CN106367519A - 利用mstn基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及家禽育种领域，具体涉及一种利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法。该方法是提取待测样本的基因组DNA，经序列如SEQ ID NO：1‑2所示的特异性引物扩增得到186bp的目的片段，目的片段经SSCP分析，凝胶电泳后用银染显色，得到DNA的SSCP图谱，根据图谱的带型筛选基因型为AA的个体。统计分析表明AA型个体的屠体重、胸肌重、腿肌重、全净膛重和半净膛重均显著的高于GG型(P<0.05)。AA纯合型能够在后代中加以固定，该检测方法简单快捷，且不受外界环境的影响。

Description

利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法
技术领域
本发明涉及家禽育种领域，具体涉及一种利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法。
背景技术
随着国民经济的发展和人民生活水平的不断提高，人们对优质肉鸡的需求越来越迫切，而优质肉鸡普遍存在着生产速度缓慢，产肉能力差等问题。优质肉鸡屠宰性能的改良，一直受到是育种工作者关注，而传统育种方法的使用，进展缓慢，迫使和刺激育种学家寻找新的途径和方法。寻找到屠宰性能的分子遗传标记用于标记辅助选择，将能加速优质肉鸡屠宰性能的改良。
MSTN基因，也就是肌肉生长抑制素基因，是骨骼肌生长的负调控因子。前期研究发现该基因的C.234突变对边鸡的生长性状具有显著或极显著的影响。因此探索MSTN基因的C.234突变对京海黄鸡的屠宰性能的影响具有重要的意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法，该方法利用MSTN基因的突变对京海黄鸡屠宰性能进行标记辅助选择，不受环境影响。
本发明公开了MSTN基因作为京海黄鸡屠宰性能分子标记的应用。具体是选择MSTN基因编码区的234bp处等位基因为A的纯合个体。
本发明还公开了利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法。
基于上述应用的利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法：提取待测样本的鸡基因组DNA，经序列如SEQ ID NO：1-2所示的特异性引物扩增得到186bp的片段，目的片段经SSCP分析，凝胶电泳后用银染显色，得到DNA的SSCP图谱，根据图谱中的带型筛选基因型为AA的个体。
本发明的原理是：针对MSTN基因设计1对引物(P1)，引物P1扩增产物存在3种基因型，测序结果与MSTN基因原序列(GenBank ID：AF346599)比对发现，在外显子1序列的234bp处有G-A的点突变，如图2，GG型在编码区的234bp处等位基因为G，GA型的等位基因为G和A，AA型的等位基因为A。统计分析表明AA基因型的屠体重、胸肌重、腿肌重、全净膛重和半净膛重均显著的高于GG型(P<0.05)。AA纯合型能够在后代中加以固定，该检测方法简单快捷，且不受外界环境的影响，可作为提高京海黄鸡屠宰性能的方法。
附图说明
图1是MSTN基因扩增产物的PCR-SSCP图谱。
图2是MSTN基因不同基因型的测序图。
具体实施方式
实施例
1.1实验动物
随机采取的353只京海黄鸡母鸡血样来自于江苏省京海禽业集团有限公司。翅静脉采集血样1.5mL，肝素抗凝，-20℃保存。常规苯酚-氯仿法抽提基因组DNA，对基因组DNA进行OD值测定，并记录其浓度后备用。140日龄时对试验群体进行屠宰，测定其屠体重、全净膛重、半净膛重、胸肌重和腿肌重。
1.2引物设计与PCR扩增
根据GenBank中已发表的MSTN基因序列(登录号为：AF346599)，采用Primer 5.0设计1对引物，扩增产物大小为186bp。引物序列如下：
P1：F：5′-GCATTAGCAGGGACGTTAT-3′(SEQ ID NO：1)
R:5′-GAAAGCAGCAGGGTTGTTA-3′(SEQ ID NO：2)
PCR反应体系为20μL，包括10×Buffer 2μL，MgCl2(25mmol/L)2.2μL，dNTPs(10mmol/L)0.8μL，上下游引物(10μmol/L)各1μL，模板1μL，Taq DNA聚合酶0.2μL，双蒸水11.8μL。PCR扩增程序为94℃预变性6min；94℃变性30s，56.0℃退火30s，72℃延伸30s，30个循环；最后72℃延伸性10min，10℃保存产物。
1.3 SSCP分析
2μL PCR产物和7μL上样缓冲液(98％甲酰胺、0.025％溴酚蓝、0.025％二甲苯氰、10mmol/L EDTA(pH8.0)、10％甘油)混匀，98℃变性10min，然后冰浴5min。采用150V进行非变性聚丙烯酰胺凝胶(PAGE30％，Acr∶Bis＝29∶1)电泳，7～9h后银染显色，PCR-SSCP图谱如图1。
1.4 MSTN基因不同基因型对京海黄鸡屠宰性能的遗传效应
采用下列模型分析不同基因型对京海黄鸡屠宰性能的影响：Y＝μ+基因型效应+残差效应。MSTN不同基因型对京海黄鸡屠宰性能的遗传效应见表1。
表1 MSTN基因C.234位点不同基因型与京海黄鸡屠体性状的相关性分析
注：同行标识不同字母表示差异显著(P<0.05)。
由表可见，AA型个体的屠体重、胸肌重、腿肌重、全净膛重和半净膛重均显著的高于GG型(P<0.05)。所以根据MSTN基因的SSCP带型筛选AA基因型的个体可作为提高京海黄鸡屠宰性能的方法。

Claims (3)

1.一种利用MSTN基因提高京海黄鸡屠宰性能的方法，其特征在于，提取待测样本的基因组DNA，经序列如SEQ ID NO：1-2所示的特异性引物扩增得到186bp的目的片段，目的片段经SSCP分析，凝胶电泳后用银染显色，得到DNA的SSCP图谱，根据图谱中的带型筛选京海黄鸡中基因型为AA的个体。
2.MSTN基因作为京海黄鸡屠宰性能分子标记的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，选择MSTN基因编码区的234bp处等位基因为A的纯合个体。
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