，其具有结构：
L-Ra-B-----Z
其中z是化合物的蛋白成分，该蛋白成分包括一个或多个多肽，其中该一个或多个多肽中的至少一个包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合到Fc受体；以及(iii)在它们的N末端具有半胱氨酸或硒代半胱氨酸；
其中B是连接Ra和C的化学结构；
其中B和Z之间的虚线代表肽连接；
其中L选自由以下组成的群组：-N3、炔烃、基团，其中R5是烷基或芳基，基团、四嗪和反式环辛烯；以及
其中Ra是键或有机结构，该有机结构包括或由以下组成：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多部分的链，其中每个部分独立地选自由以下组成的群组：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯，
其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基，以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是：
其中y＝1-100和z＝1-10。
14.根据权利要求13所述的化合物，其中L是–N3、炔烃、四嗪或反式环辛烯。
15.根据权利要求14所述的化合物，其中L是炔烃，并且该炔烃是炔丙基或环辛炔基团或具有结构：其中X1是CH或N，X2是CH2或羰基，以及R5是芳基或烷基。
16.根据权利要求14所述的化合物，其中L是四嗪，并且该四嗪具有结构：
其中Rc是H、烷基或芳基。
17.根据权利要求14所述的化合物，其中L是反式环辛烯，并且该反式环辛烯具有结构：
18.根据权利要求6-17任一项所述的化合物，其中Ra或Rb
i)是包括[PEG(y)]z基团的有机结构；
ii)包括以下的有机结构：聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)或多糖基团；
iii)包括C1-C4烷基的有机结构；
iv)包括琥珀酰亚胺的有机结构；
v)是包括胺的有机结构；
vi)是包括琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰或已二酰的有机结构；
vii)是包括丙二酰的有机结构；
viii)是包括氨基酸的有机结构；
ix)包括半胱氨酸的有机结构；
x)是包括赖氨酸的有机结构；
xi)是有机结构，该有机结构由选自由以下组成的群组的3个部分的链组成：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯，
xii)是有机结构，该有机结构由选自由以下组成的群组的4个部分的链组成：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯，
xiii)是有机结构，该有机结构由选自由以下组成的群组的5个部分的链组成：[PEG(y)]z、聚二醇、聚氧烷基化多元醇、聚乙烯醇、聚乙烯烷基醚、聚(乳酸)、聚(乳-乙醇酸)、多糖、支链残基、C1-C10烷基、C3-C10环烷烃、C2-C10烯烃、C5-C10环烯烃、胺、硫、氧、琥珀酰亚胺、马来酰亚胺、丙三醇、三唑、异恶唑烷、C2-C5酰基、C2-C5酰胺基、C2-C5酸基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、邻苯二酰、己二酰基、氨基酸、芳基、杂芳基、氨基甲酸酯、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯，
xiv)包括键合到赖氨酸的[PEG(y)]z基团；
xv)包括键合到琥珀酰亚胺基团的C1-C4酰基；
xvi)包括键合到C1-C4酰基的赖氨酸；
xvii)包括键合到戊二酰的[PEG(y)]z基团；
xviii)是有机结构，该有机结构由选自由以下组成的群组的3个、4个或5个部分的链组成：[PEG(y)]z、C2-C5酰基、琥珀酰、丙二酰、戊二酰、氨基酸、包含融合至二氢哒嗪的环辛烷的化学结构、包含融合至三唑的环辛烯的化学结构、包含融合至异恶唑烷的环辛烯的化学结构、二苯并环辛烯、二苯并氮杂环辛烯，
其中X1是CH或N,X2是CH2或羰基，以及R5是芳基或烷基；
其中[PEG(y)]z是：
其中y＝1-100和z＝1-10；
ixx)是键；
xx)是半胱氨酸；
xxi)具有线性结构；或
xxii)具有支链结构；
xxiii)具有结构：
xxiv)是：
其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50；
xxv)是：
其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50，x是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50，以及z是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50.
xxvi)是：
其中x是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50，以及z是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50；或
xxvii)是：
其中n是1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、1-30、1-40或1-50。
19.根据权利要求1-18任一项所述的化合物，其中Z包括一个C，其中C是第一多肽，该第一多肽包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体；以及(iii)在它们的N末端具有选自由以下组成的群组的序列：半胱氨酸、硒代半胱氨酸、CP、CPXCP(其中X＝P、R或S)CDKTHTCPPCP、CVECPPCP、CCVECPPCP和CDTPPPCPRCP。
20.根据权利要求19所述的化合物，其中C
i)包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体；以及(iii)在它们的N末端具有包括选自由以下组成的群组的天然发生的半胱氨酸的序列：CP、CPXCP(其中X＝P、R或S)、CDKTHTCPPCP、CVECPPCP、CCVECPPCP和CDTPPPCPRCP；
ii)是化合物的多肽成分，该多肽成分包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体；以及(iii)在它们的N末端具有包括非天然发生的半胱氨酸或硒代半胱氨酸的序列；
iii)包括连续氨基酸，该连续氨基酸与选自由IgG、IgM、IgA、IgD和IgE组成的群组的抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；
iv)包括连续氨基酸，该连续氨基酸与抗体的Fc6区域的链中存在的连续氨基酸段相同；
v)包括连续氨基酸，该连续氨基酸与除了抗体的Fc区域的链之外的抗体的链中存在的连续氨基酸段相同；
vi)包括连续氨基酸，该连续氨基酸与抗体的Fab或Fab’的重链中存在的连续氨基酸段相同；或
vii)包括连续氨基酸，该连续氨基酸与抗体的Fab或Fab’的轻链中存在的连续氨基酸段相同。
21.根据权利要求19或20所述的化合物，其中Z进一步包括第二多肽，该第二多肽包括连续氨基酸，该连续氨基酸与除了抗体的Fc区域的链之外的抗体的链中存在的连续氨基酸段相同。
22.根据权利要求21所述的化合物，其中所述第二多肽包括
i)连续氨基酸，该连续氨基酸与抗体的Fab或Fab’的重链中存在的连续氨基酸段相同，或
ii)连续氨基酸，该连续氨基酸与抗体的Fab或Fab’的轻链中存在的连续氨基酸段相同。
23.根据权利要求1-22任一项所述的化合物，其中Z
i)包括抗体或其一部分；
ii)包括抗体的至少一个Fab或Fab’或该至少一个Fab或Fab’的一部分
iii)包括抗体的Fab-1或Fab’1或其一部分；
iv)包括抗体的Fab-2或Fab’2或其一部分；
v)包括抗体的两个Fab或Fab’手；
vi)包括至少一个连续氨基酸段，该连续氨基酸段与单链抗体中存在的连续氨基酸段相同；或
vii)包括第二多肽，并且B通过Z的第二多肽的N-末端半胱氨酸或硒代半胱氨酸和B的氨基酸残基或有机酸残基之间的肽连接被连接到Z。
24.根据权利要求19-23任一项所述的化合物，其中C的C-末端
i)包括在已经被修饰的抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段；或
ii)是半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同型硒代半胱氨酸，或半胱氨酸、硒代半胱氨酸、同型半胱氨酸或同型硒代半胱氨酸的衍生物。
25.根据权利要求1-24任一项所述的化合物，其中B
i)通过Z的多肽的N-末端半胱氨酸或硒代半胱氨酸和B的氨基酸残基或有机酸残基之间的肽连接被连接到Z；或
ii)通过C的N-末端半胱氨酸或硒代半胱氨酸和B的氨基酸残基或有机酸残基之间的肽连接被连接到C。
26.一种同源二聚物或异二聚物，其包括权利要求1-25任一项所述的化合物。
27.根据权利要求26所述的同源二聚物或异二聚物，其中该同源二聚物或异二聚物的每个化合物
i)能够通过至少一个二硫键结合到另一个化合物；
ii)能够通过至少一个每个化合物的C或第二多肽之间的二硫键结合到另一个化合物；
iii)通过至少一个二硫键被结合到另一个化合物；
iv)通过至少一个每个化合物的C或第二多肽之间的二硫键被结合到另一个化合物。
28.一种制备具有以下结构的化合物的方法：
A-B-----Z
其中A是生物活性化合物的结构；
其中Z是化合物的蛋白成分，该蛋白成分包括一个或多个多肽，其中该一个或多个多肽中的至少一个包括连续氨基酸，该连续氨基酸(i)与抗体的Fc区域的链中存在的连续氨基酸段相同；(ii)结合至Fc受体以及(iii)在它们的N末端具有半胱氨酸或硒代半胱氨酸；
其中B是连接A和Z的化学结构；
其中B和Z之间的虚线代表肽连接；
其中A和B之间的实线代表非肽连接；
该方法包括以下步骤：
a)获得A’，A’包括A或A的衍生物和第一末端反应基团；
b)获得B’，B’包括B或B的衍生物、第二末端反应基团和第三末端反应基团，其中该第二末端反应基团能够与所述第一末端反应基团反应以形成非肽连接；
c)获得Z’，Z’包括Z或Z的衍生物和第四末端反应基团，其中该第四末端反应基团能够与该第三末端反应基团反应以形成肽连接；以及
d)以任何顺序反应A’、B’和Z’以制得所述化合物。
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