KR20080045158A - Ｍｃｐ1 융합체 - Google Patents

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KR20080045158A
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mcp1
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val
polypeptide
lys
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KR1020087004698A
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추안-추 초우
로레타 에이. 보버
리 설리반
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쉐링 코포레이션
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Abstract

본 발명은 임의로 링커에 의해 면역글로불린에 융합된 MCP1을 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다. 의학 질환을 치료하기 위해 폴리펩타이드를 사용하는 방법도 또한 포함된다.
단핵구 화학주성 단백질-1, CCR2-매개된 염증, 소염 치료요법

Description

ＭＣＰ1 융합체{MCP1 fusions}
본 발명은, 이의 전문이 본원에 참조로 인용된 것으로서, 2005년 8월 12일자 출원된 미국 가특허원 제60/707,731호의 이익을 청구한다.
본 발명은 특히 염증 상태의 치료 또는 예방에 유용한 융합 단백질과 당해 융합 단백질을 사용하여 상기 상태를 치료하는 방법에 관한 것이다.
단핵구 화학주성 단백질-1(MCP1, 또한, HC11 , MCAF, CCL2, SCYA2, GDCF-2, SMC-CF, HSMCR30, MGC9434, GDCF-2 및 HC11로서 알려짐)은 케모킨 수용체 CCR2에 대해 고도로 선택성이며, 고-친화성인 케모킨 리간드이다. 이는 염증 조직에 의해 국소적으로 분비되어 단핵구 및 기억 T 세포와 같은 CCR2-생성 세포를 유인한다. CCR2에 결합하게 되면, MCP1는 MCP1의 구배를 향한 칼슘 유동 및 세포 이주를 유발한다.
관절염, 죽상경화증, 다발경화증 및 섬유증을 포함하는 염증병에 MCP1 및 CCR2가 중요하게 관여함이 실질적으로 생물학적 및 유전적으로 입증되어 있다. MCP1 또는 CCR2가 결여된 마우스는 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)의 진행으로부터 보호되었다(참조: Huang et al., 2001 , J. Exp. Med. 193:713; Izikson et al., 2000, J. Exp. Med. 192:1075; Mahad and Ransohoff, 2003, Semi. Immunol. 15:23). CCR2-결여 마우스는 또한 콜라겐-유발된 관절염으로부터 보호되었다(참조: Quinones et al., 2004, J. Clin. Invest. 113:856). 또한, CCR2-녹아웃(knockout) 마우스는 죽상경화증 플라크의 진행에 대해 내성이었다(참조: Charo and Taubman, 2004, Circ. Res. 95:858).
CCR2-매개된 염증을 표적화하는 소염제는 당해 분야에서 요구되고 있다.
발명의 요약
본원에 기술된 발명은, 케모킨 수용체를 케모킨 리간드의 전신계 투여로 탈감작화시킴에 의한 당해 수용체의 표적화가 염증 부위에 대한 트라피킹(trafficking) 및 인터페론-감마와 같은 활성화 시그날에 대한 노출로부터 수용체-생성 세포를 방지한다는 놀라운 발견으로부터 유래한다. 본원에서 논의된 예시적인 예에서, CCR2는 케모킨 리간드와 같은 케모킨 수용체 및 MCP1으로서 사용되었다. MCP1 케모킨의 혈청 반감기를 연장시키기 위해 MCP1을 면역글로불린 고정 영역[힌지(hinge)에서 CH3 영역까지)으로 태그화(tagging)시켜 면역글로불린-융합 단백질을 설계하였다.
본 발명은, 본 발명의 양태에서, 단백질의 생체내 반감기를 연장시키는 제제, 예를 들면, 면역글로불린 또는 이의 단편, 또는 PEG에 융합된 MCP1, SDF1 또는 MIP1β 또는 이의 단편(예: 이의 성숙한 폴리펩타이드)와 같은 케모킨 리간드를 제공함에 의해 소염 치료요법 및 기타 요구도에 촛점을 맞추고 있다.
본 발명은 (1) 하나 이상의 반감기를 연장시키는 잔기에 융합된 하나 이상의 케모킨 폴리펩타이드; 또는 (2) 2개 이상의 융합된 케모킨 폴리펩타이드를 포함하 는 분리된 폴리펩타이드를 제공한다. 본 발명의 양태에서, MCP1은 사람 MCP1 및 마우스 MCP1으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원이다. 본 발명의 양태에서, 잔기는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 또는 면역글로불린이다. 본 발명의 양태에서, 폴리펩타이드는 하나 이상의 면역글로불린(예: 서열 8 내지 12 중 어느 것)에 융합된 하나 이상의 성숙한 MCP1 폴리펩타이드(예: 사람 또는 마우스)를 포함한다. 본 발명의 양태에서, MCP1은 사람 MCP1 및 마우스 MCP1으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원이다. 본 발명의 양태에서, 면역글로불린은 힌지로부터 CH3 영역까지의 γ1 및 γ4로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원이다. 본 발명의 양태에서, 폴리펩타이드는 마우스 IgG1에 융합된 성숙한 사람 MCP1; 사람 lgG4에 융합된 성숙한 사람 MCP1; 사람 lgG4 단량체성 변이체에 융합된 성숙한 사람 MCP1; 사람 IgG1에 융합된 성숙한 사람 MCP1; 및 사람 IgG1 단량체성 변이체에 융합된 성숙한 사람 MCP1으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원이다. 본 발명의 양태에서, MCP1은 서열 2로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 양태에서, 면역글로불린은 서열 3 내지 7에 설정된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 양태에서, MCP1은 펩타이드 링커(예: GS)에 의해 면역글로불린에 융합되어 있다. 본 발명의 영역은 특정의 폴리펩타이드 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다. 또한, 하나 이상의 추가의 치료제 또는 이의 약제학적 조성물과 연합된 본원의 특정 폴리펩타이드가 본 발명의 영역내에 속하며, 예를 들면, 여기서, 추가의 치료제는 아스피린, 디클로페낙, 디플루니살, 에토돌락, 페노프로펜, 플록타페닌, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 케토 프로펜, 케토롤락, 메클로페나메이트, 메페남산, 멜록시캄, 나부메톤, 나프록센, 옥사프로진, 페닐부타존, 피록시캄, 살살레이트, 술린닥, 테녹시캄, 티아프로펜산, 톨메틴, 베타메타손 벤조에이트, 베타메타손 발러레이트, 클로베타솔 프로피오네이트, 데속시메타손, 플루옥시놀론 아세토나이드, 플루란드레놀라이드, 국소 스테로이드, 알클로메타손 디프로피오네이트, 알로에 베라, 암시노나이드, 암시노나이드, 안트랄린, 베타메타손 디프로피오네이트, 베타메타손 발러레이트, 칼시포트리엔, 클로베타솔 프로피오네이트, 코알 타르, 사해염(Dead Sea salts), 데소나이드, 데소나이드; 베타메타손 발러레이트, 데속시메타손, 디플로라손 디아세테이트, 에프솜 염, 플루옥시놀론 아세토나이드, 플루옥시노나이드, 플루란드레놀라이드, 플루티카손 프로피오네이트, 할시노나이드, 할로베타솔 프로피오네이트, 하이드로코르티손 발러레이트, 하이드로코르티손, 모메타손 푸로에이트, 오일화된 오트밀, 석유 젤리, 프레드니카르바이트, 살리실산, 타자로텐, 트리암시놀론 아세토나이드, 하이드로코르티손, 덱사메타손, 메틸프로드니솔론 및 프레드니솔론의 혼합물, 알레팍셉트, 에타네르셉트, 사이클로스포린, 메토트렉세이트, 악시트레틴, 이소트레티노인, 하이드록시우레아, 마이코페놀레이트 모페틸, 설파살라진, 6-티오구아닌, 아나킨라, 주사가능한 금, 페니실라민, 아자티오프린, 클로로퀸, 하이드록시클로로퀸, 설파살라진, 경구 금, 아우라노핀, 금 나트륨 티오말레에이트, 아우로티오글루코즈, 메살라민, 설파살라진, 부데소나이드, 메트로니다졸, 시프로플록사신, 아자티오프린, 6-머캅토퓨린 또는 칼슘, 엽산, 비타민 B12, 셀레콕시브, 로페콕시브, 발데콕시브, 루미라콕시브, 에토리콕시브, 에팔리주마브, 아달리무마브, 인플릭시 마브 및 ABX-IL8의 식이 보충물로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원이다.
본 발명은 예를 들면, 마우스 IgGI에 융합된 사람의 프로세싱되지 않은 MCP1; 사람 lgG4에 융합된 사람의 프로세싱되지 않은 MCP1; 사람 IgG4 단량체성 변이체에 융합된 사람의 프로세싱되지 않은 MCP1; 사람 IgG1에 융합된 사람의 프로세싱되지 않은 MCP1; 및 사람 IgG1 당량체성 변이체에 융합된 사람의 프로세싱되지 않은 MCP1으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원을 암호화하는 본원의 특정의 폴리펩타이드를 암호화하는 분리된 폴리뉴클레오타이드를 제공한다. 본 발명의 양태에서, MCP1은 서열 13의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 본 발명의 양태에서, 면역글로불린은 서열 14 내지 18로 이루어진 그룹 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된다. 본 발명의 양태에서, 뉴클레오타이드 서열은 서열 19 내지 23으로 이루어진 그룹 중에서 선택된다. 본 발명은 또한 폴리펩타이드[예: pcDNA3.1(+)hMCP1 mIgG]를 포함하는 분리된 벡터(도 1에 나타내고/내거나 서열 24의 뉴클레오타이드를 포함하는) 및 당해 벡터를 포함하는 숙주 세포를 포함한다.
본 발명은 또한 숙주 세포를, 상기 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터[예: pcDNA3.1(+)hMCP1 mIgG]를 사용하여 당해 발현에 적합한 조건하에서 형질전환시키고, 임의로 숙주 세포로부터 폴리펩타이드를 분리함을 포함하는, MCP1-Ig 폴리펩타이드의 제조방법을 제공한다. 본 발명의 양태에서, 폴리뉴클레오타이드는 서열 8 내지 12로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 암호화한다. 당해 방법으로 제조된 어떠한 폴 리펩타이드도 또한 본 발명의 영역내에 있다.
본 발명은 케모킨 리간드(예: MCP1, SDF1 또는 MIP1β) 또는 케모킨 수용체의 발현 또는 활성을 감소시키거나, 또는 대상체에서 케모킨 수용체 생성 세포를 케모킨 리간드로 탈감작화시킴을 포함하여, 대상체에서 케모킨 수용체 생성 세포가 염증 조직내로 이주하는 것을 감소시킴으로써 치료가능한 질환을 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명의 양태에서, 질환은 염증성 의학 질환, 기생충 감염, 세균 감염, 바이러스 감염, 암, 심혈관 질환 및 순환성 질환으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원이다. 본 발명의 양태에서, 케모킨 수용체 생성 세포는 케모킨 리간드 폴리펩타이드 또는 반감기 연장 잔기(예: 면역글로불린 또는 이의 단편)에 융합된 케모킨 리간드 폴리펩타이드의 전신계 투여에 의해 케모킨 리간드로 탈감작화된다. 본 발명의 양태에서, MCP1은 서열 2의 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 양태에서, Ig는 서열 3 내지 7로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 양태에서, 폴리펩타이드는 서열 8 내지 12로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 MCP1-Ig이다.
본 발명은 대상체에게 임의로 추가의 치료제 또는 과정과 연합된 MCP1-Ig 또는 이의 약제학적 조성물을 투여함을 포함하여, 대상체에서 염증성 의학 질환을 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 본 발명의 양태에서, 질환은 충수염, 소화 궤양, 위궤양 및 십이지장궤양, 복막염, 췌장염, 염증성창자병, 대장염, 궤양성 대장염, 거짓막 대장염(pseudomembranous colitis), 급성 대장염, 허혈성 대장염, 곁주머니염, 후두덮개염, 이완불능증, 담관염, 담낭염, 복강질환, 간염, 크론병(Crohn's disease), 장염, 휘플병(Whipple's disease), 천식, 알레르기, 아나필락시스 쇼크, 면역 복합체 병, 기관 허혈, 재관류 손상, 기관 괴사, 건초열, 패혈증(sepsis, septicemia), 내독소 쇼크, 악액질, 고열증, 호산구성 육아종, 육아종증, 사르코이드증, 패혈 유산, 부고환염, 질염, 전립샘염 및 요도염, 기관지염, 폐공기증, 비염, 섬유증, 낭성섬유증, 폐염, 성인 호흡곤란증후군, 진폐증(pneumoultramicroscopicsilicovolcanoconiosis), 폐포염, 기관지염, 인두염, 흉막염, 부비동염, 피부염, 아토피성 피부염, 피부근육염, 일광화상, 두드러기 사마귀(urticaria wart), 사마귀, 협착증, 재협착증, 혈관염, 맥관염, 심내막염, 동맥염, 죽상경화증, 혈전정맥염, 심장막염, 심근염, 심근 허혈, 결절동맥주위염, 류마티스열, 수막염, 뇌염, 다발경화증, 신경염, 신경통, 포도막염, 관절염 및 관절통, 골수염, 근막염, 페제트병(Paget's disease), 통풍, 치주병, 류마티스 관절염, 윤활막염, 중증근육무력증, 갑상샘염, 전신홍반루푸스, 굿파스처 증후군(Goodpasture's syndrome), 베체트 증후군(Behcets's syndrome), 동종이식거부 및 이식체 대 숙주병(graft-versus-host disease)로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원이다. 본 발명의 양태에서, MCP1은 서열 2의 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 양태에서, Ig는 서열 3 내지 7로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 양태에서, MCP1-Ig는 서열 8 내지 12로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 양태에서, 대상체는 사람이다. 본 발명의 양태에서, 추가의 치료제 또는 과정은 아스피린, 디클로페낙, 디플루니살, 에토돌락, 페노프로펜, 플록타페닌, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도 메타신, 케토프로펜, 케토롤락, 메클로페나메이트, 메페남산, 멜록시캄, 나부메톤, 나프록센, 옥사프로진, 페닐부타존, 피록시캄, 살살레이트, 술린닥, 테녹시캄, 니아프로펜산, 톨메틴, 베나메타손 벤조에이트, 베타메타손 발러레이트, 클로베타솔 프로피오네이트, 데속시메타손, 플루옥시놀론 아세토나이드, 플루란드레놀라이드, 국소 스테로이드, 알클로메타손 디프로피오네이트, 알로에 베라, 암시노나이드, 암시노나이드, 안트랄린, 베타메타손 디프로피오네이트, 베나메타손 발러레이트, 칼시포트리엔, 클로베타솔 프로피오네이트, 코알 타르, 사해 염, 데소나이드, 데소나이드; 베타메타손 발러레이트, 데속시메타손, 디플로라손 디아세테이트, 에포솜 염, 플루옥시놀론 아세토나이드, 플루옥시노나이드, 플루란드레놀라이드, 플루티카손 프로피오네이트, 할시노나이드, 할로베타솔 프로피오네이트, 하이드로코르티손 발러레이트, 하이드로코르티손, 모메타손 플로에이트, 오일화된 오트밀, 석유 젤리, 프레드니카르바이트, 살시실산, 타자로텐, 트리암시놀론 아세토나이드, 하이드로코르티손, 덱사메타손, 메틸프레드니솔론 및 프레드니솔론의 혼합물, 알레팍셉트, 에타네르셉트, 사이클로스포린, 메토트렉세이트, 악시트레틴, 이소트레티노인, 하이드록시우레아, 마이코페놀레이트 모페틸, 설파살라진, 6-티오구아닌, 아나킨라, 주사가능한 금, 페니실라민, 아자티오프린, 클로로퀸, 하이드록시클로로퀸, 설파살라진, 경구 금, 아우라노핀, 금 나트륨 티오말레에이트, 아우로티오글루코즈, 메살라민, 설파살라진, 부데소나이드, 메트로니다졸, 시프로플록사신, 아자티오프린, 6-머캅토푸린 또는 칼슘, 엽산, 비타민 B12, 셀레콕시브, 로페콕시브, 발데콕시브, 루미라콕시브, 에토리콕시브, 에팔리주마브, 아달리무마브, 인플릭시 마브, ABS-IL8의 식이 보충물 및 광치료요법으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원이다.
본 발명은 MCP1을 면역글로불린 또는 이의 단편에 융합시킴을 포함하여, 대상체의 체내에서 MCP1의 생체내 반감기를 증가시키는 방법을 제공한다. 본 발명의 양태에서, MCP1은 서열 2의 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 양태에서, 면역글로불린은 서열 3 내지 7로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
도면의 간단한 설명
도 1은 플라스미드 pcDNA3.1(+)hMCP1 mIgG의 맵이다.
본 발명은 대상체의 체내(예: 혈장)에서 MCP1의 생체내 반감기를 연장시키거나 또는 지연시키는 특정의 반감기 연장 잔기에 융합된 MCP1를 포함하는 폴리펩타이드를 제공한다.
분자 생물학
본 발명에 따라서, 통상의 분자 생물학, 미생물학 및 재조합 DNA 기술이 당해 분야의 기술내에서 사용될 수 있다. 이러한 기술은 문헌에 완전히 설명되어 있다[참조: Sambrook, Fritsch & Maniatis, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Second Edition (1989) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York (herein "Sambrook, et al., 1989"); DNA Cloning : A Practical Approach, Volumes I and Il (D.N. Glover ed. 1985); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait ed. 1984); Nucleic Acid Hybridization (B.D. Hames & S.J. Higgins eds. (1985)); Transcription And Translation (B.D. Hames & S.J. Higgins, eds. (1984)); Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed. (1986)); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, (1986)); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); F.M. Ausubel, et al. (eds.), Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc. (1994)].
"폴리뉴클레오타이드", "핵산" 또는 "핵산 분자"는 리보뉴클레오사이드(아데노신, 구아노신, 우리딘 또는 사이티딘; "RNA 분자") 또는 데옥시리보뉴클레오사이드(데옥시아데노신, 데옥시구아노신, 데옥시티미딘 또는 데옥시사이티딘; "DNA 분자")의 포스페이트 에스테르 중합체 형태, 또는 포스포로티오에이트 및 티오에스테르와 같은 특정의 이의 포스포에스테르 유사체를 일본쇄 형태로, 이본쇄 형태로 또는 기타 형태로 포함한다.
"폴리뉴클레오타이드 서열", "핵산 서열" 또는 "뉴클레오타이드 서열"은 DNA 또는 RNA와 같은 핵산내 일련의 뉴클레오타이드 염기(또한 "뉴클레오타이드"로 불림)이며 2개 이상의 뉴클레오타이드의 특정 쇄를 의미한다.
RNA, 폴리펩타이드, 단백질 또는 효소와 같은 "암호화 서열" 또는 발현 생성물을 "암호화하는" 서열은 발현되는 경우, 생성물을 생성하는 뉴클레오타이드 서열이다.
용어 "유전자"는 모든 또는 일부의 하나 이상의 RNA 분자, 단백질 또는 효소를 포함하고, 예를 들면, 유전자가 발현되는 조건을 결정하는 프로모터 서열과 같은, 조절성 DNA 서열을 포함하거나 또는 포함하지 않을 수 있는 리보뉴클레오타이드 또는 아미노산의 특정 서열을 암호화하거나 또는 이에 상응하는 DNA 서열을 의미한다. 유전자는 DNA로 부터, 아미노산 서열내로 해독될 수 있거나 또는 해독될 수 없는 RNA로 전사될 수 있다.
"단백질 서열", "펩타이드 서열" 또는 "폴리펩타이드 서열" 또는 "아미노산 서열"은 단백질, 펩타이드 또는 폴리펩타이드내 일련의 2개 이상의 아미노산을 포함한다.
용어 "분리된 폴리뉴클레오타이드" 또는 "분리된 폴리펩타이드"는 세포 또는 재조합 DNA 발현 시스템내에서 일반적으로 발견되는 다른 성분들로부터 부분적으로 또는 완전하게 분리되는 폴리뉴클레오타이드(예: RNA 또는 DNA 분자, 또는 혼합된 중합체) 또는 폴리펩타이드 각각을 포함한다. 이들 성분들은 세포막, 세포벽, 리보소옴, 폴리머라제, 혈청 성분 및 추출성 게놈 서열을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
분리된 폴리뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드는 바람직하게는 분자의 필수적으로 균질성인 조성물일 것이나 일부 이종성을 함유할 수 있다.
본원에 사용된 것으로서 DNA의 "증폭"은 DNA 서열의 혼합물내에서 특정 DNA 서열의 농도를 증가시키기 위한 폴리머라제 쇄 반응(PCR)을 포함한다. PCR의 기술에 대해서는 문헌[참조: Saiki, et al., Science (1988) 239:487]을 참조한다.
용어 "숙주 세포"는 선택되거나, 변형되거나, 형질감염되거나, 형질전환되거나, 성장하거나, 또는 세포에 의한 물질의 생산, 예를 들면, 세포에 의한 유전자, DNA 또는 RNA 서열 또는 단백질의 발현 또는 복제를 위해 어떠한 방법으로 사용되거나 또는 조작된 어떠한 유기체의 어떠한 세포도 포함한다. 숙주 세포는 세균 세포[예: 이. 콜라이(E. coli)], 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포, HEK293 세포, SP2/0, NS1, 및 NSO를 포함하나, 이에 한정되지 않는 골수종 세포, 쥐 대식구 J774 세포 또는 특정의 기타 대식구 세포주 및 사람 장 내피 Caco2 세포를 포함한다.
폴리뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드 서열은 당해 분야에 공지된 특정의 방법(예: 화학적 서열분석 또는 효소적 서열분석)에 의해 측정할 수 있다. DNA의 "화학적 서열분석"은 막삼 및 길버트[Maxam and Gilbert (1977)]의 방법[참조: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:560]과 같은 방법을 포함하며, 여기서, DNA는 개개의 염기-특이적인 반응을 사용하여 무작위적으로 분해된다. DNA의 "효소적 서열분석"은 상거(Sanger)의 방법[참조: Sanger, et al., (1977) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74:5463]과 같은 방법을 포함한다.
본원의 폴리뉴클레오타이드는 천연의 조절(발현 조절) 서열에 의해 플랭킹될 수 있거나, 또는 프로모터, 내부 리보소옴 도입 부위(IRES) 및 기타 리보소옴 결합 부위 서열, 인핸서, 반응 요소, 리프레서, 시그날 서열, 폴리아데닐화 서열, 인트론, 5'- 및 3'-비-암호화 영역 등을 포함하는 이종 서열과 연합될 수 있다.
일반적으로, "프로모터" 또는 "프로모터 서열"은 세포내에서 RNA 폴리머라제에 예를 들면, 직접적으로 또는 다른 프로모터-결합된 단백질 또는 물질을 통해 결합할 수 있고 암호화 서열의 전사를 개시할 수 있는 DNA 조절 영역이다. 프로모터 서열은 일반적으로 전사 개시 부위에 의해 이의 3' 말단에서 결합되어 있으며 상부(5' 방향)으로 연장되어 특정 수준으로 전사를 개시하는데 요구되는 최소 수의 염기들 또는 성분들을 포함한다. 프로모터 서열내에서 전사 개시 부위(편리하게는, 예를 들면, 뉴클레아제 S1을 사용한 맵핑에 의해 정의된다), 및 RNA 폴리머라제의 결합에 관여하는 단백질 결합 도메인(컨센수스 서열)이 발견될 수 있다. 프로모터는 인핸서 및 리프레서 서열을 포함하는 다른 발현 조절 서열과, 또는 본 발명의 폴리뉴클레오타이드와 작동적으로 연합될 수 있다. 유전자 발현을 조절하는데 사용될 수 있는 프로모터는 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터(미국 특허 제5,385,839호 및 제5,168,062호), SV40 얼리 프로모터 영역(early promoter region)[참조: Benoist, et al., (1981) Nature 290:304-310), 라우스 육종 바이러스(Rous sarcoma virus)의 3' 긴 말단 반복체내에 함유된 프로모터[참조: Yamamoto, et al., (1980) Cell 22:787-797], 헤르페스 티미딘 키나제 프로모터[참조: Wagner, et al., (1981) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78:1441-1445], 메탈로티오네인 유전자의 조절 서열[참조: Brinster, et al., (1982) Nature 296:39-42]; β-락타마제 프로모터와 같은 원핵세포 발현 벡터[참조: Villa-Komaroff, et al., (1978) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 75:3727-3731), 또는 tac 프로모터[참조: DeBoer, et al., (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 80:21-25, 또한 "Useful proteins from recombinant bacteria" in Scientific American (1980) 242:74-94 참조]; 및 Gal 4 프로모터, ADC(알코올 데하이드로게나제) 프로모터, PGK(포스포글리세롤 키나제) 프로모터 또는 알칼린 포스파타제 프로모터와 같은 효모 또는 기타 진균으로부터의 프로모터 성분을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.
암호화 서열은, 서열이 암호화 서열의 RNA, 바람직하게는 mRNA내로의 RNA 폴리머라제 매개된 전사를 지시한 후 RNA로 스플라이싱(이것이 인트론을 함유하는 경우) 될 수 있고, 임의로 암호화 서열에 의해 암호화된 단백질로 해독되는 경우 세포내에서 전사 및 해독 조절 서열의 "조절하에", 이러한 서열과 "기능적으로 연합"되거나 또는 "작동적으로 연합"되어 있다.
용어 "발현하다" 및 "발현"은 유전자, RNA 또는 DNA 서열내에서 정보가 표현되도록, 또는 표현을 유발함을; 예를 들면, 상응하는 유전자의 전사 및 해독에 포함된 세포 작용을 활성화시켜 단백질을 생산함을 의미한다. DNA 서열은 세포내에서 또는 세포에 의해 발현되어 RNA(예: mRNA) 또는 단백질과 같은 "발현 생성물"을 형성한다. 발현 생성물 자체는 또한 세포에 의해 "발된된다"로 일컬어질 수 있다.
용어 "형질전환"은 폴리뉴클레오타이드의 세포내로의 도입을 의미한다. 도입된 유전자 또는 서열은 "클론"으로 칭해진다. 도입된 DNA 또는 RNA를 제공받는 숙주 세포는 "형질전환"되어지며 "형질전환체" 또는 "클론"이다. 숙주 세포내로 도입된 DNA 또는 RNA는 숙주 세포와 동일한 속 또는 종의 세포를 포함하는 어떠한 공급원으로부터, 또는 상이한 속 또는 종의 세포로부터 올 수 있다.
용어 "벡터"는, DNA 또는 RNA 서열이 숙주 세포내로 도입되어 숙주를 형질전환시키고, 임의로 도입된 서열의 전사 및/또는 복제를 증진시키도록 하는 비히클(예: 플라스미드)를 포함한다.
본 발명에서 사용될 수 있는 벡터는 폴리뉴클레오타이드의 숙주내로의 도입을 촉진시킬 수 있는 플라스미드, 바이러스, 박테리오파지, 통합성 DNA 단편, 및 기타 비히클을 포함한다. 플라스미드는 가장 일반적으로 사용된 형태의 벡터이나, 유사한 작용을 제공하고 당해 분야에 공지되어 있거나, 또는 공지되어 온 다른 모든 형태의 벡터도 본원에서 사용하기에 적합하다[참조: Pouwels, et al., Cloning Vectors: A Laboratory Manual, 1985 and Supplements, Elsevier, N.Y., and Rodriguez et al. (eds.), Vectors : A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, 1988, Buttersworth, Boston, MA].
본 발명은 MCP1(예: 성숙한 MCP1 폴리펩타이드), MCP1 다량체 또는 이의 융합체[예: 생체내에서 반감기를 연장시키는 잔기(예: Ig)에 융합된](예를 들면, 발명 시스템내에서)를 생산하는 방법을 포함한다. 본 발명의 양태에서, MCP1 또는 이의 다량체 또는 융합체는 적합한 숙주 세포내로 도입되는 발현 벡터내로 삽입된다. 이후에, 단백질은 숙주 세포내에서 발현된다. 이후에, 단백질은 숙주 세포로부터 분리되고 추가로 정제될 수 있다. 이러한 방법으로 생산된 특정의 폴리펩타이드는 본 발명의 영역내에 있다.
용어 "발현 시스템"은 적합한 조건하에서 벡터에 의해 운반되어 숙주 세포내로 도입되는 단백질 또는 핵산을 발현할 수 있는 숙주 세포 및 상용성 벡터를 의미한다. 일반적인 발현 시스템은 이. 콜라이 숙주 세포 또는 포유동물 숙주 세포(예: CHO 세포, HEK293 세포 및 흑색종 세포) 및 플라스미드 벡터, 곤충 숙주 세포 및 바큘로바이러스 벡터, 및 포유동물 숙주 세포 및 벡터를 포함한다.
본 발명의 MCP1 또는 이의 다량체 또는 융합체를 암호화하는 핵산의 발현은 원핵 세포 또는 진핵 세포내에서 통상의 방법으로 수행할 수 있다. 비록 이. 콜라이 숙주 세포가 원핵세포 시스템에서 가장 흔하게 사용된다고 해도, 슈도모나스(Pseudomonas) 및 바실러스(Bacillus)의 각종 균주와 같은 많은 다른 세균이 당해 분야에 공지되어 있으며 또한 사용될 수 있다. 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 발현시키기에 적합한 숙주 세포는 원핵 및 고등 진핵세포를 포함한다. 원핵세포는 그람-음성 및 그람-양성 유기체 둘다, 예를 들면, 이. 콜라이 및 비. 서브틸리스를 포함한다. 고등 진핵세포는 비-포유동물 기원, 예를 들면, 곤충 세포 및 조류, 및 포유동물 기원, 예를 들면, 사람, 영장류 및 설치류 둘다의 동물 세포(예: CHO 세포)로부터의 확립된 조직 배양 세포주를 포함한다.
원핵세포 숙주-벡터 시스템은 많은 상이한 종에 대한 다양한 벡터를 포함한다. DNA를 증폭시키는 대표적인 벡터는 pBR322 또는 많은 이의 유도체중 어느 것(예: pUC18 또는 19)이다. MCP1 폴리펩타이드를 발현시키는데 사용될 수 있는 벡터는 lac 프로모터(pUC-계열); trp 프로모터(pBR322-trp); lpp 프로모터(pIN-계열); 람다-pP 또는 pR 프로모터(pOTS); 또는 ptac(pDR540)와 같은 아이브리드 프로모터를 함유하는 것들을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다[참조: Brosius et al., "Expression Vectors Employing Lambda-, trp-, lac-, and lpp- derived Promoters", in Rodriguez and Denhardt (eds.) Vectors : A Survey of Molecular Cloning Vectors and Their Uses, 1988, Buttersworth, Boston, pp. 205-236]. 많은 폴리펩타이드가 미국 특허 제4,952,496호, 제5,693,489호 및 제5,869,320호, 및 문헌[참조: Davanloo, P., et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 2035-2039; Studier, F. W., et al., (1986) J. Mol. Biol. 189: 113-130; Rosenberg, A. H., et al., (1987) Gene 56: 125-135; 및 Dunn, J. J., et al., (1988) Gene 68: 259]에 기술된 바와 같은 이. 콜라이/T7 발현 시스템에서 높은 수준으로 발현될 수 있다.
T7 발현 시스템은 발현 카세트를 함유하는 pET 플라스미드를 포함하며, 여기서, 목적 유전자(예: MCP1 또는 이의 다량체 또는 융합체)는 이. 콜라이 박테리오파아지 T7[참조: Studier et al, J. Mol. Biol. 189(1):113-30 (1986)]로부터 극도로 강력한 프로모터뒤에 삽입된다. T7 폴리머라제의 부재하에서, 당해 프로모터는 셧 오프(shut off)된다. 발현이 일어나도록 하기 위해, pET 플라스미드를 람다 라이소겐(가장 일반적으로 사용된 라이소겐은 DE3으로 알려져 있다)내에서 염색체상에 T7 폴리머라제의 단일 카피를 대표적으로 함유하는 세균 균주내로 형질전환된다. T7 폴리머라제는 Lac-UV5 lac 프로모터의 조절하에 있다. 세포가, 락토즈를 함유하지 않은 배지에서 성장되는 경우, lac 리프레서(lacI)은 lac 오퍼레이터에 결합하여 lac 프로모터로부터 전사를 방지한다. 락토즈가 단독의 탄소원이거나, 또는 락토즈 유사체 이소프로필-베타-D-티오갈락토피라노사이드(IPTG)가 배지에 가해지는 경우, 락토즈(또는 IPTG)는 리프레서에 결합하여 오퍼레이터로부터 이의 해리를 유도하여 프로모터로부터 전사를 허용한다. 배양 배지로의 글루코즈의 첨가는 이화산물 억제 메카니즘을 통해 T7 RNA 폴리머라제의 억제에 기여한다.
고등 진핵세포 조직 배양 세포를 또한 본 발명의 MCP1 또는 이의 다량체 또는 융합체의 재조합체 생산에 사용될 수 있다. 곤충 바큘로바이러스 발현 시스템 및 포유동물 세포를 포함하는 고등 진핵세포 조직 배양 세포주를 사용할 수 있다. 이러한 세포의 형질전환 또는 형질감염 및 증식은 통상의 과정이 된다. 유용한 세포주의 예는 HeLa 세포, 차이니즈 햄스터 난소(CHO) 세포주, HEK 293 세포, 흑색종 세포, J774 세포, Caco2 세포, 랫트 새끼 신장(BRK) 세포주, 곤중 세포주, 조류 세포주, 및 원숭이(COS) 세포주를 포함한다. 통상적으로, 이러한 세포주에 대한 발현 벡터는 복제 오리진, 프로모터, 해독 개시 부위, RNA 스플라이스 부위(게놈성 DNA가 사용되는 경우), 폴리아데닐화 부위, 및 전사 종결 부위를 포함한다. 이들 벡터는 또한 일반적으로 선별 유전자 또는 증폭 유전자를 함유한다. 적합한 발현 벡터는 플라스미드, 바이러스, 또는 예를 들면, 아데노바이러스, SV40, 파르보바이러스, 박시니아 바이러스 또는 사이토메갈로바이러스와 같은 공급원으로부터 기원한 프로모터를 수반하는 레트로바이러스를 함유한다. 발현 벡터의 예는 pCR® 3.1, pCDNA1, pCD[참조: Okayama, et al., (1985) MoI. Cell Biol. 5:1136], pMC1neo Poly-A[참조: Thomas, et al., (1987) Cell 51:503], pREP8, pSVSPORT 및 이의 유도체, 및 pAC373 또는 pAC610와 같은 바큘로바이러스 벡터를 포함한다.
본 발명의 양태에서, MCP1-Ig는 단백질 A 또는 단백질 G 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다. 단백질 A 및 단백질 G는 면역글로불린에 우선적으로 결합한다. 또한, 폴리펩타이드는 염 또는 알코올 침전, 친화성 크로마토그래피, 제조 disc-겔 전기영동, 등전점 포커싱(isoelectric focusing), 고압 액체 크로마토그래피(HPLC), 역상 HPLC, 겔 여과, 양이온 및 음이온 교환 및 분배 크로마토그래피, 및 역류 분포를 포함하나 이에 한정되지 않는 표준 방법으로 정제할 수 있다. 이러한 정제 방법은 당해 분야에 잘 공지되어 있으며 예를 들면, 문헌[참조: in "Guide to Protein Purification", Methods in Enzymology, Vol. 182, M. Deutscher, Ed., 1990, Academic Press, New York, NY]에 기술되어 있다. 폴리펩타이드가 세포 또는 조직 공급원으로부터 분리되는 경우, 검정 시스템내에 페닐메탄설포닐 플루오라이드(PMSF), 페파블록 SC, 펩스타틴, 류펩틴, 키모스타틴 및 EDTA와 같은 하나 이상의 단백질분해 효소의 억제제가 포함되는 것이 바람직하다.
폴리펩타이드내에 존재하는 변형(예: 해독후 변형)은 흔히 이들이 제조되는 방법의 기능일 것이다. 숙주내에서 클로닝된 유전자를 발현시킴으로써 제조된 폴리펩타이드의 경우, 변형의 특성 및 정도는 대부분 폴리펩타이드 아미노산 서열내 존재하는 숙주 세포의 해독후 변형능 및 변형 시그날에 의해 결정될 것이다. 예를 들면, 잘 알려져 있는 바와 같이, 글리코실화는 흔히 이. 콜라이와 같은 세균 숙주에서 일어나지 않는다. 따라서, MCP1 또는 이의 다량체 또는 융합체의 글리코실화가 요구되는 경우, 폴리펩타이드는 글리코실화 숙주, 일반적으로 진핵 세포내에서 발현될 수 있다. 곤충 세포는 흔히 포유동물 세포의 것과 유사한 해독후 글리코실화를 수행한다. 이러한 이유로, 곤충 세포 발현 시스템은 글리코실화의 천연 패턴을 갖는 포유동물 단백질을 효율적으로 발현하도록 개발되어 왔다. 본 발명에서 사용될 수 있는 곤충 세포는 인섹타(Insecta) 부류의 유기체로 부터 기원한 특정 세포이며, 예를 들면, 여기서, 곤충은 스포도프테라 프루이기페르다(Spodoptera fruigiperda)(Sf9 또는 Sf21) 또는 트리코플루시아 니(Trichoplusia ni)(High 5)이다. 예를 들어, MCP1 또는 이의 다량체 또는 융합체를 제조하기 위해 본 발명에서 사용할 수 있는 곤충 발현 시스템의 예는 Bac-To-Bac[캘리포니아주 칼스바드 소재의 인비트로겐 코포레이션(Invitrogen Corporation)] 또는 게이트웨이(Gateway)(캘리포니아주 칼스바드 소재의 인비트로겐 코포레이션)을 포함한다. 경우에 따라, 탈글리코실화 효소를 사용하여 진핵세포 발현 시스템에서 생산동안 부착된 탄수화물을 제거할 수 있다.
MCP1 또는 이의 융합체 또는 다량체와 같은 폴리펩타이드로의 폴리에틸렌 글리콜(PEG)의 첨가 또는 페길화는 당해 분야에 통상적이고 잘 알려진 방법을 사용하여 달성할 수 있다(참조: 미국 특허 제5,691,154호; 미국 특허 제5,686,071호; 미국 특허 제5,639,633호; 미국 특허 제5,492,821호; 미국 특허 제5,447,722호; 미국 특허 제5,091,176호).
본 발명은 본 발명의 MCP1 또는 이의 융합체 또는 다량체에 상응하는 아미노산 또는 뉴클레오타이드 서열에 대한 특정의 표면상의 또는 약간의 변형을 고려한다. 특히, 본 발명은 본 발명의 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드의 서열 보존성 변이체를 고려한다. 폴리뉴클레오타이드 서열의 "서열-보전성 변이체"는, 제공된 코돈내 하나 이상의 뉴클레오타이드의 변화가 당해 위치에 암호화된 아미노산에 있어서 변형을 초래하지 않는 것들이다. 본 발명의 폴리펩타이드의 작용-보존성 변이체가 또한 본 발명에 의해 고려된다. "작용-보존성 변이체"는, 단백질 또는 효소내 하나 이상의 아미노산 잔기가 아미노산을 유사한 특성을 가진 아미노산으로 대체함을 포함하나, 어떠한 수단으로든 이에 한정되지 않는, 폴리펩타이드의 전체적인 구조 및 작용을 변형시키지 않으면서 변화된 것들이다. 유사한 특성을 가진 아미노산은 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 상호교환가능할 수 있는 극성/친수성 아미노산은 아스파라긴, 글루타민, 세린, 시스테인, 트레오닌, 라이신, 아르기닌, 히스티딘, 아스파르트산 및 글루탐산을 포함하며; 상호교환될 수 있는 비극성/소수성 아미노산은 글라이신, 알라닌, 발린, 류이신, 이소류이신, 프롤린, 타이로신, 페닐알라닌, 트립토판 및 메티오닌을 포함하고; 상호교환가능할 수 있는 산성 아미노산은 아스파르트산 및 글루탐산을 포함하며; 상호교환할 수 있는 염기성 아미노산은 히스티딘, 라이신 및 아르기닌을 포함한다.
본 발명은 MCP1(예를 들면, 성숙한 MCP1 폴리펩타이드), 또는 이의 MCP1 다량체 또는 융합체[예를 들면, 생체내 반감기 연장 잔기(예: Ig)](예: 서열 1, 2, 8-12 중 어느 것)를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 및 폴리뉴클레오타이드에 하이브리드화된 핵산을 포함한다. 바람직하게는, 핵산은 낮은 스트링전시 조건(stringency condition), 보다 바람직하게는 중간의 스트링전시 조건 및 가장 바람직하게는 높은 스트링전시 조건하에서 하이브리드화된다 핵산 분자는, 핵산 분자의 일본쇄 형태가 온도 및 용액 이온 강도의 적절한 조건하에서 다른 핵산 분자에 어닐링될 수 있는 경우, cDNA, 게놈성 DNA 또는 RNA와 같은 다른 핵산에 "하이브리드화"될 수 있다(참조: 상기 Sambrook, et al.). 온도 및 이온 강도의 조건은 하이브리드화의 "스트링전시"를 결정한다. 통상적으로 낮은 스트링전시 하이브리드화 조건은 55℃, 5X SSC, 0.1% SDS, 0.25% 우유 및 42℃에서 포름아미드의 부재; 또는 42℃에서 30% 포름아미드, 5X SSC, 0.5% SDS이다. 통상적으로, 중간의 스트링전시 하이브리드화 조건은, 하이브리드화가 40% 포름아미드속에서 42℃에서 5X 또는 6X SSC와 함께 수행되는 것을 제외하고는 낮은 스트링전시 조건과 유사하다. 높은 스트링전시 하이브리드화 조건은, 하이브리드화 조건이 50% 포름아미드, 5X 또는 6X SSC, 및 임의로 보다 높은 온도(예: 42℃: 57℃, 59℃, 60℃, 62℃, 63℃, 65℃ 또는 68℃보다 높은 온도)에서 수행되는 것을 제외하고는 낮은 스트링전시 조건과 유사하다. 일반적으로, SSC는 0.15M NaCl 및 0.015M Na-시트레이트이다. 하이브리드화는, 2개의 핵산이, 비록 하이브리드화의 스트링전시에 따라 염기사이에 미스매치가 가능하다고 해도, 상보성 서열을 함유한다. 핵산을 하이브리드화하기에 적절한 스트링전시는 당해 분야에 잘 공지되어 있는 변수들인, 핵산의 길이 및 상보성 정도에 의존한다. 2개의 뉴클레오타이드 서열사이에 유사성 또는 상동성 정도가 클수록, 핵산이 하이브리드화할 수 있는 스트링전시가 높다. 길이가 100 뉴클레오타이드보다 큰 하이브리드의 경우, 융점을 계산하기 위한 방정식이 유도되어 있다(참조: Sambrook, et al., 상기 참조, 9.50-9.51). 보다 짧은 핵산, 예를 들어, 올리고뉴클레오타이드를 사용한 하이브리드화의 경우, 미스매치의 위치는 보다 중요해지며, 올리고뉴클레오타이드의 길이는 이의 특수성을 결정한다(참조: Sambrook, et al., 상기 참조).
또한, 알고리듬의 매개변수를 선택하여 각각의 참조 서열의 전체 길이에 걸쳐 각각의 서열간의 최대 매치를 제공하는 BLAST 알고리듬으로 비교를 수행하는 경우, 서열 13 및 19-23 중 어느 것의 뉴클레오타이드 서열, 및 서열 1, 2 및 8-12 중 어느 것의 아미노산 서열인, 참조 MCP1(예를 들면, 성숙한 MCP1 폴리펩타이드), MCP1 다량체 또는 이의 융합체[예를 들면, 생체내 반감기를 연장시키는 잔기(예: Ig)에 융합된]에 대해 약 70% 이상 동일하고, 바람직하게는 약 80% 이상 동일하며, 보다 바람직하게는 약 90% 이상 동일하고 가장 바람직하게는 약 95% 이상(예를 들면, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%) 동일한 아미노산 서열을 포함하는 뉴클레오타이드 서열 및 폴리펩타이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드가 본 발명에 포함된다.
알고리듬의 매개변수를 선택하여 각각의 참조 서열의 전체 길이에 걸쳐 각각의 서열간의 최대 매치를 제공하는 BLAST 알고리듬으로 비교를 수행하는 경우, 서열 1, 2 및 8-12 중 어느 것의, 참조 MCP1(예를 들면, 성숙한 MCP1 폴리펩타이드), MCP1 다량체 또는 이의 융합체[예를 들면, 생체내 반감기를 연장시키는 잔기(예: Ig)에 융합된]에 대해 약 70% 이상 유사하고, 바람직하게는 약 80% 이상 유사하며, 보다 바람직하게는 약 90% 이상 유사하고 가장 바람직하게는 약 95% 이상(예를 들면, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 100%) 유사한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드가 또한 본 발명에 포함된다.
서열 동질성은 비교되는 2개 서열의 뉴클레오타이드 또는 아미노산간의 정확한 매치를 말한다. 서열 유사성은 동일하지 않은, 생화학적으로 관련된 아미노산간의 매치외에 비교되는 2개의 폴리펩타이드의 아미노산간의 정확한 매치 둘다를 말한다. 유사한 특성을 공유하며 상호교환가능할 수 있는 생화학적으로 관련된 아미노산이 위에서 논의된다.
BLAST 알고리듬에 관한 다음 참조 문헌이 본원에 참조로 인용되어 있다: BLAST ALGORITHMS: Altschul, S.F., et al., (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410; Gish, W., et al., (1993) Nature Genet. 3:266-272; Madden, T.L, et al., (1996) Meth. Enzymol. 266:131-141 ; Altschul, S.F., et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; Zhang, J., et al., (1997) Genome Res. 7:649-656; Wootton, J.C., et al., (1993) Comput. Chem. 17:149-163; Hancock, J. M., et al., (1994) Comput. Appl. Biosci. 10:67-70; ALIGNMENT SCORING SYSTEMS: Dayhoff, M.O., et al., "A model of evolutionary change in proteins." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. M. O. Dayhoff (ed.), pp. 345-352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Schwartz, R.M., et al., "Matrices for detecting distant relationships." in Atlas of Protein Sequence and Structure , (1978) vol. 5, suppl. 3." M.O. Dayhoff (ed.), pp. 353-358, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol. 219:555-565; States, D.J., et al., (1991) Methods 3:66-70; Henikoff, S., et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-10919; Altschul, S.F., et al., (1993) J. Mol. Evol. 36:290-300; ALIGNMENT STATISTICS: Karlin, S., et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268; Karlin, S., et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877; Dembo, A., et al., (1994) Ann. Prob. 22:2022-2039; and Altschul, S. F. "Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments." in Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), (1997) pp. 1-14, Plenum, New York.
케모킨 리간드 및 이의 융합체
본 발명은 임의로 링커 펩타이드(예: GS)에 의해 하나 이상의 "반감기를 연장시키는 잔기"에 융합된 MCP1 폴리펩타이드와 같은 하나 이상의 특정의 케모킨을 포함하는 특정의 융합 폴리펩타이드를 포함한다. 본 발명은 또한 2개 이상의 케모킨 폴리펩타이드, 또는 단일의 연속되는 폴리펩타이드 쇄에 융합된 이의 단편을 포함하는 특정의 케모킨 리간드 다량체를 추가로 포함한다.
본 발명의 양태에서, 케모킨 폴리펩타이드는 MCP1, SDF1(SDF1α 또는 SDF1β 포함; 참조: 진뱅크(Genbank) 수탁 번호 제P48061호) 또는 MIP1β(참조: 진뱅크 수탁 번호 제NP_002975.1호; 제AAA36656.1호; 제AAA36752.1호; 제AAA51576.1호; 제AAA57256.1호; 제AAB00790.1호; 제AAX07292.1호; 제CAA34291.1호; 제CAA37722.2호; 제CAA37723.1호; 또는 제CAG46916.1호)이다. 본 발명의 양태에서, 케모킨 폴리펩타이드는 케모킨의 CCL 또는 CXCL 부류 중 특정의 구성원, 예를 들면, CCL1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 , 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 또는 28 중 어느 것; 또는 CXCL 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15 또는 16 중 어느 것이다. 예를 들면, 본 발명의 양태에서, 케모킨은 I309, MIP1α, MIP1β, RANTES, C10, MCP2, MCP3, CCF18, 에오탁신1, MCP4, MCP5, HCC1, HCC2, NCC4, TARC, PARK, ELC, LARC, SLC, MDC, MPIF1 , 에오탁신2, TECK, 에오탁신3, ALP, CTACK로 이루어진 그룹 중에서 선택된 특정의 구성원이다. 예를 들면, 본 발명의 양태에서, 케모킨은 CCL23, CCL28, GROα, GROβ, GROγ, PF4, ENA78, GCP2, PBP, β-TG, CTAP-III, NAP-2, IL-8, MIG, IP10, I-TAC, SDF1, BLC, BRAK, 룬긴(lungine), 림포탁틴 또는 프락탈킨으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 특정의 구성원이다. 본 발명은 반감기를 연장시키는 잔기에 융합된 하나 이상의 케모킨을 포함하는 융합체(예: MCP1-SDF1-Ig)를 포함한다.
"반감기를 연장시키는 잔기"는 폴리펩타이드에 대해 추가되는 경우, 대상체의 체내(예를 들면, 대상체의 혈장속)에서 이러한 폴리펩타이드의 생체내 반감기를 연장시키는 특정 잔기, 예를 들면, 폴리펩타이드, 소 분자 또는 중합체이다. 예를 들어, 반감기를 연장시키는 잔기는, 본 발명의 양태에서, 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 모노메톡시 PEG (mPEG) 또는 면역글로불린(Ig)이다. 본 발명의 양태에서, PEG는 5, 10, 12, 20, 30, 40 또는 50 kDa 잔기 또는 이보다 크거나, 또는 약 12000개 에틸렌 글리콜 단위(PEG12000)를 포함한다.
용어 "Ig" 또는 "면역글로불린"은 특정 종으로부터, 예를 들면, 사람으로부터 또는 마우스로부터의 특정의 면역글로불린, 및 이의 단편 또는 변이체 또는 돌연변이체를 포함한다. 당해 용어는 특정의 중쇄 IgG, 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4; IgA, 예를 들면, IgA1 또는 IgA2; IgM, IgD 및 IgE를 포함한다. 본 발명의 양태에서, "Ig" 또는 "면역글로불린"은 중쇄의 힌지로부터 중쇄의 CH3에 이르기까지 앞서의 어느 것으로부터 기원한 폴리펩타이드를 말한다. 본 발명의 양태에서, "Ig"는 면역글로불린의 "단량체성 변이체" 또는 단량체"이다. 면역글로불린의 단량체성 변이체는 다른 면역글로불린(참조: 예를 들면, 서열 5 및 7)과 이량체화되지 않는다. 특정 면역글로불린의 단량체성 변이체는 면역글로불린 이량체화에 포함된 하나 이상의 잔기(예: 시스테인 잔기)의 돌연변이에 의해 작제될 수 있다. 예를 들어, 시스테인 잔기는 세린으로 돌연변이될 수 있다.
본 발명은 또한 MCP1 다량체[예를 들면, (성숙한 또는 프로세싱되지 않은 MCP1)n, 여기서, n은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10, 또는 그 이상이다)를 제공한다. MCP1 다량체는 하나 이상의 MCP1 폴리펩타이드, 또는 하나 이상의 다른 MCP1 폴리펩타이드 또는 이의 성숙한 폴리펩타이드에 융합된 이의 성숙한 폴리펩타이드를 포함한다.
용어 "MCP1"은 특정의 유기체[예: 특정의 포유동물, 예를 들면 사람, 판 트로글로디테스(Pan troglodytes); 카니스 파밀리아리스(Canis familiaris)(참조: 예를 들면, 수탁번호 제P52203호); 갈루스 갈루스(Gallus gallus); 보스 타우루스(Bos Taurus) (참조: 예를 들면, 수탁 번호 제P28291호); 라투스 노르베기쿠스(Rattus norvegicus)(참조: 예를 들면, 수탁번호 제XP_213425); 또는 무스 무스쿨루스(Mus musculus)로부터의 MCP1 유전자 또는 단백질, 또는 이의 특정 동족체 또는 단편(예: 성숙한 MCP1)을 포함한다. MCP1은 CCL2, HC11, MCAF, MCP1, MCP1 , SCYA2, GDCF-2, SMC-CF, HSMCR30, MGC9434, GDCF-2 및 HC11을 포함하는 수개의 동의어로 기술된다. 성숙한 MCP1 폴리펩타이드는 프로세싱되지 않거나 또는 성숙되지 않은 MCP1 폴리펩타이드내에 존재하는 리더 서열을 결여하고 있다. 리더 서열은 당해 분야의 통상의 기술을 가진 숙련가에 의해 용이하게 확인될 수 있다. 본 발명의 양태에서, MCP1 리더 서열은 서열 1의 아미노산 1-23이다.
용어 "MCP1-Ig"는 하나 이상의 MCP1 폴리펩타이드(예: 사람 또는 마우스) 또는 어떠한 방법 및 어떠한 배향으로도 하나 이상의 면역글로불린 폴리펩타이드 또는 이의 단편(예를 들면, 사람 IgG4 또는 IgG1 또는 힌지로부터 CH3 영역만을 포함하는 이의 단편)에 융합된 이의 단편을 포함하는 특정의 폴리펩타이드를 포함한다.
본 발명의 양태에서, 사람 MCP1의 프로세싱되지 않은 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00001
(서열 1).
본 발명의 양태에서, 사람 MCP1의 성숙한 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00002
(서열 2).
본 발명의 양태에서, 성숙한 MCP1은 서열 1의 아미노산 30번 내지 99번이다. 본 발명의 양태에서, 성숙한 MCP1은 서열 2의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서, 피로글루탐산이 N-말단에 가해지며, 본 발명의 다른 양태에서, 성숙한 MCP1은 서열 2의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서, N-말단 글루타민(Q)는 피로글루탐산으로 대체된다.
본 발명의 양태에서, 마우스 MCP1은 UniProtKB/스위스-프로트(Swiss-Prot) 수탁 번호 제P10148호 또는 수탁 번호 제NP_035463호 또는 제IPI00108087.1호하에 기술된 아미노산 서열을 포함한다. 본 발명의 양태는 또한 이러한 폴리펩타이드의 성숙한, 프로세싱된 변이체(예를 들면, 여기서, 시그날 펩타이드 아미노산 1번 내지 23번이 제거되어 있다)를 포함한다. 본 발명의 양태에서, 마우스 MCP1은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00003
(서열 30)
본 발명의 양태에서, 마우스 면역글로불린 중쇄 고정 영역(힌지 내지 CH3만)인, 동형 γ1의 성숙한 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00004
(서열 3)
본 발명의 양태에서, 사람 면역글로불린 중쇄 고정 영역(힌지 내지 CH3만), 동형 γ4의 성숙한 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00005
(서열 4)
본 발명의 양태에서, 사람 면역글로불린 중쇄 고정 영역(힌지 내지 CH3만)인, 동형 γ4 단량체성 변이체(밑줄 그어진 힌지내 C 내지 S 돌연변이)의 성숙한 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00006
(서열 5)
본 발명의 양태에서, 사람 면역글로불린 중쇄 고정 영역(힌지 내지 CH3만)인, 동형 γ1의 성숙한 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00007
(서열 6)
본 발명의 양태에서, 사람 면역글로불린 중쇄 고정 영역(힌지 내지 CH3만)인, 동형 γ1 단량체성 변이체(밑줄 그어진 힌지내 C 내지 S 돌연변이)의 성숙한 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00008
(서열 7)
본 발명의 양태에서, 마우스 IgG1(밑줄 그어진 링커)에 융합된 성숙한 사람 MCP1의 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00009
(서열 8)
본 발명의 양태에서, 사람 IgG4(밑줄 그어진 링커)에 융합된 성숙한 사람 MCP1의 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00010
(서열 9)
본 발명의 양태에서, 사람 IgG4 단량체성 변이체(밑줄 그어진 링커)에 융합된 성숙한 사람 MCP1의 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00011
(서열 10)
본 발명의 양태에서, 사람 IgG1(밑줄 그어진 링커)에 융합된 성숙한 사람 MCP1의 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00012
(서열 11)
본 발명의 양태에서, 사람 IgG1 단량체성 변이체(밑줄 그어진 링커)에 융합된 사람 MCP1의 폴리펩타이드 서열은 다음 아미노산 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00013
(서열 12)
본 발명의 양태에서, 사람 MCP1 암호화 영역의 DNA 서열은 뉴클레오타이드 서열(개시 및 종결 코돈은 밑줄 그어짐; 성숙한 폴리펩타이드의 제1 아미노산의 코돈은 굵은 활자체임)을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00014
(서열 13)
본 발명의 양태에서, 힌지 영역의 아미노 말단으로부터 개시하여 CH3 영역의 카복시-말단에서 종결하는(종결 코돈은 밑줄 그어짐) 마우스 중쇄 연역글로불린 고정 영역인, γ1 동형의 DNA 서열은 다음 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00015
(서열 14)
본 발명의 양태에서, 힌지 영역의 아미노 말단으로부터 개시하여 CH3 영역의 카복시-말단에서 종결하는(종결 코돈은 밑줄 그어짐) 사람 중쇄 연역글로불린 고정 영역인, γ4 동형의 DNA 서열은 다음 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00016
Figure 112008014394036-PCT00017
(서열 15)
본 발명의 양태에서, 힌지 영역의 아미노 말단으로부터 개시하여 CH3 영역의 카복시-말단에서 종결하는(Cys에서 Ser로의 변화는 밑줄로 표시됨; 종결 코돈은 긁은 활자체임) 사람 중쇄 연역글로불린 고정 영역인, γ4 동형의 DNA 서열은 다음 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00018
(서열 16)
하나 이상의 시스테인이 돌연변이된 본원에 설정된 특정의 면역글로불린 단량체성 변이체에서 세린을 암호화하는 코돈은 세린 아미노산을 암호화하는 특정의 코돈, 예를 들면, AGT, AGC, TCT, TCC, TCA 또는 TCG일 수 있다.
본 발명의 양태에서, 힌지 영역의 아미노 말단으로부터 개시하여 CH3 영역의 카복시-말단에서 종결하는(종결 코돈은 밑줄 그어짐) 사람 중쇄 연역글로불린 고정 영역인, γ1 동형의 DNA 서열은 다음 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00019
Figure 112008014394036-PCT00020
(서열 17)
본 발명의 양태에서, 힌지 영역의 아미노 말단으로부터 개시하여 CH3 영역의 카복시-말단에서 종결하는(Cys에서 Ser로의 변화는 밑줄 그어짐; 종결 코돈은 굵은 활자체임) 사람 중쇄 연역글로불린 고정 영역인, γ1 동형의 DNA 서열은 다음 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00021
(서열 18)
본 발명의 양태에서, 마우스 IgG1에 융합된 사람 MCP1(리더 펩타이드 포함)의 cDNA는 다음 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00022
Figure 112008014394036-PCT00023
(서열 19)
본 발명의 양태에서, 사람 IgG4에 융합된 사람 MCP1(리더 펩타이드 포함)의 cDNA는 다음 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00024
(서열 20)
본 발명의 양태에서, 사람 IgG4에 융합된 사람 MCP1(리더 서열 포함)의 cDNA는 다음 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00025
Figure 112008014394036-PCT00026
(서열 21)
본 발명의 양태에서, 사람 IgG1에 융합된 사람 MCP1(리더 서열 포함)의 cDNA는 다음 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00027
(서열 22)
본 발명의 양태에서, 사람 IgG1 단량체성 변이체에 융합된 사람 MCP1(리더 서열 포함)의 cDNA는 다음 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00028
Figure 112008014394036-PCT00029
(서열 23)
본 발명의 양태에서, 성숙한 사람 MCP1 및 마우스 IgG를 포함하는 융합 단백질을 암호화하는 발현 플라스미드인, 플라스미드 pcDNA3.1(+) hMCP1 mIgG(개시 및 종결 코돈은 밑줄 그어짐, MCP1 및 mlg의 링커에 대한 코돈은 굵은 활자체임)는 다음 뉴클레오타이드 서열을 포함한다:
Figure 112008014394036-PCT00030
Figure 112008014394036-PCT00031
Figure 112008014394036-PCT00032
Figure 112008014394036-PCT00033
(서열 24)
본 발명의 융합체는 하나 이상의 MCP1 및 하나 이상의 반감기를 연장시키는 잔기(예: 면역글로불린)을 어떠한 순서로도, 반복된 특정 횟수로 포함한다. 융합체가 다수의 MCP1을 포함하는 경우, MCP1은 동일하거나 또는 상이할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 양태에서, 본 발명의 융합체는 사람 MCP1-마우스 MCP1-Ig를 포함한다. 다수의 면역글로불린 폴리펩타이드가 또한 본 발명의 융합체속에 포함될 수 있다. 예를 들어, 하나의 양태에서, 융합체는 사람 MCP1-사람 MCP1-IgG1-IgG1; 사람 MCP1-사람 MCP1-IgG1-IgG4; 또는 사람 MCP1-Ig-마우스 MCP1-Ig-Ig-사람 MCP1을 포함한다. 어떠한 이들 양태도 용어 "MCP1-Ig"하에 포함된다. 본 발명은 또한 예를 들면, (사람 MCP1)2-PEG 또는 마우스 MCP1-사람 MCP1-PEG를 포함한다.
아미노-말단에서 MCP1을 포함하는 융합체는 카복시-말단에서 MCP1과의 융합체와 함께 본 발명의 영역내에 있으며; 용어 MCP1-Ig는 이들 유형의 융합체 둘다를 말한다. 예를 들어, 본 발명은 다음 MCP1-Ig 융합체: 사람 MCP1-Ig, Ig-사람 MCP1 , 마우스 MCP1-Ig, Ig-마우스 MCP1; PEG-사람 MCP1 또는 사람 MCP1-PEG를 포함한다.
본 발명의 양태에서, 본 발명의 MCP1-Ig 융합체는 MCP1을 Ig와 연결시키는 링커(예: 펩타이드 링커)를 포함한다. 본 발명의 양태에서, 링커는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산을 포함한다.
pcDNA3.1(+) hMCP1 mlgG외에, 다음 플라스미드가 본 발명의 일부를 형성한다. 플라스미드 pcDNA3.1 (+) hMCP1 hIgG4(개시 및 종결 코돈은 밑줄 그어져 있으며 MCP-1 및 mIg의 링커에 대한 코돈은 굵은 활자체이다):
Figure 112008014394036-PCT00034
Figure 112008014394036-PCT00035
Figure 112008014394036-PCT00036
(서열 25)
플라스미드 pcDNA3.1(+) hMCP1 hIgG1 당량체성 변이체(개시 및 종결 코돈은 밑줄 그어져 있고, MCP-1 및 mIg의 링커에 대한 코돈은 굵은 활자체이다):
Figure 112008014394036-PCT00037
Figure 112008014394036-PCT00038
Figure 112008014394036-PCT00039
Figure 112008014394036-PCT00040
(서열 26)
플라스미드 pcDNA3.1(+) hMCP1 hIgG1(개시 및 종결 코돈은 밑줄그어져 있고, MCP-1 및 mIg의 링커에 대한 코돈은 굵은 활자체이다):
Figure 112008014394036-PCT00041
Figure 112008014394036-PCT00042
Figure 112008014394036-PCT00043
Figure 112008014394036-PCT00044
(서열 27)
플라스미드 pcDNA3.1(+) hMCP1 hIgG1 당량체성 변이체(개시 및 종결 코돈은 밑줄그어져 있고, MCP-1 및 mIg의 링커에 대한 코돈은 굵은 활자체이다):
Figure 112008014394036-PCT00045
Figure 112008014394036-PCT00046
Figure 112008014394036-PCT00047
Figure 112008014394036-PCT00048
(서열 28)
치료학적 조성물 및 방법
본 발명은 내인성 케모킨(예: MCP1) 발현 또는 관련 활성(예: CCR2 수용체 결합)을 감소시키거나, 또는 케모킨 수용체(예: CCR2)의 발현 또는 활성을 감소시킴으로써 케모킨 수용체-생성 세포(예를 들면, 단핵구, 대식구 및 기억 T 림프구와 같은 CCR2-생성 세포)가 염증 조직내로 이주하는 것을 감소시킴으로써 치료할 수 있는 특정의 의학 상태 또는 질환 또는 질병을 치료하거나 또는 예방하는 방법을 포함한다. 본 발명의 양태에서, 염증 질환은 대상체에게 리간드를 전신계적 투여함으로써 동족 케모킨 리간드(예: MCP1)의 존재에 대해 대상체에서 케모킨 수용체(예: CCR2) 생성 세포를 탈감작화시킴으로써 치료한다. 본 발명의 양태에서, 케모킨 리간드는 연장된 기간 동안 투여하여 세포내에서 완전한 탈감작화 수준에 도달할 수 있다. 예를 들어, 본 발명은 대상체에게 임의로 치료학적 유효량의 추가의 치료제와 함께 치료학적 유효량의 케모킨 또는 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, MCP1 다량체 또는 이의 융합체[예를 들면, 생체내에서 반감기를 연장시키는 잔기(예: PEG 또는 Ig)에 융합된] 또는 이의 약제학적 조성물(예를 들면, 약제학적으로 허용되는 담체를 포함)를 투여함으로써, 대상체에서 염증 질환을 치료하거나 또는 예방하는 방법을 포함한다.
본 발명의 약제학적 조성물은 제약 분야에 잘 공지된 어떠한 방법으로도 제조할 수 있다; 참조: Gilman, et al., (eds.) (1990), The Pharmacological Bases of Therapeutics. 8th Ed., Pergamon Press; A. Gennaro (ed.), Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, (1990), Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania.; Avis, et al., (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms : Parenteral Medications Dekker, New York; Lieberman, et al., (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms : Tablets Dekker, New York; and Lieberman, et al., (eds.) (1990), Pharmaceutical Dosage Forms : Disperse Systems Dekker, New York.
본 발명의 양태에서, 용어 "염증 질환" 또는 "의학적 염증 질환"은 건선(예: 손톱 건선, 두피 건선, 플라크 건선, 고름물집 건선, 방울 건선, 역위 건선, 홍피성 건선 또는 건선 관절염), 강직척추염, 충수염, 소화궤양, 위궤양 및 십이지장 궤양, 복막염, 췌장염, 염증성창자병, 대장염, 궤양성 대장염, 거짓막 대장염, 급성 대장염, 허혈성 대장염, 곁주머니염, 후두덮개염, 이완불능증, 담관염, 담낭염, 복강질환, 간염, 크론병[예: 회결장염, 회장염, 위샘창자 크론병, 공회장염(jejunoileitis) 또는 크론(육아종) 결장염], 장염, 휘플병, 천식, 알레르기, 아나필락시스 쇼크, 면역 복합체 병, 기관 허혈, 재관류 손상, 기관 괴사, 건초열, 패혈증, 내독소 쇼크, 악액질, 고열증, 호산구성 육아종, 육아종증, 사코이드증, 패혈 유산, 부고환염, 질염, 전립샘염 및 요도염, 기관지염, 폐공기증, 비염, 낭성섬유증, 폐염, 성인 호흡곤란증후군, 진폐증, 폐포염, 기관지염, 인두염, 흉막염, 부비동염, 피부염, 아토피성 피부염, 피부근육염, 일광화상, 두드러기 사마귀, 사마귀, 협착증, 재협착증, 혈관염, 맥관염, 심내막염, 동맥염, 죽상경화증, 혈전정맥염, 심장막염, 심근염, 심근 허혈, 결절동맥주위염, 류마티스열, 수막염, 뇌염, 다발경화증, 신경염, 신경통, 포도막염(앞, 뒤, 중간 또는 광범위), 관절염 및 관절통, 골수염, 근막염, 페제트병, 통풍, 치주병, 류마티스 관절염(예: 여러관절-과정 소아 류마티스 관절염 또는 건선 관절염), 윤활막염, 중증근육무력증, 갑상샘염, 전신홍반루푸스, 굿파스처 증후군, 베체트 증후군, 동종이식거부 및 이식체 대 숙주병을 포함한다.
본 발명은 또한, 임의로 치료학적 유효량의 추가의 치료제와 함께 치료학적 유효량의 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, MCP1 다량체 또는 이의 융합체[예를 들면, 생체내 반감기를 연장시키는 잔기(예: PEG 또는 Ig)에 융합된] 또는 이의 약제학적 조성물(예를 들면, 약제학적으로 허용되는 담체 포함)을 대상체에게 투여함을 포함하여, 대상체에서 기생충, 바이러스 또는 세균 감염을 치료하거나 또는 예방하는 방법을 포함한다. 본 발명의 양태에서, 감염은 단순 헤르페스 바이러스 감염(예: HSV1 또는 HSV2), 사람 T 림프친화성 바이러스(HTLV; 예: 제I형) 감염, HIV 감염, HIV 당뇨병신경병증, 수막염, 간염(A, B 또는 C형 등), 패혈성 관절염, 복막염, 폐렴, 후두덮개염, 이. 콜라이 0157:h7, 용혈요독증후군, 혈전저혈소판혈증자색반병, 말라리아, 뎅기출혈열, 리슈만편모충증, 나병, 독성 쇼크 증후군, 연쇄구균 근육염, 가스괴저, 결핵균, 조류형결핵균 인트라셀룰라레(mycobacterium avium intracellulare), 폐포자충폐염, 골반염병, 고환염, 부고환염, 레기오넬라, 라임병, 인플루엔자 a, 엡슈타인-바르 바이러스(epstein-barr virus), 생-관련 식혈세포성 증후군(vital-associated hemaphagocytic syndrome), 바이러스성 뇌염 또는 무균수막염이다.
본 발명은 또한 임의로 치료학적 유효량의 추가의 치료제와 함께 치료학적 유효량의 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, MCP1 다량체 또는 이의 융합체[예를 들면, 생체내에서 반감기를 연장시키는 잔기(예: PEG 또는 Ig)에 융합된] 또는 이의 약제학적 조성물(예를 들면, 약제학적으로 허용되는 담체 포함)을 대상체에게 투여함으로써, 대상체에서 암 또는 악성종양(예: 유방암, 난소암, 위암, 자궁내막, 타액선, 폐, 신장, 결장, 결직장, 갑상샘, 췌장, 전립샘 또는 방광 암)을 치료하거나 또는 예방하는 방법을 포함한다.
본 발명은 또한 임의로 치료학적 유효량의 추가의 치료제와 함께 치료학적 유효량의 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, MCP1 다량체 또는 이의 융합체[예를 들면, 생체내에서 반감기를 연장시키는 잔기(예: PEG 또는 Ig)에 융합된] 또는 이의 약제학적 조성물(예를 들면, 약제학적으로 허용되는 담체 포함)을 대상체에게 투여함으로써, 대상체에서 특정의 심혈관 또는 순환계 질환을 치료하거나 또는 예방하는 방법을 포함한다. 본 발명의 양태에서, 질병 또는 질환은 심장 스턴 증후군(cardiac stun syndrome), 심근경색증, 울혈성심장기능상실, 뇌중풍, 허혈성 뇌중풍, 출혈, 동맥경화증, 죽상경화증, 재협착, 당뇨병성 동맥경화성 질병, 고혈압, 동맥 고혈압, 신장혈관고혈압, 실신, 쇼크, 심혈관계의 매독, 심장기능상실, 폐 심장, 원발성 폐고혈압증, 심장성 부정맥, 주기외심장박동, 심장 조동, 심방세동(지속적 또는 발작), 관류후 증후군, 심폐 바이패스 염증 반응, 무질서한 또는 다촛점성 동맥 빈맥(chaotic or multifocal atrial tachycardia), 규칙적인 협소 QRS 빈맥, 특수 부정맥, 심실세동, 히스 다발 부정맥(His bundle arrythmias), 방실차단, 다발갈래차단, 심근허혈성 질환, 심장동맥병, 협심증, 심근경색증, 심근병증, 확장형 울혈성 심근병증, 제한심장근육병증, 판막심장병, 심장내막염, 심장막 질병, 심장 종양, 대동맥 및 말초 동맥류, 대동맥박리, 대동맥의 염증, 복부 대동맥 및 이의 갈래의 폐색, 말초 혈관 질환, 폐쇄 동맥 질환, 말초 죽상경화성 질병, 폐쇄성 혈전혈관염, 기능성 말초 동맥 질환, 레이노드 현상(Raynaud's phenomenon) 및 질병, 말단청색증, 홍색사지통증, 정맥 질병, 정맥 혈전증, 정맥류성정맥, 동정맥루, 림프부종, 지방부종, 불안정협심증, 재관류 손상, 펌프후 증후군(post pump syndrome) 또는 허혈-재관류 손상이다.
케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 다량체 또는 융합체(예: MCP1-Ig)을 함유하는 약제학적 조성물은 통상의 약제학적으로 허용되는 부형제 및 첨가제 및 통상의 기술을 사용하여 제조할 수 있다. 이러한 약제학적으로 허용되는 부형제 및 첨가제는 무독성의 혼용성 섬유, 결합제, 붕해제, 완충제, 방부제, 항-산화제, 윤활제, 풍미제, 증점화제, 착색제, 유화제 등을 포함한다. 비경구(예: 피하, 정맥내, 복강내, 종양내 또는 근육내) 및 비-비경구(예: 경구, 경피, 비강내, 안구내, 설하, 흡입, 직장 및 국소)를 포함하나, 이에 한정되지 않는 모든 투여 경로가 고려된다.
주사제는 통상의 형태인, 액체 용액 또는 현탁액, 주사전 액체중 용액 또는 현탁액으로 적합한 고체형, 또는 유액으로서 제조할 수 있다. 주사제, 액제 및 유제는 또한 하나 이상의 부형제를 함유할 수 있다. 적합한 부형제는 예를 들면, 물, 염수, 덱스트로즈, 글리세롤 또는 에탄올이다. 또한, 경우에 따라, 투여할 약제학적 조성물은 또한 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 안정화제, 용해도 증진제, 및 예를 들면, 나트륨 아세테이트, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레이트 및 사이클로덱스트린과 같은 기타 이러한 제제와 같은 소량의 무독성 보조 물질을 함유할 수 있다.
비경구 제제에서 사용된 약제학적으로 허용되는 담체는 수성 비히클, 비수성 비히클, 항미생물제, 등장성 제제, 완충제, 항산화제, 국소 마취제, 현탁화 및 분산제, 유화제, 봉쇄제 또는 킬레이트제 및 기타 약제학적으로 허용되는 물질을 포함한다.
수성 비히클의 예는 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 등장성 덱스트로즈 주사액, 멸균수 주사액, 덱스트로즈 및 락테이트화된 링거 주사액을 포함한다. 비수성 비경구 비히클은 야채 기원의 고정 오일, 면화씨 오일, 옥수수 오일, 참께 오일 및 땅콩 오일을 포함한다. 정균 또는 정진균 농도의 항미생물 제제는 일반적으로 페놀 또는 크레졸, 수은제, 벤질 알코올, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-하이드록시벤조산 에스테르, 티메로살, 벤즈알코늄 클로라이드 및 벤즈에토늄 클로라이드를 포함하는 다-투여량 용기속에 포장된 비경구 제제에 가해진다. 등장성 제제는 염화나트륨 및 덱스트로즈를 포함한다. 완충제는 포스페이트 및 시트레이트를 포함한다. 항산화제는 나트륨 비설페이트를 포함한다. 국소 마취제는 프로카인 하이드로클로라이드를 포함한다. 현탁화제 및 분산화제는 나트륨 카복시메틸셀룰로즈, 하이드록시프로필 메틸셀룰로즈 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 유화제는 폴리소르베이트 80(TWEEN-80)을 포함한다. 금속 이온의 봉쇄제 또는 킬레이트제는 EDTA를 포함한다. 약제학적 담체는 또한 수혼화성 비히클용 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜; 및 pH 조절용 수산화나트륨, 염산, 시트르산 또는 락트산을 포함한다.
비경구 투여용 제제는 주사용 멸균 액제, 피하 정제를 포함하는, 사용직 전 용매와 합해지도록 된 동결건조된 산제와 같은 멸균 무수 가용성 생성물, 사용 직전 비히클과 합해지도록 된 멸균성의 무수 불용성 생성물 및 멸균 유제를 포함할 수 있다. 액제는 수성 또는 비수성일 수 있다.
일정 수준의 용량이 유지되도록 하는 서방출 또는 지연된 방출 시스템의 삽입 또한 본원에서 고려된다. 요약하면, 당해 양태에서, 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체(예: MCP1-Ig)가 고체 내부 매트릭스, 예를 들면, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리부틸메타크릴레이트, 가소화되거나 또는 가소화되지 않은 폴리비닐클로라이드, 가소화된 나일론, 가소화된 폴리에틸렌테레프탈레이트, 천연 고무, 폴리이소프렌, 폴리이소부틸렌, 폴리부타디엔, 폴리에틸렌, 에틸렌-비닐아테이트 공중합체, 실리콘 고무, 폴리디메틸실록산, 실리콘 카보네이트 공중합체, 아크릴산 및 메타크릴산의 에스테르의 하이드로겔과 같은 친수성 중합체, 가교-결합된 폴리비닐알코올 및 가교-결합된 부분 가수분해된 폴리비닐 아세테이트 속에 분산되어 있으며, 이러한 매트릭스는 체액속에서 불용성인 외부 중합체 막, 예를 들면, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 에틸렌/프로필렌 공중합체, 에틸렌/에틸 아크릴레이트 공중합체, 에틸렌/비닐아세테이트 공중합체, 실리콘 고무, 폴리디메틸 실록산, 네오프렌 고무, 염소화된 폴리에틸렌, 폴리비닐클로라이드, 비닐아세트와의 비닐 클로라이드 공중합체, 비닐리덴 클로라이드, 에틸렌 및 프로필렌, 이오노머 폴리에틸렌 테레프탈레이트, 부틸 고무 에피클로로하이드린 고무, 에틸렌/비닐 알코올 공중합체, 에틸렌/비닐 아세테이트/비닐 알코올 테르중합체, 및 에틸렌/비닐옥시에탄올 공중합체로 둘러싸여져 있다. 활성 성분은 방출 속도 조절 단계로 외부 중합체 막을 통해 확산한다. 이러한 비경구 조성물속에 함유된 활성 화합물의 퍼센트는 이의 특정 성질, 및 케모킨, 이의 다량체 및 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체, 및 대상체의 요구도에 크게 의존한다.
케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체의 농도를 조절하여 주사가 목적한 약리학적 효과를 생성하기에 효과적인 양을 제공하도록 할 수 있다. 정확한 투여량은 특히, 당해 분야에 공지된 바와 같이 환자 또는 동물의 연령, 체중 및 상태에 의존한다.
케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체를 포함하는 단위-투여량 비경구 제제는 앰플, 바이알 또는 침이 있는 주사기내로 포장된다. 모든 비경구 투여용 제제는 당해 분야에 알려지고 실시되는 바와 같이 멸균되어야 한다. 이러한 제제는 본 발명의 일부를 형성한다.
케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체는 동결건조된 분말로 제형화될 수 있으며, 이는 액체, 유제 및 기타 혼합물로서 투여하기 위해 재구성될 수 있다. 산제는 또한 고체 또는 겔로서 재구성되어 제형화될 수 있다.
멸균의 동결건조된 산제는 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 유도체를 적합한 용매속에 용해하여 제조한다. 용매는 산제로부터 제조된 분말 또는 재구성된 용액의 다른 약리학적 성분 또는 안정성을 개선시키는 부형제를 함유할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는 덱스트로즈, 소르비톨, 프럭토즈, 옥수수 시럽, 크실리톨, 글리세린, 글루코즈, 슈크로즈 또는 기타 적합한 제제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 하나의 양태로서, 용매는 또한 약 중성 pH인 시트레이트, 나트륨 또는 칼륨 포스페이트, 또는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 완충제를 함유할 수 있다. 용액의 후속적인 멸균 여과에 이은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 표준 조건하에서의 동결건조로 바람직한 제형이 제공된다. 하나의 양태에서, 수득되는 용액은 동결건조용 바이알내로 분배될 것이다. 각각의 바이알은 케모킨, 이의 다량체 및 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체의 단일 용량 또는 다수 용량을 함유할 수 있다. 동결건조된 분말은 약 4℃ 내지 실온과 같은 적절한 조건하에서 저장될 수 있다.
주사용 수를 사용한 이러한 동결건조된 분말의 재구성으로 비경구 투여에 사용하기 위한 제형이 제공된다. 재구성을 위해, 동결건조된 분말을 멸균 수 또는 다른 적합한 담체에 가할 수 있다. 정확한 양은 선택된 화합물에 따른다. 이러한 양은 실험적으로 결정될 수 있다.
흡입에 의한 투여는 예를 들면, 소르비탄 트리올레이트 또는 올레산을 함유하는 에어로졸을, 예를 들면 트리클로로플루오로메탄, 디클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄 또는 특정의 다른 생물학적으로 혼용성인 추진제 가스와 함께 사용하여 제공할 수 있으며; 케모킨, 이의 다량체 및 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체를 자체로 또는 분말형의 부형제와 함께 함유하는 시스템을 사용할 수 있다.
하나의 양태에서, 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체는 경구 투여용의 고체 용량형내로, 하나의 양태에서, 캅셀 또는 정제내로 제형화된다. 정제, 환제, 캅셀제, 트로키제 등은 하나 이상의 하기 성분들, 또는 유사한 특성의 화합물: 결합제; 윤활제; 희석제; 활주제; 붕해제; 착색제; 감미제; 풍미제; 습윤제; 구토 피복제; 및 필름 피복제를 함유할 수 있다. 결합제의 예는 미세결정성 셀룰로즈, 검 트라가칸트, 글루코즈 용액, 아카시아 무실라지(mucilage), 젤라틴 용액, 몰라쎄스(molasses), 폴리비닐피롤리돈, 포비돈, 크로스포비돈, 슈크로즈 및 전분 페이스트를 포함한다. 윤활제는 활석, 전분, 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트, 라이코포듐(lycopodium) 및 스테아르산을 포함한다. 희석제는 예를 들면, 락토즈, 슈크로즈, 전분, 카올린, 염, 만니톨 및 이칼슘 포스페이트를 포함한다. 활주제는 콜로이드성 이산화규소를 포함하나, 이에 한정되지는 않는다. 붕해제는 크로스카멜로즈 나트륨, 나트륨 전분 글리콜레이트, 알긴산, 옥수수 전분, 감자 전분, 벤토나이트, 메틸셀룰로즈, 아가 및 카복시메틸셀룰로즈를 포함한다. 착색제는 예를 들면, 특정의 승인된 품질의 수용성 FD 및 C 염료, 이의 혼합물; 및 알루미나 수화물상에 현탁된 수 불용성 FD 및 C 염료를 포함한다. 감미제는 슈크로즈, 락토즈, 만니톨 및 사카린과 같은 인공 감미제, 및 특정한 수의 분무 건조된 풍미를 포함한다. 풍미제는 과일과 같은 식물로부터 추출된 천연 풍미 및 페퍼민트 및 메틸 살리실레이트와 같은, 그러나 이에 한정되지 않는 즐거운 느낌을 생성하는 화합물의 합성 배합물을 포함한다. 습윤제는 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 소르비탄 모노올레이트, 디에틸렌 글리콜 모노라우레이트 및 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르를 포함한다. 구토성-피복제는 지방산, 지방, 왁스, 쉘락, 암모니아성 쉘락 및 셀룰로즈 아세테이트 프탈레이트를 포함한다. 필름 피복제는 하이드록시에틸셀룰로즈, 나트륨 카복시메틸셀룰로즈, 폴리에틸렌 글리콜 4000 및 셀룰로즈 아세테이트 프탈레이트를 포함한다.
본 발명의 영역은 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체, 또는 이의 약제학적 조성물을 예를 들면, 하나 이상의 추가의 치료제 및 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체와 함께 추가의 치료제를 포함하는 조성물과 함께 투여함을 포함하는 방법을 포함한다. 하나의 양태에서, 다른 치료제는, 대상체에게 투여되는 경우, 대상체에서 염증 상태를 치료하거나 또는 예방하는 제제이다. 이러한 특정 제제의 투여 및 용량은 문헌[참조: Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference, 57th Ed); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002]에서 승인된 제제의 제품 정보 용지에 나열된 계획표에 따라서와 같이, 및 당해 분야에 잘 공지된 치료학적 프로토콜과 같이 통상적이다.
용어 "와 함께"는 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체 및 추가의 치료제를 동시 전달용의 단일 조성물로 제형화하거나 또는 2개 이상의 조성물(예: 키트)내로 별도로 제형화할 수 있음을 나타낸다. 또한, 각각의 성분은 대상체에게, 다른 성분을 투여하는 경우, 예를 들면, 각각의 투여가 동시가 아니도록(예를 들면, 별도로 또는 연속적으로) 수회 간격으로 제공된 시간에 걸쳐 투여되는 경우보다 상이한 시간으로 투여될 수 있다. 또한, 별개의 성분들은 대상체에게 동일하거나 또는 상이한 경로(예: 경구, 정맥내, 피하내)로 투여될 수 있다.
"추가의 치료제"는 대상체에게 투여되는 경우, 주어진 의학 상태(예: 염증 질환)와 관련된 증상의 진행 또는 중증도의 예방, 차단 또는 감소와 같은 바람직하거나 또는 유익한 치료 효과를 가져오는 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체 이외의 특정 제제이다. 추가의 치료제는 예를 들면, 소염제 또는 통증 완화제일 수 있다.
케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체와 함께 투여되거나 또는 결합될 수 있는 추가의 치료제는 하나 이상의 비-스테로이드성 소염 약물(NSAID), 예를 들면, 아스피린, 디클로페낙, 디플루니살, 에토돌락, 페노프로펜, 플록타페닌, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 케토프로펜, 케토롤락, 메클로페나메이트, 메페남산, 멜록시캄, 나부메톤, 나프록센, 옥사프로진, 페닐부타존, 피록시캄, 살살레이트, 술린닥, 테녹시캄, 티아프로펜산 또는 톨메틴을 포함한다.
케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체와 함께 투여되거나 또는 합해질 수 있는 추가의 치료제는 하나 이상의 국소 의약, 예를 들면, 안트랄린, 칼시포트리엔, 살리사이클산, 코울 타르(coal tar), 타자로텐, 국소 스테로이드(예: 클로베타솔 프로피오네이트; 클로베타솔 프로피오네이트; 베타메타손 디프로피오네이트; 클로베타솔 프로피오네이트; 디플로라손 디아세테이트; 클로베타솔 프로피오네이트; 할로베타솔 프로피오네이트; 암시노나이드; 베타메타손 디프로피오네이트; 베타메타손 디프로피오네이트; 모메타손 푸로에이트; 디플로라손 디아세테이트; 할시노나이드; 플루옥시노나이드; 디플로라손 디아세테이트; 베타메타손 디프로피오네이트; 디플로라손 디아세테이트; 데속시메타손; 데속시메타손; 트리암시놀론 아세토나이드; 플루티카손 프로피오네이트; 암시노나이드; 베타메타손 디프로피오네이트; 디플로라손 디아세테이트; 플루옥시노나이드; 베타메타손 발러레이트; 디플로라손 디아세테이트; 베타메타손 디프로피오네이트; 데속시메타손; 베타메타손 발러레이트; 트리암시놀론 아세토나이드; 플루란드레놀라이드; 플루옥시놀론 아세토나이드; 모메타손 푸로에이트; 트리암시놀론 아세토나이드; 플루옥시놀론 아세토나이드; 베타메타손 벤조에이트; 하이드로코르티손 발러레이트; 플루란드레놀라이드; 플루티카손 프로피오네이트; 프레드니카르바이트; 데소나이드; 베타메타손 디프로피오네이트; 트리암시놀론 아세토나이드; 하이드로코르티손; 플루옥시놀론 아세토나이드; 베타메타손 벤조에이트; 베타메타손 발러레이트; 하이드로코르티손 발러레이트; 알클로메타손 디프로피오네이트; 데소나이드; 플루옥시놀론 아세토나이드; 데소나이드; 베타메타손 발러레이트; 또는 하이드로코르티손, 덱사메타손, 메틸프레드리솔론 및 프레드니솔론의 혼합물, 석유 젤리, 알로에 베라, 오일처리된 오트밀, 엡솜 염(epsom salts) 또는 사해 염을 포함한다.
투여되거나 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체와 함께 합해질 수 있는 추가의 치료제는 하나 이상의 알레팍셉트, 에타네르셉트, 사이클로스포린, 메토트렉세이트, 악시트레틴, 이소트레티노인, 하이드록시우레아, 마이코페놀레이트 모페틸, 설파살라진 또는 6-티오구아닌을 포함한다.
케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체와 함께 투여되거나 또는 합해질 수 있는 추가의 치료제는 하나 이상의 아나킨라, 주사가능한 금, 페니실라민, 아자티오프린, 클로로퀸, 하이드록시클로로퀸, 설파살라진 또는 경구 금(예: 아우라노핀, 금 나트륨 티오말레에이트 또는 아우로티오글루코즈)를 포함한다.
케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체와 함께 투여되거나 또는 합해질 수 있는 추가의 치료제는 하나 이상의 메살라민, 설파살라진, 부데소나이드, 메트로니다졸, 시프로플록사신, 아자티오프린, 6-머캅토퓨린 또는 칼슘, 엽산 또는 비타민 B12의 식이 보충물을 포함한다.
케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체와 함께 투여되거나 또는 합해질 수 있는 추가의 치료제는 셀레콕시브((Celebrex®), 로페콕시브(Vioxx®), 발데콕시브(Bextra®), 루미라콕시브(PrexigeTM) 또는 에토리콕시브(Arcoxia®)와 같은 하나 이상의 COX2 억제제를 포함한다.
케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체와 함께 투여되거나 또는 합해질 수 있는 추가의 치료제는 에팔리주마브(Raptiva®), 아달리무마브(Humira®), 인플릭시마브(Remicade®) 또는 ABX-IL8과 같은 하나 이상의 항체를 포함한다.
본 발명의 양태에서, 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체는 대상체에게, 특히 대상체가 건선으로 고생하는 경우, 광치료요법과 함께 투여된다. 이러한 양태에서, 대상체는 태양광, UVB 광, PUVA(소랄렌과 자외선 A), PUVA(소랄렌-UVA) 또는 레이저 광에 노출된다. PUVA는 건선을 치료하기 위해 자외선 A 광을, 피부가 광에 대해 보다 민감하도록 하게 하는 경구 또는 국소 의약인 소랄렌과 함께 사용한다. 레이저는 건선 피부에 주로 영향을 미치는 광의 고도로 집중된 광선을 방사하나, 건강한 피부는 현저히 노출되지 않는다. 레이저의 한가지 유형인, XTRAC 엑시머 레이저는 고도로 집중된 자외선 B 광선을 사용한다. 건선에 사용된 다른 유형의 레이저는 펄싱된 염료 레이저이며, 이는 UVB 또는 XTRAC에서 사용된 자외선과는 상이한 황색광의 펄스를 사용하여 건선의 반(patch)내에서 성장하는 일부 혈액 세포를 파괴한다. 펄싱된 염료 레이저를 사용한 치료는 일반적으로 수개월 소요되며, 매 3주로 지정된다.
용량 및 투여
본 발명의 조성물의 치료학적 투여를 위한 대표적인 프로토콜은 당해 분야에 잘 알려져 있다. 본 발명의 약제학적 조성물은 예를 들면, 비경구(예: 피하 주사, 근육내 주사, 정맥내 주사) 또는 비-비경구 경로(예: 경구, 비강)에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 환제 및 캅셀제는 경구 투여될 수 있다. 주사가능한 조성물은 당해 분야에 공지된 의약 장치를 사용하여, 예를 들면, 피부밑 침을 사용한 주사에 의해 투여할 수 있다.
본 발명의 주사가능한 약제학적 조성물은 또한 미국 특허 제5,399,163호; 제5,383,851호; 제5,312,335호; 제5,064,413호; 제4,941,880호; 제4,790,824호 또는 제4,596,556호에 기술된 장치와 같은, 침이없는 피부밑 주사 장치를 사용하여 투여할 수 있다.
하나의 양태에서, 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체와 함께 투여된 "추가의 치료제"(예: 소염제)의 1일 투여량은, 경우에 따라 문헌[참조: Physicians' Desk Reference 2003 (Physicians' Desk Reference. 57th Ed); Medical Economics Company; ISBN: 1563634457; 57th edition (November 2002)]에 따라 투여된다. 그러나, 적절한 용량은 임상의에 의해 변경되어 예를 들면, 투여되는 화합물, 또는 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체(예: MCP1-Ig)의 효능, 부작용, 연령, 체중, 의학 상태, 전체적인 건강 및 반응에 따라 치료요법을 제공받는 대상체의 특정 특성을 보충할 수 있다.
본 발명은 대상체에게 치료학적 유효량의 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체를, 임의로 치료학적 유효량의 추가의 치료제와 함께 투여함으로써 대상체에서 염증 상태를 치료 또는 예방하는 방법을 제공한다. 용어 "치료학적 유효량"은, 예를 들면, 대상체에서 질환의 예방을 포함한 특정 정도로의 표적 의학 질환 또는 이의 특정 증상의 완화, 회복, 근절 또는 정지 또는 지연을 포함하는, 투여자(예를 들면, 조사자, 의사 또는 수의사)에 의해 고려되는 조직, 시스템, 대상체 또는 숙주의 생물학적 또는 의학 반응을 유발할 치료제 또는 물질(예: MCP1-Ig)의 양을 의미한다. 본 발명의 양태에서, 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체(예: MCP1-Ig; 예를 들면, 서열 8, 9, 10, 11 또는 12의 특정 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드)의 치료학적 유효량 또는 용량은 1일 1회, 2일마다, 4일마다 또는 5일마다 또는 1주에 1회로 약 0.1mpk(체중 kg당 mg) 내지 약 10mpk(예를 들면, 0.25, 0.5, 0.75, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10mpk)이다.
본 발명의 조성물은 예를 들면, 하루에 3회, 하루에 2회, 하루에 1회, 주마다 3회, 주마다 2회 또는 주마다 1회, 매 2주마다 또는 3, 4, 5, 6, 7 또는 8주마다 1회 투여할 수 있다. 또한, 조성물은 단기간 또는 장기간(예: 1주, 1개월, 1년, 5년)에 걸쳐 투여할 수 있다.
용량 섭생은 최적의 바람직한 반응(예: 치료학적 반응)을 제공하기 위해 조절할 수 있다. 예를 들면, 투여량은 치료학적 상황의 위급성에 의해 지시되는 바와 같이 감소되거나 또는 증가할 수 있다. 예를 들어, 용량은 약물 효능, 질병의 진행 또는 내성 또는 이의 어떠한 증상, 또는 환자의 연령, 체중, 신장, 과거 병력, 현 의약, 및 교차 반응, 알레르기, 민감도 및 부작용에 대한 가능성에 따라 당해 분야의 숙련가에 의해 조절될 수 있다.
당해 분야의 통상의 지식을 가진 의사 또는 수의사는 요구되는 약제학적 조성물의 유효량을 용이하게 측정하여 처방할 수 있다. 예를 들면, 의사 또는 수의사는 케모킨, 이의 다량체 또는 융합체, 예를 들면, MCP1, 이의 융합체 또는 다량체, 또는 이의 약제학적 조성물의 투여량을 목적한 치료 효과를 달성하는데 요구되는 것보다 낮은 수준에서 시작하여 목적하는 효과가 달성될 때까지 용량을 서서히 증가시킬 수 있다.
예를 들면, 건선 진행은, 의사 또는 수의사가 각종 방법으로 모니터링할 수 있으며, 투여량 섭생은 상응하게 변경시킬 수 있다. 건선을 모니터하는 방법은 예를 들면, 피부 생검에 의한 방법, 또는 피부 조각(patch)의 스크랩핑(scraping) 또는 배양, 대상체 피부상에서 상태 확산의 모티터링에 의한 방법, 또는 관절 통증이 존재하고 지속되는 경우 건선 관절염을 점검하기 위한 X-선에 의한 방법을 포함한다.
예를 들면, 류마티스 관절염 진행은, 의사 또는 수의사에 의해, 각종 방법으로 모니터링할 수 있으며, 투여량 섭생은 상응하게 변경시킬 수 있다. 류마티스 관절염을 모니터링하는 방법은 예를 들면, 관절 X-선, 류마티스관절염 인자 혈액 시험, 상승된 적혈구 침강 속도(ESR), 낮은 적혈구용적율(빈혈) 또는 비정상적인 혈소판 수를 점검하기 위한 완전한 혈액 계수, C-반응성 단백질을 점검하기 위한 혈액 시험 또는 윤활액 분석을 포함한다.
예를 들면, 크론병 진행은, 의사 또는 수의사가 각종 방법으로 모니터링할 수 있으며, 투여량 섭생은 상응하게 변경될 수 있다. 크론병을 모니터링하는 방법은 예를 들면, 대상체 또는 환자에 의해 보고된 증상의 중증도의 모니터링, 구불창자내시경 검사, 대장내시경 검사, ERCP(내시경 역행 쓸개이자조형술), 내시경 초음파, 캡슐 내시경(capsule endoscopy), 단순 X-선, 조영제를 사용한 X-선, CT 스캔 또는 백혈구 세포 스캔을 포함한다.
예를 들면, 포도막염 진행은, 의사 또는 수의사가 각종 방법으로 모티터링할 수 있으며, 투여량 섭생은 상응하게 변경될 수 있다. 포도막염을 모니터링하는 방법은 예를 들면, 틈새등 현미경 및 검안경검사를 사용한 눈의 시험, 시력 측정 및 안내압 측정을 포함한다.
예를 들면, 궤양 대장염 진행은, 의사 또는 수의사가 각종 방법으로 모니터링할 수 있으며, 투여량 섭생은 상응하게 변경될 수 있다. 궤양 대장염을 모니터링하는 방법은 예를 들면, 통상의 체크-업, 대장내시경 검사, 직장 또는 결장 생검, 혈액 또는 고름에 대한 대변 검사, 백혈구 수준을 시험하기 위한 혈액 검사 또는 X-선 시험을 포함한다.
하기 실시예는 본 발명을 더욱 명확하게 기술하기 위해 제공된 것이며 본 발명의 영역을 한정하는 것으로 고려되어서는 안된다. 실시예 단락에서 기재된 특정의 방법 또는 조성물은 본 발명의 일부를 구성한다.
실시예 1: 사람 MCP1-마우스 Ig 중쇄 γ1(힌지-CH2-CH3) 융합체의 설계, 작제, 발현 및 정제
작제물의 설계
hMCP1 - mIg(NH2-사람 MCP1-마우스 Ig 중쇄 γ1(힌지-CH2-CH3)-COOH): BamH1 부위를 cDNA내 링커로서 도입시켜 디펩타이드의 삽입물인, Gly-Ser를 MCP1 및 Ig H 쇄의 연결부에서 생성시켰다. 당해 생성물은, 분자량이 68,993으로 예측되는 이량체를 형성하는 것으로 예측되었다.
hMCP1 - hIgG4(NH2-사람 MCP1-사람 Ig H 쇄 γ4(힌지-CH2-CH3)-COOH): BamH1 부위를 cDNA내에 링커로서 도입시켜 디펩타이드의 삽입물인, Gly-Ser를 MCP1 및 Ig H 쇄의 연결부에서 생성시켰다. 당해 생성물은, 분자량이 69,146으로 예측되는 이량체를 형성하는 것으로 예측되었다.
hMCP1 - hIgG4 단량체성 변이체(NH2-사람 MCP1-사람 Ig 중쇄 γ4( 힌지-CH2-CH3)-COOH): 2개의 시스테인 잔기를 세린 잔기로 대체하여 분자내 디설파이트 결합을 제거하였다. BamH1 부위를 링커로서 cDNA내에 도입시켜 디펩타이드의 삽입물인, Gly-Ser을 MCP1 및 Ig H 쇄의 연결부에 도입시켰다. 생성물은, 분자량이 34,543으로 예측되는 이량체를 형성하는 것으로 예측되었다.
hMCP1 - hIgG1(NH2-사람 MCP1-사람 Ig H 쇄 γ1(힌지-CH2-CH3)-COOH): BamH1 부위를 링커로서 cDNA내로 도입시켜 디펩타이드의 삽입물인, Gly-Ser을 MCP1 및 Ig H 쇄의 연결부에 생성시켰다. 생성물은, 분자량이 70,000으로 예측된 이량체를 형성하는 것으로 예측되었다.
hMCP1 - hIgG1 단량체성 변이체(NH2-사람 MCP1-사람 Ig 중쇄γ1(힌지-CH2-CH3)-COOH): 3개의 시스테인 잔기를 세린 잔기로 대체시켜 분자내 디설파이드 결합을 제거하였다. BamH1 부위를 링커로서 cDNA내에 도입시켜, 디펩타이드의 삽입물, Gly-Ser을 MCP1 및 Ig H 쇄의 연결부에 도입시켰다. 당해 생성물은, 분자량이 34,955로 예측되는 이량체를 형성하는 것으로 예측되었다.
발현 및 정제. 당해 실시예에서, MCP1-Ig는 포유동물 세포에서 발현되어, 분비된 후 세포 성장 배지로부터 분리되었다. 분리된 단백질은 SDS-PAGE 분석으로 분석하였다.
사람 MCP1의 cDNA(참조: 진뱅크 수탁 번호 제NM_002982호) 및 마우스 Ig의 고정 영역으로부터 기원한 부분 cDNA(참조: 진뱅크 수탁 번호 제BC057688호)(힌지, CH2, 및 CH3 영역에 대한 암호화 서열 포함)를 역-전사 폴리머라제 쇄 반응(RT-PCR)로 클로닝하였다. MCP1-Ig cDNA를 포유동물 발현 벡터 pCDNA3.1(+)[캘리포니아주 칼스바드 소재의 인비트로겐(Invitrogen) 제조원]내로 Hind3-Not1 단편으로서 표분 분자 생물학 과정에 의해 클로닝시켜 pcDNA3.1(+)hMCP1 mIgG 플라스미드를 생성시켰다.
CHO-K1(ATCC 수탁번호 제CRL-9618호) 세포를 5% 태 송아지 혈청이 보충된 D-MEM/F-12 배지(캘리포니아주 칼스바드 소재의 인비트로겐 제조원) 속에 유지시켰다. 플라스미드 DNA를 CHO-K1 세포내로 리포펙타민(Lipofectamine) 2000 형질감염 키트(캘리포니아주 칼스바드 소재의 인비트로겐 제조원)를 사용하여 제조업자가 제시한 프로토콜에 따라 도입시켰다. 형질감염후 48시간 째에, G418(인비트로겐 제조원)을 배양물에 1 mg/ml에서 안정하게 형질감염된 세포의 선별을 위해 가하였다. G418 내성 세포는 형질감염후 약 10 내지 14일째에 콜로니로서 나타났다. 이후에, 세포를 혼주시키고 제한된 희석에 의해 웰당 3개 세포, 웰당 1개 세포 및 웰당 0.3개 세포의 빈도로 96-웰 조직 배양 플레이트내로 제한 희석시켜 형질감염시켰다. 단일 세포-기원한 콜로니는 약 7 내지 10일 째에 나타나며, 조건화된 배지는 마우스 IgG1 [텍사스주 몬트고머리 소재의 베틸(Bethyl) 제조원]에 대해 특이적인 효소-결합된 면역흡착 검정(ELISA)으로 시험하였다. 최대 역가를 제공하는 콜로니를 세포 수에 대한 수율로 표준화함으로써 발현 수준에 대해 재-시험하였다. 리터당 40mg 이상을 생성하는 콜로니를 생산용으로 선택하였다(클론 52).
hMCP1-mIg 단백질의 생산은 혈청-유리된 조건하에서 수행하였다. 클론 52 세포를 IS-CHO V 기본 배지[캘리포니아주 이르빈 소재의 이르빈 사이언티픽(Irvine Scientific) 제조원]로 이루어진 단백질-유리된 배지의 현탁 배양물내로 단계적으로 이전시켰다. 각각의 리터의 단백질-유리된 배지는 8 mM의 글루타민(메사츄세츠주 게이더스부르그 소재의 인비트로겐 제조원), 10 ml의 100X HT(인비트로겐 제조원), 1 ml의 CD-액체(인비트로겐 제조원), 8 ml의 45% 글루코즈[미쥬리주 세인트 루이스 소재의 시그마(Sigma) 제조원], 20 ml의 GSEM(시그마 제조원), 1 ml 각각의 미량 성분 A 및 미량 성분 B[버지니아주 헤른돈 소재의 셀그로(Cellgro) 제조원]를 함유한다. 생산을 위해, 세포를 3-리터의 진탕기 플라스크내 1 리터의 용적속에 ml당 0.5 x 106 의 밀도로 씨딩하였다. 플라스크를 75 rpm의 속도로 37℃의 일정 온도에서 7.5% CO2의 존재하에 진탕시켰다. 글루타민의 농도를 리터당 약 300mg으로 유지시키고, 글루코즈의 농도를 리터당 1 내지 2g에서 유지시켰다. 조건화된 배지를, 세포 생존성이 약 20%인 경우 약 14일째에 수거하였다. 조건화된 배지를 2-마이크론 여과 단위를 통해 여과한 후 아피-겔 단백질-A-친화성 컬럼[캘리포니아주 헤르쿨레스 소재의 바이오라드(BioRad) 제조원]을 통해 제조업자의 제안된 프로토콜에 따라 여과하였다. 정제된 단백질은 SDS-폴리아크릴아미드 겔 전기영동(SDS-PAGE)에 의해 환원 조건하에서 분석하였다. 단일 결합은, 겔이 심플리블루 세이프스타인(SimplyBlue SafeStain)(인비트로겐 제조원)에 의해 염색한 후 관측하였으며, 예측된 크기는 약 34 킬로달톤이었다. 생성물의 순도는 99% 초과로 예측되었다.
실시예 2: 세포 이주 검정
당해 실험에서, 사람 MCP1-mIg의 존재는 재조합 사람 MCP1 구배에 대해 이주하기 위한 THP-1 사람 단핵구 세포의 능력을 방해하기 위해 입증되었다.
THP-1 세포 (ATCC 수탁 번호 제TIB202호)를 10% 태 송아지 혈청, 1 mM 나트륨 피루베이트, 4.5 g/리터의 글루코즈, 1.5 g/l의 중탄산나트륨, 10 mM HEPES, 0.05 mM 베타-머캅토에탄올, 및 페니실린/스트렙토마이신이 보충된 RPMI 1640 속에 유지시켰다. 세포 이주 검정은 제조업자의 지시에 따라 5㎛ 여과기[매릴랜드주 게더스부르그 소재의 뉴로프로브(NeuroProbe) 제조원]가 장착된 96-웰 케모티엑스(ChemoTx) 마이크로플레이트를 사용하여 수행하였다. 재조합 사람 MCP1 (rhMCP1)[미네소타주 미네아폴리스 소재의 알 앤드 디 시스템스(R & D Systems) 제조원]을 바닥 챔버속에 두었다. hMCP1-mIg 또는 동형 대조군 IgG를 챔버 상단 및 바닥 둘다에 두었다. 세포를 상단 웰내에 분배하였다. 마이크로플레이트를 37℃ 의 습도처리된 CO2 (5%) 인큐베이터 속에 2시간 동안 두어 세포가 바닥 챔버속에서 사람 MCP1을 향해 이주하도록 하였다. 세포 이주를 제조업자의 지시에 따라 세포역가-글로 루미니센트 세포 생존성 검정 키트(CellTiter-Glo Luminiscent Cell Viability Assay Kit)[위스콘신주 매디슨 소재의 프로메가(Promega) 제조원]에 의해 상대적인 발광 단위(RLU)로 적량하였다. 세포 이주는 케모킨 시약의 존재하에 이주의 RLU로부터 자발적인 이주의 RLU를 감하여 계산하였다. 상대적인 이주%는 세포 이주의 최대 수를 100%로 하여 계산하였다.
hMCP1-mIg 및 rhMCP1에 대한 대략적인 EC50 값은 각각 약 0.5 nM 및 0.05 nM이었다(표 1, 좌측 및 중간 컬럼). 3 nM에서 hMCP1-mIg은 rhMCP1의 구배를 향해 이주하는 THP-1 세포의 능력의 현저한 감소를 유발한다(표 1, 우측 컬럼).
THP-1 사람 단핵구 세포의 이주에 있어서 hMCP1-mIg 및 재조합 사람 MCP1(rhMCP1)의 효과
상대적인 세포 이주%
농도(nM) hMCP1-mIg 단독 rhMCP1 단독 3nM에서 rhMCP1 + hMCP1-mIg
0.01 8.3 41 -3
0.03 14.2 49.2 5.8
0.1 29.8 59.4 8.7
0.3 30.0 72.0 -0.2
1 59.0 90.5 7.6
3 81.2 100 34.1
10 73.0 58.6 35.5
30 96.6 24.8 3.5
100 75.5 -18.3 -10.7
실시예 3: 콜라겐-유도된 관절염 검정
12 내지 13주생의 수컷 B10.RIII 마우스를 소 제II형 콜라겐(BCII)[미주리주 오웬스빌 소재의 엘라스틴 프로덕츠(Elastin Products) 제조원], 디프코 불완전 프루언드 항원보강제(Difco incomplete Freunds adjuvant) 및 마이코박테리아 투베르쿨로시스(Mycobacteria tuberculosis)[MBT, 균주 H37RA, 미주리주 세인트 루이스 소재의 시그마(Sigma) 제조원]로 면역화시켰다. BCII을 4℃에서 0.01 M 아세트산(25 ml의 0.01 M 아세트산중 60 mg BCII) 속에서 밤새 용해하였다. 완전 프루언드 항원보강제(CFA)는 엠. 투베르쿨로시스와 디프코 불완전 프루언드 항원보강제(1mg/ml)를 혼합하여 제조하였다. 이후에, 1 용적의 BCII 및 1 용적의 CFA를 혼합하여 유화시켰다. 유액은 1200 ㎍/ml BCII 및 0.5 mg /ml 엠. 투베르쿨로시스를 함유하였다.
마우스를 꼬리의 기저부에서 1 부위를 포함하여 등에 5개 부위에서 피내 주사로 면역화시켰다. 각각의 마우스에게 300 ㎍ BCII/마우스와 동등한, 총 용적 0.25ml의 유액을 제공하였다.
마우스를 면역화한지 16일째에 관절염의 증상 및 중증도에 대해 기록하고 그룹을 투여량에 대해 15개로 나눔으로써 각각의 그룹이 동일한 수의 관절염을 지닌 마우스를 포함하도록 하였다. 점수는 다음과 같은 0 내지 4의 규모를 기초로 한다:
0 = 정상
1 = 발적
2 = 하나 이상의 발가락 팽윤
3 = 전체 발 팽윤
4 = 관절 굳음
점수를 추가접종(boost) 전 4일째 및 0, 2, 4, 5 및 9일째에 취하였다. 팽윤을 또한 캘리퍼 측정(caliper measurement)으로 이들 날짜에 평가하였다.
면역화를 또한 추가접종하였다: BCII을 0.01 M 아세트산(25 ml의 0.01M 아세트산중 12.5 mg BCII) 속에서 밤새 용해하였다. 마우스에 100㎍ BCII/0.2 ml/마우스를 사용하여 복강내로 면역화후 20일째(추가접총을 기준으로 0일째)에 추가접종하였다.
hMCP1-mIg(서열 8) 및 mIgG1[TC31-27F11, 캘리포니아주 팔로 알토 소재의 에스피-바이오파마(SP-BioPharma) 제조원]을 포스페이트 완충된 염수 속에서 2 mg/ml로 제조하고 나타낸 싯점에서 마우스에게 복강내 투여하였다. 제1 투여량은 체중 kg당 20mg(mpk)로 제공되었다. 후속적인 투여량은 10 mpk이었다.
혈청 샘플을 항-콜라겐 항체(IgG2a)의 측정을 위해 종결시 취하였다.
보호 효과를 표 2의 평균 질병 점수 및 표 3의 뒷발 팽윤 값에 의해 나타낸 바와 같이 hMCP1-mIg-처리된 마우스의 그룹에서 관측하였다.
항-콜라겐 IgG2a의 혈장 수준을 ELISA로 측정하였다. 플레이트를 ELISA 등급 제II형 소 콜라겐[워싱톤주 레드몬드 소재의 콘드렉스(Chondrex) 제조원]으로 ml당 50㎕에서 4℃로 밤새 피복하였다. 플레이트를 PBS로 세척한 후 1% BSA로 4℃에서 밤새 차단하였다. 약간의 세척 후, 샘플을 1:10,000에서 희석시키고 플레이트를 ml당 40pg에서 출발하여 2배의 일련 희석의 표준물[매사츄세츠주 스왐프스코트 소재의 유에스 바이올로지칼스(US Biologicals) 제조원]을 따라 플레이트에 적용시켰다. 플레이트를 4℃에서 밤새 항온처리하였다. 100㎕의 퍼옥시다제-접합된 항-IgG[매사츄세츠주 캠브릿지 소재의 아브캄(Abcam) 제조원](1:500으로 희석됨)을 웰에 가하고 실온에서 2시간 동안 항온처리하였다. 플레이트를 세척하고 100㎕의 TMB(시그마 제조원)을 웰에 가하였다. 플레이트는 490 nM에서 판독하였다.
hMCP1-mIg 처리된 동물에서, 항-콜라겐 IgG2a 항체의 수준은 동형 대조군(mIgG1)-처리된 동물의 수준과 비교하여 억제되었다(표 4).
마우스에서 콜라겐 관절염의 관절염 점수(평균 ± SEM)
점수
-4일째 0일째 2일째 4일째 7일째 9일째
정상 0 0 0 0 0 0
동형 대조군(mIgG1) 0 0.6±0.3 2.4±0.7 3.1±0.7 5.2±0.8 5.2±0.8
hMCP1-mIg 0 0.1±0.1 0.8±0.3* 1.1±0.4* 2.7±0.5* 3.5±0.7
*는 p < 0.05를 나타낸다
마우스에서 콜라겐 관절염의 발 팽윤(평균 ± SEM)
발 팽윤(mm)
처리일 -4일째 0일째 2일째 4일째 7일째 9일째
정상 1.80±0.00 1.80±0.00 1.80±0.00 1.82±0.01 1.83±0.01 1.83±0.02
동형대조군 (mIgG1) 1.80±0.00 1.83±0.03 1.88±0.04 1.99±0.05 2.15±0.07 2.23±0.08
hMCP1-mIg 1.80±0.00 1.81±0.00 1.80±0.00* 1.82±0.01* 1.89±0.04* 2.03±0.06*
*는 동형 대조군 그룹의 것과 비교하여 hMCP1-mIg-처리된 발 크기의 p<0.05를 나타낸다
9일째에 항-콜라겐 IgG2a의 혈장 수준
처리 항-콜라겐 IgG2a의 혈장 수준(㎍/ml)
정상 731.40±30.91
동형 대조군(mIgG1) 100554±25576
hMCP1-mIg 51738±13880
데이타는 평균과 표준편차로 나타내었다
실시예 4: 수용체 결합 검정
당해 실험에서는, CCR2 수용체에 결합하는 hMCP1[알 앤드 디 시스템스(R & D Systems) 제조원] 및 hMCP1-mIg(서열 8)의 능력을 검정하였다.
'완전한-길이의 사람 CCR2 cDNA(진뱅크 수탁번호 제NM_000648호)를 발표된 서열로부터 기원한 올리고뉴클레오타이드 서열을 사용하여 RT-PCR에 의해 사람 말초 혈액 단핵구 세포로부터 생성시켰다. 완전한 길이의 마우스 CCR2 cDNA(진뱅크 수탁번호 제NM_009915호)를 또한 발표된 서열로부터 기원한 올리고뉴클레오타이드서열을 사용하여 RT-PCR에 의해 마우스 비장세포로부터 생성시켰다.
쥐 IL-3 의존성 전구-B 세포 Ba/F3를 10% 태 송아지 혈청, 2 mM L-글루타민, 100㎍/ml 스트렙토마이신 및 100㎍/ml 페니실린, 50μM 2-머캅토에탄올 및 2㎍/ml의 재조합 마우스 IL-3[캘리포니아주 카마릴로 소재의 바이오소스 인터내셔날(Biosource International) 제조원]이 보충된 RPMI 1640 배지(매릴랜드주 게이더스부르그 소재의 인비트로겐 제조원)내에 유지시켰다. 사람 CCR2 및 마우스 CCR2를 발현하는 재조합 Ba/F3 세포는, Ba/F3 마우스 프리-B 세포를 pME18Sneo-hCCR2 또는 mCCR2 플라스미드를 사용하여 전기영동에 의해 문헌[참조: Chou et al. British J. Pharmacology 137:663 (2002)]에 기술된 프로토콜로 안정하게 형질감염시켜 확립하였다. 안정한 형질감염은 게네티신(인비트로겐 제조원) 1 mg/ml의 존재하에 선택하였다.
세포 막을 쵸우 등의 문헌(참조: Chou, et al., 2002) 등에 앞서 기술된 바와 같이 제조하였다. 요약하면, 세포를 펠렛화하고, 분해 완충액(10 mM HEPES, pH 7.5) 및 Complete® 프로테아제 억제제[인디아나주 인디아나폴리스 소재의 베링거 만하임(Boehringer Mannheim)] 속에 재현탁시키고 빙상에서 5분 동안 항온처리하였다. 세포를 4639 세포 분산 봄프[bomb: 일리노이드주 몰린 소재의 파르 인스트루먼트(Parr Instrument) 제조원]에 이전시키고 1500 psi 질소로 30분 동안 빙상에서 파괴시켰다. 500 g에서 5분 동안 원심분리하여 거대 세포 파편을 제거하고, 상층액중 세포막을 100,000 g에서 30분 동안 원심분리하여 펠렛화하였다. 막을 10% 슈크로즈를 함유하는 분해 완충액속에 재현탁시키고 -80℃에서 저장하였다. 방사선표지된 사람 MCP1(특이 활성 = 2200 Ci/mmol)은 퍼킨 엘머(Perkin-Elmer, 매사츄세츠주 보스톤 소재)로부터 입수하였다.
CCR2 수용체 결합 검정에서, 결합 반응은 다음 조건: 50 mM HEPES, 10 mM NaCl, 1 mM CaCl2, 10 mM MgCl2, 0.1% 소 혈청 알부민, 2 ㎍ 세포막 및 160㎍ 밀-배아 아글루티닌 SPA 비드[뉴저지주 피츠카타웨이 소재의 애머샴(Amersham) 제조원], 30 pM 방사선요오드화된 사람 MCP1 및 나타낸 농도의 경쟁 제제하에 수행하였다. 반응 혼합물을 실온에서 일정하게 흔들면서 항온처리하였다. 막-결합된 방사선 표지된 rhMCP1를 1450 마이크로베타 트릴룩스 계수기(Microbeta Trilux counter) [매릴랜드주 게이터스부르그 소재의 왈락(Wallac) 제조원]를 사용하여 측정하였다. EC50 및 Ki 값을 그래프패드 프리즘 4 소프트웨어(GraphPad Prism 4 software, 캘리포니아주 샌 디에고 소재)를 사용하여 계산하였다.
hMCP1-mIg는 표지되지 않은 rhMCP1보다 5 내지 12배 미만의 효능으로 CR2를 함유하는 세포막에 대한 결합에 있어 방사선표지된 rhMCP1과 경쟁하였다(표 5).
방사선-요오드화된 rhMCP1의 CCR2 결합의 억제
Ba/F3-hCCR2 세포 Ba/F3-mCCR2 세포
IC50 (pM) Ki (pM) IC50 (pM) Ki (pM)
rhMCP1 183.0 84.5 29.8 11.8
hMCP1-mIg 623.9 287.5 350.2 138.2
실시예 5: MCP1-Ig 융합체의 발현, 정제 및 특성화
당해 실시예에서, 융합체를 발현시키고, 정제하며 특성화하였다.
hMCP-1-hIg 융합 단백질의 변이체. 사람 MCP1-hIg 변이체 단백질을 포유동물 세포내에서 발현시키고, 분비시킨 후 세포 성장 배지로부터 분리하였다. 정제는 hMCP-1-mIg를 정제하기 위해 위에서 설정한 바와 동일한 프로토콜을 사용하여 수행하였다. 분리된 단백질은 SDS-PAGE로 분석하였다.
사람 MCP1(참조: 진뱅크 수탁번호 제NM_002982호)의 cDNA 및 사람 면역글로불린 중쇄 감마 1 동형(참조: 진뱅크 수탁 번호 제019046호) 또는 감마 4 동형(참조: 진뱅크 수탁번호 제BC025985호)(이들 경우 둘다는 힌지, CH2 및 CH3 영역에 대한 암호화 서열을 포함한다)의 고정 영역으로부터 기원한 부분 cDNA를 역-전사 폴리머라제 쇄 반응(RT-PCR)으로 클로닝하였다. 감마 1 및 감마 4 변이체의 단량체성 형태를 생성시키기 위해, 힌지 영역내 시스테인 잔기를 세린 잔기로 대체하였다.
hMCP1-hIg 변이체에 상응하는 cDNA를 표준 분자 생물학 과정에 의해 Hind3-Not1 단편으로서 포유동물 발현 벡터 pCDNA3.1(+)(캘리포니아주 칼스바드 소재의 인비트로겐 제조원)내로 개별적으로 클로닝하여 pcDNA3.1(+)hMCP1-hIgG 플라스미드를 생성시켰다.
hMCP-1-hIg 변이체는 상응하는 플라스미드를 CHO-K1 세포내로 안정하게 형질감염시켜 발현시켰다. 형질감염의 프로토콜, 안정한 클론의 선택, 조직 배양, 및 생성물 정제는 hMCP-1-mIg의 예에 기술된 것과 유사하였다.
CCR2 수용체에 대한 hMCP-1-hIg 변이체의 결합 친화성은 hMCP-1-mIg의 예에서와 같이 THP-1 세포의 막을 사용하여 측정하였다. 변이체의 Ki 값은 이량체 형태의 hMCP-1-hIg(γ1)의 경우 16.8pM, 단량체 형태의 hMCP-1-hIg(γ1)의 경우 28.8pM, 이량체 형태의 hMCP-1-hIg(γ4)의 경우 51.9pM, 및 단량체 형태의 hMCP-1-hIg(γ4)의 경우 90.1 pM인 것으로 예측되었다. 비교를 위해, 동일한 실험에서 hMCP-1의 Ki 값은 65.7 pM인 것으로 측정되었다.
변이체의 상대적 효능은 또한 THP-1 세포를 사용한 화학주성 검정으로 측정하였다. 프로토콜은 hMCP-1-mIg의 예에서 기술한 것과 유사하였다. 예측된 EC50 값은 이량체 형태의 hMCP-1-hIg(γ1)의 경우 50 pM, 단량체 형태의 hMCP-1-hIg(γ1)의 경우 90 pM, 이량체 형태의 hMCP-1-hIg(γ4)의 경우 500 pM, 및 단량체 형태의 hMCP-1-hIg(γ4)의 경우 500 pM이었다. 비교를 위해, 동일한 실험에서 hMCP-1의 EC50 값은 200 내지 400 pM인 것으로 측정되었다.
CCR2를 탈감작화시키는 hMCP-1-hIg 변이체의 능력은 화학주성 검정에 의해 THP-1 세포로 측정하였다. 당해 프로토콜은 hMCP-1-mIg의 예에서 기술된 것과 유사하다. 세포를 각각의 변이체 hMCP-1-hIg를 hMCP-1을 향한 이주에 대한 시험 전에 30분 동안 항온처리하였다. 이량체 또는 단량체 형태의 hMCP-1-hIg(γ1)의 예비처리로, 1 nM의 가능한 낮은 Ig-융합 단백질에서, THP-1 세포의 이주가 완벽하게 차단되었다. 세포를 이량체 또는 단량체 형태의 hMCP-1-hIg(γ4) 각각 1nM과 함께 예비항온처리하는 경우, hMCP-1의 EC50 값은 2 내지 4배 증가하였다. 예비항온처리를 이량체 또는 단량체 형태의 hMCP-1-hIg(γ4)를 10 nM에서 사용하여 수행하는 경우, hMCP-1의 EC50 값은 30배 이상 증가하였다.
hMCP-1-mIg의 정제. hMCP-1-mIg(하기 설정된 EAE 및 항-콜라겐 항체-유도된 관절염 모델에서 사용됨)의 대규모 정제(200mg 이상)를 위해, ProA 친화성 크로마토그래피를 rProA 세파로즈 FF 또는 마브셀렉트 수지(MabSelect resin; 스웨덴 업살라 소재의 지이 헬쓰케어(GE Healthcare)로부터 입수]를 사용하여 이용하였다. 친화성 컬럼은 10 mM, pH 7.2에서의 인산나트륨, 및 125 mM NaCl에서의 염화나트륨으로 이루어진 고 염 완충액으로 평형화시켰다. 조건화된 배지를 컬럼에 로딩한 후 앞서 나타낸 바와 동일한 완충액을 사용하여 10개 층-용적으로 세척하였다. 이어서 샘플이 로딩된 컬럼을 10mM에서 인산나트륨을 포함하는 5개 층-용적의 포스페이트 완충액 pH 7.2로 세척하였다. 생성물 용출을 0.1 M, pH 2.9에서 5 층-용적의 아세트산으로 수행하였다. 용출물을 즉시 pH 7.2가 되도록 1M에서 트리스 염기를 사용하여 중화시켰다. pH 조절 후, 혼주물을 스테리컵 익스프레스 지피 플러스(Stericup Express GP Plus) 0.22㎛[매사츄세츠주 베드포드 소재의 밀리포어(Millipore) 제조원]로 여과하였다.
Q 세파로즈 HiTRAP FF(지이 헬쓰케어 제조원)을 사용한 음이온-교환 크로마토그래피의 임의 단계를 경우에 따라 사용하여 소량의 불순물을 제거하였다. 평형 및 세척 완충액은 10 mM의 인산나트륨, pH 7.2, 및 125 mM NaCl에서 염화나트륨으로 이루어졌다. 생성물을 유동-통과시켰다.
생성물 농축을 위해, 10K 재생 셀룰로즈(밀리포어 제조원)가 장착된 아미콘 스타 셀(Amicon Stir Cell), 모델 8050을 사용하였다.
hMCP-1-mIg의 약력학. C57B6 마우스를 hMCP-1-mIg의 약력학 연구에 사용하였다. 3개 그룹내 마우스에 체중 kg당 10mg에서 단일 투여량의 hMCP-1-mIg을 정맥내, 복강내 또는 피하로 주사하였다. 혈청 샘플을 30분 내지 7일의 싯점에서 수집하였다. 잔류 수준의 hMCP-1-mIg를 효소 결합된 면역흡착 검정(ELISA)에 의해 항-hMCP-1 항체[미네소타주 미네아폴리스 소재의 알 앤드 디 시스템스(R&D Systems) 제조원]를 포획 항체로서 및 서양 고추냉이 퍼옥시다제-접합된 항-마우스 IgGI 항체[텍사스주 몬트고메리 소재의 베틸(Bethyl) 제조원]을 검출 항체로서 사용하여 측정하였다. 결과는 3 내지 5일의 혈청 반감기를 나타내었다. hMCP-1-mIg의 수준은 7일째에 약 10nM로 잔존하였다.
급성 및 재발된 EAE에서 hMCP-1-mIg의 효과. 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)을 SJL 마우스 속에서 유발시켰다. 당해 마우스를 0일째에 2 mg/mL의 완전 프루언드 항원보강제(CFA) 중 100㎍/mL PLP139-151 펩타이드[HCLGKWLGHPDKF(서열 29); 텍사스주 레위스빌 소재의 바이오신테시스(Biosynthesis) 제조원]을 피하내로 및 100 ng의 퍼투시스 독소를 정맥내로 사용하여 면역화시켰다. 마우스를 3, 5일째에 또는 3, 5, 7일째에 10mg/체중 kg(mpk)의 마우스 IgG1 동형-대조군 항체[에스피-바이오파마(SP-Biopharma) 제조원] 또는 사람 MCP-1-마우스 Ig(hMCP-1-mIg) 융합 단백질로 처리하였다. 이후에, 마우스를 체중 및 질병의 임상 신호에 대해 모니터링하였다. 질병 점수를 다음과 같이 기록하였다: 1 = 파행 꼬리, 2 = 뒷다리 약화, 3 = 부분 뒷다리 마비, 4 = 전체 뒷다리 마비, 및 5 = 거의 죽어가는 상태.
중추 신경계내로 세포의 침입은 척수로부터 분리한 세포의 유동 세포계산으로 모니터링하였다. 3마리의 마우스를 각각의 그룹에 대해 이용하였다. 마우스에 헤파린을 함유하는 등장성 완충액으로 관류시켜 CNS로부터 말초 혈액을 제거하였다. 뇌 및 척수를 CNS 단핵 분리를 위해 수거하였다. 세포를 와이어메쉬(wire mesh)를 통해 푸싱하고, 콜라게나제 및 드나제와 함께 항온처리하여 단핵 세포를 방출시켰다. 이후에, 세포 현탁액을 퍼콜 구배를 통해 원심분리하였다. 세포 회복을 트립판 블루 세포 계수기로 측정하고 세포 프로파일을 FACS 분석을 통해 확립하였다. 세포를 CD45, CD11b(염증성 대식구의 경우)에 대한 항체 및 CD4(활성화된 T 세포의 경우) 각각에 대한 항체에 접합된 BD 염료로 염색하였다. 항체는 비디 바이오사이언스(BD Biosciences)(캘리포니아주 산 조세에 소재)로부터 입수하였다. 염색된 세포를 팍스칼리버(Facscaliber)를 사용하여 세포 퀘스트 소프트웨어(cell quest software)[캘리포니아주 산 조세 소재의 비디 바이오사이언스(BD Biosciences) 제조원]를 사용하여 분석하였다.
표 6에 나타낸 결과는 EAE 모델에서 hMCP-1-mIg의 보호 효과를 나타내었다. 보호는 척수에서 대식구의 수의 감소와 관련된 것으로 여겨졌다.
EAE를 억제하는 hMCP-1-mIg 융합체 단백질 처리
실험 번호 평균 설정된 IgG1 대조군 평균 설정된 huMCP-1 Ig 융합체 단백질 최대 질병 점수 IgG1 대조군 최대 질병 점수 huMCP-1 Ig 융합체 단백질
실험 A 11.8 12.0 5,4,2 0,0,0
실험 B/D' 10.0 13.5 4,4,3 0,0,2
실험 D 9.6 14.5 4,4,4,4,3 0,0,2,3,3
평균 점수-모든 실험 10.47 13.33 3.72 0.91
* 임상 점수 데이타는 이들 2개 연구를 위해 합하였다. 마우스의 대부분을 초기 대사 연구를 위해 전임상적으로 취하였으며 포함시키지 않았다.
CNS내로 대식구 침입을 억제하는 hMCP-1-mIg 융합체 단백질
설정 투여량 섭생 CNS 분석 처리 염증성 대식구* 활성화된 T 세포*
A d3,5 d5 hMCP1-mIgG1 mIgG1 1.87E+04 2.25E+04 6.29E+04 3.76E+04
B d3,5 d6 hMCP1-mIgG1 mIgG1 1.75E+04 4.73E+04 7.26E+05 4.12E+05
C d3,5 d6 hMCP1-mIgG1 mIgG1 1.62E+05 3.35E+05 6.28E+04 9.20E+04
D d3,5,7 d12 hCMP1-mIgG1 mIgG1 0.69E+05 2.36E+05 1.29E+05 3.72E+05
* CD45hi/CD11b+/CD4-로 정의된 염증성 대식구 집단 CD45hi/CD11b-/CD4+로 정의된 활성화된 T 세포 집단
실시예 6: 항-콜라겐 항체-유발된 관절염에서 hMCP-1-mIG의 효과
당해 실험에서, 항-콜라겐 항체-유발된 관절염을 경감시키는 hMCP-1-mIg의 능력을 측정하였다.
항체 유발된 관절염은 800㎍의 케미콘 아트로겐(Chemicon's arthrogen) CIA 항체[캘리포니아주 테메쿨라 소재의 케미콘(Chemicon) 제조원] 콕테일을 연령이 맞는 수컷 B1ORIII 마우스내로 정맥내 주사하여 유발시켰다. 이러한 유도 전에, 마우스에게 40 mpk의 동형 대조군 mlgG1 또는 hMCP-1-mIg 융합체 단백질을 피하 처리하였다. 질병은 2 또는 3일에 발생하였다. 동물을 매일 점수매겼다. 점수매김 시스템을 이용하여 다음과 같이 각각의 발을 측정하였다: 1 = 하나의 팽윤된 관절, 2 = 2개 이상의 팽윤된 관절, 3 = 전체의 발 팽윤. 각각의 마우스에게 12의 최대 질병 점수를 매길 수 있다. 수득된 결과는 하기 표 8에 설정한다.
항체 유발된 관절염을 억제하는 MCP-1 Ig 융합체 단백질
항체 유발된 관절염에서 huMCP-1 Ig FP 평균 질병 점수
실험 1 실험 2 실험 1 실험 2
IgG1 대조군 huMCP1 Ig FP
0일째 0.0 0.0 0.0 0
1일째 0.0 0.0 0.0 0
2일째 0.5 2.0 0.0 0
3일째 1.5 3.4 0.8 0.2
4일째 3.3 4.0 0.8 0.6
5일째 3.8 5.6 1.0 0.8
6일째 5.5 5.8 1.3 0.8
7일째 5.3 5.6 1.3 0.8
8일째 6.0 5.6 1.3 0.8
9일째 5.5 5.4 1.3 0.8
10일째 5.5 5.4 1.3 0.8
11일째 5.3 5.0 1.3 0.8
12일째 5.0 4.0 1.3 1.2
13일째 4.5 2.5 1.3 1.2
14일째 4.0 1.5 1.3 1.2
본 발명은 본원에 기술된 특정 양태로 범위가 한정되어서는 안된다. 또한, 본원에 기술된 것들외에 본 발명의 각종 변형도 앞서의 기술로부터 당해 분야의 숙련가에게 명백할 것이다. 이러한 변형도 첨부된 청구의 범위의 영역내에 속하는 것으로 의도된다.
특허, 특허원, 공보, 제품 기술 및 프로토콜은 본 명세서 전체에 인용되어 있으며, 이의 기술은 모든 목적을 위해 이의 전체가 본원에서 참조로 인용된다.
SEQUENCE LISTING <110> Schering Corporation <120> MCP1 Fusions <130> 5-1998-0697384 <140> <141> 2006-08-10 <150> 60/707,731 <151> 2005-08-12 <160> 30 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 99 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Lys Val Ser Ala Ala Leu Leu Cys Leu Leu Leu Ile Ala Ala Thr 1 5 10 15 Phe Ile Pro Gln Gly Leu Ala Gln Pro Asp Ala Ile Asn Ala Pro Val 20 25 30 Thr Cys Cys Tyr Asn Phe Thr Asn Arg Lys Ile Ser Val Gln Arg Leu 35 40 45 Ala Ser Tyr Arg Arg Ile Thr Ser Ser Lys Cys Pro Lys Glu Ala Val 50 55 60 Ile Phe Lys Thr Ile Val Ala Lys Glu Ile Cys Ala Asp Pro Lys Gln 65 70 75 80 Lys Trp Val Gln Asp Ser Met Asp His Leu Asp Lys Gln Thr Gln Thr 85 90 95 Pro Lys Thr <210> 2 <211> 76 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Gln Pro Asp Ala Ile Asn Ala Pro Val Thr Cys Cys Tyr Asn Phe Thr 1 5 10 15 Asn Arg Lys Ile Ser Val Gln Arg Leu Ala Ser Tyr Arg Arg Ile Thr 20 25 30 Ser Ser Lys Cys Pro Lys Glu Ala Val Ile Phe Lys Thr Ile Val Ala 35 40 45 Lys Glu Ile Cys Ala Asp Pro Lys Gln Lys 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<223> mature human MCP-1 fused to human IgG4 <400> 9 Gln Pro Asp Ala Ile Asn Ala Pro Val Thr Cys Cys Tyr Asn Phe Thr 1 5 10 15 Asn Arg Lys Ile Ser Val Gln Arg Leu Ala Ser Tyr Arg Arg Ile Thr 20 25 30 Ser Ser Lys Cys Pro Lys Glu Ala Val Ile Phe Lys Thr Ile Val Ala 35 40 45 Lys Glu Ile Cys Ala Asp Pro Lys Gln Lys Trp Val Gln Asp Ser Met 50 55 60 Asp His Leu Asp Lys Gln Thr Gln Thr Pro Lys Thr Gly Ser Glu Ser 65 70 75 80 Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly 85 90 95 Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met 100 105 110 Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln 115 120 125 Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val 130 135 140 His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr 145 150 155 160 Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly 165 170 175 Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile 180 185 190 Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro 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atcatctgtc 60 ttcatcttcc ccccaaagcc caaggatgtg ctcaccatta ctctgactcc taaggtcacg 120 tgtgttgtgg tagacatcag caaggatgat cccgaggtcc agttcagctg gtttgtagat 180 gatgtggagg tgcacacagc tcagacaaaa ccccgggagg agcagttcaa cagcactttc 240 cgttcagtca gtgaacttcc catcatgcac caggactggc tcaatggcaa ggagttcaaa 300 tgcagggtca acagtgcagc tttccctgcc cccatcgaga aaaccatctc caaaaccaaa 360 ggcagaccga aggctccaca ggtgtacacc attccacctc ccaaggagca gatggccaag 420 gataaagtca gtctgacctg catgataaca gacttcttcc ctgaagacat tactgtggag 480 tggcagtgga atgggcagcc agcggagaac tacaagaaca ctcagcccat catggacaca 540 gatggctctt acttcgtcta cagcaagctc aatgtgcaga agagcaactg ggaggcagga 600 aatactttca cctgctctgt gttacatgag ggcctgcaca accaccatac tgagaagagc 660 ctctcccact ctcctggtaa atga 684 <210> 15 <211> 690 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> human heavy-chain immunoglobulin constant region, gamma 4 isotype, starting from the amino terminus of the hinge region and ending at the carboxy-terminus of the CH3 region <400> 15 gagtccaaat atggtccccc atgcccatca tgcccagcac ctgagttcct ggggggacca 60 tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag gacactctca tgatctcccg gacccctgag 120 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 180 gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc 240 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 300 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa 360 gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg 420 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 480 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 540 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aggctaaccg tggacaagag caggtggcag 600 gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag 660 aagagcctct ccctgtctct gggtaaatga 690 <210> 16 <211> 690 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> human heavy-chain immunoglobulin constant region, gamma 4 isotype, monomeric variant, starting from the amino terminus of the hinge region and ending at the carboxy-terminus of the CH3 region <400> 16 gagtccaaat atggtccccc atctccatca tctccagcac ctgagttcct ggggggacca 60 tcagtcttcc tgttcccccc aaaacccaag gacactctca tgatctcccg gacccctgag 120 gtcacgtgcg tggtggtgga cgtgagccag gaagaccccg aggtccagtt caactggtac 180 gtggatggcg tggaggtgca taatgccaag acaaagccgc gggaggagca gttcaacagc 240 acgtaccgtg tggtcagcgt cctcaccgtc ctgcaccagg actggctgaa cggcaaggag 300 tacaagtgca aggtctccaa caaaggcctc ccgtcctcca tcgagaaaac catctccaaa 360 gccaaagggc agccccgaga gccacaggtg tacaccctgc ccccatccca ggaggagatg 420 accaagaacc aggtcagcct gacctgcctg gtcaaaggct tctaccccag cgacatcgcc 480 gtggagtggg agagcaatgg gcagccggag aacaactaca agaccacgcc tcccgtgctg 540 gactccgacg gctccttctt cctctacagc aggctaaccg tggacaagag caggtggcag 600 gaggggaatg tcttctcatg ctccgtgatg catgaggctc tgcacaacca ctacacacag 660 aagagcctct ccctgtctct gggtaaatga 690 <210> 17 <211> 702 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> human heavy-chain immunoglobulin constant region, gamma 1 isotype, starting from the amino terminus of the hinge region and ending at the carboxy-terminus of the CH3 region <400> 17 gttgagccca aatcttgtga caaaactcac acatgcccac cgtgcccagc acctgaactc 60 ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 120 cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 180 ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 240 cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 300 aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 360 accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 420 cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 480 agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 540 cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 600 agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 660 cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat ga 702 <210> 18 <211> 702 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> human heavy-chain immunoglobulin constant region, gamma 1 isotype, monomeric variant, starting from the amino terminus of the hinge region and ending at the carboxy-terminus of the CH3 region <400> 18 gttgagccca aatcttctga caaaactcac acatctccac cgtctccagc acctgaactc 60 ctggggggac cgtcagtctt cctcttcccc ccaaaaccca aggacaccct catgatctcc 120 cggacccctg aggtcacatg cgtggtggtg gacgtgagcc acgaagaccc tgaggtcaag 180 ttcaactggt acgtggacgg cgtggaggtg cataatgcca agacaaagcc gcgggaggag 240 cagtacaaca gcacgtaccg tgtggtcagc gtcctcaccg tcctgcacca ggactggctg 300 aatggcaagg agtacaagtg caaggtctcc aacaaagccc tcccagcccc catcgagaaa 360 accatctcca aagccaaagg gcagccccga gaaccacagg tgtacaccct gcccccatcc 420 cgggatgagc tgaccaagaa ccaggtcagc ctgacctgcc tggtcaaagg cttctatccc 480 agcgacatcg ccgtggagtg ggagagcaat gggcagccgg agaacaacta caagaccacg 540 cctcccgtgc tggactccga cggctccttc ttcctctaca gcaagctcac cgtggacaag 600 agcaggtggc agcaggggaa cgtcttctca tgctccgtga tgcatgaggc tctgcacaac 660 cactacacgc agaagagcct ctccctgtct ccgggtaaat ga 702 <210> 19 <211> 987 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> human MCP-1 (including the leader peptide) fused to mouse IgG1 <400> 19 atgaaagtct ctgccgccct tctgtgcctg ctgctcatag cagccacctt cattccccaa 60 gggctcgctc agccagatgc aatcaatgcc ccagtcacct gctgttataa cttcaccaat 120 aggaagatct cagtgcagag gctcgcgagc tatagaagaa tcaccagcag caagtgtccc 180 aaagaagctg tgatcttcaa gaccattgtg gccaaggaga tctgtgctga ccccaagcag 240 aagtgggttc aggattccat ggaccacctg gacaagcaaa cccaaactcc gaagactgga 300 tccgtgccca gggattgtgg ttgtaagcct tgcatatgta cagtcccaga agtatcatct 360 gtcttcatct tccccccaaa gcccaaggat gtgctcacca ttactctgac tcctaaggtc 420 acgtgtgttg tggtagacat cagcaaggat gatcccgagg tccagttcag ctggtttgta 480 gatgatgtgg aggtgcacac agctcagaca aaaccccggg aggagcagtt caacagcact 540 ttccgttcag tcagtgaact tcccatcatg caccaggact ggctcaatgg caaggagttc 600 aaatgcaggg tcaacagtgc agctttccct gcccccatcg agaaaaccat ctccaaaacc 660 aaaggcagac cgaaggctcc acaggtgtac 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ggacgtgagc caggaagacc ccgaggtcca gttcaactgg 480 tacgtggatg gcgtggaggt gcataatgcc aagacaaagc cgcgggagga gcagttcaac 540 agcacgtacc gtgtggtcag cgtcctcacc gtcctgcacc aggactggct gaacggcaag 600 gagtacaagt gcaaggtctc caacaaaggc ctcccgtcct ccatcgagaa aaccatctcc 660 aaagccaaag ggcagccccg agagccacag gtgtacaccc tgcccccatc ccaggaggag 720 atgaccaaga accaggtcag cctgacctgc ctggtcaaag gcttctaccc cagcgacatc 780 gccgtggagt gggagagcaa tgggcagccg gagaacaact acaagaccac gcctcccgtg 840 ctggactccg acggctcctt cttcctctac agcaggctaa ccgtggacaa gagcaggtgg 900 caggagggga atgtcttctc atgctccgtg atgcatgagg ctctgcacaa ccactacaca 960 cagaagagcc tctccctgtc tctgggtaaa tga 993 <210> 21 <211> 993 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> human MCP-1 (including the leader sequence) fused to human IgG4 monomeric variant <400> 21 atgaaagtct ctgccgccct tctgtgcctg ctgctcatag cagccacctt cattccccaa 60 gggctcgctc agccagatgc aatcaatgcc ccagtcacct gctgttataa cttcaccaat 120 aggaagatct cagtgcagag gctcgcgagc tatagaagaa tcaccagcag 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ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg 1860 ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga 1920 gcctctccct gtctccgggt aaatgactag tcatagttta gcggccgctc gagtctagag 1980 ggcccgttta aacccgctga tcagcctcga ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg 2040 tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct 2100 aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg 2160 gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg 2220 cggtgggctc tatggcttct gaggcggaaa gaaccagctg gggctctagg gggtatcccc 2280 acgcgccctg tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg 2340 ctacacttgc cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca 2400 cgttcgccgg ctttccccgt caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta 2460 gtgctttacg gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc 2520 catcgccctg atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg 2580 gactcttgtt ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat 2640 aagggatttt gccgatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta 2700 acgcgaatta attctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc 2760 agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc 2820 cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat 2880 agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc 2940 gccccatggc tgactaattt tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct ctgcctctga 3000 gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aaaagctccc 3060 gggagcttgt atatccattt tcggatctga tcaagagaca ggatgaggat cgtttcgcat 3120 gattgaacaa gatggattgc acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg 3180 ctatgactgg gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc 3240 gcaggggcgc ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca 3300 ggacgaggca gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct 3360 cgacgttgtc actgaagcgg gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga 3420 tctcctgtca tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg 3480 gcggctgcat acgcttgatc cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat 3540 cgagcgagca cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga 3600 gcatcagggg ctcgcgccag ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg 3660 cgaggatctc gtcgtgaccc atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg 3720 ccgcttttct ggattcatcg actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat 3780 agcgttggct acccgtgata ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct 3840 cgtgctttac ggtatcgccg ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga 3900 cgagttcttc tgagcgggac tctggggttc gaaatgaccg accaagcgac gcccaacctg 3960 ccatcacgag atttcgattc caccgccgcc ttctatgaaa ggttgggctt cggaatcgtt 4020 ttccgggacg ccggctggat gatcctccag cgcggggatc tcatgctgga gttcttcgcc 4080 caccccaact tgtttattgc agcttataat ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat 4140 ttcacaaata aagcattttt ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat 4200 gtatcttatc atgtctgtat accgtcgacc tctagctaga gcttggcgta atcatggtca 4260 tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga 4320 agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg 4380 cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc 4440 caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac 4500 tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata 4560 cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa 4620 aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct 4680 gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa 4740 agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg 4800 cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca 4860 cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa 4920 ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg 4980 gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg 5040 tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga 5100 acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc 5160 tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt 5220 acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct 5280 cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc 5340 acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa 5400 acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta 5460 tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc 5520 ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat 5580 ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta 5640 tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt 5700 aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt 5760 ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg 5820 ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc 5880 gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc 5940 gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg 6000 cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga 6060 actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta 6120 ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct 6180 tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag 6240 ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga 6300 agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat 6360 aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt c 6411 <210> 28 <211> 6411 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Plasmid pcDNA3.1(+) hMCP1 hIgG1 monomeric variant <400> 28 gacggatcgg gagatctccc gatcccctat ggtgcactct cagtacaatc tgctctgatg 60 ccgcatagtt aagccagtat ctgctccctg cttgtgtgtt ggaggtcgct gagtagtgcg 120 cgagcaaaat ttaagctaca acaaggcaag gcttgaccga caattgcatg aagaatctgc 180 ttagggttag gcgttttgcg ctgcttcgcg atgtacgggc cagatatacg cgttgacatt 240 gattattgac tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata 300 tggagttccg cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc 360 cccgcccatt gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc 420 attgacgtca atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt 480 atcatatgcc aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt 540 atgcccagta catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca 600 tcgctattac catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg 660 actcacgggg atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc 720 aaaatcaacg ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg 780 gtaggcgtgt acggtgggag gtctatataa gcagagctct ctggctaact agagaaccca 840 ctgcttactg gcttatcgaa attaatacga ctcactatag ggagacccaa gctggctagc 900 gtttaaactt aagcttacga tcagtcgaat tcgccgccac catgaaagtc tctgccgccc 960 ttctgtgcct gctgctcata gcagccacct tcattcccca agggctcgct cagccagatg 1020 caatcaatgc cccagtcacc tgctgttata acttcaccaa taggaagatc tcagtgcaga 1080 ggctcgcgag ctatagaaga atcaccagca gcaagtgtcc caaagaagct gtgatcttca 1140 agaccattgt ggccaaggag atctgtgctg accccaagca gaagtgggtt caggattcca 1200 tggaccacct ggacaagcaa acccaaactc cgaagactgg atccgttgag cccaaatctt 1260 ctgacaaaac tcacacatct ccaccgtctc cagcacctga actcctgggg ggaccgtcag 1320 tcttcctctt ccccccaaaa cccaaggaca ccctcatgat ctcccggacc cctgaggtca 1380 catgcgtggt ggtggacgtg agccacgaag accctgaggt caagttcaac tggtacgtgg 1440 acggcgtgga ggtgcataat gccaagacaa agccgcggga ggagcagtac aacagcacgt 1500 accgtgtggt cagcgtcctc accgtcctgc accaggactg gctgaatggc aaggagtaca 1560 agtgcaaggt ctccaacaaa gccctcccag cccccatcga gaaaaccatc tccaaagcca 1620 aagggcagcc ccgagaacca caggtgtaca ccctgccccc atcccgggat gagctgacca 1680 agaaccaggt cagcctgacc tgcctggtca aaggcttcta tcccagcgac atcgccgtgg 1740 agtgggagag caatgggcag ccggagaaca actacaagac cacgcctccc gtgctggact 1800 ccgacggctc cttcttcctc tacagcaagc tcaccgtgga caagagcagg tggcagcagg 1860 ggaacgtctt ctcatgctcc gtgatgcatg aggctctgca caaccactac acgcagaaga 1920 gcctctccct gtctccgggt aaatgactag tcatagttta gcggccgctc gagtctagag 1980 ggcccgttta aacccgctga tcagcctcga ctgtgccttc tagttgccag ccatctgttg 2040 tttgcccctc ccccgtgcct tccttgaccc tggaaggtgc cactcccact gtcctttcct 2100 aataaaatga ggaaattgca tcgcattgtc tgagtaggtg tcattctatt ctggggggtg 2160 gggtggggca ggacagcaag ggggaggatt gggaagacaa tagcaggcat gctggggatg 2220 cggtgggctc tatggcttct gaggcggaaa gaaccagctg gggctctagg gggtatcccc 2280 acgcgccctg tagcggcgca ttaagcgcgg cgggtgtggt ggttacgcgc agcgtgaccg 2340 ctacacttgc cagcgcccta gcgcccgctc ctttcgcttt cttcccttcc tttctcgcca 2400 cgttcgccgg ctttccccgt caagctctaa atcgggggct ccctttaggg ttccgattta 2460 gtgctttacg gcacctcgac cccaaaaaac ttgattaggg tgatggttca cgtagtgggc 2520 catcgccctg atagacggtt tttcgccctt tgacgttgga gtccacgttc tttaatagtg 2580 gactcttgtt ccaaactgga acaacactca accctatctc ggtctattct tttgatttat 2640 aagggatttt gccgatttcg gcctattggt taaaaaatga gctgatttaa caaaaattta 2700 acgcgaatta attctgtgga atgtgtgtca gttagggtgt ggaaagtccc caggctcccc 2760 agcaggcaga agtatgcaaa gcatgcatct caattagtca gcaaccaggt gtggaaagtc 2820 cccaggctcc ccagcaggca gaagtatgca aagcatgcat ctcaattagt cagcaaccat 2880 agtcccgccc ctaactccgc ccatcccgcc cctaactccg cccagttccg cccattctcc 2940 gccccatggc tgactaattt tttttattta tgcagaggcc gaggccgcct ctgcctctga 3000 gctattccag aagtagtgag gaggcttttt tggaggccta ggcttttgca aaaagctccc 3060 gggagcttgt atatccattt tcggatctga tcaagagaca ggatgaggat cgtttcgcat 3120 gattgaacaa gatggattgc acgcaggttc tccggccgct tgggtggaga ggctattcgg 3180 ctatgactgg gcacaacaga caatcggctg ctctgatgcc gccgtgttcc ggctgtcagc 3240 gcaggggcgc ccggttcttt ttgtcaagac cgacctgtcc ggtgccctga atgaactgca 3300 ggacgaggca gcgcggctat cgtggctggc cacgacgggc gttccttgcg cagctgtgct 3360 cgacgttgtc actgaagcgg gaagggactg gctgctattg ggcgaagtgc cggggcagga 3420 tctcctgtca tctcaccttg ctcctgccga gaaagtatcc atcatggctg atgcaatgcg 3480 gcggctgcat acgcttgatc cggctacctg cccattcgac caccaagcga aacatcgcat 3540 cgagcgagca cgtactcgga tggaagccgg tcttgtcgat caggatgatc tggacgaaga 3600 gcatcagggg ctcgcgccag ccgaactgtt cgccaggctc aaggcgcgca tgcccgacgg 3660 cgaggatctc gtcgtgaccc atggcgatgc ctgcttgccg aatatcatgg tggaaaatgg 3720 ccgcttttct ggattcatcg actgtggccg gctgggtgtg gcggaccgct atcaggacat 3780 agcgttggct acccgtgata ttgctgaaga gcttggcggc gaatgggctg accgcttcct 3840 cgtgctttac ggtatcgccg ctcccgattc gcagcgcatc gccttctatc gccttcttga 3900 cgagttcttc tgagcgggac tctggggttc gaaatgaccg accaagcgac gcccaacctg 3960 ccatcacgag atttcgattc caccgccgcc ttctatgaaa ggttgggctt cggaatcgtt 4020 ttccgggacg ccggctggat gatcctccag cgcggggatc tcatgctgga gttcttcgcc 4080 caccccaact tgtttattgc agcttataat ggttacaaat aaagcaatag catcacaaat 4140 ttcacaaata aagcattttt ttcactgcat tctagttgtg gtttgtccaa actcatcaat 4200 gtatcttatc atgtctgtat accgtcgacc tctagctaga gcttggcgta atcatggtca 4260 tagctgtttc ctgtgtgaaa ttgttatccg ctcacaattc cacacaacat acgagccgga 4320 agcataaagt gtaaagcctg gggtgcctaa tgagtgagct aactcacatt aattgcgttg 4380 cgctcactgc ccgctttcca gtcgggaaac ctgtcgtgcc agctgcatta atgaatcggc 4440 caacgcgcgg ggagaggcgg tttgcgtatt gggcgctctt ccgcttcctc gctcactgac 4500 tcgctgcgct cggtcgttcg gctgcggcga gcggtatcag ctcactcaaa ggcggtaata 4560 cggttatcca cagaatcagg ggataacgca ggaaagaaca tgtgagcaaa aggccagcaa 4620 aaggccagga accgtaaaaa ggccgcgttg ctggcgtttt tccataggct ccgcccccct 4680 gacgagcatc acaaaaatcg acgctcaagt cagaggtggc gaaacccgac aggactataa 4740 agataccagg cgtttccccc tggaagctcc ctcgtgcgct ctcctgttcc gaccctgccg 4800 cttaccggat acctgtccgc ctttctccct tcgggaagcg tggcgctttc tcatagctca 4860 cgctgtaggt atctcagttc ggtgtaggtc gttcgctcca agctgggctg tgtgcacgaa 4920 ccccccgttc agcccgaccg ctgcgcctta tccggtaact atcgtcttga gtccaacccg 4980 gtaagacacg acttatcgcc actggcagca gccactggta acaggattag cagagcgagg 5040 tatgtaggcg gtgctacaga gttcttgaag tggtggccta actacggcta cactagaaga 5100 acagtatttg gtatctgcgc tctgctgaag ccagttacct tcggaaaaag agttggtagc 5160 tcttgatccg gcaaacaaac caccgctggt agcggttttt ttgtttgcaa gcagcagatt 5220 acgcgcagaa aaaaaggatc tcaagaagat cctttgatct tttctacggg gtctgacgct 5280 cagtggaacg aaaactcacg ttaagggatt ttggtcatga gattatcaaa aaggatcttc 5340 acctagatcc ttttaaatta aaaatgaagt tttaaatcaa tctaaagtat atatgagtaa 5400 acttggtctg acagttacca atgcttaatc agtgaggcac ctatctcagc gatctgtcta 5460 tttcgttcat ccatagttgc ctgactcccc gtcgtgtaga taactacgat acgggagggc 5520 ttaccatctg gccccagtgc tgcaatgata ccgcgagacc cacgctcacc ggctccagat 5580 ttatcagcaa taaaccagcc agccggaagg gccgagcgca gaagtggtcc tgcaacttta 5640 tccgcctcca tccagtctat taattgttgc cgggaagcta gagtaagtag ttcgccagtt 5700 aatagtttgc gcaacgttgt tgccattgct acaggcatcg tggtgtcacg ctcgtcgttt 5760 ggtatggctt cattcagctc cggttcccaa cgatcaaggc gagttacatg atcccccatg 5820 ttgtgcaaaa aagcggttag ctccttcggt cctccgatcg ttgtcagaag taagttggcc 5880 gcagtgttat cactcatggt tatggcagca ctgcataatt ctcttactgt catgccatcc 5940 gtaagatgct tttctgtgac tggtgagtac tcaaccaagt cattctgaga atagtgtatg 6000 cggcgaccga gttgctcttg cccggcgtca atacgggata ataccgcgcc acatagcaga 6060 actttaaaag tgctcatcat tggaaaacgt tcttcggggc gaaaactctc aaggatctta 6120 ccgctgttga gatccagttc gatgtaaccc actcgtgcac ccaactgatc ttcagcatct 6180 tttactttca ccagcgtttc tgggtgagca aaaacaggaa ggcaaaatgc cgcaaaaaag 6240 ggaataaggg cgacacggaa atgttgaata ctcatactct tcctttttca atattattga 6300 agcatttatc agggttattg tctcatgagc ggatacatat ttgaatgtat ttagaaaaat 6360 aaacaaatag gggttccgcg cacatttccc cgaaaagtgc cacctgacgt c 6411 <210> 29 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PLP139-151 peptide <400> 29 His Cys Leu Gly Lys Trp Leu Gly His Pro Asp Lys Phe 1 5 10 <210> 30 <211> 148 <212> PRT <213> Mus sp. <400> 30 Met Gln Val Pro Val Met Leu Leu Gly Leu Leu Phe Thr Val Ala Gly 1 5 10 15 Trp Ser Ile His Val Leu Ala Gln Pro Asp Ala Val Asn Ala Pro Leu 20 25 30 Thr Cys Cys Tyr Ser Phe Thr Ser Lys Met Ile Pro Met Ser Arg Leu 35 40 45 Glu Ser Tyr Lys Arg Ile Thr Ser Ser Arg Cys Pro Lys Glu Ala Val 50 55 60 Val Phe Val Thr Lys Leu Lys Arg Glu Val Cys Ala Asp Pro Lys Lys 65 70 75 80 Glu Trp Val Gln Thr Tyr Ile Lys Asn Leu Asp Arg Asn Gln Met Arg 85 90 95 Ser Glu Pro Thr Thr Leu Phe Lys Thr Ala Ser Ala Leu Arg Ser Ser 100 105 110 Ala Pro Leu Asn Val Lys Leu Thr Arg Lys Ser Glu Ala Asn Ala Ser 115 120 125 Thr Thr Phe Ser Thr Thr Thr Ser Ser Thr Ser Val Gly Val Thr Ser 130 135 140 Val Thr Val Asn 145

Claims (48)

  1. (1) 하나 이상의 반감기를 연장시키는 잔기에 융합된 하나 이상의 케모킨 폴리펩타이드; 또는
    (2) 2개 이상의 융합된 케모킨 폴리펩타이드를 포함하는, 분리된 폴리펩타이드.
  2. 제1항에 있어서, 케모킨이 사람 단핵구 화학주성 단백질-1(MCP1) 및 마우스 MCP1으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 폴리펩타이드.
  3. 제1항에 있어서, 반감기를 연장시키는 잔기가 폴리에틸렌 글리콜 또는 면역글로불린인 폴리펩타이드.
  4. 제1항에 있어서, 하나 이상의 면역글로불린에 융합된 하나 이상의 성숙한 MCP1 폴리펩타이드를 포함하는 폴리펩타이드.
  5. 제4항에 있어서, MCP1이 사람 MCP1 및 마우스 MCP1으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 구성원인 폴리펩타이드.
  6. 제3항에 있어서, 면역글로불린이 힌지(hinge)로부터 CH3 영역의 γ1 및 γ4 로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원인 폴리펩타이드.
  7. 제4항에 있어서,
    (a) 마우스 IgG1에 융합된 성숙한 사람 MCP1;
    (b) 사람 IgG4에 융합된 성숙한 사람 MCP1;
    (c) 사람 IgG4 단량체성 변이체에 융합된 성숙한 사람 MCP1;
    (d) 사람 IgG1에 융합된 성숙한 사람 MCP1; 및
    (e) 사람 IgG1 단량체성 변이체에 융합된 성숙한 사람 MCP1으로 이루어진 그룹 중에서 선택되는 구성원을 포함하는 폴리펩타이드.
  8. 제4항에 있어서, 서열 8 내지 12로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원으로 설정된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
  9. 제4항에 있어서, MCP1이 서열 2에 설정된 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드.
  10. 제4항에 있어서, 면역글로불린이 서열 3 내지 7으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원으로 설정된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드.
  11. 제4항에 있어서, MCP1이 면역글로불린에 펩타이드 링커에 의해 융합된 폴리 펩타이드.
  12. 제1항에 따른 폴리펩타이드 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  13. 제1항에 따른 폴리펩타이드와 함께 하나 이상의 추가의 치료제 또는 이의 약제학적 조성물을 포함하는 조성물.
  14. 제13항에 있어서, 추가의 치료제가 아스피린, 디클로페낙, 디플루니살, 에토돌락, 페노프로펜, 플록타페닌, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 케토프로펜, 케토롤락, 메클로페나메이트, 메페남산, 멜록시캄, 나부메톤, 나프록센, 옥사프로진, 페닐부타존, 피록시캄, 살살레이트, 술린닥, 테녹시캄, 티아프로펜산, 톨메틴, 베타메타손 벤조에이트, 베타메타손 발러레이트, 클로베타솔 프로피오네이트, 데속시메타손, 플루옥시놀론 아세토나이드, 플루란드레놀라이드, 국소 스테로이드, 알클로메타손 디프로피오네이트, 알로에 베라, 암시노나이드, 암시노나이드, 안트랄린, 베타메타손 디프로피오네이트, 베타메타손 발러레이트, 칼시포트리엔, 클로베타솔 프로피오네이트, 코알 타르(coal tar), 사해염(Dead Sea salts), 데소나이드, 데소나이드; 베타메타손 발러레이트, 데속시메타손, 디플로라손 디아세테이트, 에프솜 염, 플루옥시놀론 아세토나이드, 플루옥시노나이드, 플루란드레놀라이드, 플루티카손 프로피오네이트, 할시노나이드, 할로베타솔 프로피오네이트, 하 이드로코르티손 발러레이트, 하이드로코르티손, 모메타손 푸로에이트, 오일화된 오트밀, 석유 젤리, 프레드니카르바이트, 살리실산, 타자로텐, 트리암시놀론 아세토나이드, 하이드로코르티손, 덱사메타손, 메틸프로드니솔론 및 프레드니솔론의 혼합물, 알레팍셉트, 에타네르셉트, 사이클로스포린, 메토트렉세이트, 악시트레틴, 이소트레티노인, 하이드록시우레아, 마이코페놀레이트 모페틸, 설파살라진, 6-티오구아닌, 아나킨라, 주사가능한 금, 페니실라민, 아자티오프린, 클로로퀸, 하이드록시클로로퀸, 설파살라진, 경구 금, 아우라노핀, 금 나트륨 티오말레에이트, 아우로티오글루코즈, 메살라민, 설파살라진, 부데소나이드, 메트로니다졸, 시프로플록사신, 아자티오프린, 6-머캅토퓨린 또는 칼슘, 엽산, 비타민 B12, 셀레콕시브, 로페콕시브, 발데콕시브, 루미라콕시브, 에토리콕시브, 에팔리주마브, 아달리무마브, 인플릭시마브 및 ABX-IL8의 식이 보충물로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원인 조성물.
  15. 제1항에 따른 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 분리된 폴리뉴클레오타이드.
  16. 제15항에 있어서, 뉴클레오타이드 서열이
    (i) 마우스 IgG1에 융합된 사람의 프로세싱되지 않은 MCP1;
    (ii) 사람 lgG4에 융합된 사람의 프로세싱되지 않은 MCP1;
    (iii) 사람 IgG4 단량체성 변이체에 융합된 사람의 프로세싱되지 않은 MCP1;
    (iv) 사람 IgG1에 융합된 사람의 프로세싱되지 않은 MCP1; 및
    (v) 사람 IgG1 당량체성 변이체에 융합된 사람의 프로세싱되지 않은 MCP1으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드.
  17. 제15항에 있어서, MCP1이 서열 13의 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리뉴클레오타이드.
  18. 제15항에 있어서, 면역글로불린이 서열 14 내지 18로 이루어진 그룹 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리뉴클레오타이드.
  19. 제15항에 있어서, 서열 19 내지 23으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드.
  20. 제15항에 따른 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 분리된 또는 재조합 벡터.
  21. 제20항에 따른 벡터를 포함하는 분리된 숙주 세포.
  22. 필수적으로 도 1에 나타낸 바와 같은 플라스미드 맵으로 특성화된 분리된 플라스미드.
  23. 제22항에 있어서, 서열 24의 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 플라스미드.
  24. 서열 24 내지 28로 이루어진 그룹 중에서 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 분리된 플라스미드.
  25. 숙주 세포를 상기 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 발현 벡터로 당해 발현에 적합한 조건하에 형질전환시키고, 임의로, 숙주 세포로부터 폴리펩타이드를 분리함을 포함하여, MCP1-Ig 폴리펩타이드를 제조하는 방법.
  26. 제25항에 있어서, 폴리뉴클레오타이드가 서열 8 내지 12로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 암호화하는 방법.
  27. 제25항에 있어서, 폴리뉴클레오타이드가 플라스미드 pcDNA3.1(+)hMCP1 mIgG인 방법.
  28. 제25항에 따른 방법으로 제조된 분리된 폴리펩타이드.
  29. 대상체에서 케모킨 수용체 생성 세포를 케모킨 리간드로 탈감작화시킴을 포함하여, 케모킨 또는 케모킨 수용체의 발현 또는 활성을 감소시키거나, 또는 케모 킨 수용체 생성 세포의 염증 조직내로의 이주를 감소시킴에 의해 치료가능한 질환을 치료하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 질환이 의학적 염증 질환, 기생충 감염, 세균 감염, 바이러스 감염, 암, 심혈관 질환, 순환 질환 및 비만-관련 인슐린 내성으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원인 방법.
  31. 제29항에 있어서, 케모킨 수용체를 생성하는 세포가 케모킨 리간드 폴리펩타이드 또는 반감기를 연장시키는 잔기에 융합된 케모킨 리간드 폴리펩타이드를 대상체에 전신계적으로 투여함에 의해 케모킨 리간드에 대해 탈감작화되는 방법.
  32. 제29항에 있어서, 케모킨이 MCP1, SDF1, MIP1β 또는 이의 성숙한 폴리펩타이드인 방법.
  33. 제31항에 있어서, 반감기를 연장시키는 잔기가 면역글로불린 또는 이의 단편인 방법.
  34. 제32항에 있어서, MCP1이 서열 2의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  35. 제33항에 있어서, 면역글로불린 단편이 서열 3 내지 7로 이루어진 그룹 중에 서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  36. 제31항에 있어서, 폴리펩타이드가 서열 8 내지 12로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 MCP1-Ig인 방법.
  37. 대상체에게 하나 이상의 반감기를 연장시키는 잔기에 임의로 융합된 하나 이상의 MCP1 폴리펩타이드, 또는 이의 약제학적 조성물과 함께 임의로 추가의 치료제 또는 과정을 투여함을 포함하여, 대상체에서 의학적 염증 질환, 비만-관련 인슐린 내성, 기생충 감염, 세균 감염, 바이러스 감염, 암, 또는 심혈관 또는 순환성 질환을 치료하거나 또는 예방하는 방법.
  38. 제37항에 있어서, 의학적 염증 질환이 충수염, 소화 궤양, 위궤양 및 십이지장궤양, 복막염, 췌장염, 염증성창자병, 대장염, 궤양성 대장염, 거짓막 대장염(pseudomembranous colitis), 급성 대장염, 허혈성 대장염, 곁주머니염, 후두덮개염, 이완불능증, 담관염, 담낭염, 복강질환, 간염, 크론병(Crohn's disease), 장염, 휘플병(Whipple's disease), 천식, 알레르기, 아나필락시스 쇼크, 면역 복합체 병, 기관 허혈, 재관류 손상, 기관 괴사, 건초열, 패혈증(sepsis, septicemia), 내독소 쇼크, 악액질, 고열증, 호산구성 육아종, 육아종증, 사르코이드증, 패혈 유산, 부고환염, 질염, 전립샘염 및 요도염, 기관지염, 폐공기증, 비염, 섬유증, 낭성섬유증, 폐염, 성인 호흡곤란증후군, 진폐증(pneumoultramicroscopicsilicovolcanoconiosis), 폐포염, 기관지염, 인두염, 흉막염, 부비동염, 피부염, 아토피성 피부염, 피부근육염, 일광화상, 두드러기 사마귀(urticaria wart), 사마귀, 협착증, 재협착증, 혈관염, 맥관염, 심내막염, 동맥염, 죽상경화증, 혈전정맥염, 심장막염, 심근염, 심근 허혈, 결절동맥주위염, 류마티스열, 수막염, 뇌염, 다발경화증(MS), 신경염, 신경통, 포도막염, 관절염 및 관절통, 골수염, 근막염, 페제트병(Paget's disease), 통풍, 치주병, 류마티스 관절염, 윤활막염, 중증근육무력증, 갑상샘염, 전신홍반루푸스, 굿파스처 증후군(Goodpasture's syndrome), 베체트 증후군(Behcets's syndrome), 동종이식거부 및 이식체 대 숙주병(graft-versus-host disease)으로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원인 방법.
  39. 제37항에 있어서, MCP1이 서열 2의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  40. 제37항에 있어서, 반감기를 연장시키는 잔기가 폴리에틸렌 글리콜, 면역글로불린 또는 이의 단편인 방법.
  41. 제40항에 있어서, 면역글로불린 단편이 서열 3 내지 7로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산을 포함하는 방법.
  42. 제37항에 있어서, 폴리펩타이드가 서열 8 내지 12로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 MCP1-Ig인 방법.
  43. 제37항에 있어서, 대상체가 사람인 방법.
  44. 제37항에 있어서, 추가의 치료제 또는 과정이 아스피린, 디클로페낙, 디플루니살, 에토돌락, 페노프로펜, 플록타페닌, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 케토프로펜, 케토롤락, 메클로페나메이트, 메페남산, 멜록시캄, 나부메톤, 나프록센, 옥사프로진, 페닐부타존, 피록시캄, 살살레이트, 술린닥, 테녹시캄, 티아프로펜산, 톨메틴, 베타메타손 벤조에이트, 베타메타손 발러레이트, 클로베타솔 프로피오네이트, 데속시메타손, 플루옥시놀론 아세토나이드, 플루란드레놀라이드, 국소 스테로이드, 알클로메타손 디프로피오네이트, 알로에 베라, 암시노나이드, 암시노나이드, 안트랄린, 베타메타손 디프로피오네이트, 베타메타손 발러레이트, 칼시포트리엔, 클로베타솔 프로피오네이트, 코알 타르, 사해염, 데소나이드, 데소나이드; 베타메타손 발러레이트, 데속시메타손, 디플로라손 디아세테이트, 에프솜 염, 플루옥시놀론 아세토나이드, 플루옥시노나이드, 플루란드레놀라이드, 플루티카손 프로피오네이트, 할시노나이드, 할로베타솔 프로피오네이트, 하이드로코르티손 발러레이트, 하이드로코르티손, 모메타손 푸로에이트, 오일화된 오트밀, 석유 젤리, 프레드니카르바이트, 살리실산, 타자로텐, 트리암시놀론 아세토나이드, 하이드로코르티손, 덱사메타손, 메틸프로드니솔론 및 프레드니솔론의 혼합물, 알레팍셉트, 에타네르셉트, 사이클로스포린, 메토트렉세이트, 악시트레틴, 이소트레티노인, 하이 드록시우레아, 마이코페놀레이트 모페틸, 설파살라진, 6-티오구아닌, 아나킨라, 주사가능한 금, 페니실라민, 아자티오프린, 클로로퀸, 하이드록시클로로퀸, 설파살라진, 경구 금, 아우라노핀, 금 나트륨 티오말레에이트, 아우로티오글루코즈, 메살라민, 설파살라진, 부데소나이드, 메트로니다졸, 시프로플록사신, 아자티오프린, 6-머캅토퓨린 또는 칼슘, 엽산, 비타민 B12, 셀레콕시브, 로페콕시브, 발데콕시브, 루미라콕시브, 에토리콕시브, 에팔리주마브, 아달리무마브, 인플릭시마브 및 ABX-IL8의 식이 보충물로 이루어진 그룹 중에서 선택된 구성원인 방법.
  45. 폴리펩타이드를 면역글로불린 또는 이의 단편에, 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)에 융합시킴을 포함하여, 대상체의 체내에서 케모킨 폴리펩타이드의 생체내 반감기를 증가시키는 방법.
  46. 제45항에 있어서, 케모킨 폴리펩타이드가 MCP1인 방법.
  47. 제45항에 있어서, MCP1이 서열 2의 아미노산 서열을 포함하는 방법.
  48. 제45항에 있어서, 면역글로불린이 서열 3 내지 7로 이루어진 그룹 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는 방법.
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Families Citing this family (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007113285A2 (en) * 2006-03-31 2007-10-11 Biotherapix Molecular Medicines S.L.U. Mono- and bifunctional molecules with ability to bind to g protein-coupled receptors
CA2658719A1 (en) * 2006-07-24 2008-01-31 Yeda Research And Development Co. Ltd. Pharmaceutical compositions comprising ccl2 and use of same for the treatment of inflammation
JP2010506147A (ja) * 2006-09-29 2010-02-25 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 関節リウマチを有する患者のための疾患進行のリスク評価
EP2513308B1 (en) 2009-12-17 2017-01-18 Merck Sharp & Dohme Corp. Modulation of pilr to treat immune disorders
US8524217B2 (en) 2010-05-11 2013-09-03 Merck Sharp & Dohme Corp. MCP1-Ig fusion variants
EP2714065A4 (en) * 2011-06-01 2015-04-08 Jyant Technologies CHEMOKINE-IMMUNOGLOBULIN FUSION POLYPEPTIDES, COMPOSITIONS, PROCESS FOR THEIR MANUFACTURE AND USE
US9249204B2 (en) 2011-06-01 2016-02-02 Jyant Technologies, Inc. Chemokine-immunoglobulin fusion polypeptides, compositions, method of making and use thereof
US10400029B2 (en) 2011-06-28 2019-09-03 Inhibrx, Lp Serpin fusion polypeptides and methods of use thereof
PL2726092T3 (pl) 2011-06-28 2019-11-29 Inhibrx Lp Polipeptydy fuzyjne serpiny i sposoby ich stosowania
JP2015505843A (ja) * 2011-12-15 2015-02-26 ザ・ロイヤル・インスティテューション・フォア・ザ・アドバンスメント・オブ・ラーニング／マクギル・ユニヴァーシティ 可溶性ＩＧＦレセプターＦｃ融合タンパク質およびその使用
BR112016011401A2 (pt) 2013-11-20 2017-09-26 Regeneron Pharma moduladores de aplnr e utilizações dos mesmos
WO2015110526A1 (en) 2014-01-22 2015-07-30 Antagonis Biotherapeutics Gmbh Novel glycosaminoglycan-antagonising fusion proteins and methods of using same
CN114316068A (zh) * 2014-10-27 2022-04-12 英伊布里克斯公司 丝氨酸蛋白酶抑制剂融合多肽和其使用方法
US11566082B2 (en) 2014-11-17 2023-01-31 Cytiva Bioprocess R&D Ab Mutated immunoglobulin-binding polypeptides
CN107207603A (zh) * 2015-02-03 2017-09-26 吉安特科技股份有限公司 趋化因子‑免疫球蛋白融合多肽，其组合物、制备方法以及用途
ES2863682T3 (es) * 2016-01-06 2021-10-11 Univ Keio Agente antitumoral
KR20170123849A (ko) * 2016-04-29 2017-11-09 주식회사유한양행 Ccl3 변이체를 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도
CN109071613A (zh) 2016-05-11 2018-12-21 通用电气医疗集团生物工艺研发股份公司 分离基质
US10889615B2 (en) 2016-05-11 2021-01-12 Cytiva Bioprocess R&D Ab Mutated immunoglobulin-binding polypeptides
WO2017194593A1 (en) 2016-05-11 2017-11-16 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Method of cleaning and/or sanitizing a separation matrix
US10703774B2 (en) 2016-09-30 2020-07-07 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Separation method
US11708390B2 (en) 2016-05-11 2023-07-25 Cytiva Bioprocess R&D Ab Method of storing a separation matrix
US10654887B2 (en) 2016-05-11 2020-05-19 Ge Healthcare Bio-Process R&D Ab Separation matrix
US10730908B2 (en) 2016-05-11 2020-08-04 Ge Healthcare Bioprocess R&D Ab Separation method
CN105920579A (zh) * 2016-06-13 2016-09-07 浙江生创精准医疗科技有限公司 Gro单独或与其他细胞因子联合在治疗肝纤维化中的用途
CN105920585B (zh) * 2016-06-13 2019-07-09 浙江生创精准医疗科技有限公司 Mcp-1单独或与其他细胞因子联合在治疗肝纤维化中的用途
CN105944082B (zh) * 2016-06-13 2017-08-25 浙江生创精准医疗科技有限公司 骨保护素单独或与其他细胞因子联合在治疗肝纤维化中的用途
CN105944085A (zh) * 2016-06-13 2016-09-21 浙江生创精准医疗科技有限公司 Il-6单独或与其他细胞因子联合在治疗肝纤维化中的用途
CN105944086B (zh) * 2016-06-13 2017-08-25 浙江生创精准医疗科技有限公司 Il‑8单独或与其他细胞因子联合在治疗肝纤维化中的用途
KR102065150B1 (ko) 2018-04-27 2020-01-10 (주)케어젠 이소트레티노인-펩타이드 결합체를 유효성분으로 포함하는 비만의 예방 또는 치료용 조성물
CN114796264A (zh) * 2021-01-27 2022-07-29 北京北工大科技园有限公司 金络合物在制备治疗新型冠状病毒肺炎的药物中的应用
US11464464B2 (en) * 2020-07-24 2022-10-11 International Business Machines Corporation Internal and external proximate scanning
CN115704010A (zh) * 2021-08-11 2023-02-17 南京北恒生物科技有限公司 工程化免疫细胞及其用途
CN115192584A (zh) * 2022-06-09 2022-10-18 南方科技大学 一种纳米药物及其制备方法和应用

Family Cites Families (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4588585A (en) * 1982-10-19 1986-05-13 Cetus Corporation Human recombinant cysteine depleted interferon-β muteins
US4751180A (en) * 1985-03-28 1988-06-14 Chiron Corporation Expression using fused genes providing for protein product
IL92938A (en) 1989-01-01 1998-08-16 Us Commerce A polypeptide that has a mutagenic activity on monocytes and AND that encodes it
US6869924B1 (en) * 1989-01-31 2005-03-22 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Human derived monocyte attracting purified protein product useful in a method of treating infection and neoplasms in a human body, and the cloning of full length cDNA thereof
IL92937A0 (en) * 1989-01-31 1990-09-17 Us Health Human derived monocyte attracting protein,pharmaceutical compositions comprising it and dna encoding it
US5225538A (en) * 1989-02-23 1993-07-06 Genentech, Inc. Lymphocyte homing receptor/immunoglobulin fusion proteins
US5116964A (en) * 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
US6406697B1 (en) * 1989-02-23 2002-06-18 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
US5098833A (en) * 1989-02-23 1992-03-24 Genentech, Inc. DNA sequence encoding a functional domain of a lymphocyte homing receptor
US5216131A (en) * 1989-02-23 1993-06-01 Genentech, Inc. Lymphocyte homing receptors
US5179078A (en) * 1989-05-12 1993-01-12 Dana Farber Cancer Institute Method of suppressing tumor formation in vivo
US6767535B1 (en) * 1989-05-12 2004-07-27 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Suppressing tumor formation using cells expressing JE/monocyte chemoattractant protein-1
US6787645B1 (en) * 1989-05-12 2004-09-07 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. DNA encoding human JE cytokine
US5212073A (en) * 1989-05-12 1993-05-18 Genetics Institute, Inc. Process for producing human JE cytokine
ATE145428T1 (de) * 1990-12-14 1996-12-15 Cell Genesys Inc Chimärische ketten zur transduktion von rezeptorverbundenen signalwegen
WO1992019737A1 (en) 1991-05-09 1992-11-12 Dainippon Pharmaceutical Co., Ltd. Process for producing a monocyte chemotactic factor polypeptide and a strain for the production thereof
US5846717A (en) * 1996-01-24 1998-12-08 Third Wave Technologies, Inc. Detection of nucleic acid sequences by invader-directed cleavage
US5605671A (en) * 1992-10-05 1997-02-25 The Regents Of The University Of Michigan Radiolabeled neutrophil activating peptides for imaging
AU5537994A (en) * 1992-10-22 1994-05-09 Mallinckrodt Medical, Inc. Therapeutic treatment for inhibiting vascular restenosis
JPH09504422A (ja) 1993-07-29 1997-05-06 ジ・アップジョン・カンパニー 抗ヘパラナーゼ化合物を同定し、単離するためのヘパラナーゼの使用
US5510264A (en) 1993-09-28 1996-04-23 Insight Biotech Inc. Antibodies which bind meningitis related homologous antigenic sequences
US5739103A (en) * 1993-11-12 1998-04-14 Dana-Farber Cancer Institute Chemokine N-terminal deletion mutations
US5459128A (en) 1993-11-12 1995-10-17 Dana-Farber Cancer Institute Human monocyte chemoattractant protein-1 (MCP-1) derivatives
WO1995019167A1 (en) 1994-01-14 1995-07-20 Mallinckrodt Medical, Inc. Therapeutic treatment for inhibiting vascular restenosis
CN1144845A (zh) 1995-03-01 1997-03-12 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 新型人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的融合蛋白
US6737513B1 (en) * 1996-06-07 2004-05-18 Icos Corporation Macrophage derived chemokine (MDC) and chemokine analogs and assay to identify modulators of MDC activity, and therapeutic uses for same
US6498015B1 (en) * 1995-06-07 2002-12-24 Icos Corporation Methods of identifying agents that modulate the binding between MDC and an MDC receptor
HUP9701282A3 (en) * 1995-06-07 1999-09-28 Icos Corp Bothell Macrophage derived chemokine and chemokine analogs
CA2152141A1 (en) 1995-06-19 1996-12-20 Ian-Clark Lewis Monocyte chemoattractant protein (mcp)-1 antagonists
US6403782B1 (en) * 1995-06-22 2002-06-11 President And Fellows Of Harvard College Nucleic acid encoding eotaxin
US6706471B1 (en) * 1996-01-24 2004-03-16 Third Wave Technologies, Inc. Detection of nucleic acid sequences by invader-directed cleavage
US6780982B2 (en) * 1996-07-12 2004-08-24 Third Wave Technologies, Inc. Charge tags and the separation of nucleic acid molecules
EP0972029A1 (en) * 1997-03-07 2000-01-19 Human Genome Sciences, Inc. Human secreted proteins
US6878687B1 (en) * 1997-03-07 2005-04-12 Human Genome Sciences, Inc. Protein HMAAD57
WO1998045435A2 (en) 1997-04-10 1998-10-15 Genetics Institute, Inc. SECRETED EXPRESSED SEQUENCE TAGS (sESTs)
GB9715660D0 (en) 1997-07-25 1997-10-01 Zeneca Ltd Proteins
US6989435B2 (en) 1997-09-11 2006-01-24 Cambridge University Technical Services Ltd. Compounds and methods to inhibit or augment an inflammatory response
US6569418B1 (en) * 1997-12-11 2003-05-27 University Of Maryland Biotechnology Institute Immuno-modulating effects of chemokines in DNA vaccination
US6485910B1 (en) * 1998-02-09 2002-11-26 Incyte Genomics, Inc. Ras association domain containing protein
US6607879B1 (en) * 1998-02-09 2003-08-19 Incyte Corporation Compositions for the detection of blood cell and immunological response gene expression
DK1098664T3 (da) 1998-07-22 2003-11-17 Osprey Pharmaceuticals Ltd Sammensætninger og deres anvendelser til at behandle sekundær vævsskade og andre inflammatoriske tilstande og forstyrrelser
AU5337499A (en) 1998-08-03 2000-03-06 East Carolina University Low adenosine anti-sense oligonucleotide agent, composition, kit and treatments
AU1208200A (en) 1998-10-15 2000-05-01 Genetics Institute Inc. Secreted expressed sequence tags (sests)
US20040248169A1 (en) * 1999-01-06 2004-12-09 Chondrogene Limited Method for the detection of obesity related gene transcripts in blood
CA2363067C (en) 1999-01-12 2012-03-20 David J. Grainger Compounds and methods to inhibit or augment an inflammatory response
US20040031072A1 (en) * 1999-05-06 2004-02-12 La Rosa Thomas J. Soy nucleic acid molecules and other molecules associated with transcription plants and uses thereof for plant improvement
US20020009730A1 (en) * 1999-11-17 2002-01-24 Alex Chenchik Human stress array
AU2074101A (en) * 1999-12-08 2001-06-18 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of cervical cancer
WO2001046697A2 (en) 1999-12-21 2001-06-28 Millennium Predictive Medicine Identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
AU4347701A (en) * 2000-03-01 2001-09-12 Corixa Corp Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20040002068A1 (en) * 2000-03-01 2004-01-01 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
US20030078396A1 (en) * 2000-03-01 2003-04-24 Corixa Corporation Compositions and methods for the detection, diagnosis and therapy of hematological malignancies
CA2343602A1 (en) 2000-04-18 2001-10-18 Genset Est's and encoded human proteins
US7309693B2 (en) * 2000-05-26 2007-12-18 Kensuke Egashira Preventives and remedies for pulmonary hypertension
AU2001286890A1 (en) 2000-08-28 2002-03-13 Genaissance Pharmaceuticals, Inc. Haplotypes of the scya2 gene
US20030175704A1 (en) * 2000-10-04 2003-09-18 Lasek Amy K. W. Genes expressed in lung cancer
US20020137081A1 (en) * 2001-01-08 2002-09-26 Olga Bandman Genes differentially expressed in vascular tissue activation
WO2002068579A2 (en) 2001-01-10 2002-09-06 Pe Corporation (Ny) Kits, such as nucleic acid arrays, comprising a majority of human exons or transcripts, for detecting expression and other uses thereof
US20030073144A1 (en) * 2001-01-30 2003-04-17 Corixa Corporation Compositions and methods for the therapy and diagnosis of pancreatic cancer
WO2002066510A2 (en) 2001-02-20 2002-08-29 K.U. Leuven Research And Development Regakine-1
WO2002081745A2 (en) * 2001-04-05 2002-10-17 Proskelia Pharmaceuticals Genes involved in osteogenesis, and methods of use
AU2002256359A1 (en) 2001-04-24 2002-11-05 Epigenesis Pharmaceuticals, Inc. Antisense and anti-inflammatory based compositions to treat respiratory disorders
WO2002085309A2 (en) 2001-04-24 2002-10-31 Epigenesis Pharmaceuticals, Inc. Composition, formulations & kits for treatment of respiratory & lung disease with anti-sense oligonucleotides & a bronchodilating agent
US20030166903A1 (en) * 2001-04-27 2003-09-04 Anna Astromoff Genes associated with vascular disease
US7171311B2 (en) 2001-06-18 2007-01-30 Rosetta Inpharmatics Llc Methods of assigning treatment to breast cancer patients
US20040077835A1 (en) * 2001-07-12 2004-04-22 Robin Offord Chemokine receptor modulators, production and use
US20030099974A1 (en) * 2001-07-18 2003-05-29 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Novel genes, compositions, kits and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of breast cancer
BR0206251A (pt) * 2001-10-30 2004-06-15 Ortho Clinical Diagnostics Inc Métodos para avaliar e tratar leucemia
EP1447095B1 (en) 2001-11-02 2012-06-13 Kensuke Egashira Preventives and/or remedies for post-transplant arteriosclerosis as rejection of organ transplant
US20030129214A1 (en) * 2002-01-10 2003-07-10 University Of Washington Methods of enhancing the biocompatibility of an implantable medical device
WO2003083059A2 (en) 2002-03-26 2003-10-09 Centocor, Inc. Mcp-1 mutant proteins, antibodies, compositions, methods and uses
GB0207624D0 (en) 2002-04-02 2002-05-15 Cancer Res Ventures Ltd Chemokine and uses thereof
CN1665839A (zh) 2002-04-10 2005-09-07 应用研究系统Ars股份公司 Mcp蛋白质的新型拮抗剂
AU2002364707A1 (en) 2002-04-23 2003-11-10 Duke University Atherosclerotic phenotype determinative genes and methods for using the same
JP2003310272A (ja) 2002-04-26 2003-11-05 Toshio Tanaka 血管拡張薬応答遺伝子の発現量変化を指標にした血管拡張物質の探索方法
AU2003229392A1 (en) * 2002-05-31 2003-12-19 Scegen Pty Ltd Self-coalescing or self-aggregating proteins derived from a membrane translocating sequence
US7202343B2 (en) * 2002-08-19 2007-04-10 Abgenix, Inc. Antibodies directed to monocyte chemo-attractant protein-1 (MCP-1) and uses thereof
CN1435433A (zh) 2002-08-30 2003-08-13 龚小迪 长效广谱的趋化因子受体抑制物
AU2002951346A0 (en) 2002-09-05 2002-09-26 Garvan Institute Of Medical Research Diagnosis of ovarian cancer
WO2004031233A2 (en) 2002-10-04 2004-04-15 Applied Research Systems Ars Holding N.V. Novel chemokine-like polypeptides
US7595430B2 (en) * 2002-10-30 2009-09-29 University Of Kentucky Research Foundation Methods and animal model for analyzing age-related macular degeneration
US20060263774A1 (en) * 2002-11-01 2006-11-23 Genentech, Inc. Compositions and methods for the treatment of immune related diseases
US20040157253A1 (en) * 2003-02-07 2004-08-12 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for use of inflammatory proteins in the diagnosis and treatment of metabolic disorders
EP1626981A4 (en) 2003-03-04 2006-11-22 Biorexis Pharmaceutical Corp PROTEINS PROTECTED AGAINST DIPEPTIDYLPEPTIDASE
ATE394676T1 (de) 2003-03-12 2008-05-15 Rappaport Family Inst For Res Verbindungen und verfahren zur diagnose von prostatakrebs
US7510833B2 (en) 2003-03-13 2009-03-31 Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. Method for examining obesity or leanness
JP2004307427A (ja) 2003-04-10 2004-11-04 Kensuke Egashira 腎虚血再灌流傷害の治療・改善・予防剤
EP1473304A1 (de) 2003-05-02 2004-11-03 BOEHRINGER INGELHEIM PHARMA GMBH &amp; CO. KG Verfahren zur Herstellung eines N-terminal modifizierten chemotaktischen Faktors
ZA200508439B (en) * 2003-05-05 2007-03-28 Probiodrug Ag Medical use of inhibitors of glutaminyl and glutamate cyclases
KR20120035203A (ko) * 2003-05-05 2012-04-13 프로비오드룩 아게 글루타미닐 및 글루타메이트 사이클라제의 이펙터의 용도
CA2529589A1 (en) 2003-06-18 2004-12-29 Direvo Biotech Ag New biological entities and the pharmaceutical or diagnostic use thereof
JP4635255B2 (ja) * 2003-09-02 2011-02-23 独立行政法人産業技術総合研究所 抗体医薬
AR046594A1 (es) * 2003-10-16 2005-12-14 Applied Research Systems Usos terapeuticos de variantes de quemoquina
US20050232923A1 (en) * 2003-11-05 2005-10-20 Li Yan Methods and compositions for treating MCP-1 related pathologies

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